JPH06503578A

JPH06503578A - ペプチド用液相法

Info

Publication number: JPH06503578A
Application number: JP4503322A
Authority: JP
Inventors: スティーブンソン，デイビッド
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション
Priority date: 1990-11-30
Filing date: 1991-11-25
Publication date: 1994-04-21
Also published as: WO1992009620A1; MX9102333A; EP0564587A1; KR930703345A; CA2097305A1; PT99654A; AU9166491A; ZA919440B; EP0564587A4; IE914157A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】ペプチド用液相法本発明は、ペプチドＬ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ− ＮＨ２の製造法に関する。

このペプチドは、下垂体成長ホルモン放出活性を有する。

また、本発明は、本発明の製造法において使用される中間体に関する。

発明の背景米国特許第４．４１１．８９０号には、ペプチド　Ｌ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ −＾１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｎ［１２が下垂体成長ホルモン放出活性を有すると記載されている。該ペプチドは、成長ホルモン欠損に関連した症状の治療に有用である。

米国特許第４．４１１．８９０号に例示されているこのペプチドの製造法は、出発物質アミノ酸を樹脂に結合させ、ついで適当なアミノ酸と逐次力・ツブリングさせる固相法である。したがって、該面相法における中間体は、ペプチド−樹脂化合物である。所望のペプチド生成物を、フッ化水素と処理することにより該樹脂から開裂させる。米国特許第４．４１１．８９０号には、当該分野で公知の溶液法はペプチドの製造に使用できると述べられているが、溶液法は何ら例示されていない。液相法について記載されている唯一の中間体は、保護されたヘキサペプチ本発明は、Ｌ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−へ１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ −Ｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２の有利な製造法を提供する。該製造法は、容易に単離精製される固体の再結晶可能な中間体を与える液相法（ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｐｈａｓｅ　ｍｅｔｈｏｄ）である。こねらの固体の中間体（ま一般に結晶性であり、再結晶により精製してもよい。固体の再結晶可能な中間体は、特に製造法の全工程においては、ペプチド化学では珍しく、精製における利点を与える。

したがって、本発明は、ａ　）　Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨｚをＺ−Ｄ−Ｐｈｅとカップリングさせ、ｂ）Ｚ基を除去し、得られたＤ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−＋ｔＨ２をＺ −Ｌ−Ｔｒｐ−ＮＨ２とがツブリングさせ、ｃ）Ｚ基を除去し、得られたＬ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ　（ＢＯＣ） −ＮＨ２をＺ−Ｌ−Ａｌａと力・ツブリングさせ、ｄ）Ｚ基を除去し、得られたＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｎｕ　、をＺ−Ｄ−Ｔｒｐとカップリングさせ、ｅ）Ｚ基を除去し、得られたＤ−Ｔｒｐ−Ｌ−＾１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ −Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨｚを（ＢＯＣ）　２−Ｌ−Ｈｉｓとカップリングさせ、およびｆ）ＢＯＣ基を除去し、Ｌ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−＾１ａ−Ｌ −Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−１，−Ｌｙｓ−）ＪＨ２を得ることを特徴とする式％式％で表される化合物の製造法である。

不純物の成長を防ぐため、好ましくは、該製造法の各工程で該中間体を再結晶する。該製造法の次工程で使用する前に各中間体を精製する場合には、最終生成物の精製が容易になる。

さらに、本発明の液相法が、樹脂から生成物を開裂させるために固相法において使用される腐食性のフッ化水素の使用を避けられることは、有利である。本発明の液相法は、アミノ保護基を除去するために該反応法の終わりに、ただ１回の酸処理を要するのみであり、したがって、トリプトファン残基の分解を最小限化する。一方、固相法は反復的酸処理を含む。

本発明の製造法における保護されたペプチド中間体もまた、本発明の特徴である。該中間体は固体であり、一般に結晶性であり、再結晶により容易に精製されるため、本発明の製造法において特に有用である。

本発明の製造法は、以下のとおり表されてもよい。

Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＢ２（１）１）再結晶２）触媒Ｈ２３）　Ｚ−Ｄ−ＰｈｅＺ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ−（ＢＯＣ）−ＮＥｚ　（ＩＩ）１）再結晶２）触媒Ｈ２３）　Ｚ−Ｌ−ＴｒｐＺ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｅｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）＝ＮＨｔ　（ＩＩＩ）１）再結晶２）触媒Ｈ２３）’　Ｚ−Ｌ−ＡｌａＺ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＢ１２　（ＩＶ）１）再結晶２）触媒Ｈ２３）　Ｚ−Ｄ−ＴｒｐＺ−Ｄ＝Ｔｒｐ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−’Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｎｌ１２（Ｖ）１）再結晶２）触媒Ｈ２３）　ＢＯＣ−Ｌ−Ｈｉｓ　（ＢＯＣ）ＢＯＣ−Ｌ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ− ＾１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｎｌ１２およびＢＯＣ−Ｌ−Ｈｉｓ（ＢＯＣ）−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−＾１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ −Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２（ｖＴ）１）再結晶２）酸Ｌ−Ｈｉ　５−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−Ａ　１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ−ＮＵ　２　（Ｖ　Ｉ　Ｉ　）本発明の中間体化合物は、上記構造式（Ｉ）　 −（ＶＩ）で表される。

