JPH07181173A - Method and apparatus for gradient analysis of liquid chromatography - Google Patents
Method and apparatus for gradient analysis of liquid chromatographyInfo
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- JPH07181173A JPH07181173A JP32742393A JP32742393A JPH07181173A JP H07181173 A JPH07181173 A JP H07181173A JP 32742393 A JP32742393 A JP 32742393A JP 32742393 A JP32742393 A JP 32742393A JP H07181173 A JPH07181173 A JP H07181173A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は液体クロマトグラフィー
のグラジエント分析において、迅速かつ高精度な分析が
可能な液体クロマトグラフィー分析方法および装置に関
し、特に、少量の試料で高感度な分析が可能な、口径の
小さい分離カラムおよびサプレッサーを用いた液体クロ
マトグラフィー分析に最適な、液体クロマトグラフィー
のグラジエント分析方法および装置に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a liquid chromatographic analysis method and apparatus capable of rapid and highly accurate analysis in gradient analysis of liquid chromatography, and in particular, enables highly sensitive analysis with a small amount of sample. The present invention relates to a gradient analysis method and apparatus for liquid chromatography, which is optimal for liquid chromatography analysis using a separation column having a small diameter and a suppressor.
【０００２】[0002]
【従来の技術】液体クロマトグラフィーを用いて、目的
成分よりも溶離時間（保持時間）が長い不要成分（以
下、マトリックス成分とする）を含む試料を分析する場
合には、高精度な分析を行うためには、マトリックス成
分による目的成分検出の妨害を防ぐために、マトリック
ス成分が分離カラムから溶離するまで次回の測定を待つ
必要がある。2. Description of the Related Art When using liquid chromatography to analyze a sample containing an unnecessary component (hereinafter referred to as a matrix component) having an elution time (retention time) longer than the target component, a highly accurate analysis is performed. In order to prevent the interference of the target component detection by the matrix component, it is necessary to wait for the next measurement until the matrix component elutes from the separation column.
【０００３】例えば、広く一般に用いられるダイオネク
ス社製ＡＳ４Ａ陰イオン分離カラムを用いて、過塩素酸
イオンをマトリックス成分として含む試料中の硫酸イオ
ンを測定する場合、硫酸イオンは１０分前後で溶離し測
定を終えるが、過塩素酸イオンは溶離を始めるまでに測
定開始から１時間程度の時間が必要であり、過塩素酸イ
オンが溶離を終えるには、少なくとも測定開始から１時
間２０分程度の時間が必要である。ここで、測定能率を
上げるために過塩素酸イオンが溶離し終わらない状態で
次々と試料を打ち込み測定を行うと、５〜６検体測定後
に、図８（ａ）〜（ｃ）に示されるように測定目的成分
である硫酸イオンのピーク信号に過塩素酸イオンのピー
クがしばしば重なり、硫酸イオンの測定を妨害する。For example, when the sulfate ion in a sample containing perchlorate ion as a matrix component is measured by using a widely used AS4A anion separation column manufactured by Dionex, the sulfate ion is eluted in about 10 minutes and then measured. However, it takes about 1 hour from the start of measurement before the elution of perchlorate ions begins, and at least 1 hour 20 minutes from the start of measurement until the elution of perchlorate ions ends. is necessary. Here, in order to improve the measurement efficiency, when the samples are successively shot and measured in a state where the perchlorate ion is not completely eluted, the measurement is performed after 5 to 6 samples, as shown in FIGS. 8 (a) to 8 (c). In addition, the peak signal of sulfate ion, which is the target component of measurement, is often overlapped with the peak of perchlorate ion, which interferes with the measurement of sulfate ion.
【０００４】また、過塩素酸イオンが分離カラム内に残
留している状態で次々と新しい試料を打ち込むと、分離
カラム内に過塩素酸イオン等が残留して分離カラムの性
能に影響を与え、硫酸イオン溶離時間の変動および検出
ピーク形状の変化が発生し、定性および定量上好ましく
ない状態に陥る場合がある。そのため、目的成分を溶離
した後、マトリックス成分を迅速に溶離させ、次回の測
定を迅速に行うことができる方法の検討が各種行われて
いる。Further, when new samples are successively shot in a state where the perchlorate ions remain in the separation column, the perchlorate ions and the like remain in the separation column and affect the performance of the separation column. Fluctuations in sulfate ion elution time and changes in detection peak shape may occur, resulting in a qualitatively and quantitatively unfavorable state. Therefore, various studies have been conducted on a method in which the target component is eluted and then the matrix component is rapidly eluted so that the next measurement can be performed quickly.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】測定目的成分の測定感
度や再現性に影響を与えずマトリックス成分を早く溶離
させる方法としては、測定目的成分溶離後に溶離液の流
量を増やす方法、目的物溶離後に溶離液濃度を高くする
方法等が知られている。しかし、溶離液の流量を増やす
と液体クロマトグラフ装置の圧力が上昇するので、装置
の使用可能圧力以下までしか溶離液の流量を増やすこと
ができない。そのため、通常の２倍〜３倍程度までしか
溶離液の流量は増やすことができないために効果は弱
い。As a method of quickly eluting the matrix component without affecting the measurement sensitivity and reproducibility of the measurement target component, there is a method of increasing the flow rate of the eluent after the measurement target component is eluted, or after the target substance is eluted. A method of increasing the concentration of the eluent is known. However, when the flow rate of the eluent is increased, the pressure of the liquid chromatograph apparatus rises, so that the flow rate of the eluent can be increased only up to the usable pressure of the apparatus. Therefore, the flow rate of the eluent can be increased only to about 2 to 3 times the normal amount, and the effect is weak.
【０００６】これに対し、測定時には希薄な溶離液を用
いることにより成分ごとの溶離時間差を大きくしてクロ
マトグラムのピークをシャープに出し、目的成分が溶離
した後に、溶離液の濃度を高くしてマトリックス成分の
溶離を促進する、いわゆるグラジエント分析法では、前
述の溶離液量を増やす方法より良好な効果が得られ、有
効な手段として知られている。しかしながら、溶離液の
濃度は装置の限界までしか向上することができず、ま
た、あまり高濃度な溶離液はサプレッサーや検出器等に
悪影響を及ぼす可能性がある。特に、分離カラムおよび
サプレッサーを用いる液体クロマトグラフ装置で、近年
注目されている小口径の分離カラムおよびサプレッサー
を用いた装置にグラジエント分析法を利用した際には、
サプレッサーに溶離液成分が滞留してしまい、測定感度
および測定精度の低下を起こすことが発見された。On the other hand, at the time of measurement, a dilute eluent is used to increase the difference in elution time for each component so that the peak of the chromatogram is sharpened and the concentration of the eluent is increased after the target component is eluted. The so-called gradient analysis method, which promotes the elution of matrix components, is known as an effective means because it has better effects than the above-described method of increasing the amount of eluent. However, the concentration of the eluent can be improved only up to the limit of the device, and the eluent having a too high concentration may adversely affect the suppressor, the detector and the like. In particular, in a liquid chromatograph apparatus using a separation column and a suppressor, when the gradient analysis method is used in an apparatus using a small-diameter separation column and a suppressor, which has been attracting attention in recent years,
It has been discovered that the eluent component stays in the suppressor, causing a decrease in measurement sensitivity and measurement accuracy.
【０００７】小口径の分離カラムおよびサプレッサーを
用いた液体クロマトグラフ装置（以下、小口径クロマト
グラフ装置とする）とは、分離カラムおよびサプレッサ
ーを通常より小口径とすることにより、少量の試料でも
高感度の分析が可能である、少量の溶離液での分析が可
能である（口径が半分であれば、溶離液は１／４で済
む）、測定感度が良好である（口径が半分であれば溶離
液に対する試料濃度は４倍となり、感度は約４倍とな
る）、等の優れた特性を実現したものである。A liquid chromatograph using a small-diameter separation column and a suppressor (hereinafter referred to as a small-diameter chromatograph) has a smaller diameter than that of a separation column and a suppressor, so that even a small amount of sample can be improved. Sensitivity analysis is possible, analysis with a small amount of eluent is possible (if the aperture is half, the eluent is 1/4), and the measurement sensitivity is good (if the aperture is half, The sample concentration with respect to the eluent is 4 times, and the sensitivity is about 4 times).
