JPH06500554A - エイズ性痴呆、脊髄障害、末梢神経障害、および視覚喪失の治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

エイズ性痴呆、を髄障害、末梢神経障害、および視覚喪失の治療発明の背景 本発明は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）感染によって引き起こされる神経系 障害の治療に関する。 ヒトにおけるＨＪＶ感染は一般的な免疫抑制を引き起こし、を髄障害、視覚喪失 、末梢神経障害、および痴呆性神経障害、すなわちエイズ性痴呆合併症（このう ち後者がＨＩＶ−感染患者の死の普通で重要な原因である）を含めた他の神経学 的発現のごとき他の障害に関係する。ＨＩＶ感染は、大脳皮質、を髄、および網 膜を含めた中枢神経の種々の部位につき記載されている。プラス（Ｐｒｉｃｅ） ら（１９８８、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　２３９　：　５８６　）および ホー（ＢＯ）ら（１９８９、アナルズ・イン・インターナショナル・メデイシン （Ａｎｎａｌｓ　ｉｎ　Ｉｎｔｅｒｎａ−ｔｉｏｎａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）　 １１１　：　４００　）は、エイズ性痴呆合併症の臨床的、疫学的および病理学 的態様について総括しており、神経機能障害における機構はマクロファージおよ び小膝細胞のごとき感染細胞によって放出されるウィルスもしくは細胞由来毒性 物質いずれかによる間接的組繊障害かも知れないと示唆している。エイズ関連痴 呆を患う患者の脳に存在する従前より知られている白色物質病変に加え、日和見 性重感染の不存在下においてさえ、ニューロンのほぼ２０％が損傷を受けている 、あるいは死滅しているという証拠がある（ケツラー（Ｋｅｔｚｌｅｒ）ら、１ ９９０、アクタ−＝ニーｏバソロジカ（Ａｃｔａ　Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇ ｊｃａ）８０　：　９２）。 ポメランツ（Ｐｏｍｅｒａｎｔｚ）ら（１９８７、ニュー・イングランド・ジャ ーナル・オブ・メディシン（Ｎｅｗ　Ｅｎｇ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　）、旦１ユニ １６４３）は、エイズに罹った２人の轡者の網膜にＨＩＶ　Ｉ型感染が存在する ことを記載している。テヌラ（Ｔｅｎｈｕｌａ）ら（１９９０，インベステイガ テイブ・オプサルモロンー・アンド・ヴイジュアル・サイエンス（Ｉｎｖｅｓｔ 、　Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ、　Ｖｉｓ、　Ｓｃｉ、　）　３１　：　３６５　）は 、ＨＩＶ感染患者で視神経の軸索の喪失を報告しており、これは網膜神経節細胞 二ニーロンの喪失を示唆する。ブレンネマン（Ｂｒｅｎｎｅｍａｎ）ら（１９８ ８、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）３３５　：　６３９）は、ＨＩＶの外皮蛋白ｇ ｐ１２０が試験管内で海馬ニューロンを殺すことを見い出している。 発明の概要 本発明は、ヒト免疫不全ウィルスに感染した患者のニューロンにおける細胞内遊 離Ｃａ”イオン濃度のｇｐ１２０−反応性上昇および該患者の該ニューロンの引 き続いての死滅の低下を引き起こすのに有効な濃度で、レベモパミルまたはその 生理学的に許容される塩を該患者に投与することにより、該ヒト患者挺おいてニ ューロンに対する損傷を減少させる方法を要旨とする。「ヒト免疫不全ウィルス 」とは、ＨＩＶ−１、ＨｒＶ−２、ＬＡＶその他を含めたヒト免疫不全ウィルス （ＨＩＶ）のすべてのタイプおよび変異体を意味する。好ましい具体例において 、該ニューロンは中枢または末梢神経系から由来するものでよい。 好ましくは、感染患者の血液は抗ＨＩＶ抗体を含有し：最も好ましくは、該患者 はエイズ関連合併症の徴候、または後天性免疫不全症候群の徴候を示すものであ る。最も好ましくは、レベモパミルは経口または静脈内投与する。また、該方法 は、細胞内遊離Ｃａ”イオン濃度のｇｐ１２０一応答性上昇の減少を引き起こす のに有効な濃度にて、かかる減少が可能な第２の化合物を患者に投与することを 含めても良い。最も好ましい第２の化合物は、ニフェジピン、ベラパミル、ニト レンジピン、シルティアゼム、スミス・クライン薬剤番号９５１２、ニモジピン 、アムロジピン、ニカルジピン、フルナリジン、およびジプロテベリンを含めた 表１．２および３に掲げるカルシウムチャンネル拮抗剤である。他の好ましい第 ２の化合物は、チャンネルブロッカ−、レセプター拮抗剤、またはグリシン共作 動剤部位または亜鉛部位、マグネシウム部位、ポリアミン部位、ｐＨ−感受性部 位、もしくはレドックス調節部位のごときいくつかの調節部位のうちのいずれか に作用する薬剤を含めたＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）レセプタ ー−チャンネル複合体の拮抗剤を含む。好ましいＮＭＤＡレセプター−チャンネ ル拮抗剤の中には、表４に掲げたもの、例えば、ＭＫ−ｓｏｌおよびＤ−２−ア ミノ−５−ホスホノバレレート（ＡＰＶ）がある。 本発明は、痴呆、を髄障害、末梢神経障害、視覚喪失またはヒト免疫不全ウィル スによる感染に関連する他の神経学的発現の低下または（予防的治療を含めた） 防止に有用である。脳摂取指標（ＢＵＩ）分析は、レベモバミルは血液から脳へ と容易に通過し、極端に速くかつ異常に優れた治療を容易とすることを示す。 本発明の他の特徴および利点は、好ましい具体例および請求の範囲についての以 下の記載から明らかとなるであろう。 好ましい具体例の記載 ４、

【図面の簡単な説明】

