JPH0678790A - Production of optically active 3-@(3754/24)4-methoxyphenyl)glycidic acid ester compound - Google Patents
Production of optically active 3-@(3754/24)4-methoxyphenyl)glycidic acid ester compoundInfo
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Abstract
Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、セラチア属微生物の生
産するエステラーゼを用いてラセミ型3−(4−メトキ
シフェニル)グリシッド酸エステル類化合物から(2
R,3S)−3−(4−メトキシフェニル)グリシッド
酸エステル類化合物を製造する方法に関する。The present invention relates to a racemic 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound (2) using an esterase produced by a Serratia microorganism.
It relates to a method for producing an R, 3S) -3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound.
【0002】[0002]
【従来技術】(2R,3S)−3−(4−メトキシフェ
ニル)グリシッド酸エステル類化合物は、冠血管拡張作
用等の生物学的活性を有する1,5−ベンゾチアゼピン
誘導体(ジルチアゼム)の合成中間体として重要な化合
物である(特開昭60−13775、同60−1377
6)。2. Description of the Related Art (2R, 3S) -3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compounds are synthetic 1,5-benzothiazepine derivatives (diltiazem) having biological activity such as coronary vasodilatory action. It is an important compound as an intermediate (JP-A-60-13775 and JP-A-60-1377).
6).
【0003】従来、(2R,3S)−3−(4−メトキ
シフェニル)グリシッド酸エステル類化合物を製造する
方法としては、キャンディダ属、ムコール属などの微生
物由来の酵素を用いる不斉エステル交換反応を利用し
て、ラセミ型トランス−3−(4−メトキシフェニル)
グリシッド酸エステル類化合物とアルカノールから製造
する方法が知られている(特開平4−228095)。
しかしながら、上記方法では、使用する微生物酵素のラ
セミ型原料化合物における(2S,3R)体に対する立
体選択性が充分ではないため、高い光学純度を有する目
的物を効率よく製造できないという難点がある。Conventionally, as a method for producing a (2R, 3S) -3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound, an asymmetric transesterification reaction using an enzyme derived from a microorganism such as genus Candida or genus Mucor Using racemic trans-3- (4-methoxyphenyl)
A method for producing from a glycidic acid ester compound and an alkanol is known (JP-A-4-228095).
However, the above method has a drawback that the target compound having high optical purity cannot be efficiently produced because the stereoselectivity of the microbial enzyme used for the (2S, 3R) form in the racemic raw material compound is not sufficient.
【0004】[0004]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、光学活性
1,5−ベンゾチアゼピン誘導体の合成中間体として有
用な光学活性3−(4−メトキシフェニル)グリシッド
酸エステル類化合物を工業的有利に製造する方法を提供
するものである。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention provides an optically active 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound useful as a synthetic intermediate of an optically active 1,5-benzothiazepine derivative industrially advantageously. A method of manufacturing is provided.
【0005】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明者らは鋭意研究を
重ねた結果、セラチア・マルセッセンスの生産するエス
テラーゼに、ラセミ型トランス−3−(4−メトキシフ
ェニル)グリシッド酸エステル類化合物中の(2S,3
R)体を非常に立体選択性良く不斉エステル交換する能
力があることを見出し、本発明を完成するに至った。す
なわち、本発明によれば、一般式〔I〕Means for Solving the Problems As a result of intensive studies conducted by the present inventors, the esterase produced by Serratia marcescens was identified as a compound of racemic trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compounds ( 2S, 3
They have found that they have the ability to asymmetrically transesterify the R) form with very high stereoselectivity, and completed the present invention. That is, according to the present invention, the general formula [I]
【0006】[0006]
【化7】 [Chemical 7]
【0007】(但し、R1 は低級アルキル基を表す。)
で示される(2R,3S)−3−(4−メトキシフェニ
ル)グリシッド酸エステル類化合物は、一般式〔II〕(However, R 1 represents a lower alkyl group.)
The (2R, 3S) -3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound represented by the general formula [II]
【0008】[0008]
【化8】 [Chemical 8]
【0009】(式中、R1 は前記と同一意味を表す。)
で示されるラセミ型トランス−3−(4−メトキシフェ
ニル)グリシッド酸エステル類化合物と、一般式〔II
I〕(In the formula, R 1 has the same meaning as described above.)
