JPH06509323A

JPH06509323A - ホモシステイネミア治療方法としてのホモシステインのニトロソ化

Info

Publication number: JPH06509323A
Application number: JP4510280A
Authority: JP
Inventors: ステムラー，ジョナサン，エス．; ロスカルゾ，ジョゼフ
Original assignee: ブリガムアンドウィメンズホスピタル
Priority date: 1991-04-10
Filing date: 1992-04-09
Publication date: 1994-10-20
Also published as: AU660464B2; CA2108152A1; IL101567A0; EP0590092A1; US5385937A; WO1992018002A1; EP0590092A4; AU1799192A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ホモシスティネミア治療方法としてのホモシスティンのニトロソ化発明の分野この発明は高いレベルのホモシスティンに関連した疾病を治療もしくは予防するための一つの新しい方法に関するもので、ニトロソ化合物を含む医薬品組成物を患者に投与することよりなる。

発明の背景技術の簡単な説明ホモシスティンはチオール含有アミノ酸であり、メチオニンのジメチル化で生じる。ホモシスティンは体液中で容易に酸化され、ホモシスティンジスルフィド（ホモシスチン）、混合ジスルフィド、および環化酸化物であるホモシステインヂオラクトン（ＨＴＬ）を形成する。

ホモシスティヌリアスはホモシスティン代謝を制御する経路において数多くの異なった先天性あるいは後天性欠損より生じる臨床疾患である。これらの疾患では血液中および尿中のホモシスティンの濃度の増加が顕著である。

ホモシスティヌリアスの最も一般的な形態は、メチオニンがシスティンに変換される硫酸移動の経路にある酵素、シスメチオニンβ−シンターゼの欠失により生じる。もう一つの形態は、ホモシスティンからメチオニンへの８１□依存型変換のための基質を提供する５、ｌＯ−メチル・テトラヒドロ葉酸塩還元酵素の欠失から生じる。ホモシスティヌリアスはまた、葉酸塩、ビタミンＢ１□および８６などの必要な代謝補因子の欠失がらも生じる。加えて、ホモシスティン代謝は、葉酸吸収を損なう胆汁酸金属イオン封鎖剤およびナイアシン療法より生じることもある。最後に、これらの疾患は、異常な腎臓機能に対し、あるいはまだ特性化されていないその他の機側に対しても二次的であることもある。

ある患者では代謝欠損が血清中のホモシスティンの上昇を生じ、それは尿中のホモシスチンの検出量の排泄を起こすほどに高くはないが、それでも重大な病的結果を生じさせる。か（して研究者は、［ハイパーホモシスティネミア」という用語が、血清ホモシスティンの一過性あるいは持続性上昇に言及するものとし、それは尿中ホモシスチンの増加を伴うこともあり、そうでないこともあり得るという考え方を提案した（マリノー他ｒ（：１ｒｃｕｌａｔｉｏｎＪ　７９：１１８０−１１８８（１９８９年））。

ハイパーホモシステイネミアは、重大な血管、眼球、神経および骨格異常を示す多種多様の疾病を引き起こす。

アテローム発生および血栓病は、よく認識されたハイバーホモシステイネミアの合併症である（クラーク他ｒＮ、Ｅｎｇｌ。

Ｊ、Ｍｅｄ、Ｊ　３２４：１１４９−１１５５　（１９９１年）。マリ、’　− ｒ（：１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ　Ｊ　８　１　：　２００４−２００６　（１９９０年））。病気に悩む個々人は、若い時期に重大な血栓合併症をしばしば経験し１頭蓋外および頭蓋内勤脈、静脈および血脈側の血栓症、および冠状動脈閉塞症を伴い、共通の致命的な事件となる。若い患者では、末梢動脈の閉塞は、しばしば腎性血管高血圧、間欠性破竹あるいは腸間脈虚血をおこし、血栓症は肺塞栓症を続いておこすことになりかねない。もし治療が行われない場合には、若年性ハイパーホモシスティネミアは、心筋梗塞、心臓発作あるいは肺血栓症のため、２０才以下で５０％以上の死亡に帰着する。（Ｌ、Ｅ、ブラットスレーム他ｒｌｌｅｔａｂｏｌｉｓｓＪ　３４　（１１）　１０７３−１０７７　（１９８５年））。年輩の患者では、中位のハイバーホモシスティネミアが、冠状動脈および末梢動脈血管症に悩む人達の２０〜３０％に存在することが見出される。（Ｍ、Ｒ，マリノーｒｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　Ｊ　８１　：　２００４−２００６　（１９９０年））。

通常のうっ血は、血小板凝集塊が連続的に形成され分散するダイナミックな過程である。この過程を達成するために、血小板活性化の生理的刺激はプロスタサイクリンおよび内皮派生弛緩因子（ＥＤＲＦ）などの物質の血管内皮細胞分泌により反対平衡化され、前記物質は、−酸化窒素（Ｎｏ）、あるいはそれと密接に関連した誘導体として確認された。（バーマー化ｒＮａｔｕｒｅＪ　３２７：５２４−５２６　（１９８７年）。イグナルロ他ｒＰｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、ＵＳＡＪ　８４　：　９２６５−９２６９　（１９８７年））。

従って内皮機能障害もしくは損傷は１個人に対して血栓症および血管閉塞事象の素因となり得る。

推論証拠によってハイバーホモシスティネミアに内皮機能障害および高い血小板凝集に関する随時機側の存在することが提示された。血管損傷および血小板過多閉塞血栓症の部位での著しい血小板の蓄積は、ヒトおよび経験ハイパーホモシステイネミア双方の顕著な病理的特性である。（ジェイムスｒＪＡＣＣＪ　１５　：　７６３−７７４　（１９９０年）。パーカー他、ｒＮ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｗｅｄ　Ｊ　２９１　：　５３７−５４３　（１９７４年）。パーカー他ｒＪ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、Ｊ　５８　：　７３１−７３４（１９７６年）。この疾病の出現を説明するためにい（っがのグループが、ホモシスティン及びＨＴＬの直接毒性作用について報告している。（マクドナルド他ｒＬａｎｃｅｔＪ　１　：　７４５−７４６　（１９６４年）。グレーパー他ｒＰｅｄｉａｔｒ、　Ｒｅｓ、　Ｊｌ　６　：　４９０−４９３　（１９８２年）。マツカリ−他ｒ　Ｒｅｓ。

Ｃｏｗｓ’、（１：ｈｅｍ、Ｐａｔｈ、Ｐｈｅｍ、Ｊ　５６　（３）　、３４９ −３６０（１９８７年）。しかし、これらの親凝集作用は均質に提示されてはおらず、また支援生化学分子機料も十分には説明されいない。更に、そのＳＨ反応基に起因して、ホモスティンの血小板活性作用は、類似の化学的物理的特性をもつ他の生物性チオールの既知の抗血小板特性を調和させることは困難である。

例えばグルタチオン、システィン及びＮ−アセチルシスティンはミリモル濃度で抗血小板作用を有することが示されている。（トーマス他、ｒＴｈｒｏｍｂ　Ｒｅ５Ｊ　４４　：　８５９−８６６（１９８６年）。ステムラ−他ｒＡｒｍ、　Ｊ、　Ｃａｒｄｉｏｌ、Ｊ　６２　：３７７−３８０　（１９８８年））。

他の研究者は、ホモシスティン誘導内皮損傷が内皮下層結合組織を被曝させることにより、生体内で血小板活性に対する代替的機料を示すことを明らかにした（パーカー他、ｒ　Ｎ、　Ｅｎｇｌ　。

Ｊ、Ｗｅｄ、Ｊ　２９１　：５３７−５４３　（１９７４年）。パーカー他Ｎ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、Ｊ　５８　：　７３１−７４１　（１９７６年））。内皮毒性が続いて確認され、それはＳＨ基により発生するＨ２０□、あるいはＨＴ　Ｌの直接毒性作用に起因するものであった。（ウオール他、ｒＴｈｒｏｍｂ、　Ｒｅｓ、　Ｊ　ｌ　８　：　１１３−１２１　（１９８０年）。スターケバラム他、ｒ　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｉｎｖｅｓｔ、Ｊ　７７　；　ｔ３７０−１３７６　（１９８６年）。マツカリ −他、ｒＡｍ、　Ｊ、　Ｐａｔｈ、６１　（１）　：　１−８　（１９７０年）。

加えて、高水準のホモシスティンの酸化物が、血漿内のホモシスティン関連負荷および細胞質ゾルを更に増加させ、このためその病原性に寄与することになり得る。（カン他、ｒＡｍ、　Ｓｏｃ。

Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、Ｊ　７７　：　ｌ　４８２−１４８６　（１９８６年）。

マツカリ−ｒ　Ｎａｔｕｒｅ　Ｊ　（ロンドン）、２３１　：３９１−９２（１９７１年）。他のものは、ホモシスティンが低密度のリボ蛋白質コレステロールの自己酸化を相乗強化し、血小板凝集の強化を通して血栓症を助長することを明らかにしている。

その血栓形成およびアテローム発生作用に加えて、ホモシスティンは膠原の通常の架橋に干渉する。この作用は血管のみならず、ハイパーホモシステイネミアの閉塞、骨格、神経症合併症の原因となる。例えば、眼球提靭帯での変質膠原は、眼球転位症（水晶体転位症）の、また骨基質の変質膠原は骨粗髭症の原因となる。

ホモシスティンの神経系合併症は、精神運動発育遅滞、強度の精神遅滞、１瘤発作および上位運動ニューロン機能障害などを含む。血栓性疾患には二次的な再発生脳血管性偶発症候は、精神遅滞および他の神経系合併症の原因とるが、一方脳細胞代謝に対する直接の化学細胞毒作用も関係がある。さらに何人かのハイバーホモシステイネミアの患者にみられる中枢神経系。