【０００８】ところが、本発明者らの検討によれば、小
口径型クロマトグラフ装置では、装置（分離カラムおよ
びサプレッサー）が耐えることができる濃度まで溶離液
濃度を高くして使用した場合は、高濃度溶離液でマトリ
ックス成分を溶離した後に、溶離液濃度を通常の測定濃
度に下げても高濃度の溶離液成分がサプレッサーに滞留
し、測定目的成分の測定感度の低下および測定精度の低
下を引き起こすことを見出した。However, according to the study by the present inventors, in the small-diameter type chromatograph apparatus, when the eluent concentration is increased to such a level that the apparatus (separation column and suppressor) can withstand, it is expected to be After eluting the matrix component with a concentrated eluent, even if the eluent concentration is reduced to the normal measurement concentration, a high concentration of the eluent component remains in the suppressor, causing a decrease in the measurement sensitivity of the target component and a decrease in measurement accuracy. I found that.
【０００９】例えば、陰イオンを分析する場合は、通
常、溶離液にナトリウム塩溶液を使用するが、小口径型
クロマトグラフ装置でグラジエント分析法を利用した場
合には、溶離液濃度を高くした際にサプレッサーでナト
リウムイオンと水素イオンが充分にイオン交換されず、
サプレッサーのイオン交換膜表面および膜内部にナトリ
ウムイオンが滞留してしまう。そのため、溶離液濃度を
通常使用濃度まで下げてもサプレッサーのイオン交換膜
表面および膜内部にナトリウムイオンが残留していると
推察される。For example, when analyzing anions, a sodium salt solution is usually used as an eluent, but when a gradient analysis method is used in a small-diameter type chromatograph, the eluent concentration is increased. In the suppressor, sodium ion and hydrogen ion are not sufficiently exchanged,
Sodium ions accumulate on the surface of the suppressor ion exchange membrane and inside the membrane. Therefore, it is presumed that sodium ions remain on the surface of the ion-exchange membrane of the suppressor and inside the membrane even when the concentration of the eluent is lowered to the normal use concentration.
【００１０】イオン交換膜表面および膜内部のナトリウ
ムイオン濃度が、測定時における溶離液濃度と同等の濃
度まで低下しないうちに次の試料を注入すると、サプレ
ッサー内において、測定目的成分のナトリウム塩から酸
の形態へのイオン交換による変化が、通常の状態に比べ
て非定量的に不完全にしか行われないために、測定目的
成分の非定量的な感度の減少を生じる。これを防ぐには
水〜測定時濃度程度の溶離液で洗浄を行い、装置のフロ
ー内部を通常状態に戻せばよいが、小口径型クロマトグ
ラフ装置の場合、装置の洗浄に１時間以上必要であり、
測定時間の増大を招く。If the next sample is injected before the concentration of sodium ions on the surface of the ion exchange membrane and inside the membrane has dropped to a concentration equivalent to the concentration of the eluent at the time of measurement, the sodium salt of the measurement target component is converted into acid in the suppressor. The change due to ion exchange to the above form is non-quantitatively imperfect compared with the normal state, resulting in non-quantitative decrease in the sensitivity of the target component. To prevent this, it is sufficient to wash with water to an eluent of about the concentration at the time of measurement, and to return the inside of the flow of the device to a normal state. However, in the case of a small-diameter type chromatograph device, it takes 1 hour or more to clean the device. Yes,
This increases the measurement time.
【００１１】他方、マトリックス成分による問題点を解
決するため、図９に示されるように、測定用の分離カラ
ム６２の上流に、分離カラム６２に比べて分離成分の溶
離時間が短いガードカラム等のマトリックス分離カラム
６０を取り付け、マトリックス分離カラム６０と分離カ
ラム６２の間に経路切り替え用の三方切替弁６４を設け
る構成も考えられる。このクロマトグラフ装置は、試料
ａをマトリックス分離カラム６０に流入し、次いで分離
カラム６２に流入するものであり、分離カラム６２を通
過した目的成分は、サプレッサーに流入して電気伝導度
検出器によって検出される。On the other hand, in order to solve the problem caused by the matrix component, as shown in FIG. 9, a guard column or the like is provided upstream of the separation column 62 for measurement, where the elution time of the separation component is shorter than that of the separation column 62. A configuration in which the matrix separation column 60 is attached and a three-way switching valve 64 for path switching is provided between the matrix separation column 60 and the separation column 62 is also conceivable. In this chromatographic apparatus, the sample a flows into the matrix separation column 60 and then into the separation column 62, and the target component that has passed through the separation column 62 flows into the suppressor and is detected by the electrical conductivity detector. To be done.
【００１２】一方、試料中の目的成分がマトリックス分
離カラム６０を通過したことを確認すると、三方切替弁
６４を切り替えることによって、マトリックス成分を分
離カラム６２には送らずに廃液瓶６６に流す。ここで、
前述のようにマトリックス分離カラム６０は、マトリッ
クス成分の溶離時間が短いので、マトリックス成分は迅
速にマトリックス分離カラム６０を通過し、次回の測定
を迅速に行うことが可能となる。On the other hand, when it is confirmed that the target component in the sample has passed through the matrix separation column 60, the three-way switching valve 64 is switched so that the matrix component is not sent to the separation column 62 but is flown into the waste liquid bottle 66. here,
As described above, since the matrix separation column 60 has a short elution time of the matrix component, the matrix component quickly passes through the matrix separation column 60, and the next measurement can be performed quickly.
【００１３】ところが、マトリックス成分の濃度によ
り、目的成分のマトリックス分離カラム６０からの溶離
時間が変化し、しかもマトリックス成分と測定目的成分
の溶離時間差が短いために、三方切替弁６４の切替えタ
イミング設定が難しく、実用化は困難である。また、マ
トリックス分離カラム６０を、目的成分とマトリックス
成分との溶離時間の差が大きいものにして、三方切替弁
６４の切替えタイミングを設定し易くした場合は、目的
成分のマトリックス分離カラム６０および分離カラム６
２からの溶離時間が長くなり、分析時間の増大を招く。However, the elution time of the target component from the matrix separation column 60 changes depending on the concentration of the matrix component, and the elution time difference between the matrix component and the measurement target component is short, so that the switching timing of the three-way switching valve 64 is set. It is difficult and difficult to put into practical use. When the matrix separation column 60 has a large difference in elution time between the target component and the matrix component to facilitate the setting of the switching timing of the three-way switching valve 64, the matrix separation column 60 and the separation column of the target component 6
The elution time from 2 becomes long, resulting in an increase in analysis time.
【００１４】他方、特開平３−２４２５５２号公報に
は、分離カラムの下流に、試料流路と洗浄液供給源とを
択一的に切り替える切替弁を設け、この三方切替弁より
分離カラムに洗浄液を供給して、分離カラムを洗浄可能
にした液体クロマトグラフ装置（金属成分分析装置）が
開示されている。On the other hand, in JP-A-3-242552, a switching valve that selectively switches between a sample flow path and a cleaning liquid supply source is provided downstream of the separation column, and the cleaning liquid is supplied to the separation column from this three-way switching valve. A liquid chromatograph device (metal component analyzer) capable of supplying and cleaning a separation column is disclosed.
【００１５】しかしながら、この公報に開示される装置
は、多数回の使用によって能力の低下した分離（濃縮）
カラムを洗浄して、分離能力を復活させることを目的と
したもので、分離カラムの洗浄は装置による分析操作を
完全に停止した後でないと行うことは不可能である。従
って、この公報に開示される装置では、液体クロマトグ
ラフィーにおいて、グラジエント分析方法を利用した迅
速な連続分析は不可能であり、特に、サプレッサーを用
いる液体クロマトグラフ、さらには小口径の分離カラム
およびサプレッサーを用いる小口径型クロマトグラフ装
置が特有に有する前述の問題点を解決しての迅速な連続
分析は不可能である。However, the apparatus disclosed in this publication has a capability of separation (concentration) which is reduced by a large number of uses.
The purpose is to wash the column to restore the separation ability, and the washing of the separation column cannot be performed until the analytical operation by the apparatus is completely stopped. Therefore, in the device disclosed in this publication, rapid continuous analysis utilizing a gradient analysis method is not possible in liquid chromatography, and in particular, a liquid chromatograph using a suppressor, and further a separation column and a suppressor having a small diameter. It is not possible to carry out rapid continuous analysis by solving the above-mentioned problems peculiar to the small-diameter type chromatograph apparatus using the.
【００１６】本発明の目的は、前記従来技術の問題点を
解決することにあり、グラジエント法を利用した液体ク
ロマトグラフィーにおいて、分離カラムからマトリック
ス成分を迅速に溶離して、マトリックス成分に起因する
測定感度および精度の低下のない、高精度な連続測定を
迅速に行うことができ、特に、分離カラムおよびサプレ
ッサーを用いる液体クロマトグラフィー（イオンクロマ
トグラフィー）で、近年注目されている小口径の分離カ
ラムおよびサプレッサーを用いた液体クロマトグラフィ
ーに好適に利用される、液体クロマトグラフィーのグラ
ジエント分析方法、およびこれを利用する装置を提供す
ることにある。An object of the present invention is to solve the above-mentioned problems of the prior art. In liquid chromatography using a gradient method, matrix components are rapidly eluted from a separation column and the measurement due to the matrix components is carried out. It enables rapid and highly accurate continuous measurement without deterioration of sensitivity and precision. Especially, in liquid chromatography (ion chromatography) using a separation column and a suppressor, a small-diameter separation column and It is an object of the present invention to provide a gradient analysis method for liquid chromatography, which is preferably used for liquid chromatography using a suppressor, and an apparatus using the same.
