JPH0643165A - 歯周疾患診断用抗原及び該抗原を利用した歯周疾患診断法 - Google Patents
歯周疾患診断用抗原及び該抗原を利用した歯周疾患診断法Info
- Publication number
- JPH0643165A JPH0643165A JP21715292A JP21715292A JPH0643165A JP H0643165 A JPH0643165 A JP H0643165A JP 21715292 A JP21715292 A JP 21715292A JP 21715292 A JP21715292 A JP 21715292A JP H0643165 A JPH0643165 A JP H0643165A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- gum disease
- periodontal disease
- diagnosing
- germ
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖又はこれ
にポリペプチドを結合させたものからなることを特徴と
する歯周疾患診断用抗原を被検者からの検体中抗体と反
応させて、歯周疾患原因菌に対する特異抗体を検出又は
測定する。 【効果】 本発明の歯周疾患診断用抗原を用いれば、歯
周疾患原因菌により発症した歯周疾患患者の歯肉溝液、
唾液、血液、血清、あるいは歯垢などの被検体中の該菌
に対する抗体価を特異的に高感度で測定することがで
き、歯周疾患の過去及び現在の病態あるいは治療過程を
確実に知ることができる。更に、複数の歯周疾患原因菌
由来の抗原を用いれば、どの原因菌に起因する疾患であ
るかを知ることができ、治療及び再発防止法の選択が容
易になる。
にポリペプチドを結合させたものからなることを特徴と
する歯周疾患診断用抗原を被検者からの検体中抗体と反
応させて、歯周疾患原因菌に対する特異抗体を検出又は
測定する。 【効果】 本発明の歯周疾患診断用抗原を用いれば、歯
周疾患原因菌により発症した歯周疾患患者の歯肉溝液、
唾液、血液、血清、あるいは歯垢などの被検体中の該菌
に対する抗体価を特異的に高感度で測定することがで
き、歯周疾患の過去及び現在の病態あるいは治療過程を
確実に知ることができる。更に、複数の歯周疾患原因菌
由来の抗原を用いれば、どの原因菌に起因する疾患であ
るかを知ることができ、治療及び再発防止法の選択が容
易になる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は歯周疾患の診断用抗原及
びその抗原を利用した歯周疾患診断法に関する。更に詳
しくは、ヒト被検者からの検体中に歯周疾患原因菌に対
する特異抗体が存在するか否かを判定することにより、
歯周疾患の病態を確実にかつ簡便にしかも迅速に診断す
ることができる歯周疾患の診断法及びこれに用いる試薬
（歯周疾患診断用抗原）に関する。
びその抗原を利用した歯周疾患診断法に関する。更に詳
しくは、ヒト被検者からの検体中に歯周疾患原因菌に対
する特異抗体が存在するか否かを判定することにより、
歯周疾患の病態を確実にかつ簡便にしかも迅速に診断す
ることができる歯周疾患の診断法及びこれに用いる試薬
（歯周疾患診断用抗原）に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】歯周疾
患原因菌に対する特異抗体の有無を測定することは、歯
周疾患を予防し、あるいは早期に発見して適切な処置を
施すために最も重要である。そこで、歯周疾患原因菌に
対する特異抗体の有無並びに抗体価の程度を測定する種
々の方法が提案されている。例えば歯周疾患患者の歯肉
溝液、唾液、血液、あるいは血清中の該原因菌に対する
抗体価をオクテロニー法、免疫電気泳動法、受身赤血球
凝集反応、あるいはＥＬＩＳＡ法などにより測定するこ
とが試みられている。しかしながら、いずれの方法でも
抗体検出のために使用する抗原が全菌体であったり、菌
体抽出物のような菌体成分であったりするため、特異性
が低くなり、確実な特異抗体の測定を妨げている。
患原因菌に対する特異抗体の有無を測定することは、歯
周疾患を予防し、あるいは早期に発見して適切な処置を
施すために最も重要である。そこで、歯周疾患原因菌に
対する特異抗体の有無並びに抗体価の程度を測定する種
々の方法が提案されている。例えば歯周疾患患者の歯肉
溝液、唾液、血液、あるいは血清中の該原因菌に対する
抗体価をオクテロニー法、免疫電気泳動法、受身赤血球
凝集反応、あるいはＥＬＩＳＡ法などにより測定するこ
とが試みられている。しかしながら、いずれの方法でも
抗体検出のために使用する抗原が全菌体であったり、菌
体抽出物のような菌体成分であったりするため、特異性
が低くなり、確実な特異抗体の測定を妨げている。
【０００３】本発明は上記事情に鑑みなされたもので、
歯周疾患原因菌に対する抗体を特異的に確実に検出又は
測定することができる歯周疾患診断用抗原及びこの抗原
を用いて歯周疾患患者の検体中の特異抗体を検出又は測
定することにより、歯周疾患の病態を確実に診断するこ
とができる歯周疾患診断法を提供することを目的とす
る。
歯周疾患原因菌に対する抗体を特異的に確実に検出又は
