JPH06300763A - Fluorescent microbead for fluorescent immunoassay and its manufacture - Google Patents
Fluorescent microbead for fluorescent immunoassay and its manufactureInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】 本発明は、蛍光体と磁性微粒子
により標識した検体の蛍光強度を測定することにより、
該検体の抗原または抗体量を測定する蛍光免疫測定に用
いられる蛍光マイクロビーズ及びその製造方法に関する
ものである。TECHNICAL FIELD The present invention provides: by measuring the fluorescence intensity of a specimen labeled with a fluorescent substance and magnetic fine particles,
The present invention relates to a fluorescent microbead used for fluorescent immunoassay for measuring the amount of antigen or antibody of the sample and a method for producing the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】従来から知られている抗原抗体反応を利
用した免疫測定方法としては、ラジオイムノアッセイ
（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、蛍光イム
ノアッセイ（ＦＩＡ）、レーザイムノアッセイ（ＬＩ
Ａ）等が既に実用化されている。これらの方法は、それ
ぞれアイソトープ、酵素、蛍光物質等により標識した抗
原の有無を検出する方法である。しかしながら、ＥＩＡ
法、ＦＩＡ法、ＬＩＡ法は感度が、１０-6グラムからせ
いぜい１０-10グラムであり、抗原抗体反応において特
に有用である抗原検査としては感度不足であり、実用上
問題があった。また、ＲＩＡ法は感度的には１０-12グ
ラムあり、超微量分析、抗原検査が可能な測定法である
が、放射性物質を利用するため特殊設備を必要とし、汎
用性、価格等の点で問題があった。2. Description of the Related Art Conventionally known immunoassay methods utilizing the antigen-antibody reaction include radioimmunoassay (RIA), enzyme immunoassay (EIA), fluorescent immunoassay (FIA) and laser immunoassay (LI).
A) etc. have already been put to practical use. Each of these methods is a method of detecting the presence or absence of an antigen labeled with an isotope, an enzyme, a fluorescent substance, or the like. However, EIA
The methods, FIA method and LIA method have a sensitivity of 10 −6 gram to 10 −10 gram at the most, and are insufficient in sensitivity as an antigen test which is particularly useful in an antigen-antibody reaction, and there is a practical problem. In addition, the RIA method has a sensitivity of 10 -12 grams and is a measurement method capable of ultra trace analysis and antigen test, but requires special equipment because it uses radioactive substances, and in terms of versatility and price, etc. There was a problem.
【０００３】そこで、本発明者らは抗原検査が可能な１
０-12グラム以上の感度を有し、かつ 汎用性の高い測定
法として、抗体を結合した蛍光色素を含有する蛍光マイ
クロビーズ及び抗体を結合した磁性微粒子（磁性体標識
体）により検体中の抗原を捕捉し、これら蛍光マイクロ
ビーズと磁性微粒子と検体とからなる反応複合体を外部
磁場等により溶液表面の１点に集合させ、該集合点にレ
ーザ光を照射し、該検体から発生する蛍光を検出する免
疫測定法を提案してきた（例えば、特開平２−１５１７
６６号公報等参照のこと）。Therefore, the present inventors have made it possible to carry out an antigen test 1.
As a highly versatile measuring method having a sensitivity of 0 -12 grams or more, an antigen in a sample is measured by fluorescent microbeads containing a fluorescent dye bound with an antibody and magnetic fine particles (magnetic substance-labeled body) bound with an antibody. Of the fluorescent microbeads, the magnetic fine particles and the sample are collected at one point on the surface of the solution by an external magnetic field or the like, and the collected point is irradiated with laser light to emit fluorescence generated from the sample. An immunoassay method for detection has been proposed (for example, JP-A-2-1517).
66, etc.).
