JPH06105257B2 - 癌の測定用キット - Google Patents

癌の測定用キット

Info

Publication number
JPH06105257B2
JPH06105257B2 JP59165351A JP16535184A JPH06105257B2 JP H06105257 B2 JPH06105257 B2 JP H06105257B2 JP 59165351 A JP59165351 A JP 59165351A JP 16535184 A JP16535184 A JP 16535184A JP H06105257 B2 JPH06105257 B2 JP H06105257B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
peak
type
cancer
afp
liver cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP59165351A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS6144355A (ja
Inventor
達也 石黒
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hitachi Chemical Diagnostics Systems Co Ltd
Original Assignee
Kyowa Medex Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kyowa Medex Co Ltd filed Critical Kyowa Medex Co Ltd
Priority to JP59165351A priority Critical patent/JPH06105257B2/ja
Priority to EP85305362A priority patent/EP0171243B1/en
Priority to DE8585305362T priority patent/DE3586614T2/de
Priority to AU45654/85A priority patent/AU584346B2/en
Priority to CA000488106A priority patent/CA1260388A/en
Priority to DK357185A priority patent/DK169156B1/da
Priority to US06/762,970 priority patent/US4791066A/en
Publication of JPS6144355A publication Critical patent/JPS6144355A/ja
Publication of JPH06105257B2 publication Critical patent/JPH06105257B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G01N33/561—Immunoelectrophoresis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57469—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving tumor associated glycolinkage, i.e. TAG
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57473—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving carcinoembryonic antigen, i.e. CEA
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57476—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving oncofetal proteins
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
    • Y10S436/813—Cancer
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/827—Lectins

