JPH06506061A - 電極表面のイオンリザーバー - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 電極表面のイオンリザーバー 発明の分野 電極膜複合体の製法と、このような電極膜複合体を組み込んだバイオセンサーの 、被分析物の検出における使い方に関する。また、本発明は電極膜複合体に用い られる新規化合物に関する。

発明の背景 ゲートされた（ｇａｔｅａ）イオンチャンネルを組み込んだ膜を有するバイオセ ンサーは、国際特許出願第ＷＯ３９１０１１５９号や第ＷＯ９０１０８７８３号 に開示されている。これらの出願に開示されているように、適切に修飾されたレ セプター分子は両親媒性分子とともに分散され、表面結合特性が変化した膿を形 成することが可能である。そしてこれは、高結合能力と高結合特異性を持つレセ プター表面を有するバイオセンサーの生産において有効である。また、ポリペプ チドイオノフオアなどのイオンチャンネルは両親媒性分子とともに分散し、それ によって、イオン透過性について改良された特質を持つ膿が形成される。これら の出願には、被分析物の結合によって膿の導電率が変化するといった、これらの イオンチャンネルをゲー）　（ｇａｔｅ）する様々な方法が開示されている。

本発明者らは、固体基質の上に形成された膿の安定性とイオン流束特性は、電極 と膜との間に間隙部が形成されるように、両親媒性化合物の配列が、電極表面に 化学吸着するか、共有的に結合することによって大きく改善できることを決定づ けた。

従来の技術は、そのような概念を、ヒドロゲルまたは多孔質シリコンを、その上 に２層膜が形成できるようなりザーバーとして用いるということで教示した。

このようなプロセスは再現が困難であり、今日までに当技術において、確実に再 現性よ（機能した例は挙げられていない。本発明は、以下の点で従来例と異なつ ている。即ち、本発明は単一の分子からなり、その分子は、膜と共存する疎水性 基と、イオンと共存する親水性基と、電極表面に化学吸着または共有結合で結合 することができる基とを分子内に有しており、その分子は、機能的な両親媒性膜 ／リザーバー／電極の集合体を形成するように連結されている。本発明は、機能 的なイオノフオアやイオンチャンネルを組み込むことができる、非常に制御しゃ すく、再現性に優れ、安定した２層膜または１層膜を形成する製造工程を容易に することができる。

従って、第一の側面において、本発明は、電極と、ち密に充填された両親媒性分 子と複数のイオノフオアの配列からなる膿とから構成される電極膜複合体であっ て、その膿が、膿と電極との間に親水性の間隙部が形成されるように、連結分子 によって電極に連結されてなり、この間隙部が前記イオノフオアを通過するイオ ンの流束に十分なものであり、その連結分子が、同一分子内に、少なくとも膜を 形成する両親媒性分子の部分をなすか、またはその膜に結合されもしくは埋着さ れる疎水性領域と、電極に結合する結合領域と、前記疎水性領域と結合領域との 間に介在して膜と電極との間の前記間隙部を形成する親水性領域とを有すること を特徴とする電極層複合体を提供する。

本発明の好ましい具体例としては１、膜と電極との距離は１０−１０００オング ストロームの範囲であり、さらに好ましくは、１５〜ｌｏｏオングストロームの 範囲である。

さらに、本発明の好ましい具体例では、連結分子の疎水性領域は、少な（とも膜 を構成している両親媒性分子の部分である。

また、本発明では、膜が１層の場合、全ての両親媒性分子が連結分子の疎水性領 域であることが好ましい。そして膜が２層の場合は電極側の膜を構成している全 ての両親媒性分子が連結分子の疎水性領域であることが好ましい。疎水性領域膿 は胴の半分を占めているものであってもよいし、膜の全体を占めているものであ ってもよい。また、膿の半分を占めているものと、膜の全体を占めているものの 混合物が使われても良い。膜が１層の場合は、典型的には疎水性領域は膜の全体 を占めている。

実効的な連結分子は、種々の飽和または不飽和炭炭化水素鎖、典型的には炭素数 がｌＯ〜４０の長さの炭素鎖であるものを含む疎水性領域を用いて達成できるこ れらの疎水性基は、親水性リザーバー基と、単独あるいは二重鎖、三重鎖成分と して、グリセロール、グルタミン酸、トリエタノールアミンのような脂質合成に 通常利用される基によって結合されていてもよい。

さらに具体例として、疎水性領域がジオレイルグルタメートからなることが好ま しい。

さらに具体例として、疎水性領域がジ（Ｘ）グルタメート、ただしＸは炭素数１ ２〜２０の長さのアルキル基、からなることが好ましい。

さらに具体例として、疎水性領域がグリセａ−ルジテトラデヵノエート、グリセ ロールジドデカノエート、グリセロールジヘキサデカノエート、グリセロールジ オクタデカノエート、グリセロールジオレエートからなることが好ましい。

また、具体例として、疎水性領域は古細−脂質、あるいは古細菌脂質の類似物を 掛は渡している合成膜からなることが好ましい。

さらに具体例として、疎水性領域は、スチレン、あるいはアセチレン性基または その他の重合可能な基を含むことが好ましい。

さらに具体例として、疎水性領域はグラミシジンあるいはその誘導体の一種のよ うなイオンチャンネルと共存する膜であることが好ましい。

膜に埋着されたそのような連結分子を使用することにより、農の安定性が増大さ することが示された。

本発明の好ましい例として連結分子の結合領域は化学吸着によって電極表面に結 合している。電極が金、白金、パラジウム、銀などの遷移元素から形成されてい る場合は、結合領域がチオール、ジスルフィド、スルフィド、チオン、キサンテ ート、７オスフイン、またはインニトリル基などを含んでいるのが好ましい。

さらに好ましい具体例では、電極が金、銀、白金、パラジウムからなり、結合領 域がチオール、ジスルフィド基のいずれかを含んでおり、連結分子は化学吸着に よって電極表面に結合している。

変形例として、電極に水酸基化された表面が形成された場合、結合領域はシリル ーアルフキシ、シリルクロライド基のようなシリル基を含んでいることが好まし い。水酸基化した電極表面は、当業者に周知の様々の方法を用いて形成してもよ （、それは、シリコン酸化物やスズ、白金、イリジウムのような金属の酸化物か らなるものであってもよい　さらに、好ましい異体例では、電極がシリコン、ス ズ、白金またはイリジウムの酸化物からなり、結合領域がシリル基を含んでおり 、連結分子は電極に共有結合によって結合している。

連結分子の親水性領域は長鎖の親水性化合物であることが好ましい。連結分子の 親水性領域はオリゴ／ポリエーテル、オリゴ／ポリペプチド、オリゴ／ポリアミ ド、オリゴ／ポリアミン、オリゴ／ポリエステル、オリゴ／ポリサブカライド、 ポリオール、多電何基（正及び／又は負）、電極活性種あるいはそれらの組み合 わせからなるのもであってよい。連結分子の親水性領域の主要な要件は、膜中で 、イオノフオアを通るイオンの拡散を起こさせることである。これは、リザーバ ー領域を構成している長鎖に沿った、あるいは含まれた、適切なイオン及び／又 は水の結合部位の配置によって成し遂げられる。

本発明の好ましい例として、親水性領域はオリゴエチレンオキサイド基からなる 。このオリゴエチレンオキサイド基は４〜２０のエチレンオイサイド単位からな る。

さらに具体的な例では、親水性領域は、コハク酸に結合したテトラエチレングリ コールの副単位（寥ｕｂｕｎ口）からなることが好ましい。このテトラエチレン グリコール／コハク酸の副単位は１〜４回繰り返されていてもよい。

さらに具体的な例では、親水性領域は、適切な単量体の、原子団転移性あるいは アニオン性重合によつて生成されるのが好ましい。

さらに好ましい例として、親水性領域はメルカプトエタノール、コハク酸、１． ４−ジエステル化１．２．３．４−ブタンテトラオール及びコハク酸副単位から なる。コハク酸／１，４−ジエステル化１，２．３．４−ブタンテトラオールは １〜４回繰り返されていてもよい。

本発明のもう一つの異体例として、イオノフオアは被分析物が存在するとき、膜 の導電率が変化するようにゲートされている。

本発明の好ましい形態として、イオノフオアは、グラミシジン、パリノマイシン 、クラウンエーテル同族体からなる群から選択される。

後の例から明らかなように、イオノフオアがパリノマイシン、クラウンエーテル 同族体、イオン選択性イオンチャンネルの場合は、本発明の電極層複合体はイオ ン選択性電極として機能する。

したがって、第二の側面において、本発明は、電極と、ち密に充填された、両親 媒性分子、及びパリノマイシン、クラウンエーテル同族体、クラウンエーテル同 族体、イオン選択性イオンチャンネルの群から選ばれた複数のイオノフオアの配 列からなる膜とから構成されるイオン選択電極であつて、その膜が、膿と電極と の間に親水性の間隙部が形成されるように、連結分子によって電極に連結されて なり、この間隙部が前記イオノフオアを通過するイオンの流束に十分なものであ り、その連結分子が、同一分子内に、少なくとも膜を形成する両親媒性分子の部 分をなすか、またはその膜に結合されもしくは埋着される疎水性領域と、電極に 結合する結合領域と、前記疎水性領域と結合領域との間に介在して膿と電極との 間の前記間隙部を形成する親水性領域とを有することを特徴とするイオン選択性 電極を提供する。

さらに、イオノフオアがグラミシジンの場合、電極膜複合体はエタノールのよう な小さい中性有機分子の存在を検出することができる。これは、小さい中性有機 分子が、膜を膨潤させるか、あるいは膜の表面張力を変化させることによって、 膜の構造や物理的特性を変化させ、このことがイオンチャンネルの電導性に影響 を与えることによる。したがって、本発明の電極１１ｍ合体は化学感応膜として 用いることもできる。