本明細書中で使用するアミノ酸／残基についての略語は、標準的なペプチド命名法に従う。かかる略語および本明細書中で使用する他の語は以下のとおりである。

Ｌ−Ｈｉｓ　＝　Ｌ−ヒスチシンＤ−Ｔ、　＝　Ｄ−トリプトファンＤ−Ｐｈｅ　−Ｄ−フェニルアラニンＬ−ＬｙｓＩＩＬ−リンノ２　−ペンシルオキシカルボニルＢＯＣ＝ｔ−ブチルオキ７カルボニルＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸冒ＳＣ＝水溶性力ルホシイミド［１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸］ＤＭＦ　＝ジメチルホルムアミド上記した製造法の工程においては、次工程で使用する前に中間体（１）−（ｍを再結晶する。中間体（ＩＩ）　−（ＶＩ）は、接触水素化分解によりペンジルレオキシカルボニル基（Ｚ）を除去し、ついで適当なアミノ酸と力・ノブ１ノングさせることにより製造する。

出発物質であるＮ（α）−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ（ε）−１−ブチルオキシカルボニル−し−リシンアミド（１）は、Ｎ（α）−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ（ε）−１−ブチルオキ／カルボニル−し−リジンから、アンモニア、水溶性カルホンイミド［すなわち、１−３（ジメチルアミノプロピルイミドり製造する。接触水素化分解によりペンノルオキシカｌレボニル基を中間体（１）から除去した後、水溶性カルボジイミドおよび１−ヒドロキシベン゛／ト１ノア・／−ルを使用して、得られたアミンをベンジルオキシカルボニル−Ｄ−フェニルアラニンにカップリングさせる。ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−ト’Ｊブトファン、ベンジルオキシカルボニル−し−アラニン、ペンジルオキシカルボニル−Ｄ−トリプトファンおよびＮ（α）、Ｎ（ｉｍ）−ジ−ｔ−ブチフレオキシカルボニル−スチジンでこの脱保護（Ｚ基の除去）およびカップリングの順序を繰り返して、ジ−ｔ−ブチルオキシカルボニルへキサペプチドおよびトリーｔープチルオキシカルポニルへキサペプチド（Ｖｌ）の混合物を得る。ｔ−ブチルオキシカルボニル基を酸で除去して、所望のペプチド生成物（ＶＩＩ）を得る。ペプチド生成物（ＶＩＩ）は、例えば、逆相液体クロマトグラフィーを使用して精製される。

ｔ−ブチルオキシカルボニル基は、酸および所望によりカルボニウムイオン捕捉剤を使用して除去する。ｔ−ブチルオキシカルボニル基を除去するのに適当な酸は当該分野でよく知られており、鉱酸または有機強酸、例えばトリフルオロ酢酸を包含する。カルボニウムイオン捕捉剤もまた当該分野でよく知られており、求電子性アリール化合物およびメルカプタン類、例えばｎ−プロピルメルカプタンを包含する。

２保護基を除去するための水素化分解は、適当な触媒、例えば５〜１０％パラジウム炭素のようなパラジウム炭素を使用して行う。好ましくは、１０％パラジウム炭素を使用する。水素化分解を行う圧力は重要でなく、大気圧から数百ｐｓｌであってもよい。典型的には、大気圧から１００ｐｓｉで行う。水素圧を上げると反応速度が増大する。約１００ｐｓ　ｉで反応を行うことが好ましい。オートクレーブ中での激しい撹拌（例えば６００ｒｐｍ）は、反応速度を上げるのに非常に有利である。

カップリング反応は当該分野てよく知られており、例えば、ハロゲン化アシル、活性化エステルまたは活性化無水物を形成させて中間体のカルボキシル基を活性化させることにより、または、例えばンシクロへキシルカルボジイミドまたは水溶性カルボジイミド、ＰＰＡ　（１−プロパンホスホン酸環状無水物）、ＤＰＰＡ（ジフェニルホスホリルアジド）またはＢＯＰ試薬（ベンゾトリアゾール−１＝イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート）のようなカルボジイミドのようなカップリング試薬でカップリングさせることにより行ってもよい。水溶性カルボジイミドが好ましい。カルボジイミドによるカップリング反応を促進するために、Ｎ−ヒドロキシーベンゾトリアゾールのような追加的試薬を加えてもよい。

完了の際に、カップリング反応溶液を、例えば、中間体（ＩＩ）　−（Ｖ）における水性塩基に注ぎ、カップ盲ルグ反応溶液を、炭酸カリウムまたは炭酸水素カリウム水溶液に激しく撹拌しながら注ぐ。

ジーＢＯＣおよびトリーＢＯＣ中間体（ＶＩ）の製造においては、好ましくは、カップ１ルグ反応溶液を炭酸水素カリウム水溶液に注ぐ。カップ１ルグ溶液の添加の間、該水性炭酸水素カリウムを激しく撹拌する。好ましくは、添加の速さくま約５００ｍ１〜ＩＬＺ分とすべきである。

中間体（ＶＩ）を濾過により集める場合、濾液が中性になるまでこれをよく洗浄すべきである。湿っぽい生成物は、再結晶および／またはＢＯＣ保護基の除去前に一定重量になるまで乾燥すべきである。

ＢＯＣ保護基は、酸により、所望によりカルボニウムイオン捕捉剤の存在下で除去する。トリフルオロ酢酸は、ＢＯＣ基を除去するのに適切な酸である。カルボニウムイオン捕捉剤を使用することが好ましい。典型的なカルボニウムイオン捕捉剤は、アニソール、ジメトキシベンゼンおよびメルカプタンである。ｎ−プロピルメルカプタンが適切である。

以下の実施例は、本発明の特定の実施を例示するものであり、本発明の範囲を限定するものではない。

実施例ＩＺ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−）ＪＨ２（７）製造塔頂撹拌ｔｌ＆ＣＤ）イｆ＝　丸１ｉ１７　ラスコ中、Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−０Ｈ（６８２，０ｇ、１．７９ｍｏ　＋）および１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール水和物（３３０，４ｇ。

