JPH06189739A - メチシリン耐性黄色ブドウ球菌検査用のスタンプ用培地及びメチシリン耐性黄色ブドウ球菌の検査方法 - Google Patents

メチシリン耐性黄色ブドウ球菌検査用のスタンプ用培地及びメチシリン耐性黄色ブドウ球菌の検査方法

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JPH06189739A
JPH06189739A JP12274392A JP12274392A JPH06189739A JP H06189739 A JPH06189739 A JP H06189739A JP 12274392 A JP12274392 A JP 12274392A JP 12274392 A JP12274392 A JP 12274392A JP H06189739 A JPH06189739 A JP H06189739A
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stamping
stamp
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浩史 大ケ瀬
Koichi Nakazawa
弘一 中澤
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AKAMON UINTON KK
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(以下、MR
SAという。)を、たとえば24時間の短時間で確実に
検査することができるMRSA用のスタンプ培地を提供
すること。 【構成】 シャーレの本体に寒天培地が満たされ、該本
体に蓋体が取外し可能に被せられて、かつ前記培地及び
蓋体で被った内部が滅菌状態にされ、被検査部位にスタ
ンプ採菌するためのスタンプ培地である。前記寒天培地
が、メチシリン、及び消毒剤の中和剤を含むベアドパー
カー培地よりなることを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】この発明はメチシリン(DMPP
C)に対して耐性を有するメチシリン耐性黄色ブドウ球
菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus 、
以下MRSAと略記する。)検査用のスタンプ用培地,
及びMRSAの検査方法に関するものである。
【0002】
【従来の技術】MRSAは、病院内感染の起因菌として
注目されて以来、近年、各病院に固有の菌株が定着して
おり、いまだ根絶されるに及んでいない。MRSAは主
に接触伝播し、患者から患者および医療従事者への直接
的伝播、および医療機器、器材などを介しての間接的伝
播により周囲の医療従事者、患者に蔓延する。従ってM
RSAの汚染の恐れがある場合や、消毒効果の確認のた
めに、MRSAの検出検査が必要となる。そして、MR
SAの従来の検査は、ハートインヒュージョン寒天培地
あるいは卵黄加マンニット食塩寒天培地にて行なわれて
いる。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、前記し
たハートインヒュージョン寒天培地および卵黄加マンニ
ット食塩寒天培地を用いるMRSAの検査方法は、メチ
シリン耐性表皮ブドウ球菌(methicillin resistant St
aphylococcus epidermidis、以下、MRSEと略記す
る)などの他菌も同時に検出するので、菌の分離及び同
定に2週間以上の多くの時間と労力を要し、コストもか
かる問題があった。
【0004】そこで、本発明の第1の課題は、前記した
従来の問題点を解消しようとしたものであって、MRS
Aを、たとえば24時間の、短時間でかつ低コストで確
実に検査することができるMRSA用のスタンプ用培地
を提供することにある。
【0005】また、本発明の第2の課題は、MRSAの