図面 図１は異なるｇｐ１２０１１度における網膜神経節細胞の死滅を示す用量−反応 曲線である。 図２は組換えｇｐ１２０および抗血清の存在下における網膜細胞生存のグラフで ある。 図３（ａ）は種々の用量のｇｐ１２０に対する応答における、網膜神経節の細胞 内遊離Ｃａ”濃度（［Ｃａ”］　ｉ］の動力学のグラフであり、（ｂ）は［Ｃａ 　”］　ｉに対するｇｐ１２０濃度の定常状態の用量−反応グラフである。 図４はｇｐ１２０単独またはｇｐ１２０抗血清で免疫沈降させたｇｐ１２０の存 在下における、［Ｃａ　”］　ｉのｇｐ１２０促進上昇の棒グラフである。 （（Ｓ）−エモパミルとしても公知の（米国特許第４５９６８２０号））薬剤レ ベモパミルは、血液−脳関門を容易に通過する（すなわち、ＣＮＳ透過性である ）カルシウムチャンネル・ブロッカ−である。この薬剤は、ＨＩＶ−１感染と関 連する骨髄障害、視覚喪失、および痴呆症のごとき中枢神経障害を治療するのに 用いることができる。 レベモパミルは、多数の経路にうちのいずれの１の経路によっても投与できる。 例えば、レベモバミルはＣＮＳ透過性であるので、投与は、毎日２または３回、 ０．１ないし５０ｍｇ／ｋｇ体重の示唆分割用量にて、経口または静脈内投与で きる。それほど好ましいものではないが、投与は、毎日２または３回、０．１な いし５０ｍｇ／ｋｇ体重の示唆用量にて、髄腔内または硝子体内投与できる。 望むならば、レベモパミルと組み合わせて、第２のＣａ”チャンネル拮抗剤を患 者に投与することができる。好ましい第２化合物の用量は以下の通りである。 ニモジピンまたはスミス・クライン（Ｓｍｉｔｈ　Ｋ１１ｎｅ）薬剤番号９５１ ２、ニカルジピン、フルナリジン、またはジプロテベリンは、６０ないし１２０ ０ｍｇ／日の示唆分割用量にて、経口または静脈内投与できる。ＭＫ−８０１は 領０１ないし５．Ｏｍｇ／ｋｇの日用量にて用いることができる。ニフェジピン は２０ないし８００ｍｇ／日の用量にて投与し：また、ジルティアゼムは６０な いし９６０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。これらの各化合物は、好ましくは髄腔 内または硝子体内投与する。他の示唆される第２化合物（例えば、表１〜４に示 すもの）の有効用量は０．０１ないし１０００ｍｇ／ｋｇの範囲である。 以下に、ＨＩＶ−１感染は神経系に関連する細胞に有害であること；かかる神経 細胞損傷は細胞内Ｃａ”“のｇｐ１２０蛋白−媒介増加の結果であることを詳細 に説明する。また、レベモバミルの最大有効レベルを当業者が決定するのに必要 な指針を提供するアッセイについても詳細に記載する。 試験管内ニューロン細胞死滅アッセイ ニューロン細胞死は、網膜神経節細胞を試験管内で精製した天然または組換えｇ ｐ１２０と共にインキュベートし、生細胞をスコア取りすることによって検定で きる。二ニー・ロン細胞死滅を減少させるレベモパミルの能力は、ｇｐ１２０お よび当該薬剤と共に一晩インキユベートした生細胞のスコア取りによって決定で きる。 出生後ラットからの網膜神経節細胞は以下のごとくに同定し、その生存率を確認 する。一般的麻酔下、蛍光染料グラニュラ−ブルー（マクロモレクラーレ・ヘミ ツク（Ｍａｃｒｏａ＋ｏｌｅｋｕｌａｒｅ　Ｃｈｅｍｉｃ）、ウムシュタット（ Ｉｌｍｓｔａｄｔ）、ＦＲＧ）をほぼ２％（Ｗ／　Ｖ　）のモーライン中懸濁液 として、４ないし７日齢のロング・エバンズ（Ｌｏｎｇ　Ｅｖａｎｓ）ラット（ チャールズ・リバー・ラボラトリ−（Ｃｈａｒｌｅｓ　ＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａ ｔｏｒｙ）、ウイルミントン、マサチューセ・ソツ州）の上圧に注射した。２な いし７日後、該動物を断頭によって殺し、摘出し、網膜を素早く取り出す。次（ １で、リプトン（Ｌｉｐｔｏｎ）ら（ジャーナル・オブ・フイジオロシー（Ｊ、 　Ｐｈｙｓｉｏｌｌ、　）、０．７％（ｗ／ｖ）メチルセルロース、２ｍＭグル タミン、ｌμｌ／ｍ＋ゲンタマイシン、１６ｍＭデキストロース、および５％（ Ｖ　／　Ｖ　）う・ソト血清を補足したイーグルの最小必須培地（ＭＥＭ、カタ ログ番号１０９０、ンブコ・グランド・イスランド（Ｇｉｂｃｏ　Ｇｒａｎｄ　 ｌ５ｌａｎｄ）、ニューヨーク州）中で培養する。該細胞を、３５ｍｍ組織培養 皿中、ポリーＬ−リジンで被覆した７５ｍｍ２カツ（−ガラス上で平板培養し： 次いで、ｇｐ１２０を添加した。同胞培養に、ｇｐ１２０と共（こあるいはそれ なくして、種々の用量のレベモバミルを与える。 細胞生存は、培養中の１日後に検定する。インキュベーションは５％ＣＯ２／９ ５％空気の雰囲気下、３７℃で２０〜２４時間継続する。神経節細胞は、連続的 に存在させる蛍光青色染料によって確実に同定できる。／Ｘ−ン（Ｈａｈｎ）ら （１９８６、プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイ エンシズ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃｄ、　Ｓｃｉ、）　ＵＳＡ８旦：６５５ ６））に記載されて０るごとくに、フルオレセインジアセテートを取り込みそれ をフルオレセインに切断する網膜神経節の能力をその活力を指標として使用する 。染料取り込みおよび切断は、パッチ電極で検定した通常の電気生理学的特性と よく相関する。 生存率テストを行うため、細胞培養培地を、領０００５％フルオレセインジアセ テートを含有する生理食塩水と１５〜４５秒間で交換し、次０で、細胞を生理食 塩水中ですすぐ。蛍光染料を含まず（か（して、生きていなＬ））網膜神経節細 胞は、しばしば、相−コントラストおよびＵＶ蛍光光学双方下で目に見えるまま であり、後者はマーカー染料グラニュラ−ブルーの連続存在のためである：他の 死んだ網膜神経節細胞は崩壊し、夾雑物のみが残る。対照的に、生きた網膜神経 節細胞はＵＶ光で青色を示すのみならず、蛍光に適したフィルターをかけると黄 色−緑色の蛍光を示す。かくして、２の交換可能な蛍光フィルター・セットの使 用により、（通常、はぼ１：１０の単独：クラスターの比で）、単独ニューロン として見い出されるか、あるいは小クラスター中の他の細胞の間に存在する、培 養中の生きた神経節細胞の迅速な測定が可能となる。 