【０００４】この新しい測定方法において用いられる蛍
光マイクロビーズは、下記の条件を満足することが要求
される。 （１） 蛍光収率が高い。 （２） 化学残基がマイクロビーズ表面に存在する。 （３） 非特異的反応が少ない。 （４） マイクロビーズ間の凝集、沈降が少ない。 （５） Ｈｅ−Ｎｅレーザ等の安価で小型のレーザの発
振波長で励起することができる。 さらに詳しく述べると、まず使用される蛍光色素が高感
度であるためには、蛍光収率が高く、かつ、レーザ発振
波長に該蛍光色素の励起波長が合致していることが必要
である。また、マイクロビーズの材料特性として、抗体
を表面に結合させるために、アミノ基、カルボキシル
基、シアノ基等の化学残基がマイクロビーズ表面に存在
することが必要である。特に、アミノ基に対しては、安
定でかつ反応性の高い架橋剤が実用化されており、アミ
ノ基によりマイクロビーズ表面が修飾されていることは
重要である。The fluorescent microbeads used in this new measuring method are required to satisfy the following conditions. (1) The fluorescence yield is high. (2) Chemical residues are present on the microbead surface. (3) There are few nonspecific reactions. (4) There is little aggregation or sedimentation between microbeads. (5) It can be excited at the oscillation wavelength of an inexpensive and small laser such as a He-Ne laser. More specifically, in order for the fluorescent dye used to have high sensitivity, it is necessary that the fluorescence yield is high and the excitation wavelength of the fluorescent dye matches the laser oscillation wavelength. Further, as a material property of the microbeads, it is necessary that chemical residues such as amino groups, carboxyl groups and cyano groups be present on the microbead surface in order to bind the antibody to the surface. Particularly, for amino groups, stable and highly reactive cross-linking agents have been put to practical use, and it is important that the surface of the microbeads is modified with amino groups.
【０００５】また、免疫アッセイに用いられる材料の基
本的特性として、反応時に抗原との非特異的反応が少な
いことが必要である。ここで述べる非特異的反応とは、
マイクロビーズと磁性微粒子が抗原抗体反応を介しない
で結合することであり、非特異的反応が多いと測定上ノ
イズレベル（いわゆるコントロール値）の上昇を引き起
こし、実質的な感度低下となる。そこで、マイクロビー
ズの非特異的反応を防止するためには、親水性を向上さ
せ、かつ、表面電位をマッチングさせることが重要であ
る。また、マイクロビーズ間の凝集は磁性微粒子による
磁界への集合力を低下させ感度低下につながるために好
ましくない。また、マイクロビーズの沈降も同様の理由
により感度低下につながるために好ましくない。Further, as a basic characteristic of the material used in the immunoassay, it is necessary that the nonspecific reaction with the antigen during the reaction is small. The non-specific reaction described here is
The microbeads are bound to the magnetic fine particles without an antigen-antibody reaction. If there are many non-specific reactions, the noise level in measurement (so-called control value) is increased, and the sensitivity is substantially reduced. Therefore, in order to prevent the non-specific reaction of the microbeads, it is important to improve the hydrophilicity and match the surface potential. Further, agglomeration between the microbeads is not preferable because it reduces the gathering force of the magnetic fine particles on the magnetic field and leads to a decrease in sensitivity. Also, sedimentation of microbeads is not preferable because it leads to a decrease in sensitivity for the same reason.
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】ところで、従来の蛍光
マイクロビーズでは、上記条件中（１）及び（５）を満
たすものは多いが、他の条件（２）〜（４）を満足する
ものは皆無である。すなわち、（２）については、化学
残基、特にアミノ基の結合量はせいぜい０．１ｍｅｑ／
ｇであり、抗体結合において結合量に大きく作用するア
ミノ基量としては不十分な量である。また、（３）につ
いては、従来の蛍光マイクロビーズとタンパク質を混合
した後に表面電位の変化量を求め、この変化量から該蛍
光マイクロビーズの非特異的反応性を調べてみると、ほ
ぼ９０％以上の蛍光マイクロビーズで非特異的反応が生
じることが明らかとなった。したがって、従来の蛍光マ
イクロビーズでは、非特異的反応を防止することができ
ない。By the way, many conventional fluorescent microbeads satisfy the above conditions (1) and (5), but do not satisfy the other conditions (2) to (4). There is none. That is, with respect to (2), the bonding amount of chemical residues, particularly amino groups, is 0.1 meq / at most.