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は液体中の癌関連抗原、特に正常細胞の癌化や脱
分化により産生される糖蛋白、糖脂質および糖抗原を免
疫血清学的検査法により定性，定量し、癌を測定する方
法に用いるキットに関する。
従来の技術 従来、癌の特異的免疫血清学的検査法には、癌特異糖蛋
白を癌診断用マーカーとして測定する方法が行われてい
る。これらの方法は、糖蛋白質の蛋白質部分の免疫原性
を利用する方法であり、腫瘍マーカーとしては、例え
ば、α−フェトプロテイン（以下AFPという）、癌胎児
性抗原（以下CEAという）、γ−グルタミルトランスペ
プチターゼ（以下γ−GTPという）、ヒト絨毛性ゴナド
トロピン（以下HCGという）等が挙げられる。
発明が解決しようとする問題点 例えば、血清AFP値の測定は、原発性肝癌の特異的免疫
血清学的診断法として知られているが、その上昇が軽度
の場合には、肝細胞の再生によるのか、肝癌細胞による
ものなのか、鑑別が困難である。AFPは、原発性肝癌の
ほか、卵巣腫瘍やときとして、胃癌，膵癌よりの肝転移
（転移性肝癌）でもときとして著しく増加するため、単
なる量的変動からは癌の鑑別診断が難しい。
問題点を解決するための手段 本発明者は、細胞の癌性変化に伴い、その体液中には未
分化型細胞（特に癌細胞）により産生される癌関連糖抗
原が放出されること、該糖抗原は正常な分化型細胞から
産生されるものとは立体的な構造に部分的相違が見られ
ること、さらには糖結合蛋白質であるレクチンは、これ
ら糖抗原の部分的な立体構造を特異的に認識することに
着目した結果、吸着交叉免疫電気泳動法（以下ACIEとい
う）を用いてレクチン結合性を分析する方法において、
泳動後の発色系にパーオキシダーゼ（以下PODという）
標識プロテインＡと４−メトキシ−１−ナフトールおよ
び過酸化水素からなる高感度な検出法を用いることによ
り分析の精度を挙げ、測定時間の短縮ができること、さ
らには、レクチンの結合特異性を任意に組み合わせるこ
とにより癌の種類を明確に鑑別することができることを
見出し、本発明を完成した。
作用 以下本発明を詳細に説明する。
本発明は、液体中のα−フェトプロテインと２種類以上
のレクチンとの結合性を個別に吸着交叉免疫電気泳動法
により分析し、得られた２種類以上の分析結果を統合し
て、原発性肝癌と転移性肝癌とを鑑別する、癌の測定方
法に用いるための、レクチン、パーオキシダーゼ標識プ
ロテインＡ、抗α−フェトプロテイン血清、４−エトキ
シ−１−ナフトールおよび過酸化水素からなる癌の測定
用キットに関する。さらにACIEにおける発色にPOD標識
プロテインＡと４−メトキシ−１−ナフトールおよび過
酸化水素とからなる検出法を用いれば、より高感度に癌
の診断が行なえる。
本発明で使用される液体としては、各種の体液、例え
ば、血液，尿，唾液，胃液，腸液，膵液，胆汁，細胞組
織液，浮種液，胸水，心嚢液，関節液，脳脊髄液，羊
水，性器分泌液，母乳，鼻汁，喀痰，涙，汗等が挙げら
れるが就中、血液を血清または血漿として使用するのが
好ましい。
癌関連糖抗原としては、AFP,CEA,HCG,γ−GTP等が挙げ
られる。
本発明で使用されるレクチンとしては、α−Ｄ−グルコ
ースおよびα−Ｄ−マンノースと特異的に結合するレク
チンとしてタチナタマメレクチン（以下ConAという）、
及びレンズマメレクチン（以下LCHという）が、Ｎ−ア
セチルガラクトサミンと特異的に結合するレクチンとし
てインゲンマメレクチン（以下PHAという）のイソレク
チンであるPHA−Ｅが、β−Ｄ−ガラクトースと特異的
に結合するレクチンとしてヒマの実レクチン（以下RCA
という）のイソレクチンであるRCA−Ｉが、Ｎ−アセチ
ルグルコサミンと特異的に結合するレクチンとして、バ
ンデリアマメレクチン（以下BSAという）のイソレクチ
ンであるBSA−II等が挙げられる。
本発明方法において、癌関連糖抗原の分離・同定はACIE
法を利用するのが好ましい。すなわち、癌関連糖抗原含
有試料をレクチン含有ゲル内で一次元に泳動分離した
後、分離された各分画を抗血清を含んだゲル内で二次元
の方向に泳動し、発色させることにより各分画を鋭い沈
降峰として、定量的に検出することができる。レクチン
結合性はこの泳動距離の特異的な変化から求められる。
本発明方法においてACIE後の発色には酸素免疫測定法を
用いる。特にPOD標識プロテインＡと４−メトキシ−１
−ナフトールおよい過酸化水素とからなる発色系は、高
感度，高分離能，鮮明，迅速かつ簡便な方法であり、癌
の確定的診断には極めて有用な方法である。
レクチンとの結合性による癌の診断は、単独でもある程