肝臓、腎臓、骨格筋に拡散した病理的変化は、ホモシスティンにより影響を受けた直接の細胞毒に帰因するものであった。

ホモシスティンに帰因する副作用に加えてシスティンなどのような他の硫黄含有アミノ酸も、血管や結合組織の疾患に関係してきた。システィンの酸化代謝における異常が、慢性関節リウマチおよび全身性狼瘉に見出されることがつい最近になって理解されている。これらの疾病はさらに脈管炎とも関連している（ゴーダン他ｒＬａｎｃｅｔＪ　３３９　：　２５−２６　（１９９２年））。

ハイパーホモシステイネミアを治療する現在利用可能な方法は、基本的には、血清のホモシスティン水準を減少する試みで、ピリドキシン、葉酸塩、コリン、ベタインあるいはコバラミンなどのビタミン補助剤を投与することによりなる。新生児の時期に診断された何人かの苦しんでいる幼児は、メチオニン制限、シスチン補助治療食により治療に成功している。しかし、この方法による成功は、新生児の時期内における正確な詮所に依存しており、ハイパーホモシステイネミアで苦しむ患者の非常に少ない割合を占めるに過ぎない。

ビタミン治療法はある患者の血漿ホモシスティンの減少を生じることが示されたが、ハイパーホモシステイネミアで苦しむ数多くの患者は、この治療法の結果としてホモシスティン水準が少ししか下がらなかったりあるいは全熱下がらなかったことを経験している。更に、ビタミン治療法はホモシスティンの毒性作用を直接中和せず、あるいはホモシスティンに対する過去の被曝から生じる病的作用を改善する手段を提供しない。

従って、現在の治療法で、苦しんでいる患者に存在するアテローム血栓症の（もしくはその他の）合併症の危険度を減少させる確証は存在しない。

ハイバーホモシステイネミアの治療を成功させることは、ホモシスティン水準を直ちに減少させるだけでなく、より重要なことは、ホモシスティンにより生み出された毒性作用を直接中和することに依存している。従って、臨床上の要求は、ホモシスティンの直接毒性を直接中和し、またホモシスティンの過去の被曝から生じる病態生理学的異常を改善する薬理学的方法に存在する。

発明の概要この発明は、ホモシスティンの水準の上昇に関連する疾病を治療しあるいは予防する一つの方法に関する。またこの方法は、それを必要とする患者にニトロソ化合物を治療に有効な量で投与することによりなる。特にこのニトロソ化合物は、ニトログリセン、Ｓ−ニトロソチオール、Ｓ−ニトロソ蛋白質、硝酸、ニトロプルシド、ヂオニトライト、チオニトレート、鉄ニトロシル化合物、シドノニミン、フロクサン、ニトロソニウム塩および関連化合物よりなるＮｏ供給体のグループより選択することができる。

この発明は更にこの発明の方法に関する。この方法では、Ｓ−二トロンチオール化合物は、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルシスティン、Ｓ−ニトロソ−グルタチオン、Ｓ−ニトロソ−システィン、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティン、Ｓ−ニトロソーパンクトエイン誘導体、Ｓ−ニトロソ−ペニシラミン、Ｓ−ニトロソ−カプトプリル、長連鎖脂質親和性ニトロソチオール、およびＳ−ニトロソジチオールよりなるグループから選択される。

この発明は、更に発明の方法に関し、そこでは、ニトロソ化合物は薬剤許容キャリアよりなる医薬品組成物の一部として投与される。

この発明は、更にある方法に関し、そこでは、医薬品組成物は経口、舌下、静脈、筋肉内、あるいはエアロゾル受渡しよりなるルートで患者に投与される。

この発明は、また、この発明の方法に関し、そこでは前記疾病は、冠状動脈閉塞、アテローム硬化、静脈血栓症、動脈血栓症、腎血管性高血圧症、間欠性跋行、腸間膜虚血、腸血管性疾患、および肺塞栓症よりなるグループより選択された血管疾患である。

この発明は更に発明の方法に関し、そこで前記疾病は、水晶体転位症、精神遅滞、精神運動発育遅滞、骨格奇形および骨粗鬆症よりなるグループから選択された結合組織疾患の一つである。

この発明は、また発明の方法に関し、そこでは疾病はホモシスティン誘発細胞毒よりなる疾病である。

この発明はさらに、それを必要とする患者に対し、ニトロソ化合物の治療的に有効な量で投与されることよりなる、硫黄含有アミノ酸の水準を高めることで疾病の治療あるいは予防を行う一つの方法に関する。

この発明は、また、前記アミノ酸がホモシスティン、システィン、シスチンおよびメチオニンよりなるグループから選択される発明の方法に関する。

更にまた、この発明は、前記疾病が血管疾患、細胞毒、あるいは結合組織疾患よりなる発明の方法に関する。

図面の説明この発明のその他各種の目的、特性およびそれに付随する利点は、添付の各図面と共に検討するとより容易に理解されると同時にもっと完全に評価されるであろう。

第１図：Ｓ−二トロソーホモシステインの分光学および化学特性Ａ：紫外線吸収スペクトルＢ：　［”Ｎｌ　−ＮＭＲス’（クトルＣａｍ徐電気泳動移動度のホモシスティンビークの損失およびビークの置換Ｄ：Ｓ−ニトロソ−ホモシスティン　ビークＥ：ホモシステイン　チオラクトン　ビーク第２図：ホモシステイン媒介Ｈ２０，生成、およびニトロソ化によるＨ＊Ｏ＊生成の防止第３図：ホモシステイン誘発内皮機能障害Ａニアセチルコリン（０）制御、およびホモシスティン（）で誘発される内皮依存型弛緩Ｂニアセチルコリンに対するホモシスティン被曝血管の弛緩第４図：ホモシスティンの存在（・）あるいは不在（０）の下で保温された内皮細胞に示される、ＥＤＲＦによる血小板阻害のホモシスティン媒介稀釈第５図：制御に依存する最大凝集率にプロットしたホモシスティン（○）、ＨＴＬ　（遊離塩基）（Δ）、およびＨＴＬ　（塩酸塩）（Δ）による血小板阻害の供与量効果曲線Ａ：１５ｕＭ　ＡＤＰで誘発されるＰＲＰの凝集Ｂ　：　０．１６ｍｇ／ｍｌ膠原で誘発されるＰＲＰの凝集第６図：ＨＴＬで生じる血小板凝集Ａ：クロロフォルムに抽出されたＨＴＬ　（遊離塩基）２ｕｌで誘発された凝集Ｂ　：　ＨＰＬＣグレード・クロロフォルム溶媒２ｕｌで誘発された凝集第７図：ＡＤＰ（○）および膠原（・）で誘発された血小板凝集のＳ−ニトロソ −ホモシスティンによる供与量依存型阻害第８図：Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンによる血小板サイクリックＧＭＰの産出第９図：内因性窒素酸化物からのＳ−ニトロソ−ホモシスティン検出Ａ：ホモシスティン１ｍＭの存在下で。

Ｂ：塩化第２水銀で処理した後の（ａ）の対サンプルＣ：ホモシスティン１ｍＭの不在下で。

Ｄ＝塩化第二水銀で処理した後の（Ｃ）の対サンプル第１Ｏ図：Ｓ−ニトロソ− ホモシスティンによる血小板阻害Ａ：対照凝集（ａ）および無刺激の内皮細胞に被曝させたホモシスティンの関係Ｂ　：　ＮａＮＯｘ　（・）およびＥＤＲＦ　（○）から合成されたＳ−ニトロソ−ホモシスティンによる阻害のための供与量効果の関係。

第１１図：　ｐＨ７，４（・）およびｐＨ２，５（０）におけるＳ−ニトロソ− ホモシスティンの安定度第１２図：Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンに誘発された血管緊張低下第１３図ニジスティンによるＨ３Ｏ２生成第１４図：Ｓ−ニトロソ化によるシスティンのＨ２０＊生成の遮断第１５図：ホモシスティン媒介アテローム血栓症についての提案された機側およびＮＯによるその調節望ましい実施例の記述この発明は、ハイバーホモシステイネミアに関連する病態心理学的条件を治療、あるいは予防するために患者に対してニトロソ化合物の投与が用いられることを発見したことに関する。このような疾患には、ハイバーホモシステイネミアから生ずる血管、神経系、眼あるいは骨格の合併症が含まれる。

「ニトロソ化合物」という用語は、生体内でＮｏを引き渡すことのできるある化合物を意味する。典型的なニトロソ化合物は、ニトログリセリン、Ｓ−ニトロソチオール、硝酸、Ｓ−二トロン蛋白質、ニトロプルシドおよび関連化合物である。

「Ｓ−ニトロソチオール」と言う用語の典型的な化合物は、それだけに限定されないが、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルシスティン、Ｓ−ニトロソ−グルタチオン、Ｓ−ニトロソ−システィン、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティン、Ｓ−ニトロソーバンタトエイン誘導体、Ｓ−ニトロソ−ペニシラミン、Ｓ−ニトロソ−カプトプリル、長連鎖脂質親和性二トロソヂオール、およびＳ−ニトロンジチオールを含む。

この発明の一つの実施例は、ハイパーホモシステイネミアに関連する血管性疾患を治療あるいは予防するために、ニトロソ化合物を投与することに関する。特に、このような血管性疾患は、必ずしもそれに限定されないが、アテローム硬化、静脈血栓症、動脈血栓症、冠状動脈閉塞症、腎血管性高血圧、間欠性波行、腸間膜虚血症、腸血管性疾患、および肺塞栓症を含む。