It is g, which is an insufficient amount as the amount of amino group that greatly affects the binding amount in antibody binding. Regarding (3), when the amount of change in surface potential is obtained after mixing conventional fluorescent microbeads and protein, and the non-specific reactivity of the fluorescent microbeads is examined from this amount of change, it is approximately 90%. It was revealed that the above-mentioned fluorescent microbeads cause a nonspecific reaction. Therefore, conventional fluorescent microbeads cannot prevent non-specific reactions.
【０００７】また、（４）については、例えば、粒径が
０．５μｍ以下の蛍光マイクロビーズでは、非常に分散
性が高く室温においても沈降することはないが、凝集が
認められる。また、粒径が３μｍ以上の蛍光マイクロビ
ーズでは、分散性が低いため沈降し易く、しかも、これ
ら蛍光マイクロビーズ間の凝集が認められる。以上のよ
うに、従来の蛍光マイクロビーズでは、条件（２）〜
（４）を満足するものがなく、特に、蛍光マイクロビー
ズと磁性微粒子と検体とからなる反応複合体にレーザ光
を照射する免疫測定法に適用することはできない。Regarding (4), for example, fluorescent microbeads having a particle size of 0.5 μm or less have very high dispersibility and do not settle at room temperature, but aggregation is observed. In addition, fluorescent microbeads having a particle size of 3 μm or more have low dispersibility and thus are likely to settle, and aggregation between these fluorescent microbeads is recognized. As described above, in the conventional fluorescent microbeads, the condition (2)-
There is nothing that satisfies (4), and it cannot be applied to an immunoassay method in which a reaction complex composed of fluorescent microbeads, magnetic fine particles, and a specimen is irradiated with laser light.
【０００８】本発明は、上記事情に鑑みてなされたもの
であって、簡便で迅速かつ高感度の免疫測定方法に好適
に用いることができる蛍光マイクロビーズ及びその製造
方法を提供することにある。The present invention has been made in view of the above circumstances, and it is an object of the present invention to provide a fluorescent microbead that can be suitably used in a simple, rapid, and highly sensitive immunoassay method and a method for producing the same.
【０００９】[0009]
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明は次の様な蛍光マイクロビーズ及びその製造
方法を採用した。すなわち、請求項１記載の蛍光マイク
ロビーズは、抗体を結合した蛍光色素を含有する蛍光マ
イクロビーズ及び抗体を結合した磁性体標識体により検
体中の抗原を捕捉し、これら蛍光マイクロビーズと磁性
体標識体と検体とからなる反応複合体にレーザ光を照射
し、該検体から発生する蛍光を検出する免疫測定法に用
いる蛍光マイクロビーズであって、多孔質マイクロビー
ズの表面にアミノ基を付加したことを特徴としている。To solve the above problems, the present invention employs the following fluorescent microbeads and a method for producing the same. That is, the fluorescent microbeads according to claim 1 capture the antigen in the sample by the fluorescent microbeads containing the fluorescent dye bound with the antibody and the magnetic substance-labeled substance bound with the antibody. A fluorescent microbead used in an immunoassay for irradiating a reaction complex composed of a body and a specimen with laser light to detect fluorescence emitted from the specimen, wherein an amino group is added to the surface of the porous microbead. Is characterized by.
