JPH06292587A - Decomposition of high-molecular weight polyethylene glycol - Google Patents
Decomposition of high-molecular weight polyethylene glycolInfo
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- JPH06292587A JPH06292587A JP10763093A JP10763093A JPH06292587A JP H06292587 A JPH06292587 A JP H06292587A JP 10763093 A JP10763093 A JP 10763093A JP 10763093 A JP10763093 A JP 10763093A JP H06292587 A JPH06292587 A JP H06292587A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、高分子量ポリエチレン
グリコールの分解方法に関する。更に詳しくは、微生物
を用いた高分子量ポリエチレングリコールの分解方法に
関する。FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a method for decomposing high molecular weight polyethylene glycol. More specifically, it relates to a method for decomposing high molecular weight polyethylene glycol using a microorganism.
【０００２】[0002]
【従来の技術】非イオン系界面活性剤の構成成分でもあ
るポリエチレングリコールは、環境保持の上からも最終
的には分解されなければならない。ポリオキシエチレン
系非イオン界面活性剤の微生物による分解法として、シ
ュードモナス属に属するシュードモナス nov. Sp. を培
地に培養し、得られた菌体または菌体を破壊して得られ
た抽出物をこの界面活性剤に作用させる方法が提案され
ている(特公昭54-36674号公報)。しかしながら、そこで
分解の対象とされているのは、酸化エチレンを7〜8個程
度付加したポリエチレングリコールのドデシルエーテル
などであり、高分子量ポリエチレングリコールを対象と
したものではない。2. Description of the Related Art Polyethylene glycol, which is also a constituent of nonionic surfactants, must be finally decomposed in view of environmental preservation. As a method for degrading polyoxyethylene-based nonionic surfactants by microorganisms, Pseudomonas nov. Sp. Belonging to the genus Pseudomonas was cultured in a medium and the obtained bacterial cells or the extract obtained by destroying the bacterial cells A method for acting on a surfactant has been proposed (Japanese Patent Publication No. 54-36674). However, what is targeted for decomposition there is dodecyl ether of polyethylene glycol to which about 7 to 8 ethylene oxides are added, and not high molecular weight polyethylene glycol.
【０００３】一般に、高分子量ポリエチレングリコール
は、微生物によって分解され難いものとされており、そ
の理由として、高分子量ポリエチレングリコールを分解
すると、微生物の生育を阻害するグリオキシル酸が生産
されるためとされている。Generally, high molecular weight polyethylene glycol is considered to be difficult to be decomposed by microorganisms. The reason is that when high molecular weight polyethylene glycol is decomposed, glyoxylic acid which inhibits the growth of microorganisms is produced. There is.
【０００４】そこで、これの打開方法として、グリオキ
シル酸を分解させるフラボバクテリウム属微生物とポリ
エチレングリコールを分解させるシュードモナス属微生
物との２種の微生物を用いた共生培養による分解法が提
案されているが、この方法でも分解し得るポリエチレン
グリコールの上限分子量は約20000程度とされている。Therefore, as a breakthrough method for this, there has been proposed a decomposition method by symbiotic culture using two kinds of microorganisms, a microorganism of the genus Flavobacterium that decomposes glyoxylic acid and a microorganism of the genus Pseudomonas that decomposes polyethylene glycol. The maximum molecular weight of polyethylene glycol that can be decomposed by this method is about 20,000.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、単一
の微生物を用いて、約20000以上の分子量を有する高分
子量ポリエチレングリコールを分解する方法を提供する
ことにある。An object of the present invention is to provide a method for degrading high molecular weight polyethylene glycol having a molecular weight of about 20,000 or more using a single microorganism.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】かかる本発明の目的は、
P.シュードアルカリジェニス No.02A (FERM P-13574)ま
たはバチルス sp. No.S3A (FERM P-13573) を高分子量
ポリエチレングリコールを含有する培地に添加し、培養
することにより、高分子量ポリエチレングリコールを分
解させる方法によって達成される。The object of the present invention is as follows.
P. pseudoalkaline genis No. 02A (FERM P-13574) or Bacillus sp. No. S3A (FERM P-13573) was added to a medium containing high molecular weight polyethylene glycol, and cultured to obtain high molecular weight polyethylene glycol. It is achieved by a method of decomposing.