ｇｐ１２０は以下のごとくに生産し精製する。ロベイ（Ｒｏｂｅｙ）ら（１９８ ６、プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンシズ ８７）、およびコルンフェルトら（Ｋｏｒｎｆｅｌｄ）ら（１９８８、ネテチャ −（Ｎａｔｕｒｅ）３３５：４４５）によって記載されているごとくに、ｇｐ１ ２０の２の天然単離体ＲＦ２および３Ｂ（ブレンネマン（Ｂｒｅｎｎｅｍａｎ） ら、１９８８、前掲：ネイチャ−（Ｎａｔｕｒｅ）３３５　：　４４５　；ナシ ョナル・キャンサー・インスティテユート（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　 Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）、フレデリック（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ）、メリーランド州 ）を免疫親和性クロマトグラフィーによって精製する。加つるに、ｇｐ１２０− ３Ｂをコードする遺伝子由来の組換えｇｐ１２０は以下のごとくに得られる。 組換えｇｐ１２０は、アミノ酸６１〜５３１をコードする単離体３Ｂ工ンベロー プ暗号配列を含有するプラスミドでチャイニーズ・ハムスター・オバリー（ＣＨ Ｏ）細胞細胞系（ＡＴＣＣ）をトランスフェクトすることによって生産される（ ラスキ４−　（Ｌａｓｋｙ）ら、１９８６、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２ ３３　：　２０９）。該遺伝子を切断して天然アミノ末端シグナル配列およびカ ルボキシ末端膜内外ドメインを除去し、次いで、単純庖疹ウィルス糖蛋白−〇シ グナル配列（べ能とする。哺乳動物細胞における生産により、該エンベロープ蛋 白は糖鎖化されていることが確認される。このエンベロープ糖蛋白ｒｇｐ１２０ −３Ｂは免疫親和性クロマトグラフィーによって精製し、ポリアクリルアミドゲ ル電気泳動およびウェスタンプロットにより見積もって５ｐｐｍ　（９９，９９ ５％）の純度である。（低濃度の）ｇｐ１２０調製は、活性を示すには、（再冷 凍を避けて）新たに溶解される必要性が大のようである。 ｇｐ１２０は試験管内にてニューロン細胞死滅を増大させる。 ニューロン細胞の死滅は、網膜神経節細胞を、試験管内にて、精製した天然また は組換えｇｐ１２０と共にインキュベートし、生細胞をスコア取りすることによ って検定する。 図１は１０−９Ｍないし１０−＋ｓＭ未満の範囲のｇｐ１２０濃度における用量 −反応曲線であり、培養した網膜細胞と共に天然の精製したｇｐ１２０（ＲＦ２ ）もしくは組換えｇｐ１２０調製とのインキュベーションの結果、２４時間以内 にかなり多数の神経節細胞が死滅することを示す。細胞死滅の有意な（Ｐ＜０． ０１）増加は２Ｘ１０−”Ｍを超えるｇｐ１２０濃度で観察された。各培養にお ける処理の知識なくして生細胞をスコア取りした。対照培養は７５ｍｍ２カバー グラス当たり９５〜２５０の範囲の網膜神経節細胞が計数されたが、これは、合 計網膜細胞集団のほぼ１％に対応するものであった。各実験につき少なくとも３ 回繰り返して各点を測定し、データは３つの実験を示すものであった。示した値 は平均値上その標準誤差である。統計分析は、分散のワン・ウェイ（ｏｎｅ　ｗ ａｙ）分析、続いての平均値のシェッフエ（Ｓｃｈｅｆｆｅ）多重比較より成る ものであった。これらの結果は、本実験におけるニューロン細胞死滅はｇｐ１２ ０の添加によることを示す。この結果を確認するために、対照実験を行い、そこ ではニューロン細胞死滅はｇｐ１２０エンベロープ蛋白特異的抗血清の添加によ って妨げられる。 ｇｐ１２０抗血清はｇｐ１２０関連ニューロン細胞の死滅を妨げる。 ｇｐ１２０の３Ｂ単離体の組換え断片十フロイントのアジュバントの初回および 第２回筋肉的免疫化によってヤギ抗−ｇｐ１２０免疫血清を調製する。これらの 注射に先立ち、免疫前血清を各ヤギから収集する。免疫後血清中のｇｐ１２０抗 体の存在は、免疫精製ｇｐ１２０のポリアクリルアミドゲル電気泳動およびウェ スタンブロンドによって確認する。 図２は抗−ｇｐ１２０抗血清が組換えエンベロープ蛋白（ｒｇｐ１２０−３Ｂ） によるラット網膜神経節細胞のニューロン細胞死滅を妨げたことを示す。２゜ｐ Ｍのｇｐ１２０と、ヤギＧ１０８４からの多クローンｇｐ１２０抗体を含有する 免疫後血清もしくは同ヤギからの免疫前血清いずれかとの存在下または不存在下 で、８日齢ラットからの網膜培養を平板培養した。血清は、対照増殖培地中に１ ：５００希釈した濃度で用いた。図２は５種の独立したアッセイからのデータを 示し：誤差の棒は平均値の標準誤差を示す。前記したごとくに統計解析を行った 。 これらの結果は、抗−ｇｐ１２０はｇｐ１２０の精製調製の効果を中和する：す なわち、２０ｐＭのｇｐ１２０で処理した培養における細胞死滅は、ヤギ抗−ｇ ｐ１２０血清の培養培地への添加によって妨げ得ることを示す。抗体調製物また はその免疫前血清単独はいずれも、対照培養培地で観察されるのと比較して有意 に生存に影響を与えなかった。対照的に、ｇｐ１２０またはｇｐ１２０＋免疫前 血清の添加の結果、網膜神経節細胞を有意に死滅させる（Ｐ＜０．０１）。さら に、ｇｐ１２０単独またはｇｐ１２０＋免疫前血清で処理した培養に比較すると 、抗−ｇｐ１２０血清はｇｐ１２０に暴露された網膜神経節の有意な割合を少な くした。ｇｐ１２０の存在下における抗血清Ｇ１０８４での処理の結果、対照培 地単独中でインキュベートした培養と統計的に異ならないニューロン細胞が計数 された。これらの図は培養における単独細胞およびクラスター細胞を共に示すが 、最も適切な結果は、クラスター細胞についてのものである。というのは、ニュ ーロンは脳において相互に連結しているからである。 