JPH06107559A - トロンボスポンジンのペプチド断片および類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 Ｚ_１−ＡＡ_１−ＡＡ_２−ＡＡ_３−ＡＡ_４−Ａ
Ａ_５−ＡＡ_６−ＡＡ_７−ＡＡ_８−ＡＡ_９−Ｚ_２なるアミ
ノ酸配列を有するポリペプチド化合物の有効量を投与す
ることよりなる、トロンボスポンジン様活性の促進また
は阻害法。〔式中、Ｚ_１はアミノ酸のアミン残基、Ｚ_２
はアミノ酸のカルボキシル残基を、もしくはそれぞれの
化学的に変性された残基を表し、例えばＡＡ_１はトリプ
トファン；ＡＡ_２はセリン、スレオニン、アスパラギン
酸；ＡＡ_３はプロリン、グルタミン酸、イソロイシン；
ＡＡ_４はシスティン；ＡＡ_５はセリン、アスパラギン；
ＡＡ_６はバリン、スレオニン；ＡＡ_７はスレオニン、セ
リン；ＡＡ_８はシスティン；ＡＡ_９はセリン、グリシン
である〕 【効果】 上記化合物は抗転移剤、特に腫瘍細胞の肺転
移抑制剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、一般に、トロンボスポンジン様
活性を保持するトロンボスポンジンのペプチドの断片お
よび合成類似体に関する。ペプチドは、抗腫瘍剤の開
発、血栓崩壊、脈管形成、補体の活性化、細胞の付着、
診断試薬および他の関係する領域における因子として使
用を見いだす。

【０００２】トロンボスポンジン（また、トロンビン感
受性タンパク質またはＴＳＰとして知られている）は、
３つの同一のジサルファイド結合したポリペプチド鎖か
ら構成されている大きいマウス１８０ｋＤの糖タンパク
質である。トロンボスポンジンはある数の手順により精
製されており、これらの手順は次のものを包含する：排
除クロマトグラフィー［ラウラー（Ｌａｗｌｅｒ）ら、
ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー
（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）（１９７８）２５３：８
６０９−１６］、ヘパリン親和クロマトグラフィー［ラ
ウラー（Ｌａｗｌｅｒ）ら、血栓の研究（Ｔｈｒｏｍ
ｂ．Ｒｅｓ．）（１９８１）２２：２６７−２６９］、
フィブリン親和クロマトグラフィー［ツスジンスキー
（Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ）ら、ジャーナル・オブ・バイオ
ロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）
（１９８５）２６０：１２２４０−５］、塩化バリウム
沈澱［アレキサンダー（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ）ら、バイ
オケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．）（１
９８４）２１７：６７−７１］およびアニオン交換クロ
マトグラフィーおよびＨＰＬＣ［クレザロリン（Ｃｌｅ
ｚａｒｏｌｉｎ）ら、ジャーナル・オブ・クロマトグラ
フィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）（１９８４）２９
６：２４９−５６］。

【０００３】ＴＳＰの完全なアミノ酸配列は、次のもの
を包含する種々のグループにより調製されたＤＮＡのク
ローンから推定された［ラウラー（Ｌａｗｌｅｒ）ら、
ジャーナル・オブ・セル・バクテリオロジー（Ｊ．Ｃｅ
ｌｌ Ｂｉｏｌ．）１０３：１６３５−４８；コバヤシ
（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ）ら、バイオケミストリー（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）（１９８６）２５：８４１８−
２５；ディキシット（Ｄｉｘｉｔ）ら、プロシーディン
グス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエン
シズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．）（１
９８６）８３：５４４９−５３；およびヘネシー（Ｈｅ
ｎｎｅｓｓｙ）ら、ジャーナル・オブ・セル・バクテリ
オロジー（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．）（１９８９）１
０８：７２９−３６］。

【０００４】コバヤシ（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ）ら（ｓｕ
ｐｒａ）、ロブソン（Ｒｏｂｓｏｎ）ら［ネイチャー
（Ｎａｔｕｒｅ）（１９８８）３３５：７９−８２］お
よびゴウンディス（Ｇｏｕｎｄｉｓ）ら［ネイチャー
（Ｎａｔｕｒｅ）（１９８８）３３５：８２−８５］
は、トロンボスポンジン、トロンボスポンジンに関係す
る無名タンパク質、プロペルジン、末端補体成分および
サーカムスポロゾイトのタンパク質を比較し、そしてコ
ンセンサス配列（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１）Ｗ−Ｓ−Ｐ
−Ｃ−Ｓ−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｇ付近に基づく有意の相同性を
認識した。配列の相同性は認識されたが、このような配
列の使用について知られていなかった。

【０００５】自然トロンボスポンジンの分子は、腫瘍細
胞の転移を増強することが示された［ツスジンスキー
（Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ）ら、キャンサー・リサーチ（Ｃ
ａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９８７）４７：４
１３０−４１３３］。トロンボスポンジンの増強が起こ
る機構は、現在よく理解されていない。

【０００６】トロンボスポンジンおよび／またはＴＳＰ
様タンパク質は、脈管形成の阻害において作用を有する
ことが報告された［ラスチネジャド（Ｒａｓｔｉｎｅｊ
ａｄ）ら、細胞（Ｃｅｌｌ）（１９８９）５６：３４５
−３５５、およびグッド（Ｇｏｓｄ）ら、ジャーナル・
オブ・セル・バクテリオロジー（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ
ｌ．）Ｓｕｐｐｌ．（１９８９）１３Ｂ：３０］。トロ
ンボスポンジンが脈管形成を調節する機構はよく理解さ
れていない。

【０００７】本発明は、完全なトロンボスポンジンの生
物学的活性をまねるか、あるいは阻害し、そして種々の
生物学的、予防または治療学的領域において使用を見い
だす、トロンボスポンジンの断片および類似体を提供す
る。

【０００８】今回、トロンボスポンジンの断片または合
成類似体のあるクラスは種々の使用を有することが発見
された。これらのペプチドは、哺乳動物において生体内
で腫瘍の転移を阻害することができる。ペプチドは、ま
た、創傷の治癒、アテローム性動脈硬化症、血栓、およ
び血栓崩壊の状態、脈管形成において、そして細胞の付
着促進剤、補体の調節剤および診断試薬として、そして
他の関連する領域において有用である。トロンボスポン
ジンのＩ型に基づく類似体［ラウラー（Ｌａｗｌｅｒ）
ら、血栓および出血におけるセミナース（Ｓｅｍｉｎａ
ｒｓ ｉｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ＆ Ｈｅｍｏｓｔ
ａｓｉｓ）（１９８７）１３：２４５−２５４］、ロブ
ソン（Ｒｏｂｓｏｎ）ら、ｓｕｐｒａ、およびグラウン
ディス（Ｇｒｏｕｎｄｉｓ）ら、ｓｕｐｒａ、に記載さ
れている］は、トロンボスポンジン様活性を有すること
が示された。詳しくは、ロブソン（Ｒｏｂｓｏｎ）（ｓ
ｕｐｒａ）の配列のモチーフの一部分Ｗ−Ｓ−Ｐ−Ｃ−
Ｓ−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｇに基づきそしてそれを包含する類似
体は、トロンボスポンジン様活性を有することが示され
た。

【０００９】したがって、本発明は、１つの面におい
て、式： Ｚ₁−ＡＡ₁−ＡＡ₂−ＡＡ₃−ＡＡ₄−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−ＡＡ₈−ＡＡ₉−Ｚ₂ 式中、Ｚ₁は水素、アミノ、アセチル、あるいは少なく
とも１つのアミノ酸残基またはそのデスアミノの形態で
あり、ＡＡ₁は中性／非極性／大きい／環状のアミノ酸
残基であり、ＡＡ₂は中性／極性／小さい、あるいは中
性／極性／大きい／非環状または酸性のアミノ酸残基で
あり、ＡＡ₃は中性／非極性／大きい／環状の、あるい
は中性／非極性／大きい／非環状の、あるいは中性／極
性／大きい／非環状の、あるいは中性／極性／小さいア
ミノ酸残基であり、ＡＡ₄は中性／極性／小さいアミノ
酸残基であり、ＡＡ₅は中性／極性／小さい、あるいは
中性／極性／大きい／非環状のアミノ酸残基であり、Ａ
Ａ₆は中性／非極性／大きい／非環状の、あるいは中性
／極性／大きい／非環状のアミノ酸残基であり、ＡＡ₇
は中性／極性／大きい／非環状の、あるいは中性／極性
／小さいアミノ酸残基であり、ＡＡ₈は中性／極性／小
さいアミノ酸残基であり、ＡＡ₉は中性／極性／小さい
アミノ酸残基であり、そしてＺ₂はヒドロキシル、カル
ボキシル、非アミノ酸、例えば、アグマチンであるか、
あるいはそのカルボキシアミドまたはアルキルアミドの
形態を包含する、少なくとも１種のアミノ酸残基であ
る、により同定される、トロンボスポンジン様活性を有
するポリペプチド化合物に関する。