And a racemic trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound represented by the formula [II
I]
【0010】[0010]
【化9】 [Chemical 9]
【0011】(式中、R2 は炭素数2〜10のアルキル
基を表す。但し、R2 はR1 より炭素鎖長の長いアルキ
ル基を表す。)で示されるアルカノールとを、セラチア
・マルセッセンス由来のエステラーゼの存在下で反応さ
せることにより、(2S,3R)−3−(4−メトキシ
フェニル)グリシッド酸エステル類化合物を優先的に不
斉エステル交換させて、一般式〔IV〕(In the formula, R 2 represents an alkyl group having 2 to 10 carbon atoms, provided that R 2 represents an alkyl group having a carbon chain longer than that of R 1. ) and Serratia marcescens. The (2S, 3R) -3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound is preferentially asymmetrically transesterified by reacting in the presence of the esterase derived from the general formula [IV]
【0012】[0012]
【化10】 [Chemical 10]
【0013】(式中、R2 は前記と同一意味を表す。)
で示されるグリシッド酸エステル類化合物に変換した
後、反応混合物から未反応の対掌体を分離・採取するこ
とにより製造することができる。(In the formula, R 2 has the same meaning as described above.)
It can be produced by converting to a glycidic acid ester compound represented by and then separating and collecting the unreacted enantiomer from the reaction mixture.
【0014】以下、本発明を具体的に説明する。The present invention will be specifically described below.
【0015】本発明に使用しうるセラチア・マルセッセ
ンスは、野生株、変異株であってもよく、例えばセラチ
ア・マルセッセンスSr41(微工研条寄第487号)
があげられる。更にはこれらの細菌から、遺伝子組換
え、細胞融合などの生物工学的手法により誘導された細
菌であってもよい。The Serratia marcescens which can be used in the present invention may be a wild strain or a mutant strain. For example, Serratia marcescens Sr41 (Microtechnology Research Institute No. 487).
Can be given. Further, it may be a bacterium derived from these bacteria by a bioengineering method such as gene recombination or cell fusion.
【0016】本発明にかかわるエステラーゼは、上記の
如き細菌を培養して得られる培養液から常法により精製
されたものを好適に使用することができる。また、この
ような酵素を、例えば、ポリアクリルアミド法、含硫多
糖ゲル法(カラギーナンゲル法等)、アルギン酸ゲル
法、寒天ゲル法、光架橋性樹脂、ポリエチレングリコー
ル、セライト等の公知の方法により固定化して使用する
こともできる。As the esterase according to the present invention, those purified by a conventional method from the culture solution obtained by culturing the above-mentioned bacteria can be preferably used. In addition, such an enzyme is immobilized by a known method such as polyacrylamide method, sulfur-containing polysaccharide gel method (carrageenan gel method, etc.), alginic acid gel method, agar gel method, photocrosslinkable resin, polyethylene glycol, celite, etc. It can also be used after being converted.
【0017】本発明方法の原料化合物であるラセミ型ト
ランス−3−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸エ
ステル類化合物〔II〕は、(2S,3R)体および
(2R,3S)体を等量含むものだけでなく、これら光
学活性体を共に含むものであればいずれも用いることが
できる。他方の原料化合物であるアルカノールとして
は、炭素数2〜10のものを使用することができ、とり
わけ炭素数が2から8のものが好ましい。このようなア
ルコールとしては、例えば、エチルアルコール、n−プ
ロピルアルコール、n−ブチルアルコール、n−アミル
アルコール、n−オクチルアルコールなどがあげられ
る。The racemic trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound [II], which is the starting material compound of the method of the present invention, contains the (2S, 3R) -form and the (2R, 3S) -form in equal amounts. Not only those, but any one containing both of these optically active substances can be used. As the alkanol as the other raw material compound, those having 2 to 10 carbon atoms can be used, and those having 2 to 8 carbon atoms are particularly preferable. Examples of such alcohols include ethyl alcohol, n-propyl alcohol, n-butyl alcohol, n-amyl alcohol, n-octyl alcohol and the like.
【0018】本発明にかかる不斉エステル交換反応は、
ラセミ型トランス−3−(4−メトキシフェニル)グリ
シッド酸エステル類化合物〔II〕とアルカノール〔I
II〕を有機溶媒中上記の如きエステラーゼの存在下で
作用させることにより好適に実施出来る。The asymmetric transesterification reaction of the present invention comprises
Racemic trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound [II] and alkanol [I
II] can be preferably carried out by acting in the organic solvent in the presence of esterase as described above.