【００１０】また、請求項２記載の蛍光免疫測定用蛍光
マイクロビーズの製造方法は、請求項１記載の蛍光免疫
測定用蛍光マイクロビーズを製造する方法であって、多
孔質マイクロビーズの表面にアミノ基を付加する工程
と、該アミノ基が付加された多孔質マイクロビーズを蛍
光溶液に含浸する工程と、蛍光染色された多孔質マイク
ロビーズを洗浄する工程とを備えたことを特徴としてい
る。The method for producing the fluorescent microbeads for fluorescent immunoassay according to claim 2 is the method for producing the fluorescent microbeads for fluorescent immunoassay according to claim 1, wherein the surface of the porous microbeads has an amino group. The method is characterized by including a step of adding a group, a step of impregnating the amino group-added porous microbeads with a fluorescent solution, and a step of washing the fluorescently stained porous microbeads.
【００１１】ここで、前記蛍光マイクロビーズの製造方
法について、さらに詳しく説明する。まず、多孔質ポリ
マービーズを作製する。この作製は、本発明者等が既に
提案している方法に従って行なう（特開平５−４３７０
６号公報、特開平５−４３７０７号公報等参照のこ
と）。すなわち、グリシジルメタクリレートを主成分と
し、副成分として２−ヒドロキシエチルメタクリレート
を含有するポリマーを架橋重合し、多孔質ポリマービー
ズを作製する。この多孔質ポリマービーズは粒径が０．
５〜３μｍであり、分散性が良好である。また、空隙率
は４０％程度であり、非常に多孔質である。Now, the method for producing the fluorescent microbeads will be described in more detail. First, porous polymer beads are prepared. This fabrication is performed according to the method already proposed by the present inventors (Japanese Patent Laid-Open No. 5-4370).
No. 6, JP-A-5-43707, etc.). That is, a polymer containing glycidyl methacrylate as a main component and 2-hydroxyethyl methacrylate as a subcomponent is cross-linked and polymerized to produce porous polymer beads. The porous polymer beads have a particle size of 0.
It is 5 to 3 μm, and the dispersibility is good. Further, the porosity is about 40%, and it is very porous.
【００１２】次いで、この多孔質ポリマービーズをアミ
ノ化する。アミノ化率は、従来のポリマービーズが０．
１ｍｅｑ／ｇ程度であるのに対し、本発明の多孔質ポリ
マービーズは０．８ｍｅｑ／ｇ以上であり非常に大き
い。Next, the porous polymer beads are aminated. The amination ratio of conventional polymer beads is 0.
While it is about 1 meq / g, the porous polymer beads of the present invention have an extremely large value of 0.8 meq / g or more.
【００１３】次いで、このアミノ化された多孔質ポリマ
ービーズを蛍光溶液に含浸する。ここでは、従来のポリ
マービーズの替わりに多孔質ポリマービーズを用いてい
るので、ビーズ内部まで染色され、かつ脱色され難い。
前記蛍光溶液は、蛍光色素を有機溶媒に溶解したもので
ある。蛍光色素は、Ｈｅ−Ｎｅレーザ（波長６３３ｎ
ｍ）やＡｒレーザ（波長５１４ｎｍ，４８８ｎｍ）等の
レーザ光源とのマッチング、励起波長と蛍光波長の波長
差の大きさ等を考慮し選択する。表１に使用可能な蛍光
色素を示す。Next, the aminated porous polymer beads are impregnated with a fluorescent solution. Here, since porous polymer beads are used instead of conventional polymer beads, it is difficult to stain and decolor the inside of the beads.
The fluorescent solution is a fluorescent dye dissolved in an organic solvent. The fluorescent dye is a He-Ne laser (wavelength 633n
m) or Ar laser (wavelengths 514 nm, 488 nm) or the like, matching with a laser light source, the size of the wavelength difference between the excitation wavelength and the fluorescence wavelength, and the like are selected. Table 1 shows usable fluorescent dyes.
【００１４】[0014]
【表１】 [Table 1]
【００１５】また、有機溶媒としては、蛍光色素の溶解
性がよく、かつ染色後の水系洗浄液と容易に置換できる
ように水との相溶性の良好なものであればよく、例え
ば、エタノール、メタノール、ジメチルホルムアミド等
が好適に用いられる。As the organic solvent, any solvent may be used as long as it has good solubility of the fluorescent dye and good compatibility with water so that it can be easily replaced with the aqueous washing solution after dyeing. For example, ethanol and methanol. , Dimethylformamide and the like are preferably used.
