JPH06507901A - ヒト・モノクローナル抗体８１ａｖ７８に認識される抗原ｃｔａａ ８１ａｖ７８ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒト・モノクローナル抗体８１ＡＶ７８に認識される抗原ＣＴＡＡ　８１　＾Ｖ ７８ 発明の背景 大腸ガンは、米国に於て男女ともに２番目に罹患率の高いガンである。最近まで その治療方法としては外科手術が有るのみであったが、全層性の進行及び局所リ ンパ節への転移を有する患者の場合は予後が不良である。最近報告された無作為 フェーズ１１能動性特異的免疫療法実験で劇的な予後改善が示された。

その免疫療法では、Ｔｉｃｓ　ＢＣＧ　（Ｂ＊ｃｉｌｌ■Ｃｓ１ｓｅ目ｅ　Ｇ＊ ｔｒｉ＋＋）（ＩＨ１ｉ…ｃ　Ｉｏ＋　ＴｕｂｅｒｃＩｌｏｓｉｓ　Ｒｅ５ｅａ ｒｃｈ、　ＣｂｉｅＢｏ、ＩＬ）と混合した同系腫瘍細胞で患者を免疫すると、 皮膚の遅延型過敏反応が有意に増大し、また、４年間にわたって再発数及び死亡 数が有意に減ったことが示されている（３）。

大腸ガン関連抗原の同定に関して記載している刊行物は多い（４−９１゜これら 抗原のほとんどは、ある形態の結腸腫瘍（抽出物、分離細胞及び膜調製物など） 又は結腸腫瘍細胞株でマウスを免疫して得たモノクローナル抗体を用いて同定さ れている。

これらマウス・抗体はマウスに抗原性を有する抗原のうちのいずれかを認識する 。これらの研究に加えて、腫瘍性物質と特異的に反応するヒト・モノクローナル 抗体の報告がいくつか有る。

免疫療法計画中に同系腫瘍細胞及びＢＣＧで能動免疫された大腸ガン患者の末梢 血のＢ細胞を利用し、本発明者らは、ヒト・抗−腫瘍モノクローナル抗体の産生 方法を開発するに至った（１１）。ヒト結腸ガンに対して産生されたマウス・モ ノクローナル抗体が健常人にも存在する組織成分、例えばＣＥＡなどを認識する ことが多いのに対して、本発明者らによるヒト・モノクローナル抗体はＣＥＡ　 、血液型決定基又は組織適合性抗原と反応性を示さない。このことによって示さ れるように、これらの抗体は、同系宿主中で免疫原性が有るものとして認識され るエピトープに対する特異性に特徴がある。

本発明者らは、これらのヒト・モノクローナル抗体を腫瘍抗原の同定用プローブ として利用した。本発明者らは、結腸腫瘍、結ｌｌｌ５腫瘍細胞株の抽出物、及 びヌードマウス中で産生されたヒト腫瘍組織異種移植片中の特定の抗原を同定し た。本発明の抗原は、ヒト・モノクローナル抗体（ＩＩＩＣ＾）８１ＡＶ７ｇに より認識されるエピトープを含有することを特徴とする。

発明の要約 ＣＴＡＡ　８１ＡＶ？ｌｌハ同時係属中の出願υＳＳＭ　１１７／７０１，２８ １号（１９９１年５７１１６日出願、ＨＭ■１ら、ｒ腫瘍関連モノクローナル抗 体８１八Ｖ７８Ｊ　ｌ　の特許請求の範囲に紀就のヒト・モノクローナル抗体８ １ＡＶ７ｇによって認識される腫瘍関連抗原である。本明細書中に前記出願明細 書中の開示内容を参照する。このＩｇＭモノクローナル抗体は、様々な腫瘍細胞 株の細胞表面抗原と反応することが確認されている。ＣＴＡＡ８１ＡＶ７ｇは結 腸腫瘍細胞株、原発性結腸腫瘍、及び結腸腫瘍異種移植片組織の脂質抽出物中に 見られる。この抗原は酸性物質であることが判明しており、各種薄層クロマトグ ラフィー及びカラムクロマトグラフィー技術によって精製できる。

本発明はまた、このエピトープを含有する本抗原に対する抗体をガンの診断及び 治療監視のために使用すること、並びにこのエピトープを含有する腫瘍細胞に対 して得られるものに類似する免疫応答を誘起するために本抗原をワクチンの調製 に使用することにも係る。