【0019】有機溶媒としては、トランス−3−(4−
メトキシフェニル)グリシッド酸エステル類化合物〔I
I〕を溶解するものであればよく、水と実質的に混和し
ない有機溶媒及び水混和性の有機溶媒のいずれでも使用
することができる。このような有機溶媒としては、例え
ばトルエン、キシレン、四塩化炭素、ベンゼン、トリク
ロロエタン、クロロホルム、ヘキサン、酢酸エチル、酢
酸ブチル、オクチルアルコール、メチルイソブチルケト
ン、t−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテ
ル、1,4−ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセト
ンなどがあげられ、とりわけ水と実質的に混和しない有
機溶媒即ちトルエン、四塩化炭素、ベンゼン、トリクロ
ロエタンなどが好ましい。As the organic solvent, trans-3- (4-
Methoxyphenyl) glycid acid ester compounds [I
Any solvent capable of dissolving I] can be used, and either an organic solvent which is substantially immiscible with water or a water-miscible organic solvent can be used. Examples of such an organic solvent include toluene, xylene, carbon tetrachloride, benzene, trichloroethane, chloroform, hexane, ethyl acetate, butyl acetate, octyl alcohol, methyl isobutyl ketone, t-butyl methyl ether, isopropyl ether, 1,4. -Dioxane, tetrahydrofuran, acetone and the like can be mentioned, and among them, organic solvents which are substantially immiscible with water, that is, toluene, carbon tetrachloride, benzene, trichloroethane and the like are preferable.
【0020】また、本発明の不斉エステル交換反応を効
率よく行うためには、反応系に水分が多量に存在すると
エステル交換よりもエステルの加水分解が優先的に進行
するので、反応系の水分含量は可及的に少量となるよう
にするのが好ましい。In order to efficiently carry out the asymmetric transesterification reaction of the present invention, when a large amount of water is present in the reaction system, hydrolysis of the ester proceeds preferentially over transesterification. It is preferable that the content be as small as possible.
【0021】基質であるラセミ型トランス−3−(4−
メトキシフェニル)グリシッド酸エステル類化合物〔I
I〕の濃度は、概ね0.02〜2モル/リットル、とり
わけ0.1〜1モル/リットルが好ましい。また、他方
の基質であるアルカノールの濃度は、概ね0.01〜1
6モル/リットル、とりわけ0.1〜8モル/リットル
が好ましい。化合物〔II〕とアルカノールとのモル割
合は、1:0.5〜1:8、とりわけ1:1〜1:4で
あるのが好ましい。反応は常温ないし加温下、好ましく
は20〜60℃、とりわけ好ましくは30〜40℃で好
適に進行する。The racemic trans-3- (4-
Methoxyphenyl) glycid acid ester compounds [I
The concentration of [I] is generally 0.02 to 2 mol / liter, preferably 0.1 to 1 mol / liter. The concentration of the other substrate, alkanol, is generally 0.01 to 1
6 mol / l, especially 0.1 to 8 mol / l is preferred. The molar ratio of the compound [II] and the alkanol is preferably 1: 0.5 to 1: 8, more preferably 1: 1 to 1: 4. The reaction suitably proceeds at room temperature or under heating, preferably 20 to 60 ° C, particularly preferably 30 to 40 ° C.
【0022】上記不斉エステル交換反応によって、原料
化合物〔II〕とはエステル部位が異なる(2S,3
R)−3−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸エス
テル類化合物〔IV〕が生成し、反応終了液中にはこの
反応生成物の他、未反応の目的とする対掌体である(2
R,3S)体〔I〕およびラセミ体原料化合物が存在す
る。このような反応終了液からの目的化合物の分離・採
取は、例えばこれら化合物の溶媒に対する溶解度差を利
用して容易に行うことが出来る。Due to the above asymmetric transesterification reaction, the ester moiety is different from the starting compound [II] (2S, 3
R) -3- (4-Methoxyphenyl) glycidic acid ester compound [IV] is produced, and in the reaction-terminated liquid, in addition to this reaction product, the unreacted target enantiomer (2
R, 3S) form [I] and racemic starting material compounds are present. Separation / collection of the target compound from such a reaction-terminated liquid can be easily performed by utilizing the difference in solubility of these compounds in a solvent.