【００１６】ここで、蛍光色素の濃度及び浸漬時間は、
蛍光マイクロビーズの蛍光特性を左右する重要な要素で
ある。蛍光色素の濃度が高い場合には、マイクロビーズ
表面における蛍光色素の濃度が高くなり、蛍光消光の要
因となる。また、蛍光色素の濃度が低い場合には、染色
時間が著しく増大し、かつ、蛍光色素の染色量も理想的
な最大値に到達しない場合がある。Here, the concentration of the fluorescent dye and the immersion time are
It is an important factor that influences the fluorescent characteristics of fluorescent microbeads. If the concentration of the fluorescent dye is high, the concentration of the fluorescent dye on the surface of the microbeads will be high, which will cause fluorescence quenching. Further, when the concentration of the fluorescent dye is low, the dyeing time may be significantly increased, and the dyeing amount of the fluorescent dye may not reach the ideal maximum value.
【００１７】本発明者等は、蛍光強度と蛍光色素濃度及
び浸漬時間との関係について鋭意検討した結果、表２に
示すような蛍光強度の浸漬時間及び蛍光色素濃度依存性
なる知見を得た。また、蛍光強度は蛍光色素の種類によ
らないこともわかった。As a result of earnest studies on the relationship between the fluorescence intensity, the fluorescent dye concentration and the immersion time, the present inventors have found that the fluorescence intensity depends on the immersion time and the fluorescent dye concentration as shown in Table 2. It was also found that the fluorescence intensity does not depend on the type of fluorescent dye.
【００１８】[0018]
【表２】 [Table 2]
【００１９】この結果によれば、最適な含浸条件は、蛍
光色素濃度が１０-4〜３×１０-5ｍｏｌ／ｌ、浸漬時間
が１日〜４日であり、より好適な条件は、蛍光色素濃度
が１．５×１０-5ｍｏｌ／ｌ、浸漬時間が４日である。According to these results, the optimum impregnation condition is that the fluorescent dye concentration is 10 −4 to 3 × 10 −5 mol / l, and the immersion time is 1 to 4 days. The dye concentration is 1.5 × 10 −5 mol / l, and the immersion time is 4 days.
【００２０】[0020]
【実施例】以下、本発明の一実施例について説明する。
なお、以下に開示する実施例は、本発明の単なる例示に
過ぎず本発明の範囲を何等限定するものではない。EXAMPLES An example of the present invention will be described below.
The examples disclosed below are merely examples of the present invention and do not limit the scope of the present invention.
【００２１】まず、蛍光染色用のマイクロビーズを作製
した。プロピオン酸エチル２５．３ｍｌに、グリシジル
メタクリレートを３．６ｍｌ及び２−ヒドロキシエチル
メタクリレートを０．３４ｍｌそれぞれ加えて混合し、
さらに、架橋剤としてトリエチレングリコールジメタク
リレートを０．７４ｍｌ、重合開始剤としてアゾビスイ
ソブチルニトリルを０．５５ｇそれぞれ添加した。 次
に、この混合溶液を直ちに４０℃の温度中に３時間静置
して重合した後、該重合反応液をアセトン中に投入し、
重合を停止して架橋重合体とした。このようにして、真
球状の単分散微粒子であるマイクロビーズを作製するこ
とができた。First, micro beads for fluorescent staining were prepared. To 25.3 ml of ethyl propionate, 3.6 ml of glycidyl methacrylate and 0.34 ml of 2-hydroxyethyl methacrylate were added and mixed, respectively.
Furthermore, 0.74 ml of triethylene glycol dimethacrylate was added as a crosslinking agent, and 0.55 g of azobisisobutylnitrile was added as a polymerization initiator. Next, this mixed solution was immediately allowed to stand at a temperature of 40 ° C. for 3 hours for polymerization, and then the polymerization reaction solution was put into acetone,
Polymerization was stopped to obtain a crosslinked polymer. In this way, it was possible to produce the microbeads, which are spherical monodisperse particles.