【００１７】[0017]
【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
に、本発明の液体クロマトグラフィーのグラジエント分
析方法は、分離カラムとサプレッサーとを用いる液体ク
ロマトグラフィーにおいて、測定用溶離液によって目的
成分が前記分離カラムから流出した後に、前記測定用溶
離液よりも溶離能力の高い除去用溶離液を前記分離カラ
ムに流入して不要成分を分離カラムから流出せしめるグ
ラジエント分析方法であって、前記除去用溶離液を前記
分離カラムに流入すると共に前記分離カラムからの流出
経路をサプレッサーとは別の経路に切り換え、同時に前
記サプレッサーに前記除去用溶離液より溶離能力の低い
補助溶離液を流入することを特徴とする液体クロマトグ
ラフィーのグラジエント分析方法を提供する。In order to achieve the above object, the gradient analysis method of liquid chromatography of the present invention is a liquid chromatography using a separation column and a suppressor, wherein the target component is A gradient analysis method in which, after flowing out from a separation column, an eluent for removal having a higher elution capacity than the eluent for measurement flows into the separation column to cause unnecessary components to flow out from the separation column, the eluent for removal Of the auxiliary eluent having a lower elution capacity than that of the removing eluent at the same time as flowing into the separation column and switching an outflow path from the separation column to a path different from the suppressor. A gradient analysis method for liquid chromatography is provided.
【００１８】また、前記分離カラムおよびサプレッサー
の口径が３mm以下であるのが好ましい。Further, it is preferable that the separation column and the suppressor have a diameter of 3 mm or less.
【００１９】さらに、前記分析方法を利用する、本発明
の液体クロマトグラフィーのグラジエント分析装置は、
目的成分が分離カラムから流出した後に、測定用溶離液
より溶離能力の高い除去用溶離液を前記分離カラムに流
入して不要成分を分離カラムから流出せしめるグラジエ
ント分析を行う液体クロマトグラフィーのグラジエント
分析装置であって、分離カラムと、前記分離カラムの下
流側に配置されるサプレッサーと、前記サプレッサーに
流入した目的成分を検出する検出手段と、試料、前記分
離カラム中の成分を溶離する測定用溶離液、および前記
測定用溶離液よりも溶離能力の高い除去用溶離液をそれ
ぞれ前記分離カラムに供給する手段と、前記除去用溶離
液より溶離能力の低い補助溶離液を前記サプレッサーに
供給するための補助溶離液供給手段と、前記分離カラム
およびサプレッサーの間に配置され、前記分離カラムま
たは補助溶液供給手段と前記サプレッサーまたは廃液経
路とを接続自在にする多方向切換弁および流路とを有
し、前記検出手段による目的成分の検出が終了した後、
前記分離カラムに前記除去用溶離液を供給すると共に、
前記多方向切替弁を切り替え、前記分離カラムからの流
出経路を廃液経路に接続し、補助溶液供給手段と前記サ
プレッサーとを接続することを特徴とする液体クロマト
グラフィーのグラジエント分析装置を提供する。Furthermore, the gradient analyzer for liquid chromatography of the present invention utilizing the above-mentioned analysis method,
A gradient analyzer for liquid chromatography that performs a gradient analysis in which after the target component flows out from the separation column, a removal eluent having a higher elution capacity than the measurement eluent is introduced into the separation column and unnecessary components are allowed to flow out from the separation column. A separation column, a suppressor arranged on the downstream side of the separation column, a detection means for detecting the target component flowing into the suppressor, a sample, and a measurement eluent for eluting the component in the separation column. , And means for supplying a removal eluent having a higher elution capacity than the measurement eluent to the separation column, and an auxiliary means for supplying an auxiliary eluent having a lower elution capacity than the removal eluent to the suppressor. It is arranged between the eluent supply means and the separation column and suppressor, and supplies the separation column or the auxiliary solution. And a multi-way switching valve and the flow path to freely connect the the stepped suppressor or waste path, after the detection of the target component has been completed by the detection means,
While supplying the removal eluent to the separation column,
A gradient analyzer for liquid chromatography, characterized in that the multi-way switching valve is switched, an outflow path from the separation column is connected to a waste liquid path, and an auxiliary solution supply means and the suppressor are connected.
【００２０】また、前記分離カラムおよびサプレッサー
の口径が３mm以下である請求項３に記載のサプレッサー
を用いるのがが好ましい。Further, it is preferable to use the suppressor according to claim 3, wherein the separation column and the suppressor have a diameter of 3 mm or less.
【００２１】以下、本発明の液体クロマトグラフィーの
グラジエント分析方法および装置について、添付の図面
に示される好適実施例をもとに詳細に説明する。図１に
本発明の液体クロマトグラフィーのグラジエント分析方
法（以下、分析方法とする）を実施する、本発明の液体
クロマトグラフィーのグラジエント分析方法（以下、分
析装置とする）の概念図を示す。The liquid chromatography gradient analysis method and apparatus of the present invention will now be described in detail with reference to the preferred embodiments shown in the accompanying drawings. FIG. 1 shows a conceptual diagram of the gradient analysis method of liquid chromatography of the present invention (hereinafter referred to as an analyzer) for carrying out the gradient analysis method of liquid chromatography of the present invention (hereinafter referred to as an analysis method).
【００２２】図示例の分析装置は、各成分を分離する分
離カラム２４、サプレッサー３２、電気伝導度検出セル
３４および電気伝導度検出器３６を用いる、いわゆるイ
オンクロマトグラフィー（ＩＣ）を行う装置であって、
前記各部位に加え、オートサンプラー１０、第１溶離液
槽１２、第２溶離液槽１４、濃度コントロールポンプ２
０、試料・溶離液切替弁１６、多方向切替弁２６、第３
溶離液槽２８、第１廃液瓶４０等の各種の部位が適宜組
み合わされて、接続されて構成される。このような本発
明の分析装置は、目的成分が分離カラム２４から溶離し
た後に、分離カラム２４に高溶離力の除去用溶離液を流
入し、マトリックス成分を迅速に溶離する、いわゆるグ
ラジエント分析方法を行うものである。The analyzer shown in the drawing is a device for performing so-called ion chromatography (IC) using a separation column 24 for separating each component, a suppressor 32, an electric conductivity detection cell 34 and an electric conductivity detector 36. hand,
In addition to the above parts, an autosampler 10, a first eluent tank 12, a second eluent tank 14, a concentration control pump 2
0, sample / eluent switching valve 16, multidirectional switching valve 26, third
Various parts such as the eluent tank 28 and the first waste liquid bottle 40 are appropriately combined and connected. Such an analyzer of the present invention is a so-called gradient analysis method in which after the target component is eluted from the separation column 24, a removal eluent having a high elution power is flown into the separation column 24 to rapidly elute the matrix component. It is something to do.
【００２３】オートサンプラー１０は、調整されたサン
プルを一定量採取して試料ループ２２に供給するもので
ある。図示例の装置において、試料はオートサンプラー
１０より試料・溶離液切替弁１６に接続される試料ルー
プ２２に注入され、この試料ループ２２より分離カラム
２４に流入される。本発明においては各種の公知のオー
トサンプラーがすべて利用可能である。また、本発明の
分析装置においては、オートサンプラー１０は必ずしも
使用する必要はない。The autosampler 10 collects a fixed amount of the adjusted sample and supplies it to the sample loop 22. In the apparatus of the illustrated example, the sample is injected from the autosampler 10 into the sample loop 22 connected to the sample / eluent switching valve 16 and then introduced into the separation column 24 from the sample loop 22. In the present invention, various known autosamplers can all be used. Further, the autosampler 10 does not necessarily have to be used in the analyzer of the present invention.
【００２４】一方、第１溶離液槽１２は水等の希薄な溶
離液を充填し、また、第２溶離液槽１４は測定に使用す
る測定用溶離液の５〜１００倍程度、好ましくは十倍程
度の高濃度溶離液を充填する。On the other hand, the first eluent tank 12 is filled with a dilute eluent such as water, and the second eluent tank 14 is about 5 to 100 times, preferably about 10 times, the eluent for measurement used for measurement. Fill with about twice the high concentration eluent.