２、１５ｍｏ　１）を順次ＤＭＦ　（１，０６Ｌ）に溶解した。得られた溶液を水浴中０〜５℃に冷却し、温度が１２℃を越えない速さで粉末漏斗を通してＷＳＣ（３７７、０ｇ、１．９８ｍｏｌ）を加えた。添加後、水浴を除き、該混合物を３０分間室温で撹拌した。次に、これを水浴中０〜５℃に再度冷却し、濃水酸化アンモニウム（２２５ｍＬ、３．５９ｍｏ　ｌ　ＮＨ３）のＤＭＦ　（５００ｍｌ）溶液を、温度が２５度未満を維持する速さで加えた。得られた溶液を室温で１．５時間撹拌し、ついで、激しく撹拌しながら、炭酸カリウム水溶液（５，６％ｗ／ｖ、３６Ｌ）にゆっくり加えた。分離した該白色固体をポンプで集め、洗浄液がｐＨ試験紙で中性になるまで脱イオン水（約２５Ｌ）で洗浄し、−夜空気乾燥した。この固体を、イソプロパツール（３，９５Ｌ）および脱イオン水（５，５５Ｌ）の混合物から再結晶して白色結晶を得、これをポンプで集め、イソプロパノ−ルー水（２：３ｖ／ｖ、２Ｌ）で洗浄し、一定重量になるまで真空中４５℃で乾燥した（４３６ｇ、６４．１％）　。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｅ、３６０ＭＨｚＭ　７．４−７．１５（ｍ、６Ｈ）、　６．９３（ｓ、２Ｈ）。

６．７２（ｂｒ　ｔ、ＩＨ）、　５．０２（ｓ、２Ｈ）、　３．９３−３．８３（ｍ、ＩＨ）、　２．９１−２．８０（ｍ、２１１）、　１D６５−１．２０（ｔ　６Ｈ）、１．３６（ｓ、　９ｔｌ）　：　ＭＳ（ＦＡＢ）　ｔｍ／ｅ　３．８０．３［Ｍ＋ＩＩＩ］”；　ＴＬＣＲｆ　Ｏ，５７（シ潟J、　９０：８：２クロロホルム：メタノール：酢酸）；　ＨＰＬＣＲＴ　７．０分（５μアルテツクス・ウルトラスフイア−（Ａｌｔｅｘ　Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）　（登録商標）　ＯＤＳ、４．６　Ｘ　２５０＋ｎ、１ｍｌ／分、グラジェント、Ａ：　１／９　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍリン酸二水素アンモニウムＢ：　１／１　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍリン酸二水素アンモニウム、０％− １００％Ｂ１０分かけて、１００％Ｂ３５分、２２０ｎｍでＵＶ検出）。

Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｎｕｔ　（２０，０ｇ、５３ｍｍｏ　＋　）をＤＭＦ　（１００ｍｌ）に溶解した。この溶液を水素化反応に適切なオートクレーブ（容量３００ｍ１）に移した。これに、１０％パラジウム炭素触媒（０，６７ｇ）のＤＭＦ　（２０ｍｌ）懸濁液を加えた。該オートクレーブに水素を１００ｐｓｉで充填し、タービン撹拌機を約６００ｒｐｍで作動させた。温度を２２〜２４℃に維持した。２時間後、撹拌を停止し、オートクレーブを開けた。ＨＰＬＣは出発物質が存在しないことを示した。

反応混合物をＤＭＦ洗浄セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）　（登録商標）吸着床を通して濾過した。ついで、該固体をＤＭＦ　（３５ｍｌ）で洗浄し、濾液および洗浄液を集めＬ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＢ２　（５３ｍｍ　ｏ　Ｉ　）およびトルエンのＤＭＦ　（１５５ｍｌ）溶液よりなるこの全生成物を、塔頂撹拌機のついた丸底フラスコに入れ、０〜５℃に冷却した。Ｚ−Ｄ−Ｐｈｅ　（，１７，１ｇ、５８ｍｍｏ　＋）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（９，６ｇ、６３ｍｍｏ＋）をこの溶液に順次溶解した。激しく撹拌しながら、粉末添加漏斗を通して、温度を１０℃未満に維持する速さでＷＳＣ（１２，８ｇ、６７ｍｍｏｌ）を加えた。ＷＳＣが溶解したら、該反応混合物を外界温度で１時間撹拌した。該反応混合物をＤＭＦ洗浄セライト（登録商標）吸着床を通して濾過し、ついで炭酸カリウム水溶液（５％ｗ／ｖ、１．６Ｌ）に激しく撹拌しながらゆっくり加えた。沈殿した固体をブフナー漏斗上で集め、溶出液がｐＨ試験紙で中性になるまで濾過ケーキを脱イオン水（約１．２Ｌ）で洗浄した。該固体を沸騰イソプロパツール（２４０ｍｌ）に溶解した。沸騰溶液に、曇り点まで脱イオン水（約２４０ｍ１）を加え、得られた溶液を０〜５℃で一夜冷却した。該固体をブフナー漏斗上で集め、水性イソプロパツール（１：１ｖ／ｖ、１００ｍ１）で洗浄した。該固体を真空中４０℃で乾燥した（２６．３ｇ。