図面の簡単な説明 第１図　二組の腫瘍−正常組織の二次元ＴＬＣ第２図　ＣＴＡＡｇｌＡＶ７１１ −４＾及び５のＴＬＣによる純度第３　ｆｆｌ　ＣＴＡＡ　ＩＩＩＡＶ７＆−４ １ヒ５　トＭＣＡ　ＨＡＶＨ）免疫反応性第４図　ＣＴＡ八８へＡＶ７Ｎ−４Ａ 及び５はＴＬＣ後ホスフェート基に関して陽性である。

第５．５ｇ及び５ｂ図　ＣＴＡＡ　８１ＡＶ７Ｍ−４Ａ（ＩＩ）ＩＩＭＲスヘク ト／ｌ。

第６．６Ｉ及び６ｂ図　ＣＴＡＡ　Ｈ＾ｖ７ト４＾の高速原子衝撃質量分析スペ クトル 第７　図ＣＴＡＡ　８１ＡＹ７Ｂ−５（７）ＮＭＲスペクトル第８．８Ｉ及び８ ｂ図　ＣＴＡＡ８１ＡＶ７ｇ−５の高速原子衝撃質量分析スペクトル 第９図　ウシ心臓カルジオリシンのロＲスペクトル第１Ｏ図　モノ−オレオイル −ホスファチジン酸のＮＭＩスペクトル 好ましい具体例の説明 本発明者らは、ヒト・ＭＣＡ　Ｈ＾Ｖ７ｇによって認識される抗原を、結腸、乳 房、肺、卵巣及び膵臓の腺ガン中に、腫瘍細胞と結合する細胞表面を通じて、間 接生細胞蛍光法により発見した。抗原の発現と細胞周期の関連性は認められなか った。これらの結果を第４表に示した。

結騙魔瘍細胞株及び原発性結腸腫瘍からの脂質はヒト・モノクローナル抗体８１ ＾ＹＨと反応することが判明した。この脂質をカラムクロマトグラフィー法及び 薄層クロマトグラフィー法によって精製した。精製脂質は酸性リン脂質であり、 グリコシレイトされてないように思われた。種々の薄層クロマトグラフィー法に より展開させることで、本抗原を含有する二つの脂質を同定し、特性を決定した 。二つの脂質のうちの少なくとも一方はＴ細胞の増殖を誘起するので、本抗原は 種々の型のガンに対して細胞性の免疫反応を誘起するワクチンとして有用である と考えられる。

一メタノール（２：　ｌ）で抽出した。この粗製脂質の分画を一次元薄層クロマ トグラフィーにより試験すると、免疫反応性のスポットが存在した。ＤＦ、＾Ｅ セファデックスを用いた總イオン交換クロマトグラフィーにより酸性脂質から中 性物質が分離されたということは、前記免疫反応性脂質がこのカラムに結合する 脂質中に存在することを示している。このように、免疫反応性脂質は抽出及びフ ラクション化後に脂質の酸性プール中にあった。

ヒト・モノクローナル抗体８１ＡＶ７ｇによって認識される免疫反応性脂質ハｃ ＴＡへ８１ＡＶ７ｇ−４Ａ及びＣＴＡＡ　８１ＡＶ７ｇ−５ト命名した。二次元 薄層クロマトグラフィーにより、これらの抗原は共に腫瘍組織抽出物中に存在す るが、正常な結腸の抽出物中には見られないことが分かった。これらは、正常組 織中には存在しないか、又は存在したとしても検出限界ぎりぎりの少量でしか存 在しない。第１図は腫瘍組織及び正常な結腸組織の第−展開媒にクロロホルム− メタノール溶媒を、第二展開線にブタノール−ピリジン溶媒を用いた二次元丁Ｌ Ｃによる二組の抽出及び分析の結果を示す。焼付け（ｃｂ＋＋＋ｉＢ）によって クロマトグラム上の様々なスポットを同定した。

腫瘍細胞株から抽出した後、これら二つの酸性脂質を、陰イオン交換クロマトグ ラフィーおよびそれに続く分取用薄層クロマトグラフィーを用いて見掛は上向質 のものに精製した　（第５表）。精製に用いた溶媒系はブタノール−ピリジン系 である。

脂質は、階層クロマトグラムから切取り、シリカゲルからクロロホルム−メタノ ールを用いて溶出した。第２図より明らかなように、両脂質ともに抽出した後に 再度クロマトグラフィーを行ったとき、単一のスポットが得られた。