細胞内Ｃａ”の測定 細胞内遊離Ｃａ”の濃度（［Ｃａ”］　ｉ）は、Ｃａ”＋感受性蛍光染料ｆｕｒ ａ　２を用いるディジタル画像顕微鏡によって出生後ラット網膜神経節細胞およ び海鳥ニューロンで以下のごと（に測定する。文献に記載されているごと（に（ レイファー１９８７）、１ないし２退部ロング・エバンス（Ｌｏｎｇ　Ｅｖａｎ ｓ）ラットからの網膜神経節を培養する。該神経節細胞を、逆行性輸送された赤 色蛍光染料（ＤｉＩまたはローダミン標識マイクロスフイア）の存在によって、 あるいは形態学的基準および免疫蛍光的基準（例えば、ニューロフィラメント抗 体で染まる大きなまたはα一様神経節細胞：トレーガ−（Ｄｒａｇｅｒ）ら、ネ イチャー（Ｎａｔｕｒｅ）３０９　：　６２４．１９８４）によって同定する。 Ｃａ”測定の間、特に断りのない限り、ニューロンを浸す流体はハンクスの平衡 化塩：１３６．７ｍＭ　ＮａＣｌ、１ｍＭＮ　ａ　ＨＣＯｓ、０　、３４　ｍＭ 　Ｎ　ａ　２ＨＰ　Ｏ４，０，４４ｍＭ　ＫＨ２ＰＯ４，５，３６ｍＭＫｃＩ、 ２．５ｍＭ　ＣａＣｌ２．０．５ｍＭ　ＭｇＳＯ４，３，５ｍＭＭｇＣｌ□、５ ｍＭ　Ｈｅｐｅｓ　ＮａＯＨ，２２，２ｍＭグルコース、およびフェノールレッ ド指示薬（０，００１％ｖ／ｖ）；ｐＨ７，２よりなる。外皮蛋白ｇｐ１２０お よび他の物質は、通常、この浴溶液への希釈後の圧出により該ニューロンに適用 する。高に°溶液はＮａＣｌとＫＣＩを置き換えることによって調製する。ニュ ーロンの［Ｃａ”コ　ｌは文献記載（グリンキービッツ（Ｇｒｙｎｋｉｅｗｉｃ ｚ）ら、５５８　（１９８５）：コノール（Ｃｏｎｎｏｒ）ら、ジャーナル・オ ブ＋＝、−ｏサイセトキンーメチルエステル（Ａ　Ｍ　）で分析する。１０μＭ のｆｕｒａ２−ＡＭを含有するイーグルの最小必須培地を網膜または海鳥細胞ニ ューロンに添加した後、培養を５％Ｃｏ２／９５％空気の湿潤チャンバー中、３ ７℃でインキュベートし、次いですすぐ。染料を負荷し、捕捉され、安定な蛍光 比によって測定されるごとくに１時間内に脱エステル化され、［Ｃａ　”］　ｉ に対するＣａ２”イオノフオア・イオノマイノンの効果を測定する。Ｃａ”画像 処理の間、細胞をハンクスの平衡化塩を含むＨｅｐｅｓ−緩衝化生理食塩水の溶 液中でインキュベートする。Ｚｅｉｓｓ＾ｘｉｏｖｅｒｔ　３５顕微鏡上に据え 付けたＤＡＧＥ　ＭＴＩ　６６　ＳＩＴまたはＱＵＡＮＴＥＸ　ＱＸ−１００増 感ＣＣＤカメラを用い、３５０および３８０ｎｍにより励起される５００ｎｍの 蛍光を測定することによって得られる像比から［Ｃａ　”］　ｉを計算する。各 写真についての露出時間は５００ｍ５である。分析はＱｕａｎｔｅｘ（サニーベ イル（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ）、カリフォルニア州）　ＱＸ７−２１０イメージ− プロセッシング系で行う。細胞はデータ収集の間紫外光のみに暴露するので（一 般に、合計２０秒／細胞未満）　、ｆｕｒａ２の脱色は最小である。 ｇｐ１２０はＣａ”の細胞内濃度に影響する。 ｇｐ１２０促進神経毒は以下の実験における細胞内Ｃａ　２Ｊ１度の増加に関係 することが示された。細胞内Ｃａ”は前記したごとくに測定した。前記したごと く、組換え源からの高精製ｇｐ１２０の２００ｐＭの適用により、［Ｃａ　”］ 　ｉの驚くべき増加があった（図３）。外皮蛋白の添加前に得られた対照レベル （Ｃａ”＝３６±４ｎＭ、平均値±ＳＥＭ１ｎ＝４２）に比較して、ｇｐ１２０ 適用の７分内にレベルは３３倍増加した（２１００±３３０ｎＭ、ｎ＝１０　； 　９３４ないし３９４３ｎＭの値の範囲）。天然単離体（ＲＦ２および３Ｂ）か ら精製したｇｐ１２０の他の調製は同様の結果を示した。本明細書中に示したす べての実験では高精製組換えｇｐ１２０を用いた。 ｇｐ１２０を海馬ニューロンに適用した場合に同様の効果が観察される。胚１８ 日ＣＤラットの海鳥皮質をトリプシン（０，０２７％Ｗ／Ｖ）でノくラノくうに し、３５ｍｍ培養皿当たり６０００００個の細胞の密度で平板培養し、各皿には ５個のポリーＬ−リジン被覆カバーガラスを含有させた。増殖培地（ローゼンベ ルグ（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）ら、ニューロサイエンス・レターズ（Ｎｅｕｒｏｓ ｃｉ、　Ｌｅｔｔ、　）、１旦旦１６２．１９８９）は１週間当たり３回交換し た。これらの実験において、Ｃａ”測定は培養１４ないし２１日後に行った。総 じて、２００ｐＭのｇｐ１２０はテストしたニューロンの７６％において［Ｃａ 　”］　ｉの増加を示した（ｎ＝７５）。 い（つかの実験は、ｇｐ１２０が［Ｃａ”］　ｉのこの増加の原因であることを 示す。引き続いてのｇｐ１２０の同一網膜神経節細胞ニューロンへの添加は［Ｃ ａ　”］　ｉを〜２μＭまで増加させたが（ｎ＝１０）、通常の浴媒質の適用は ［Ｃａ　”］　ｉの変化を起こさなかった。トリプシンでのｇｐ１２０の処理、 続いての大豆トリプシン阻害剤（シグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓｉｇｍａ　 ＣｈｅｌＩｌｉｃａｌＣｏ、）、セントルイス、ミズリー州）での中和の結果、 もはや［Ｃａ　”］　ｉ増加に活性を持たない調製となった。組換えｇｐ１２０ は単純庖疹ウィルス糖蛋白Ｄシグナル配列を持つ構築体から作ったので、組換え ｇｐ１２０として同−媒質中で正確に作った糖蛋白り対照を網膜神経節細胞に適 用した。糖蛋白りは効果を示さなかったし、また、中捏度の［Ｃａ　”］　ｉの 増加を引き起こしたが（＜２００ｎＭ、ｎ−６）　、’４モルｇｐ１２０の添加 後に典型的に観察されたマイクロモルレベルまでではなかった。 ５ＱｍＭ　ＫＣＩのごれらのニューロンへの圧入により、［Ｃａ”］　ｉを６０ ０ｎＭまで増加させた（６００土９９ｎＭ、、ｎ＝５）　。ＫＣｌに３０秒ない し３分間軽くａ露すると、二のレベルのＣａ”となり、添加開始１５分内にピー クが形成され、次の数分間にわたり〜２５０ｎＭのレベルまで回復した（２４゜ ±２１ｎＭ、ｎ＝５）。