【0023】例えば、原料化合物〔II〕としてメチル
エステルを用い、アルカノール〔III〕としてn−プ
ロピルアルコールを用いた場合、反応終了液中の未反応
の目的化合物(2R,3S)−3−(4−メトキシフェ
ニル)グリシッド酸メチルエステルは、そのラセミ体あ
るいはエステル交換生成物である(2S,3R)−3−
(4−メトキシフェニル)グリシッド酸n−プロピルエ
ステルよりも有機溶媒(例えばトルエン、あるいはイソ
プロパノール等)に対する溶解度が小さく、溶媒中より
優先的に結晶化するので、この結晶を採取することによ
り目的化合物を容易に取得することができる。For example, when methyl ester is used as the starting compound [II] and n-propyl alcohol is used as the alkanol [III], the unreacted target compound (2R, 3S) -3- (4) in the reaction completed liquid is used. -Methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester is its racemate or transesterification product (2S, 3R) -3-
(4-Methoxyphenyl) glycidic acid n-propyl ester has a lower solubility in an organic solvent (for example, toluene or isopropanol) and crystallizes preferentially in the solvent. Therefore, the target compound is collected by collecting the crystals. Can be easily obtained.
【0024】上記本発明法で得られる(2R,3S)−
3−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸アルキルエ
ステルは、公知方法、例えば、特開昭60−20287
1記載の方法により、優れた冠血管拡張作用を有する
(+)−シス−2−(4−メトキシフェニル)−3−ア
セチルオキシ−5−[2−(ジメチルアミノ)エチル]
−2,3−ジヒドロ−1,5−ベンゾチアゼピン−4
(5H)−オンまたはその薬理的に許容する塩に導くこ
とが出来る。(2R, 3S) -obtained by the above method of the present invention
The alkyl ester of 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid can be obtained by a known method, for example, JP-A-60-20287.
(+)-Cis-2- (4-methoxyphenyl) -3-acetyloxy-5- [2- (dimethylamino) ethyl] having an excellent coronary vasodilator effect by the method described in 1.
-2,3-Dihydro-1,5-benzothiazepine-4
It can be led to (5H) -one or a pharmacologically acceptable salt thereof.
【0025】なお、本明細書において、低級アルキル基
とは炭素数1〜6、好ましくは1〜4のアルキル基を意
味する。In the present specification, the lower alkyl group means an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, preferably 1 to 4 carbon atoms.
【0026】[0026]
実施例1 後記参考例で得られたセラチア・マルセッセンス由来の
エステラーゼ2.5g(オリーブ油分解活性:4.9x
105 ユニット)を懸濁したトルエン 100mlに、
(±)−トランス−3−(4−メトキシフェニル)グリ
シッド酸メチルエステル0.1molとn−プロピルア
ルコール0.4molを添加し、200ml容の共栓付
三角フラスコ中にて、30℃、48時間攪拌(900r
pm)した。反応液から酵素を濾別した後、無水硫酸ナ
トリウムにて脱水した。次いで、反応液を減圧濃縮した
後、−20℃にて一晩冷却して析出した粗結晶を減圧濾
過した。この粗結晶にイソプロピルアルコール30ml
を添加し、加熱後冷却して再結晶化した。この結晶を濾
取し、冷イソプロピルアルコール10mlにて洗浄する
ことにより、(2R、3S)−3−(4−メトキシフェ
ニル)グリシッド酸メチルエステルの結晶7.8mgを
得た。 M.P. : 88℃ [α]D 20: −207°(C=0.2,メタノール) 光学純度 : >99 % 赤外吸収スペクトル : 図1 核磁気共鳴スペクトル: 図2 質量分析スペクトル : 図3。Example 1 2.5 g of esterase derived from Serratia marcescens obtained in Reference Example below (olive oil degrading activity: 4.9x)
10 5 units) in 100 ml of toluene,
0.1 mol of (±) -trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester and 0.4 mol of n-propyl alcohol were added, and the mixture was placed in a 200 ml Erlenmeyer flask with a ground stopper at 30 ° C. for 48 hours. Stir (900r
pm). After the enzyme was filtered off from the reaction solution, it was dehydrated with anhydrous sodium sulfate. Then, the reaction solution was concentrated under reduced pressure, cooled at -20 ° C overnight, and the precipitated crude crystals were filtered under reduced pressure. 30 ml of isopropyl alcohol in the crude crystals
Was added, heated and cooled to recrystallize. The crystals were collected by filtration and washed with 10 ml of cold isopropyl alcohol to obtain 7.8 mg of (2R, 3S) -3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester crystals. M. P. : 88 ° C. [α] D 20 : −207 ° (C = 0.2, methanol) Optical purity:> 99% Infrared absorption spectrum: FIG. 1 Nuclear magnetic resonance spectrum: FIG. 2 Mass spectrum: FIG.