上述したように、イオノフオアをゲートさせる種々の方法は、国際特許出願第Ｗ Ｏ３９１０１１５９号と第Ｗ０９０１０８７８３号に開示されている。これらで 用いられているように、「ゲートされたイオノフオア」という用語は、被分析物 の有無に依存して、そのイオノフオアを通過するイオンの容量が変化するイオノ フオアをコンペイ（ｃｏｎｖｅｙ）することを意味する。

本発明は、第三の側面において、イオノフオアがゲートされた本発明の第一の側 面の電極膜複合体を試料と接触させ、この膜の導電率を測定し、その導電率の変 化が試料中の被分析物の存在を示すことからなる、試料中の測定物質の存在を分 析する方法を提供する。

本発明は、第四の側面において、 （１）結合領域、親水性領域、及び複数のイオノフオアを含む一層膜を自己形成 するかまたは自己形成した両親媒性分子と複数のイオノフオアとからなる一層膿 に結合もしくは埋着される疎水性領域からなる連結分子を含む溶液を調製し、（ ２）電極と上記結合領域の成分が、結合領域が電極に化学吸着するように選択さ れた電極をこの溶液と接触させ、 （３）この被覆された電極をすすぐ ことことからなる電極膜複合体の製法をなす。

本発明のこの側面の具体例において、上記の被覆された電極は、トリフルオロエ タノールまたは類似の溶液に約１４間浸漬するか、またはトリフルオロエタノー ルまたは類似の溶液中、６０℃で１′時間の処理を施すことが好ましい。

本発明のさらに好ましい具体例においては、この被覆電極を、アルカン／脂質を 分離でき、かつ水溶性である担持溶媒中の鎖長ｃ８〜Ｃ１６のアルカンまたはス クアレンを含む脂質溶液と接触させることによって、第二の膿を上記の被覆電極 の上に形成する。

本発明のこの側面のさらに好ましい具体例においては、上記アルカンは、Ｎ−デ カン、へ牛すデカンおよびスクアレンの群から選ばれたものである。

このアルカンは、膜中のイオン漏洩路を封するために用いられるものであり、一 方担持溶媒は、電極を被覆した一層上に残留脂質単層を残して水溶液中に分散す ることによって二層膜が形成される。担持溶媒は、膜がこの沈積の間に乾燥しな いよう十分に非揮発性であって、かつ水溶液に浸漬および／またはすすぐことに よって膜から除去できるように水溶性であることが好ましい。典型的な溶液は、 ジオキサン中５０ｍｇ／ｍｌのグリセロールモノオレエートを含み、これに２％ のヘキサデカンを加えたものであって、この例では、ジオキサンが担持溶媒とさ れている。この膿は、エタノールまたはＮ−デカンなどの溶媒から新規に沈着さ れた連結分子によって電極から隔てられた一層被覆を有する直径１ｍｍの金電極 に、１マイクロリブトルの１記溶液を施して形成することができる。第二層を施 した後、電極集合体を水または塩水に浸漬する。必要なら、微量の担持溶媒を除 去するために、水または溶媒は、膜が空気／水界面を通過しない限り膜を破損す ることなく交換することができる。

本発明の第五の側面において、膜を電極に結合し、かつ膜と電極との間に間隙部 を与えるために用いられる連結分子は、同一分子内において、（１）ジオレイル グルタメート、ジ（Ｘ）グルタメート（ここでＸは、炭素数１２〜２０のアルキ ル鎖である）、グリセロールモノオレエート、グリセロールジテトラデカノエー ト、グリセロールジヘ手すデカノエート、グリセロールジオクタデカンエート、 グリセロールジオレエート、古細ｌ詣質、古細蒙脂質の類似物を掛は渡している 合成膜、および膜と共存するイオンチャネルの群から選ばれた疎水性領域、 （２）オリゴ／ポリエーテル、オリゴ／ポリペプチド、オリゴ／ポリアミド、オ リゴ／ポリアミン、オリゴ／ポリエステル、オリゴ／ポリサッカライド、ポリオ ール、多電何基、電極活性種、およびこれらの混合物の群から選ばれた親水性領 域、および （３）チオール、ジサルファイド、サルファイド、チオン、キサンテート、ホス フィン、インニトリルおよびシリル基の群から選ばれた結合領域を有する連結分 子である。

本発明のこの側面の好ましい具体例において、疎水性領域はグラミシジンである 。

本発明のさらに好ましい具体例において、連結分子の親水性領域は、好ましくは ４〜２０のエチレンオキサイド単位からなるオリゴエチレンオキサイド基からな る。

本発明のいっそう好ましい具体例において、連結分子の親水性領域は、コハク酸 に結合したテトラエチレングリコールの１〜４副単位からなるものである。

本発明のいっそう好ましい具体例において、連結分子の親水性領域は、メルカプ トエタノール、および１〜４コハク酸／ｌ、４ジエステル化１，２，３．４−ブ タンテトラオール副単位からなるものである。

本発明の特性をさらに明確に理解するために、その好ましい聾様を、以下の実施 例と図面を参照して説明する。

図１は、ベンジルジサルファイド結合領域、テトラエチレングリコール、コハク 酸、テトラエチレングリコールおよびコハク酸サブグループ（ｓｕｂｇｒｏｕｐ ）の連続で構成された親水性領域、およびジオレイルグルタメートの疎水性領域 からなる連結分子ｌを示す。

図２は、対称性ジサルファイド結合領域、テトラエチレングリフール、コハク酸 、テトラエチレングリコールおよびコハク酸サブグループの連続で構成された親 水性領域、およびコレステロールの疎水性領域からなる連結分子２を示す。

図３は、対称性ジサルファイド結合領域、テトラエチレングリコールおよびコハ ク酸サブグループの連続で構成された親水性領域、および１．２−グリセシール ジテトラデカノエートの疎水性領域からなる連結分子３を示す。

図４は、対称性ジサルファイド結合領域、テトラエチレングリコールおよびコハ ク酸サブグループの連続で構成された親水性領域、およびジオレイルグルタメー トの疎水性領域からなる連結分子４を示す。

図６は、チオールまたはジサルファイド結合領域、メルカプトエタノール、コハ ク酸、１．４−ジエステル化１，２，３．４−ブタンテトラオールおよびコハク 酸副単位の連続で構成された親水性領域、および１．２−グリセロールジテトラ デカノエートの疎水性領域からなる連結分子５を示す。

図６は、ベンジルジサルファイド結合領域、テトラエチレングリコール、コハク 酸、テトラエチレングリコール、コハク酸の連続で構成された親水性領域、およ び１．１’　ドトリアコンタメチレンビス（２−ヘキサデシル−５ｎ−グリセロ ール）　（ｄｏｔｒｌｉｃｏｎｔａｓｅｔｈｙｌｅｎｅｂｌｇ（２−ｈｓｘａｄ ｅｃｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏｌ））およびグリシン、１．６−アミノカプロ ン酸、１．６−アミノカプロン酸およびビオチンで構成された疎水性領域からな る連結分子６を示す。

図７は、ベンジルジサルファイド結合領域、テトラエチレングリコール、コハク 酸、テトラエチレングリコール、コハク酸、テトラエチレングリコール、コハク 酸の連続で構成された親水性領域、およびグラミシジンの疎水性領域からなる連 結分子７を示す。

図８は、センサ膜の形成手順を示す。

図９は、周波数に対するスｌｏｇ（こで、繍Ｏ）は、デカン中の連結化合物１と グリセａ−ルモノオレエート混合物とから形成された二層膜について得られたイ ンピーダンスグラフであり、線（ＩＩ）は、同じ電極にビオチニル化グラミシジ ン誘導体を付加したもののインピーダンスグラフであり、また線（ＩＩＩ）は、 同じ電極にストレブトラピジンを付加したもののインピーダンスグラフである。

そして、 図１０は、０．１ＭのＫＣＩ　（線（Ｉ））および０．１ＭのＮａＣ１（線（Ｉ Ｉ））存在下におけるパリノマイシンを組み込んだ二層膜のインピーダンスグラ フである。

実施例１ 連結剤化学合成の詳細 実験： 連結分子！の合成 ｌ）化合物８ １０−（４−メチルフェニルスルホニル）−３，６，８，１２−テトラオ牛すデ カノール ０−トルエンスルホニルクロライド（ｔ２．５ｇ）を、０−５℃で、テトラエチ レングリコール（２７ｇ）の溶液に徐々に加えた。この混合物を０〜６℃に２４ 時間保った。次いでこの混合物を塩酸（２Ｍ、２５０ｍ１）上に注ぎ、次いでジ クロロメタンで抽出した。このジクロロメタンを新たな塩酸て洗い、乾燥し、蒸 発乾固した。残渣をクロマトグラフィー（シリカ、酢酸エチル溶離液使用）で精 製し化合物８　（１３，６ｇ）を得た。

２）化合物９ １Ｏ−メルカプト−３，６，９−１９オ牛サデ力ノール化合物８　（１３，６ｇ ）とチオ尿素（３，１ｇ）とを混合し、エタノール（１００ｍｌ）中で２４時間 還流した。この溶液に水（５ｍｌ）中、水酸化ナトリウム（４，１ｇ）とエタノ ール（５０ｍｌ）とを加え、この混合物を窒素下に２゜５時間還流した。この溶 液を塩酸でｐＨ２に酸性化し、蒸発乾固した。残渣は、シリカを通して濾過しく １０％エタノール／酢酸エチル溶離液使用）、化合物９（６，５ｇ）を得た。