９５％）　。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ、３６０ＭＨｚ）　６８．０９（ｄ、　ＩＢ、Ｊ−７Ｈｚ）、　７．５４（ｄ、　ＩＨｊ＝７Ｈｚj、　７゜４−７．１５（ｍ、１０Ｈ）、　７．０４（ｓ、２Ｈ）、　６．７０（ｂｒ　ｔ、ＩＨ）、　４゜９５（ａ＋、２Ｈ）、　４．３−４．１５iｍ、２Ｈ）、　３０−２．７（ｍ、４Ｈ）、１．７−１．０（ａ＋、６Ｈ）、１．３６（ｓ、９Ｈ）：　ＭＳ（ＦＡＢ）　Ｉｌｌ／ｅ　５２７．４［Ｍ＋［ｌR゛、５２５ＪＪｌｌ−Ｈ］−；　ＴＬＣＲｆ　Ｏ，６０（ノリ力、　９０：８：２クロロホルム：メタノール：酢酸）、ＥｒＰＬＣＲ７１６分（５μアルテツクス・ウルトラスフイア−（Ａｌｔｅｘ　Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）　（登録商標）ＯＤＳ、４．６Ｘ２５０＋ｍａ、１ｍｌ／分、グラジエンｌ−，、Ａ：　１／９　ｖ／ｖアセトニトリル／水−領３Ｍリン酸二水素アンモニウムＢ：　１／１　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０６３Ｍリン酸二水素アンモニウム、７５％Ｂ５分間、７５％ −１００％Ｂ　７．５分かけて、１００％Ｂ３５分、２２０ｎｍでＵＶ検出）。

Ｚ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨｔ　（２６，０ｇ、　４９ｍｍｏ　Ｉ　）をＤＭＦ　（１００ｍｌ）に溶解した。この溶液を水素化反応に適切なオートクレーブ（容量３００ｍ１）に移した。これに、１０％パラジウム炭素触媒（１，３ｇ）のＤＭＦ　（２０ｍｌ）懸濁液を加えた。該オートクレーブをシールし、ついで１００ｐｓ　ｉまでの水素の充填および放出を数回行った。該オートクレーブに１００ｐｓｉの水素を充填し、タービン撹拌機を約６００ｒｐｍで作動させた。温度を２２〜２４℃に維持した。約２時間後、撹拌を停止し、オートクレーブを開けた。ＴＬＣおよびＨＰＬＣは出発物質が存在しないことを示した。

反応混合物をＤＭＦ洗浄セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）　（登録商標）吸着床を通して濾過した。ついで、該固体をＤＭＦ　（５０ｍｌ）で洗浄し、濾液および洗浄液を集めた。

Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＢ２　（４９ｍｍ　ｏ　ｌ　）およびトルエンのＤＭＦ　（約１７０ｍ１）溶液よりなる全生成物を、塔頂撹拌機のついた丸底フラスコに入れ、０〜５℃に冷却した。Ｚ−Ｌ−Ｔｒｐ　（１８，６ｇ、５５ｍｍｏ　１）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（９，０２ｇ、５９ｍｍｏｌ）をこの溶液に順次溶解した。

激しく撹拌しながら、粉末添加漏斗を通して、温度を１０℃未満に維持する速さでＷＳＣ（１２ｇ、６２ｍｍｏ　１）を加えた。ＷＳＣが溶解したら、該反応混合物を外界温度で２．５時間撹拌した。この時、ＴＬＣはＤ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＢｚが存在しないことを示した。該反応混合物をＤＭＦ洗浄セライト（登録商標）吸着床を通して濾過し、ついで炭酸カリウム水溶液（５％ｗ／ｖ、ｌ。６Ｌ）に激しく撹拌しながらゆっくり加えた。固体として分離した生成物をポンプで集め、洗浄液が塩基性でなくなるまで脱イオン水（１，２Ｌ）で洗浄した。この湿った固体を沸騰メタノール（５００ｍ　ｌ　）に溶解し、曇り点まで脱イオン水（１５０ｍｌ）を加えた。該溶液を０〜５℃で一夜冷却した。

分離した該固体をブフナー漏斗上で集め、水性メタノール（５０％ｖ／ｖ、１００ｍ１）で洗浄した。該固体を真空中４０℃で乾燥した（３３．３ｇ、９５％）　、　’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｓ、３６０ＭＨｚ）６１０、７３（ｄ、　ＩＨ，Ｊ＝ＩＨｚ）、　８．４５（ｄ、　ＩＨ，Ｊ−７Ｈｚ）、　８．０５（ｄ、　ＩＨ，Ｊ＝７Ｈｚ）、　７．６（ｄA　１１　Ｊ−７１１ｚ）。

７．４−６．９（ｍ、１７Ｈ）、　６．７０（ｂｒ　ｔ、ＬＨ）、　４．９２（ｍ、２Ｈ）、　４．６．４．２５．４．１５各シグナル（ａB ＩＨ）、３．０−２．６（ｍ、６■）、１．７−１．０（ｉ、６［１）、１．３６（ｓ、９Ｈ）；　ＭＳ（ＦＡＢ）　ｒａｃｅ　７１３．６bＭ＋Ｈコー。

７１１．４［Ｍ−■］−：　ＴＬＣＲｆ　Ｏ，４６（シリカ、　９０：８：２クロロホルム：メタノール：酢酸）：ＨＰＬＣＲＴ　２１分（５μアルテツクス・ウルトラスフイア−（Ａｌｔｅｘ　Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）　（登録商標）　ＯＤＳ、４．６　Ｘ　２５０ｍｍ、１ｍｌ／分、グラジェント、Ａ：　１／９　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍリン酸二水素アンモニウムＢ：　１／１　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍリン酸二水素アンモニウム、７５％Ｂ　５分間、７５％−１００％Ｂ　７．５分かけて、１００％Ｂ３５分、２２０ｎｍでＵＶ検出）。