【０００７】P.シュードアルカリジェニス No.02A [Ｉ]
は、神奈川県茅ヶ崎市内の土壌から、またバチルス s
p. No.S3A [II] は、静岡県相良町の土壌からそれぞれ
分離されたものであり、それの培養は、任意の培地を用
い、37℃の振とう条件下で1〜10日間程度行われる。具
体的には、L-ブイヨン(トリプトン10g、酵母エキス5g、
NaCl 5g、殺菌前のpH7.0)3mlを試験管に入れ、これに採
取した土壌を入れ、37℃で24時間振とう培養した。P. Pseudo Alkali Genice No. 02A [I]
Is from the soil in Chigasaki City, Kanagawa Prefecture,
p. No.S3A [II] was isolated from each soil in Sagara-cho, Shizuoka Prefecture, and the culture was performed using an arbitrary medium under shaking conditions at 37 ° C for about 1-10 days. Be seen. Specifically, L-broth (tryptone 10 g, yeast extract 5 g,
5 g of NaCl and 3 ml of pH 7.0 before sterilization) were placed in a test tube, and the soil thus sampled was placed in the test tube, followed by shaking culture at 37 ° C for 24 hours.
【０００８】これらは、それぞれ下記の如き菌学的性質
を有する。 [Ｉ] [II] Ａ．形態 (１)細胞の形、大きさ 桿菌、0.5×1μm 桿菌、0.5×1μm (２)運動性 あり あり (３)胞子形成 なし あり (４)グラム染色性 陰性 陽性 Ｂ．培地における成育状態 肉汁寒天平板培養 褐色、隆起あり 褐色、隆起あり Ｃ．生理学的性質 (１)硝酸塩の還元 あり あり (２)ＶＰテスト なし なし (３)インドールの生成 なし なし (４)硫化水素の生成 なし なし (５)クエン酸の利用 あり あり (６)色素の生成 なし なし (７)ウレアーゼの生産 なし なし (８)オキシダーゼ活性 あり あり (９)リジンの分解 なし なし (10)オルニチンの分解 なし なし (11)アルギニンの分解 あり あり (12)生育の範囲 pH4〜5、温度30〜45℃ pH4〜9、温度30〜40℃ (13)酸素に対する態度 好気性 通性嫌気性 (14)糖類からの酸の生成 グルコース − ＋ マンニット − − アドニット − − アラビノース − − イノシット − − ラムノース − − ソルビット − − 麦 芽 糖 − − 白 糖 − − 培地：ペプトン2g、NaCl 5g、K2HPO4 0.3g、炭水化物10
g、ブロムチモールブルー0.08g、寒天15g、蒸留水100ml
(pH7.1) 添加濃度：1%Each of these has the following mycological properties. [I] [II] A. Morphology (1) Shape and size of cells Bacilli, 0.5 × 1 μm Bacilli, 0.5 × 1 μm (2) Motile Yes (3) No sporulation Yes (4) Gram stain Negative Positive B. Growth condition in medium Broth agar plate culture Brown, with ridge Brown, with ridge C. Physiological properties (1) Reduction of nitrate Yes Yes (2) VP test No No (3) Indole formation No No (4) Hydrogen sulfide formation No No (5) Citric acid utilization Yes Yes (6) Dye formation No No (7) Urease production No No (8) Oxidase activity Yes Yes (9) Lysine decomposition No No (10) Ornithine decomposition No No (11) Arginine decomposition Yes Yes (12) Growth range pH 4-5 , Temperature 30 ~ 45 ℃ pH4 ~ 9, Temperature 30 ~ 40 ℃ (13) Attitude toward oxygen Aerobic and facultative anaerobic (14) Acid production from sugars Glucose- + mannitol-adnitol-arabinose-inosit − − Rhamnose − − Sorbit − − Maltose − − White sugar − − Medium: Peptone 2 g, NaCl 5 g, K 2 HPO 4 0.3 g, carbohydrate 10
g, bromthymol blue 0.08g, agar 15g, distilled water 100ml
(pH7.1) Additive concentration: 1%
【０００９】以上の菌学的性質に基づいて、これらの菌
を Manual of DeterminativeBacteriology 第9版より検
索した結果、それぞれシュードモナス属およびバチルス
属に属する菌であることを確認した。Based on the above-mentioned mycological properties, these bacteria were searched from the Manual of Determinative Bacteriology 9th edition, and as a result, they were confirmed to belong to the genus Pseudomonas and the genus Bacillus, respectively.