３）化合物１Ｇ １４−フェニル−１２，１３−ジチア−３，６，９−）リオ牛すテトラデカノ乾 燥トルエン（２５ｍｌ）中、Ｎ−クロロスクシンイミド（２，１６ｇ）の混合物 に、２分間かけてベンジルチオール゛（２，０ｇ）を加えた。この混合物をさら に１０分間攪拌し、次いで乾燥ジクロロメタン（３０醜ｌ）中、化合物９（３， ４ｇ）の溶液に加えた。さらに１０分間攪拌した後、この混合物を水（１００ｍ ｌ）とジクロロメタン（Ｓｏｍ＋）との間で分配した。このジクロロメタン抽出 針を分液し、乾燥し、蒸発乾固して残渣をクロマトグラフィー（シリカ、３％エ タノール／ジクロロメタン）で精製し化合物１０　（２，９ｇ）’４：ｔ８ｔ＝ 。

４）化合物１１ ４−オキソ−１９−フェニル−１７，１８−ジチア−５，８，１１，１４−テト ラオキサノナデカン酸 ピリジン（２０醜ｌ）中、化合物１０　（３，１ｇ）と無水コハク酸（１，５ｇ ）との混合溶液を室温で１８時間攪拌した。この混合物を塩酸（ＩＭ、３００ｍ １．０℃）上に注ぎ、ジクロロメタン（３ｘ４０ｍｌ）で抽出した。ジクロロメ タン抽出物を水（２ｘ２００ｍｌ）で洗い、乾燥し蒸発乾固して化合物１１（３ ，８ｇ）を得た。

５）化合物１２ １３．１６−ジｔ＊Ｖ−３１−７ｇ二１ｋ−２９，３０−ジチア−３，６，９゜ １２．１７，２０，２３．２６−オクタオキサウントリコンタノールジクロロメ タン（１０醜ｌ）中、化合物１１　（０，８ｇ）　、乾燥テトラエチレングリコ ール（２，０ｇ）、ジメチルアミノピリジン（０，０５ｇ）およびジシクロへキ シルジイミド（０，４５ｇ）を混合し、室温で１２時間攪拌した。この混合物を 濾過し、ジクロロメタン（３０醜ｌ）と水（７０醜ｌ）との間で分配し、分液し てジクロロメタン抽出液を乾燥し蒸発乾固した。残渣をクロマトグラフ（シリカ 、酢酸エチル溶出液）で精製し化合物１２　（０，３７３ｇ）を得た。

６）化合物１３ ４、１８．２１−　トリオキソ−３６−フェニル−３４，３５−ジチア−５，８ ，１１，１４，１？、　２２．２５．２８．３１−ノナオ牛すヘキサトリコンタ ン酸 化合物１２（０，３１４ｇ）、ジメチルアミノピリジ７（０，０５ｇ）および無 水コハク酸をジクロロメタン（１０醜ｌ）に溶解し、４８時間還流した。余剰の ジクロロメタンを蒸発させ、残留物をクロマトグラフィー（シリカ、酢酸エチル 溶離液）で分離して化合物１３　（０，３３６ｇ＞を得た。

７）化合物１４ ２１−（Ｎ−４’、４°−ジメチル−２°−オキソ−３°−オキサブチルアミン ）−２０，２４ジオキソ−１９，２トジオ牛ントリコンタ−（Ｚ、　Ｚ）−９， ３４−ジエンＮ−Ｂｏｃグルタミン酸（２，５ｇ）、オレイルアルコール（６， ８ｇ）、ジメチルアミノピリジン（０，１ｇ）の乾燥ジクロロメタン（７６■ｌ ）溶液にジシクロへ亭シルジイミド（５，２ｇ）を加えた。この混合物を４８時 間攪拌し、ろ過し、ろ液を蒸発させた。この粗生成物をクロマトグラフィー（シ リカ、ヘキサン／酢酸エチル溶離液、９：１）で分離して化合物１４　（０，５ ｇ）を得た。

８）化合物１５ ２１−７　！　／　−２０，２４−ジオキ７−１９．２５−ジオキサトリテトラ コンタ−（Ｚ、　Ｚ）−９，Ｈ−ジ化合物１４　（Ｌ　３ｇｇ＞を乾燥ジクロロ メタン（１００ｍｌ）に溶解した。乾燥塩酸ガスの気泡をこの溶液中に２６分間 通し、ついで窒素ガスを５０分間通した。このジクロロメタン溶液を炭酸カリウ ム溶液（６％、２００ｍ１）で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。残留物をクロマト グラフィー（シリカ、酢酸エチル溶離液）で分離して化合物１５　（１，１ｇ） を得た。

９）化合物１ ２３−（２０’−１４−７−１９’−第４４）！イコ＋−（Ｚ）−９°−ｘ　ｙ 　）−７０−７エニに−２０，２５，２１１，４２，４トベンタオキソ−２４− アザ−１９，２１，３２，３５，３ｇ、　４１．４Ｌ　４７．５２．５３−デカ オキサ−ｓｓ、　ｓトリチアへ手すコンタ−（Ｚ）−９−エン化合物１５　（０ ，２７５ｇ）、化合物１３　（０，２７７ｇ）、ジメチルアミノピリジン（０， ０２ｇ）およびシンクロヘキシルジイミド（０，１１４ｇ）を乾燥ジクロロメタ ン（２０醜ｌ）に溶解し、４８時間攪拌した。この混合物を炭酸カリウム溶液（ ５％、２０ｍ１）で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー （シリカ、酢酸エチル／ヘキサン溶離液、７０：３０）で分離して化合物１　（ ０，２６６ｇ）を得た。

連結分子４の調製 １０）化合物１６ ！！−（２０’−＋＋７−１１３’−ｔ＋ｆｚイ＝＋＋−（Ｚ）−９’−ｃン） −４３−フｘニルー２０．２５．２１１−トリオキソ−２４−アザ−１９，２９ ，３２，３５，３８−ペンタオキサ−４１，４２−ジチアトリテトラコンタ−（ Ｚ）−９−エン 化合物１５　（０，５ｇ）　、化合物１１　（０，３３２ｇ）　、ジメチルアミ ノピリジン（０，０２ｇ）およびジクロヘキシルカルボジイミド（ｄｌｃｌｏｈ ｅｘｃｙｌｃａｒｂｏｄｌｌｍｌｄｅｌ　（０，１６ｇ）をジクロロメタン（ｆ ｏｗｌ）中に混合し、１８時間攪拌した。この混合物をろ過し、蒸発させた。残 留物をクロマトグラフィー（シリカ、酢酸エチル／ヘキサン、３０ニア０）で分 離して化合物１６　（０，５３ｇ）を得た。

１１）化合物１７ ２３−（２０°−オキＶ−１９゛−ｔキサエイ”ｆ−（Ｚ）−９°−Ｘ　ン）− ２０，２５，２８−）　ＩＪ　オキ７−２４−アザ−１９，２９，３２，３５， ３８−ヘｙタオキサー４１−＋　７　ウ７　ｆト５　）　７９−（Ｚ）−９−ｚ 　ンエタノール／水（９，１）中の化合物１６　（０，５３ｇ）をトリブチルホ スフィン（ｌ■１）で処理し、３０分間攪拌した。この反応混合物をジクロロメ タン（１００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）の間で分配し、分離し、このジクロロメ タン抽出物を乾燥し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカ、酢酸 エチル／ヘキサン溶離液、１：１）で分離して化合物＋７　（０，３８８ｇ）を 得た。

１２）化合物４ ２３、６０−ビニＸ　（２０’−オキソ−！９°−オ牛すｚイコサー（Ｚ）−９ ’−Ｌ　ン）−２０，２５，５５，５Ｌ　Ｈ−ヘン４ｔ＋ソー２４．５９−シフ ｆ’−１９，２９，＄２．３５゜３ｇ、４Ｓ、４８．５１．５４．６４−デカを 牛？−４１，４２−ジチアトリオクタフンター（Ｚ、　Ｚ）−９，７３−ジエン 化合物１７　（０，２５ｇ）とトリエチルアミン（０、２＋＋１）のジクロロメ タン（１０醜ｌ）ｍ液に１当量のヨウ素を加えた。ついでこの混合物を水（３０ 醜ｌ）で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。残留物をクロマトグラフィー（シリカ、 酢酸エチル／ヘキサン溶離液、６５：４５）で分離して、化合物４　（０，１６ ４ｇ）を得た。

ｉａ）化合物１８ ３Ｂ−７３二に−Ｌｌ−＜２’　オキ７−１’−オキサテトラデカン　）−１４ ，２０，２３−）　ＩＪ　オキソ　−ｉｓ、　ｉｌｌ、　２４．２フ、　＄０． ３３−ヘキサオクタ−１６，３７−ジチアオクタトリコンクン１．２−ジテトラ デカン酸グＩＪ４！ｌｆｆ−＃　（０，５９ｇ＞　、化合物１１　（０，５ｇ） 、ジメチルアミノピリジン（０，０５ｇ）およびジシロへ牛ジルカルボジイミド （０，２６３ｇ）を混合し、ジクロロメタン（２０醜ｌ）中で１８時間攪拌した 。

この混合物をろ過し、ろ液を蒸発させ、ついで残留物をクロマトグラフィー（シ リカ、酢酸エチル／ジクロロメタン溶離液、１：９）で分離して化合物１８（０ ，８４５ｇ）を得た。

１４）化合物１９ １７−（２°−オキソ−１−オキサテトラデカン）−１４，２０，２３−トリオ キソ−３６−チア−１５，＋１゜２４、２７．３０．　＄３−へ牛サオキサヘキ サトリコンクン化合物１Ｂ　（０，８４５ｇ）を化合物１６と同様の方法でトリ ブチルホスフィン（ｌ■１）を用いて処理して化合物１９　（０，４１ｇ）を得 た。