【００１０】また、本発明の他の面によれば、前述のポ
リペプチド化合物および製剤学的に許容されうる液体、
ゲルまたは固体の担体を含有する製剤学的組成物が提供
される。これらの化合物の治療学的有効な投与量の投与
は、動物の医学、とくに獣医学、例えば、哺乳動物およ
び鳥類に対するトロンボスポンジン様活性の有効な増強
または阻害を提供する。

【００１１】本発明によれば、哺乳動物において生体内
でトロンボスポンジンの活性を阻害するか、あるいはま
ねる、あるクラスのトロンボスポンジンの断片および類
似体が提供される。

【００１２】Ａ．定義 「トロンボスポンジン様活性」は、ここにおいて、トロ
ンボスポンジンの既知の生物学的活性をまねる活性とし
て定義する。これらの活性は、次のものを包含する：細
胞付着活性、細胞のミトゲン活性、細胞の化学走性活
性、および止血活性およびこれらの活性から誘導される
活性、例えば、腫瘍細胞または微生物の転移活性、血小
板凝集活性、線維素溶解活性および免疫の調節。

【００１３】「抗転移活性」は、ここにおいて、腫瘍細
胞の転移を防止するか、あるいはその程度または大きさ
を大きく減少するか、あるいは一次の充実腫瘍の退行を
阻害するか、あるいはそれを引き起こす能力として定義
される。

【００１４】「創傷の治癒活性」は、ここにおいて、創
傷の治癒の速度増加するか、あるいは治癒のプロセスの
結果を改良する（すなわち、瘢痕の減少、触覚の刺激に
対するすぐれた応答など）能力として定義される。

【００１５】「アテローム性動脈硬化症活性」は、ここ
において、アテローム性動脈硬化症の病変の形成を促進
または阻害するトロンボスポンジンの能力として定義す
る。アテローム性動脈硬化症の病変は、ことに動脈壁に
おける、脂質を含有する物質の変性的蓄積として定義さ
れる。

【００１６】「抗血栓活性」は、ここにおいて、血小板
の凝集を阻害するか、あるいは血栓の形成を拮抗する能
力として定義される。

【００１７】「血栓崩壊活性」は、ここにおいて、血栓
の構造を崩壊する能力として定義される。

【００１８】「脈管形成活性」は、ここにおいて、血管
またはリンパ管の形成を阻害または増強する能力として
定義される。

【００１９】「増殖因子活性」は、ここにおいて、細胞
の増殖を阻害または促進する能力として定義される。

【００２０】「細胞付着活性」は、ここにおいて、基質
への細胞、好ましくは哺乳動物細胞の付着を促進または
阻害する能力として定義される。

【００２１】「補体活性」は、ここにおいて、免疫系の
補体カスケードの通路（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｃａｓ
ｃａｄｅ Ｐａｔｈｗａｙ）を活性化またはブロッキン
グする能力として定義される。

【００２２】「抗ウイルス活性」は、ここにおいて、ウ
イルス粒子が細胞に結合する能力を妨害することによっ
て、ウイルスの感染の防止または阻害する能力として定
義される。

【００２３】本発明のポリペプチド化合物のアミノ酸残
基の配列、コアのノナペプチド、およびその好ましい実
施態様は、特定のサブクラスのある種の特性のアミノ酸
で定義される。

【００２４】アミノ酸残基は、一般に、次のようにして
４つの主要なサブクラスに細分類することができる：酸性 、すなわち、残基は生理学的ｐＨにおいてＨイオン
を損失するために負の電化を有し、そしてペプチドが水
性媒質中に存在するとき、残基は水溶液により吸引され
て、残基が含有されているペプチドのコンフォメーショ
ンにおいて表面の位置を探す。

【００２５】塩基性、すなわち、ペプチドは生理学的ｐ
ＨにおいてＨイオンとの会合のために陽の電化を有し、
そしてペプチドが水性媒質中に存在するとき、残基は水
溶液により吸引されて、残基が含有されているペプチド
のコンフォメーションにおいて表面の位置を探す。

【００２６】中性／非極性、すなわち、残基は生理学的
ｐＨにおいて帯電せず、そしてペプチドが水性媒質中に
存在するとき、残基は水溶液により推進されて、残基が
含有されているペプチドのコンフォメーションにおいて
内部の位置を探す。

【００２７】中性／極性、すなわち、残基は生理学的ｐ
Ｈにおいて帯電せず、そしてペプチドが水性媒質中に存
在するとき、残基は水溶液により吸引されて、残基が含
有されているペプチドのコンフォメーションにおいて外
部の位置を探す。

【００２８】もちろん、個々の残基の分子の統計学的収
集において、ある分子は帯電し、そしてあるものは帯電
しないことが理解される。帯電したという定義に適合さ
せるために、個々の分子の有意の百分率（少なくともほ
ぼ２５％）は生理学的ｐＨにおいて帯電されている。

【００２９】アミノ酸残基は、さらに、残基の側鎖の置
換基に関して、環状または非環状、自明の分類、および
小さいまたは大きいとして特徴づけることができる。残
基は３個またはそれより小さい数の炭素原子を含有する
とき、小さいと考えられる。小さい残基は、もちろん、
常に非環状である。

【００３０】天然に産出する調製のアミノ酸について、
前述の方式に従う細分類は次の通りである： 酸性：アスパラギン酸およびグルタミン酸； 塩基性／非環状：アルギニンおよびリジン； 塩基性／環状：ヒスチジン； 中性／極性／小さい：グリシン、セリンおよびシステイ
ン； 中性／極性／大きい／非環状：スレオニン、アスパラギ
ンおよびグルタミン； 中性／極性／大きい／環状：チロシン； 中性／非極性／小さい：アラニン； 中性／非極性／大きい／非環状：バリン、イソロイシ
ン、ロイシンおよびメチオニン； 中性／非極性／大きい／環状：フェニルアラニンおよび
トリプトファン。

【００３１】タンパク質のアミノ酸およびプロリンは、
分類の中性／非極性／大きい／環状の範囲内に入るが、
ペプチド鎖の第２のコンフォメーションへの既知の作用
のために、代替物として含められない。

【００３２】ある種の普通に直面する自然以外のアミノ
酸、例えば、デスアミノチロシン（ｄｅｓ Ｔｙｒ）、
アグマチン（Ａｇｍ）、ｎ−ホルミルトリプトファン
（ｆ−Ｔｒｐ）、アルファ−アミノイソ酪酸（Ａｉ
ｂ）、およびサルコシン（Ｓａｒ）、スタチン、オルニ
チン（Ｏｒｎ）、ホモリジン、ホモセリン、ホモアルギ
ニン、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ノルバリンは、また、
本発明の化合物の中に組み込むことができる。デスアミ
ノチロシンはＮ−末端に組み込まれる。アグマチンおよ
びスタチンはＣ−末端に組み込まれる。上の定義に基づ
いて、ｎ−ホルミルＴｒｐは中性／非極性／大きい／環
状であり、Ｓａｒは中性／非極性／小さいであり、Ａｉ
ｂは中性／非極性／非環状であり、Ｏｒｎは塩基性／非
環状であり、ホモリジンは塩基性／非環状であり、ホモ
セリンは中性／極性／小さいであり、ホモアルギニンは
塩基性／非環状であり、ノルロイシンは中性／非極性／
大きい／非環状であり、そしてノルバリンは中性／非極
性／大きい／非環状である。

【００３３】本発明のポリペプチド化合物を記載するた
めに使用する命名法は普通の実施に従い、ここでアミノ
基は各アミノ酸残基の左に表され、そしてカルボキシ基
の右に表される。本発明の選択した特定の実施態様を表
す式において、アミノ末端基およびカルボキシ末端基
は、詳しくは示されていないが、特記しない限り、生理
学的ｐＨにおいてそれらが取る形態にあると理解される
であろう。アミノ酸の構造式において、各残基は、一般
に、次のスケジュールに従い、アミノ酸の通称に相当す
る、単一の文字表示により表される：

【００３４】

【表１】 アミノ酸 １文字の記号 ３文字のコード アラニン Ａ Ａｌａ アルギニン Ｒ Ａｒｇ アスパラギン Ｎ Ａｓｎ アスパラギン酸 Ｄ Ａｓｐ システイン Ｃ Ｃｙｓ グルタミン Ｑ Ｇｌｎ グルタミン酸 Ｅ Ｇｌｕ グリシン Ｇ Ｇｌｙ ヒスチジン Ｈ Ｈｉｓ イソロイシン Ｉ Ｉｌｅ ロイシン Ｌ Ｌｅｕ リジン Ｋ Ｌｙｓ メチオニン Ｍ Ｍｅｔ フェニルアラニン Ｆ Ｐｈｅ プロリン Ｐ Ｐｒｏ セリン Ｓ Ｓｅｒ スレオニン Ｔ Ｔｈｒ トリプトファン Ｗ Ｔｒｐ チロシン Ｙ Ｔｙｒ バリン Ｖ Ｖａｌ この出願において、光学的異性体を有するアミノ酸残基
のＬ−型を、例えば、記号「［Ｄ−ＡＡ_n］」により、
特記しない限り、意図する。