【0027】実施例2 参考例1で得られたエステラーゼ25mgを懸濁した下
記表に示す有機溶媒1.0mlに(±)−トランス−3
−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸メチルエステ
ル1mmolとn−プロピルアルコール1mmolを添
加し、外径13mmの試験管中にて、30℃で24時間
振盪(300rpm)した。反応後、反応液中の3−
(4−メトキシフェニル)グリシッド酸メチルエステル
および3−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸n−
プロピルエステルの光学異性体別の含量は下記第1表の
通りであった。尚、上記光学活性体の定量は、ダイセル
化学工業製のキラルセルOJφ4.6x250mmを用
い、高速液体クロマトグラフィーにより行った(以下、
同様)。Example 2 (±) -trans-3 was added to 1.0 ml of the organic solvent shown in the following table in which 25 mg of esterase obtained in Reference Example 1 was suspended.
1-mmol of (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester and 1 mmol of n-propyl alcohol were added, and the mixture was shaken (300 rpm) at 30 ° C for 24 hours in a test tube having an outer diameter of 13 mm. After the reaction, 3- in the reaction solution
(4-Methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester and 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid n-
The content of propyl ester by optical isomer was as shown in Table 1 below. The quantitative determination of the optically active substance was performed by high performance liquid chromatography using Chiralcel OJφ4.6 × 250 mm manufactured by Daicel Chemical Industries (hereinafter,
As well).
【0028】[0028]
【表1】 [Table 1]
【0029】実施例3 参考例1で得られたエステラーゼのトルエン懸濁液(2
5〜100mg/ml)1.0mlに(±)−トランス
−3−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸メチルエ
ステル1mmolとn−プロピルアルコール1mmol
を添加し、外径13mmの試験管中にて、30℃で24
時間振盪(300rpm)した。反応後、反応液中の3
−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸メチルエステ
ルおよび3−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸n
−プロピルエステルの光学異性体別の含量は下記第2表
の通りであった。Example 3 Toluene suspension of esterase obtained in Reference Example 1 (2
5 to 100 mg / ml) 1.0 ml of (±) -trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester and n-propyl alcohol 1 mmol
In a test tube with an outer diameter of 13 mm at 30 ° C. for 24 hours.
It was shaken for time (300 rpm). After the reaction, 3 in the reaction solution
-(4-Methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester and 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid n
The content of each propyl ester by optical isomer was as shown in Table 2 below.
【0030】[0030]
【表2】 [Table 2]
【0031】実施例4 参考例1で得られたエステラーゼ25mgを懸濁したト
ルエン1.0mlに(±)−トランス−3−(4−メト
キシフェニル)グリシッド酸メチルエステル1mmol
と下記表に示した濃度のn−プロピルアルコールを添加
し、外径13mmの試験管中にて、30℃で24時間振
盪(300rpm)した。反応後、反応液中の3−(4
−メトキシフェニル)グリシッド酸メチルエステルおよ
び3−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸n−プロ
ピルエステルの光学異性体別の含量は下記第3表の通り
であった。Example 4 (±) -trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester 1 mmol was added to 1.0 ml of toluene in which 25 mg of esterase obtained in Reference Example 1 was suspended.
And n-propyl alcohol having the concentrations shown in the following table were added, and the mixture was shaken (300 rpm) at 30 ° C. for 24 hours in a test tube having an outer diameter of 13 mm. After the reaction, 3- (4 in the reaction solution
The contents of -methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester and 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid n-propyl ester by optical isomer are shown in Table 3 below.
【0032】[0032]
【表3】 [Table 3]
【0033】実施例5 参考例1で得られたエステラーゼ25mgを懸濁したト
ルエン1.0mlに(±)−トランス−3−(4−メト
キシフェニル)グリシッド酸メチルエステル1mmol
と下記表に示したアルコール4mmolを添加し、外径
13mmの試験管中にて、30℃で24時間振盪(30
0rpm)した。反応後、反応液中の3−(4−メトキ
シフェニル)グリシッド酸メチルエステルおよび不斉エ
ステル交換生成物3−(4−メトキシフェニル)グリシ
ッド酸アルキルエステルの光学異性体別の含量は下記第
4表の通りであった。Example 5 (±) -trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester 1 mmol was added to 1.0 ml of toluene in which 25 mg of esterase obtained in Reference Example 1 was suspended.
And 4 mmol of the alcohol shown in the table below were added, and the mixture was shaken in a test tube with an outer diameter of 13 mm at 30 ° C. for 24 hours (30
0 rpm). After the reaction, the contents of 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester and the asymmetric transesterification product 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid alkyl ester in the reaction solution by optical isomer are shown in Table 4 below. It was the street.