汚染場所、あるいは汚染された可能性のある場所などに
おいて、簡単にサンプリングできて短時間で検査するこ
とができるMRSAの検査方法を提供することにある。
【0006】
【課題を解決するための手段】前記した第1の課題を達
成するために請求項1記載の発明は、シャーレの本体に
寒天培地が満たされ、該本体に蓋体が取外し可能に被せ
られて、かつ前記培地及び蓋体で被った内部が滅菌状態
にされ、被検査部位にスタンプ採菌するためのスタンプ
用培地であって、前記寒天培地が、メチシリン、及び消
毒剤の中和剤を含むベアドパーカー培地(メチシリン及
び中和剤を含むベアドパーカー培地を以下、MTB培地
と略記する。)よりなることを特徴とする。
【0007】そして、前記した第2の課題を達成するた
めの請求項2記載の発明は、シャーレの本体の寒天培地
を被検査部位にスタンプして採菌した後、蓋体を被せ、
所定温度でかつ所定時間保持して前記寒天培地に形成さ
れるコロニーを判定する菌の検査方法において、請求項
1記載のスタンプ用培地を用いることを特徴とする。
【0008】
【作用】請求項1の発明において、MTB培地は黄色ブ
ドウ球菌の生育に対して特異性を有する。培地中のメチ
シリンはメチシリンに耐性のない菌株を生育させない。
培地中の中和剤は、スタンプ採菌(以下、スタンピング
ともいう。)の際に採取される消毒剤の影響をなくす作
用をする。
【0009】請求項2の発明は、請求項1のスタンプ用
培地を用いることより、該スタンプ用培地の作用(請求
項1の上記作用)を有効に利用してMRSAをスタンピ
ング法により検査可能とする。
【0010】
【実施例】まず、本発明を得るための第1の試験例を、
図4〜図6を参照して説明する。図4(A)は既知MR
SAの臨床分離株,及び病院内環境に現れ易い、コアグ
ラーゼ陰性ブドウ球菌(coagulase negative staphyloc
occi)、コリネバクテリウム、ミクロコッカスなどと、
滅菌蒸留水にてマクファーランド(McFarlan
d)1.0の懸濁液を調製し、その1mlを、滅菌済の
直径9cmの被検査シャーレ11,12に各塗沫後乾燥
したものである。図4において11A,12Aは各塗沫
面を示す。そして、MTB培地3(後述する実施例にお
けるMTB培地3の調製の記載部分参照。)よりなるス
タンプ用培地1,及び消毒剤の中和剤を加えたハートイ
ンヒュージョン培地13(以下、THI培地と略記す
る、表1の配合成分参照。)よりなるスタンプ用培地1
4を各々用意する。
【0011】 MTB培地3よりなるスタンプ用培地1の培地面は図5
(A)に示すように、被検査シャーレ11の塗沫面11
Aにスタンピングした後、直ちに蓋体を被せ、THI培
地13よりなるスタンプ用培地14の培地面は図5
(B)に示すように、被検査シャーレ12の塗沫面12
Aにスタンピングした後、蓋体を被せ、サンプリングを
終えた。
【0012】サンプリング後の両スタンプ用培地1,1
4は37℃の保温器中にて培養し経時的に生育コロニー
を観察した。スタンプ用培地1は培養後18時間からコ
ロニーが認められ、24時間では図6(A)に示すよう
に中心部が黒紫色で、辺緑が白色の光沢のある、ごま様
の隆起した直径1.0〜1.5mmの正円形のコロニー
7を形成した。別試験の同定の結果、このコロニー7は
MRSAと判明した。図6(B)に示すように、スタン
プ用培地14は何種ものコロニー15,16,17が形
成された。したがって、MTB培地3のスタンプ用培地
1によればMRSAを特異的に生育させ得ることが認め
られる。
【0013】次に、本発明の第2の試験例を、図7〜図
9を参照して説明する。MTB培地3はメチシリン耐性
培地であるが、その後の試験において、コアグラーゼ陰
性ブドウ球菌に属するMRSEに対しては、耐性が弱く
て若干コロニーを形成することが認められたので、この
試験ではMRSAとMRSEのコロニー形状の判別性を
調べた。図7(A)は既知MRSAの臨床分離株と滅菌
蒸留水にてマクファーランド1.0の懸濁液を調製し、