【００３５】本発明の範囲内の化合物は開示した式を多
数の方法で変更することによって得ることができるが、
こうして得られるポリペプチド化合物の活性は保持され
る。例えば、これらの化合物のアミノ酸は常態で自然の
Ｌ光学的異性体の型であるが、１または２以上の、通常
２以下の、そして好ましくは１つのアミノ酸を光学的異
性体のＤ型と置換することができるか、あるいはＤ，Ｌ
−型ラセミ体混合物はポリペプチド化合物からなる分子
で提供されることができる。さらに、活性が維持される
かぎり、本発明の化合物においてジサルファイド結合は
存在するか、あるいは存在しないことができる。

【００３６】化合物内に、とくにカルボキシ末端または
アミノ末端に含有されるアミノ酸残基は、また、それら
の活性に悪影響を及ぼさないで、メチル化、アミド化ま
たはアセチル化により修飾することができるか、あるい
は、例えば、循環の半減期、プロテアーゼに対する抵抗
性および化合物の溶解度を変化させる他の化学基で置換
することによって修飾することができる。

【００３７】前の定義に加えて、次の略号を本発明の説
明を通じて使用した： ＢＣＡ ビシンコニン酸 ＢＳＡ ウシ血清アルブミン ｔ−Ｂｏｃ ｔ−ブチルオキシカルボニル Ｂｚｙ ベンジル ℃ セ氏度 ＤＣＭ ジクロロメタン ＤＩＥＡ ジイソプロピルエチルアミン ＤＭＥＭ ダルベッコ最小必須培地 ＤＭＦ ジメチルホルムアミド ＨＦ フッ化水素 ＨＯＢＴ １−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル ＨＰＬＣ 高性能液体クロマトグラフィー ｍＢＨＡ メチルベンズヒドリルアミン μｇ マイクログラム μｌ マイクロリットル ｍｌ ミリリットル ｍＭ ミリモル ｎｍ ナノメートル ＮＭＰ Ｎ−メチルピロリドン ％ 百分率 ＰＡＭ フェニルアセチルアミドメチル ＰＢＳ リン酸塩緩衝液 ＴＦＡ トリフルオロ酢酸 Ｂ．好ましい実施態様 本発明のポリペプチド化合物は、すべて、コアノナペプ
チド配列： Ｚ₁−ＡＡ₁−ＡＡ₂−ＡＡ₃−ＡＡ₄−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−ＡＡ₈−ＡＡ₉−Ｚ₂ 式中、ＡＡ₁は中性／非極性／大きい／環状のアミノ酸
残基であり、ＡＡ₂は中性／極性／小さい、あるいは中
性／極性／大きい／非環状または酸性のアミノ酸残基で
あり、ＡＡ₃は中性／非極性／大きい／環状の、あるい
は中性／非極性／大きい／非環状の、あるいは中性／極
性／大きい／非環状の、あるいは中性／極性／小さいア
ミノ酸残基であり、ＡＡ₄は中性／極性／小さいアミノ
酸残基であり、ＡＡ₅は中性／極性／小さい、あるいは
中性／極性／大きい／非環状のアミノ酸残基であり、Ａ
Ａ₆は中性／非極性／大きい／非環状の、あるいは中性
／極性／大きい／非環状のアミノ酸残基であり、ＡＡ₇
は中性／極性／大きい／非環状の、あるいは中性／極性
／小さいアミノ酸残基であり、ＡＡ₈は中性／極性／小
さいアミノ酸残基であり、ＡＡ₉は中性／極性／小さい
アミノ酸残基であり、Ｚ₁は水素、アミノ、アセチル、
あるいは少なくとも１つのアミノ酸残基またはそのデス
アミノの形態であり、そしてＺ₂はヒドロキシル、カル
ボキシル、非アミノ酸、例えば、アグマチンであるか、
あるいはそのカルボキシアミドまたはアルキルアミドの
形態を包含する、少なくとも１種のアミノ酸残基であ
る、を含有する。

【００３８】このコアノナペプチドの最も好ましい配列
はＷ−Ｓ−Ｐ−Ｃ−Ｓ−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｇ（ＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１）である。他の好ましい実施態様は、各記号
が次の意味を有するポリペプチド化合物を包含する：Ａ
Ａ₁はトリプトファンまたはｎ−ホルミル−トリプトフ
ァンであり、ＡＡ₂はセリン、スレオニンまたはアスパ
ラギン酸であり、ＡＡ₃はプロリン、グルタミン酸、セ
リンまたはイソロイシンであり、ＡＡ₄はシステインで
あり、ＡＡ₅はセリンまたはアスパラギンであり、ＡＡ₆
はバリンまたはスレオニンであり、ＡＡ₇はスレオニン
またはセリンであり、ＡＡ₈はシステインであり、ＡＡ₉
はグリシンまたはセリンであり、それらのカルボキシア
ミドの形態を包含する。

【００３９】配列が次のものから成る群より選択され
る、実施態様はとくに好ましい：

【００４０】

【表２】

【００４１】本発明の範囲内の化合物は、この分野にお
いてよく知られている手段、例えば、固体相ペプチド合
成により化学的に合成することができる。この合成は、
ペプチドのカルボキシ末端から、アルファ−アミノ酸を
使用して開始する。ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）
保護基はすべてのアミノ基のために使用することができ
るが、他の保護基は適当である。参照、ステワート（Ｓ
ｔｅｗａｒｔ）ら、「固体相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ
−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ）」、Ｗ．Ｈ．フリーマン・カンパニー（Ｆｒｅｅｍ
ａｎ Ｃｏ．）、サンフランシスコ（１９６９）および
メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）、ジャーナル
・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティー（Ｊ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）８５：２１４９−２１５４（１９
６３）。ペプチド合成のこれらおよび他の方法は、ま
た、米国特許第３，８６２，９２５号、米国特許第３，
８４２，０６７号、米国特許第３，９７２，８５９号お
よび米国特許第４，１０５，６０２号に例示されてい
る。

【００４２】便利には、化合物は、例えば、アプライド
・バイオシステムス（Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏｓｙＳｔ
ｅｍｓ）４３０Ａペプチドシンセサイザー（カルフォル
ニア州フォスター市）またはバイオサーチ（Ｂｉｏｓｅ
ａｒｃｈ）ＳＡＭ ＩＩオートマチックペプチドシンセ
サイザー［バイオサーチ・インコーポレーテッド（Ｂｉ
ｏｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．）カルフォルニア州サンラフ
ァエル］を使用して、製造業者により供給される指示の
マニュアルに従い、自動的に、あるいは手動の技術によ
り合成することができる。

【００４３】ペプチド合成の当業者は容易に理解される
ように、本発明の化合物を合成する過程の間にこの開示
に従い構成される中間体はそれら自体有用な化合物であ
り、こうして本発明の範囲内に入る。

【００４４】あるいは、本発明の選択した化合物は、よ
く知られている方法に従い調製した組み換えＤＮＡ構成
体の発現により産生することができる。このような産生
は、大量のこのような化合物または別の実施態様を提供
するために望ましいことがある。

【００４５】Ｃ．投与 本発明の化合物は、健全な動物においてトロンボスポン
ジン様活性を有する。完全なトロンボスポンジンの作用
を阻害するか、あるいはまねる生理学的作用を有するこ
とが示された本発明の化合物およびそれらを含有する組
成物は、多数の治療学的および予防の応用、例えば、癌
の治療、創傷の治癒、アテローム性動脈硬化症、血栓ま
たは血栓崩壊の状態、脈管形成、補体の活性化、または
の細胞の付着における使用を見いだす。

【００４６】こうして、本発明は、また、単独で、前述
の治療学的利益を提供することができる、無毒の付加
塩、アミドおよびそれらのエステルを包含する、本発明
の化合物の有効量を含有する組成物を提供する。このよ
うな組成物は、また、生理学的に許容されうる液体、ゲ
ルまたは固体の希釈剤、アジュバントおよび賦形剤と一
緒に提供することができる。

【００４７】これらの化合物および組成物は、他の治療
剤と同様な方法で、獣医学的使用において、例えば、家
畜に、そしてヒトにおける臨床的使用のために動物に投
与することができる。一般に、治療学的効能に要求され
る投与量は約１μｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ、より通常約１
０μｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲であろう。ある
いは、これらの範囲内の投与量は、所望の治療学的利益
が得られるまで、延長した期間、通常２４時間以上にわ
たって投与することができる。