測定することができる歯周疾患診断用抗原及びこの抗原
を用いて歯周疾患患者の検体中の特異抗体を検出又は測
定することにより、歯周疾患の病態を確実に診断するこ
とができる歯周疾患診断法を提供することを目的とす
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段及び作用】本発明者は、上
記目的を達成するため鋭意検討を進めた結果、歯周疾患
原因菌の菌体表層から多糖を調製し、得られた抗原を用
いて、ヒトの歯肉溝液、唾液、血液、あるいは血清など
のヒト被検体中の抗体価を測定したところ、該原因菌に
対する特異抗体を確実に検出できることを知見した。更
に、上記のようにして得られた多糖にＢＳＡ（牛血清ア
ルブミン）などのポリペプチドを結合させた標品を抗原
として同様にヒト被検体中の抗体価を測定すると、より
一層特異抗体との反応性が高まり、高感度に該原因菌に
対する特異抗体を検出できることを知見し、本発明をな
すに至った。
記目的を達成するため鋭意検討を進めた結果、歯周疾患
原因菌の菌体表層から多糖を調製し、得られた抗原を用
いて、ヒトの歯肉溝液、唾液、血液、あるいは血清など
のヒト被検体中の抗体価を測定したところ、該原因菌に
対する特異抗体を確実に検出できることを知見した。更
に、上記のようにして得られた多糖にＢＳＡ（牛血清ア
ルブミン）などのポリペプチドを結合させた標品を抗原
として同様にヒト被検体中の抗体価を測定すると、より
一層特異抗体との反応性が高まり、高感度に該原因菌に
対する特異抗体を検出できることを知見し、本発明をな
すに至った。
【０００５】従って、本発明は、歯周疾患原因菌の菌体
表層由来多糖、あるいはこの菌体表層由来多糖にポリペ
プチドを結合させた抗原からなることを特徴とする歯周
疾患診断用抗原、及び、この診断用抗原をヒト被検者か
らの検体中抗体と反応させることによって歯周疾患原因
菌に対する特異抗体を検出又は測定することを特徴とす
る歯周疾患診断法を提供する。
表層由来多糖、あるいはこの菌体表層由来多糖にポリペ
プチドを結合させた抗原からなることを特徴とする歯周
疾患診断用抗原、及び、この診断用抗原をヒト被検者か
らの検体中抗体と反応させることによって歯周疾患原因
菌に対する特異抗体を検出又は測定することを特徴とす
る歯周疾患診断法を提供する。
【０００６】以下、本発明につき更に詳しく説明する
と、本発明の歯周疾患診断用抗原（試薬）は、上述した
ように、歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖からなる抗
原又は該多糖にポリペプチドを結合させた抗原である。
と、本発明の歯周疾患診断用抗原（試薬）は、上述した
ように、歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖からなる抗
原又は該多糖にポリペプチドを結合させた抗原である。
【０００７】ここで、歯周疾患原因菌とは、一般的に歯
周疾患と病因論的因果関係が深いと考えられているアク
チノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス，ポルフ
ィロモナス・ジンジバリス，プレボテーラ・インターメ
ディア，フゾバクテリウム・ヌクレアタム，キャプノサ
イトファガ属菌種、オイケネラ・コローデンス，ボリネ
ラ・レクタ，バクテロイデス・フォーサイサス，トレポ
ネーマ・デンティコーラなどのスピロヘータ等をいう。
周疾患と病因論的因果関係が深いと考えられているアク
チノバチルス・アクチノマイセテムコミタンス，ポルフ
ィロモナス・ジンジバリス，プレボテーラ・インターメ
ディア，フゾバクテリウム・ヌクレアタム，キャプノサ
イトファガ属菌種、オイケネラ・コローデンス，ボリネ
ラ・レクタ，バクテロイデス・フォーサイサス，トレポ
ネーマ・デンティコーラなどのスピロヘータ等をいう。
【０００８】これら歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖
は、周知の方法で調製することができる。例えば培養し
た菌体をオートクレーブ処理する方法、菌体に亜硝酸を
作用させて抽出する方法、菌体からフェノール・水抽出
する方法などが利用できる。また、化学構造が既知の菌
体表層由来多糖、例えば次の一般式（ａ），（ｂ），
（ｃ）で示されるアクチノバチルス・アクチノマイセテ
ムコミタンスの血清型特異多糖などの場合は、菌体から
抽出する方法の他に単糖などより化学的に合成した多糖
あるいは糖鎖工学的手法を用いて合成した多糖を用いる
ことも可能である。
は、周知の方法で調製することができる。例えば培養し
た菌体をオートクレーブ処理する方法、菌体に亜硝酸を
作用させて抽出する方法、菌体からフェノール・水抽出
する方法などが利用できる。また、化学構造が既知の菌
体表層由来多糖、例えば次の一般式（ａ），（ｂ），
（ｃ）で示されるアクチノバチルス・アクチノマイセテ
ムコミタンスの血清型特異多糖などの場合は、菌体から
抽出する方法の他に単糖などより化学的に合成した多糖
あるいは糖鎖工学的手法を用いて合成した多糖を用いる
ことも可能である。
【０００９】
【化１】
【００１０】なお、上記化合物（ａ），（ｂ）及び
（ｃ）は、それぞれアクチノバチルス・アクチノマイセ
テムコミタンスの血清型ａ，ｂ及びｃの菌から調製する