度は可能であるが、充分とは言えず、レクチンとの結合
性を２種以上組み合わせることにより、より明確に行え
る。組み合わせとしては測定物質の種類により異なる
が、例えばAFPの分析には、ConA,LCH等が挙げられる。
詳細には、胎児性蛋白の１種であるAFPは原発性肝癌や
性線の奇形腫，卵巣腫瘍の患者血中に出現する糖蛋白質
である。ACIEを用いるとレクチン結合性の差からAFPは
数種類に分画される。すなわち、例えばConAを用いる
と、AFPはConAに結合する分画とConAに結合しない分画
の２分画に分かれ、個体発生学的にはConA結合AFPは肝
細胞に、ConA非結合AFPは卵黄嚢に由来することが知ら
れている。本発明において、原発性肝癌患者の血清AFP
を分析すると、大多数の胎生期の肝細胞に由来するAFP
分画（ａ峰という）の他、１部卵黄嚢由来の分画（ｂ峰
という）が認められる。一方転移性肝癌患者の血清AFP
はすべて卵黄嚢由来の分画（ｂ峰）が認められる。同様
にLCHにおいて、胎生期のAFPはＡ峰、Ｂ峰,C峰,D峰の４
分画に分かれる。AFP産生部位の経時的変化から、Ａ峰
とＣ峰は肝細胞由来の分画、Ｂ峰とＤ峰は卵黄嚢由来の
分画であると分析される。原発性肝癌および転移性肝癌
それぞれのAFP分画パターンをみると原発性肝癌ではす
べてＡ峰,C峰のみ認められるが、転移性肝癌ではＡ峰,C
峰以外にＢ峰が認められる。すなわち、原発性肝癌では
胎生期の肝細胞で産生されるAFP分画が主として出現す
るのに対し、転移性肝癌では胎児肝由来のAFP以外に卵
黄嚢で産生される分画も認められる。従って卵黄嚢由来
のAFP分画を指標することにより原発性肝癌と転移性肝
癌の識別診断は可能となる。
さらには、他のレクチン,PHA−E,RCA−I,BSA−IIにおい
て、羊水中のAFPは、経時的に特異的な変動を示さない
が、癌患者血清中のAFPでは、特異的な分画パターンを
示す。
癌関連糖抗原は複雑な立体構造を示すが、各レクチンは
この構造を部分的に認識しているので、１種類のレクチ
ンの糖特異的結合性だけでは癌の診断は明確には行えな
い。ConA,LCH,PHA−E,RCA−I,BSA−IIの５種類のレクチ
ンを適宜に組み合わせることで、より明確に癌関連糖抗
原の立体構造を識別させ、これにより癌鑑別を確定的に
診断することができる。
本法を実施するにあたって、検体量，レクチンの量,POD
標識プロテインＡの量および比率，基質の量，反応時
間，温度，電気泳動の条件は測定する物質の種類，レク
チンの種類，使用する受容体の力価，支持体の種類等に
よって異なるので各測定について最も適切な条件を実験
的に決める。
以下に、本発明の実施の態様を具体的に示す。
一定量の体液５μ以上好ましくは５〜10μを、レク
チン含有ゲル上一次元電気泳動により拡散させる。一次
元泳動後、分離された各分画を抗血清を含んだゲル内で
二次元の方向に泳動し、酸素免疫測定法により検出す
る。
レクチン濃度は測定物質およびレクチンの種類により異
なるが、一般的に分離能は濃度にも依存する。本発明方
法においては、高感度な検出法であるので低濃度のレク
チン、200〜600μg/mlでも容易に分離できる。
ゲル支持体は特に限定されないが、二次元の吸着交叉免
疫電気泳動の場合には特に電気浸透度の低いアガロース
を用いた方が、ゲルの歪みが少なく良い。ゲル支持体の
調製法は通常の方法を採用できる。蒸留水、pH8.6附近
のバルビタール緩衝液またはトリス塩酸緩衝液等の希釈
液に一定量のアガロースを添加し、静かに撹拌下、60〜
80℃に加温して溶解し所定の平板に流し、放冷してゼリ
ー状に凝固させる。
ゲルの濃度は、通常0.5〜2.0重量％、特に0.8〜1.0重量
％が好ましく、必要により防腐剤を添加しても良い。
またこのゲルは、長時間泳動すると発熱のためゲルの表
面が乾燥して、歪みの原因にもなる。さらにレクチンと
該糖抗原の結合は一般的に低温ほど強いので、泳動は15
℃以下、好ましくは５〜10℃で行うと良い。例えば電子
冷却泳動装置等を用いると低濃度のレクチンでも効率よ
く分離できる。
ACIEの一次元の泳動距離は、一般的に長くする程分離は
良いが、レクチンもその分必要となり、泳動時間も長く
なるので6cm以上であれば十分である。泳動用のコント
ロールマーカーには、色素〔例えばブロムフェノールブ
ルー（以下BPBという）〕結合アルブミンを検体と平行
して流すが、AFPの場合には、BPB結合アルブミンが６〜
7cm附近まで泳動すれば十分である。
一方、二次元の泳動も長時間を要する（通常は16時間以
上）が、本発明における検出法は測定感度が鋭敏である