発明者により提示されているように、ハイパーホモシステイネミアは、ホモシスティンのＳＨ基から生成されたＨ２０□により広範に媒介された内皮傷害を経てアテローム硬化や血栓症を悪化させる。内皮損傷は、血小板凝集および血管狭窄を中和するのに通常必要なＮｏの欠失を生じる。

ニトロソ化合物を患者に投与すると、数多（の方法でホモシスティンの血栓形成およびアテローム発生作用を直接中和する。その方法は必ずしもそれに限定されないが、以下の機側を含む。ホモシスティンのＨＴＬへの酸化転換と同じように、ホモシスティンのニトロソ化はＳＨ基からのＨ２Ｏ２発生を妨げ、かくしてホモシスティン誘発内皮損傷を予防する。加えて化合物は生体内でＮｏを受け渡し、これがチオール誘発内皮損傷により生じるＮＯ欠失を補正する。このＮＯは、その後反応してＳ−二トロンチオールを形成し、それが潜在的血管拡張および血小板阻害作用を高めることで血栓形成を中和する。

この発明のもう一つの実施例は、ハイバーホモシステイネミアと関連する結合組織疾患を治療もしくは予防するためのニトロソ剤を投与することに関する。「結合組織」という用語は、身体の構造的支柱を提供し、その細胞、器官および組織をつなぐ細胞外成分を意味する。主要な結合組織は、骨、皮膚、腿。

靭帯および軟骨である。しかしこの用語は、更に血管、滑膜腔９体液、　ｉｉおよび隔膜にも適用される。特殊な結合組織疾患の例は、必ずしもそれに限定されないが、血管組織症、水晶体転位症、骨相ｎ症、骨格異常、慢性関節リウマチ、全身性狼癒、精神遅滞、精神運動発育遅滞などである。

この発明のもう一つの実施例は、ホモシスティンによる加えられる細胞毒作用を治療もしくは予防するニトロソ化合物の投与に関する。「細胞毒」という用語は、細胞に対し障害あるいは破壊的であるか、あるいは通常の細胞機能に干渉することを意味する。ホモシスティンの細胞毒作用は、必ずしもそれに限定されないが、肝臓、腎−１心臓、血管および腸を含むすべての器官系の細胞に影響する。

この発明のもう一つの実施例は、Ｎｏの受け渡しを腸へ提供する脂質親和性ニトロソチオールの使用を含む。このニトロソチオールが有する脂質親水性のため、これらの化合物は血液脳関門に浸透することができ、したがって中枢神経系に直接到達する。これら化合物の投与は、中枢神経系でホモシスティンにより加えられる毒性効果を直接あるいは局所的に除去する方法を提供する。

この発明のもう一つの実施例は、他の硫黄含有アミノ酸に関連する疾病を治療し予防するニトロソ剤の投与に関する。このようなアミノ酸は、システィン、シスチンおよびメチオニンを含む、これらアミノ酸に関連する疾病は、必ずしもそれに限定されないが、アテローム硬化、血栓症、細胞毒、結合組織疾患、慢性関節リウマチ、全身性狼瘉および関連する脈管炎を含む。

発明者は、システィンのＳＨ基がＨｚＯ＊を発生させることを立証した。ホモシスティンの場合と同様に、ＨｘＯ鵞はシスティンのアテローム発生および血栓性作用に導く内皮障害を媒介する。システィンのＳ−ニトロソ化はＨ，０１の発生を妨げ、かくしてシスティンのチオール誘発毒性を希釈する方法を提供する。

ニトロソ剤に加えて、ホモシスティンのＳＨ基は他の化学的方法によって妨げることができる０例えばＳＨ遮断は、チオールの投与により達成されるジスルフィド形成により完成される。適切なチオールは、必ずしもそれに限定されないが、Ｎ−アセデルシスティン、グルタチオン、およびカプトプリルである。かくしてチオール投与は、ホモシスティンおよび他の硫黄含有アミノ酸のＳＨ基によって加えられる毒性作用を希釈する追加の方法を提供する。

この発明の一つの追加実施例は、前記で検討した生理作用を達成するために、薬学上許容されるキャリアを含む医薬品組成物の一部として、Ｓ−ニトロソチオール化合物を投与することに関する。

この発明で利用される医薬品に組成物は、鼻腔内２口腔、腸内、局所、舌下、直腸、筋肉内、静脈内、皮下等の手段で投与される。

この発明の化合物は、従来の賦形剤と併用することができる。すなわち、この賦形剤は、活性化合物と有害反応しない腸管外、腸内あるいは鼻腔内に適した薬学的に許容される有機もしくは無機のキャリアである。適切な薬学許容キャリアは、必ずしもそれに限定されないが、水１食塩水、アルコール、植物油、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、珪酸、粘性パラフィン、香料油、脂肪酸モノグリセリドおよびジグリセリド、ベトロエスラール脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等である。この医薬品調製は、滅菌することができ、また望まれるならば、この活性化合物と有害化反応を行い補助薬、例えば滑剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩、緩衝液、染色・香味およびもしくは芳香物質およびその他の補助薬と混合することもできる。

腸管外適用については、特に適切な使薬は、溶液、望ましくは油性および水溶液、さらに懸濁液、乳化剤、あるいは座薬を含む埋没物よりなる。アンプルは便利な単位投薬量であこの発明で利用される医薬品組成物は、鼻腔内、経口、腸内局所、舌下、直腸、筋肉内、静脈内あるいは皮下等の手段で投与することができる。

腸内への適用では、特に錠剤、タルクおよびもしくは炭水化物キャリア結合剤もしくは類似品を有するドラジエあるいはカプセルなどが適切であり、このキャリアは望ましくはラクトースおよび、もしくはコーンスターチ（とうもろこしでんぷん）あるいはポテトスターチである。加糖使薬が使用できる場合には、シロップ、エリキシルあるいは同等品が使用できる。

持続性徐放性組成物は、活性成分が異なった分解コーティングで、例えば微量被包あるいは多重コーティング等によって保護されているものを含め形成することができる。

使用される活性化合物の事実は望ましい量は、利用される特定化合物、形成される特殊組成物、使用方法および特定投与部位などによって変化することが認識されるであろう。一定の投与実験記録に対する最適投与率は、前述の指針に関して実施された従来の投与量決定テストを使用し、先行技術を有する当業者により容易に確かめることができる。

この発明に従って、医薬品組成物の「治療に有効な量」は、望ましい薬理作用を達成するのに部分な量である。一般に、組成物の有効量を提供するのに必要な投与量、しかも普通の従来の技術の一つで調節することのできる投与量は、受容体の年令、Ｕ康、物理的条件、性９体重および病気の程度などに依存して変化するであろう。更に投与量は、治療の頻度、および望ましい作用の性質および範囲によって決定することができる。

綿密精巧にすることなく、前述した説明を使用して先行技術を有する当業者がこの発明を最高限度まで利用することができると考えられる。下記に述べる実施例は、従って単に実例となるように解釈されるものであり、どのようなものであろうとも、明細書の残りの部分を制限するものではない。

前記および下記のすべての公開文献のすべての典拠が参考としてここに組み入れられる。

実　施　例材料ホモシスティン、ホモシスチン、ＨＴＬ　（遊離塩基および塩酸塩）、ホモシスティン酸、硫黄第二銅、硫酸第一鉄、メチレンブルー、セファロース２Ｂ−３００、アセチルサリチル酸、エピネフリン、ＡＤＰ、アセチルコリンおよびカルシウムイオノフオアＡ２３１３８は、シグマケミカル社（ミズーリ州セントルイス）から購入された。ウシ・トロンビンはＩＣＮ、イミューノバイオロジカル（イリノイ州うイル）より得られた。

サルファ剤およびＮ−（１−ナフチル）エチレンジアミンニ塩酸化合物はオールドリッチケミカル社（ウィスコンシン州ミルウォーキー）より購入された。コウシ皮膠原はウオージントンバイオケミカルにュージャージー州フリーホールド）から得られた。亜硝酸ソーダはフィッシャーサイエンティフィックにュージャーシー州フェアローン）より購入された。ＮＯガスはマシーソンガス製品から購入された。サイクリックＧＭＰ水準決定に必要な放射性同位元素標識免疫測定装具は、ニューイングランド・ニュークリア（マサチューセッツ州ボストン）から購入された。ヘベス生物緩衝液（ＨＢＳ）は、ＮａＣ１１４０ｍＭ、ＨＣｌ　６ｍＭ、Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］−ピペラジン−Ｎ−［２−エタン−スルフィン酸６　ｍ　Ｍ　］、Ｎａａ　ＨＰＯ４２ｍＭ、ＭｇＳＯ４２ｍＭ＋　デキストロース０．１％およびウシ血清アルブミン０．４％で構成される。リン酸生物緩衝液（ＰＢＳ）は、ＮａＣ１１４０ｍＭ、リン酸ナトリウム１０ｍＭ、ｐＨ７，４で構成される。クレブス緩衝液は、ＮａＣ１１４０ｍＭ、ＫＣＩ　４．７ｍＭ。

ＣａＣ１２２，５ｍＭ、Ｍｇ５Ｏ−１，２ｍＭ、ＫＨ−ＰＯ−１，２ｍＭ、ＮａＨＣＯ，１２，５ｍＭおよびＤ−グルコース１１ｍＭで構成される。

実施例１：ホモシスティンの酸化代謝および窒素の酸化物に対する反応性ａ１分析化学的方法サヴイルの化学的方法がＳ−ニトロソチオールの検出に使用された。（サヴイルｒＡｎａｌｙｓｔＪ　８３　：　６７０−６７２（１９５８年））。この方法は溶液中の遊離ＮＯｘを検定するが、サルファ剤とのジアゾ化反応およびそれに続（発色基Ｎ−（１−ナフチル）エチレンジアミンとのカップリングな含む。Ｓ− ニトロソチオールの特異性が、Ｈｇ　Ｃｌ　ｍの存在および不在の下で実施される検定決定から明らかにされる。