ことができ、この場合血清型ａの株としてはアクチノバ
チルス・アクチノマイセテムコミタンスＡＴＣＣ２９５
２３，ＳＵＮＹのＢ７５など、血清型ｂの株としてはＡ
ＴＣＣ２９５２２，Ｙ４など、血清型ｃの株としてはＮ
ＣＴＣ９７１０、ＳＵＮＹａＢ６７などが挙げられる。
（ｃ）は、それぞれアクチノバチルス・アクチノマイセ
テムコミタンスの血清型ａ，ｂ及びｃの菌から調製する
ことができ、この場合血清型ａの株としてはアクチノバ
チルス・アクチノマイセテムコミタンスＡＴＣＣ２９５
２３，ＳＵＮＹのＢ７５など、血清型ｂの株としてはＡ
ＴＣＣ２９５２２，Ｙ４など、血清型ｃの株としてはＮ
ＣＴＣ９７１０、ＳＵＮＹａＢ６７などが挙げられる。
【００１１】また、上記歯周疾患原因菌の菌体表層由来
多糖と結合させるポリペプチドは、特に限定されるもの
ではなく、例えばＢＳＡ（牛血清アルブミン）、卵白ア
ルブミンなどの各種アルブミン、γ−グロブリン、カゼ
イン，ビオチン、コレラトキシンＢサブユニット，フェ
リチン，トランスフェリン，チトクロームＣ，ミオシン
などが挙げられる。
多糖と結合させるポリペプチドは、特に限定されるもの
ではなく、例えばＢＳＡ（牛血清アルブミン）、卵白ア
ルブミンなどの各種アルブミン、γ−グロブリン、カゼ
イン，ビオチン、コレラトキシンＢサブユニット，フェ
リチン，トランスフェリン，チトクロームＣ，ミオシン
などが挙げられる。
【００１２】菌体表層由来多糖とポリペプチドの結合方
法は、一般的な多糖とポリペプチドとを結合する方法が
用いられ、多糖とポリペプチドを結合することができ、
しかも多糖の抗原性が変化しない方法であればどのよう
な結合方法を用いてもいっこうに差し支えない。具体的
には、吸着法、共有結合法のいずれの方法でも結合でき
るが、結合力の強さの点から、共有結合法がより好まし
い。多糖とポリペプチドを共有結合させる方法は多くの
様式が知られているが、いずれの様式も利用できる。例
えば多糖を臭化シアンで活性化した後、ポリペプチドを
結合させる方法、多糖に芳香族アミノ基を導入した後、
ポリペプチドの芳香族基とジアゾ結合させる方法、多糖
にアミノ基を導入した後、ポリペプチドのアミノ基と反
応させてシッフ塩基を形成させる方法、多糖とトレシル
クロリドを反応させた後、ポリペプチドのアミノ基やチ
オール基と結合させるトレシルクロリド法などが挙げら
れる。
法は、一般的な多糖とポリペプチドとを結合する方法が
用いられ、多糖とポリペプチドを結合することができ、
しかも多糖の抗原性が変化しない方法であればどのよう
な結合方法を用いてもいっこうに差し支えない。具体的
には、吸着法、共有結合法のいずれの方法でも結合でき
るが、結合力の強さの点から、共有結合法がより好まし
い。多糖とポリペプチドを共有結合させる方法は多くの
様式が知られているが、いずれの様式も利用できる。例
えば多糖を臭化シアンで活性化した後、ポリペプチドを
結合させる方法、多糖に芳香族アミノ基を導入した後、
ポリペプチドの芳香族基とジアゾ結合させる方法、多糖
にアミノ基を導入した後、ポリペプチドのアミノ基と反
応させてシッフ塩基を形成させる方法、多糖とトレシル
クロリドを反応させた後、ポリペプチドのアミノ基やチ
オール基と結合させるトレシルクロリド法などが挙げら
れる。
【００１３】本発明抗原を用いて検体中の抗体を測定す
る方法としては、一般的な抗体の測定法がそのまま利用
できる。例えばオクテロニー法、免疫電気泳動法、受身
赤血球凝集反応法、ラテックス凝集法、ＥＬＩＳＡ法な
どが挙げられるが、簡便かつ迅速に検出するならばラテ
ックス凝集法が、抗体価を精度よく測定するならばＥＬ
ＩＳＡ法が好ましい。なお、ヒト被検者からの検体とし
ては通常、歯肉溝液、唾液、血液、血清、あるいは歯垢
等が用いられる。検体はそのまま抗原と反応させること
もできるし、また、抗体成分を遠心操作などにより分離
した後、反応させてもよい。
る方法としては、一般的な抗体の測定法がそのまま利用
できる。例えばオクテロニー法、免疫電気泳動法、受身
赤血球凝集反応法、ラテックス凝集法、ＥＬＩＳＡ法な
どが挙げられるが、簡便かつ迅速に検出するならばラテ
ックス凝集法が、抗体価を精度よく測定するならばＥＬ
ＩＳＡ法が好ましい。なお、ヒト被検者からの検体とし
ては通常、歯肉溝液、唾液、血液、血清、あるいは歯垢
等が用いられる。検体はそのまま抗原と反応させること
もできるし、また、抗体成分を遠心操作などにより分離
した後、反応させてもよい。
【００１４】
【発明の効果】本発明の歯周疾患診断用抗原を用いれ
ば、歯周疾患原因菌により発症した歯周疾患患者の歯肉
溝液、唾液、血液、血清、あるいは歯垢などの被検体中
の該菌に対する抗体価を特異的に高感度で測定すること
ができ、原因菌の感染状況、歯周疾患の過去及び現在の
病態あるいは治療過程を確実に知ることができる。更
に、複数の歯周疾患原因菌由来の抗原を用いれば、どの
原因菌に起因する疾患であるかを知ることができ、治療
及び再発防止法の選択が容易になる。
ば、歯周疾患原因菌により発症した歯周疾患患者の歯肉
溝液、唾液、血液、血清、あるいは歯垢などの被検体中
の該菌に対する抗体価を特異的に高感度で測定すること
ができ、原因菌の感染状況、歯周疾患の過去及び現在の
病態あるいは治療過程を確実に知ることができる。更