【００１０】これらの菌を用いての高分子量ポリエチレ
ングリコール(高分子量ポリエチレングリコール基含有
物質を含む)の分解は、これらの菌を高分子量ポリエチ
レングリコールを含有する培地に添加することにより行
われる。培地としては、例えば トリプトン 10g 酵母エキス 5g NaCl 5g 高分子量PEG(MW50000) 10g の混合物を、pH7.0に調整した後、121℃、1.1kg/cm2、1
5分間の滅菌処理したものが用いられ、このような組成
の培養培地3ml当り108〜109個の菌を加え、振とう条件
下、37℃で約3〜10日間程度培養すると、高分子量ポリ
エチレングリコールは効果的に分解される。Decomposition of high molecular weight polyethylene glycol (including high molecular weight polyethylene glycol group-containing substance) using these bacteria is carried out by adding these bacteria to a medium containing high molecular weight polyethylene glycol. As the medium, for example, a mixture of tryptone 10 g yeast extract 5 g NaCl 5 g high molecular weight PEG (MW50000) 10 g was adjusted to pH 7.0, then 121 ° C, 1.1 kg / cm 2 , 1
A sterilized product for 5 minutes is used, and 10 8 to 10 9 cells are added to 3 ml of the culture medium having such a composition, and the mixture is cultivated under shaking conditions at 37 ° C. for about 3 to 10 days. Polyethylene glycol is effectively degraded.
【００１１】[0011]
【発明の効果】単一の微生物であるP.シュードアルカリ
ジェニス No.02A またはバチルス sp.No.S3A を用い、
これを高分子量ポリエチレングリコールを含有する培地
に添加し、培養することにより、約20000以上の分子量
を有する高分子量ポリエチレングリコールであっても、
それの分解を効果的に行うことができる。[Effects of the Invention] Using a single microorganism, P. pseudoalkaline genis No. 02A or Bacillus sp. No. S3A,
By adding this to a medium containing a high molecular weight polyethylene glycol and culturing, even a high molecular weight polyethylene glycol having a molecular weight of about 20,000 or more,
It can be effectively decomposed.
【００１２】[0012]
【実施例】次に、実施例について本発明を説明する。EXAMPLES The present invention will now be described with reference to examples.
【００１３】実施例１ 前記滅菌処理された培養培地3mlに、P.シュードアルカ
リジェニス No.02A を108個/mlの量で加え、振とう回数
120rpm、37℃で10日間の培養を行った。培養液を、遠心
分離(4000rpm、15分間)して集菌した後、上澄液を0.2μ
mのフィルターで除菌し、ポリエチレングリコール分解
定量試料とした。Example 1 P. pseudoalkaline Genice No. 02A was added to 3 ml of the sterilized culture medium at a rate of 10 8 pieces / ml, and the number of times of shaking was increased.
Culture was performed at 120 rpm and 37 ° C. for 10 days. The culture solution was centrifuged (4000 rpm, 15 minutes) to collect the cells, and the supernatant was 0.2 μm.
Bacteria were sterilized with a filter of m and used as a polyethylene glycol decomposition quantitative sample.
【００１４】ポリエチレングリコール分解能力の定量
は、展開溶媒：蒸留水、流速：2ml/分、カラム：東ソー
製品G5000PWXLを用いて、示差屈折計を用いて行われ、
培養前後におけるポリエチレングリコールの溶出出力の
減少率を求めた。 培養前のPEG溶出出力 87.0mV 培養後のPEG溶出出力 33.0mV 減少率 62%Quantification of polyethylene glycol decomposing ability was carried out using a differential refractometer using a developing solvent: distilled water, a flow rate: 2 ml / min, a column: Tosoh G5000PWXL.