【００２５】両溶離液槽には、脱気装置１８および濃度
コントロールポンプ２０が接続される。濃度コントロー
ルポンプ２０は、両溶離液槽に充填される溶離液を汲み
上げ、混合・濃度調整して、測定時に分離カラム２４か
ら目的成分を溶離するための測定用溶離液、あるいは測
定用溶離液よりも高濃度で溶離能力の高い除去用溶離液
を調整・吐出し、試料・溶離液切替弁１６に供給する。A deaerator 18 and a concentration control pump 20 are connected to both eluent tanks. The concentration control pump 20 pumps up the eluent filled in both eluent tanks, mixes and adjusts the concentration, and elutes the target component from the separation column 24 at the time of measurement, or from the eluent for measurement. Also adjusts and discharges a high-concentration removal eluent having a high elution capacity and supplies it to the sample / eluent switching valve 16.
【００２６】本発明においては、このような濃度コント
ロールポンプ２０を利用するのに限定はされず、あらか
じめ測定用溶離液と除去用溶離液とを調整しておき、異
なるポンプで分離カラム２４に供給する方法等、測定用
溶離液あるいは除去用溶離液を択一的に分離カラム２４
に供給可能な公知の方法がすべて利用可能である。The present invention is not limited to the use of such a concentration control pump 20. The measuring eluent and the removing eluent are adjusted in advance and supplied to the separation column 24 by different pumps. Method, etc., the measuring eluent or the eluent for removal is selectively separated in the separation column 24.
All known methods that can be supplied to
【００２７】オートサンプラー１０および濃度コントロ
ールポンプ２０は共に試料・溶離液切替弁１６に接続さ
れる。試料・溶離液切替弁１６は直結あるいは試料ルー
プ２２を介して接続される２つの４方向切替弁で構成さ
れ、オートサンプラー１０および濃度コントロールポン
プ２０を、試料ループ２２を介してあるいは介さずに、
分離カラム２４および第１廃液瓶４０に接続する。Both the autosampler 10 and the concentration control pump 20 are connected to the sample / eluent switching valve 16. The sample / eluent switching valve 16 is composed of two four-way switching valves which are directly connected or connected via a sample loop 22, and the autosampler 10 and the concentration control pump 20 are connected via the sample loop 22 or not.
It is connected to the separation column 24 and the first waste liquid bottle 40.
【００２８】なお、本発明においては、このような４方
向切替弁を２個組み合わせた試料・溶離液切替弁１６を
使用しなくても、試料、測定用溶離液および除去用溶離
液のそれぞれに独立のポンプおよび経路切替手段を設け
る構成等、試料、測定用溶離液および除去用溶離液のそ
れぞれを独立して試料ループ２２、分離カラム２４等に
供給可能な構成がいずれも利用可能である。In the present invention, even if the sample / eluent switching valve 16 in which two such four-way switching valves are combined is not used, each of the sample, the measuring eluent, and the removing eluent is removed. Any structure, such as a structure in which an independent pump and a path switching unit are provided, is capable of independently supplying the sample, the measurement eluent, and the removal eluent to the sample loop 22, the separation column 24, and the like.
【００２９】試料・溶離液切替弁１６の下流には分離カ
ラム２４が配置される。分離カラム２４は、試料に含有
される各成分を一旦保持（滞留）した後に溶離すること
で試料中の各成分を分離するもので、試料中の各成分
は、溶離液の流量や溶離能力に応じた各成分毎の溶離時
間（保持時間）に応じて、溶離時間の短いものから順次
溶離されて分離される。A separation column 24 is arranged downstream of the sample / eluent switching valve 16. The separation column 24 separates each component in the sample by once retaining (retaining) each component contained in the sample and then eluting it. Each component in the sample has a flow rate and an elution capacity of the eluent. Depending on the elution time (retention time) of each component, the components having shorter elution times are sequentially eluted and separated.
【００３０】本発明の分析装置（方法）において、分離
カラム２４には特に限定はなく、測定する目的成分に応
じて、公知の分離カラムがすべて利用可能である。ここ
で、本発明はグラジエント分析を行うものであり、後に
詳述するが、除去用溶離液がサプレッサー３２に流入す
ることがないので、サプレッサー３２に溶離液成分が滞
留することによる測定感度や精度の低下がない。特に小
口径のサプレッサーにおいては、この利点は極めて重要
な意味を持つ。従って、少量の試料、少量の溶離液での
分析が可能で、測定感度を良好とできる、通常より口径
の小さい、好ましくは口径が３ミリ以下の小口径型の分
離カラムは、特に好適に利用可能である。In the analyzer (method) of the present invention, the separation column 24 is not particularly limited, and any known separation column can be used according to the target component to be measured. Here, the present invention performs gradient analysis, which will be described in detail later, but since the eluent for removal does not flow into the suppressor 32, measurement sensitivity and accuracy due to retention of the eluent component in the suppressor 32 There is no decline. This advantage is extremely important especially for suppressors of small diameter. Therefore, it is possible to analyze with a small amount of sample and a small amount of eluent, and to improve the measurement sensitivity. A small-diameter separation column with a smaller diameter than usual, preferably with a diameter of 3 mm or less is particularly preferably used. It is possible.
【００３１】分離カラム２４の下流には、４方向切替弁
である多方向切替弁２６が配置される。多方向切替弁２
６には、除去用溶離液より溶離能力が低い、好ましくは
測定用溶離液とほぼ同等すなわち測定用溶離液と同様の
溶離力を有する（あるいは測定用溶離液と同じ組成の）
補助溶離液を充填しかつ供給する第３溶離液槽２８が接
続される。さらに、多方向切替弁２６の残りの口は、溶
離液成分を電気伝導度の低い形態に変えて電気伝導度測
定のバックグラウンドレベルを低下するサプレッサー３
２および第１廃液瓶４０に接続される。A multi-way switching valve 26, which is a four-way switching valve, is arranged downstream of the separation column 24. Multidirectional switching valve 2
No. 6 has a lower elution capacity than the removal eluent, and preferably has almost the same elution power as the measurement eluent, that is, the same elution power as the measurement eluent (or the same composition as the measurement eluent).
A third eluent tank 28 is connected to which the auxiliary eluent is filled and supplied. Further, the remaining port of the multidirectional switching valve 26 changes the eluent component to a form having low electric conductivity to suppress the background level of electric conductivity measurement.
2 and the first waste liquid bottle 40.
【００３２】すなわち、図示例の分析装置においては、
分離カラム２４および第３溶離液槽２８は、多方向切替
弁２６によってサプレッサー３２および第１廃液瓶４０
に択一的に接続自在にされる。That is, in the analyzer of the illustrated example,
The separation column 24 and the third eluent tank 28 are connected to the suppressor 32 and the first waste liquid bottle 40 by the multidirectional switching valve 26.
Can be freely connected as an alternative.
【００３３】本発明の分析装置（方法）は、このような
構成を有することにより、グラジエント分析方法におい
て、マトリックス成分を分離カラム２４から迅速に溶離
するための除去用溶離液をサプレッサー３２に流入する
ことなく、第１廃液瓶４０に流すことができる。The analyzing apparatus (method) of the present invention having such a structure allows the removal eluent for rapidly eluting the matrix components from the separation column 24 to flow into the suppressor 32 in the gradient analysis method. It can be flowed to the first waste liquid bottle 40 without the need.
【００３４】周知のように、グラジエント分析方法と
は、測定時には測定用の希薄な溶離液（測定用溶離液）
を用いてクロマトグラムのピークをシャープに出し、目
的成分が分離カラム２４から溶離した後に、高濃度の溶
離液（除去用溶離液）を使用して分離カラム２４からの
溶離の遅い成分の溶離を促進することにより、液体クロ
マトグラフ装置による迅速な連続分析を可能とする方法
である。なお、本来は徐々に濃度を変える（濃度勾配を
付ける）ことを意味しているが、低濃度から高濃度に一
挙に変えても別に問題はない。本発明者らの新たな知見
によれば、分離カラムおよびサプレッサーの口径が３mm
以下の小口径型クロマトグラフ装置で特に顕著に確認さ
れたが、高濃度溶離液を使用すると、マトリックス成分
を分離カラム２４から溶離した後に、溶離液を希薄なも
のに変更しても、高濃度溶離液成分がサプレッサーに滞
留し、測定目的成分の測定感度の低下および測定精度の
低下を引き起こすのは前述のとおりである。As is well known, the gradient analysis method means a dilute eluent for measurement during measurement (eluent for measurement).
The peak of the chromatogram is sharpened using, and after elution of the target component from the separation column 24, a high-concentration eluent (removing eluent) is used to elute the component that elutes slowly from the separation column 24. By accelerating, it is a method that enables rapid continuous analysis by a liquid chromatograph. Originally, it means gradually changing the concentration (providing a concentration gradient), but there is no problem even if the concentration is changed from low concentration to high concentration all at once. According to the new findings of the present inventors, the separation column and the suppressor have a diameter of 3 mm.