に、複数の歯周疾患原因菌由来の抗原を用いれば、どの
原因菌に起因する疾患であるかを知ることができ、治療
及び再発防止法の選択が容易になる。
【００１５】
【実施例】以下、実施例を示して本発明を具体的に説明
するが、本発明は下記実施例に制限されるものではな
い。 （１）菌体表層多糖の調製 アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスＹ４
株を１％酵母エキスを加えたトッドヘビットブロスに接
種し、５％ＣＯ2を含むインキュベーター中で３７℃，
３日間培養した。集菌後、生理食塩水で３回洗浄して生
理食塩水に懸濁し、１２１℃，１５分間オートクレーブ
処理を行った。冷却後、１０，０００×ｇで２０分間遠
心して上清を分取し、沈渣には再度生理食塩水を加えて
上述の抽出操作を繰り返した。得られた上清を集め、蒸
留水に対して十分透析し、凍結乾燥した。これを菌体表
層多糖とした。
するが、本発明は下記実施例に制限されるものではな
い。 （１）菌体表層多糖の調製 アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミタンスＹ４
株を１％酵母エキスを加えたトッドヘビットブロスに接
種し、５％ＣＯ2を含むインキュベーター中で３７℃，
３日間培養した。集菌後、生理食塩水で３回洗浄して生
理食塩水に懸濁し、１２１℃，１５分間オートクレーブ
処理を行った。冷却後、１０，０００×ｇで２０分間遠
心して上清を分取し、沈渣には再度生理食塩水を加えて
上述の抽出操作を繰り返した。得られた上清を集め、蒸
留水に対して十分透析し、凍結乾燥した。これを菌体表
層多糖とした。
【００１６】また、上記と同様の方法で、ポルフィロモ
ナス・ジンジバリス３８１株、プレボテーラ・インター
メディアＡＴＣＣ３３５６３株，トレポネ−マ・デンテ
ィコーラＡＴＣＣ３３４０５株の各培養菌体から、菌体
表層多糖を調製した。
ナス・ジンジバリス３８１株、プレボテーラ・インター
メディアＡＴＣＣ３３５６３株，トレポネ−マ・デンテ
ィコーラＡＴＣＣ３３４０５株の各培養菌体から、菌体
表層多糖を調製した。
【００１７】（２）菌体表層多糖とポリペプチドの結合 前記調製した各菌体表層多糖を臭化シアンで活性化した
後、アジピン酸ジヒドラジドと反応させてアミノ基を付
与した。更に、カルボジイミド法により牛血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）と結合させた。この抗原を菌体表層多糖−
ＢＳＡとする。
後、アジピン酸ジヒドラジドと反応させてアミノ基を付
与した。更に、カルボジイミド法により牛血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）と結合させた。この抗原を菌体表層多糖−
ＢＳＡとする。
【００１８】（３）菌体表層多糖抗原感作ラテックス標
品の調製 ラテックス粒子としてイムノテックスＧ２８０１（粒径
０．８７６μｍ：日本合成ゴム（株）製）を用い、０．
１Ｍグリシン緩衝生理食塩水（０．０５％アジ化ナトリ
ウム含有：以下ＧＢＳと略す）中に０．５％（Ｗ／Ｖ）
となるように浮遊させた。この浮遊液に、１００μｇ／
ｍｌとなるようにＧＢＳで希釈した前記菌体表層多糖−
ＢＳＡ抗原を等量混合し、３７℃で９０分間反応させて
抗原を吸着させた。このラテックス粒子を３，０００×
ｇで５分間の遠心により沈殿させた後、その沈渣を０．
１％牛血清アルブミン−リン酸緩衝生理食塩水（ＢＳＡ
−ＰＢＳ）に浮遊させ、室温で１５分間反応させてブロ
ッキングを行った。最終的に０．５％（Ｗ／Ｖ）となる
ようにＢＳＡ−ＰＢＳに浮遊させたものを菌体表層多糖
−ＢＳＡ抗原感作ラテックス標品とした。
品の調製 ラテックス粒子としてイムノテックスＧ２８０１（粒径
０．８７６μｍ：日本合成ゴム（株）製）を用い、０．
１Ｍグリシン緩衝生理食塩水（０．０５％アジ化ナトリ
ウム含有：以下ＧＢＳと略す）中に０．５％（Ｗ／Ｖ）
となるように浮遊させた。この浮遊液に、１００μｇ／
ｍｌとなるようにＧＢＳで希釈した前記菌体表層多糖−
ＢＳＡ抗原を等量混合し、３７℃で９０分間反応させて
抗原を吸着させた。このラテックス粒子を３，０００×
ｇで５分間の遠心により沈殿させた後、その沈渣を０．
１％牛血清アルブミン−リン酸緩衝生理食塩水（ＢＳＡ
−ＰＢＳ）に浮遊させ、室温で１５分間反応させてブロ
ッキングを行った。最終的に０．５％（Ｗ／Ｖ）となる
ようにＢＳＡ−ＰＢＳに浮遊させたものを菌体表層多糖
−ＢＳＡ抗原感作ラテックス標品とした。
【００１９】（４）ラテックス凝集法によるヒト被検者
からの歯肉溝液中の各種歯周疾患原因菌に対する特異抗
体の検出 ６名の健常者（臨床的診査により歯肉の炎症等を認め
ず、かつプラーク中に歯周疾患原因菌を検出しなかった
者）及び１０名の歯周疾患患者（若年性歯周炎及び成人
性歯周炎患者）より歯肉溝液を採取し、各々４μｌと前
記方法で得られた各種菌体表層多糖−ＢＳＡ抗原感作ラ
テックス標品３６μｌをスライドガラス平板上で混和
し、室温で反応させた。１０分間反応後、観察される凝
集の程度を下記の基準で３段階に評価した。結果を表１
に示す。
からの歯肉溝液中の各種歯周疾患原因菌に対する特異抗
体の検出 ６名の健常者（臨床的診査により歯肉の炎症等を認め