ＨｇＣ１□は５−Ｎｏ結合の加水分解で触媒作用をする試薬である。（サヴイル、ｒＡｎａｌｙｓｔ　Ｊ　８３　：　６７０−６７２（１９５８年））。

Ｓ−ニトロソチオール吸収の決定は、ギルフォード・レスポンスｕＶ／ＶＩＳ分光光度計を使用して行われた。Ｒ３−Ｎｏ、の核磁気共鳴測定は、ボネットと彼の共同研究者の方法に従ってなされた。（ボネット他ｒＪＣ３Ｐｅｒｋｉｎｓ　Ｔｒａｎｓ、　Ｊ　Ｉ　二２２６１−２２６４　（１９７５年））。［＋ｒ′Ｎ］ＮＭＲスペクトルはマサヂューセッッ州ビレリカのプルツカ−５００ＭＨｚスペクトロメーターで記録された。重水ロックは、［Ｄ］　ｔ　。

で実施され、スペクトルは、５８７ｐｐｍのＮａＮ０ｚ飽和溶液の［ｌ　ｆｉＮ　］自然存在比スペクトルと参照された。

スペクトルは５０．６８ＭＨｚで記録され、１６にデータポイントの９過渡電流が３０°パルス幅およびｌＯ秒緩和遅れで補集された。データはフーリエ変換の前に２Ｈｚ指数ライン拡張因子で増幅された。

化学発光アナライザーは、ＮＯをオゾンと反応させると、検知可能なその発光を生じるように主材上で作動する。それが生物学的分析に係る標準方法の主要な制約は、溶液内で遊離しＮＯｘおよびＳ−ニトロソチオールから誘導されるＮｏを識別することができないことである。（パーマ−他ｒ　Ｎａｔｕｒｅ　Ｊ３２７　：　５２４−５２６　（１９８７年））。この特異性の欠除は、主としてＮＯの高温度検知に対する還元リフラックスチェンバーの必要性から生じる。従って、我々は、特定Ｓ−ニトロソチオール検知の目的ときわめて高感度の新しいアナライザーを適合させた。（ＴＥＡモデル５４３．テレメディスク社）。

この装置は化学還元に代えてＵＶ光分解を利用し、母体ニトロソ化合物からＮＯを引き離す。

しかし、この方法は（触媒熱分解が採用される）ＮＯｘからＮＯを引き離すことには、殆ど効果がない。かくしてニトロソ化合物は、必要な信号検出ＵＶ光分解により基準Ｎｏから容易に確認され識別される。Ｓ−ニトロソチオールは、更に５分間好気性雰囲気条件下で過剰Ｎ　ａ　Ｃｌ　ｚで試料前処理を行うことで他のニトロソ化合物から識別される。ＳＨ基を選択的に結合することにより、ＮＯはＳ−ニトロソチオールで置換され（サヴイルｒＡｎａｌｙｓｔ　Ｊ　８３　：　６７０−６７２　（１９５８年）、急速に自動酸化して高位の形態の窒素（ＮＯｘ）になり、これは検出の感度が著しく貧弱である。従って、Ｓ−ニトロソチオールは　Ｉ）信号検出のためのＵＶ光分解の必要性、および２）Ｈｇ　Ｃ１、を用いて試料処理による信号除去の成功によって確認される。Ｓ−ニトロソ−ホモシスティン検出のこの方法の感度は、１ｐＭに近似し、またその再現は２％以内である。これらの値は、このアナライザーを用いて他のニトロソ化合物の検出で報告された範囲内にある。

各種の酸化およびＳ−ニトロソ化誘導体からホモシスティンを分離する化学的方法は利用できない。この目的のために下記の電気泳動法が開発された。

等速電気泳動分析は、シリカ被覆毛管（２０ｃｎＸ　２５ｃｍ）が装着されたバイオラッドＨＰＥ−１００毛管システム（カリフォルニア州すッチモンド、バイオラッド社）で実施された。

電気泳動分離はオンラインで検出され、１．Ｏｃ＋ｍ／ｍｉｎのチャートスピードでかつ１秒の上昇時間にプログラムされたモデル１３２１シングルベン　ストリップ　チャートレコーダーで記録された。試料は室温で実施されたハミルトン注射器および解析を用いて注射された。

解析を始めるために、毛管および電極リザーバーは電気泳動緩衝液（０，１Ｍリン酸塩、ｐＨ２，５）で充填され、内部電力供給の極性は検知器（＋極性）に向かうカチオンの移動で設定された。入口はそれからイオン除去水で洗われ、０．０ＩＮＨＣ１，Ｏ，０１Ｍリン酸ナトリウムで希釈された１０ｕｌの試料が、１．１ｋＶで９秒間負荷された。人口電極リザーバーは続いて電気泳動緩衝液で洗われ、試料運転は１１ｋＶで実施された。解析の間で、毛管も同じく分離緩衝液で洗われた。溶出物は２００ｎｍで最適感度をモニターされた。３２０ｎｍでＳ −ニトロソチオールの検出の確たる証拠が得られた。（マイヤーズ他ｒＮａｔｕｒｅＪ　３４５：１６］−１６３（１９９０年））。

ｂ、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンの合成および化学的特性づけＳ−ニトロソ−ホモシスティンはニトロソ化の標準的な方法で用意された。ここでホモシスティンは、２５℃で酸性化されたＮ　ａ　Ｎ　Ｏ＊当量（０，５Ｎ　ＨＣＩ）で処理された。（コワルーク他、ｒＪ、Ｐｈａｒ＋ｍａｃｏ１．　Ｅｘｐ、　Ｔｈｅｒ、　Ｊ　２５６　：　１２５６−１２６４　（１９９０年）。オルドレッド他ｒＪ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ。

Ｐｅｒｋｉｎｇ　Ｔｒａｎｓ、Ｊ　Ｕ　：　７７７−７８２　（１９８７年）、パイラー他ｒＪ、　Ａｇｒｉｃ、　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｔｖ、Ｊ　３１　：　５２３ −５２７（１９８３年））。

これらの条件下で、チオールの窒素酸化物との一般的反応は、完全でかつ化学量論的であったと報告されている。しかしホモシスティンにとっては、ラクトン誘導体への酸性触媒変換（リーゲル他、ｒＪ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ＋ｍ、Ｊ　ｌ　１２　：　ｌ　４９−１５４（１９３５年））は、検討を要さる潜在的競争反応である。他のＳ−ニトロソチオールに特徴的であるように、前記溶液は、製品生成に従って急速に赤化し、第１図Ａに示されるように、約２５０ｎｍ、３４０ｎｍおよび５５０ｎｍで際立った最適吸収度を示した。５４７ｎｍにおけるこの化合物の吸収度肝算値は、１６．　７ｃｍ−’であり、これはＳ−ニトロソシスティンおよびＳ−ニトロソ−ゲルタデオンの公表値１６．６および１６．１とそれぞれ相関する。（コワルーク他ｒＪ、　Ｐｈａｒ＋１ａｃｏ１、Ｅｘｐ、　Ｔｈｅｒ、Ｊ　２５６　：１２５６−１２６４　（１９９０年））。酸性化したＮａ　［”Ｎ］　Ｏ□で処理したホモシスティンの［“＠Ｎｌ−ＮＭＲ溶液を使用すると、内部［“６Ｎ］標準に関して７５０ｐｐｍで化学的移動を明らかにして、第１図Ｂで示されるように、５−Ｎｏ統合の形成を示した。

サヴイル反応においては、チオール／Ｓ−ニトロソチオール化学量論は約１．０であった。試料の毛管電気泳動は、第１図Ｃで示されるようにホモシスティンの最大（１（５，９４±０、　１５ｍ　ｉ　ｎ）の目減りを示し、またよりゆるやかな電気泳動移動度との新しい最大値（７，７４±Ｏ，１８ｍ　ｉ　ｎ）を同時に生成する。この最大値は第１図りで示されるように、その質量比に対する負荷から決定され、（グロスマン他［＾ｎａ１、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ　１７９：２８−３３　（１９８９年））７．２分の理論的予測溶出時間にもとづき、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンとして確認される。さらに重大なことは、ＨＴＬ　（第１図Ｅ）は反応溶液内には存在しなかった。これらにより、この化学データは化学量論的なホモシスティンのＳ−ニトロソ化に対する証拠を提供するものとなる。

この反応の生物学的関連を更に支持するために、Ｓ−二トロソーホモシステインは生理的条件の下で合成された。一つの方法では、Ｓ−ニトロソ化は、０．５Ｍのホモシスティン飽和溶液（４０ｍＭ）あるいはＩＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７，４）を、溶液内に泡立たせた基準ＮＯガスに短い間被曝させることで達成された。他の研究によれば、ホモシスティン（１ｍＭ）は前に記述したように、ＥＤＲＦを分泌する高いずれ応力に対応して刺戟される内皮細胞で保温された。これらの実験では、内皮細胞室は全容量が１ｍｌで、１０ｍＭのリン酸ナトリウム生理緩衝液（ｐＨ７，４）および内皮細胞密度５Ｘ１０”細胞／　ｕ　ｌを含んでいた。細胞は約０．４３ダイン／ｃ＋＊”のずれ応力で約１５分間被曝された。（ステムラ−他ｒｃｉｒｃ、　Ｒｅ５ｉ　６５　：　７８９−７９５　（１９８９年））。