【００２２】次に、このマイクロビーズを遠心洗浄し
た。まず、前操作として、このマイクロビーズをエタノ
ール中に分散させ、該エタノールの温度を０〜３℃に保
ちつつ超音波洗浄を行い、その後、アセトンを用いて３
回、その後エタノールを用いて２回それぞれ遠心洗浄を
行なった。Next, the microbeads were washed by centrifugation. First, as a pre-operation, the microbeads are dispersed in ethanol, ultrasonic cleaning is performed while the temperature of the ethanol is maintained at 0 to 3 ° C., and then acetone is used for 3 times.
Centrifugal washing was carried out twice, and then twice with ethanol.
【００２３】洗浄したマイクロビーズをエタノールに分
散した状態で、８％のアンモニア水溶液に投入し、グリ
シジル基のアミノ化を行なった。アミノ化は、アンモニ
ア水溶液の温度を０〜３℃に保ちつつ超音波を照射しな
がら行なった。その後、該溶液の温度を上昇させてアミ
ノ化を促進させた。アミノ化後、マイクロビーズを水洗
し、さらに希硫酸を用いて残存グリシジル基の加水分解
を行ない、次いで、蒸留水を用いて水洗し、マイクロビ
ーズ濃度１．６％のビーズ分散液を作製した。アミノ化
されたマイクロビーズは、平均粒径が１．５μｍであっ
た。また、電子顕微鏡により表面観察を行なったとこ
ろ、該マイクロビーズは多孔質であることがわかった。The washed microbeads in a state of being dispersed in ethanol were put into an 8% aqueous ammonia solution to aminate the glycidyl group. The amination was performed while irradiating ultrasonic waves while keeping the temperature of the aqueous ammonia solution at 0 to 3 ° C. Then, the temperature of the solution was raised to promote amination. After the amination, the microbeads were washed with water, the residual glycidyl group was hydrolyzed using dilute sulfuric acid, and then washed with distilled water to prepare a bead dispersion having a microbead concentration of 1.6%. The aminated microbeads had an average particle size of 1.5 μm. In addition, when the surface was observed with an electron microscope, it was found that the microbeads were porous.
【００２４】次に、該マイクロビーズを蛍光溶液に含浸
し、蛍光マイクロビーズを作製した。まず、蛍光色素オ
キサジン７２０（分子量４３１）０．６６ｍｇをエタノ
ール１０００ｍｌに溶解し、１０-5Ｍの蛍光溶液を作製
した。次に、この蛍光溶液５ｍｌに前記ビーズ分散液を
０．５ｍｌ加え、含浸した。所定時間放置した後、回転
数３０００ｒｐｍにて１０分間遠心分離し、上澄を除去
した。さらに、０．０５％ＢＳＡ−ＨＥＰＥＳ溶液を１
０ｍｌ加え、再度同一条件にて遠心分離を行い、上澄を
除去した。この操作を３回繰り返し行なった。遠心後の
蛍光マイクロビーズは、１％ＢＳＡ−ＨＥＰＥＳ溶液１
ｍｌに分散した。Next, the microbeads were impregnated with a fluorescent solution to prepare fluorescent microbeads. First, 0.66 mg of the fluorescent dye oxazine 720 (molecular weight 431) was dissolved in 1000 ml of ethanol to prepare a 10 −5 M fluorescent solution. Next, 0.5 ml of the above bead dispersion was added to 5 ml of this fluorescent solution to impregnate it. After leaving it for a predetermined time, it was centrifuged at a rotation speed of 3000 rpm for 10 minutes to remove the supernatant. Further, add 1% of 0.05% BSA-HEPES solution.
0 ml was added and the mixture was centrifuged again under the same conditions to remove the supernatant. This operation was repeated 3 times. The fluorescent microbeads after centrifugation were 1% BSA-HEPES solution 1
dispersed in ml.