実施例４Ｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔ　−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｎｕｔの製造Ｚ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｎｕｔ　（３３，０ｇ、　４６　ｍｍ　ｏ　Ｉ　）をＤＭＦ（１００ｍｌ）に溶解した。この溶液を水素化反応に適切なオートクレーブ（容量３００ｍ１）に移した。これに、１０％パラジウム炭素触媒（２，２ｇ）のＤＭＦ　（２０ｍｌ）懸濁液を加えた。該オートクレーブをシールし、１００ｐｓ　ｉまでの水素の充填および放出を数回行った。該オートクレーブに１００ｐｓｉの水素を充填し、タービン撹拌機を約６０Ｏｒｐｍで作動させた。温度を２０−２８℃に維持した。約３時間後、撹拌を停止し、オートクレーブを開けた。ＴＬＣは出発物質が存在しないことを示した。

ＨＰＬＣは痕跡量の残留を示した。

Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ３（４６ｍｍ　ｏ　］　）のＤＭＦおよびトルエン（約２０ｍ１）溶液を、塔頂撹拌機のついた丸底フラスコに入れ、０〜５℃に冷却した。

Ｚ−Ｌ−Ａｌａ　（１１，３ｇ、５０ｍｍｏ　１）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（８，４７ｇ、５０ｍｍｏｌ）をこの溶液に順次溶解した。

激しく撹拌しながら、粉末添加漏斗を通して、１度を１０℃未満に維持する速さでＷＳＣ（１１，１ｇ、５８ｍｍｏｌ）を加えた。ＷＳＣが溶解したら、該反応混合物を外界温度で２．５時間撹拌した。該反応混合物をＤＭＦ洗浄セライト（登録商標）吸着床を通して濾過し、ついで炭酸カリウム水溶液（５％ｗ／ｖ、１．６Ｌ）に激しく撹拌しながらゆっくり加えた。固体として分離した生成物をポンプで集め、洗浄液が中性になるまで脱イオン水（１，６Ｌ）で洗浄した。吸引して可能な限り乾燥した後、この湿った濾過ケーキを沸騰メタノール（７００ｍｌ）に溶解し、曇り点まで脱イオン水（３００ｍｌ）を加えた。得られた溶液を０〜５℃で一夜冷却した。該固体をブフナー漏斗上で集め、メタノール−水（１：　１．　ｖ／ｖ。

２００ｍ１）で洗浄し、真空中４０℃で乾燥した（３４．８ｇ、９５％）。′ＨＮＭＲ（ＤＩＩＳＯ−ｄｓ、３６０Ｍ１１ｚ）　６１０．７３（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝ＩＨｚ）、　８．２７．８．１５．７．８８各シグナル（ｄAＩＬＪ港７Ｈｚ）、　７．５（ｄ、ＩＨ，Ｊ−７Ｈｚ）、　７．４−６．９（＋ｍ、１７１１）、　６．６９（ｂｒ　ｔ、ｌＨ）、　５．０（香A２Ｂ）。

４、６−４．０（ｍ、　４Ｅ［）、　３．０−２．７（ｍ、　６１１１）、　１．７−Ｌ　Ｏ（ｍ、　６１１）、　１．３６（ｓ、　９Ｈ）A　１．１２（ｄ、　３１１．　Ｊ−８１ｉｚ）；　ｌｌ５（ＦＡＢ）　ｒａｃｅ　７８４．６［Ｍ＋Ｂコ゛、　７８２．５［Ｍ−Ｈ］−；　ＴＬＣＲｆ　Ｏ，４６（シリカ、　９０：８：Qクロロホルム：メタノール：酢酸）；ＨＰＬＣ訂１９分（５μアルテツクス・ウルトラスフイア−（Ａｌｔｅｘ　Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）　（登録商標）　００５．　４．６Ｘ２５０ｍｍ＋、１ｍｌ／分、グラジェント、Ａ：　１／９　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍリン酸二水素アンモニウムＢ：　１／１　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍ　リン酸二水素アンモニウム、７５％Ｂ　５分間、７５％−１００％Ｂ　７．５分かけて、１００％Ｂ３５分。

２２ＯｎｌｌでＵＶ検出）。

Ｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｎｆｌｚ　（３４、５ｇ　、　４３　ｍｍ　ｏ　ｌ　）をＤＭＦ（１００ｍｌ）に溶解した。この溶液を水素化反応に適切なオートクレーブ（容量３００ｍ１）に移した。

これに、１０％パラジウム炭素触媒（３，４５ｇ）のＤＭＦ　（２０ｍｌ）懸濁液を加えた。該オートクレーブをシールし、ついで１０Ｑｐｓｉまでの水素の充填および放出を数回行った。該オートクレーブに１００ｐｓｌの水素を充填し、タービン撹拌機を約６０Ｏｒｐｍで作動させた。温度を２０〜２８℃に維持した。約３．５時間後、撹拌を停止し、オートクレーブを開けた。ＴＬＣは出発物質が存在しないことを示し、ＨＰＬＣは痕跡量の残留を示した。

反応混合物をＤＭＦ洗浄セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）　（登録商標）吸着床を通して濾過した。ついで、該固体をＤＭＦ　（５０ｍ　ｌ　）で洗浄し、濾液および洗浄液を集めた。