【００４８】典型的には、このような組成物は、液体の
溶液または懸濁液として、注射可能なものとして調製す
ることができる；注射の前に液体中の溶液または懸濁に
適当な固体の形態は、また、調製することができる。調
製物は、また、乳化することができる。活性成分は、生
理学的に許容されかつ活性成分と適合性の希釈剤または
賦形剤としばしば混合される。適当な希釈剤または賦形
剤は、例えば、水、生理食塩水、テキストロース、グリ
セロールなど、およびそれらの組み合わせである。さら
に、必要に応じて、組成物は少量の補助物質、例えば、
湿潤剤または乳化剤、安定剤またはｐＨ緩衝剤などを含
有することができる。

【００４９】組成物は、便利には、非経口的に、注射に
より、例えば、皮下または静脈内に投与される。投与の
他のモードに適当な追加の配合物は、座薬、鼻内のエア
ゾール、および、ある場合において、経口的投与を包含
する。座薬について、伝統的結合剤および賦形剤は、例
えば、次のものを包含することができる：このような座
薬は、０．５〜１０％、好ましくは１〜２％の範囲の活
性成分を含有する混合物から形成することができる。経
口的配合物は、このような通常使用される賦形剤、例え
ば、製剤学的等級のマンニトール、ラクトース、澱粉、
ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、セ
ルロース、炭酸マグネシウムなどを含む。これらの組成
物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル剤、持続解
放性配合物、または粉末の形態を取り、そして１０〜９
５％、好ましくは２５〜７０％の活性成分を含有するこ
とができる。これらの経口的配合物は、ペプチドをそれ
が吸収されうるまで保護するように設計された配合物を
包含する。

【００５０】ペプチド化合物は、中性または塩の形態と
して組成物に配合することができる。製剤学的に許容さ
れうる無毒の塩は、酸付加塩（遊離アミノ酸と形成され
る）を包含し、そして無機酸、例えば、塩酸またはリン
酸、あるいは有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石
酸、マンデル酸などと形成される。遊離カルボキシリル
基と形成する塩は、無機塩基、例えば、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化第二
鉄、および有機塩基、例えば、イソプロピルアミン、ト
リメチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチ
ジン、プロカインなどから誘導することができる。

【００５１】トロンボスポンジン様活性を表示する本発
明の化合物に加えて、本発明の化合物は、また、このよ
うな有用な化合物の合成における中間体として使用する
ことができる。

【００５２】本発明の化合物は、それら自体にホモ重合
（すなわち、（ペプチド）_n）することができるか、あ
るいは互いにヘテロ重合（すなわち、（ペプチド１−ペ
プチド２）することができる。化合物は、また、ジサル
ファイドまたは他の手段により環化することができる。
化合物は、また、生物適合性ポリマーの化合物、例え
ば、バイオポル（ＢＩＯＰＯＬ^R）［Ｗ．Ｒ．グレイス
・アンド・カンパニー（Ｇｒａｃｅ ＆ Ｃｏ．）、コ
ネチカット州］。

【００５３】いかなる理論にも拘束されたくないが、本
発明の組成物は自然トロンボスポンジンに対する作用物
質または拮抗物質として作用すると信じられる。これら
の化合物は、また、サーカプスポロゾイトのタンパク
質、トロンボスポンジンに関係する無名のタンパク質、
およびプロペルジン補体タンパク質として作用すると信
じられる。さらに、本発明の化合物は大きさが小さい
（完全なトロンボスポンジンに関して）ので、それらが
示す性質は、他の一般に付着性の化合物、例えば、ＲＧ
Ｄを含有する化合物（その配列は１００を越えるタンパ
ク質の中に見いだされる）およびフィブロネクチンの作
用と反対に、性質が特異的である可能性がいっそう強
い。本発明のペプチド化合物の副作用は、これらの広く
付着性の化合物と比較したとき、大きく減少する。

【００５４】Ｄ．使用 前述したように、本発明の化合物は、種々の生物学的、
予防または治療学的領域において使用することができ
る。これらの化合物は、トロンボスポンジン様活性があ
る役割を演ずる、任意の病気の状態において有用である
と考えれる。これらの病気の状態は、次のものを包含す
るが、これらに限定されない：転移、創傷の治癒、アテ
ローム性動脈硬化症、血栓の状態、血栓崩壊の状態、脈
管形成、細胞の増殖、および補体の活性化。本発明の化
合物に対して向けられた抗体は、また、診断試薬、治療
剤、または他の化合物のキャリヤーとして有用である。

【００５５】多数の生体外および生体内のアッセイを使
用して、トロンボスポンジン様活性を有する化合物を実
証することができる。これらのアッセイは次のものを包
含するが、これらに限定されない：細胞付着アッセイ、
血小板凝集アッセイおよび細胞増殖アッセイ。

【００５６】転移 転移は、血液の流れまたはリンパ管を経る悪性腫瘍の細
胞の移送におけるように、体の１つの部分から他の無関
係の部分への病気の広がりである。転移は、内皮への腫
瘍細胞の付着、内皮の収縮、基底膜のマトリックスの劣
化および血液の流れの中への腫瘍細胞の侵入を包含す
る、カスケード機構を通してなされると信じられる。こ
のカスケードにおける任意の相における関与は、転移性
癌の処置または予防に対して有益であることがある。

【００５７】前述したように、自然のトロンボスポンジ
ンは、腫瘍細胞の転移を増強ことが示された。トロンボ
スポンジンの増強が起こる機構は、現在よく理解されて
いない。

【００５８】抗転移活性は、生体外における黒色腫細胞
への化合物の結合の能力［ツスジンスキー（Ｔｕｓｚｙ
ｎｓｋｉ）ら、アナリティカル・バイオケミストリー
（Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）（１９９０）１８
４：１８９−９１］、および生体内の腫瘍のコロニーの
大きさおよび数を減少する能力［ツスジンスキー（Ｔｕ
ｓｚｙｎｓｋｉ）ら、キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（１９８７）４７：４１３０
−４１３３］により特性決定される。

【００５９】本発明の化合物は、抗転移剤として有用で
あり、とくに抗肺肺転移剤として有用である。これらの
化合物は、転移性腫瘍細胞、とくにトロンボスポンジン
に対して応答性の付着を阻害する。化合物は、また、腫
瘍のコロニー数ならびに腫瘍のコロニーの数を減少す
る。

【００６０】このような抗転移活性が発生しうる機構が
いくつか存在する。ペプチドは細胞障害性であるか、あ
るいは細胞の増殖を阻害することができる。細胞の増殖
の阻害因子として、化合物は１）有糸分裂誘発を阻害
し、２）脈管形成を阻害するか、あるいは３）補体の通
路および関連するキラー細胞を活性化する作用をするこ
とができる。

【００６１】本発明の化合物は、また、生医学的装置に
おいて使用を見いだす。化合物は転移性腫瘍細胞の付着
を促進する能力を有するので、生医学的装置を化合物で
コーティングして、血液またはリンパから腫瘍細胞を除
去することができる。生医学的装置は、また、肝腫瘍を
捕捉するために有用である。

【００６２】化合物は、また、診断または治療の目的で
トキシン、薬物、ホルモンまたは像映剤を転移性腫瘍細
胞に対して向けるための担体として使用される。これら
の担体は、また、肝腫瘍に結合するであろう。

【００６３】創傷の治癒 創傷の治癒は創傷の閉鎖であり、そして４つの必須の成
分に分割することができる：炎症、脈管形成、コラーゲ
ンの堆積および上皮形成。すべての４つの成分は、創傷
の治癒においてある役割を演ずる。

【００６４】創傷の治癒の活性は、脈管形成活性を示す
化合物の能力、生体内のスポンジのモデルにおいてコラ
ーゲンの堆積およびＤＮＡの合成を刺激する化合物の能
力あるいは創傷の治癒を改良するか、あるいは生体内の
部分的または完全な厚さの創傷のモデルにおける治癒時
間を減少する能力により特性決定される。

【００６５】アテローム性動脈硬化症 アテローム性動脈硬化症は、影響を受けた区域の変性を
伴う、動脈の内壁上の小さい脂肪の節の堆積により特性
づけられる。

【００６６】アテローム性動脈硬化症活性は、高コレス
テロール治療食を供給されたウサギの大動脈病変の進展
を阻害する化合物の能力により特性づけられる。アテロ
ーム性動脈硬化症活性を特性決定する他のアッセイは、
脈管平滑筋および内皮細胞の増殖、収縮性表現型および
損傷に対する応答を調節することを包含する。これらの
アッセイは、この分野においてよく確立されている。

【００６７】血栓状態 本発明の化合物に関連する血栓活性は、血小板の凝集お
よび血小板血栓の形成を阻害する作用をする。血小板
は、結合性フィブリノゲン、血小板の凝集および血栓の
形成を経る血液凝固に参加する。抗血栓剤として、これ
らのペプチドは次の状態において有用である：心筋梗
塞、血栓塞栓の病気および癌および心臓血管の病気によ
る血栓合併症。