精製脂質に再度クロマトグラフィーを行いＭＣＡ　！ＩＩ＾ｖ７８との免疫反応 性を調べた。第３図より明らかなように、免疫反応性のスポットｉｔ　ＣＴＡＡ 　８１ＡＶ７８−４Ａ及びＣＴＡＡ　８１＾Ｙ７Ｂ−５（７）両方で見られた。

二つの脂質抗原の性質をさらに分析するため、両抗原を多溶媒系の薄層クロマト グラフィーで展開した。抗原の分析は、精製物及び酸性粗製物の両方の形態につ いて行った。第１Ａ表はＣＴＡＡ８１ＡＶ７Ｌ４＾の三種の溶媒系によるＲ１値 を示す。第１Ｂ表はＣＴＡ八８へＡＶ７８−５の同じ溶媒系によるＲ９値を示す 。

これらの抗原の性質をさらに分析するために、粗製酸性プール及び精製抗原の両 方について二次元薄層クロマトグラフィーを行った。粗製酸性プールについては 、クロマトグラムの第−展開媒にクロロホルム−メタノール溶媒系を、第二展開 線にブタノール−ピリジン溶媒系を用いた。精製抗原については、第−展開媒に ブタノール−ピリジン溶媒系を、第二展開線にクロロホルム−メタノール溶媒系 を用いた。これらの抗原の二次元電気泳動後のＲｊ値を第２表に示した。

ＭＣ＾８１ＡＶ７ｇに認識される脂質抗原の性質をさらに分析するために、これ ら抗原についてクロロホルム−メタノール溶媒系を用いた薄層クロマトグラフィ ーを行なった後、リン酸化（ホスホリル化）脂質の検出用のＰｈｏｓｐ＋ｉ７を スプレーした。第４図より明らかなように、ＣＴＡＡ８１ＡＶ７ｇ−４＾及びＣ Ｔ＾＾８１＾ｖ７ト５の両方がこのスプレーに陽性反応を呈し、いずれの脂質も リン酸化されていることが分かる。リン脂質と結合している可能性のある炭水化 物残基の存在を同定できる検出システムを用いた類似の実験ではこれらリン脂質 は陰性であったので、いずれの脂質もグリコシレート（糖脂質）ではないと考え られる。

ヒト・モノクローナル抗体に認識される腫瘍関連抗原を得る一つの目的は、ワク チンの産生用に使用し得る抗原の開発にある。コノ目的におけ６　ＣＴＡＡ　８ １ＡＶ７ｇ−４Ａ及びＣＴＡＡ　８１ＡＹ７１Ｓ（７）潜在的な有用性を確認す るために、能動特異的免疫療法を受けている患者の末梢血リンパ球のＴ細胞増殖 性を分析した。第３表より明らかなように、ＣＴＡＡ８１＾Ｖ？＄−４＾は、同 種腫瘍細胞で既に免疫された二名の患者のＰＢＬ中でＴ細胞の増殖反応を誘起し た。

これより本抗原がワクチンの開発に有用となり得ることが示さ腫瘍細胞株ＷｉＤ ＋及びＨＣＴ−８はＡｍｔ＋ｉｃ＊ａ　Ｔｙｐｅ　Ｔｉｚ＋ｗｅ　ＣｓＣ５１ｌ ＊Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　（＾ＴＣＣＩ、　Ｉｌｌｃｋｒｉｌｌｔ、　ＭｓＢｌ ＊ｍｄより入手した。原発性結腸腫瘍は外科摘出したものをＷ■ｂｉＢｌｏａ　 Ｈｏｔｐｉｌ＊Ｉ、　Ｗ■ｈｉＢｌｏｎ、ＤＣより入手した。