更に後の研究は、チオラクトンなどのホモシスティンの酸化誘導体に存在する硫黄のＮＯｘに対する反応性を説明するために行われた。

前記のニトロソ化方法を用いて、ホモシステインーチオラクトンがＳ−ニトロソチオールを形成するために反応しないことが確定された。同様に毛管ゾーン電気泳動（ＣＺＥ）により確認され、また、サブイル相補性検定にあるように、ＨＴＬの正当な硫黄がＮＯｘによる親電子性攻撃を調べることはできない。

更に重要なことは、ホモシスティンのＳ−ニトロソ化が酸性触媒反応において環状閉鎖（チオラクトン形成）を妨げた。酸性環境（１−１２Ｎ　ＭＣＩ）内でホモシスティン保温はＨ”濃縮およびＨＴＬの時間依存型形成を生じ、それは等モルＮ　ａ　Ｎ　Ｏ２を追加したものには生じなかった。これら状況下では、ＨＴＬを排除してＳ−ニトロソ−ホモシスティンが形成され、続＜ＨＴＬへの変換は、ＣＺＥによりまたサヴイル反応で確認されたように、数時間の時間経過を経た後も観察されなかった。これらのデータは、スルフヒドリルがＳ−ニトロソ化の必要条件であることを示し、また、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンの形成およびホモシスティンの酸化経路がもっばら一つずつ起こる生物化学反応であることを示している。

実施例２：内皮にに対するホモシスティンの作用ａ：マイクロキャリア内皮細胞の培養内皮細胞は、以下ｒＥＣＢＪと呼称するが、既存の技術でウシ大動脈から分離され（シュワルツｒｌｎ　ＶｉｔｒｏＪ　１４　：９６６−９５０．（１９７８年））、標準方法（ディピース他ｒＪ、　Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ、　Ｊ　１０１　：８７１−８７９　（１９８５年））に従ってマイナス負荷球状プラスチックビーズのマイクロキャリアシステムで培養された。

ｂ、培養細胞からのＥＤＲＦ生成この方法では、標準方法を用いて、内皮細胞がＥＤＲＦを分泌する高いずれ応力で刺戟された。すべてのの実験において、プロスタノイド合成は確立した実験記録に従ってアセチルサリチル酸で阻害された（ステムラ−他ｒｃｉｒｃ、　Ｒｅｓ、Ｊ　６５：　７８９−７９５　（１９８９年））。タック他、「Ａ園、Ｊ。

Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｊ　２８　：　Ｈ３Ｏ４−Ｈ８１２（１９８９年））。この研究の目的のために、ＥＣＢは密度５Ｘ１０”細胞／　ｕ　１で全容量１ｍＭのＰＢＳ　（ｐＨ７，４）を含むチャンバー内に置かれ、１５分間０．４３ダイン／Ｃ園２のずれ応力にさらされた。

Ｃ１内皮細胞の生活能力マイクロキャリアピースの内皮細胞の密集細胞成長および度合のアセスメントは、位相差顕微鏡で決まった手順で研究された。実験過程の間、保温媒体２５ｕ１のアリクウオットが、時間間隔で乳酸脱水酵素（ＬＤＨ）測定のため移され、ＬＤ−１分析装置（シグマケミカル社）を使用して分光器で確定された。同じ間隔で細胞の生活能力がトリバンブルーの生体染色除外法で評価された。

追加の実験において、前記分離成長した内皮細胞（通路６−２０）はトリプシン処理の後、１２ウ工ル組織培養平板（マサチューセッツ州、ケンブリッジ、コスタ−社）に移され。

ｌＯ％コウシ血清を補われたダルベツコ補正イーグル媒体（ＤＭＥＭ）に密集成長した。実験の直前に個々のウェルは２度洗滌され、ワイマウス媒体もしくはコウシ血清から遊離したＤ　Ｍ　Ｅ　Ｍ　７５０　ｕ　１が充填された。各種の対照と同じように、Ｃｕ”（１５０ｕＭ）およびＦｅ”（１０ｕＭ）の存在下および不在下でのホモシスティン（１−１０ｍＭ）の保温は、Ｇｏ、５％内で前記記載のＬＤＨの確定、およびトリバンブルーの生体染色除外法により評価された。

ｄ、形態学的研究内皮細胞生活能力の実験を補足するために、細胞はＦ−アクチンを可視化するように染色された。使用された方法は、これまで公開された実験記録を一部修正したものである。（フリップ他ｒ、１．　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ、　Ｃｙｔｏｃｈｅｓ＋、　Ｊ　３６　：　５５１−５５４（１９８８年））。内皮細胞は、トランスウェル・ポリカーボネート細胞クラスター平板、２４ウエルで６．５ｍ＋ａに密集成長した（組織培養処理、０．４ｕＭ細孔、核細孔（Ｒ）。マサチューセッツ州・ケンブリッジ、コスタ−社）。酸化還元金属（１−５０ｕＭ　Ｃｕ”およびＦ　ｅ　”）の存在下および不在下で、等量のホモシスティン（１−１０ｍＭ）および対照試料（ＤＭＥＭ）が上部ウェル区画部分に追加され、ｃｏｔ　５％雰囲気３７℃条件下で２４時間保温された。各種の時間間隔でポリカーボネート膜が除去され、内皮細胞単層はＰＢＳ内で２度洗滌され、３．７５％フォルムアルデヒドで固定された。

この単層は引き続き洗滌され、ローダミン結合ファロイジン（３３３ｎＭ）で保温された。ポリカーボネート膜は一滴のグリセロール／ＰＢＳ　（１：　ｌ）とともにスライドにのせられ、ツアイス・アクジオスコープ顕微鏡を使用しエビ蛍光顕微鏡検査が行われた。写真はコダック　エフタフローム４００で機影された。

ｅ、内皮依存型弛緩この標準生物学的検定の詳細はこれまでに報告されている（オスボーン。他ｒＪ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、Ｊ　８３　：　４６５−４７３（１９８９年））。要約すると、３−４　Ｋｇの重量のニューシーラント・ホワイトメスウサギの下降胸部大動脈が分離され、付着結合組織が除去された。ある実験では、内皮は内腔に挿入された綿棒で柔らかくこすって除去された。その環があぶみにのせられ、７ｍｌのクレブ緩衝液を含む酸素付与（０１９５％、ｃｏｔ　５％）ガラスチャンバーで３７℃で懸濁され、アイソメトリック張力の変化を記録する押込みトランスデユーサ−（モデルＦＴ０３Ｃ）に接続された。エピネフリンにより収縮が持続誘発し、アセデルコリン、トロンビンおよびカルシウム・イオンフォアにより内皮依存型弛緩が誘発した。内皮依存型弛緩に対するホモシスティンの作用は、このモデルで１０時間の間隔で検討された。これらの実験においては、ホモシスティン（１ｍＭ）が管チャンバーに追加され、内皮依存型弛緩は時間間隔での時間制御で比較された。

酸化還元金属により高められたホモシスティン媒介内皮毒性についてのこれまでの報告（スターケバラム他、Ｎ、　Ｃｌ１ｎ。

Ｉｎｖｃｓｔ、Ｊ　１７：１３７０−１３７６　（１９８６年））から考えて、１ｕＭの硫酸銅が選択された実験で加えられた。遊離スルフヒドリルの損耗がエルマン試薬（ＤＴＮＢ）で続行した。

（セトラツク他、ｒＡｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ　２５　：　ｌ　９５−２０５（１９６８年））Ｍ離スルフヒドリル／時間の２０％以下の酸化が定量されたことに基づいて、ホモシスティンの溶液は時間間隔で変化した。

他の実験においては、ベッセルトーンに対するホモシスティンおよびＳ−ニトロソホモシスティンの直接作用が検査された。これらの化合物は、１ｕＭのエピネフリンに対する安定した収縮が達成された後、内皮露出でベッセルリングに加えられた。ある場合には、メチレンブルー（１００ｕＭ）は収縮の開始＠３０分間にベッセルリングで事前保温された。

ｒ、ホモシスティンからの過酸化水素生成ホモシスティンは、Ｈ，Ｏ□を生成し、内皮細胞を損傷するということについて各種研究の中で強い証拠および合意が存在する。チオールが自動酸化し２個の電子を０２に移しＩ］２０□を形成することが示されている。（スターケバラム他、Ｎ、　（、ｌｉｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、ｉ　７７　：　１３７０−１３７６（］　９９８６年）。従って、本発明者は、ＳＨ基を遮断してＳ−ニトロソ化カ月４２０２生成を制限する仮説を検証した。

スコボレチンは、ホースラディツシュペルオキシダーゼ（ＨＰＯ）による８、０２の触媒還元で水素ドナーとして役立つ。この酸化反応において、スコボレチン蛍光は、媒体中のＨ２Ｏ，濃度に直接比例して失われる。（ルート他、ｒ、１．　Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ　Ｊ　５３　：　９４５　９５５　（１９７５年）　）。ホモシスティンからのＨ，Ｏ，産出を検出するよう設計された下記の検定条件は、これまでに公開されている。（スターケバラム他。ｒＪ、　（：ｌｉｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、Ｊ　７７　：　１３７０−　］　３３７６１１９８６年）、、反応は２．５ｍｌのクレブ緩衝液に４ｕＭのスコボレチンを含むキュベツトで実施され、２．２ｕＭ　ＨＰＯを追加して開始された。蛍光測定は、３６０ｎｍで行われた試料励起および４６０ｎｍでの放出を伴い、分光蛍光計にュージャージー州エジソン、スペックスイングストリーズ社、フルオロローブ　２　モデルＦｌｌｘ）で行われた。