【００６８】本発明の化合物は、血小板の凝集の第２段
階（すなわち、血小板凝集のトロンボスポンジン依存性
段階）を特異的に阻害する能力を有する。この活性のた
めに、本発明の化合物は、病気状態の結果（すなわち、
灰色血小板症候群、本質的な血栓減少症、骨髄増殖症症
候群）として引き起こされるか、あるいは治療（すなわ
ち、癌の治療）により誘発される血小板減少症の阻害に
おいて有用である。これらの化合物は、また、バルーン
カテーテル法後の冠状動脈閉塞を防止する作用をする。

【００６９】本発明の化合物は、血液凝固の形成および
構造を調節する。トロンボスポンジンは、フィブリン凝
固の中に組み込まれ、そして血液凝固因子ＸＩＩＩａの
ための基質として働く。トロンボスポンジンにおけるＩ
ＱＱ配列のモチーフは、因子ＸＩＩＩａへの架橋に関係
付けられた。ＩＱＱを含有するペプチドは、凝固の構造
および形成を調節する。生体外の既知のフィブリン溶解
アッセイはこの能力を実証する。

【００７０】抗血栓活性は、次のものを包含する、ある
数のアッセイにより特性決定される：１）洗浄した血小
板中のＡＤＰまたはトロビン誘発血小板の凝集の阻害、
２）血小板に富んだ血漿中の血小板凝集の阻害、３）生
体内で測定したコラーゲン誘発血小板凝集の阻害、およ
び４）頸動脈における誘発された血栓形成の阻害−−こ
のアッセイにおいて、ペプチドは血栓誘発後の動脈の閉
塞を遅延または防止するであろう。

【００７１】あるいは、本発明の化合物は効力のある凝
固剤として有用である。この作用は局在化することがあ
り、そして長く続く。この活性は、凝固が必要であると
き（すなわち、外科または血友病において）有用であ
る。

【００７２】血栓崩壊状態 本発明の化合物に関連する血栓崩壊活性は、形成した血
栓の構造を変更する、すなわち、血液凝固を溶解する作
用をする。血栓崩壊活性は、プラスミンの存在下にフィ
ブリンの溶解を増強する能力として特性決定される（す
なわち、標準の凝固溶解のアッセイ）。

【００７３】脈管形成 脈管形成は血管およびリンパ管の形成である。本発明の
化合物は、脈管形成の調節、とくに創傷の治癒の増強、
腫瘍の増殖および転移、糖尿病性網膜症、血管新生緑内
障および慢性関節リウマチの阻害または防止において有
用である。これらのアッセイは次のものを包含するが、
これらに限定されない：種々の細胞系を使用する増殖お
よび移動の研究、コラゲナーゼの阻害およびニワトリの
絨毛尿膜上の生体内の血管新生（ＣＡＭアッセイ）。

【００７４】補体活性 本発明の化合物に関連する補体活性は、種々の病気の状
態においてある役割を演ずる。ペプチドは、感染に対す
る自然および獲得の両者の抵抗性において補体仲介のク
リアランスおよび不活性化機構を増強する。ペプチドの
補体活性は、補体タンパク質Ｃ３ｂの殺腫瘍活性を促進
する働きをする。さらに、補体タンパク質は心臓発作後
の再灌流に寄与することが知られており、そして本発明
の化合物はこのような活性を阻害し、こうして心臓発作
の間の心臓組織の死亡および組織の損傷を少なくするた
めに有用である。

【００７５】抗ウイルス物質 ウイルスの感染はウイルス粒子の細胞への付着を包含す
る。本発明のペプチドは、ウイルスの付着を妨害し、こ
うして抗ウイルス剤として有用である。本発明のペプチ
ドは、また、抗バクテリア剤として有用である。

【００７６】抗生物質 本発明の化合物は、また、標識した試薬、通常抗体を使
用するイムノアッセイにおいて使用するための抗血清の
調製のために使用することができる。便利には、ポリペ
プチドは抗原にジアルデヒド、とくに４〜６個の炭素原
子のジアルデヒドおよび脂肪族またはカーボジイミドに
より接合することができる。これらの化合物および免疫
原試薬は、種々の標識、例えば、発色化合物、蛍光化合
物、例えば、フルオレセインまたはローダミン、ラジオ
アイソトープ、例えば、¹²⁵Ｉ、³⁵Ｓ、¹⁴Ｃまたは³Ｈ、
あるいは磁性粒子で、この分野においてよく知られてい
る手段により標識することができる。

【００７７】標識された化合物および試薬、またはそれ
らを認識しかつそれらに特異的に結合することができる
標識した試薬は、例えば、診断試薬として、使用するこ
とができる。生物学的標本からの試料は、本発明の化合
物を使用して、共通の抗原決定基を有する物質の存在ま
たは量についてアッセイすることができる。

【００７８】トロンボスポンジンのレベルは、転移性肺
癌および結腸癌をもつ患者の血清において高くなる［ツ
スジンスキー（Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ）ら、抗血栓治療
（Ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ Ｔｈｅｒａｐｙ（１
９８９）Ａ２８およびスミス（Ｓｍｉｔｈ）ら、アメリ
カン・アソシエーション・オブ・クリニカリー・オンコ
ロジー（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ
ｏｆ ＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ）（印刷
中）］。本発明のペプチドに対する抗体は、種々のタイ
プの癌についての診断／予後のアッセイにおける試薬と
して有用であることができ、このような癌は次のものを
包含するが、これらに限定されない：胃腸管：胃、結
腸、および直腸）の癌、肺癌および肝炎の癌。

【００７９】さらに、モノクローナル抗体はこの分野に
おいて知られている方法により調製することができる。
ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体は、ある
数の癌の治療において治療学的使用を見いだす。第１
に、抗体はトロンボスポンジンの分離に使用することが
できる。これはトロンボスポンジンが腫瘍細胞の転移を
仲介するので有用である。第２に、抗体は腫瘍細胞使用
上に存在するトロンボスポンジンを遮断するために使用
することができる。第３に、細胞障害性薬物、ホルモ
ン、または像映剤を癌の治療において使用する抗体に結
合することができる。第４に、生医学的装置を前記抗体
でコーティングして、過剰のトロンボスポンジンを血清
から除去することができるか、あるいは細胞表面上にト
ロンボスポンジンを有する細胞を除去することができ
る。

【００８０】本発明のペプチドは、また、細胞または細
胞膜の抽出物からトロンボスポンジン細胞表面受容体を
単離することができる。トロンボスポンジン細胞表面受
容体を使用して、よりよいトロンボスポンジン類似体を
開発するか、あるいは血清から過剰のトロンボスポンジ
ンを除去することができる。

【００８１】次の実施例によって、本発明をさらに説明
する。

【００８２】

【実施例】本発明のペプチドは、ペプチドの合成の慣用
方法により合成することができる。好ましい方法はメリ
フィード（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｄ）、ジャーナル・オブ・
アメリカン・ケミカル・ソサイアティー（Ｊ．Ａｍ．Ｃ
ｈｅｍ．Ｓｏｃ．）８５、２１４９−２１５４（１９６
３）；サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）１５０、１７８−
１８５（１９６５）；Ｉｂｉｄ．２３２，３４１−３４
７（１９８６）の固相合成である。固相合成は、一般
に、Ｃ−末端カルボキシアミドをもつペプチドを合成す
るとき、ペプチドのＣ−末端から、保護されたアルファ
−アミノ酸を適当な樹脂、例えば、フェニルアセトアミ
ドメチル（ＰＡＭ）、ポリスチレン樹脂、またはｐ−メ
チルベンズヒドリルアミン（ｍＢＨＡ）樹脂に結合する
ことによって開始する。本発明において、アプライド・
バイオシステムス（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅ
ｍｓ）４３０Ａペプチドシンセサイザー（カリフォルニ
ア州フォスター市）で実施する固相技術により、ｔ−ブ
トキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）アルファアミノ−基保
護されたアミノ酸を使用して、製造業者の指示に従い、
ペプチドを合成した。この合成の間、適当なアミノ酸の
側鎖の保護基を必要に応じて使用する。こうして、アス
パラギン酸をカルボキシル基上でベンジル保護基として
保護し、そしてアルギニンをグアニジン基上でトシルに
より保護する。所望のペプチドが合成された後、ペプチ
ドを樹脂から切断し、そして保護基を試薬、例えば、フ
ッ化水素（ＨＦ）で処理することによって除去する。次
いで、ペプチドを高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）または他のこのようなペプチドの精製方法により
精製することができる。固相のペプチド合成のために確
立された手順についての背景の情報は、「固相のペプチ
ドの合成（ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓ
ｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、ステワート（Ｓｔｅｗａｒｔ）
およびヤング（Ｙｏｕｎｇ）著、Ｗ．Ｈ．フリーマナ・
アンド・カンパニー（Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．）、
サンフランシスコ、１９６９］。