It was confirmed particularly remarkably in the following small-diameter type chromatograph apparatus. However, when a high-concentration eluent is used, even if the eluent is changed to a dilute one after the matrix component is eluted from the separation column 24, a high concentration is obtained. As described above, the eluent component stays in the suppressor, which causes a decrease in the measurement sensitivity and a decrease in the measurement accuracy of the measurement target component.
【００３５】これに対し、本発明の分析装置（方法）に
よれば、除去用溶離液を分離カラム２４に供給する際に
は、多方向切替弁２６によって分離カラム２４と第１廃
液瓶４０とを接続し、除去用溶離液をサプレッサー３２
に流入することなく、分離カラム２４に残留するマトリ
ックス成分を迅速に溶離できる。しかも、この際にはサ
プレッサー３２には第３溶離液槽２８が接続され、測定
用溶離液と同等の補助溶離液が供給されているので、サ
プレッサー３２は安定して立ち上がった状態となってお
り、分離カラム２４からのマトリックス成分溶離終了
後、即座に次回の測定を行うことが可能である。従っ
て、本発明によれば、グラジエント法を利用した液体ク
ロマトグラフィーにおいて、除去用溶離液による悪影響
をサプレッサーや検出器に与えることがなく、分離カラ
ムからマトリックス成分を迅速に溶離して、マトリック
ス成分に起因する測定感度および精度の低下のない、高
精度な連続測定を迅速に行うことができ、特に、小口径
の分離カラムおよびサプレッサーを用いた液体クロマト
グラフィーに好適に利用可能である。On the other hand, according to the analyzer (method) of the present invention, when the removing eluent is supplied to the separation column 24, the separation column 24 and the first waste liquid bottle 40 are moved by the multidirectional switching valve 26. Connect the Suppressor 32 to remove the eluent for removal.
The matrix components remaining in the separation column 24 can be quickly eluted without flowing into the column. Moreover, at this time, the suppressor 32 is connected to the third eluent tank 28 and is supplied with the auxiliary eluent equivalent to the measuring eluent, so that the suppressor 32 is in a stable rising state. After the elution of the matrix component from the separation column 24 is completed, the next measurement can be performed immediately. Therefore, according to the present invention, in liquid chromatography using the gradient method, the adverse effect of the removing eluent is not exerted on the suppressor and the detector, and the matrix component is rapidly eluted from the separation column to form the matrix component. High-accuracy continuous measurement can be carried out rapidly without deterioration of measurement sensitivity and accuracy due to it, and it is particularly suitable for use in liquid chromatography using a small-diameter separation column and suppressor.
【００３６】本発明に利用可能なサプレッサー３２には
特に限定はなく、測定する目的成分に応じて、公知の分
離カラムがすべて利用可能であり、また、イオン交換膜
方式であっても電気透析型であってもよい。ここで、前
述のように本発明においてはサプレッサー３２への除去
用溶離液の流入がなく、サプレッサー３２に溶離液成分
が滞留することによる測定感度や精度の低下がないの
で、少量の試料、少量の溶離液での分析が可能で、測定
感度を良好とできる、小口径型のサプレッサーが特に好
適に利用可能である。The suppressor 32 that can be used in the present invention is not particularly limited, and any known separation column can be used according to the target component to be measured. Further, even if it is an ion exchange membrane system, it is an electrodialysis type. May be Here, as described above, in the present invention, the eluent for removal does not flow into the suppressor 32, and the measurement sensitivity and accuracy due to the retention of the eluent component in the suppressor 32 do not decrease, so a small sample, small amount A small-diameter suppressor that can perform analysis with the eluent of (1) and has good measurement sensitivity can be particularly preferably used.
【００３７】本発明においては、図示例のような第３溶
離液槽２８を設けて補助溶離液をサプレッサーに供給す
るのに限定はされず、供給手段を設けて第１溶離液槽に
充填される希薄な溶離液を供給するように構成してもよ
い。The present invention is not limited to providing the third eluent tank 28 as shown in the figure to supply the auxiliary eluent to the suppressor, but it is also possible to provide a supplying means to fill the first eluent tank. It may be configured to supply a dilute eluent.
【００３８】また、サプレッサー３２には、サプレッサ
ー３２の能力を再生するための再生液供給手段３０が接
続が配置される。使用された再生液は、第２廃液瓶４２
に排出される。Also connected to the suppressor 32 is a regenerant supply means 30 for regenerating the capacity of the suppressor 32. The used regenerating liquid is the second waste liquid bottle 42.
Is discharged to.
【００３９】サプレッサー３２の下流には、電気伝導度
検出セル３４が配置され、この電気伝導度検出セル３４
には第３廃液瓶４４が接続される。また、電気伝導度検
出セル３４には、溶離液の電気伝導度を計測して目的成
分を検出する電気伝導度検出器３６が（電気的に）接続
され、この電気伝導度検出器３６による計測結果は記録
装置３８に記録される。An electrical conductivity detecting cell 34 is arranged downstream of the suppressor 32, and the electrical conductivity detecting cell 34 is provided.
A third waste liquid bottle 44 is connected to. Further, an electric conductivity detector 36 for measuring the electric conductivity of the eluent to detect a target component is (electrically) connected to the electric conductivity detection cell 34, and the electric conductivity detector 36 measures the electric conductivity. The result is recorded in the recording device 38.
【００４０】以下、本発明の分析装置（方法）の作用に
ついて説明する。まず、図１に示される状態に試料・溶
離液切替弁１６および多方向切替弁２６が切り替えら
れ、オートサンプラー１０と試料ループ２２、濃度コン
トロールポンプ２０と分離カラム２４、さらに分離カラ
ム２４とサプレッサー３２とが、それぞれ接続される。
この状態でオートサンプラー１０から試料ループ２２に
試料が注入される。また、第１溶離液槽１２および第２
溶離液槽１４に充填される希薄および高濃度溶離液は、
脱気装置１８で脱気されつつ濃度コントロールポンプ２
０によって汲み上げられ、混合・濃度調整されて測定用
溶離液とされて試料・溶離液切替弁１６に供給され、分
離カラム２４〜サプレッサー３２〜第３廃液瓶４４に至
る主経路を流れている。なお、脱気装置１８は設置が望
まれるが、本発明の場合には急に濃度が変わるので、必
ずしも脱気しなくてもガス泡による一時的な変動はさほ
ど致命的ではなく、必須の要件ではない。The operation of the analyzer (method) of the present invention will be described below. First, the sample / eluent switching valve 16 and the multidirectional switching valve 26 are switched to the state shown in FIG. 1, and the autosampler 10 and the sample loop 22, the concentration control pump 20 and the separation column 24, and the separation column 24 and the suppressor 32. And are connected respectively.
In this state, the sample is injected from the auto sampler 10 into the sample loop 22. In addition, the first eluent tank 12 and the second
The dilute and high-concentration eluent filled in the eluent tank 14 is
Concentration control pump 2 while being degassed by the degassing device 18.
0 is pumped up, mixed and adjusted in concentration to be an eluent for measurement, supplied to the sample / eluent switching valve 16, and flows through the main path from the separation column 24 to the suppressor 32 to the third waste liquid bottle 44. Although the deaerator 18 is desired to be installed, in the case of the present invention, the concentration changes abruptly, so even if deaerating is not necessary, temporary fluctuation due to gas bubbles is not so fatal, and is an essential requirement. is not.
【００４１】試料ループ２２への試料注入が終了する
と、試料・溶離液切替弁１６が切り替えられて図２に示
される状態となり、濃度コントロールポンプ２０、試料
ループ２２および分離カラム２４が接続されて、測定が
開始される。すなわち、試料ループ２２に測定用溶離液
が供給され、試料はこの測定用溶離液と共に分離カラム
２４に流入する。分離カラム２４に試料（測定用溶離
液）が流入し、さらに測定用溶離液が供給されると、試
料中の成分のうち溶離時間の短いものから分離カラム２
４より流出し、多方向切換弁２６を通過してサプレッサ
ー３２で溶離液成分のバックグラウンドが低下され、次
いで電気伝導度検出セル３４に流入して、電気伝導度検
出器３６によって電気伝導度が測定されて、目的成分が
検出され、記録装置３８に記録される。また、電気伝導
度検出セル３４を通過した測定用溶離液（目的成分）
は、第３廃液瓶４４に排出される。When the sample injection into the sample loop 22 is completed, the sample / eluent switching valve 16 is switched to the state shown in FIG. 2, and the concentration control pump 20, the sample loop 22 and the separation column 24 are connected, The measurement is started. That is, the measurement eluent is supplied to the sample loop 22, and the sample flows into the separation column 24 together with the measurement eluent. When the sample (measuring eluent) flows into the separation column 24 and is further supplied with the measuring eluent, the separation column 2 starts from the component having the shortest elution time among the components in the sample.