１５）化合物３ ＩＴ、　５６−ビＸ　（２’　を牛ソー１゛−オ牛サテトラデカン）−１４，２ ０，２！、　Ｓｏ、　５３．５９−ヘキサオキソ−Ｉｓ、　＋１．２４．２７． ３０．３３．４０．４３．４８．４９．５４．５８−デデシルオキサ（ｄｅｄｅ ｅｙｌｏｘａ）−３６，R ７−シチアドへブタトリコンタン 化合物１９　（０，２ｇ）を化合物１７と同様の方法でトリエチルアミン（０゜ ２−１）とヨウ素を用いて処理して化合物３　（０，１８ｇ）を得た。

連結分子６の調製 １６）化合物２０ １８、５５−ビス（ヒドロキシメチル）−１７，２０，５３，５８−テトラオキ サードへブタトリコンタン このジオール（２０）をヤマウチ等（Ｙｍｍａｕｃｈｌ　ａｔ　ａｌ、Ｂｌｏｃ ｈｌｍｌｃｍ　ａｎｄ　ＢｌｏｐｂＩｓｌｃａ　ＡＣＴＡ％ｔｏｏ！、１５１− 五６（１（１９８９））の方法にしたがって調製した。

１７）化合物２１ １ｇ−（８°、８−　ツメチル−３°、６−ジオキソ−５°アザ−２°、７°− ジオキサノナン）−５トヒドロキシメチル−１７，２０，５３，５６−チトラオ キサドへブタコンタン化合物２０を乾燥ジクロロメタン（ｃ、’１０５ｇ／■ｌ ）中で攪拌した溶液を１当量のジシクロへキシルカルボジイミド、触媒量のジメ チルアミノピリジン、および１当量の１ｌ−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）− グリシンで処理した。この反応混合物を窒素雰囲気で０．５時間還流し、ついで 室温で一晩攪拌した。この粗反応混合物をクロマトグラフィー（シリカ、酢酸エ チル／ヘキサン溶離液、２１　ニア５）で分離して化合物２１を４８％の収率で 得た。

１８）化合物２２ １ｇ−（１−オキソ−５°−アザ−２°−オキサペンクン）−５５−ヒドロキシ メチル−１７，２０，５３゜５トテトラオ亭サドへブタコンタン 化合物２１を蒸留直後のトリフルオロ酢酸を用いて１０分間処理した。過剰のト リフルオロ酢酸は、真空状態で除去し、残留物をトルエンを用いた共沸蒸留を繰 り返すことによって乾燥した。ついでこの残留物をさらに真空状態で１時間乾燥 し、本質的に定量的な収率で化合物２２を得た。

１９）化合物２３ １８−　（１９°−トビオチンー３°、Ｓ’、１３°−トリオキソ−５°、１２ ’、１９−トリアザ−２°−オキサノナデカン）−５トヒドロキシメチルーｌフ 、２０．５１．５６−チトラオキサドへブタコンタン　化合物ｚｚをジクロロメ タン（ｃ、２０ｍｇ／嘗ｌ）に溶解し、１当量のトリエチルアミンを加えた。次 にメタノール（ｃ、５０ｍｇ／■ｌ）を加え、ついでビオチン−ＸＸ−Ｎ−ヒド ロキシスクシンイミド（カルビオケム（Ｃａｌｂｌｏｅｈｅｓ）、１．５当量） を加え、この混合物を室温で３６時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をクロ マトグラフィー（シリカ、２０−５０％酢酸エチル／ヘキサン傾斜溶離法）で分 離して化合物２３を３０％の収率で得た。

２０）化合物２４ ５トドビオチン−２２，３９−ビス（１−オキサヘプタデカン）−１−フェニル −１ｊ　１９．４２．４５、５２−ヘンタオ牛７−４５．５１．５８−トリアザ −６，９，１２，１５，２０，２４，３７，４１−オクタオキサ−２゜３−ジチ アオクタペンタコンタン 化合物２３をジクロロメタン（Ｃ０３璽ｇ／園１）に溶解し、ジシクロへキシル カルボジイミド（５当量）、触媒量のジメチルアミノピリジン、および化合物１ １で処理し、クロマトグラフィー（／リカ、１０％メタノール／ジクロロメタン ）で分離した後、化合物２４を得た。

２１）化合物６ ９４−トビオチン−３９，７５−ビス（１’−オキサヘプタデカン）−１−フェ ニル−１Ｇ、　＋９．３３．３＠、７８．８１．８８−ヘプタオキソ−８０，Ｓ ＩＴ、　９４−トリアザ−６、Ｌ１２．　Ｉ　Ｓ、　２０．２３．２Ｇ、　２９ ．３２．３？A　４１゜ ７３．７フートリデカオキサー２．３−ジチアテトラノナコンクン化合物２４と 同様の方法で、ジクロロメタンに入れたジメチルアミノピリジン、ジシクロへキ シルカルボジイミドおよび化合物１３を用いて化合物２３を処理し、クロマトグ ラフィーを用いて分離して化合物６を得た。

連結分子７の調製 ２２）化合物２５ 国際特許出願第９Ｑ／Ｑ８７８３号に記載されている方法にしたがって２１−〇 −グラミシジンー４．１８．２１−）ジオキソ−５，８，１１，１４，１７−ベ ンタオキサウンエイフサン酸を調製した。

２３）化合物７ ０−グラミシジン ５３−フェニル−４，１８，２１，３Ｓｊ８−ペンタノール−５４，１１，１４ ，１７，２２，２５，２Ｍ、　Ｈ，３４，３９゜４２、４５．４８−テトラデカ オキサ−５ｔ、５２−ジチアトリペンタコンタン酸（ｄｌｔｈｌａｔｒｌｐｅｎ ｔａｃｏｎｔａｎｏａｔｅ＋ 化合物２５　（０，０２５ｇ）　、化合物１２（０，０２４ｇ）、ジシクロへキ シルカルボジイミド（０，０８ｇ）およびジメチルアミノピリジン（０，０１ｇ ）を乾燥ジクロロメタン（３■ｌ）中に混合し、２４時間攪拌した。過剰の溶媒 を蒸発させ、残留物をクロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン／メタノー ル／水／トリメチルアミン溶離液、４００：４４：４：ｌ）で分離して化合物７ （０，００８２ｇ）を得た。

２４）化合物２６ ４、１８．２１−　トリオキソ−３６−フェニル−３４，３５−ジチア−５，８ ，１１，１４，ｌフ、　２２．２５．２８．３１−ノナオキサヘキサトリコンタ ン酸０−グラミシジングラミシジンＡをジクロロメタンに入れたジメチルアミ／ ピリジン、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび化合物１３を用いて処理し、 クロマトグラフィーを用いて分離した後、化合物２６を得た。

フ、８．２９１０−テトラヒドロ亭シー４．１１．１４．２１２８．３３−ヘキ サオキソ−５，１０，１５，２２，２７，３３−ヘキサオキサ−１１１９−ジチ アヘキサトリコンタンニ酸、ジ（２，３−ジテトラデカノイルオキシ）プロパニ ルエステルおよび７．トジヒドロキシーｌフーメルカブト−４，１１，１４−ト リオキソ−６、１０，１５−トリオキサヘプタデカン酸２．３−ジテトラデカノ イルオキシプロパニルの合成 ２５）化合物２７ ２−エチル−４，５−ジ（ヒドロキシメチル）−２−メチル−１，３−ジオキソ ラン４．５−ジェトキシカルボニル−２−エチル−２−メチル−１，３−ジオキ シラン（１３，６８ｇ、５２．６−ｍｏｌ）の乾燥エーテル（８０ｍｌ）溶液を 、乾燥エーテルに水素化アルミニウムリチウム（２，４ｇ、６３．２■■ｏｌ） を入れた懸濁液に滴下して加え、この混合物を窒素雰囲気下で２時間還流し、次 に一晩室温で攪拌し、ついでさらに２時間還流した。冷却後すぐに水（２，５■ Ｉ）、水酸化ナトリウム（４Ｎ、２．　５ｍ１）および水（２５ｍｌ）を順次コ ンデンサ下に注意深く加えた。上澄み液をデカントして取り除き、残留物をエー テル（２ｘ１００ｍｌ）を用いて粉末にした。この混合エーテル層を硫酸ナトリ ウムで乾燥し、ろ過し、乾燥するまで蒸発させた。この残留物を高真空（約２− 一、１６０度）で蒸留し、標記の化合物を透明な油性物（５，４１ｇ、５８％） として得た。

２６）化合物２８ ２−エチル−４−ヒドロキシメチル−２−メチル−５−（３，６−シオキソー９ ．ｌＯ−ジテトラデカノイルオキシー２，７−ジオ牟サデシル）−１，３−ジオ キソラン１．２−ジテトラデカノイルー３−スクシノイルグリセロール（５，２ ９ｇ、８．６■ｍｏｌ）　、！−エチル−４，５−ジ（ヒドロキシメチル）−２ −メチル−１，３−ジオキソラン（４゜４７８ｇ、２５．４■−０υおよびトリ メチルアミノピリジン（触媒量）のジクロロメタン（乾燥、５０ｍ１）　Ｗｉ液 にジシクロへ亭ジルカルボジイミド（１，８ｇ。

８．７■■０１）を加え、この混合物を一晩攪拌した。次にこの混合物をろ過し 、乾燥するまで蒸発させた。残留物をジクロロメタンおよび酢酸エチル／ジクロ ロメタン（１：９）で溶離したシリカゲルのりａマドグラフィーで精製し、はと んど標記の化合物からなるもの（４，７７８ｇ、７２％）を得た。