その1mlを、滅菌済の直径9cmの被検査シャーレ2
1に塗沫後乾燥したものである。図7(B)はMRSE
と滅菌蒸留水にてマクファーランド1.0の懸濁液を調
製し、その1mlを、滅菌済の直径9cmの被検査シャ
ーレ22に塗沫後乾燥したものである。なお、図7にお
いて21A,22Aは各塗沫面を示す。そしてMTB培
地3よりなる各スタンプ用培地1A,1Bを用意し、一
方のスタンプ用培地1Aの培地面は図8(A)に示すよ
うに、被検査シャーレ21の塗沫面21Aにスタンピン
グした後、直ちに蓋体を閉じ、他方のスタンプ用培地1
Bの培地面は図8(B)に示すように、被検査シャーレ
22の塗沫面22Aにスタンピングした後、蓋体を閉じ
てサンプリングを終えた。
【0014】サンプリング後の両スタンプ用培地1A,
1Bは37℃の保温器中にて培養し経時的に生育コロニ
ーを観察した。スタンプ用培地1Aは培養後18時間か
らコロニー25が認められ、24時間で中心部が黒紫色
で、辺緑が白色の光沢のある、ごま様の隆起した直径
1.0〜1.5mmの正円形コロニーを形成し、その周
辺を0.5〜1.0mmの透明帯がとり囲んでいた。ス
タンプ用培地1Bはコロニーの発育が遅く、培養後、1
8〜20時間ではコロニーを認めず、24〜28時間で
MRSAより小さく淡い黒色のコロニー26の形成を示
した。このコロニー26はMRSAと異なり、周囲の透
明帯は認めなかった。MRSAとMRSEは、コロニー
の外観の明瞭な相違により、容易に識別することができ
た。したがって、MTB培地3よりなるスタンプ用培地
1A,1BによればMRSAとMRSEは容易に区別可
能なことが認められた。
【0015】次に、本発明の実施例を、図1〜図3を参
照して説明する。まず、本例で用いるスタンプ用培地1
を多数枚用意する。各スタンプ用培地1は被検査部位6
にスタンピングするためのものであり、シャーレ本体
(単に本体ともいう。)2に寒天培地であるMTB培地
3が満たされ、該本体2に蓋体4が取外し可能に被せら
れ、かつ前記MTB培地3及び蓋体4で被った内部5が
滅菌状態にされている。本例のスタンプ用培地1は図2
に示すように、角形基板2Aに凹部口径面積10cm2
の円形凹部2Bが突出形成された本体2と、本体2の円
形凹部2Bの外周に取外し可能に嵌着する蓋体4とより
なり、本体2及び蓋体4はポリプロピレン等の透明プラ
スチックにて形成されている。
【0016】MTB培地3は次の要領にて調製したもの
である。表2に示す配合の培地原料と精製水1000m
lを混合し加熱溶解して、121℃,15分間滅菌し、
これを50℃に保った後、精製水1ml中にメチシリン
10mg含有するメチシリン溶液を培地液1ml当りメ
チシリンが12.5μgの割合となるように添加し、か
つ表3に示す配合の中和剤溶液(pH7.4)を培地
(液)1リットル当り2.5mlの割合でまた、3.5
%亜テルル酸カリウム溶液を、1リットル当り3mlの
割合で無菌的(メンブランフィルタの濾過滅菌)に加え
て作られる(培地pHは6.9)。
【0017】
【0018】
【0019】調製した滅菌状態のMTB培地は、予じめ
滅菌状態のシャーレ本体2の円形凹部2Bに無菌室にて
分注し、培地表面積10cm2 の寒天培地とされ、蓋体
4が被われてMTB培地3よりなるスタンプ用培地1と
される。
【0020】しかして、MTB培地3よりなるスタンプ
用培地1により手術室環境の、床、入口ドア取手、手術
台上面の各被検査部位6よりサンプリングした。すなわ
ち、図1に示すように、蓋体4を外したスタンプ用培地
1の培地面を被検査部位6にスタンピングし、図2に示
すように、蓋体4を閉じた。サンプリングした各スタン
プ用培地1は37℃の保温器に培養した。
【0021】24時間の培養ではいずれのスタンプ用培
地1もコロニーの形成を認めなかった。28〜36時間
後、被検査部位6が手術台上面のものにおいては図3
(A)に示すスタンプ用培地1のように直径1.6mm