4, the background of the eluent component is reduced by the suppressor 32 after passing through the multidirectional switching valve 26, then flows into the electric conductivity detecting cell 34, and the electric conductivity is detected by the electric conductivity detector 36. After the measurement, the target component is detected and recorded in the recording device 38. Further, the measuring eluent that has passed through the electric conductivity detecting cell 34 (target component)
Is discharged to the third waste liquid bottle 44.
【００４２】電気伝導度検出器３６あるいは記録装置３
８によって目的成分がすべて分離カラム２４より流出し
たことが確認されると、多方向切替弁２６が切り替えら
れ図３に示される状態となり、分離カラム２４と第１廃
液瓶４０が、第３溶離液槽２８とサプレッサー３２が、
それぞれ接続される。同時に、第３溶離液槽２８からサ
プレッサー３２に補助溶離液が供給され、他方、濃度コ
ントロールポンプ２０は第１溶離液槽１２および第２溶
離液槽１４からの各溶離液の混合量を調整して除去用溶
離液とし、これを分離カラム２４に供給して、残留する
マトリックス成分を迅速に溶離する。この際、必要に応
じて除去用溶離液の流量を増量してもよい。分離カラム
２４を通過した除去用溶離液およびマトリックス成分
は、サプレッサー３２には流入せずに第１廃液瓶４０に
排出される。Electric conductivity detector 36 or recording device 3
When it is confirmed by 8 that all the target components have flowed out from the separation column 24, the multidirectional switching valve 26 is switched to the state shown in FIG. 3, and the separation column 24 and the first waste liquid bottle 40 become the third eluent. Tank 28 and suppressor 32
Connected respectively. At the same time, the auxiliary eluent is supplied from the third eluent tank 28 to the suppressor 32, while the concentration control pump 20 adjusts the mixing amount of each eluent from the first eluent tank 12 and the second eluent tank 14. Is used as a removing eluent and is supplied to the separation column 24 to rapidly elute the remaining matrix components. At this time, the flow rate of the removing eluent may be increased if necessary. The eluent for removal and the matrix component that have passed through the separation column 24 are discharged to the first waste liquid bottle 40 without flowing into the suppressor 32.
【００４３】分離カラム２４からのマトリックス成分の
溶離が終了すると、濃度コントロールポンプ２０は再度
溶離液の濃度を調整して、数分間測定用溶離液を供給す
ることによって、除去用溶離液が供給された系内を測定
用溶離液に置換し、さらに、溶離液流量を調整した場合
には流量を測定流量に戻す。When the elution of the matrix component from the separation column 24 is completed, the concentration control pump 20 adjusts the concentration of the eluent again and supplies the measuring eluent for several minutes, thereby supplying the removing eluent. The system is replaced with the measuring eluent, and when the eluent flow rate is adjusted, the flow rate is returned to the measurement flow rate.
【００４４】測定用溶離液への置換が終了すると、多方
向切替弁２６を切り替えて図２に示される状態として分
離カラム２４とサプレッサー３２とを接続し、測定用溶
離液を分離カラム２４〜第３廃液瓶４４に至る主経路全
体に流して系内を安定させ、所定時間経過後に、試料・
溶離液切替弁１６を切り替えて図１に示される状態とし
て、次回の測定を待機する。When the replacement with the measuring eluent is completed, the multidirectional switching valve 26 is switched to connect the separation column 24 and the suppressor 32 in the state shown in FIG. 3 Flow through the entire main path to the waste liquid bottle 44 to stabilize the system, and after a predetermined time has passed,
The eluent switching valve 16 is switched to the state shown in FIG. 1 to wait for the next measurement.
【００４５】以上、本発明の液体クロマトグラフィーの
グラジエント分析方法および装置について詳細に説明し
たが、本発明は上述の例には限定されず、本発明の要旨
を逸脱しない範囲において、各種の変更および改良を行
ってもよいのはもちろんである。Although the gradient analysis method and apparatus for liquid chromatography of the present invention have been described above in detail, the present invention is not limited to the above-mentioned examples, and various changes and modifications are possible without departing from the gist of the present invention. Of course, improvements may be made.
【００４６】[0046]
【実施例】以下、本発明の液体クロマトグラフィーのグ
ラジエント分析方法および装置の具体的実施例を挙げ、
本発明をより詳細に説明する。なお、本発明は以下の実
施例に限定されない。EXAMPLES Hereinafter, specific examples of the gradient analysis method and apparatus for liquid chromatography of the present invention will be described.
The present invention will be described in more detail. The present invention is not limited to the examples below.
【００４７】＜実施例１＞過塩素酸数１００ｍｇ／ｌ溶
液中の濃度数１００μｇ／ｌ〜数ｍｇ／ｌの硫酸イオン
の測定を、図１〜３に示される本発明の分析装置を用
い、本発明の分析方法によって行った。なお、各溶離液
や測定条件等は下記のとおりである。<Example 1> The number of perchloric acid in the solution of 100 mg / l in the concentration of several 100 μg / l to several mg / l of the sulfate ion was measured by using the analyzer of the present invention shown in FIGS. The analysis method of the present invention was used. The respective eluents, measurement conditions, etc. are as follows.
【００４８】第一溶離液槽１２ イオン交換水 第二溶離液槽１４ １８ｍＭ Ｎａ2 ＣＯ3 、１７ｍ
Ｍ ＮａＨＣＯ3 第三溶離液槽２８ １．８ｍＭ Ｎａ2 ＣＯ3 、１．
７ｍＭ ＮａＨＣＯ3 溶離液流量 第一溶離液、第二溶離液あわせて０．５
ｍｌ／ｍｉｎ、または０．８ｍｌ／ｍｉｎ 第三溶離液 ０．５ｍｌ／ｍｉｎ 再生液 ２５ｍＭ Ｈ2 ＳＯ4 再生液流量 ５ｍｌ／ｍｉｎ 試料量 １０μｌ 分離カラム２４ ダイオネクス社製 ＩＯＮＰＡＣ
ＡＳ４Ａ−ＳＣ２ｍｍ サプレッサー３２ ダイオネクス社製 ＡＭＭＳ（２ｍ
ｍ）First eluent tank 12 Ion-exchanged water Second eluent tank 14 18 mM Na 2 CO 3 , 17 m
M NaHCO 3 third eluent tank 28 1.8 mM Na 2 CO 3 , 1.
7 mM NaHCO 3 eluent flow rate 0.5 for both first and second eluents
ml / min or 0.8 ml / min third eluent 0.5 ml / min regenerant 25 mM H 2 SO 4 regenerant flow 5 ml / min sample volume 10 μl separation column 24 IONPAC manufactured by Dionex
AS4A-SC2mm Suppressor 32 AMMS (2m manufactured by Dionex)
m)
【００４９】上記条件で、試料の分析を行った。まず、
図１に示される状態として、オートサンプラー１０から
試料ループ２２に試料を１０μｌ打ち込む。この間、濃
度コントロールポンプ２０からは、１．８ｍＭ Ｎａ2
ＣＯ3 、１．７ｍＭ ＮａＨＣＯ3 に調整された測定用
溶離液が０．５ｍｌ／ｍｉｎの流量で試料・溶離液切替
弁１６に供給されている。The sample was analyzed under the above conditions. First,
In the state shown in FIG. 1, 10 μl of the sample is shot from the autosampler 10 into the sample loop 22. During this period, 1.8 mM Na 2 was supplied from the concentration control pump 20.
The measurement eluent adjusted to CO 3 , 1.7 mM NaHCO 3 is supplied to the sample / eluent switching valve 16 at a flow rate of 0.5 ml / min.
【００５０】次いで、試料・溶離液切替弁１６を図２に
示されるように切り替え、濃度コントロールポンプ２
０、試料ループ２２および分離カラム２４を接続して、
測定を開始した。Next, the sample / eluent switching valve 16 is switched as shown in FIG.
0, the sample loop 22 and the separation column 24 are connected,
The measurement was started.
【００５１】上記条件では、１０分後に目的成分（硫酸
イオン）の検出終了が確認されたので、多方向切替弁２
６を切り替えて図３に示される状態とし、サプレッサー
３２に第三溶離液槽２８に充填される１．８ｍＭ Ｎａ
2 ＣＯ3 、１．７ｍＭ ＮａＨＣＯ3 の補助溶離液を供
給し、同時に濃度コントロールポンプ２０によって溶離
液の濃度を調整し、１８ｍＭ Ｎａ2 ＣＯ3 、１７ｍＭ
ＮａＨＣＯ3 の除去用溶離液を試料ループ２２および
分離カラム２４に供給した。また、除去用溶離液に切り
替えた時点で、流量は０．８ｍｌ／ｍｉｎに増量した。
なお、この除去用溶離液は多方向切替弁２６を経て第１
廃液瓶４０に排出される。Under the above conditions, it was confirmed that the detection of the target component (sulfate ion) was completed after 10 minutes, so the multidirectional switching valve 2
6 is switched to the state shown in FIG. 3, and the suppressor 32 is filled with 1.8 mM Na in the third eluent tank 28.