この結果は、第２図および表１で示される。明らかに、ホモシスティンはスコボレヂン蛍光の急速な減料を誘発し、かくしてＨ，Ｏ□の生成を示している。

ｇ、ホモシスティン誘発内皮機能障害ホモシスティン細胞毒の酵素および形態学的例証がないため、ベッセル生物学的検定において、内皮機能障害の上記の証拠が更に追求された。第３図に示されるように、ホモシスティンにさらされたベッセル内の内皮依存型弛緩の著しい希釈が示される。ｌｏｏｎｍ、１ｕ、Ｍおよび１０ｕＭのアセチルコリンに対するＳ −ニトロソ−ホモシスティン被曝ベッセルの弛緩は、５回の実験の間チオール不在のまま時間制限に対し標準化された。データは平均信士Ｓ、Ｄ、（１！！準偏差）で提示されたる。曲線はＡＮＯＶＡ　（共産）からＰくまで一つずつそれぞれ異なっている。更にこの実験でホモシスティン誘発内皮機能障害の時間経過は、第４図に示されるようにホモシスティン関連血小板活性化の時間的プロファイルにうまく対応する。ＡＤＰおよびヒスタミンで誘発された内皮依存型弛緩は、同様にホモシスティンにより減少し、かくして選択的なムスカリン作用欠損を排除することになった。このようにこれらのデータは、ホモシスティン媒介内皮機能障害を明らかに提示し、この機料が一緒に行われた実験でみられるように血小板活性化をひきおこすという概念を強く支持するものである。

著しく対照的に、Ｓ−ニトロ−ホモシスティンからのＨ２Ｏ２産出は、金属触媒が存在する場合であってもなおごく少量である。かくしてｉ（，０ｍ産出を通じてのホモシスティンの細胞毒機料は、Ｓ−ニトロソ化で希釈されることになる。

実施例３：血小板凝集に対するホモシスティンおよびＳ−ニトロソ−ホモシスティンの作用ａ、血小板の調製非ステロイド系消炎剤を少なくとも１０日間服用しなかったボランティアより静脈血が提供され、それは３．４ｍＭのクエン酸トリナトリウムで抗凝固された。

血小板過多血漿（ＰＲＰ）が１．５０ｇ、１０分間遠心分離により調製された。

ゲル濾過血小板（ＧＦＰ）は前記（ホーイガ−他ｒ　ＮａｔｕｒｅＪ８３１　：１９５−１９８　（１９８０年））の通りＰＰＰをチロードーヘペス緩衝液のセファロース−２Ｂカラムを通過させることで得られた。血小板数はコールタ−カウンター（フロリダ州ハイアリ−、コールタ−エレクトロニクス社。モデルＺＮ）を用いて測定され、ＰＰＰあるいはＨＢＳの添加で１５０．０００／ｕｌに調節された。

ｂ、血小板凝集ＰＲＰおよびＧＦＰの凝集が標準比濁分析手法（ボーン他、ｒ　Ｊ、　Ｐｈｙｓｏｌ　（ロンドン）４１６８：１７８−１９５日９８０年）を用いてモニターされ、ここで０．３　（ＧＦＰ）あるいは０．５　（ＰＲＰ）ｍｌアリクウオットの血小板が３７％で保温され、ＰＡＰ−４血小板凝集計（ペンシルヴアニア州ハツトボロー、バイオデータ社）でＩｏｏｏｒｐｍで攪拌された。凝集は各種濃度のＡＤＰ　（０，７５ｕＭ、５ｕＭ。

１４ｕＭ）、トロンビン（０，０２５ｕ／ｍｌ）および膠原（０，０１６ｍｇ／ｍｌ、ｏ、１６ｍｇ／ｍｌ）の添加で誘発され、光透過度の変化が記録された。

典型的名実験において、作用薬の追加の前に、血小板は３分間３７℃でホモシスティンおよびその誘導体で保温された。しかし、選択された実験において、前保温が約１時間まで行われた。血小板凝集におけるＥＣＢ、より生成したＥ　Ｄ　ＲＦの作用を検証する我々の方法は、詳細に発表されている。

（タック他、ｒＡｍ−，１，Ｐｈｙｓｊｏｌ、　Ｊ　２８　：　Ｈ３Ｏ４−Ｈ８１２（１９８９年））のとりわＧづこれらの実験において、Ｅ　ＣＢ　ｓは６時間ＤＭＥＤ内でホモシスティン（５ｍ　Ｍ　）の存在下および不在下で前保温され、その時間血小板凝集のＥＤＲＦ媒介阻害は時間間隔で定量された。ＥＣＢ、は血小板と共に保温の曲にホモシスティンを除去するためにＰＢＳで洗滌され、Ｅ　Ｉ）　ＲＦ放出は血小板活性化で連続攪拌（フロー）の作用で３分間刺戟された。（タック他、ｒＡＩＩｌ、　Ｊ、　Ｐｔ＋ｙｓｉｏ１．　Ｊ　２８　：Ｈ３Ｏ４−Ｈ８１２（１９８９年））。凝集はその後５ｕＭのＡ　Ｄ　Ｐで誘発された。あらゆる場合で、凝集は最大変化率あるいは光透過率の範囲を測定することで定量分析された。

Ｃ１血小板凝集に対するホモシスティンの作用ＡＤＰ（１４ｕＭ）および膠原（０，１６ｍｇ／ｍｌ）により誘発される血小板凝集に対するホモシスティンの作用は、第５図で示される。８人の異なるボランティアより得られたＰＲＰで実験が行われ、血小板凝集についての投与量依存型阻害が一致して示された。この阻害のためのＩＣ５０はいずれの作用薬の場合でも約１０ｍＭである。

合成チオールによる血小板凝集を説明するために提案された理論的機料にもとづいて、追加の実験が行われた。（）・−マス他、ｒＴｈｒｏｍｂ　Ｒｅｓ、　Ｊ　４４　：　８５９−８６６　（１９８６年）。

ラッカー他、ｒ　Ｔｈｒｏｍｂ、Ｈａｅｎｏｓｔａｓ　（ストウットガルト）」５１　：１１９−１２４　（１９８４年））。オキシラジカル生成および非特異的（恐らく時間依存型）表面膜ジスルフィド還元などがそれである。ホモシスティンの作用は、更に、１時間にわたる保温の間に、ＧＦＰに第−波の（可逆）凝集を誘発する低い投与量の作用薬（ＡＤＰ、膠原およびトロンビン）を使用し、またＳ　Ｈ依存型スーパーオキシドおよびＨ２０□生成を容易にするためのＰＲＰおよびＧ　Ｆ　ＰをＣｕ”　（１−１０ｕＭ）およびＦｅ”　（１−１０ｕＭ）と共に追加補足した後で更に検討された。すべての場合において、作用薬誘発凝集は、ホモシスティンのミリモル濃度で阻害され、低い投与量では大部分は影響を受けなかった。加えて自然発生的凝集は観察されなかった。

ＡＤＰおよび膠原誘発血小板凝集に対するＨＴＬ　（遊離塩基および塩酸塩）の作用は第５図（Ａ）および（Ｂ）で示される。化合物は２個の形態で弱い抗血小板活性を示している。

とりわけこれらの研究では、ＨＴ　Ｌ遊離塩基の保存溶液はＩＮ　ＨＣＩに溶解され、同じような結果がＤＭＳＯに溶解した化合物に対して示された。

クロロフォルム内でＨＴＬ（ａ離塩基）に誘発される血小板凝集が最近示され（マツカリ−他、ｒＲｅｓ、　Ｃｏｍａａ、　Ｃｈｅｗ、　ＰａｔｈＰｈａｒ＋＊、　Ｊ　５６　（３）　：　３４９−３６０　（１９８７年））、この溶媒にある化合物の膜溶解度にその原因がめられた。発明者により行われた実験では、クロロフォルム（１−ＩＰＬＣグレード）による対照保温は、第６図に示されるようにマツカリ−他により使用されたものの半分の容積％で血小板凝集を誘発し、検出可能なＨＴ　Ｌの親凝集作用が加わることはなかった。

他の研究では、発明者はホモシスティンのＨＴＬ（６Ｎ−１２Ｎ　ＨＣＩ）への酸触媒の変換を誘発し、血小板凝集でこの方法で生成したＨＴＬの作用を試験した。観察された結果は第５図で示されたものと類似していた。ホモシスティンおよびホモシスティン酸は、１０ｍＭまでの濃度でＰＲＰにあるＡＤＰ（１４ｕＭ）誘発血小板凝集には何らの作用も与えず。

従来の報告を確認した。（マクドナルド他、ｒ　ＬａｎｃｅｔＪ　ｌ　ニア４５ −７４６　（１９６４年）。マツカリ−他、ｒＲｅｓ、　Ｃｏ＋ｕ＋。

Ｃｈｅｗ、　Ｐａｔｈ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｊ　５６　（３）　３４９−３６０　（１９８７年）。ディビス他ｒＡｍ、　Ｊ、　Ｄｉｓ、　Ｃｈｉｌｄ　Ｊ　ｌ　２９　：　１０２０−１０２１　（１９７５年））。

ｄ、ＥＲＤＦおよびホモシスティン関連血小板凝集検出可能なホモシスティンの直接の親凝集作用が不在の下で、ホモシスティン媒介内皮細胞機能障害が補助的に血小板活性化に導くという仮説を検証した。

この目的のために、ＥＣＢはホモシスティン（５ｍ　Ｍ　、ウェイマウス媒体）で６時間まで保温され、ホモシスティンは時間対照実験で付随的に排除された。

一定の時間の間隔をおいて、ＥＣＢ　（ＩＸＩＯ＠細胞）は除去され、ＰＢＳ内で洗滌さ、れ、血小板過多血漿（ＰＰＰ）に加わられた。ＥＤＲＦ分泌は３分間血小板凝集計で刺戟され、（タック他、ｒＡｍ、　Ｊ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ。