ず、かつプラーク中に歯周疾患原因菌を検出しなかった
者）及び１０名の歯周疾患患者（若年性歯周炎及び成人
性歯周炎患者）より歯肉溝液を採取し、各々４μｌと前
記方法で得られた各種菌体表層多糖−ＢＳＡ抗原感作ラ
テックス標品３６μｌをスライドガラス平板上で混和
し、室温で反応させた。１０分間反応後、観察される凝
集の程度を下記の基準で３段階に評価した。結果を表１
に示す。
【００２０】凝集の判定基準 −：肉眼的に凝集を認めず、ラテックス粒子が白く均一
に濁ったままのもの ＋：明らかな凝集を認めるが、未反応のラテックス粒子
で背景が白く濁っているもの ＋＋：全てのラテックス粒子が凝集塊を形成し、背景が
透けて見えるもの
に濁ったままのもの ＋：明らかな凝集を認めるが、未反応のラテックス粒子
で背景が白く濁っているもの ＋＋：全てのラテックス粒子が凝集塊を形成し、背景が
透けて見えるもの
【００２１】
【表１】 Ａ．ａ．：アクチノバチルス・アクチノマイセテムコミ
タンス Ｐ．ｇ．：ポルフィロモナス・ジンジバリス Ｐ．ｉ．：プレボテーラ・インターメディア Ｔ．ｄ．：トレポネーマ・デンティコーラ
タンス Ｐ．ｇ．：ポルフィロモナス・ジンジバリス Ｐ．ｉ．：プレボテーラ・インターメディア Ｔ．ｄ．：トレポネーマ・デンティコーラ
【００２２】表１から明らかなように、健常者６名はラ
テックス凝集反応が全て陰性であった。一方、歯周疾患
患者はいずれかの歯周疾患原因菌由来抗原に対する反応
性が陽性であった。
テックス凝集反応が全て陰性であった。一方、歯周疾患
患者はいずれかの歯周疾患原因菌由来抗原に対する反応
性が陽性であった。
【００２３】（５）ＥＬＩＳＡ法によるヒト血清中の各
種歯周疾患原因菌に対する特異抗体の測定 ６名の健常者及び１０名の歯周疾患患者より静脈血を採
取し、常法に従って血清を分離した。
種歯周疾患原因菌に対する特異抗体の測定 ６名の健常者及び１０名の歯周疾患患者より静脈血を採
取し、常法に従って血清を分離した。
【００２４】被検血清抗体価の測定は、ＥＬＩＳＡ法に
より下記の通り行ったが、これに限定されるものではな
く、一般のＥＬＩＳＡ試験法のいずれの方法を用いても
差し支えない。
より下記の通り行ったが、これに限定されるものではな
く、一般のＥＬＩＳＡ試験法のいずれの方法を用いても
差し支えない。
【００２５】前記調製した各菌体表層多糖抗原、あるい
は菌体表層多糖−ＢＳＡ抗原を０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐ
Ｈ９．６）にて１０μｇ／ｍｌとなるように調製し、９
６穴マイクロタイタープレートの各ウェルに１００μｌ
ずつ入れた後、４℃で一昼夜放置して抗原を吸着させ
た。その後、各ウェルを軽く洗浄し、２％ＢＳＡを含む
０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）を３００μｌずつ入
れ、４℃で保存した。使用直前に０．０５％Ｔｗｅｅｎ
２０及び０．０２％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝
液生理食塩水（以下、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎと略す）でウ
ェルを３回洗浄した後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで希釈した
被検血清１００μｌを入れ、室温で２時間反応させた。
被検血清の希釈はＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１００倍から５
１２００倍まで２倍段階希釈したものを使用した。反応
後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎでウェルを３回洗浄し、ＰＢＳ
−Ｔｗｅｅｎで１０００倍に希釈したアルカリフォスタ
ーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（ヤギ）溶液を１００μｌず
つ入れ、室温で２時間反応させた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ
でウェルをよく洗浄後、１００μｌの酵素基質溶液（１
０％ジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．８）に１ｍｇ
／ｍｌとなるようにパラニトロフェニルリン酸２ナトリ
ウムを溶解した溶液）を入れ、３７℃で３０分間反応さ
せた。反応後、直ちに３Ｍ−ＮａＯＨを５０μｌずつ各
ウェルに加えて酵素反応を停止させ、ＥＬＩＳＡプレー
トリーダー（タイターマック，マルチスキャンＭＣＣ）
を用いて各ウェルの４０５ｎｍにおける吸光度（ＯＤ
405）を測定した。
は菌体表層多糖−ＢＳＡ抗原を０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐ
Ｈ９．６）にて１０μｇ／ｍｌとなるように調製し、９
６穴マイクロタイタープレートの各ウェルに１００μｌ
ずつ入れた後、４℃で一昼夜放置して抗原を吸着させ
た。その後、各ウェルを軽く洗浄し、２％ＢＳＡを含む