The reduction rate of the elution output of polyethylene glycol before and after the culture was determined. PEG elution output before culturing 87.0mV PEG elution output after culturing 33.0mV Reduction rate 62%
【００１５】実施例２ 実施例１において、P.シュードアルカリジェニス No.02
A の代わりに、バチルス sp. No.S3A を用いると、次の
ような結果が得られた。 培養前のPEG溶出出力 70.3mV 培養後のPEG溶出出力 27.4mV 減少率 ６１％Example 2 In Example 1, P. pseudoalkaline Genice No. 02
When Bacillus sp. No. S3A was used instead of A, the following results were obtained. PEG elution output before culturing 70.3mV PEG elution output after culturing 27.4mV Decrease rate 61%
─────────────────────────────────────────────────────
─────────────────────────────────────────────────── ───
【手続補正書】[Procedure amendment]
【提出日】平成６年４月２８日[Submission date] April 28, 1994
【手続補正１】[Procedure Amendment 1]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】特許請求の範囲[Name of item to be amended] Claims
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【特許請求の範囲】[Claims]
【手続補正２】[Procedure Amendment 2]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】０００６[Correction target item name] 0006
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】かかる本発明の目的は、
シュードモナス属シュードアルカリジェニス種に属し、
高分子量ポリエチレングリコールを分解する能力を有す
る微生物、例えばシュードモナスシュードアルカリジェ
ニスＮｏ．０２Ａ（ＦＥＲＭ Ｐ−１３５７４）または
バチルス属に属し、高分子量ポリエチレングリコールを
分解する能力を有する微生物、例えばバチルス ｓｐ．
Ｎｏ．Ｓ３Ａ（ＦＥＲＭ Ｐ−１３５７３）を高分子量
ポリエチレングリコールを含有する培地に添加し、培養
することにより、高分子量ポリエチレングリコールを分
解させる方法によって達成される。The object of the present invention is as follows.
Pseudomonas belonging to the genus Pseudomonas belonging to Genius
Has the ability to degrade high molecular weight polyethylene glycols
Microorganisms such as Pseudomonas pseudoalkaline Genice No. 02A (FERM P-13574) or
Belongs to the genus Bacillus, high molecular weight polyethylene glycol
Microorganisms capable of degrading, for example Bacillus sp.
No. This can be achieved by a method of degrading high molecular weight polyethylene glycol by adding S3A (FERM P-13573) to a medium containing high molecular weight polyethylene glycol and culturing.
【手続補正３】[Procedure 3]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】０００７[Correction target item name] 0007
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【０００７】 シュードモナスシュードアルカリジェニ
スＮｏ．０２Ａ［Ｉ］は、神奈川県茅ケ崎市内の土壌か
ら、またバチルス ｓｐ．Ｎｏ．Ｓ３Ａ［ＩＩ］は、
静岡県相良町の土壌からそれぞれ分離されたものであ
り、それの培養は、任意の培地を用い、３７℃の振とう
条件下で１〜１０日間程度行われる。具体的には、Ｌ−
ブイヨン（トリプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、ＮａＣ
ｌ ５ｇ，殺菌前のｐＨ７．０）３ｍｌを試験管に入
れ、これに採取した土壌を入れ、３７℃で２４時間振と
う培養した。 Pseudomonas pseudo-alkaline Genice No. 02A [I] is derived from soil in Chigasaki City, Kanagawa Prefecture, and from Bacillus sp. No. S3A [II] is
The soil is separated from the soil in Sagara-cho, Shizuoka Prefecture, and the culture is performed using an arbitrary medium under shaking conditions at 37 ° C. for about 1 to 10 days. Specifically, L-
Bouillon (10 g tryptone, 5 g yeast extract, NaC
3 g of 5 g, pH 7.0 before sterilization) was put in a test tube, the soil collected was put in this, and shake culture was carried out at 37 ° C. for 24 hours.
【手続補正４】[Procedure amendment 4]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１１[Correction target item name] 0011
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【００１１】[0011]
【発明の効果】単一の微生物であるシュードモナスシュ
ードアルカリジェニスＮｏ．０２Ａまたはバチルス ｓ
ｐ．Ｎｏ．Ｓ３Ａを用い、これを高分子量ポリエチレン
グリコールを含有する培地に添加し、培養することによ
り、約２００００以上の分子量を有する高分子量ポリエ
チレングリコールであっても、それの分解を効果的に行
うことができる。EFFECT OF THE INVENTION Pseudomonas pseudoalkaline Genice No. 1 which is a single microorganism. 02A or Bacillus
p. No. By using S3A and adding it to a medium containing high molecular weight polyethylene glycol and culturing, even high molecular weight polyethylene glycol having a molecular weight of about 20,000 or more can be effectively decomposed. .