Ｊ　２８；Ｈ８０４−Ｈ３１２（１９８９年））、凝集はＡＤＰ（５ｕＭ）で誘発した。

第４図で描かれたように、ホモシスティンの持続性被曝はＥＤＲＦの分泌を通じて血小板凝集を阻害するＥＣＢの先天的能力を失わせる原因となる。媒体内に放出されたＬＤＨの測定は、時間をかけると少し増加（〈２０％／６時間）し、ホモシスティン被曝および対照ＥＣＢａの間に差異は見られなかった。同様に、細胞のミクロキャリアからの分離にも差異はなく、あるいはトリパンブルーの排除がホモシスティンの存在下で検出できた。

細胞の生活能力についての他の研究では、内皮細胞は、マイクロタイター平板で平板培養され、１２時間にわたり（１−”　ｕＭ　Ｃｕ”の存在下および不在下で）ホモシスティンを保温した。ＬＤＨの時間依存型増加は小さく　（１２＋１２％、平均値±Ｓ、Ｄ、、ｎ−１２）、更に１０ｍＭホモシスティン（Ｎ＝１２　；　ｐ：＝Ｎ、Ｓ）によって前記対照レベルがそれほど著しく増加しなかった。アクチン（ｎ＝３）の染色は、ホモシスティン処理細胞あるいは１２時間を越えた時間制御のいずれについても検出できる形態学的変化は示さなかった。これらのデータは共に、ホモシスティンの被曝の結果として生活能力があり、しかも機能不全となる内皮の存在を支持するものである。

ｅ、血小板凝集に対するＳ−ニトロソ−ホモシスティンの作用第７図で描かれているように、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンは、血小板凝集を著しく阻害した。等濃度のＮ　ａ　Ｎ　Ｏ＊を用いる対照実験において、血小板凝集の著しい阻害は観察されなかった。（ＮａＮＯ□　（１００ｕＭ）の標準範囲凝集＝１．０２±０．１２．ｎ＝１２）ｒ、サイクリックＧＭＰレベルに対するＳ−ニトロソ−ホモシスティンの作用サイクリックＧ　Ｍ　Ｐ　（ｃ　Ｇ　Ｍ　Ｐ　）の測定は、４００ｕｌアリクウオツトのＰＰＰに対する放射線免疫検定法で実施され、標準方法で処理された。

（タック他、ｒＡｍ、　Ｊ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｊ２８：Ｈ８０４−Ｈ３１２（１９８９年））。ホモシスティン、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティン、および関心のある他の化合物の保温は６０秒間行われ、１０％のトリクロロ酢酸の添加により反応は終結した。

ＥＤＲＦの血小板作用に関する限り、Ｎｏおよび他のニトロソ化合物は、細胞内サイクリックＧ　Ｍ　Ｐの増加を通じて媒介される。（イグナルロ、ｒｃｉｒｃ、　Ｒｅｓ、Ｊ　６５　：　１−２１（１９８９年））。この機側はＳ−ニトロソーホモシスンのために研究された。Ｓ−ニトロソ−ホモシスティン（ｌｏｏｕＭ）を６０秒間ＰＲＰ内で保温すると、基底レベル（Ｐｒｏ、０５）を越えて細胞内血小板サイクリックＧＭＰは３．６倍増加する結果となった。等濃度のＮ　ａ　Ｎ　Ｏ２およびホモシスティンは血小板サイクリックＧＭＰに何ら顕著な影響を与えなかった（第８図）。

ｇ、ＥＤＲＦおよび血小板阻害からのＳ−ニトロソ−ホモシスティンの形成ホモシスティン（１ｍＭ）の存在下および不在下でＥＤＲＦを分泌する高いずれ能力によるＥＣＢ刺戟から得られる溶出液は、ケミルミネセンスおよびＳ−ニトロソチオール形成のためのサブイル法により分析された。表２および第９図に示されたその結果は、Ｓ−ニトロソチオールのホモシスティン依存型形成、二つの測定方法の間の量的一致、その制約された感受性（ｌｏＯｎＭ）により説明されるサヴイルの方法で測定値にみられる大きな変化、などを示している。

これらの試料の生物活性を更に定量分析するために、１００ｕｌアリクウオツトのＥＣＢ溶出液が１０分間ＰＲＰ（２００ｕ　Ｌ）で保温され、凝集がＡＤＰ（５ｕＭ）で誘発した。ホモシスティンの存在下でＥＤＲＦを分泌するための刺戟されたＥＣＢにより誘発した血小板阻害が第１０図Ａで示される。Ｓ−二トロソーホモシステインがこれらの研究で活性種であることを更に証拠付けるものとして、観察された血小板阻害の程度が、溶液のＳ−ニトロソチオール容量にもとづいて、Ｓ−二１−ロソーホモシステインの用量反応関係（第１０図Ｂ参照）から予測されたものと一致した。更にＥＤＲＦの半減期が５−３０秒という関係から（パーマ−他、ｒＮａｔｕｒｅＪ３２７　：　５２４−５２６　（１９８７年））。イグナルロ他ｒＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、Ｊアメリカ合衆国、８４　：　９２６５−９２６９　（１９８７年））これらの研究で、ＥＣＢ溶出物がＰＲＰへ移る時間の遅れが約５分であり、また試料の生物活性が同様に３０分の時間の遅れ（ｒ）＝２）で維持されたことは注目に値することである。

第１１図で示されるように、生理的条件の下でこれらの研究成果は、はＳ−ニトロソ−ホモシスティンの著しい安定性と完全に調和する。これをふまえて、このような実験は、１）内因性窒素に対するホモシスティンの被曝は％Ｓ−ニトロソーホモシスティンの形成を生じ、２）ホモシスティンに対する内皮細胞の短い被曝は、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンの形成を通して抗血小板活性を生じ、また、３）ホモシスティンはＳ−二トロソーホモシステインの形成においてＮＯおよびＥＤＲＦ様生物活性を維持する（安定させる）のに重要な役割を果たすことを示す。

実施例４：ベッセル弛緩に対するＳ−ニトロソ−ホモスティンの作用Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンの作用は、実施例２（ｅ）で記述された方法に従って、ベッセル生物学的検定で更に検討された。第１２図で示されるように、化合物はＩＣ，。、１５０ｎＭの活性血管拡張薬である。（表３）。この５−Ｎｏ付加物の潜在能力を表示するものとして、このシステムにおけるＳ−ニトロソ− システィンのＩＣ，、は４ｕＭである。サイクリックＧＭＰ−依存型機能磯割に一致して、Ｓ−ニトロソ−システィンによる弛緩はグアニル酸シクラーゼ阻害剤メチレンブルーにより完全に妨げられた。

実施例５　：　Ｈ＊　Ｏｘ生成に対するＳ−ニトロソ−ホモシスティンの作用実施例２（ｆ）に記載された方法は、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンがＨ２０！を生成するかどうかを確定するために採用された。結果は第２図に示されている。ホモシスティンとは非常に対照的にＳ−二トロソーホモシステインよりのＨｚＯｔの生成は金属触媒が存在していてさえごく僅かであった。かくしてＨ２０□ 産出で媒介されるホモシスティンの細胞毒機料は、Ｓ−ニトロソ化で稀釈される。

実施例６：ＨｉＯｉ生成に対するシスティンの作用およびＳ−ニトロソ化によるＨｘＯｚ生成の遮断実施例２（ｒ）に記載された方法は、システィンがＨ２０□ を生成するかどうか、また１１，０□生成がＳ−ニトロソ化により遮断され得るかどうかを確定するために採用された。その結果は第１３図および第１４図で示される。第１３図で示されるように、システィンはスコボレチン蛍光の急速な損耗を誘発し、か（してＨ２Ｏ２生成を示している。対照的に第１４図で示されるように、Ｓ−ニトロソ−システィンよりのＨｔＯ□の産出はきわめて僅かである。このように、ＨｔＯｉ産出により媒介されるシスティンの細胞毒機料は、Ｓ− ニトロソ化により稀釈される。

ディスカッジョン内皮の損傷あるいは機能障害は血栓症および血管閉塞事象の素因を与える。これらの研究では、発明者はホモシスティンに対する持続性被曝の間に、血小板凝集を最大に阻害する内皮の能力に進行性機能障害が生じることを観察し、また、ホモシスティン媒介内皮機能障害が血小板活性化の素因となることを示した。データは更に、ホモシステイネミアにある血栓性傾向が超正常凝集応答を与えないというこれまでの観察に同意する。

ホモシスティンの細胞毒および付随する血栓形成性は、ＥＤＲＦに対する機能的生物学的検定により定義することができる。かくして、ＥＤＲＦを分泌する能力と血小板活性を経る血栓形成機料との間に逆の関係が存在する。しかし、このパラダイムはＥＤＲＦ　（あるいはその誘導体）およびホモシスティンの間の相互作用により更に拡張される。他の生物学的チオールがＮＯｘの存在でＳ−ニトロソチオールを形成するよう反応し、また、生物学的チオールがＥＤＲＦの生物活性を相乗強化することを証拠が示唆している。

ホモシスティンに関するこの相互作用の潜在的重要性を更に調査するために、発明者はＳ−ニトロシル化誘導体である、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンを合成し特性化した。以下に述べる検定は、半減期のＮｏと対した生理学的条件下でのこのＳ−ニトロソチオール付加物の異常な安定性を示し、またそれがサイクリックＧＭＰの増加を通じて媒介された抗血小板性および血管拡張性を有することを示した。