０．１Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ９．６）を３００μｌずつ入
れ、４℃で保存した。使用直前に０．０５％Ｔｗｅｅｎ
２０及び０．０２％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝
液生理食塩水（以下、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎと略す）でウ
ェルを３回洗浄した後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで希釈した
被検血清１００μｌを入れ、室温で２時間反応させた。
被検血清の希釈はＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１００倍から５
１２００倍まで２倍段階希釈したものを使用した。反応
後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎでウェルを３回洗浄し、ＰＢＳ
−Ｔｗｅｅｎで１０００倍に希釈したアルカリフォスタ
ーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（ヤギ）溶液を１００μｌず
つ入れ、室温で２時間反応させた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ
でウェルをよく洗浄後、１００μｌの酵素基質溶液（１
０％ジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．８）に１ｍｇ
／ｍｌとなるようにパラニトロフェニルリン酸２ナトリ
ウムを溶解した溶液）を入れ、３７℃で３０分間反応さ
せた。反応後、直ちに３Ｍ−ＮａＯＨを５０μｌずつ各
ウェルに加えて酵素反応を停止させ、ＥＬＩＳＡプレー
トリーダー（タイターマック，マルチスキャンＭＣＣ）
を用いて各ウェルの４０５ｎｍにおける吸光度（ＯＤ
405）を測定した。
【００２６】被検血清抗体価は、下記の算出法によりＥ
ＬＩＳＡユニットとして表わした。即ち、ブランク値を
差し引いた後のＯＤ405の値が０．１以上となる被検血
清の最大希釈倍数をもってＥＬＩＳＡユニットとした。
ＬＩＳＡユニットとして表わした。即ち、ブランク値を
差し引いた後のＯＤ405の値が０．１以上となる被検血
清の最大希釈倍数をもってＥＬＩＳＡユニットとした。
【００２７】抗原として各種菌体表層多糖抗原を用いた
場合の結果を表２に、また抗原として各菌体表層多糖−
ＢＳＡ抗原を用いた場合の結果を表３に示す。
場合の結果を表２に、また抗原として各菌体表層多糖−
ＢＳＡ抗原を用いた場合の結果を表３に示す。
【００２８】表２、表３の結果から明らかなように、歯
周疾患患者血清中にはいずれかの歯周疾患原因菌由来の
抗原に対する特異抗体が検出された。更に、菌体表層多
糖−ＢＳＡをＥＬＩＳＡ抗原として用いると、より一層
特異抗体との反応性が高まり、高感度に特異抗体価を測
定できる効果が認められた。
周疾患患者血清中にはいずれかの歯周疾患原因菌由来の
抗原に対する特異抗体が検出された。更に、菌体表層多
糖−ＢＳＡをＥＬＩＳＡ抗原として用いると、より一層
特異抗体との反応性が高まり、高感度に特異抗体価を測
定できる効果が認められた。
【００２９】
【表２】
【００３０】
【表３】
【００３１】従って、以上のように、本診断法により歯
周疾患原因菌に感染しているか否かの判定が確実にでき
ると共に、どの原因菌に感染しているかの推定もできる
ため、個々の患者にとって最適な治療法の判断も容易と
なることが認められる。
周疾患原因菌に感染しているか否かの判定が確実にでき
ると共に、どの原因菌に感染しているかの推定もできる
ため、個々の患者にとって最適な治療法の判断も容易と
なることが認められる。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年７月２７日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１１】また、上記歯周疾患原因菌の菌体表層由来
多糖と結合させるポリペプチドは、特に限定されるもの
ではなく、例えばＢＳＡ（牛血清アルブミン）、卵白ア
ルブミンなどの各種アルブミン、γ−グロブリン、カゼ
イン，アビジン、コレラトキシンＢサブユニット，フェ
リチン，トランスフェリン，チトクロームＣ，ミオシ
ン，ゼラチン，コラーゲンなどが挙げられる。
多糖と結合させるポリペプチドは、特に限定されるもの
ではなく、例えばＢＳＡ（牛血清アルブミン）、卵白ア
ルブミンなどの各種アルブミン、γ−グロブリン、カゼ
イン，アビジン、コレラトキシンＢサブユニット，フェ
リチン，トランスフェリン，チトクロームＣ，ミオシ
ン，ゼラチン，コラーゲンなどが挙げられる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１３】本発明抗原を用いて検体中の抗体を測定す
る方法としては、一般的な抗体の測定法がそのまま利用
できる。例えばオクテロニー法、免疫電気泳動法、受身
赤血球凝集反応法、ラテックス凝集法、ゼラチン粒子凝
集法、ＥＬＩＳＡ法などが挙げられるが、簡便かつ迅速
に検出するならばラテックス凝集法が、抗体価を精度よ