【００８３】前述の説明に従い、次の手順は新規な合成
ペプチドのために使用した： 手順 Ａ ０．１ミリモルの選択したＢｏｃ−ＡＡ_n−ＯＣＨ₂−Ｐ
ＡＭ樹脂（０．２〜０．８ミリモル／ｇの樹脂）［アプ
ライド・バイオシステムス・インコーポレーテッド（Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）］ま
たはｐ−ｍＢＨＡ樹脂（０．２〜０．７ミリモル／ｇの
樹脂）（アプライド・バイオシステムス・インコーポレ
ーテッド）を、それぞれ、Ｂｏｃ−ＡＡ_n-1またはＢｏ
ｃ−ＡＡ_nの組み込みのためにスケジュールＡに従い処
理する。

【００８４】スケジュールＡ、小規模の急速サイクルの
化学 １、５分の純粋なＴＦＡの洗浄 ２、４０秒のＤＭＦの流れの洗浄 ３、ＤＭＦ中の２０％のＤＩＥＡで１分の処理 ４、４０秒のＤＭＦの流れの洗浄 ５、ＤＭＦ中に溶解した適当な保護したｔ−Ｂｏｃアミ
ノ酸の予備形成した対称無水物の１〜１０当量の添加 ６、１０分の結合期間 ７、４０秒のＤＭＦの流れの洗浄 手順 Ｂ ０．５ミリモルの選択したＢｏｃ−ＡＡ_n−ＯＣＨ₂−Ｐ
ＡＭ樹脂（０．２〜０．８ミリモル／ｇの樹脂）（アプ
ライド・バイオシステムス・インコーポレーテッド）ま
たはｐ−ｍＢＨＡ樹脂（０．２〜０．７ミリモル／ｇの
樹脂）（アプライド・バイオシステムス・インコーポレ
ーテッド）を、それぞれ、Ｂｏｃ−ＡＡ_n-1またはＢｏ
ｃ−ＡＡ_nの組み込みのためにスケジュールＢに従い処
理する。

【００８５】スケジュールＢ、大規模のＮＭＰ／ＨＯＢ
Ｔの化学 １、ＤＣＭ中の３０％のＴＦＡによる３分の洗浄 ２、ＤＣＭ中の３０％のＴＦＡによる１７分の洗浄 ３、ＤＣＭによる５×の洗浄 ４、ＤＭＦ中の５％のＤＩＥＡで１分の洗浄 ５、ＮＭＰ中の５％のＤＩＥＡで１分の洗浄 ６、ＮＭＰによる５×の洗浄 ７、ＮＭＰ中に溶解した適当な保護したｔ−Ｂｏｃアミ
ノ酸のＨＯＢＴ−ｅｓｔ１〜４当量の添加 ８、３０分の結合期間 ９、２０％までのＤＭＳＯの添加、引き続く１６分の結
合期間 １０、３．８当量のＤＩＥＡの添加、引き続く７分の結
合期間 １１、ＤＣＭによる３×の洗浄 １２、１０％の酢酸無水物、ＤＣＭ中の５％のＤＣＭの
２分間の洗浄 １３、ＤＣＭ中の１０％の酢酸無水物による４分間の洗
浄 １４、ＤＣＭによる４×の洗浄。

【００８６】実施例 １ （ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１）ＷＳＰＣＳＶＴＣＧ化合物
ｐ１の化学的合成 簡単に述べると、０．１３ｇのｔ−Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｏ
ＣＨ₂ＰＡＭ樹脂（０．７５ミリモル／ｇ）に、次の適
当に保護されたアミノ酸を順次に添加した：ｔ−Ｂｏｃ
−Ｃｙｓ（４−ＣＨ₃Ｂｚｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ
（Ｂｚｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−Ｖａｌ、ｔ−Ｂｏｃ−Ｓｅｒ
（Ｂｚｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（４−ＣＨ₃Ｂｚ
ｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−Ｐｒｏ、ｔ−Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｔｒｐ。生ずる、乾燥した、Ｎ
末端保護されたペプチジル樹脂を、５％のアニソール、
５％のジメチルサルファイドおよび１％のｐ−チオクレ
ゾールを含有する無水フッ化水素中に−５℃において２
時間懸濁した。ＨＦおよび揮発性スカベンジャーを窒素
のスパージで除去し、そしてペプチド−樹脂混合物を冷
ジエチルエーテル中に懸濁した。ペプチド−樹脂混合物
をジエチルエーテルで３回洗浄し、次いでペプチドを３
０％の酢酸で抽出した。この溶液をＨ₂Ｏで１：１に希
釈し、そして凍結乾燥して粗製のペプチドを得た。アミ
コン（Ａｍｉｃｏｎ）Ｃ₁₈ＭＣ−２５０−１０カラムの
逆相クロマトグラフィーにより精製し、０．１％の水性
トリフルオロ酢酸で９０％のアセトニトリルおよび１０
％のＨ₂Ｏ中の０．１％のＴＦＡにより得られる勾配で
溶離した。分画を集め、そして分析用逆相ＨＰＬＣによ
り判定して、９０％の純度に基づいてプールした。プー
ルした分画を脱酸素したＨ₂Ｏで希釈し、そして凍結乾
燥して純粋なペプチドをトリフルオロ酢酸塩として得
た。

【００８７】実施例 ２ ＷＳＰＣＳＶＴＣＧ−ＮＨ₂化合物ｐ６の化学的合成 簡単に述べると、０．１７₃ｇのｐ−メチルベンズヒド
リルアミン樹脂（０．７５ミリモル／ｇ）に、次の適当
に保護されたアミノ酸を順次に添加した：ｔ−Ｂｏｃ−
Ｇｌｙ、ｔ−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（４−ＣＨ₃Ｂｚｌ）、ｔ
−Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−Ｖａｌ、ｔ
−Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（４
−ＣＨ₃Ｂｚｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−Ｐｒｏ、ｔ−Ｂｏｃ−
Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）およびｔ−Ｂｏｃ−Ｔｒｐ（ＣＨ
Ｏ）。生ずるＮ末端脱保護されたホルミル化されたペプ
チジル樹脂を乾燥し、次いで８％のアニソールおよび２
％のジメチルサルファイドを含有する無水フッ化水素中
に懸濁した。この処理は−２０℃において０．５時間で
あり、そして０℃において２時間であった。ＨＦを窒素
のスパージで除去した。ペプチド−樹脂混合物をジエチ
ルエーテル中に懸濁し、そしてジエチルエーテルで３回
洗浄した。ペプチドを２５％の酢酸で抽出した。樹脂を
５０％の酢酸およびＨ₂Ｏで洗浄した。水溶液をプール
し、脱酸素したＨ₂Ｏで１：１に希釈し、そして凍結乾
燥してホルミル化した粗製のペプチドを得た。アプライ
ド・バイオシステムス（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ）４３０Ａユーザー・ブレチン１８（１９８７
年４月２８日）に記載されている手順を使用して脱ホル
ミル化を実施した。６モルのグアニジン−ＨＣｌ中のペ
プチド（５ｍｇ／ｍｌ濃縮物）を０℃に冷却し、そして
エタノールアミンを１モルに添加した。ｐＨを濃塩酸で
６に低下した。

【００８８】アミコン（Ａｍｉｃｏｎ）Ｃ₁₈ＭＣ−２５
０−１０カラムの逆相クロマトグラフィーにより精製し
た。アセトニトリル対Ｈ₂Ｏを増加して、０．１％のＴ
ＦＡを維持して勾配の溶離を達成した。分析用逆相ＨＰ
ＬＣにより判定して９０％の純度をもつ集めた分画をプ
ールし、脱酸素したＨ₂Ｏで希釈し、そして凍結乾燥し
て純粋なペプチドをトリフルオロ酢酸塩として得た。

【００８９】実施例 ３ ｆＷＳＰＣＳＶＴＣＧ−ＮＨ₂化合物ｐ５の化学的合成 簡単に述べると、手順は実施例２についてと同一であっ
たが、脱ホルミル化工程を実施しなかった。得られた粗
製ペプチドをＨＦで切断し、引き続いて凍結乾燥し、そ
してホルミル化されたＣ−末端のアミド種として精製し
た。

【００９０】実施例 ４ 他のトロンボスポンジンの断片または類似体 適当な変更を用いて、実施例１、２および３に概説した
手順に従い、次のトロンボスポンジンの断片および類似
体を合成した：