２７）　化合物２９ ５−フェニル−３，４−ジチアペンタノールベンジルチオール（１，１７ｍ１） の乾燥トルエン（２ｍｌ）溶液は、Ｎ−クロロスクシンイミド（１，３４ｇ）の トルエン（５ｍ　ｌ　）懸濁物に５分間以上の滴下方式で添加した。メルカプト エタノール（７００μｍ）とトリエチルアミン（１，３４ｍ１）とのトルエン（ ３ｍｌ）中の混合物を６分間攪拌した混合物を５分間以上の滴下方式で添加した 。その混合物はさらに１０分間攪拌し３０ｍ１のジクロロメタンで希釈し、水で 洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過しそして乾物まで濃縮した。その生成物 はシリカゲルのカラムクロマトグラフィーによりジクロロメタンで溶離して精製 して、表題の化合物が得られる（５２２ｍｇ、２５％）。

２８）　化合物　３０ ４−オキソ−１Ｏ−フェニル−５−オキサ−８，９−ジチアデカン酸Ｓ−フェニ ル−３，４−ジチアペンタノール（８３２ｍｇ、４．１５ｍｍｏ＋）の乾燥テト ラヒトｏ７う７（２υｍ＋）溶液、無水フハク酸（４１５ｍｇ、　４．１５ｍｍ ｏｌ）と４−ジメチルアミノピリジン（２５ｍｇ）の混合物は一晩以上窒素下で 還流した。その混合物は次いで乾物まで濃縮し、さらに精製をすることなく使用 した。

２９）　化合物　３１ ２−エチル−２−メチル−４−（＋６−シオキソー１２−フェニル−２，７−シ オキサーｔｏ、１１−ジチアドデカニル）−５−（３４−ジオキソ−９，１０− ジテトラデカノイルオ牛シー、７−ジオキサデシル）−１，３−ジオキソラン ２−エチル−４−ヒドロキシメチル−２−メチル−５−（３，６−シオキソー９ ．１０−ジテトラデカノイルオキシ−２，７−ジオキサデシル）−１，３−ジオ キソラン（３，１８ｇ、４．１３ｍｍｏ＋）と４−オキソ−１Ｏ−フェニル−５ −オキサ−８，トジチアデカン酸（４，１５ｍｍｏｌ）との混合物を、ジシクロ へキシルカルボジイミド（９７５ｍｇ、４．７５ｍｍｏｌ）と４−ダイメチルア ミノピリジン（触媒相当量）に添加し、そしてこの混合物を塩化カルシウム乾燥 管のもとて一晩攪拌し、ついで濾過、濃縮しさらにシ「ツカゲルのカラムクロマ トグラフィーで酢酸エチル／ジクロロメタン（５：ｅＩ５＞により溶離して精製 して表題の化合物を得た（２．８ｇ、６４％）。

３０）　化合物　３２ ２、トリテトラデカノイルオ牟シプロパニルフ、トリヒドロキシ−１フーメルカ ブトー４゜１１、１４−トリオキシ−５，１０，１５−トリオキサヘプタデカ／ エートトエチに−１−ｆｉチル−４−（３，８−ジオ牛７−１２−７　ｚ　ニル −７、ツージオキサ−１０，１１−ジチアドデカニル）−ト（ジオ牛ソー１．１ ０−ジテトラデカノイルオキシ−２，７−ジオキすデンル）−１，！−ジオキソ ラン（２，０６ｇ）のメタノール（２００ｍｇ）溶液はり。

ｗｅｘ５０Ｗ−Ｘ８ビーズ（１０ｇ）と４５時間還流した。冷却条件で、その混 合物を濾過し、乾物まで濃縮した。その生成物をシリカゲルのカラムによりジク ロロメタン／酢酸エチル（３：Ｉ）で溶離し、出発材料（１，８２６ｇ）と表題 の化合物（１５３ｍｇ、回収された出発材料に関して６９％）とを回収した。

３１）　化合物　５ ７．１２９．３０−ｙ　）　ジヒドロキシ−４，１１，１４，２３，２６，３３ −ヘキサオキ７１０．　Ｉｓ、２２．２７．３２−ヘキサオキサ−１１１，１９ −ジチアヘキサトリコンタンジオン酸　ジ（２，３−ジテトラデカノイルオキシ ブロパニル）エステル ２．３−ジテトラデカノイルオキシプロパニルー７．８−ジヒドロキシ−１７− メルカプト−４、１１，１４−）ジオキソ−５，１０，１５−トリオキサヘブタ デカノエート（１１７ｍｇ、０゜１１７ｍｍｏ鳳〉のエタノール（Ｈ＋ｒｒ＋＋ ）と水（３，５ｍ１）溶液はトリブチルホスフィン（５０μＩ）と処理し、その 混合物を３０分攪拌し、ついで乾物まで濃縮した。その生成物をジクロロメタン 中に溶解し、硫酸ナトリウムにより乾燥し、シリカゲルのカラムでジクロロメタ ンを先に流してトリブチルホスフィンを除去し、生産物をそれから酢酸エチルで 溶離した。後者の溶離部分を合わせて乾物まで濃縮した。その生成物とトリエチ ルアミン（１８μ＋、０．１３ｍｍ。

１）のジクロロメタン溶液は、ヨウ素（１５ｍｇ、０．０５９ｍｍｏ　Ｉ）のジ クロロメタン（ｌｏｍｌ）溶液と滴下方式で溶液中の黄色が持続するまで処理し た（これには上記ヨウ素溶液９ｍｌを要〔た）。その混合物はついで水（２０ｍ ｌ）で洗った。水層と分離した有機層はジクロロメタン（２ｘｌ　０ｍ１）で抽 出し、合併した有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し更に乾物まで濃縮した。

その生成物をシリカゲルでクロマトグラフィーし、酢酸エチル／ジクロロメタン （３：ｌ）で溶離して表題の化合物を得た（５０ｍｇ、４９％）。

４．１１．２１．４ｇ、　５１．　ａｓ−ヘキ４）　ｔ　＊　ｖ　−６，８，１ １，１４，ｔ７．２２．２５．２ｇ、　Ｈ３３ｇ、　４１．S４．４７．５２． 　Ａ６ 、５ｇ、　６１．６４−オクタデカオキサ−３４，１５−ジチアオクタへ牟すフ ンタンジオン酸ジコレステリルエステルの合成 ３２）　化合物　３３ Ｓ、　６．９．　ＩＬ　１９．２２−ヘキサオキサ−１２，１３−ジチアテトラ エイコサン−１，２４−ジオール１１−メルカプト！、　８．９−　）リオキサ ウンデヵノール（３８８ｍｇ、１．８４ｍｍｏ１）とトリエチルアミン（２５６ μｍ、１．８４ｍｍｏ＋）のジクロロメタン（１０ｔｎｌ）溶液を、ヨウ素（２ ３４ｍｇ、０．９２１ｍｍｏ　＋）と分配法で処理した。その混合物は一晩以上 攪拌し、次いで乾物まで濃縮した。その生成物は酢酸エチル中に溶かして濾過し 、その浦波を乾物まで乾燥して表題の化合物を得て（３９０ｍｇ、定量の収率） 、これは更に精製することなく使用した。

３３）　化合物　３４ ４．３１−ジオ牛７−５．８．１１．１４．２１．２４．２７４Ｇ−オクタオキ サー１７．　ｌｌ−ジチアテトラトリコンタンジオン酸 ３、６．９．１！、　１９．２２−ヘキサオキサ−ｔｚ、　１３−ジチアテトラ エイコサン−１，２４−ジオール（３９０ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）はトルエン （ｌｏｍｌ）とアゼオトロビブク（ｍｚｅｏｔｒｏｐｌｅ）蒸留により乾燥し、 ついで乾燥したテトラヒドロフラン（９１５ｍｇ）に溶かした。無水フハク酸（ ３８８ｍｇ、３．８８ｍｍｏｌ）と４−ジメチルアミノピリジン（２１ｍｇ、０ ．１７ｍｍｏ　ｌ）を加え、さらにその混合物を窒素のもとで２２時間還流によ り加熱した。その混合物を乾物まで濃縮し、その生産物をシリカゲルのクロマト グラフィーにより、ジクロロメタン／酢酸エチル（１：１）それから酢酸エチル その後に酢酸エチル／メタノール（９：１）で溶離して精製した。その酢酸エチ ル／メタ／−ル（９：１）溶離部分を合わせ、乾物まで濃縮して表題化合物を得 た（１５１ｍｇ、２６％）。

３４）　化合物　３３ コハク酸半コレステリルエステル 無水フハク酸（２０ｇ、２００ｍｍｏ＋）を、コレステロール（７０ｇ、１８１ ｍｍｏ１）のピリジン（３０ｍｌ）及びジクロロメタン（６００ｍｇ）溶液に加 えた。その溶液は次いで４．５日還流した。冷却条件で、その混合物をジクロロ メタン（５００ｍｇ）と塩酸（３Ｍ、３００ｍ１）との間で分配した。その有機 層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥、濾過し、乾物まで濃縮した。生成物の 半分をエタノールから再結晶し、表題の化合物を得た（３９ｇ、８８％）。

３５〉　化合物　３４ コハク酸半フレステリルエステル半１１−ヒドロキシ−３，８，９−トリオキサ ウンデシルエステル フハク酸半コレステリルエステル（１，３７ｇ、２．８１ｍｍｏｌ）、テトラエ チレングリコール（１，１ｍｌ、６．７３ｍｍｏ　ｌ）　、ジシクロへキシルカ ルボジイミド（７７０ｍｇ、３．７３ｍｍｏｌ）と４−ジメチルアミノピリジン （１１０ｍｇ、０．９００ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（４０ｍｌ）溶液は 、窒素のもとで一晩以上攪拌した。その混合物はシリカのカラムでクロマトグラ フィーし、酢酸エチル／ジクロロメタン（１：　１）で溶離し、表題の化合物を 得たく８６１ｍｇ、４６％）。

