JPH0614871B2 - 多糖類の水溶液の製造法 - Google Patents

多糖類の水溶液の製造法

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JPH0614871B2 JP61018296A JP1829686A JPH0614871B2 JP H0614871 B2 JPH0614871 B2 JP H0614871B2 JP 61018296 A JP61018296 A JP 61018296A JP 1829686 A JP1829686 A JP 1829686A JP H0614871 B2 JPH0614871 B2 JP H0614871B2
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
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Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、多糖類の水溶液特にスクシノグルカン型の多
糖類の水溶液の製造法に関する。
スクシノグルカン型の多糖類は、グルコースと7モルの
グルコース当たり0.9〜1.2モルのガラクトース及び0.65
〜1.1モルのピルバートとを、0〜2モル(7モルのグ
ルコース当たり)の割合のスクシネート及びアセテート
とともに含んでなるヘテロ多糖類として定義され得る。
本明細書において、かかる多糖類を生産する微生物を
「スクシノグルカン型の多糖類生産微生物」と記載す
る。
〔従来の技術〕
EP−A(欧州特許出願)−40445には、シュード
モナス(Pseudomonas)、リゾビウム(Rhizobium)、アルカ
リゲネス(Alcaligenes)又はアグロバクテリウム(Agroba
cterium)の粘液形成性の種例えばシュードモナス種NCIB
11264、シュードモナス種NCIB 11592又はそれらの突然
変異体を好気性条件下で水性栄養培地中で培養し、そし
て多糖類を含む培地から多糖類を回収する、ことからな
るスクシノグルカン型の多糖類の製造法が記載されてい
る。
EP−A−138255には、アグロバクテリウム・ラ
ジオバクター(Agrobacterium radiobacter)NCIB 11883
の培養を含む、スクシノグルカン型の多糖類の改良製造
法が記載されている。EP−A−40445又はEP−
A−138255の方法から得られる生成物は、それら
が孔径1.2μmのセルラーゼアセテートフィルター(例
えば、1.2μm“ミリポア(Millipore)”フィルター、ミ
リポア(Millipore)は商標)に通されるべきである場
合、予備過を必要とする、ということがわかった。か
かるフィルターを通過する多糖類の溶液の能力は、多糖
類が油の高回収操作に良好に機能するという有用性を示
し、即ち、多糖類を含有する水性の置換配合物(displac
ement formulation)を、油又はガスを産出する岩石地層
に注入することは、岩石地層の小さな孔の閉塞を起こし
得る物質によって妨害されない。
US(米国)特許4,416,990には、油地層におけるキサ
ンタンガムの注入性及び過性を改善して原油の回収率
を改善するために、バクテリアの細胞の残渣及びミクロ
ゲルを不純物として含有するキサンタンガムの水性分散
液を処理するのに担子菌のセルラーゼを用いることが記
載されている。
GB(英国)2065688Bには、孔のある媒体を流
れることができる、水溶液の多糖類の能力を高めるため
に、多糖類の糖ユニット間の結合の少なくとも1つを加
水分解することができる細胞内酵素で多糖類を処理する
ことが記載されている。
〔発明の解決点〕
スクシノグルカン型の多糖類の注入性及び過性を改善
する方法が、今般見出された。
〔解決手段、作用及び効果〕
本発明は、同化可能な炭水化物源を水性栄養培地中でス
クシノグルカン型の多糖類生産微生物であるアグロバク
テリウム属の微生物で好気的に発酵させることからなる
多糖類の水溶液の製造法において、セルラーゼを発酵肉
汁に添加することを特徴とする上記製造法を提供する。
発酵肉汁に添加されるセルラーゼの量は、とりわけ、酵
素の活性度及び微生物の濃度に左右させる。しかしなが
ら、一般に、セルラーゼは、0.01〜0.2g.-1好まし
くは0.05〜0.2g.-1の範囲の割合で好都合に添加さ