An auxiliary eluent of 2 CO 3 , 1.7 mM NaHCO 3 was supplied, and at the same time, the concentration of the eluent was adjusted by the concentration control pump 20 to obtain 18 mM Na 2 CO 3 and 17 mM.
The eluent for removal of NaHCO 3 was fed to the sample loop 22 and the separation column 24. The flow rate was increased to 0.8 ml / min at the time of switching to the eluent for removal.
The eluent for removal passes through the multi-directional switching valve 26 and is then passed through the first direction.
It is discharged to the waste liquid bottle 40.
【００５２】測定開始より１８分経過したところで、濃
度コントロールポンプ２０によって溶離液の濃度を調整
し、分離カラム２４に供給する溶離液を１．８ｍＭ Ｎ
ａ2ＣＯ3 、１．７ｍＭ ＮａＨＣＯ3 の測定用溶離液
に変更し、流量を再度０．５ｍｌ／ｍｉｎとした。After 18 minutes from the start of measurement, the concentration of the eluent was adjusted by the concentration control pump 20, and the eluent supplied to the separation column 24 was 1.8 mM N 2.
The measuring eluent was changed to a 2 CO 3 and 1.7 mM NaHCO 3 , and the flow rate was set to 0.5 ml / min again.
【００５３】２３分経過後、マトリックス成分の溶離、
および系内の測定用溶離液置換がほぼ終了したと見な
し、多方向切替弁２６を切り替えて図２に示される状態
として、分離カラム２４から第３廃液瓶４４に至る主経
路に測定用溶離液を流し、３０分経過後に、試料・溶離
液切替弁１６を切り替えて、図１に示される次回の測定
待機状態とし、一介の測定ルーチンを終了し、直ちに次
回の測定を開始した。すなわち、本実施例（発明例）で
は、３０分で一回の測定操作が終了した。なお、測定用
溶離液への置換は、サプレッサー３２に溶離液を流して
予備測定を行う方法や、発色剤を混ぜてポストカラム吸
光光度法で測定する方法等によって確認してもよい。After 23 minutes, elution of matrix components,
It is considered that the replacement of the measuring eluent in the system is almost completed, and the multidirectional switching valve 26 is switched to the state shown in FIG. 2 to bring the measuring eluent into the main path from the separation column 24 to the third waste liquid bottle 44. After 30 minutes have passed, the sample / eluent switching valve 16 was switched to the next measurement standby state shown in FIG. 1, the one measurement routine was terminated, and the next measurement was immediately started. That is, in this example (invention example), one measurement operation was completed in 30 minutes. The replacement with the measuring eluent may be confirmed by a method of flowing the eluent through the suppressor 32 for preliminary measurement, a method of mixing a color former with the post-column absorptiometry, or the like.
【００５４】以上の測定ルーチンを繰り返した結果を図
４に示す。図４に示されるように、本発明によれば、測
定後直ちに次の試料を測定しても感度の低下は起こらず
良好な再現性が得られた。The result of repeating the above measurement routine is shown in FIG. As shown in FIG. 4, according to the present invention, even if the next sample was measured immediately after the measurement, the sensitivity did not decrease and good reproducibility was obtained.
【００５５】＜実施例２＞上記実施例１において、測定
開始後１０分経過後の多方向切替弁２６の切り替えを行
わず、除去用溶離液供給を終了（実施例１での２２分経
過時）した後の測定用溶離液の供給時間を種々変更し
て、同様の測定を行い、硫酸イオンを測定して検出感度
の変動を検討した。同様の測定を３回行った結果を図５
に示す。また、比較のために、本発明法として、測定開
始後１０分経過後の多方向切替弁２６の切り替えを行っ
て上記と同様の実験を行い、感度の変動を測定した結果
を図６に示す。<Embodiment 2> In Embodiment 1, the multi-directional switching valve 26 is not switched 10 minutes after the start of measurement, and the supply of the eluent for removal is completed (when 22 minutes have elapsed in Embodiment 1). After changing the supply time of the measuring eluent, the same measurement was performed, and the sulfate ion was measured to examine the fluctuation of the detection sensitivity. The result of performing the same measurement three times is shown in FIG.
Shown in. For comparison, as the method of the present invention, the multi-directional switching valve 26 was switched 10 minutes after the start of the measurement, the same experiment as above was conducted, and the result of measuring the variation in sensitivity is shown in FIG. .
【００５６】図６に示されるように、多方向切替弁２６
の切り替えを行って除去用溶離液を流す本発明では感度
の変動は起こっていないが、図５に示されるように、本
発明を用いない場合は感度が変動し、回復には２時間程
度安定させて装置のフロー内の溶離液濃度置換を行う必
要がある。As shown in FIG. 6, the multidirectional switching valve 26
In the present invention in which the removal eluent is switched by switching the above, the sensitivity does not fluctuate, but as shown in FIG. 5, the sensitivity fluctuates when the present invention is not used, and the recovery is stable for about 2 hours. Therefore, it is necessary to replace the concentration of the eluent in the flow of the apparatus.
【００５７】＜実施例３＞溶離液をほう酸および水酸化
ナトリウムに変更した以外は、前記実施例２と全く同様
にして感度の変動を測定した。なお、ほう酸溶離液およ
び水酸化ナトリウム溶離液共に測定用溶離液の濃度は４
０ｍＭ、除去用溶離液の濃度は４００ｍＭとした。結果
を図７に示す。なお、図７において、△は水酸化ナトリ
ウム溶離液での結果を、□はほう酸溶離液での結果をそ
れぞれ示す。また、前記実施例２における結果（本発明
を用いる場合および用いない場合）を○として併記す
る。Example 3 Sensitivity fluctuations were measured in the same manner as in Example 2 except that boric acid and sodium hydroxide were used as eluents. The concentration of the measuring eluent is 4 for both the boric acid eluent and the sodium hydroxide eluent.
The concentration of the eluent for removal was 0 mM and 400 mM. The results are shown in Fig. 7. In FIG. 7, Δ indicates the result with the sodium hydroxide eluent, and □ shows the result with the boric acid eluent. In addition, the result in Example 2 (when the present invention is used and when it is not used) is also shown as ◯.
【００５８】図７に示されるように、従来法では、溶離
液の種類を変えても炭酸ナトリウム・炭酸水素ナトリウ
ム混合溶離液の場合と同様に感度の回復には２時間程度
安定させて装置のフロー内の溶離液濃度置換を行う必要
がある。また、通常の一定の溶離液濃度で測定すると、
分析時間は１試料あたり７５分以上必要である。As shown in FIG. 7, in the conventional method, even if the type of the eluent is changed, the sensitivity is recovered for about 2 hours to recover the sensitivity as in the case of the mixed eluent of sodium carbonate / sodium hydrogen carbonate. It is necessary to replace the concentration of the eluent in the flow. Also, when measured with a normal constant eluent concentration,
The analysis time must be 75 minutes or more per sample.
【００５９】なお、以上の実施例は、サプレッサー３２
としてイオン交換膜方式のサプレッサー（ダイオネクス
社製 ＡＭＭＳ（２ｍｍ））を用いた例であるが、電気
透析型のサプレッサーを用いた際にも、ほぼ同様の結果
が得られた。In the above embodiment, the suppressor 32 is used.
As an example, an ion-exchange membrane type suppressor (AMMS (2 mm) manufactured by Dionex) was used, but almost the same result was obtained when an electrodialysis type suppressor was used.
【００６０】以上の結果より、本発明の効果は明らかで
ある。From the above results, the effect of the present invention is clear.
【００６１】[0061]
【発明の効果】以上詳細に説明したように、本発明のグ
ラジエント法を利用した液体クロマトグラフィー方法お
よび装置によれば、溶離力の高い除去用溶離液をサプレ
ッサーに流入することなく、分離カラムからマトリック
ス成分を迅速に溶離して、マトリックス成分に起因する
測定感度および精度の低下のない、高精度な連続測定を
迅速に行うことができる。サプレッサーに除去用溶離液
が流入することがないので、サプレッサーへの溶離液成
分による感度および精度低下を生じやすい小口径の分離
カラムおよびサプレッサーを用いた液体クロマトグラフ
ィーには、特に好適に可能である。As described in detail above, according to the liquid chromatography method and apparatus utilizing the gradient method of the present invention, the eluent for removal having a high elution power is removed from the separation column without flowing into the suppressor. It is possible to rapidly elute the matrix component and rapidly perform highly accurate continuous measurement without deterioration in measurement sensitivity and precision due to the matrix component. Since the eluent for removal does not flow into the suppressor, it is particularly suitable for liquid chromatography using a small-diameter separation column and suppressor in which the sensitivity and accuracy are likely to decrease due to the eluent component into the suppressor. .