３６）　化合物　３５ ４、１ｇ、　２１．４ｇ、　５１．　Ｉｓ−へキサオキソ−５，Ｉｔ、　１１． １４．１？、　２２．２５．２Ｂ、　３１．３ｇ、４１．４S．４７．５２．５ ５ 、５８．６１．６４−オクタデカオキサ−３４，３５−ジチアオクタへキサコン タンジオン酸ジクロルステリルエステル ４．３１−ジオキソ−５，８，１１，１４，２１，２４，２フ、３０−オクタオ キサ−１７，ｌｌｌ−ジチアテトラトリコンタンジオン酸（１５０ｍｇ、０．２ ４２ｍｍｏｌ）とコハク酸半コレステリルエステル半１１−ヒドロキシ−３，６ ，９−）リオキサウンデシルエステル（５９４ｍｇ、０．８８１ｍｇ）　、ジシ クＯヘキシルカルボジイミド（１４２ｍｇ、０．６８８ｍｍｏｌ）と４−ジエチ ルアミノピリジン（３４ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（２０ ｍｌ）溶液は窒素のもとて一晩以上攪拌した。その混合物は次いで濾過し、モし てシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによりジクロロメタン／酢酸エチル （１：　ｌ）　、その後酢酸エチルで溶離し、表題の化合物を得た（２２２ｍｇ 、４８％）。

実施例２ センサー膿の組み立て この説明中に記載された連結分子を用いたセンサー朧の組み立ては、ｆｓ８図中 に示された次の原案で達成して良い。

工程Ａ：連結分子の自己形成される単層は、ｖｈｔｔｅｓ＋ｄｅｓら（Ｊ、＾− ，ＣｈａｔＳｏｃ、　１９８１、　ＬＬＬ　３２１−３２５）によって教示され る方法に従って形成される。金は、ガラス、シリコン又はプラスチックのような 適当な担体上に電極（１２）を与えるように適当なパターンで蒸着又はスパッタ される。その電極（１２）は次に連結分子（１１）を含む溶液中に浸し、金の表 面上にイオノフオア（１３）と化学吸着連結分子を含む連結分子の自己形成され た単層が与えられる。連結分子（１１）と（１ｇ）のための溶媒は一般にエタノ ール、デカン、ヘキサン、ジクロロメタン又は他の通常に利用できる溶媒であり 、それらは担体と相互作用しないものに規定される。溶剤中の連結分子（ｌｌ） と（１３）の濃度は限定されないが、好ましくは１０ｍＭより少な（，０，０１ ｍＭより太き（される。連結分子（１１）と（１３）の吸着の時間は、その適用 範囲が１分より小さい場合であっても完全なものが出現するけれども、好適には １０分より長く、２時間より短くする。吸着が１０分より長く２４時間までは連 結分子の行動に悪影響は現われない。

工程Ｂ：その電極は次にエタノール、ヘキサン、デカン又はジクロロメタンのよ うな適当な溶剤ですすぎ洗いされる。

工程Ｃ：その電極を取り出し乾燥する。

工程Ｄ：グリセロールモノオレエートのデカン溶液（１００ｍｇ／ｍｌ）、又は グリセロールモノオレエートのヘキサデカン溶液（５０ｍｇ／ｍ＋）又はグリセ ロールモノオレエー）　（５０ｍｇ）＋ヘキサデカン（０，１ｍ１）のジオキサ ン（１ｍｌ）溶液のような油脂分子（１４）の混合物を電極の頂部に塗る。これ に続いて０．１Ｍ　ＮａＣ１溶液の添加によりその上に、黒色油脂膜によって形 成されたような絶縁された油脂２層膜として典型的なインピーダンス特性をもっ て形成される。何らかの以前の方法を越えた形成のこの方法の有利性はそれらの 膜の安定性（シーツクと振動の耐性と同様に最終の膿も時間の長さによって両方 ）が増加され、生産の顕著な容易化、そして膿の内部と貯蔵部の外部を通してイ オンを伝導するイオノフオアとさせる能力である。もしもグリセロールモノオレ エートの上述した混合物がグラミシジン又はパリノマイシンのようなイオノフオ アを含むと、合併性で機能性イオノフオアの２層膜が形成される。加えて、エタ ノール又はメタノール又は塩溶液浴の中の塩水のような適当な溶剤中の膿に適合 するイオノフオアのアリフォラ（ａｌｌｑｕｏｔｓ）注入が又可能であり、その 結果として膜に適合するイオノフオアは機能的な状態において２層膜の中に合併 されるであろう。そのイオノフオアの伝導はゲートして良い。

第９図はｌｏｇ［Ｚ］対屑波数の典型的なインピーダンスのプロットを示す。

ｍ（１）は連結化合物１とグリセａ−ルモノオレエートのデカン溶液（ｔｏｏｍ ｚ／ｍ　ｌ　）との混合物とから形成された２層膜より得られたインピーダンス のグラフである。線（１１）はイオンチャンネルの加入に関してインピーダンス 中の明確な降下として示されるビオチニレート化されたグラミシジン誘導体の付 加した同じ電極のインピーダンスプロットである。線（１１１）はストレブトラ ビジンの付加の後の同じ電極のインピーダンスプロットである。ストレブトラビ ジンは黒色油脂膜においてビオチニレート化されたグラミンジンのイオンチャン ネル中のイオンチャンネル伝導減少の原因となることが知られている。同様のゲ ーティング応答は連結分子を用いて製造された２層膜について明瞭に見られる。

実施例３ 二層膜内へのパリノマイシンの取り込み、カリウムイオンのイオン選択性電極の 製造。

グリセロールモノオレエートのデカン溶液へのパリノマイシンの添加（１００ｍ ｇ／ｍｌ、３０００：１　グリセロールモノオレエート：パリノマイシン）は、 その表面に吸着された化合物ｌの単一層を持つｌｍｍ２の金電極上に、この溶液 を添加して二層膜を生じさせる。さもなくば、パリノマイシンのエタノール希釈 溶液を塩溶液に注入することにより、パリノマイシンを膜の中に選択的に取り込 むんでもよい。パリノマイシンは、カリウムイオンを二層膜を通して輸送するイ オノフオアである。ナトリウムのような他のイオンは、はとんど輸送されない。

　図１０は、０．１ＭのにＣ１（線（Ｉ））およびＯ，ＩＭのＮａＣｌ　（線（ ム量））存在下でのインピーダンスの違いを示す。

表１は、０．１ＭのＫＣＩおよび０．１ＭのＮａＣ１存在下での、ＩＨｚでの膜 のインピーダンスを示し、その効果の可逆性を示している。

紅 水層（ａ）　Ｎａ”　Ｋ”　Ｎａ”　Ｋ”　Ｎａ”　Ｋ”　Ｎａ十ｌ　ｏｇ／ｚ ／　（ｂ）　フ、８　６．１５　フ、５５　１０　フ、５５　５．９　フ、４５ （ａ）溶液は、Ｏ，ＩＭのＮａＣｌ、Ｏ，ＩＭのＫＣＩのいずれかの水溶液であ る。

（ｂ）インピーダンスは、ｌＨｚで測定され、ｌｏｇ（オーム）で示す。

得られた結果は、パリノマイシンがチャンネルではなくイオノフオアであるよう に、二層膜が液体状態にあること、イオンの伝導は二層膜の欠陥構造を通らずに 特定のイオノフオアを遇してなされること、エタノールから塩溶液に注入された ときに、パリノマイシンが複数の層を横切って輸送されないような単一の二層体 が得られること、そして、作動するイオン選択的電極が上記の膜形成工程によっ て形成されることを表す。イオン選択性膜の形成の容易性は、−回使用のイオン 選択性の電極や複数イオンの選択性電極の生産に役立つ。

実施例４ リザーバー効率のためのパリノマイシンの試験の詳細試験は、連結化合物１−６ の相対的なリザーバー能力を決定するために、案出された。この試験では、連結 化合物の単一層は、新たに蒸着させた１ｍｍ２の金電極に、１ｍＭのエタノール 溶液から連結化合物を吸着させることによって形成される。グリセロールモノオ レエートのデカン溶ｉｆｆｌ（１００ｍｇ／ｍｌ、３０００：１　’ｊリセロー ルモノオレエート：バリノマインン）、次いでＯ，１ＭのＮａｃ１溶液が加えら れる。０．１ＭのＮａＣ１およびＯ，ＩＭのＫＣＩの中での二層膜のインピーダ ンスは、ＩＨｚで決定される。０．１ＭのＮａＣｌに対する０、１ＭのＫＣＩの インピーダンスの違いの相対値が、連結化合物の相対的なりザーバー容量の指標 として用いられた。０．１ＭのＮａＣｌのインピーダンス値も、絶縁された二層 膜が形成されたことを確認する指標として用いられた。表２に実験結果を示す。

個々の測定では、各連結化合物について複数の電極が使用されている。リザーバ ー能力は、連結化合物ｌ−化合物２〉化合物５〉化合物３〉−化合物４〉〉ドデ シルチオールと順序づけることができる。

化合物　１ｏｇｌＺｌ＠　ＩｏｇＩＺｌａ　ΔＩｏｇｌＺ１番号　０．１Ｍ　Ｎ ａＣｌ　Ｏ，ＬＭ　ＫＣｌ１　７、　６　６．　５　１．　０ ２　７．６　６．４５　１．１５ ３　７、　７　７．　２　０．　５ ４　７．７　７．０５　０．６５ ５　７．７　６．８５　０．８５ ドデシルチオール　７．　３　７．　２　０．　１（ａ）ＩＨｚで測定し、ｌｏ ｇ（オーム）の単位で示した。