【００９１】

【表３】

【００９２】アミノ酸配列は下記の通りであった。

【００９３】 実施例 ５ 直接付着アッセイ トロンボスポンジンはその付着性質により転移において
作用すると信じられる。一般に、ツスジンスキー（Ｔｕ
ｓｚｙｎｓｋｉ）ら［アナリティカル・バイオケミスト
リー（Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）（１９９０）
１８４：１８９−９１］の開示に従い、本発明のトロン
ボスポンジンの断片または類似体に付着する黒色腫細胞
の能力を評価するアッセイを開発した。このアッセイに
おいて、９６ウェル（ｗｅｌｌ）のマイクロタイター皿
［コスター（Ｃｏｓｔａｒ）、マサチュセッツ州ケンブ
リッジ］のウェルを、２０ミリモルのＮａＣｌ、ｐＨ
７．３、中の種々の配位子の４０μｇ／ｍｌの溶液の５
０μｌとともに２〜３時間インキュベーションした。ト
ロンボスポンジン［ツスジンスキー（Ｔｕｓｚｙｎｓｋ
ｉ）ら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）（１９８５）２６
０：１２２４０−５により精製した］、フィブロネクチ
ン［シグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓｉｇｍａ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）、ミゾリー州］を陽性の対照と
して使用した。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（シグマ
・ケミカル・カンパニー）を陰性の対照として使用し
た。本発明のトロンボスポンジン類似体（ＳＥＱ ＩＤ
Ｎｏ．１）ｐ１、ｐ５およびｐ６を実施例１〜３に記
載するように合成した。マイクロタイター皿への付着
後、ウェルを吸引し、１％のＢＳＡを含有する２００μ
ｌのリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）で１時間処理し、次いで
２００ｍｌのＰＢＳでさらに洗浄した。

【００９４】マウスＢ₁₅Ｆ₁₀黒色腫細胞を増殖させ、そ
して標準の手順を使用する増殖の対数期の間に収穫し
た。収穫した細胞を血清不含ダルベッコ最小必須培地
（ＤＭＥＭ）［フロー・ラボラトリーズ（Ｆｌｏｗ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）］中で３回洗浄し、そしてＤ
ＭＥＭの中に４×１０⁵細胞／ｍｌの最終濃度で懸濁さ
せた。細胞の懸濁液のうちの１００μｌを種々の配位子
を含有するマイクロタイター皿の各ウェルに添加し、そ
して皿をＣＯ₂のインキュベーター中で３７℃において
１時間インキュベーションした。非付着性細胞を吸引に
より除去し、そしてウェルを２００μｌのＰＢＳで３回
洗浄した。付着した細胞を直接にマイクロタイターウェ
ル中で２００μｌのピアース（Ｐｉｅｒｃｅ）ＢＣＡ作
動溶液［ピアース・ケミカル・カンパニー（Ｐｉｅｒｃ
ｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．）ブックレットＮｏ．２３２２５
（１９８７）］で溶解合計の細胞−関連（ａｓｓｏｃｉ
ａｔｅｄ）タンパク質を決定した。平板を付着性マイラ
ー（ｍｙｌａｒ）シート（フロー・ラボラリトーズ）で
カバーし、そして６０℃において３０分間インキュベー
ションした。平板を室温に冷却し、カバーシートを除去
し、そして各ウェルの吸収をマイクロタイタープレート
のリーダー［バイオテク（Ｂｉｏｔｅｋ）、バーモント
州バーリントン］で５６２ｎｍにおいて決定した。

【００９５】表１の結果が示すように、本発明のｐ１、
ｐ５およびｐ６のペプチドは付着性質を示す。

【００９６】

【表４】 表１ 吸収した化合物（２μｌ） トロンボスポンジン％としての付着 トロンボスポンジン １００ ｐ１（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１） ９８ ｐ５ ７９ ｐ６ ７０ ＢＳＡ １３実施例 ６ 黒色腫細胞に対する特異的付着を測定する競合アッセイ 実施例５の直接付着アッセイを変更して、黒色腫細胞に
対する付着について完全なトロンボスポンジンと競合す
る本発明のペプチド化合物の能力を測定した。このアッ
セイにおいて、完全なトロンボスポンジンを実施例５に
記載するようにマイクロタイター皿上に吸収する。アッ
セイは実施例５に類似するが、黒色腫細胞をマイクロタ
イター皿へ添加する前に、１００μｇ／ｍｌの種々の配
位子とともに１５分間予備インキュベーションした。

【００９７】表２の結果が示すように、ｐ１（ＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１）は黒色腫細胞についてトロンボスポン
ジンと効果的に競合することができる。ペプチドはこの
濃度において競合する程度が少ない。

【００９８】

【表５】

【００９９】実施例 ７ 直接血小板付着アッセイ 付着性血小板の数は本質的に前に記載されたようにして
決定した［ツスジンスキー（Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ）ら、
アナリティカル・ケミストリー（Ａｎａｌｙ．Ｃｈｅ
ｍ．）ｓｕｐｒａ］。簡単に述べると、前に記載された
ようにして洗浄した１００μｌの５×１０⁸の血小板／
ｍｌ［ツスジンスキー（Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ）ら、血液
（Ｂｌｏｏｄ）７２、１０９−２２５、１９８８］をマ
イクロタイタープレートに添加し、そのウェルを５０μ
ｌの４０μｇ／ｍｌのペプチドまたはタンパク質溶液
［ヘペス（Ｈｅｐｅｓ）緩衝化生理食塩水、ｐＨ７．
４］で処置した。溶液をヒュームフード内で２時間イン
キュベーションした後、室温において乾燥した。ウェル
を１時間１％のＢＳＡでブロッキングした。血小板（１
００μｌ）をウェル中で３０分間インキュベーション
し、そして非付着性血小板をアスピレーションにより除
去した。ウェルを２００μｌのヘペス緩衝化生理食塩
水、ｐＨ７．４、で３回洗浄した。ＢＣＡタンパク質ア
ッセイを使用して血小板誘導タンパク質を測定すること
によって、付着性血小板の数を決定した。

【０１００】表３の結果が示すように、この濃度におい
て、ｐ１（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１）、ｐ６、および少
ない程度に、ｐ５は血小板に付着する。

【０１０１】

【表６】 表３ 化合物 対照の％としての付着 トロンボスポンジン １００ ＢＳＡ ０．７ ｐ１（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１） ３９ ｐ５ ２．１ ｐ６ ３８ フィブロネクチン ８３実施例 ８ 血小板へのトロンボスポンジンの特異的付着を測定する
競合アッセイ 実施例７の直接付着アッセイを変更して、血小板の付着
についての完全なトロンボスポンジンまたはフィブロネ
クチンと競合する本発明のペプチド化合物の能力を測定
した。

【０１０２】このアッセイにおいて、トロンボスポンジ
ン（ＴＳＰ）またはフィブロネクチン（ＦＮ）を実施例
７に記載するようにマイクロタイター皿上に吸収させ
た。このアッセイは実施例７に類似するが、血小板をマ
イクロタイター皿へ添加する前に、２５０μｇ／ｍｌの
種々の配位子とともに予備インキュベーションした。

【０１０３】表４の結果が示すように、ｐ１（ＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１）は血小板についてトロンボスポンジン
と効果的に競合したが、フィブロネクチンと競合しなか
った。

【０１０４】

【表７】

【０１０５】実施例 ９ 血小板凝集のアッセイ ルミネセンスを測定するために装備した単一チャンネル
のアグロメーター［クロモ−ログ（Ｃｆｒｏｍｏ−Ｌｏ
ｇ）、ペンシルバニア州ヘイバータウン］で血小板の凝
集を監視した。血小板に富んだ血漿（ＰＲＰ）は、０．
３８％のクエン酸ナトリウムで抗凝固処置した全血か
ら、１５０×ｇで２０分間遠心することによって得た。
ペプチドを０．５ｍｌのＰＲＰに添加し、そして凝集を
１μモルのＡＤＰで開始した。緩衝液のブランクは希釈
剤（水）を含有するが、ペプチドをを含有しなかった。

【０１０６】図１の結果が示すように、ｐ１（ＳＥＱ
ＩＤ Ｎｏ．１）、ｐ５およびｐ６は血小板の凝集を阻
害する。

【０１０７】実施例 １０ 本発明のペプチド化合物の抗転移活性を実証するために
使用した生体内モデルは、ツスジンスキー（Ｔｕｓｚｙ
ｎｓｋｉ）ら［キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ）４７：４１３０−４１３３］により
記載されている。簡単に述べると、Ｃ５７黒色マウス
に、対照緩衝液（ヘペス緩衝化生理食塩水、ｐＨ７．
４）あるいは示した量の本発明のペプチド化合物ｐ１
（ＳＥＱ ＩＤＮｏ．１）、ｐ５またはｐ６の存在下
に、５×１０⁵のＢ₁₆Ｆ₁₆マウス黒色腫細胞を静脈内注
射した。１６日後、マウスを殺し、そして肺腫瘍の数を
計数した。

【０１０８】表５の結果が示すように、本発明のペプチ
ドは抗転移活性を有する。ｐ１、ｐ５およびｐ６で処置
した動物は、対照より統計学的に少ない腫瘍を発生し
た。さらに、肺腫瘍はｐ１およびｐ６で処置した動物に
おいて大きさが小さい。