Ｓ−ホモシスティンに関する生物学的関連性を更に支持するために、発明者はＮｏから内在的に誘導されるホモシスティン依存型Ｓ−ニトロソチオール形成およびその分子の抗血小板生物活性に関し記録を作成した。か（して内皮はＥＤＲＦの分泌を通じてホモシスティンの血栓形成機料を中和することができ、またＳ− ニトロソ−ホモシスティンの形成は、カウンター調節経路にとって基本的である。Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンの内因性形成は、血小板阻害および血管緊張低下を経る止血処理に欠くことのできない役割を果たす。

細胞培養におけるホモシスティン誘発内皮損傷は、ＳＨ基により生成したＨ、Ｏ □から、全部ではないにしてもかなりの部分が生じる。Ｈ２０□生成の生化学的測定が、これらの研究でホモシスティンの細胞毒と直接相関する限りにおいては、ホモシスティンのＳ−ニトロソ化はスルフヒドリル依存型Ｈ＊　Ｏ。

生成を有効に阻害する。ＥＤＲＦの存在下でＳ−ニトロソ−ホモシスティン形成の実証に関連して、これらの観察は他の硫黄含有アミノ酸と同様にホモシスティンの毒性な内皮が修飾するという新規な機側を記述する。更にこのような関係において、チオラクトンに対する酸化代謝により付与されたホモシスティンのアテローム形成性は、ＮＯｘによる電子分解に対しくエステル結合内の）ラクトン硫黄を隔離することにより少なくともも部分的には説明することができる。

ホモシスティンの毒性発現はＮＯの可溶性とホモシスティンレベルの間のインバランスに反映する。したがって、Ｎｏ不足は、「チオール過剰」の絶対レベルよりも、ホモシスティンの病原性ボテンシアルのより正確な測定尺度を提供する。

かくしてハイパーホモシステイネミアは（内皮損傷の結果として）ＮＯの相対的欠失をもたらし、また同様により古く獲得された不全あるいは先天性代謝異常から生じるホモシスティンレベルの上昇を招くこととなる。ハイバーホモシステイネミア機側にも拘らず、結果として生じる内皮損傷はＮｏ産出を妨げ、内皮の正常な抗血栓機側に干渉する。第１５図で示されるように。

これは、これらのＳ−ニトロソ化の抗血栓細胞保護機側が、アテローム硬化および血栓症に対する個体素因を犠牲にして次第に弱まっていくサイクルの引金を引く。

第１５図は、ホモシスティン媒介アテローム血栓症およびそのＮｏ調節の機側を示す。ｌ）ホモシスティンは内皮から得られたＮＯｘと反応し、血栓拡張抗血小板Ｓ−二トロソチオール付加物を形成する。２）Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンはいくつかの潜在的生物学的Ｓ−ニトロソチオールの一つであり、それはチオールーニトロソヂオール置換を経て反応し、血漿および細胞質ゾルの弛緩および血小板阻害に活性である分子のプールとして役立つ、３）ホモシスティンレベルが上昇し、あるいはＮＯ放出が弱められる疾病状態では、ホモシスティン（遊離ＳＨ）はＨｘｏ□生成により内皮を損傷し、従ってＮｏ産出を阻害する。同じようなオキシラジカル依存型機料により、ホモスティンはＬＤＬの酸化に参加し、スカベンジャーレセプターで認識されるアテローム発生形態に変える。４）相対的なＮ。

欠失に伴い、ホモシスティンはＨＴＬによる酸化代謝に短絡する。この経路は、結合組織の過剰硫化を経て、少なくとも部分的にベッセル壁を更に損傷することになる。

より広い関係において、Ｓ−ニトロソ化の細胞保護機料は、システィンなどの他の硫黄含有アミノ酸のアテローム発生を調節するより一般的な役割を果たす。チオール依存型アテローム形成性制がホモシスティンに特異的ではないことを示す証拠が増えている。システィンはまた反応性酸素種（０８）の生成を支援し、この酸素は低密度リボ蛋白を修飾してスカベンジャーレセプターとして認識される形態にすることで、アテローム発生に強（関係してきた。（パーザサラジーｒ　Ｓ、　Ｂｉｏｃｈｉｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｊ　Ａｃｔａ９１７　：　３３７−３４０　（１９８７年）。

ハイネツケ他ｒＪ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ＋ｗ、Ｊ　２６２　：　１００９８− １０ＪＯ３（１９８７年））。システィンは更に銅触媒反応において非常に効率的な２個の電子供給者となり、Ｈ２０！を生成する。システィンの未だ評価されていない毒性は、特にこの関係において適正であり、その理由は、この分子のＳ −ニトロソ化誘導体のもつ血管拡張抗血小板の性質が、ＥＤＲＦとして同定される請求の範囲で重要な要件であるためである。

従って、一般にその細胞毒および血栓発生ポテンシャルを修飾するために硫黄アミノ酸の生化学経路の調節機料が必要となる。ホモシスティンに関連して説明されたように、Ｓ−ニトロソ化はそのような細胞調節機料の一つを表しており、それは生物学的チオールにＥＤＲＦ様生物活性を授け、その毒性効果を希釈する。

要約すると、提出したデータは下肥のことを示す。１）ホモシスティンおよびＨＴＬは弱い血小板インヒビターであり、直接血小板凝集を促進しない。２）ホモシスティン媒介内皮損傷は付随するＥ　Ｄ　ＲＦ　／　Ｎ　Ｏｘ産出の希釈を伴い、血小板活性化の素因となる。３）ホモシスティンは生理的条件下で窒素酸化物と反応し、安定したＳ−ニトロソチオール（Ｓ−ニトロソ−ホモシスティン）を形成する。４）ホモシスティンの酸化代謝で、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティン形成のポテンシャルは失われる。５）反応性酸素種の生成を通じるホモシスティン媒介内皮損傷機料は、Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンの存在下では現れない。

また６）Ｓ−ニトロソ−ホモシスティンは、サイクリックＧＭＰで媒介された、内在性ＥＤＲＦ様抗血小板血管抗張性を有する。

これらのデータはホモシスティン誘発アテローム硬化および血栓症の機側に新しい見識を提供し、細胞生化学および代謝の調節に関し、Ｓ−ニトロソチオールの機能性のより大きなポテンシャルを際立たせる。Ｎｏの利用がホモシスティンの血栓症発生および細胞毒ポテンシャアルにとってもつとも重要であるという概念が、同じように、重要な薬理学的含蓄を持つ。かくしてＮｏ等量の提供は、ホモシスティンが病因の役割を果たしている疾病の治療および予防には治療という面から重要である。

表１表３Ａ　ＢＡ二　へ　恥昏幀（鋒）ｐ嚇時用（ｍｉｎ）ｉ　′Ｖ−い〜罎≧枡＋−／オｄ＜モ　哨［５ＮＯ）−１ｏ］、　Ｍダ叶０．０　３０．０　６０．０　９０．０　１２０．０　１５０．０　１Ｅ！０．０ら吊（＝ｎ；ｈ）ｄ＾ｔＩ、Ｚト吠イ（国際調査報告フロント・ページの続き（５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ａ６１Ｋ　３７１０２　ＡＢＪ　８３１４−４Ｃ（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、ＡＵ、ＣＡ、ＪＰＩ

Claims

【特許請求の範囲】

１．ホモシステインのレベル上昇で生じる疾病を治療しあるいは予防する一つの方法であって、ニトロソ化合物の治療有効量をそれを必要とする患者に投与することによりなる方法。
２．前記ニトロソ化合物が、ニトログリセリン、Ｓ−ニトロソチオール、Ｓ−ニトロン蛋白質、硝酸、ニトロプルシド、ニトロソニウム塩、シドノニミン、フロクサン、および関連化合物からなるクループより選択される請求の範囲第１項記載の方法。
３．前記化合物が医薬品許容キャリアよりなる医薬品組成物の一部として投与される請求の範囲第２項記載の方法。
４．前記医薬品組成物が、経口、皮下、静脈内、筋肉内あるいはエアロゾル受け渡しにより患者に投与される請求の範囲第３項記載の方法。
５．前記Ｓ−ニトロソチオール化合物が、Ｓ−ニトロソーＮ−アセチルシステイン、Ｓ−ニトロソーグルタチオン、Ｓ−ニトロソーシステイン、Ｓ−ニトロソーホモシステイン、Ｓ−ニトロソーパンタトエイン誘導体、Ｓ−ニトロソーペニシラミン、Ｓ−ニトロソーカプトプリル、長連鎖親脂質ニトロソチオール、およびＳ−ニトロソージチオールからなるクループより選択される請求の範囲第２項記載の方法。
６．前記疾病が血管疾患、細胞毒、あるいは結合組織疾患よりなる請求項の範囲第１項記載の方法。
７．前記疾病が静脈血栓症、動脈血栓症、アテローム硬化、冠状動脈閉塞症、腎血管性高血圧、間欠性跛行、腸間脈虚血、腸血管性疾患、および肺塞栓症よりなる血管疾患である請求の範囲第６項記載の方法。
８．前記疾病が血管繊維症、水晶体転位、精神遅滞、精神運動機能障書、骨格奇形、および骨粗鬆症よりなる結合組織疾患である請求の範囲第６項記載の方法。
９．前記疾病がホモシステイン誘発細胞毒作用よりなる請求の範囲第６項記載の方法。
１０．硫黄含有アミノ酸のレベル上昇から生じる疾病を治療しあるいは予防する一つの方法であって、ニトロソ化合物の治療有効量をそれを必要とする患者に投与することよりなる方法。
１１．前記アミノ酸がホモシステイン，システイン，シスチンおよびメチオニンからなるグループより選択される請求の範囲第９項記載の方法。
１２．前記疾病が血管疾患，細胞毒あるいは結合粗織疾患よりなる請求の範囲第９項記載の方法。