のコロニー7と直径0.5mmのコロニー8を認め、他
の被検査部位6では図3(B)に示すスタンプ用培地1
のように、コロニー形成は認めなかった。前記スタンプ
用培地1の各コロニー7,8は観察したところ形状及び
色調などより大径の5コのコロニー7はMRSAであ
り、小径の3コのコロニー8はMRSEと認められた。
(なお、同定によりコロニー7はMRSAと判明し、コ
ロニー8はMRSEであることが判明した。)
【0022】
【発明の効果】請求項1のスタンプ用培地は、MTB培
地を用いているので、MRSAを消毒剤の影響を受ける
ことなく、特異的に生育させることができる。そして、
請求項1のスタンプ用培地によれば、他菌株を生育させ
ることなく、MRSAを成育させ得るので、従来のハー
トインヒュージョン寒天培地あるいは卵黄化マンニット
食塩寒天培地の場合のようにMRSAと同時に生育した
他菌株を分離し同定する時間と手間を要せず、コスト低
減できて都合がよい。また、請求項2のMRSAの検査
方法は、請求項1記載のスタンプ用培地を用いることよ
り、たとえば36±1℃,24時間培養の短時間にてM
RSAが判定可能であり、MRSAの検査を極く簡単に
行なうことができて便利である。そして、請求項2はス
タンピング方法であるので従来と同様に実施し易い。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明実施例のスタンプ用培地によるスタンピ
ング工程図。
【図2】本実施例で用いるスタンプ用培地構造説明図。
【図3】(A)図及び(B)図は本実施例における培養
後各スタンプ用培地の正面図。
【図4】(A)図及び(B)図は第1の試験例に係わ
り、MRSA及び他菌を塗沫乾燥した被検査シャーレの
正面図。
【図5】(A)図はMTB培地よりなるスタンプ用培地
のスタンピング工程図で、(B)図はTHI培地よりな
るスタンプ用培地のスタンピング工程図。
【図6】(A)図はMTB培地よりなるスタンプ用培地
のコロニーを示す図であり、(B)図はTHI培地より
なるスタンプ用培地のコロニーを示す図。
【図7】(A)図及び(B)図は第2の試験例に係わ
り、(A)図はMRSAを塗沫乾燥した被検査シャーレ
の正面図、(B)図はMRSEを塗沫乾燥した被検査シ
ャーレの正面図。
【図8】(A)図はMTB培地のスタンプ用培地により
MRSAをスタンピングする工程図、(B)図はMTB
培地のスタンプ用培地によりMRSEをスタンピングす
る工程図。
【図9】(A)図はMTB培地のスタンプ用培地におけ
るMRSAコロニーを示す図、(B)図はMTB培地の
スタンプ用培地におけるMRSEコロニーを示す図。
【符号の説明】
1 スタンプ用培地 2 シャーレ本体 3 MTB培地 4 蓋体 6 被検査部位 7 コロニー
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 FI 技術表示箇所 C12R 1:445)

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 シャーレの本体に寒天培地が満たされ、
    該本体に蓋体が取外し可能に被せられて、かつ前記培地
    及び蓋体で被った内部が滅菌状態にされ、被検査部位に
    スタンプ採菌するためのスタンプ用培地であって、 前記寒天培地が、メチシリン、及び消毒剤の中和剤を含
    むベアドパーカー培地よりなることを特徴としたメチシ
    リン耐性黄色ブドウ球菌検査用のスタンプ用培地。
  2. 【請求項2】 シャーレの本体の寒天培地を被検査部位
    にスタンプして採菌した後、蓋体を被せ、所定温度でか
    つ所定時間保持して前記寒天培地に形成されるコロニー
    を判定する菌の検査方法において、請求項1記載のスタ
    ンプ用培地を用いることを特徴としたメチシリン耐性黄
    色ブドウ球菌の検査方法。
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