対照的に、いくばくかの［Ｃａ２＋］　１の増加を引き 起こすには２００ｐＭのｇｐｌ、２０の少なくとも１分間添加が必要であり、そ の効果は単一の細胞についての実験の間、継続的かつ不可逆的であった（１０な いし３０分の［Ｃａ　”］　ｉモニタリング、測定は３０秒毎）。ｇｐ１２０の 種々の用量の３分間適用によって喚起される［Ｃａ２”］　ｌの経時変化を図に 示す。ピークレベルには添加開始後〜７分て達した。かくして、ｇｐ１２０とは 反対に、Ｋ゛に対する反応において観察される）Ｃａ　”］　ｉの増加には、定 性的なものと定量的なもの双方がある。 ピコモル範囲において極端に低用量のｇｐ１２０は、徐々に用量−依存的に［Ｃ ａ　２−］　ｉを増加させるのに効果的であった（図３Ｂ）。２ＯｐＭもの低ｇ ｐ１２０が［Ｃａ　”ｌ　ｉを増加させた。遊離Ｃａ”’（≧２μＭ）の非常な 高レベルが２００ｐＭあるいはそれを超えるｇｐ１２０濃度で得られた。 ｇｌ）１２０で観察される［Ｃａ　２−１　ｉの増加はウィルス・エンベロープ 蛋白の精製調製物中の汚染物によって引き起こされるのかも知れない。しがし、 高精製組換えｇｐ１２０ではそうではないようだ。さらに確認するために、プロ ティンＡを被覆したセファロースビーズにカップリングさせたヤギ抗ｇｐ１２０ 抗体（抗−ｇｐ１２０）を用いる免疫沈降実験を以下のごとくに行った。 ｇｐ１２０の免疫沈降は前記したものをいくらか修飾して行った。同一ヤギから の抗−ｇｐ１２０または免疫前血清の１　：　１００または１　：　５００希釈 物をプロティン−Ａ被覆セファロースビーズに結合させ、洗浄し、７ｎＭ　ｇｐ １２０を含有する溶液と共に４℃にて１８時間インキュベートし：続いて、遠心 した。 免疫前血清で処理した物質の上澄は、イムノブロッティングならびに［Ｃａ　” ］　ｉおよび細胞死滅の増加（１：　３５０ないし〜２０ｐＭの希釈後）で確認 されたごとく、ｇｐ１２０活性を有していた：抗−ｇｐ１２０に暴露した物質は ほとんどまたは全熱活性を有していなかった。 かかる３つの実験のうち１つを図４に示す。免疫前血清での処理は［Ｃａ　２″ ］　ｉを増大させるｇｐ１２０の能力を有意に変更させなかった（縞を付した棒 と灰色の棒を比較せよ；平均［Ｃａ　”］　ｉはｇｐ１２０単独適用後よりも、 免疫前血清で処理したｇｐ１２０の適用後の方が大であったが、この差異は統計 的有意性には至らなかった。対照と比較すると（Ｐ＜０．０１、分散分析（ＡＮ ＯＶＡ）、続いて平均値のシェフェ多重比較；有意性は星印で示す）、ｇｐ１２ ０および免疫前血清処理ｇｐ１２０は共に［Ｃａ　”］　ｉを有意に増加させた 。対照的に、抗−ｇｐ１２０を含有する免疫後血清での免疫沈降により、ｇｐ１ ２０の効果は完全になくされた（図４の最後の右欄）。 ｇｐ１２０媒介ニューロン細胞死滅に対するレベモバミルの効果ｇｐ１２０媒介 ニューロン細胞死滅に対するレベモバミルの効果およびカルシウムチャンネルに 拮抗するその縫方は以下のごとくにテストできる。（前記したごとき）平板培養 時に、網膜神経節細胞の培養にｇｐ１２０（２０ｐＭ）および／またはレベモバ ミル（１０μＭ）を与え、ニューロン細胞生存を１日後に（前記したごとくに） 検定する。各実験は４回繰り返して組織培養皿で追試し、平均値を計算する。対 照群（すなわち、ｇｐ１２０のみて処理したもの）におけるクラスター網膜神経 節細胞の生存をｇｐ１２０＋レベモパミル処理の生存と比較する。 好ましくは、この実験は多数回繰り返す。ｇｐ１２０単独との比較において、ｇ ｐ１２０＋レベモバミルでの網膜神経節細胞生存の増加は（好ましくは、３Ｂお よびＲＦ２天然単離体ならびに組換え３Ｂ形態を含む）、レベモパミルがｇｐ１ ２０媒介ニューロン細胞損傷を減少させるのに効果的であることを示す。 他のカルシウムチャンネル阻害薬剤（例えば、ニフェジピン）に関する実験から の証拠は、高濃度のかかる薬剤はそれ自身有意なニューロン細胞死滅を誘導する ことを示す（ここに参照のために挙げるＷ０９０／１１７６１参照）。これらの 現象の１つの可能な説明は、ニューロンの健康に必要な細胞内Ｃａ２“には最適 レベルがあるという仮定を必要とする。余りにも低い［Ｃａ　”］　ｉは生存を 阻害する一方、余りにも高い［Ｃａ　”］　ｉもまた細胞死滅につながる。これ らの２両極端の間で生存は促進される。もう１つの理論によると、何等かの他の 関係付けられていない理由により、薬剤単独でニューロンに対して毒性であり得 る。しかし、その場合には、ニフェジピンの場合における生存は、ニフェジピン 単独と比較して、ｇｐ１２０＋ニフエ／ビンの組合せにつき、わずかに良好であ ったという発見を説明するのが困難である。 低用量のレベモバミルがｇｐ１２０処理後のニューロン生存に対する効果は以下 のごと（にテストされる。平板培養時にｇｐ１２０−３Ｂ（２０ｐＭ）および／ または（例えば、１０ｎＭおよび１μＭ間の）濃度範囲のレベモパミルを処理培 養に与え、１日後に網膜神経節細胞生存を検定する。用量−反応曲線を微妙に適 合させることによって、それ自体最小死滅を生じるが実質的にｇｐ１２０により 媒介される毒性をブロックするレベモパミルの最適レベルを見付けることができ る。ニフェジピンおよびニモジピンのごとき他のカルシウムチャンネル拮抗剤に 関する同等の実験からの証拠は、０．１μＭの最適薬剤濃度を示し、この濃度は 同様に最適なレベモパミル濃度であると示唆される。 細胞内［（ａ　ｌ　＋　Ｍのｇｐ１２０媒介増加に対するレベモバミルの効果ｇ ｐ１２０と共にインキュベートした網膜神経節細胞内の遊離Ｃａ２“イオンの細 胞内濃度に対するレベモバミルの効果をテストするために、網膜神経節細胞に前 記したごとくにｆｕｒａ　２を負荷する。次いで、パファー（ｐｕｆｆｅｒ）ピ ペットによりウィルスエンベロープ蛋白ｇｐ１２０　（２００ｐＭ）を、予め通 常の媒質またはレベモバミル（例えば、１１００ｎないし１０μＭ）含有媒質に 浸したニューロンに数分間適用する。細胞内Ｃａ”濃度を前記したごとくに測定 する。ｇｐ１２０は［ｃａ”］　ｉを増加させる（前記参照）。