Ｌ−＾１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２（４３ｍｍ　ｏ　］　）のＤＭＦおよびトルエン（約２００ｍ１）溶液を、塔頂撹拌機のついた丸底フラスコに入れ、０〜５℃に冷却した。Ｚ−Ｄ−Ｔｒｐ　（１６，０ｇ、４８ｍｍｏ　１）およびｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（７，９９ｇ、５２ｍｍｏｌ）をこの溶液に順次溶解した。激しく撹拌しながら、粉末添加漏斗を通して、温度を１０℃未満に維持する速さでＷＳＣ（１０，４ｇ、５４ｍｍｏ　＋）を加えた。ＷＳＣが溶解したら、該反応混合物を外界温度で３時間撹拌した。この時、ＴＬＣはＬ−＾１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ −（ＢＯＣ）−Ｎ［Ｉ、が存在しないことを示した。該溶液をセライト（登録商標）吸着床を通して濾過した。該反応混合物を炭酸カリウム水溶液（５％ｗ／ｖ、１．６Ｌ）に激しく撹拌しながらゆっくり加えた。固体として分離した生成物をポンプで集め、洗浄液が中性になるまで脱イオン水（１，６Ｌ）で洗浄した。

吸引して可能な限り乾燥した後、この湿った濾過ケーキを沸騰エタノール（１，４Ｌ）およびＤＭＦ　（１００ｍｌ）に６０℃で溶解した。曇り点まで脱イオン水（４００ｍｌ）を加えた。得られた溶液を０〜５℃で一夜冷却した。該固体をブフナー漏斗上で集め、エタノール−水（１：　１．ｖ／ｖ、２００ｍ１）で洗浄し、真空中４０℃で乾燥した（３９．３ｇ、９３．６％）　、　’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄｓ、３６０ＭＦＩｚ）　６１０．８．１０．７各シグナル（ｄ、　ＩＨ，Ｊ村Ｈｚ）、　８．２０−７．８５（ｍ、　４［１）、　７．６５−６．９（ｍ、　２３ＥＩ）、　６．７０（ｂ秩@ｔ、　ＩＨ）。

５．０（＋ｍ、２Ｈ）、　４．６−４．０（ｍ、５Ｈ）、　３．１５−２．６（ｍ、８Ｈ）、　１．７−０．９（！１．６Ｈ）、　１．３７iＳ、９■）、１゜０４（ｄ、３Ｈ，Ｊ−８Ｈｚ）＋　ＭＳ（ＦＡＢ）　ｍ／ｅ　９７０．７［Ｍ＋Ｈ］−、９６８，６［１−Ｈ］−：　ＴＬＣＲｆ　０．３０iシリカ。

９０：８＋２クロロホルム、メタノール：酢酸）：　Ｅ［ＰＬＣＲＴ　２５分（５２アルテツクス・ウルトラスフイア−（Ａｌｔｅｘ　Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）　（登録商標）　ＯＤＳ、４．６　Ｘ　２５０ｗｍ。

１　ｍｌ／分、グラジェント、Ａ：　１／９　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍリン酸二水素アンモニウムＢ：　１／１　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍリン酸二水素アンモニウム、７５％Ｂ５分間、７５％−１００％Ｂ７．５分かけて、１００％Ｂ３５分、２２０ｎｍＴＵＶ検出）。

Ｚ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ） −ＮＨｔ　（３９，０ｇ、　４０　ｍｍ　ｏ　ｌ　）をＤＭＦ　（１００ｍｌ）に溶解した。この溶液を水素化反応に適切なオートクレーブ（容量３００ｍ１）に移した。これに、１０％パラジウム炭素触媒（５ｇ）のＤＭＦ　（３０ｍｌ）懸濁液を加えた。該オートクレーブをシールし、ついで１０Ｑｐｓｉまでの水素の充填および放出を数回行った。該オートクレーブに１００ｐｓｉの水素を充填し、タービン撹拌機を約６００ｒｐｍで作動させた。温度を２０〜２８℃に維持した。約５時間後、撹拌を停止し、１００ｐＳｉまでの窒素のオートクレーブへの充填および放出を数回行った。ＴＬＣおよびＨＰＬＣは出発物質が存在しないことを示した。

Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−＾１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２（４０ｍｍ　ｏ　１　）のＤＭＦおよびトルエン（約２００ｍ１）溶液を、塔頂撹拌機のついた丸底フラスコに入れ、水浴中で０〜５℃に冷却した。（ＢＯＣ）２−Ｌ−Ｈｉｓ　（１５，７ｇ、４４ｍｍｏ　り　、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（７，３９ｇ、４８ｍｍｏｌ）およびＷＳＣ（９，６３ｇ、５０ｍｍｏｌ）をこの溶液に順次溶解した。５分以内の間隔で各添加を行った。

ＷＳＣが溶解したら、該反応混合物を０〜５℃で１時間、ついで外界温度で一夜撹拌した。Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−Ｎｕｔの消失はＨＰＬＣにより監視した。該反応混合物をセライト（登録商標）吸着床を通して濾過した。得られた濾液を炭酸水素カリウム水溶液（１０％ｗ／ｖ、３Ｌ）に激しく撹拌しながらゆっくり加えた。固体として分離した生成物をポンプで集め、洗浄液が中性になるまで脱イオン水（約５Ｌ）で洗浄した。濾液が出なくなるまで吸引した後、この湿ったケーキを真空中３５℃で乾燥して４５．４ｇの固体を得たく９５％）。ＨＰＬＣの示すところによれば、主要な種がトリーＢＯＣ−へキサペプチド（８８，３％）で、次がジーＢＯＣ−へキサペプチド（９，５％）であった。