連結化合物１−５のりザーパー能力は、分子の親水性領域の長さに依存する。

すなわち、約４０オングストロームの長さの親水性領域を持つ連結分子１，２は 、約２０オングストロームの長さしかない親水性領域を持つ類似の化合物３．４ より大きなりザーバー能力を持つ。しかしながら、約２０オングストロームの長 さの親水性領域しか持たない化合物５では、その大きな親水性により、化合物３ ．４より良いリザーバーであると考えられる。連結分子の親水性リザーバー領域 の本質的な性質を示すため、ドデシルチオール（親水性リザーバー領域を含まな イ分子）の第１の吸着層と、上記グリセリンモノオレエート／パリノマイシンの 第２の層とからなる二層膜は、二層を通して非常に限られたイオン伝導しか起こ さないことが示された。

実施例６ ともに吸着されたグラミシジン電極の生産の詳細ビオチン化（ｂｌｏｔｌｎｙｌ ａｔｅｄ）されたグラミシジンと、連結グラミシジン（化合物７）との１０：ｌ の混合物を、トリフルオロエタノールに溶解させた。トリフルオロエタノールは 、回転式蒸発器で蒸発させた。エタノールを、グラミシジン混合物に添加し、２ 度蒸発させる。その後、残留物を、１０％のエタノール／ジクロロメタンに溶解 させ、２４時間放置する。ビオチン化グラミシジンのホモ二量体とグラミシジン ７のホモ二量体と同様に、ビオチン化グラミシジン／連結グラミシジンのへテロ ニ量体を含むこの溶液の部分を、ビオチン化グラミシジン／連結グラミシジン７ のへテロニ量体に対する化合物ｌの最終的な比率が１０００：ｌになるように、 化合物！の１ｍＭの溶液に加える。蒸着された１ｍｍ２の金電極は、溶液に加え られ、化合物ｌとグラミシジン結合体との単層膜が吸着される。必要な時間経過 後（数分から数時間）、電極は取り出され、化学的に吸着されないホモ二量体の ビオチン化グラミシジンを取り除くために、１０％のエタノール／ジクロロメタ ンで洗浄する。実施例３で述べたグリセロールモノオレエートの溶液を用いた第 二の脂質層を加えることにより、伝導性のグラミシジン分子を含む安定な二層膜 が得られる。これら二層膜は、ＩＨｚで、平均ｌｏｇ６．７５オームのインピー ダンスを持つ。吸着溶液の中にグラミシジンを含まない以外は同様に形成された 二層膜は、ＩＨｚで平均ｌｏｇ７．４５オームのインピーダンスを持つ。単一層 から不特定に結合したグラミシジンを取り除くため、１０％のエタノール／ジク ロロメタンを用い、単一層をすすいだ後、吸着溶液中でもはやグラミシジン結合 せず、単にビオチン化グラミシジンのみを含む二層膜は、ｌＨｚで平均ｌｏｇ７ ．５オームのインピーダンスを持つ。トリフルオロエタノール、トリフルオロエ タノール／エタノール、またはジメチルスルフオキシドのような溶媒にグラミシ ジンを分解する溶媒で、吸着された単一層を洗浄すれば、残った底部層の中のイ オンチャンネルのみとして、グリセロールモノオレエートを加えることにより、 絶縁フィルムが形成される。これらの二層体は、ＩＭ２で平均ｌｏｇ７．５オー ムのインピーダンスを持つ。このように機能するイオンチャンネルは、ともに吸 着する工程を通し、二層体の中に組み込まれる。

第二の層を形成するために、グリセロールモノオレエートのデカン溶液を用い、 二層体の中にグラミシジン分子を混入させた上記実施例３のように膜を用意した と台、二層膜を遇したグラミシジンのイオン伝導は、塩溶液に中のエタノールの ような、小さな中性有機分子の濃度に依存することも見出された。例えば、典型 的な電極／二層膜集合体のインピーダンスは、０．１ＭのＮａＣｌ中、ＩＨｚで 、ｌｏｇｌ、３オームである。その後、塩溶液を、０．１ＭのＮａＣ１中の５％ メタノールに替えると、インピーダンスは、ｌｏｇ７．２オームに落ち、０゜１ ＭのＮａＣ１中の５％のエタノールでは、インピーダンスは、１０１ｉ７．０に 落ち、０．１ＭのＮ自０１中の６％のジオキサンでは、インピーダンスが６．８ オームに落ちる。結果は可逆的であり、被分析物が、膜のモルフオロジー（■ｏ ｒｐｂｏｌｏｇｙ）や他の物理的特質、を与える能力を、この膜組成によるその ような被分析物の存在を測定するために利用することのできる可能性を示してい る。

実施例７ 改善されたゲート応答を達成するためのトリフルオロエタノールを用いた二層膜 バイオセンサの生産の詳細 ガラス電極上に蒸着させた１ｍｍ２の金は、前記実施例３のように形成される。

新品の金電極が、１時間、連結分子１　（０，１ｍＭデカン溶液）を含む溶液に 配置される。電極は、過剰な吸着溶液を取り除くために、デカンですすがれ、乾 燥され、トリフルオロエタノール中で１時間６０℃に加熱され、または、トリフ ルオロエタノールの溶液中に１週間室温て放置される。電極が取り出され、乾燥 され、そして、ジオキサン（１ｍｌ）中のグリセロールモノオレエート（５０ｍ ｇ）と、２％のへキサデカンと、ビオチン化グラミシジン（ビオチン化グラミシ ジンに対するモノオレイン酸グリセロールの比率は１００００：１）とを含む溶 液１μｍが加えられ、次に、Ｏ，ＩＭのＮａＣｌが加えられる。塩溶液を交換し た後、従来開示されているように（１’ｃＴ　１１１（１９０７０８１８３）ス トレブタビジン（ｓＬｒｅｐｔａｖｌｄｌｎ）が加えられる。ゲートの応答大き さは、トリフルオロエタノール加熱処理をしない電極で向上することが分かった 。それは、トリフルオロエタノールで加熱処理した電極では、ストレプタビジン を加えることにより、ＩＨｚでのインピーダンスが２オームからフオームに増大 したのに対し、トリフルオロエタノールの加熱処理なしの電極では、ＩＨｚのイ ンピーダンスは、１オームから２．５オームに上昇するだけである。

電極と膿との間にイオンのリザーバーを設けることは、人体中への埋め込み用電 極の構築にも有用であると確信される。特定のシグナル（例えば、膿への特別な 分析物の結合、または、電圧ゲートされたイオンチャンネルに対する直流電圧の 印加）を受けた電極上で、電極と膜との間の間隙内に存在するイオンが、墳め込 まれた電極を囲む組織の中に放出されていることが認識される。これらのイオン は、電極を通した電流と同様に、この組織を刺激する。リザーバー中のイオンを 運んだ後に、電極を、引き続き要求される刺激を供給てきる状態にするために、 リザーバーは再びイオンで満たされるであろう。

広く述べたように、本発明は、特別の実施例に見られるように、この発明の思想 または視野から離れることなしに、種々の変形および／または修飾がなされてよ いことは、当業者には用意に理解できるであろう。それゆえ、この実施例は、す べての点で例証であり、制限するものでないと考えられる。