く測定するならばＥＬＩＳＡ法が好ましい。なお、ヒト
被検者からの検体としては通常、歯肉溝液、唾液、血
液、血清、あるいは歯垢等が用いられる。検体はそのま
ま抗原と反応させることもできるし、また、抗体成分を
遠心操作などにより分離した後、反応させてもよい。
る方法としては、一般的な抗体の測定法がそのまま利用
できる。例えばオクテロニー法、免疫電気泳動法、受身
赤血球凝集反応法、ラテックス凝集法、ゼラチン粒子凝
集法、ＥＬＩＳＡ法などが挙げられるが、簡便かつ迅速
に検出するならばラテックス凝集法が、抗体価を精度よ
く測定するならばＥＬＩＳＡ法が好ましい。なお、ヒト
被検者からの検体としては通常、歯肉溝液、唾液、血
液、血清、あるいは歯垢等が用いられる。検体はそのま
ま抗原と反応させることもできるし、また、抗体成分を
遠心操作などにより分離した後、反応させてもよい。
Claims (3)
- 【請求項１】 歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖から
なることを特徴とする歯周疾患診断用抗原。 - 【請求項２】 歯周疾患原因菌の菌体表層由来多糖にポ
リペプチドを結合させた抗原からなることを特徴とする
歯周疾患診断用抗原。 - 【請求項３】 請求項１又は２の歯周疾患診断用抗原を
被検者からの検体中抗体と反応させて、歯周疾患原因菌
に対する特異抗体を検出又は測定することを特徴とする
歯周疾患診断法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21715292A JPH0643165A (ja) | 1992-07-23 | 1992-07-23 | 歯周疾患診断用抗原及び該抗原を利用した歯周疾患診断法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21715292A JPH0643165A (ja) | 1992-07-23 | 1992-07-23 | 歯周疾患診断用抗原及び該抗原を利用した歯周疾患診断法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0643165A true JPH0643165A (ja) | 1994-02-18 |
Family
ID=16699676
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21715292A Pending JPH0643165A (ja) | 1992-07-23 | 1992-07-23 | 歯周疾患診断用抗原及び該抗原を利用した歯周疾患診断法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0643165A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008020215A (ja) * | 2006-07-11 | 2008-01-31 | Toagosei Co Ltd | 急性冠症候群およびその病態の検査方法並びに検査薬 |
| CN105001130A (zh) * | 2015-07-07 | 2015-10-28 | 张琳苹 | 一种3-芳基-2-环戊烯-1-酮化合物的合成方法 |
-
1992
- 1992-07-23 JP JP21715292A patent/JPH0643165A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008020215A (ja) * | 2006-07-11 | 2008-01-31 | Toagosei Co Ltd | 急性冠症候群およびその病態の検査方法並びに検査薬 |
| CN105001130A (zh) * | 2015-07-07 | 2015-10-28 | 张琳苹 | 一种3-芳基-2-环戊烯-1-酮化合物的合成方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1339067C (en) | Antigenic compositions and methods for their production and use | |
| Baker et al. | Importance of Actinomyces and certain gram-negative anaerobic organisms in the transformation of lymphocytes from patients with periodontal disease | |
| Halbert et al. | The use of precipitin analysis in agar for the study of human streptococcal infections: II. Ouchterlony and Oakley technics | |
| Alemohammad et al. | Detection of immunoglobulin G antibodies to Helicobacter pylori in urine by an enzyme immunoassay method | |