階層クロマトグラフィー技術 薄層クロマトグラフィー用プレートは）ＩＰＴＬＣ４１ＥＳＥＬＥＧ　６０（Ｅ Ｍ　５ｃｉｔｏｅｃ＋、　Ｇｉｂｌ＋＋ｔｏｗｎ、Ｎｌ、Ｃｓ１ｔｌｏｌ　Ｎ５ ｓｂｅ＋　５５４７）を使用した。使用した第−展開媒は、クロロホルム−メタ ノール、塩化カルシウム及び水酸化アンモニウムの系であり、体積比はそれぞれ ３Ｇ：２０：３．２（マ／マ／７１である。使用した第二展開媒は、ブタノール 、ピリジン及び３０％水酸化アンモニウム溶液の系であり、体積比は３０・４７ ．　ｓｒｓ、　７５　（マ／マ／マ）である。使用した第三展開媒は、プロパツ ール、ヘキサノール及び水の系であり、体積比は２５：２５＋３（マ／マ／マ） である。一般には、クロマトグラフィー用プレート上に試料をスポットし、クロ マトグラフィー・チャンバー中に移した。溶媒がプレート上を毛細管現象によっ て上方に移動し、存在する脂質が分離された。薄層クロマトグラフ上に１０％硫 酸をスプレーし、ホットプレート上で発色するまで加熱（最大で約１００℃まで ）した。種々の脂質中のホスフェートの検出はＳ＠ｐｐｅｌｃｏ、ｌｅｅ、　よ り入手したＰｈｏｓｐ＋５ｙ（Ｃ暑１＊ｌｏｌ　Ｎｗ■ｂ＠＋　３−３０４７１ をスプレーすることで行った。

カラムクロマトグラフィー技術 ＤＥＡＥセファデックスはＰｈ＊＋ｍ５ｔｉ＊、Ｉｎｃ、、　Ｐｉ＊ｃＩｌ鳳ｖ ｓ７．　Ｎｅｗ　Ｊｅ口Ｃ！より入手した。高速液体クロマトグラフィー用５ｔ −６０シリカ・カラムはＳｍｐｐｅｌｃｏ、１ｆｉｅ、より入手した。ＤＥＡＥ セファデックスカラムの場合は予め１００％メタノールで平衡化したカラムに脂 質抽出物をかけた。カラムに吸着した脂質は０．３Ｍ酢酸アンモニウムを含有す る１００％メタノールで溶出した。シリカ　８１−６０カラムの場合は予めＩｌ ｌのプロパノ−ルーヘキサノールで平衡化したカラムに試料をかけた。次に、カ ラムに４％の水を含有するプロパノ−ルーヘキサノールから９％の水を含有する プロＩくノールまで一次関数的に成分比を変えた溶媒を通し、溶出した。

溶媒バッファーは全て０．００５％の＊＋ｃｅｌｉｃ　ｚｔｉｄを含有させた。

免疫反応其 脂質抗原の免疫反応性はＭＣ八へ１ＡＶ７ｇを用いて評価した。約４０μ冨の精 製脂質又は１００〜２０μ蓼の酸性粗製脂質をクロロホルム−メタノール溶媒系 を用いたＴＬＣプレート上にスポットした。

用いた全ての溶液は３％のポリビニルピロリドン（Ａｍ＋ｅ＋ｃｏ、Ｓｏｌ・ａ 、　Ｏｉｌ、Ｃｔｔｔｌｏｇ　Ｎ＋＋＋ｂｅ＋　ＰＯＯ５Ｇ７２０１　を含有す るものであった。

プレートを乾燥し、ｂｌｏｌｌｏ（Ｓ％Ｗ／マの脱脂粉乳のリン酸］くツファ− ［ＰＢＳｌ　溶液）で　１時間ブロックした。ＰＢＳ中で３回（３ｘ）洗浄した 後、プレートをＰＢＳで１０μｍ／−１に希釈したＭＣ八へ１ＡＶ７ｇと２３℃ で　１時間インキュベートした。ＰＢＳで　３回（３り洗浄した後、ヤギ抗−ヒ トｌ　ｇＭ−ペルオキシダーゼ複合体（ＫＰＬ、　Ｒｏｃｋマ１１１　ｅ、　Ｍ ＤＩをｌ：ｌ０Ｇｏに希釈し、プレートを２３℃で　１時間インキュベートした 。ＰＢＳで　３回（３ｘ）洗浄した後、プレートを０．０６％のジメチルアミノ アゾベンゼン（Ｓｉ（ｓ＋　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、Ｓｔ、Ｌｏｗ口、　Ｍ Ｏ＋及び０００３％の過酸化水素のＰＢＳ溶液により発色させた。

■細胞増殖性分析 Ｔ細胞増殖性分析は、自己の腫瘍細胞で免疫されている患者の抹消血リンパ球（ ＰＢＬ）を用いて行った。ＰＢＬは一７０℃において貯蔵し、解凍後、ｌ　ｗｅ ｌｌ当たりに５Ｘ　１Ｇ’個の細胞密度となるようにマイクロタイタープレート に蒔いた。抗原検体を１！！１１当たりに２０μ！〜２００μｇの濃度となるよ うに添加した。