【０１０９】

【表８】 表５ 化合物 濃度（μｇ／マウス） 緩衝液の対照の％ 緩衝液 −−− １００ ｐ１ （ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１） ３０ ４９ ｐ５ ３０ ８７ ｐ６ ３０ ９１ ｐ６ １００ １０２ ｐ６ ３００ ５０実施例 １１ ＣＡＭアッセイ ニワトリの絨毛尿膜（ＣＡＭ）への抗脈管形成性質のア
ッセイを、「卵培養」技術［アウエルバッチ（Ａｕｅｒ
ｂａｃｈ）、ディベロップメンタル・バイオロジー（Ｄ
ｅｖ．Ｂｉｏｌ．）（１９７４）４１：３９１およびク
ルム（Ｃｒｕｍ）、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）（１
９８５）２３０：１３７５］を使用して実施した。この
方法において使用した受精した白色レグホンの卵［ツル
スロウ・ファームス（Ｔｒｕｓｌｏｗ Ｆａｒｍｓ）、
ミゾリー州チェスタータウン］を第３日（受精後）に殻
から取り出し、そして培養皿に入れた。「培養した卵」
を第６日までに３７℃および７０％の相対湿度において
２％のＣＯ₂の雰囲気中で維持した。第６日に、インキ
ュベーションを補助のＣＯ₂の不存在下に実施した。

【０１１０】低いゲル化温度のアガロースペレット［カ
ステロット（Ｃａｓｔｅｌｌｏｔ）、ジャーナル・オブ
・セル・フィジオロジー（１９８６）１２７：３２３］
を使用して、試験物質をＣＡＭ上に移植した。このアッ
セイを２回実施した。第１アッセイにおいて、試験物質
は水中に希釈した９０、９および０．９μｇのペプチド
のｐ１（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１）を含有するペレット
を含んだ。第２アッセイにおいて、試験物質は水中に希
釈した９０、９および０．９μｇのペプチドのｐ１、リ
ン酸塩緩衝液中に希釈した２０、５０、１００および２
００μｇのペプチドのｐ１を含有するペレットを含ん
だ。６０μｇのヒドロコルチゾンおよび５０μｇのヘパ
リンを含有するペレットを含有するペレットである陽性
の対照を、両者のアッセイにおいて使用した。試料のペ
レットを第６日のＣＡＭ上に配置した。１８〜２１のペ
レットを各の試料について移植した。胚への試料の毒性
の起こり得る累積作用のために、１つのみの試料／卵を
使用した。

【０１１１】抗脈管形成は、フェンセラウ（Ｆｅｎｓｅ
ｌａｕ）、「増殖および成熟の因子（Ｇｒｏｗｔｈ ａ
ｎｄ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒｓ）」（１
９８４）２：１７５］に記載されているように、胚の脈
管形成の阻害についてのアッセイにおいて検査した。抗
脈管形成は０（移植物付近の脈管の生長の変化なし）〜
１（移植物付近の毛管の数の減少）および２（移植物付
近のすべての毛管の不存在）の範囲である。これらのス
コアから無脈管指数［ＡＶＩ］を計算することができ
る：

【０１１２】

【数１】 ＡＶＩ＝（ａ×０＋ｂ×１＋ｃ×２）／（ａ＋ｂ＋ｃ）［最大値＝２］ 式中、 ａ＝等級０のＣＡＭの数 ｂ＝等級１のＣＡＭの数 ｃ＝等級２のＣＡＭの数 ａ＋ｂ＋ｃ＝合計の生存−合計のペレットの不含 ［試験の終わりにおける使用可能な胚の合計の数］ ＡＶＩの値は抗脈管形成活性の一次インジケーターとし
て使用する。ＡＶＩ値と活性との相関関係を下に示す：

【０１１３】

【表９】 ＡＶＩの範囲 抗脈管形成活性のレベル ０．５より小さい 不活性 ０．５−０．７５ 弱く活性 ０．７５−１．０ 適度に活性 １．０−１．５ 高度に活性 １．５より大きい 例外的に活性 胚の脈管形成の阻害は、また、ペレットを取り囲む影響
を受けたゾーンならびに影響を受けた領域を境界するペ
レットの部分の大きさを測定することによって定量し
た。ペプチドの内容物の同一性は評価の期間の間にマス
クした。

【０１１４】表６の結果が示すように、ペプチドｐ１は
弱く抗脈管形成である。この研究において、また、ｐ１
が毒性ではないことを示す投与量において、異常の発育
または過度の胚の死は示されなかった。さらに、ＣＡＭ
のほとんどの上に、ペレット付近の脈管の減少または無
脈管は存在した。

【０１１５】

【表１０】

【０１１６】実施例 １２ コラゲナーゼの阻害アッセイ コラゲナーゼは脈管形成プロセスにおいて重要な役割を
演ずることが示された［ランガー（Ｌａｎｇｅｒ）ら、
プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・
オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．）（１９８０）７７：４３３１；サーギエルッ
ソン（Ｔｈｕｒｇｉｅｒｅｓｓｏｎ）ら、ジャーナル・
オブ・ナショナル・キャンサー・インスチチュート
（Ｊ．Ｎｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．）（１９８
２）６９：１０４９およびリフキン（Ｒｉｆｋｉｎ）
ら、内皮細胞の病理学（Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔ
ｈｅ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｃａｌ Ｃｅｌｌ）（Ａｃａ
ｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８２）１９１−１９
７］。コラゲナーゼ阻害活性は、ジョンソン−ウィント
（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｉｎｔ）［アナリティカル・バイ
オケミストリー（Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）
（１９８０）１０４：１７５］に記載されているように
して決定した。ペプチドｐ１（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．
１）およびｐ２７を、５０ｎｇ、１００ｎｇ、２５０ｎ
ｇ、５００ｎｇ、１μｇおよび２μｇの投与量におい
て、コラゲナーゼ活性についてのジョンソン−ウィット
（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｉｔｔ）の放射能測定酵素アッセ
イにおいて試験した。ペプチド２７は２μｇの投与量に
おいて阻害性（−２１％）であった。

【図面の簡単な説明】

【図１】血小板の凝集を阻害する本発明の選択したペプ
チド化合物の生体外能力を描写する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 7/10 7537−4Ｈ Ｃ０７Ｋ 99:00 (71)出願人 591048335 ザ・メデイカル・カレツジ・オブ・ペンシ ルベニア ＴＨＥ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ ＯＦ ＰＥＮＮＳＹＬＶＡＮＩＡ アメリカ合衆国ペンシルベニア州19129フ イラデルフイア・ヘンリイアベニュー3300 (72)発明者 アラン・ハワード・デユーチ アメリカ合衆国メリーランド州21044コロ ンビア・ブライトプルーム6301 (72)発明者 ジヨージ・ポール・タスジンスキ アメリカ合衆国ニユージヤージイ州08094 ウイリアムズタウン・ソローレイン824

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式： Ｚ₁−ＡＡ₁−ＡＡ₂−ＡＡ₃−ＡＡ₄−ＡＡ₅−ＡＡ₆−ＡＡ₇−ＡＡ₈−ＡＡ₉−Ｚ₂ 式中、 Ｚ₁は水素、アミノ、アセチル、あるいは少なくとも１
   つのアミノ酸残基またはそのデスアミノの形態であり、 ＡＡ₁は中性／非極性／大きい／環状のアミノ酸残基で
   あり、 ＡＡ₂は中性／極性／小さい、あるいは中性／極性／大
   きい／非環状または酸性のアミノ酸残基であり、 ＡＡ₃は中性／非極性／大きい／環状の、あるいは中性
   ／非極性／大きい／非環状の、あるいは中性／極性／大
   きい／非環状の、あるいは中性／極性／小さいアミノ酸
   残基であり、 ＡＡ₄は中性／極性／小さいアミノ酸残基であり、 ＡＡ₅は中性／極性／小さい、あるいは中性／極性／大
   きい／非環状のアミノ酸残基であり、 ＡＡ₆は中性／非極性／大きい／非環状の、あるいは中
   性／極性／大きい／非環状のアミノ酸残基であり、 ＡＡ₇は中性／極性／大きい／非環状の、あるいは中性
   ／極性／小さいアミノ酸残基であり、 ＡＡ₈は中性／極性／小さいアミノ酸残基であり、 ＡＡ₉は中性／極性／小さいアミノ酸残基であり、そし
   てＺ₂はヒドロキシル、カルボキシル、非アミノ酸、例
   えば、アグマチンであるか、あるいはそのカルボキシア
   ミドまたはアルキルアミドの形態を包含する、少なくと
   も１種のアミノ酸残基である、からなるポリペプチド化
   合物の有効量を投与することからなる、トロンボスポン
   ジン様活性を促進または阻害する方法。