トリーＢＯＣおよびジーＢＯＣヘキサペプチド（５０ｇ）の粗混合物をＤＭＦ（１３０ｍｌ）１：６０℃で溶解した。メタノール（１，３Ｌ）、ついで活性化炭素（２５ｇ）を加えた。該混合物を２分間沸騰させ、セライトの吸着床を通して熱時濾過した。該ケーキを熱メタノール（５００ｍｌ）で洗浄した。集めた濾液および洗浄液を一１５℃で一夜冷凍した。分離した白色固体をポンプで集め、メタノール（２００ｍｌ）で洗浄し、真空中室温で一夜乾燥した（３７．１ｇ、７４．２％）　。’Ｅ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ、４００Ｍ）Ｉｚ）δ１０．８．１０．７各シグナル（ｄ、１１１．Ｊ＝ＩＨｚ）、　８゜２５−７．９（ａ’、　５Ｈ）、　８．１ｓ、　ＩＥＩ）、　７．５５−６．９（ｍ、　２０Ｈ）、　６．７５（ｂｒ　ｔ、　ＩＨ）、　４D６−４．１ｆ、　６Ｈ）。

３．１−２．６（ｍ、１０Ｈ）、　１．７〜１．０（ｍ、６Ｈ）、　１．５１（ｓ、９［１）、　１．３６（ｓ、９Ｈ）、　１．３０（ｄ、XＨ）、　１．０（ｄ。

３Ｂ、　Ｊ４Ｈｚ）：　ＭＳ（ＦＡＢ）　ｒａ／ｅ　１１７３．６［Ｍ＋Ｈコ゛（トリーＢＯＣ）、１０７３．５［Ｍ＋Ｈ］”（ジーＢＯＣj；ＴＬＣＲｆ　Ｏ，４４（ト’Ｊ　−ＢＯＣ）、　０．０２（シーＢＯＣ）（シリカ、　９０：８：２りＯＯホルム：メタノール：酢酸）、　Ｒｆ　Ｏ，９４（ト ’Ｊ−ＢＯＣ）、　０．４７（ン−ＢＯＣ）（シリカ、　４：１：１ブタノール：酢酸・水）：　ＥＩＰＬＣＲＴ　３１分（トＩＪ−ＢＯＣ，９０，２％）、８分（ン−ＢＯＣ，８，４％）　（５＋　フルテックス・ウルトラスフイア−（Ａｌｔｅｘ　Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）　、（登録商標）　ＯＤＳ、４．６Ｘ　２　’５０ｍｍ、１　ｍｌ／分、グラジェント　、Ａ：　１／９　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍリン酸二水素アンモニウムＢ・　１／Ｉ　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，３Ｍ　リン酸二水素アンモニウム、７５％Ｂ５分間、７５％− １００％Ｂ　７．５分かけて、１００％Ｂ３５分、２２ＱｎｍでＬ；Ｖ検出）。

実施例７Ｌ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−＾１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ− ＮＨｔの製造トリフルオロ酢酸（９６０ｍｌ）およびｎ−プロパンチオール（１５０ｍｌ）を混合し、１分間撹拌した。ＢＯＣ−Ｌ−Ｈｉ　５−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ −Ａ　１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ　（ＢＯＣ）−ＮｌｈおよびＢＯＣ−Ｌ−ｆｌ　ｉ　ｓ　（ＢＯＣ）−Ｄ−Ｔ　ｒｐ−Ｌ−Ａ　１　ａ−Ｌ− Ｔ　ｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙ　ｓ　（ＢＯb）−ＮＵ　ｔの混合物（６００ｇ）を撹拌しながら加えた。溶解が完了したら、該溶液を室温で２時間保った。

この時、サンプルをＨＰＬＣで分析して、所望の生成物の存在および出発物質の不存在を確認した。

該反応混合物を蒸発させてガムを得、これを蒸留水（３００ｍ　ｌ　）に溶解し、２回再蒸発させた。ついで、該混合物を蒸留水（ＩＬ）に溶解し、希水酸化アンモニウム水溶液を滴下することにより、ｐＨを約３に調整した。

この物質を逆相液体クロマトグラフィーにより精製した（ＹＭＣ型ＡＳ−５０５５、エンドキャップト・オクタデシル・シリカ、球形、粒径５０μおよび細孔サイズ１２０人）。吸着床サイズは内径５ｃｍｘ長さ５０ｃｍであり、吸着床容積９８１ｍ１に相当し、ステンレス綱ＨＰＬＣカラム中に充填した。また、同一の充填物（１９６ｍｌ）を含有する内径５ｃｍｘ長さ１０　ｃ’ｍのガート・ドカラムがあった。これは、ベックマン（Ｂｅｃｋ＋＊ａｎ）ブレツブ−３５０ＨＰＬＣシステムを用い、溶出液を２５４Ｍｍで監視して、０．１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液ｐＨ４゜５（４Ｌ）で平衡化した。

上記のｐＨを調整した反応混合物を、蒸留水（３００ｍｌ）でさらに希釈し、ついで流速１００ｍ１／分でカラムに載せた。該カラムを１．０Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ８（６，ＯＬ）　、ついで０．ＩＭ酢酸゛アンモニウムｐＨ４，５（２，５Ｌ）で洗浄した。該生成物を、以下のＯ，１Ｍ水性酢酸アンモニウムｐＨ４，５中のアセトニトリルの溶液での逐次溶出により除去した：１０％ｖ／ｖ　（ＩＬ）　、１５％ｖ／ｖ　（９００ｍｌ）　、１７％ｖ／ｖ　（ＩＬ）　、２０％ｖ／ｖ　（２，５Ｌ）、２５％ｖ／ｖ　（２，５Ｌ）。１２５ｍ１からＩＬの大きさの画分を集めた。最後に、該カラムを、０．１Ｍ水性酢酸アンモニウムｐＨ４，５（３，５Ｌ）中の５０％Ｖ　／　Ｖアセトニトリルで洗浄した。