| EP0439462B1 (en) | Process for preparation of high molecular weight cell-associated protein of campylobacter pylori and use for serological detection of campylobacter pylori infection | |
| Artenstein et al. | Serologic studies of meningococcal infection and polysaccharide vaccination | |
| CN101738473B (zh) | 梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒及其制备方法 | |
| JPH05264553A (ja) | ヘリコバクターピロリ検出用の抗原調製物 | |
| Pérez-Pérez et al. | Value of serology as a noninvasive method for evaluating the efficacy of treatment of Helicobacter pylori infection | |
| Araj et al. | Diagnostic value of the enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Candida albicans cytoplasmic antigen in sera of cancer patients | |
| Morinushi et al. | The relationship between gingivitis and colonization by Porphyromonas gingivalis and Actinobacillus actinomycetemcomitans in children | |
| Leinonen et al. | Comparison of counter-current immunoelectrophoresis, latex agglutination, and radioimmunoassay in detection of soluble capsular polysaccharide antigens of Haemophilus influenzae type b and Neisseria meningitidis of groups A or C. | |
| Fujita et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay measurement of fluctuations in antibody titer and antigenemia in cancer patients with and without candidiasis | |
| US6068985A (en) | In vitro test for Helicobacter pylori | |
| JP4268358B2 (ja) | 抗体および免疫学的測定方法 | |
| CA2134667C (en) | In vitro test for helicobacter pylori | |
| US4461838A (en) | Gonococcal Pili processes for the preparation thereof and the use thereof for the detection of and prevention of infections caused by Neisseria gonorrhoeae | |
| US4696896A (en) | Gonococcal Pili processes for the preparation thereof and the use thereof for the detection of and prevention of infections caused by Neisseria gonorrhoeae | |
| JPH0643165A (ja) | 歯周疾患診断用抗原及び該抗原を利用した歯周疾患診断法 | |
| JPH0643164A (ja) | 歯周疾患に随伴する微生物類の分別ならびにそれに有用な製品およびキット | |
| IE44448B1 (en) | Gonococcal pili processes for the preparation thereof and the use thereof | |
| JP5250812B2 (ja) | ヘリコバクター・ピロリ菌由来の新規抗原、抗原組成物およびピロリ菌抗体の検出方法。 | |
| Coates et al. | Identification of Mycobacterium tuberculosis antigens in Seibert fractions by immunoblotting | |
| JP4578401B2 (ja) | 固定化抗体の製造方法 | |
| JPH07294530A (ja) | 病原体に対する体液中の抗体検出法 |