【0034】[0034]
【表4】 [Table 4]
【0035】実施例6 参考例1で得られたエステラーゼ25mgを懸濁したト
ルエン1.0mlに(±)−トランス−3−(4−メト
キシフェニル)グリシッド酸メチルエステル1mmol
とn−プロピルアルコール4mmolを添加し、外径1
3mmの試験管中にて、30℃で24時間振盪(300
rpm)した。反応後、反応液中の3−(4−メトキシ
フェニル)グリシッド酸メチルエステルおよび3−(4
−メトキシフェニル)グリシッド酸n−プロピルエステ
ルの光学異性体別の含量を測定した。また、参考例1で
得られたエステラーゼにかえて、対照の酵素としてキャ
ンディダ・シリンドラシア由来のリパーゼ(商品名:リ
パーゼOF、名糖産業製)を用いて、上記と同様に
(±)−トランス−3−(4−メトキシフェニル)グリ
シッド酸メチルエステルを処理し、反応液中の各光学異
性体別の含量を測定した。結果は下記第5表の通りであ
った。Example 6 (±) -trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester 1 mmol was added to 1.0 ml of toluene in which 25 mg of esterase obtained in Reference Example 1 was suspended.
And n-propyl alcohol 4 mmol are added, and the outer diameter is 1
Shake in a 3 mm test tube at 30 ° C for 24 hours (300
rpm). After the reaction, 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester and 3- (4
The content of each of the n-propyl esters of -methoxyphenyl) glycidic acid was measured for each optical isomer. Further, in place of the esterase obtained in Reference Example 1, a lipase derived from Candida syrindrasia (trade name: Lipase OF, manufactured by Meito Sangyo Co., Ltd.) was used as a control enzyme, and (±) -trans was used in the same manner as above. Methyl 3- (4-methoxyphenyl) glycidate was treated and the content of each optical isomer in the reaction solution was measured. The results are shown in Table 5 below.
【0036】[0036]
【表5】 [Table 5]
【0037】参考例1 デキストリン1%、硫酸アンモニウム0.2%、ミース
トS(アサヒビール製)2%、燐酸一カリウム0.2
%、硫酸マグネシウム0.05%、硫酸第一鉄0.00
1%、Span85(花王製)1.5%w/vおよびポ
リアルキレングリコール誘導体系界面活性剤(カラリン
102、三洋化成工業社製)0.2%v/vよりなる液
体培地18リットル(pH7.0)を30リットル容ジ
ャーファーメンターに入れ滅菌後、予め同培地で27.
5℃、20時間往復振とう培養したセラチア・マルセッ
センスSr41(微工研条寄第487号)の前培養液2
00mlを接種し、25℃で0.33vvm、0.5k
g/cm2 ・G、300rpmの条件下で、L−プロリ
ン1.5%を連続添加しながら28時間培養した。この
培養液10リットルを遠心除菌後、吸着樹脂SP207
(三菱化成工業製)にて不純物を除去した。得られた上
清液は、限外ろ過膜(SLP1053、旭化成工業製)
にて1リットルまで濃縮後、凍結乾燥して196,00
0ユニット/gのオリーブ油分解活性を持つエステラー
ゼ54gを得た。Reference Example 1 Dextrin 1%, ammonium sulfate 0.2%, Mist S (Asahi Breweries) 2%, monopotassium phosphate 0.2
%, Magnesium sulfate 0.05%, ferrous sulfate 0.00
18 liters of liquid medium (pH 7.5%, Span 85 (manufactured by Kao) 1.5% w / v and polyalkylene glycol derivative type surfactant (Kararin 102, Sanyo Kasei Co., Ltd.) 0.2% v / v). 0) was placed in a 30 liter jar fermenter and sterilized, and then 27.
Pre-cultured solution 2 of Serratia marcescens Sr41 (Microtechnology Research Institute No. 487) cultivated by reciprocal shaking culture at 5 ° C for 20 hours
Inoculate with 00ml, 0.33vvm, 0.5k at 25 ℃
The cells were cultured for 28 hours under the conditions of g / cm 2 · G and 300 rpm while continuously adding 1.5% of L-proline. Centrifugal sterilization of 10 liters of this culture solution followed by adsorption resin SP207
(Made by Mitsubishi Kasei Co., Ltd.) to remove impurities. The obtained supernatant is an ultrafiltration membrane (SLP1053, manufactured by Asahi Kasei Corporation)
After concentrating to 1 liter, lyophilize to 196,00
54 g of esterase having an activity of degrading olive oil of 0 unit / g was obtained.