レベモパミル効 果の１つの尺度は、細胞内Ｃａ”濃度のかかる増加の部分的または全体的ブロッ クによって証明されるであろう。しかしながら、効果の最良の尺度はＨＩＶ−関 連傷害の面におけるニューロン細胞損傷の妨害である。 ｇｐ１２０存在下におけるカルシウムチャンネルを通じての電流の流れに対する レベモバミルの効果 ニューロン細胞機能の以下のアッセイは、レベモバミルのごときカルシウムチャ ンネル拮抗剤がＣａ２＋チヤンネルを通じてのＣａ”“イオンの流れに与える効 果をテストする。ｇｐ１２０が細胞死滅を増加させる機構についてのいずれかの 理論に固執することなく、ｇｐ１２０はＣａ２′″チヤンネルを横切っての電流 の流れを増加させることができる。細胞内Ｃａ２“濃度のｇｐ１２０関与上昇を 減少させることができる化合物についてスクリーニングする予備的尺度として、 Ｃａ２′″電流の以下のアッセイをｇｐ１２０存在下で行うべきである。 レベモパミル（例えば、１００ｎ１００ｎμＭ）の存在下または不存在下にて、 網膜神経節細胞にｇｐ１２０を存在させてＣａ”電流を測定する。別法として、 Ｂａ”によってカルシウムチャンネルを通って運ばれる電流を、レベモパミルと 共に（例えば、１００ｎ１００ｎμＭ）あるいはそれなくして２０ｐＭのｇｐ１ ２０−ＲＦ２の適用の間に測定する。ｇｐ１２０の存在下ですべての追跡がなさ れる。特に感度のよいアッセイは、脱分極保持電圧（Ｖｌ、ｌ＝　４０ｍＶ）か ら開始する段階状電圧（例えば、Ｖｃ＝　１０ｍＶ）を用いて達成される（カル ジンおよびリプトン（Ｋａｒｓｃｈｉｎ　ａｎｄ　Ｌｉｐｔｏｎ）、１９８９、 ジャーナル・オブ・フィンオロジ−（Ｊ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　）、１ユ８：３ ７９）。レベモバミルでのＣａ”電流の拮抗作用についての濃度範囲は、１００ ｎ１００ｎμＭの有効濃度範囲で出発し、このようにして実験的に決定すること ができる。 他のニューロンはｇｐ１２０に対して感受性である。 もう１つの重要な考慮は、網膜神経節細胞以外の哺乳動物中枢神経ニューロンに おけるＣａ”レベルはｇｐ１２０に対して感受性であるか否か、従って、レベモ バミル様カルシウムチャンネル・ブロッカ−での処理に従うか否かである。ミラ ー（Ｍｉｌｌｅｒ）　（サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　２３５　：　４６．１ ９８７）は、ジヒドロピリジンは、種々の脳領域からのニューロンの９０％以上 において、少なくともある程度は、Ｃａ２＋の内向き電流に影響するが、これら の薬剤の有効性には領域による差異が存在したことを示唆している。フェニルア ルキルアミンのごとき他のクラスのカルシウムチャンネル拮抗剤は、脳の異なる 領域において効果的であろう。例えば、海馬ニューロンにおけるＣａ”電流はベ ラパミル（１００μＭ）によって部分的に抑制されることが示されており（ヤア リ（Ｙａａｒｉ）ら、１９８７、エイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）　２３５・６８ ０）；加えて、新規カルシウムチャンネル・ブロッカ−またはＧプロティンおよ びこの効果に影響する細胞内メツセンジャーはこの点で有用であろう（オリベラ （Ｏｌｉｖｅｒａ）ら、１９８５、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）−ロンは線条 体ニューロンよりもカルシウムチャンネル拮抗剤に感受性であることを示してい る。この多様性は、恐らくは、（Ｌ−タイプ電流と同様に）Ｃａ”電流の遅延成 分のみがジヒドロピリジンおよび恐らくはレベモバミルに対して感受性であると いう事実に帰すことができるであろう。 第２のＣａ”チャンネルまたはＮＭＤＡ−レセプターチャンネル拮抗剤の投与所 望ならば、Ｃａ”チャンネルに拮抗できるか、あるいはＮＭＤＡ−レセプターチ ャンネル（またはその効果）に拮抗できる第２の化合物をレベモパミルと組み合 わせて患者に投与することができる。好ましいカルシウムチャンネル拮抗剤を表 １．２および３に掲げる。 表１ 電圧依存性カルシウムチヤンネル（一般クラス）の拮抗剤ジヒドロピリジン（例 えば、ニモジピン）フェニルアルキルアミン（例えば、ベラパミル、Ｄ−６００ ，Ｄ−８８８）ベンゾチアゼピン（例えば、ンルテイアゼムその他）ベブリンル および関連薬剤 ジフェニルブチルピペルンン ンフェニルビベラノン（例えば、フルナリンン／ンンナリジン・ンリーズ）ＨＯ Ｅ　１６６および関連薬剤 フルスビリレンおよび関連薬剤 トキノンおよび天然化合物（例えば、カタツムリ・トキンンーωコノトキンンＧ ＶＩＡおよびＧＶＴＩＡ、マイトトキシン、タイカドキノン、テトランソン、ホ ロレナ（ｈｏｌｏｌｅｎａ）・トキシン、プレクトロイス（ｐｌｅｃｔｒｅｕｙ ｓ）　トキシン、漏斗網クモ毒物およびそのトキシン画分 表２ ジヒドロピリジン・カルシウムチャンネル拮抗剤ニフェジピン　ＫＷ３０４９ ニルジピン　オキソジビン ＰＹ１０８−０６８　（ダロシピン）　ＣＤ３４９メスジビン　ＴＣ８１ Ｇ　Ｘ　１０４８　ＹＭ−０９７３０−５または（４Ｓ）ＤＨＰフロリジン　Ｍ ＤＬ７２５６７ 二トレンジピン　Ｒｏ１８　３９８１ ニソルジピン　ＤＨＰ−２１８ ニモジピン　ニルバジピン ニカルジビン　アムロジピン フェロジビン　８３６３−３ ＰＮ２００−１１０　（イスラジピン）　イオジビンＣＶ４０９３　アジドピン 表３ 他のカルシウムチャンネル拮抗剤 ジクロフリム　Ｄ−６００ ビモジド　Ｄ−８８８ プレニラミン　スミス・クライン９５１２フエンシリン　ラノルジン ベルヘキシリン　リドフラッジ ミオフラジン　ＣＥＲＭ−１１９５６ フルナリジン／シンナリジン・シリーズ　Ｒ−５８７３５Ｒ−５６８６５ ベラパミル　アミロリド ジルフィアジン　フエニトイン ジプロペルピン　チオリダジン 三環抗曹剤 好ましい第２化合物は以下の薬剤、例えば、ニモジピン（ミレス・ファルマソユ ーティカルズ（Ｍｉｌｅｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ウェスト＋バ ーベン、コネチカット州）、スミス・クライン薬剤番号９５１２　（スミス・ク ライン、フレンチービーチャム（Ｓｍｉｔｈ　Ｋ１１ｎｅ、　Ｆｒｅｎｃｈ−Ｂ ｅｅｃｈａｍ）、フィラデルフィア、ペンシルベニア州）、ジブロテベリン（ス ミス・クライン、フレンチービーチアム）、およびフルナリジンを含み、そのう ち最も好ましいのは血液−脳関門を横切ることができるものである。 