図１ 図２ ｖ！Ｊ７ 図８ −　Ｌｏｇ　（周波数）　（Ｌｏ　ｇｕｚ）図１０ ε ＡＵ　２１２７９／８８　ＥＰ　３８２７３６　ＷＯ８９０１１５９フロントベ ージの続き （５１）Ｉｎｔ、　Ｃ１，’　識別記号　庁内整理番号ＧＯＩＮ　２７／４０　 ７２３５−２Ｊ７６３８−４Ｃ （８１）指定回　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、ＡＵ、ＣＡ 、ＪＰ、ＵＳ （７２）発明者　ラギューズ、パークハードオーストラリア国　２０７５　ニュ ー　サウスウエールズ　セント　アイブズ　ムーディーズ　ロード　２ Ｉ Ａ６１Ｂ　５１０４　３００　Ｖ （７２）発明者　コーンネル、　ブルース　アンドリューオーストラリア国　２ ０８９　ニュー　サウスウエールズ　ニュートラル　ベイ　ライコム　ロード　 ５８ （７２）発明者　ペース、　ロナルド　ジョンオーストラリア国　２６０７　オ ーストラリアン　キャピタル　テリトリ−ファラー ホークスベリー　クレセント　１３８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．電極と、ち密に充填された両親媒性分子と複数のイオノフォアの配列とから なる膜とから構成され、 その膜が、膜と電極の間に親水性の間隙部を形成するように、連結分子によって 電極に接続きれており、その間隙部は、イオノフォアを通過するイオンの流束に 充分なものであり、その連結分子は、その同一分子中に、膜に結合し又は埋め込 まれる疎水性領域と、電極に結合する結合領域と、前記疎水性領域と結合領域と を仲介し、前記膜と電極の間の間隙部を形成する親水性領域とからなる電極膜複 合体。 ２．電極と、ち密に充填された両親媒性分子とバリノマイシン、クラウンエーテ ル類及びイオン選択性イオンチャンネルから選ばれた複数のイオノフォアの配列 とからなる膜とから構成され、 その膜は、膜と電極の間に親水性の間隙部が形成きれるように、連結分子によっ て電極に接続されており、その間隙部は、イオノフォアを通過するイオンの流束 に充分なものであり、その連結分子は、その同一分子中に、少なくとも膜を形成 している両親媒性分子の部分、あるいは膜に結合し又は埋め込まれる疎水性領域 と、電極に結合する結合領域と前記疎水性領域と結合領域とを仲介し、前記膜と 電極の間の間隙部を形成する親水性領域とからなるイオン選択性電極。 ３．膜と電極との間隔が、１０から１０００オングストロームの範囲である請求 項１または２記載の電極膜複合体。 ４．膜と電極との間隔が、１５から１００オングストロームの範囲である請求項 １から３のいずれかに記載の電極膜複合体。 ５．連結分子の疎水性領域が、少なくとも膜を形成している両親媒性分子の部分 からなる請求項１から４のいずれかに記載の電極膜複合体６．連結分子の疎水性 領域が、ジオレイルグルタメート、ジ（Ｘ）グルタメート（但し、Ｘは炭素数１ ２から２０の長さのアルキル鎖）、グリセロールジドデカノエート、グリセロー ルジテトラデカノエート、グリセロールジへキサデカノエート、グリセロールジ オクタデカノエート、グリセロールジオレエート、古細菌脂質あるいは古細菌脂 質の類似物を掛け渡している合成膜から選ばれたものである請求項１から５のい ずれかに記載の電極膜複合体７．連結分子の疎水性領域が、重合可能な基を含ん でいる請求項１から６のいずれかに記載の電極膜複合体 ８．連結分子の疎水性領域が、膜と共存する膜である請求項１から７のいずれか に記載の電極膜複合体 ９．疎水性領域がグラミシジンである請求項８記載の電極膜複合体１０．連結分 子の親水性領域が、オリゴ／ポリエーテル、オリゴ／ポリペプチド、オリゴ／ポ リアミド、オリゴ／ポリアミン、オリゴ／ポリエステル、オリゴ／ポリサッカラ イド、ポリオール、多電荷基、電極活性種、あるいはそれらの組合せである請求 項１から９のいずれかに記載の電極膜複合体。 １１．連結分子の親水性領域が、オリゴエチレンオキサイド基である請求項１か ら１０のいずれかに記載の電極膜複合体。 １２．オリゴエチレノキサイド基が、４から２０のエチレンオキサイド単位から なる請求項１１記載の電極膜複合体。 １３．連結分子の親水性領域が、コハク酸に結合したテトラエチレングリコール の１−４副単位である請求項１から１０のいずれかに記載の電極膜複合体１４． 連結分子の親水性領域が、メルカプトエタノール、及び１から４コハク酸／１， ４−ジェステル化１，２，３，４−ブタンテトラオール副単位からなる請求項１ から１０のいずれかに記載の電極膜複合体１５．連結分子が、ベンジルジスルフ ィドの結合領域と、テトラエチレングリコール、コハク酸、テトラエチレングリ コールそしてコハク酸サブグループの連続で構成きれる疎水性領域と、ジオレイ ルグルタメートの疎水柱領域からなる請求項１から４のいずれかに記載の電極膜 複合体。 １６．連結分子が、対称性ジスルフィド結合領域と、テトラエチレングリコール 、コハク酸、テトラエチレングリコール及びコハク酸サプグループの連続で構成 される疎水性領域と、コレステロールの疎水性領域からなる請求項１から４のい ずれかに記載の電極膜複合体。 １７．連結分子が、対称性ジスルフィド結合領域と、テトラエチレングリコール とコハク酸サプグループの連続で構成される親水性領域と、１，２−グリセロー ルジテトラデカノエートの疎水性領域からなる請求項１から４のいずれかに記載 の電極膜複合体。 １８．連結分子が、対称性ジスルフィド結合領域と、テトラエチレングリコール とコハク酸サブグループの連続で構成される親水性領域と、ジオレイルグルタメ ートの疎水性領域からなる請求項１から４のいずれかに記載の電極膜複合体。 １９．連結分子が、チオールまたはジスルフィドの結合領域と、メルカプトエタ ノール、コハク酸、１，４−ジエステル化１，２，３，４−プタンテトラオール 、及びコハク酸副単位の連続で構成される親水性領域と、１，２−グリセロール ジテトラデカノエートの疎水性領域からなる請求項１から４のいずれかに記載の 電極膜複合体。 ２０．連結分子が、ベンジルジスルフィドの結合領域と、テトラエチレングリコ ール、コハク酸、テトラエチレングリコール、コハク酸の連続で構成される親水 性領域と、１，１−ドトリアコンタメリレンビス（２−へキサデシル−８ｎ−グ リセロール）及びグリシン、１，６−アミノカプロン酸とビオチンからなるヘッ ドグループ（ｈｅａｄ　ｇｒｏｕｐ）の疎水性領域からなる請求項１から４のい ずれかに記載の電極膜複合体。 ２１．連結分子が、ベンジルジスルフィドの結合両極と、テトラエチレングリコ ール、コハク酸、テトラエチレングリコール、コハク酸、テトラエチレングリコ ール、コハク酸の連続で構成される親水性領域と、グラミシジンの疎水性領域か らなる請求項１から４のいずれかに記載の電極膜複合体。 ２２．イオノフォアがグラミシジンである請求項１から２１のいずれかに記載の 電極膜複合体。 ２３．イオノフォアが、複分析物存在下で、膜の導電率が変化するようにゲート きれた請求項１から２２のいずれかに記載の電極膜複合体。 ２４．イオノフォアをゲートした請求項２３記載の電極膜複合体をサンプルに接 触させ、膜の導電性を測定し、導電性の変化がサンプル中の被分析物の存在を示 すことからなるサンプル中の複分析物の存在の分析方法。 ２５．（１）結合領域、親水性領域、及び複数のイオノフォアを含む一層膜を自 己形成するか、または自己形成した両親媒性分子のと複数のイオノフォアとから なる一層膜に結合もしくは埋め込まれる疎水性領域からなる連結分子を含む溶液 を調整し、 （２）電極と上記結合領域の成分が、結合領域が電極に化学吸着するように選択 された電極をこの溶液に接触きせ、（３）この複覆された電極をすすぐ ことからなる電極膜複合体の製造方法。 ２６．被覆された電極を、トリフルオロエタノールまたは類似の溶液に、約１週 間浸漬する、あるいはトリフルオロエタノールまたは類似の溶液中で、６０℃で １時間処理する請求項２５記載の方法。 ２７．複覆した電極を、アルカン／脂質を分離でき、水溶性の担体溶媒中のＣ８ −Ｃ１６アルカンまたはスタアレンを含む脂質の溶液に接触させ、被覆した電極 の上に第２の膜層を形成する請求項２５または２６記載の方法。 ２８．アルカンが、Ｎ−デカン、へキサデカン、及びスタアレンから選ばれたも のである請求項２７記載の方法。 ２９．膜を電極に結合させ、膜と電極の間に間隙部を形成する連結分子であって 、同じ分子中に、 （１）ジオレイルグルタメート、ジ（Ｘ）グルタメート（但し、Ｘは炭素数１２ から２０の長さのアルキル鎖）、グリセロールジドデカノエート、グリセロール ジテトラデカノエート、グリセロールジへキサデカノエート、グリセロールジオ クタデカノエート、グリセロールジオレエート、古細菌脂質あるいは古細菌脂質 の類似物に掛け渡された合成膜から選ばれた疎水性領域と、（２）オリゴ／ポリ エーテル、オリゴ／ポリペプチド、オリゴ／ポリアミド、オリゴ／ポリアミン、 オリゴ／ポリエステル、オリゴ／ポリサッカライド、ポリオール、多重電荷基、 電極活性種、あるいはそれらの組合せから選ばれた親水性領域と、 （３）チオール、ジスルフィド、スルフィド、チオン、キサンテート、フォスフ ィン、イソニトリル、及びシリル基から選ばれた結合領域とからなる連結分子。 ３０．疎水性領域がグラミシジンである請求項２９記載の連結分子。 ３１．連結分子の疎水性領域が、好ましくは４から２０のエチレンオキサイド単 位からなるオリゴエチレンオキサイド基からなる請求項２９記載の連結分子。 ３２．連結分子の親水性領域が、コハク酸に結合したテトラエチレングリコール の１−４副単位である請求項２９記載の連結分子。 ３３．連結分子の親水性領域が、メルカプトエタノール、及び１から４コハク酸 ／１，４−ジエステル化、１，２，３，４−プタンテトラオール副単位である請 求項２９記載の連結分子。 ３４．連結分子が、べンジルジスルフィドの結合領域と、テトラエチレングリコ ール、コハク（酸）、テトラエチレングリコールそしてコハク酸サブグループの 連続で構成される疎水性領域と、ジオレイルグルタメートの疏水性領域からなる 請求項２９記載の連結分子。 ３５．連結分子が、対称性ジスルフィド結合領域と、テトラエチレングリコール 、コハク酸、テトラエチレングリコール及びコハク酸サプグループの連続で構成 される疎水性領域と、コレステロールの疎水性領域からなる請求項２９記載の連 結分子。 ３６．連結分子が、対称性ジスルフィド結合領域と、テトラエチレングリコール とコハク酸サブグループの連続で構成される親水性領域と、１，２−グリセロー ルジテトラデカノエートの疎水性領域からなる請求項２９記載の連結分子。 ３７．連結分子が、対称性ジスルフィド結合領域と、テトラエチレングリコール とコハク酸サブグループの連続で構成きれる親水性領域と、ジオレイルグルタメ ートの疎水性領域からなる請求項２９記載の連結分子。 ３８．連結分子が、チオールまたはジスルフィドの結合領域と、メルカプトエタ ノール、コハク酸、１，４−ジエステル化１，２，３，４−プタンテトラオール 、及びコハク酸副単位の連続で構成される親水性領域と、１，２−グリセロール ジテトラデカノエートの疎水性領域からなる請求項２９記載の連結分子。 ３９．連結分子が、ベンジルジスルフィドの結合領域と、テトラエチレングリコ ール、コハク酸、テトラエチレングリコール、コハク酸の連続で構成される親水 性領域と、１，１−ドトリアコンタメチレンビス（２−へキサデシル−８ｎ−グ リセロール及びグリシン、１，６−アミノカプロン酸とピオチンからなるヘッド グループの疎水性領域からなる請求項２９記載の連結分子。 ４０．連結分子が、ベンジルジスルフィドの結合領域と、テトラエチレングリコ ール、コハク酸、テトラエチレングリコール、コハク酸、テトラエチレングリコ ール、コハク酸の連続で構成される親水性領域と、グラミシジンの疎水性領域か らなる請求項２９記載の連結分子。