該両分をＨＰＬＣで分析し、生成物を含有するものをプールした。アセトニトリルを蒸発させ、水性残渣を凍結乾燥した。得られた固体を蒸留水に２回再溶解し、再凍結乾燥してＬ４ｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ −Ｌ−Ｌｙｓ−ＮＢ２　（４７、６７ｇ）を得た。

生成物を蒸留水に溶解し、集め、０２μ膜（硝酸セルロース）と通して濾過した。濾液を凍結乾燥してＬ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−＾１ａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ− Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ−ＮＬ　（粉末）を得た。アミノ酸分析：Ｈｉｓ　（０，９９）　、Ａｈａ　（１，０）　、Ｐｈｅ　（１，０）　、Ｌｙｓ（１，０１）：紫外線吸収によるＴｒｐについての分析（１，９３）：Ｒ７１７分（５μアルテツクス・ウルトラスフイア−（Ａｌｔｅｘ　Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）　（登録商標）　ＯＤＳ。

４．６ｘ２５０ｍｍ、１ｍｌ／分、グラジェント、Ａ：　１／４　ｖ／ｖアセトニトリル／水−０，１Ｍ　リン酸二水素アンモニウム−０，８Ｍリン酸（トリエチルアミンでｐＨ３゜０に！Ｉ！Ｅ）　Ｂ・　３／７ｖ／ｖアセトニトリル／水 −０，１Ｍ　リン酸二水素アンモニウム−０，８Ｍリン酸（トリエチルアミンでｐＨ３，０１：調整）、Ｏ％Ｂ２３分間、０％−１００％Ｂ３７分かけて、２１０止でＵＶ検出）。

本製造法およびこれらの中間体の変形は、当業者に明らかである。本発明の範囲は、開示した特定の実施例に限定されるものではなく、以下の請求の範囲内のすべてを包含することを意図する。

国際調査報告フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｋ　５１０６　Ｚ　８３１８−４Ｈ／／　Ｃ０７Ｋ　９９：００Ｉ

Claims

【特許請求の範囲】

１．ａ）Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２をＺ−Ｄ−Ｐｈｅとカップリングさせ、ｂ）Ｚ基を除去し、得られたＤ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２をＺ−Ｌ− Ｔｒｐ−ＮＨ２とカップリングさせ、ｃ）Ｚ基を除去し、得られたＬ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）− ＮＨ２をＺ−Ｌ−Ａｌａとカップリングさせ、ｄ）Ｚ基を除去し、得られたＬ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２をＺ−Ｄ−Ｔｒｐとカップリングさせ、ｅ）Ｚ基を除去し、得られたＤ−Ｔｒｐ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ −Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２を（ＢＯＣ）２−Ｌ−Ｈｉｓとカップリングさせ、およびｆ）ＢＯＣ基を除去し、Ｌ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ− Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２を得ることを特徴とする式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で表される化合物の製造法。
２．それぞれのカップリング後に再結晶する請求項１記載の製造法。
３．保護基Ｚを接触水素化分解で除去する請求項１記載の製造法。
４．触媒が５〜１０％パラジウム炭素である請求項３記載の製造法。
５．大気圧から約１００ｐｓｉで接触水素化分解を行う請求項３記載の製造法。
６．接触水素化分解を約１００ｐｓｉで行う請求項４記載の製造法。
７．酸およびカルボニウムイオン捕捉剤を使用して保護基ＢＯＣを除去する請求項１記載の製造法。
８．酸がトリフルオロ酢酸で、カルボニウムイオン捕捉剤がｎ−プロピルメルカプタンである請求項７記載の製造法。
９．水溶性カルボジイミドおよび１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾールを使用してカップリング反応を行う請求項１記載の製造法。
１０．式：Ｚ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２［式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル、およびＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す］で表される固体の再結晶可能な化合物。
１１．式：Ｚ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２［式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル、およびＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す〕で表される固体の再結晶可能な化合物。
１２．式：Ｚ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２〔式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル、およびＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す］で表される固体の再結晶可能な化合物。
１３．式：Ｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）− ＮＨ２［式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル、およびＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す］で表される固体の再結晶可能な化合物。
１４．式：▲数式、化学式、表等があります▼［式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル、およびＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す］で表される固体の再結晶可能な化合物。
１５．式：▲数式、化学式、表等があります▼［式中、ＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す］で表される固体の再結晶可能な化合物。
１６．▲数式、化学式、表等があります▼をＢＯＣ−Ｌ−Ｈｉｓ（ＢＯＣ）およびカップリング試薬と反応させることを特徴とする式：▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、ＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す］で表される化合物の製造法。
１７．▲数式、化学式、表等があります▼をＺ−Ｄ−Ｔｒｐおよびカップリング試薬と反応させることを特徴とする式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル、およびＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す］で表される化合物の製造法。
１８．Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２をＺ−Ｌ−Ａｌａおよびカップリング試薬と反応させることを特徴とする式：Ｚ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２［式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル、およびＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す］で表される化合物の製造法。
１９．Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２をＺ−Ｌ−Ｔｒｐおよびカップリング試薬と反応させることを特徴とする式：Ｚ−Ｌ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２［式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル、およびＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す〕で表される化合物の製造法。
２０．Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２をＺ−Ｄ−Ｐｈｅおよびカップリング試薬と反応させることを特徴とする式：Ｚ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＢＯＣ）−ＮＨ２［式中、Ｚはベンジルオキシカルボニル、およびＢＯＣはｔ−ブチルオキシカルボニルを示す］で表される化合物の製造法。