３０単位／■１のγ−インターフェロンを各々のｗｅｌｌに添加した。

細胞を６日間インキュベートし、さらに（３旧−チミジンを加えて１６時間イン キュベートし、ろ過により収集し、計数した。

励起係数　（Ｓ、　１．　ｌ　は以下のようにして計算した。

Ｓ、！、＝検体抗原のＣＰＭ／コントロール媒体のＣＰＭこれらの実験では、精 製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）をコントロールとして用いた。

実施例２　ＣＴＡＡ　８１ＡＶ７８−４Ａ及びＣＴＡＡ　Ｎ＾Ｖ７８　ノ分析Ｃ Ｔ＾＾８１ＡＶ７１１−４Ａ及び５を薄層り０７トグラフイｆＭｅ＋ｅｋ　ｔｉ ｌｉｅｓ　６０　ｓ溶媒系　クロロホルム：メタノール：水＝６５４５＋４、検 出　Ｕ＋ａｉ　＋ｔＢｔｍｌ）により精製した。これらはＲ１値の高い（溶媒の 展開先端とほぼ同じ）汚染された（コンタミした）分画を含有していることが確 認された。試料　（クロロホルム：メタノール＝９１の溶液）は、いずれも小さ な（０，３ｘ　５ｃａｌシリカカラム　（Ｍ！ｒｅｋ　５ｉｌｉｅｔ　６０．４ ３−６０４１　、クロロホルム：メタノール＝９１で平衡化）でクロマトグラフ ィーを行った。Ｒ１値の高い物質をカラムより９．１溶出液を用いて溶出させＮ ＩＩＲ分析で確認した所、遊離脂肪酸のみが成分であることが分かった。

その後主要な抗原成分をクロロホルム：メタノール：水（Ｈ；３５・４）で溶出 した　（それぞれ５及び４＾の分画）。

精製抗原の分画、５（ＣＴＡＡ　８１＾Ｙ７ト５１及び４＾（ＣＴＡ＾８１ＡＶ ７ト４Ａ）を　’Ｒ−ＮＭＲ、ＦＡＢ−ｉｔｓ及び脂肪酸分析によりさらに分析 した。

４＾の分析 ４＾の　ＩＨ−ロＲスペクトルを第５図に示した。グリセリン骨格のプロトンの 共鳴α、β及びγよりホスファチジン酸コア構造の存在が示唆される。即ち、γ −及びβ−水酸基が共にアシル化ｆＲ’及びＲ２１され、α−水酸基がホスホリ ル化されたものである。

アシル鎖に基づく共鳴より不飽和脂肪酸（５，３〜５．４１１１１１の一重Ｈ＝ ＣＲ＝プロトン、２．０ｐｐ−の−ＣＩＩ＝ＣＨ−Ｃ焦２−プロトン）の存在が 示唆される。

第　６図のＦＡＩ−ＭＳスペクトルより、１３４４．１３７２．１４００及び１ ４１１に分子マスが確認され、脂肪酸１ト０．１６．１．１８．０及び１８：ｌ の存在が確認された。

’Ｉｔ−ＮＭＲ及びＦＡＲ−１１３の結果は、抗原４Ａ中の主要な成分が、分子 中の脂肪酸部分を異とするジホスファチジルグリセロール（カルシオリピン）で あるということで一致した。

第５図との比較参照として、ウシ心臓カルシオリピン（Ｓｉ（＠ｔＣ５６４６） のスペクトルを第９図に示す。

カルシオリピン ５の分析 分画５の　’Ｈ−ＮＭＲスペクトルを第　７図に示した。グリセリン骨格のプロ トンの共鳴σ、β及びγよりリゾホスファチジン酸コア構造の存在が示唆される 。即ち、β−水酸基がアシル化されていないものである。

ＦＡＢ−ＭＳスペクトルは第８図に示す。分子マスは７４４．７４８及び７２０ に確認された　（マスは　−Ｃ１１２−ＣｌＩ２−の　１単位に相当する２８だ け相違している。）。次の脂肪酸、即ち、１４：０、＋６・０．１６１．１８０ 及び１８：ｌ　Ｉ第８１図）が確認された。

ビス　（モノアシルグリセロ）−ホスフェートＩＨ−ロＲ及びＦＡＢ−ＭＳの結 果は、抗原分画５中の主要な成分が、分子中の脂肪酸部分を異とするビス　（モ ノアシルグリセロ）−ホスフェートであるということで一致した。