【0038】(オリーブ油分解活性の測定法)2%ポリ
ビニルアルコール(商品名:ポバール117、クラレ社
製)225mlと局方オリーブ油75mlの混液を5−
10℃にて10分間、14,500rpmで乳化し、得
られたオリーブ油乳化液5.0mlと0.25Mトリス
塩酸緩衝液(pH8.0)4.0ml(2.5mM塩化
カルシウムを含む)を37℃で10分間予熱しておく。
これに1mlの酵素液を加え、37℃で20分間反応さ
せた後、アセトン−エタノール混液(1:1)20ml
を加えて反応を停止し、フェノールフタレインを指示薬
として0.05N NaOH溶液で滴定する。以上の方
法で1分間に1μmolの脂肪酸を遊離する酵素量を1
ユニットとした。(Measurement method of olive oil degrading activity) A mixed solution of 225 ml of 2% polyvinyl alcohol (trade name: Poval 117, manufactured by Kuraray Co., Ltd.) and 75 ml of pharmacopoeia olive oil was treated with 5-
After emulsifying at 14,500 rpm for 10 minutes at 10 ° C., 5.0 ml of the resulting olive oil emulsion and 4.0 ml of 0.25M Tris-HCl buffer (pH 8.0) (containing 2.5 mM calcium chloride) were used. Preheat at 10 ° C for 10 minutes.
To this, 1 ml of enzyme solution was added and reacted at 37 ° C. for 20 minutes, and then 20 ml of acetone-ethanol mixed solution (1: 1)
Is added to stop the reaction, and titrated with a 0.05N NaOH solution using phenolphthalein as an indicator. The amount of enzyme that releases 1 μmol of fatty acid in 1 minute by the above method is 1
It was a unit.
【0039】[0039]
【発明の効果】本発明方法は、セラチア・マルセッセン
スの産生するエステラーゼを用いた不斉エステル交換反
応を利用して原料化合物ラセミ型トランス−3−(4−
メトキシフェニル)グリシッド酸エステル類化合物から
光学活性(2R,3S)体を高い光学純度で収率良く取
得できるという優れた特長を有するものであり、光学活
性(2R,3S)−3−(4−メトキシフェニル)グリ
シッド酸エステル類化合物の工業的に有利な製法となり
うるものである。INDUSTRIAL APPLICABILITY The method of the present invention utilizes the asymmetric transesterification reaction using an esterase produced by Serratia marcescens as the starting compound racemic trans-3- (4-
It has an excellent feature that an optically active (2R, 3S) body can be obtained from a methoxyphenyl) glycidic acid ester compound with high optical purity in a high yield, and is optically active (2R, 3S) -3- (4- It can be an industrially advantageous production method of methoxyphenyl) glycidic acid ester compounds.
【図1】 実施例1で得られた(2R,3S)−3−
(4−メトキシフェニル)グリシッド酸メチルエステル
の赤外線スペクトル(KBr)を示す。FIG. 1 is (2R, 3S) -3-obtained in Example 1.
2 shows an infrared spectrum (KBr) of (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester.
【図2】 実施例1で得られた(2R,3S)−3−
(4−メトキシフェニル)グリシッド酸メチルエステル
の核磁気共鳴スペクトルを示す。FIG. 2 is (2R, 3S) -3-obtained in Example 1.
1 shows a nuclear magnetic resonance spectrum of (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester.
【図3】 実施例1で得られた(2R,3S)−3−
(4−メトキシフェニル)グリシッド酸メチルエステル
の質量分析スペクトルを示す。FIG. 3 is (2R, 3S) -3-obtained in Example 1.
1 shows a mass spectrometric spectrum of (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester.
Claims (5)
セミ型トランス−3−(4−メトキシフェニル)グリシ
ッド酸エステルと一般式〔III〕 【化2】 (式中R2 は炭素数2〜10のアルキル基を表す。但
し、R2 はR1 より炭素鎖長の長いアルキル基を表
す。)で示されるアルカノールとをセラチア・マルセッ
センス由来のエステラーゼの存在下で反応させることに
より(2S,3R)−3−(4−メトキシフェニル)グ
リシッド酸エステルを優先的に不斉エステル交換して一
般式〔IV〕 【化3】 (式中、R2 は前記と同一の意味を表す。)で示される
グリシッド酸エステルに変換した後、反応混合物から未
反応の対掌体を分離、採取することを特徴とする一般式
〔I〕 【化4】 (式中、R1 は前記と同一の意味を表す。)で示される
(2R,3S)−3−(4−メトキシフェニル)グリシ
ッド酸エステルの製法。1. A compound represented by the general formula [II]: (Wherein R 1 represents a lower alkyl group) and a racemic trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester represented by the general formula [III] (In the formula, R 2 represents an alkyl group having 2 to 10 carbon atoms, provided that R 2 represents an alkyl group having a carbon chain longer than that of R 1. ) and an esterase derived from Serratia marcescens. The (2S, 3R) -3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester is preferentially asymmetrically transesterified by reacting under the general formula [IV] (In the formula, R 2 has the same meaning as described above.) After conversion into a glycidic acid ester represented by the formula, the unreacted enantiomer is separated from the reaction mixture and collected. ] [Chemical 4] (In the formula, R 1 represents the same meaning as described above.) A method for producing (2R, 3S) -3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester.