それほど好ましい拮抗剤ではないものとして、ＣＮＳ透過性が低いもの、例えば 、ベラパミル（カラン・シイ・ディ・ンーレ・アンド・カンパニー（Ｃａｌａｎ 、　Ｇ、　Ｄ。 ５ｅａｒｌｅ　＆　Ｃｏ、　）、シカゴ、イリノイ州：イソプティン・クノル（ Ｉｓｏｐｔｉｎ、　Ｋｎｏｌｌ）、ホイイッパニ（Ｔｈｉｐｐａｎｙ）、ニュー シャーシー州）、ニトレンジピン、ジルティアゼム（カルシゼム（Ｃａｒｄｉｚ ｅａ＋）、マリオン（Ｍａｒｉｏｎ）、カンザスシティ、ミズリー州）、および ニフェジピン（ここに参照のために挙げる米国特許第３４８５８４７号）（プロ カルブイア・ファイザー（Ｐｒｏｃａｒｄｉａ、Ｐｆｉｚｅｒ）、ニューヨーク 、ニューヨーク州、アダラット・ミレス（Ａｄａｌａｔ、　Ｍｉｌｅｓ））であ る。有用な他のＣａ２＋チヤンネル拮抗剤はミオフラジン、フルナリジン、ベブ リジル、リドフラジン、ＣＥＲＭ−１９６、Ｒ−５８７３５、Ｒ−５６８６５、 ラノラジン、ニソルジピン、ニカルジピン、ＲＮ２００−１１０、フェロジピン 、アムロジピン、Ｒ−（−）−２０２−７９１、およびＲ−（＋）−ベイ（Ｂａ ｙ）−Ｋ　−８６４４（ミレス・ベイヤー（Ｍｉｌｅｓ、　Ｂａｙｅｒ））であ り、それらの化学式はポデッケ（Ｂｏｄｄｅｋｅ）らのトレンズ・イン・ファル マコロジック・サイエンシズ（Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ 　５ｃｉｅｎｃｅ）、１９８９．１０：３７０に記載されている。種々のカルシ ウムチャンネル拮抗剤が同定されている（ここに参照のために挙げるホセイ（Ｈ ｏｓｅｙ）、ジャーナル・オン・メンプレイン・バイオロジー（Ｊ、　Ｍｅｍｂ ｒａｎｅ　Ｂｉｏ、　）およびリン（Ｌｉｎ）ら、プロシーディングズ・オン・ ナショナル・アカデミ−・オン・サイエン／ズ（Ｐｒｏ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃｄ 、　Ｓｃｉ、）ＵＳＡ８ユニ４５３８．１９９０）。 いずれの第２カルシウムチヤンネル拮抗剤化合物（例えば、前記したもの）につ いても、ＨＩＶ−１（または他のＨＩＶ）に関連する神経学的障害を防止する効 果は、ニューロン細胞機能の以下のアッセイ：ニューロン細胞死滅、ニューロン 中の細胞内遊離Ｃａ”イオン濃度の検出、およびＣａ”チャンネルを通る電流の 流れ（前記参照）の検出のうち１以上を用いる薬剤のスクリーニングによって測 定される。グルタミン酸レセプター−チャンネル複合体のＮ−メチル−Ｄ−アス パラギン酸（ＮＭＤＡ）サブタイプのいずれの適当な拮抗剤もレベモバミルと組 み合わせる第２化合物として使用することもできる。好ましい拮抗剤を表４に示 す。該拮抗剤はチャンネル・ブロッカ−、レセプター拮抗剤であり得るか、ある いはグリシン共作用部位、または亜鉛部位、マグネシウム部位、ポリアミン部位 、ｐＨ感受性部位もしくはレドックス調節部位（例えば、表４参照）のごときい くつかの調節部位のうちのいずれかに作用し得るものでよい。ＮＭＤＡレセプタ ーの多くの拮抗剤が同定されている（ここに参照のために挙げるワトキンズ（ｆ ａｔｋｉｎｓ）ら、トレンズ・イン・ファルマコロシカル・サイエンシズ（Ｔｒ ｅｎｄｓｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉ、　）　１１　：　２ ５．１９９０）。細胞内Ｃａ”イオン濃度のｇｐ１２０〜反応上昇を減衰させる ようにＮＭＤＡ−レセプター−チャンネル複合体と相互作用する他の物質も本発 明の方法で使用できる。かかる調節物質は、ＮＭＤＡレセプターのレドックス部 位の酸化を引き起こすことが公知のもの（ここに参照のために挙げる１９８９年 ８月９日出願のＵ、Ｓ、Ｓ、Ｎ、３９１．７７８）、および酸化もしくは還元さ れたグルタチオンを包含する。 表４ ＮＭＤＡレセプター−チャンネル複合体拮抗剤ＭＫ−８０１（ジゾシルピン）お よびこのジベンゾシクロヘプテンのより新しい誘導体（非競合的、オープン−チ ャンネル・ブロッカ−）（メルク（Ｍｅｒｃｋ））デキストルファン、デキスト ロメトルファンおよび誘導体またはモルフィナンズ（非競合ＮＭＤＡレセプター 拮抗剤）（ホフマン・ラーロシｚ（Ｈｏｆｆｍａｎ　Ｌａ−Ｒｏｃｈｅ））フエ ンンクリジン（ＰＣＰ）および誘導体ならびにピラジン化合物ヘヒスト（Ｈｏｅ ｃｈｓｔ）８３１９１７１８９　（非競合的ＮＭＤＡ拮抗剤）キヌレナーテ（グ リシン共作用部位その他の部位における拮抗剤）７−クロローキシルナート、５ ．７−クロローキシルナート、および誘導体（グリシン共作用部位における拮抗 剤（メルク（Ｍｅｒｃｋ））ｋ−オピオイド・レセプター作動剤Ｕ３０４８８Ｈ （アップ・ジョン（Ｕｐｊｏｈｎ））アデノシンおよび誘導体（例えば、ノナジ ス前グルタミン酸放出を減少させるためのンクロへキシルアデノシン） ＭＤＬ２７．