第７図との比較参照　（α、β及びγ共鳴）として、モノ−オレオイル−リゾホ スファチジン酸のスペクトルを第１０図に示す。

脂肪酸分析 分画４＾及び５の試料をメタノール：　Ｉｔ２ＳＯ４で処理した。得られた脂肪 酸メチルエステルをガスクロマトグラフィー法で分析した。結果を第６表に示す 。数値（２回の測定値）は試料中の脂肪酸の９ｇ数を表す。試料重量が不明であ るため、相対的な量に関する情報のみが得られた。この分析結果は、リン脂質４ ＾及び５中にＣ−１６及びＣ−１８脂肪酸側鎖が存在する点でＦＡＲ−１１３の 結果と一致してしている。

第１Ａ表 Ｃ丁＾へ８１＾Ｖ７Ｂ　（７）−次元薄層りＯ？トゲラフイー　（ＣＴＡＡ　８ １ＡＶ７８−４Ａｌ（１ｉＲｆ値は以下の式に準じて計算した。

抗原の移動距離 ただし数値は３検体の平均値であり、誤差は±ｌＧ％であった。

第１．Ｂ表 ＣＴＡＡ　ａｌＡＶ７８　（７）−次元薄層クロマトグラフィー（つづき）　（ ＣＴＡＡ　８１Ａｖ７ｇ−５１ｆＩＩＲｆ値は以下の式に準じて計算した。

抗原の移動距離 展開媒の先端距離 ただし数値は３検体の平均値であり、誤差は±１０％であった。

第２表 ＣＴＡ八８へＡＶ　７８の二次元薄層クロマトグラフィー弓）　左側が第−展開 媒てあり、抗原を展開する。右側が第二展開媒である。

（２１Ｒｆ値は以下の式に準じて計算した。

抗原の移動距離 ただし数値は±１０％であった。

第４表 ヒト・モノクローナル抗体８１＾Ｖ７ｇの反応性生腫瘍細胞による間接蛍光法” ・６ １８１＾Ｖ７８の濃度はｌ　ＯＲ／　ｍｌである。全ての細胞についｂ　蛍光強 度：　４＋強　３（中程度　２＋やや弱Ｈ弱　−無 Ｃ表示の蛍光強度を示した細胞の百分率である。

残りの細胞は蛍光を発しなかった。

ｄ　アセトン浸透細胞の染色により、細胞骨格にそった糸状の染色パターンが得 られた。全ての細胞株は、アセトン浸透細胞による強い蛍光染色を呈した。

細胞株は＾＊＋＋１ｃ１ｎ　Ｔ７ｐｃ　Ｃｕ１ｔｕ「ｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ 。

Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、１１ｔＢｌａｎｄ　より人手した。

第５表 ０＝無、　１＝低、　２＝中程度、　３＝高細胞株はＡＩＷｅ＋ｉｅｕ　丁７ｐ ｅ　Ｃｏ１１ａｔｅ　Ｃｏ１１ｅｃｌｉｏｎ。

Ｒｏｃｋｙｉｌｌｅ、Ｍａ＋７１ｘｎｄより入手した。

第６表 図ＩＡ　図ＩＢ 図２ 図３ 図４ 特表十６−５０７９０１　（９）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒト・モノクローナル抗体８１ＡＶ７８と免疫反応し得、且つ腫瘍細胞株Ｓ ＫＣＯ−１、ＨＣＴ−８、ＥＰ、ＣＡＬＢ−１、Ｏｖｅａｒ３及びＰａｎｃ−１ に存在する、ホスホリル化されていて、且つグリコシル化されていないヒト・腫 瘍細胞脂質抗原。
2. ２．薄層クロマトグラフィーにおいて第１．Ａ表中に記載の性質を有し、且つ第 ５図で示されるＮＭＲスペクトルを有する、請求の範囲第１項のヒト・腫瘍細胞 抗原。
3. ３．薄層クロマトグラフィーにおいて第１．Ｂ表中に記載の性質を有し、且つ第 ７図で示されるＮＭＲスペクトルを有する、請求の範囲第１項のヒト・腫瘍細胞 抗原。
4. ４．免疫学的に有効な量の、請求の範囲第１項のヒト・腫瘍細胞抗原及び医薬上 許容できる希釈剤からなる、腫瘍抗原に対する細胞の応答を誘起するワクチン。