う請求項1記載の製法。2. The method according to claim 1, wherein the asymmetric transesterification reaction is carried out in an organic solvent.
−3−(4−メトキシフェニル)グリシッド酸メチルエ
ステルである請求項1記載の製法。3. The antipode to be separated and collected is (2R, 3S)
The method according to claim 1, which is methyl 3- (4-methoxyphenyl) glycidate.
スSr41(微工研条寄第487号)由来のエステラー
ゼである請求項1記載の製法。4. The method according to claim 1, wherein the esterase is an esterase derived from Serratia marcescens Sr41 (Microtechnology Research Institute No. 487).
フェニル)グリシッド酸メチルエステルと一般式〔II
I−A〕 【化5】 (式中R21は炭素数2〜8のアルキル基を表す。)で示
されるアルカノールとをセラチア・マルセッセンス由来
のエステラーゼの存在下で反応させることにより(2
S,3R)−3−(4−メトキシフェニル)グリシッド
酸メチルエステルを優先的に不斉エステル交換して一般
式〔IV−A〕 【化6】 (式中、R21は前記と同一の意味を表す。)で示される
グリシッド酸エステルに変換した後、反応混合物から未
反応の対掌体を分離・採取し、次いで該対掌体を公知方
法により(+)−シス−2−(4−メトキシフェニル)
−3−アセチルオキシ−5−[2−(ジメチルアミノ)
エチル]−2,3−ジヒドロ−1,5−ベンゾチアゼピ
ン−4(5H)−オンまたはその薬理的に許容しうる塩
に変換することを特徴とする1,5−ベンゾチアゼピン
誘導体の製法。5. Racemic trans-3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester and a compound of the general formula [II
IA] [Chemical formula 5] By reacting with an alkanol represented by the formula (R 21 represents an alkyl group having 2 to 8 carbon atoms) in the presence of an esterase derived from Serratia marcescens (2
S, 3R) -3- (4-Methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester is preferentially asymmetrically transesterified to give a compound of general formula [IV-A] (Wherein R 21 has the same meaning as described above), the unreacted enantiomer is separated and collected from the reaction mixture, and then the enantiomer is prepared by a known method. By (+)-cis-2- (4-methoxyphenyl)
-3-Acetyloxy-5- [2- (dimethylamino)
Ethyl] -2,3-dihydro-1,5-benzothiazepin-4 (5H) -one or a pharmacologically acceptable salt thereof, which is converted into a 1,5-benzothiazepine derivative. .
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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JP23546492A JP2622251B2 (en) | 1992-09-03 | 1992-09-03 | Method for producing optically active 3- (4-methoxyphenyl) glycidic acid ester compound |
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998056762A3 (en) * | 1997-06-11 | 1999-03-25 | Tanabe Seiyaku Co | Process for preparing optically active phenyloxirane compounds |
WO1999022014A1 (en) * | 1997-10-27 | 1999-05-06 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Process for preparing (2r,3s)-3-(4-lower alkoxyphenyl)glycidic acid esters |
US5998637A (en) * | 1997-02-27 | 1999-12-07 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Process for preparing optically active trans-3-substituted glycidic acid ester |
-
1992
- 1992-09-03 JP JP23546492A patent/JP2622251B2/en not_active Expired - Lifetime
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US5998637A (en) * | 1997-02-27 | 1999-12-07 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Process for preparing optically active trans-3-substituted glycidic acid ester |
US6197953B1 (en) | 1997-02-27 | 2001-03-06 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Process for preparing optically active trans-3-substituted glycidic acid ester |
WO1998056762A3 (en) * | 1997-06-11 | 1999-03-25 | Tanabe Seiyaku Co | Process for preparing optically active phenyloxirane compounds |
WO1999022014A1 (en) * | 1997-10-27 | 1999-05-06 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Process for preparing (2r,3s)-3-(4-lower alkoxyphenyl)glycidic acid esters |
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