れ得る。「セルラーゼ」なる用語は、セルロースのβ−
1→4の結合を破壊することのできるいかなる酵素をも
指す。
セルラーゼ活性を有する市販の酵素調剤の例には、スタ
ージ(Sturge)社の「セルラーゼ(Cellulase)CP」、マ
イルズ・バイオケミカルズ(Miles Biochemicals)社の
「セルラーゼ(Cellulase)AC」、マイルズ・バイオケミ
カルズ社の「セルロシン(Cellulosin)AP」、マイルズ・
バイオケミカルズ社の「キシラナーゼ(Xylanase)」、ノ
ボ(Novo)社の「セルクラスト(Celluclast)」及びギスト
−ブロケーズ(Gist-Brocades)社のセルラーゼがある。
好ましい多糖類生産微生物には、アグロバクテリウム・
ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)、アグ
ロバクテリウム・ラジオバクター(Agrobacterium radio
bacter)、アグロバクテリウム・リゾゲネス(Agrobacter
ium rhizogenes)、及びそれらの突然変異体からなる群
がある。特に好ましいものは、アグロバクテリウム・ラ
ジオバクターNCIB 11883である。
本発明の方法によって得られ得る多糖類の製品例えば多
糖類の水溶液は、油及びガスの探索及び生産操作に用い
られる水増粘剤(water thickener)として好都合に用い
られ得る。この技術分野における多糖類の適用は、しゅ
ん工(completion)、改修(work-over)、掘削(drilling)
及び流体置換(fluid displacement)用の配合物に期待さ
れ得る。
しかしながら、本方法は特に、多糖類の配合物から潜在
的な閉塞粒子を除去する優秀な方法であるので、本方法
で得られる多糖類の水溶液は、油の高回収操作における
流体置換用水溶液に(増粘剤として)、有利に用いられ
る。
〔実施例〕
本発明は、次の例から更に理解されよう。
例I アグロバクテリウム・ラジオバクター株NCIB 1188
3を用いて、pH7、温度36℃にて、下記の培地中で回
分発酵を行った。
肉汁の試料は、菌体の生長の終わりの時点に(71/2時
間,光学式密度測定によって決定(生長の終わりは、一
定値になることによりわかる。))並びにグルコースの
枯渇の時点に(更に70時間,発酵肉汁の分析によって
決定)採取した。セルラーゼ(0.2g.-1)を接種材
料NCIB11883とともに添加した以外は同じように行
った、同様な発酵も行った。試料は、上記のように採取
した。試料(80ml)を15%w/v NaCl+1.5%w/v CaCl2
の水溶液12容量部の添加により13倍(v/v)に希
釈し、2時間混合し(ウルトラツルラックス(Ultraturr
ax)混合機使用,ウルトラツルラックス(Ultraturrax)は
商標)、30℃、40psiの加圧にて、直径47mmの1.2
μmミリポア(Millipore)フィルター(ミリポア(Millip
ore)は商標)を通過する流速を測定することによって
過性を試験した。第1図は、その結果を示す。曲線Aは
未処理の肉汁(生長の終わり)についてのものであり、
曲線Bは未処理の肉汁(グルコースの枯渇)についての
ものである。曲線Cはセルラーゼで処理した肉汁(生長
の終わり)についてのものであり、曲線Dはセルラーゼ
で処理した肉汁(グルコースの枯渇)についてのもので
ある。処理した肉汁の過性は、両方の場合とも著しく
優れている。
例II アグロバクテリウム・ラジオバクター株NCIB 1188
3を用いて、例Iに記載の如く回分発酵を行った。菌体
の生長の終わりの時点にセルラーゼ(0.2g.-1)を
肉汁に添加し、そして発酵をグルコースが枯渇するまで
続けた。肉汁(10倍に希釈)の過性を例Iに記載の
如く試験した。第2図に、この肉汁についての結果(曲
線A)が、セルラーゼを添加しなかった肉汁についての
結果(曲線B)に対して比較されている。処理した肉汁
の過性は、顕著に優れている。
例III アグロバクテリウム・ラジオバクター株NCIB 1188
3を用いて、例Iに記載の如く回分発酵を行った。グル
コースの枯渇の時点に、肉汁のpHを5.5に調整し、セル
ラーゼを0.1g.-1、0.05g.-1又は0.019g.-1
添加した。肉汁を40℃にて1.8時間培養した。過性
を例Iに記載の如く測定した。結果を第3図に示す。0.