【手続補正５】[Procedure Amendment 5]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１３[Correction target item name] 0013
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【００１３】実施例１ 前記滅菌処理された培養培地３ｍｌに、シュードモナス
シュードアルカリジェニスＮｏ．０２Ａを１０８個／ｍ
ｌの量で加え、振とう回数１２０ｒｐｍ、３７℃で１０
日間の培養を行った。培養液を、遠心分離（４０００ｒ
ｐｍ、１５分間）して集菌した後、上澄液を０．２μｍ
のフィルターで除菌し、ポリエチレングリコール分解定
量試料とした。Example 1 Pseudomonas pseudoalkaline Genice No. 3 was added to 3 ml of the sterilized culture medium. 02A 10 8 / m
l, shaking frequency 120 rpm, 37 ° C for 10
Culture was carried out for one day. Centrifuge the culture solution (4000r
pm, 15 minutes) to collect the bacteria, and then the supernatant is 0.2 μm
The sample was sterilized with a filter to prepare a polyethylene glycol decomposition quantitative sample.
【手続補正６】[Procedure correction 6]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１５[Name of item to be corrected] 0015
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction content]
【００１５】実施例２ 実施例１において、シュードモナスシュードアルカリジ
ェニスＮｏ．０２Ａの代わりに、バチルス ｓｐ．Ｎ
ｏ．Ｓ３Ａを用いると、次のような結果が得られた。 培養前のＰＥＧ溶出出力 ７０．３ｍＶ 培養後のＰＥＧ溶出出力 ２７．４ｍＶ 減少率 ６１％Example 2 In Example 1, Pseudomonas pseudoalkali Genis No. 02A instead of Bacillus sp. N
o. The following results were obtained using S3A. PEG elution output before culturing 70.3 mV PEG elution output after culturing 27.4 mV decrease rate 61%
Claims (2)
ERM P-13574) を高分子量ポリエチレングリコールを含
有する培地に添加し、培養することを特徴とする高分子
量ポリエチレングリコールの分解方法。1. P. Pseudo Alkali Genice No. 02A (F
ERM P-13574) is added to a medium containing a high molecular weight polyethylene glycol, and the mixture is cultured, which is a method for decomposing a high molecular weight polyethylene glycol.
を高分子量ポリエチレングリコールを含有する培地に添
加し、培養することを特徴とする高分子量ポリエチレン
グリコールの分解方法。2. Bacillus sp. No.S3A (FERM P-13573)
A method for decomposing high molecular weight polyethylene glycol, which comprises culturing by adding to a medium containing high molecular weight polyethylene glycol.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10763093A JP3178159B2 (en) | 1993-04-09 | 1993-04-09 | Decomposition method of high molecular weight polyethylene glycol |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10763093A JP3178159B2 (en) | 1993-04-09 | 1993-04-09 | Decomposition method of high molecular weight polyethylene glycol |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06292587A true JPH06292587A (en) | 1994-10-21 |
| JP3178159B2 JP3178159B2 (en) | 2001-06-18 |
Family
ID=14464065
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10763093A Expired - Fee Related JP3178159B2 (en) | 1993-04-09 | 1993-04-09 | Decomposition method of high molecular weight polyethylene glycol |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3178159B2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996026974A1 (en) * | 1995-02-28 | 1996-09-06 | Mitsui Toatsu Chemicals, Incorporated | Method of degrading polymer |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102014100301B3 (en) * | 2014-01-13 | 2014-12-04 | Sick Ag | Opto-electronic sensor for detecting objects in a surveillance area |
| CN106597466A (en) | 2016-12-22 | 2017-04-26 | 深圳市镭神智能系统有限公司 | 360-DEG scanning laser radar based on optical communication |
-
1993
- 1993-04-09 JP JP10763093A patent/JP3178159B2/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996026974A1 (en) * | 1995-02-28 | 1996-09-06 | Mitsui Toatsu Chemicals, Incorporated | Method of degrading polymer |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3178159B2 (en) | 2001-06-18 |
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