２６６　（メレル・ドウ（Ｍｅｒｒｅｌｌ　Ｄｏｗ））およびトリ アゾール−オン誘導体 モノシアロガングリオシド（ＮＭＤＡレセプター−媒介神経毒に関与するプロテ ィンキナーゼＣ転移を阻害する）（例えば、フィディア・コーポレーション（Ｆ ｉｄｉａ　Ｃｏｒｐ、　）のＧＭＩ）ＣＧＳ−１９７５５および他のピペリジン 誘導体（チバーガイギー（ＣＩＢ＾−ＧＥＩＧＹ））Ｄ−２−アミノ−５−ホス ホノバレレート（ＮＭＤＡレセプター拮抗剤）Ｄ−２−アミノ−７−ホスホホノ ヘブタノエート（ＡＤ７、選択的ＮＭＤＡレセプター拮抗剤） ＣＰＰ　［３−（２−カルボキシピペラジン−４−イル）プロピル−１−ホスホ ン酸］、ＡＰ７のリギッド（ｒｉｇｉｄ）アナログである選択的ＮＭＤＡレセプ ター拮抗剤 インドール−２−カルボン酸（ＮＭＤＡレセプターのグリシン共作用部位におけ る促進の競合的拮抗剤） ＤＮＱＸ　（６，７−シクロロキノキサリンー２，３−ジオンおよびＣＮＱＸを 含めた他のキノキサリンまたはオキサジアゾール誘導体）（ＤＮＱＸはＮＭＤＡ レセプターの特異的グリシン共作用部位拮抗剤である）ケタミン（ＮＭＤＡレセ プター−作動チャンネルの非競合的オーブンチャンネルブロッカ−） ０−ホスホホモセリン（ＮＭＤＡ拮抗剤）ティレタミンおよび他のシクロヘキサ ン誘導体（非競合的ＮＭＤＡ拮抗剤）アルカインまたは関連ビグアニジンおよび 生体ポリアミン（ポリアミン調節部位の拮抗剤） イフェンブロジルおよび関連薬剤（ポリアミン部位の拮抗剤）ジエチレントリア ミン（ポリアミン部位の拮抗剤）１．１０−ジアミノデカン（ポリアミン部位の インノ（−ス作動剤）Ｕ７４５００ＡＳＵ７５４１２ＥおよびＵ７４００６Ｆ　 （ア’ノブジョンＵｐｊｏｈｎ））のごとき２１−アミノステロイド（ラザロイ ド）（カルシウムによる過剰刺激１こ対しＮＭＤＡレセセプターを結合させる現 象に干渉）（ＮＭＤＡ−レセプター媒介神経毒をブロックするための）酸化また は還元されたグルタチオン メマンチン、アマンタジン、リマンタジン、および誘導体（非競合的使用−依存 性ＮＭＤＡ拮抗剤） 一般に、常法により細胞を無傷で単離できる限り、中枢神経系からの種々のタイ プのニューロン細胞および本明細書で記載した方法を用いて、拮抗剤をテストで きる。網膜培養を本明細書に記載するアッセイで用いた（しかし、海鳥皮質ニュ ーロンもまた、例えば、ニューロン死滅および細胞内カルシウムのアッセイで用 いた）。なぜならば、網膜細胞は出生後哺乳動物から生産でき、よく特徴付けら れており、蛍光標識で確実に同定できる中枢ニューロン、網膜神経節細胞を含有 するからである。培養物中の網膜神経節細胞の実質的部分は、機能的シナプス活 性を示すと共に、すべてではないにせよ、無傷網膜および脳で見い出された神経 伝達物質レセプターの多くを有するからである。効果的な拮抗剤はＨＩＶ−１関 連ニユーロン細胞の損傷もしくは死滅の減少を引き起こし、ｇｐ１２０の存在下 で起こる細胞内Ｃａ”イオン濃度上昇を妨げるであろう。加えて、効果的な拮抗 剤はニューロンのカルシウムチャンネルを通じてのＣａ”イオン内向は電流をニ ューロン細胞の死滅を減少させるのに十分な程度まで低下させる一方、それ自体 ニューロン細胞を殺すかも知れない出来事であるＣａ“ｌオン内向は電流を完全 にはブロックしない。該拮抗剤は当該分野でよく知られた医薬化合物を用い、医 薬製剤に配合できる：該拮抗剤化合物の正確な処方は投与経路に依存する。 他の具体例 他の具体例は以下の請求の範囲内のものである。例えば、本発明の方法はヒト免 疫不全ウィルスによる感染に関係した痴呆症、骨髄障害、末梢神経障害、または 視覚喪失の治療に使用できる。該方法は、患者がエイズ関連合併症またはエイズ 自体の兆候を示すか否かに拘わらず使用でき、かくして、本発明の方法はＨ１■ 感染後においてＣＮＳニューロンに対する損傷につき予防的治療として使用でき る。本発明の方法では、レベモバミルを、当該化合物を中枢神経系にアクセス可 能とするいずれの手段によっても投与できる。好ましくは、レベモバミルは経口 または静脈内投与し、別法として、それは、脳および／またはを髄へ髄腔内投与 できるか、あるいは網膜には硝子体内投与できる。また、本発明の方法は単一の 患者にレベモパミルと細胞内Ｃａ２′″濃度の調節剤の多（の範鴫からの有用な 化金物（例えば、表１〜４に掲げるもの）の１種以上とを投与することを含む。 生存網膜神経節細胞　ＦＩＧ、１ （対照の％） １０ｇ（濃度）［Ｍ］ ＦＩＧ、３ａ　時間（分） 免疫前　免疫後 生存網膜神経節細胞 生存網膜神経節細胞 ＦＩＧ、１０ 国際調査報告

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒト免疫不全ウイルスに感染したヒト患者のニューロンにおける遊離細胞内 Ｃａ＋＋イオン濃度のｇｐ１２０−反応上昇および該患者の該ニューロンの引き 続いての損傷の減少を引き起こすのに十分な濃度にて、レベモパミルまたはその 生理学的に許容される塩を該患者に投与することを特徴とする該患者におけるニ ューロンに対する損傷を流少させる方法。
2. ２．該ニューロンが中枢神経系からのものである請求の範囲第１項記載の方法。
3. ３．該ニューロンが末梢神経系からのものである請求の範囲第１項記載の方法。
4. ４．該ヒト患者の血液が抗ＨＩＶ抗体を含有する請求の範囲第１項記載の方法。
5. ５．該ヒト患者がエイズ関連合併症または後天性免疫不全症候群の兆候を示す請 求の範囲第１項記載の方法。
6. ６．該化合物を該患者に経口または静脈内投与する請求の範囲第１項記載の方法 。
7. ７．さらに、該患者の該ニューロンにおける遊離Ｃａ＋＋イオン濃度のｇｐ１２ ０−反応上昇および該患者の該ニューロンの損傷を減少できる第２の化合物を、 かかる減少を引き起こすのに十分な濃度で該患者に投与することよりなる請求の 範囲第１項記載の方法。
8. ８．該第２の化合物が表１、２または３に掲げるもののうち１つである請求の範 囲第７項記載の方法。
9. ９．該化合物がニフェジピン、ベラパミル、ニトレンジピン、ジルティアゼム、 スミス・クライン薬物番号９５１２、ニモジピン、アムロジピン、ニカルジピン 、フルラリジン、または誘導体のうち１種またはそれを超える請求の範囲第７項 記載の方法。
10. １０．さらに、ＮＭＤＡレセプターーチャンネル複合体の拮抗剤である第２の化 合物をかかる拮抗作用を引き起こすのに十分な濃度で該患者に投与することより なる請求の範囲第１項記載の方法。
11. １１．該第２の化合物が表４に掲げたものである請求の範囲第１０項記載の方法 。
12. １２．該第２の化合物が２−アミノ−５−ホスホノバレレートまたはＭＫ−８０ １である請求の範囲第１０項記載の方法。