【００２５】このようにして得られた蛍光マイクロビー
ズの諸特性は、表３のとおりである。Table 3 shows various characteristics of the thus obtained fluorescent microbeads.
【表３】 [Table 3]
【００２６】[0026]
【発明の効果】以上説明した様に、本発明の請求項１記
載の蛍光マイクロビーズによれば、多孔質マイクロビー
ズの表面にアミノ基を付加したので、蛍光収率を向上さ
せることができ、したがって、簡便で迅速かつ高感度の
免疫測定方法に好適に用いることができる蛍光マイクロ
ビーズを提供することができる。As described above, according to the fluorescent microbeads of the first aspect of the present invention, since amino groups are added to the surface of the porous microbeads, the fluorescent yield can be improved, Therefore, it is possible to provide a fluorescent microbead that can be suitably used in a simple, rapid, and highly sensitive immunoassay method.
【００２７】また、請求項２記載の蛍光免疫測定用蛍光
マイクロビーズの製造方法によれば、多孔質マイクロビ
ーズの表面にアミノ基を付加する工程と、該アミノ基が
付加された多孔質マイクロビーズを蛍光溶液に含浸する
工程と、蛍光染色された多孔質マイクロビーズを洗浄す
る工程とを備えたので、簡易でかつ高い蛍光収率の蛍光
マイクロビーズを製造することができる。According to the method for producing fluorescent microbeads for fluorescent immunoassay according to claim 2, the step of adding an amino group to the surface of the porous microbead and the porous microbead to which the amino group is added Since the method includes a step of impregnating a fluorescent solution with a fluorescent solution and a step of washing the fluorescent-stained porous microbeads, it is possible to easily manufacture fluorescent microbeads with a high fluorescence yield.
Claims (2)
マイクロビーズ及び抗体を結合した磁性体標識体により
検体中の抗原を捕捉し、これら蛍光マイクロビーズと磁
性体標識体と検体とからなる反応複合体にレーザ光を照
射し、該検体から発生する蛍光を検出する免疫測定法に
用いる蛍光マイクロビーズであって、多孔質マイクロビ
ーズの表面にアミノ基を付加したことを特徴とする蛍光
免疫測定用蛍光マイクロビーズ。1. A reaction consisting of fluorescent microbeads containing a fluorescent dye bound to an antibody and a magnetic substance-labeled substance bound to an antibody to capture an antigen in a specimen, and comprising the fluorescent microbeads, the magnetic substance-labeled substance and the specimen. A fluorescent immunobead for use in an immunoassay for irradiating a complex with laser light to detect fluorescence emitted from the specimen, characterized in that an amino group is added to the surface of the porous microbead. Fluorescent micro beads.
を付加する工程と、該アミノ基が付加された多孔質マイ
クロビーズを蛍光溶液に含浸する工程と、蛍光染色され
た多孔質マイクロビーズを洗浄する工程とを備えたこと
を特徴とする請求項１記載の蛍光免疫測定用蛍光マイク
ロビーズの製造方法。2. A step of adding an amino group to the surface of the porous microbeads, a step of impregnating the porous microbeads to which the amino group has been added with a fluorescent solution, and washing the fluorescent-stained porous microbeads. The method for producing fluorescent microbeads for fluorescent immunoassay according to claim 1, further comprising:
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8764293A JPH06300763A (en) | 1993-04-14 | 1993-04-14 | Fluorescent microbead for fluorescent immunoassay and its manufacture |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8764293A JPH06300763A (en) | 1993-04-14 | 1993-04-14 | Fluorescent microbead for fluorescent immunoassay and its manufacture |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06300763A true JPH06300763A (en) | 1994-10-28 |
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ID=13920642
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| JP8764293A Pending JPH06300763A (en) | 1993-04-14 | 1993-04-14 | Fluorescent microbead for fluorescent immunoassay and its manufacture |
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1993
- 1993-04-14 JP JP8764293A patent/JPH06300763A/en active Pending
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