1g.-1(曲線A)、0.05g.-1(曲線B)又は0.0
19g.-1(曲線C)のセルラーゼでの処理は、未処理
の肉汁(曲線D)と比較して大きな改善をもたらす。
例IV アグロバクテリウム・ラジオバクター株NCIB 1188
3を用いて、例Iに記載の如く回分発酵を行った。グル
コースの枯渇の時点に、肉汁のpHを5.5に調整し、市販
のセルラーゼ調剤の1つを添加した(0.2g.-1)。
40℃にて5.75時間培養した後、肉汁(10倍に希釈)
の過性を例Iに記載の如く試験した。結果を第4図に
示す。0.2g.-1の「セルラーゼCP」(スタージ
社,曲線A)、「セルラーゼ」(ギスト−ブロケーズ
社、曲線B)、「セルラーゼAC」(マイルズ・バイオ
ケミカル社,曲線C)、「セルロシンAP」(マイルズ
・バイオケミカルズ社,曲線D)、「キシラナーゼ」
(マイルズ・バイオケミカルズ社,曲線E)、あるいは
0.2ml.-1の「セルクラスト」(ノボ社,曲線F)の
添加は、未処理の肉汁(曲線G)と比較して過性の劇
的な改善をもたらす。
例V アグロバクテリウム・ラジオバクター株NCIB 1188
3を用いて、例Iに記載の如く回分発酵を行った。肉汁
の試料をグルコースの枯渇の時点に採取し、そして残り
の肉汁をセルラーゼ(0.2g.-1)でpH5.5、温度40
℃にて7時間処理した。過性を例Iに記載の如く測定
した(10倍に希釈)。結果を第5図に示す。セルラー
ゼで処理した肉汁(曲線A)は、優秀な過性を有して
いた。未処理の肉汁(曲線B)の過性は不良であっ
た。セルラーゼで処理した肉汁から調製した溶液500
mlにセルラーゼで処理しなかった溶液を追従させると、
溶液を変えた後急速に閉塞が起こった(曲線C)。過
する直前にセルラーゼを未処理生成物に添加した場合、
急速に閉塞が起こった(曲線D)。これらのことから、
上記の結果はセルラーゼがミリポア(Millipore)・フィ
ルター(ミリポア(Millipore)は商標)のセルローズア
セテートに対して作用することに因るのではなく、セル
ラーゼが微生物の肉汁に作用することに困る、というこ
とがわかる。
【図面の簡単な説明】
第1図、第2図、第3図、第4図及び第5図は、過性
の試験結果を示す。

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】同化可能な炭水化物源を水性栄養培地中で
    スクシノグルカン型の多糖類生産微生物であるアグロバ
    クテリウム属の微生物で好気的に発酵させることからな
    る多糖類の水溶液の製造法において、セルラーゼを発酵
    肉汁に添加することを特徴とする上記製造法。
  2. 【請求項2】0.01〜0.2g.-1のセルラーゼを発酵肉
    汁に添加する、特許請求の範囲第1項に記載の製造法。
  3. 【請求項3】0.05〜0.2g.-1のセルラーゼを発酵肉
    汁に添加する、特許請求の範囲第2項に記載の製造法。
  4. 【請求項4】多糖類生産微生物をアグロバクテリウム・
    ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)、アグ
    ロバクテリウム・ラジオバクター(Agrobacterium radio
    bacter)、アグロバクテリウム・リゾゲネス(Agrobacter
    ium rhizogenes)、及びそれらの突然変異体からなる群
    から選択する、特許請求の範囲第1項、第2項又は第3
    項に記載の製造法。
  5. 【請求項5】微生物がアグロバクテリウム・ラジオバク
    ターNCIB 11883である、特許請求の範囲第4項に記載の
    製造法。
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