【図１】本発明の液体クロマトグラフィーのグラジエン
ト分析装置の一例およびその動作を示す概念図である。FIG. 1 is a conceptual diagram showing an example of a gradient analyzer for liquid chromatography of the present invention and its operation.
【図２】図１に示される液体クロマトグラフィーのグラ
ジエント分析装置の動作を示す概念図である。FIG. 2 is a conceptual diagram showing the operation of the gradient analyzer for liquid chromatography shown in FIG.
【図３】図１に示される液体クロマトグラフィーのグラ
ジエント分析装置の動作を示す概念図である。FIG. 3 is a conceptual diagram showing the operation of the gradient analyzer for liquid chromatography shown in FIG.
【図４】本発明の液体クロマトグラフィーのグラジエン
ト分析方法によるルーチン分析の結果を示すグラフであ
る。FIG. 4 is a graph showing the results of routine analysis by the gradient analysis method for liquid chromatography of the present invention.
【図５】従来の液体クロマトグラフィーのグラジエント
分析方法による安定時間と測定感度との関係を示すグラ
フである。FIG. 5 is a graph showing the relationship between the stability time and the measurement sensitivity by the conventional gradient analysis method of liquid chromatography.
【図６】本発明の液体クロマトグラフィーのグラジエン
ト分析方法による安定時間と測定感度との関係を示すグ
ラフである。FIG. 6 is a graph showing the relationship between the stabilization time and the measurement sensitivity by the gradient analysis method of liquid chromatography of the present invention.
【図７】本発明および従来の液体クロマトグラフィーの
グラジエント分析方法の別の例による安定時間と測定感
度との関係を示すグラフである。FIG. 7 is a graph showing the relationship between stability time and measurement sensitivity according to another example of the gradient analysis method of the present invention and the conventional liquid chromatography.
【図８】（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、従来の液体ク
ロマトグラフィーにおいてルーチン分析を行った際のク
ロマトグラムである。8 (a), (b) and (c) are chromatograms obtained by performing routine analysis in conventional liquid chromatography.
【図９】従来の液体クロマトグラフィーのグラジエント
分析方法を行う装置の一部を概念的に示す図である。FIG. 9 is a view conceptually showing a part of an apparatus for performing a conventional gradient analysis method of liquid chromatography.
１０ オートサンプラー １２ 第１溶離液槽 １４ 第２溶離液槽 １６ 試料・溶離液切替弁 １８ 脱気装置 ２０ 濃度コントロールポンプ ２２ 試料ループ ２４ 分離カラム ２６ 多方向切替弁 ２８ 第３溶離液槽 ３０ 再生液槽 ３２ サプレッサー ３４ 電気伝導度セル ３６ 電気伝導度検出器 ３８ 記録装置 ４０ 廃液瓶１ ４２ 廃液瓶２ ４４ 廃液瓶３ 10 Autosampler 12 First eluent tank 14 Second eluent tank 16 Sample / eluent switching valve 18 Degassing device 20 Concentration control pump 22 Sample loop 24 Separation column 26 Multidirectional switching valve 28 Third eluent tank 30 Regeneration solution Tank 32 Suppressor 34 Electric conductivity cell 36 Electric conductivity detector 38 Recording device 40 Waste liquid bottle 1 42 Waste liquid bottle 2 44 Waste liquid bottle 3
Claims (4)
クロマトグラフィーにおいて、測定用溶離液によって目
的成分が前記分離カラムから流出した後に、前記測定用
溶離液よりも溶離能力の高い除去用溶離液を前記分離カ
ラムに流入して不要成分を分離カラムから流出せしめる
グラジエント分析方法であって、 前記除去用溶離液を前記分離カラムに流入すると共に前
記分離カラムからの流出経路をサプレッサーとは別の経
路に切り換え、同時に前記サプレッサーに前記除去用溶
離液より溶離能力の低い補助溶離液を流入することを特
徴とする液体クロマトグラフィーのグラジエント分析方
法。1. In liquid chromatography using a separation column and a suppressor, after the target component has flowed out from the separation column by the measurement eluent, a removal eluent having a higher elution capacity than the measurement eluent is used. A gradient analysis method of flowing into a separation column and causing unnecessary components to flow out of the separation column, wherein the eluent for removal is allowed to flow into the separation column and an outflow route from the separation column is switched to a route different from the suppressor. At the same time, an auxiliary eluent having a lower elution ability than the eluent for removal is introduced into the suppressor, and the gradient analysis method for liquid chromatography is characterized.
が３mm以下である請求項１に記載の液体クロマトグラフ
ィーのグラジエント分析方法。2. The gradient analysis method for liquid chromatography according to claim 1, wherein the separation column and the suppressor have a diameter of 3 mm or less.
測定用溶離液より溶離能力の高い除去用溶離液を前記分
離カラムに流入して不要成分を分離カラムから流出せし
めるグラジエント分析を行う液体クロマトグラフィーの
グラジエント分析装置であって、 分離カラムと、前記分離カラムの下流側に配置されるサ
プレッサーと、前記サプレッサーに流入した目的成分を
検出する検出手段と、試料、前記分離カラム中の成分を
溶離する測定用溶離液、および前記測定用溶離液よりも
溶離能力の高い除去用溶離液をそれぞれ前記分離カラム
に供給する手段と、前記除去用溶離液より溶離能力の低
い補助溶離液を前記サプレッサーに供給するための補助
溶離液供給手段と、前記分離カラムおよびサプレッサー
の間に配置され、前記分離カラムまたは補助溶液供給手
段と前記サプレッサーまたは廃液経路とを接続自在にす
る多方向切換弁および流路とを有し、 前記検出手段による目的成分の検出が終了した後、前記
分離カラムに前記除去用溶離液を供給すると共に、前記
多方向切替弁を切り替え、前記分離カラムからの流出経
路を廃液経路に接続し、補助溶液供給手段と前記サプレ
ッサーとを接続することを特徴とする液体クロマトグラ
フィーのグラジエント分析装置。3. After the target component flows out from the separation column,
A gradient analyzer of liquid chromatography for performing a gradient analysis in which an eluent for removal having a higher elution capacity than an eluent for measurement is allowed to flow into the separation column and an unnecessary component is allowed to flow out from the separation column. A suppressor arranged on the downstream side of the column, a detection means for detecting the target component flowing into the suppressor, a sample, a measuring eluent for eluting the component in the separation column, and an eluent rather than the measuring eluent. A means for supplying a high-capacity removing eluent to the separation column, an auxiliary eluent supplying means for supplying an auxiliary eluent having a lower elution capacity than the removing eluent to the suppressor, the separation column, and The separation column or auxiliary solution supply means and the suppressor or waste liquid path are disposed between suppressors. A multi-directional switching valve and a flow path that can be connected to each other, and after the detection of the target component by the detection means is finished, the eluent for removal is supplied to the separation column and the multi-directional switching valve is operated. A gradient analyzer for liquid chromatography, characterized in that the outflow path from the separation column is connected to a waste solution path, and an auxiliary solution supply means and the suppressor are connected.
が３mm以下である請求項３に記載の液体クロマトグラフ
ィーのグラジエント分析装置。4. The gradient analyzer for liquid chromatography according to claim 3, wherein the separation column and the suppressor have a diameter of 3 mm or less.
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|---|---|---|---|
| JP32742393A JP3299362B2 (en) | 1993-12-24 | 1993-12-24 | Method and apparatus for gradient analysis of liquid chromatography |
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Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005241637A (en) * | 2004-02-06 | 2005-09-08 | Micromass Uk Ltd | Mass spectrometer |
| US8741149B2 (en) | 2004-02-06 | 2014-06-03 | Micromass Uk Limited | Mass spectrometer |
| JP2018009943A (en) * | 2016-07-15 | 2018-01-18 | 東ソー株式会社 | Ion chromatograph switching suppressor |
| CN107621550A (en) * | 2017-11-08 | 2018-01-23 | 苏州市苏测检测技术有限公司 | Food elution detection integration apparatus |
| CN114113373A (en) * | 2021-11-09 | 2022-03-01 | 东南大学 | System and method for measuring glyphosate, glufosinate-ammonium and nitrite in urine |
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1993
- 1993-12-24 JP JP32742393A patent/JP3299362B2/en not_active Expired - Fee Related
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