ため２〜６時間、好ましくは２〜４時間泳動すれば十分
である。
次に本発明を実施例を用いて具体的に説明するが、本発
明は以下の実施例によってその範囲を限定されるもので
はない。
実施例1. LCH〔ファルマシア・ファインケミカルズ社（スウェー
デン）製〕−ACIEによる肝癌の鑑別診断 （ａ） 被検サンプルの調製： 原発性肝癌48例、転移性肝癌８例の各血清を正常ヒト血
清（AFP:5ng/ml以下）で希釈し、AFP30,000ng/ml以下に
調整しサンプルとした。
（ｂ） LCH含有アガロース板の作製（一次元泳動
用）： 1.0％アガロース〔FMC Marine Colloids Division社
（米）製、pH8.6,イオン強度0.05のバルビタール緩衝液
で溶解〕にLCHを200μg/ml混合した。このLCH含有アガ
ロースゲル15mlをゲルボンド（FMC Marine Colloids Di
vision社製,110×125mm）上に流し込み、凝固させて、
厚さ約1mmのLCH含有アガロース板を作製した。
（ｃ） 抗AFP血清含有アガロース板の作製（二次元泳
動用）： 1.0％アガロース10mlに抗AFP血清〔ダコ（DAKO）社（デ
ンマーク）製〕20μを混合した。この抗AFP血清含有
アガロースゲル10mlを上記と同じゲルボンドに流し込
み、凝固させて厚さ約1mmの抗AFP血清含有アガロース板
を作製した。
（ｄ） POD標識プロテインＡ希釈液の調製： POD標識プロテインＡ〔E.Y.LABOLATORIES社（米）製〕2
0μに、希釈液〔NaCl14.0gをバルビタール緩衝液（pH
8.6）１に溶解したもの〕10mlを混合し、0.2％POD標
識プロテインＡ希釈液とした。
（ｅ） 発色用試液の調製： ４−メトキシ−１−ナフトール〔アルドリッチ（Aldric
h）社（米）製〕200μ、0.05Mトリス緩衝液（トリス
ヒドロキシメチルアミノメタン12.114g/と0.1M HCl
を100:77で混合した液、pH7.6）10mlおよび30％H2O21滴
を使用直前に混合し発色用試液とした。
（ｆ） AFPの測定： （ａ）で得たサンプル10μを（ｂ）で調製したLCH含
有アガロース板の孔（直径4mm）に注入し、一次元電気
泳動を行った。泳動は、バルビタール緩衝液（pH8.6）
を用いて、3mA/cm,90分,10℃冷却下に行った。また対照
としてヒト血清アルブミン（シグマ社製,fractionV,0.0
1％BPB5μ含有）を用い、約6cm泳動した位置に印をつ
けた。
一次元電気泳動後、アガロース板を泳動方向し平行に約
1cmの巾で切り取り、（ｃ）で調製した抗AFP含有アガロ
ース板に密着させ、一次元展開方向に対して直角方向に
2.5mA/cm,3時間,10℃冷却下に二次元電気泳動を行っ
た。
泳動後、吸着パット（日本商事社製）で２〜３分間処理
して脱蛋白したのち、リン酸緩衝液（pH7.2）で30分間
洗浄した。再び吸着パットを用いて乾燥し、実施例１〜
（ｃ）で調製したPOD標識プロテインA10mlを平板上に流
した。30分間反応後、再び吸着パットによる乾燥，洗浄
〔リン酸緩衝液（pH7.2）で30分間〕，吸着パットによ
る乾燥を上記と同様に繰り返したのち、（ｅ）で調製し
た発色試液10mlを加え、２〜３分間反応させた。２〜３
分間水洗し、吸着パットで乾燥させて、一次元電気泳動
で得たアルブミンの位置から二次元電気泳動で現れた泳
動ピークまでの距離を測定した。
標準羊水をLCH−ACIEにより泳動すると、泳動距離によ
り決定されるＡ峰、Ｂ峰、Ｃ峰に分離されることが知ら
れているが（図１）、上記の実験で得られるLCH−ACIE
による肝癌患者血清の代表的な泳動像は、（１）Ａ峰の
みが単独に出現するタイプ（Ｉ型）、（２）Ｃ峰のみが
単独に出現するタイプ（II型）、（３）Ａ峰とＣ峰の２
峰が出現するタイプ（III型）、（４）Ａ峰あるいはＣ
峰以外にＢ峰も出現するタイプ（IV型）に分かれる。
III型はさらにＡ峰とＣ峰の量的な違いによって（ａ）
峰の方がＣ峰より高いタイプ（III a型）、（ｂ）Ｃ峰
の方がＡ峰より高いタイプ（III b型）に分かれる。
またIV型は（ａ）Ａ峰とＢ峰の２峰が出現するタイプ
（IV a型）、（ｂ）Ａ峰,B峰,C峰の３峰が出現するタイ
プ（IV b型）、（ｃ）Ｂ峰のみ出現するタイプ（IV c
型）に分かれる。
第１表に示される通り、原発性肝癌血清中のAFPはＩ型,
II型およびIII型に分画されるが、転移性肝癌ではすべ
てIV型に分画され、原発性，転移性肝癌の識別に有用で
ある。
実施例2. ConA−ACIEによる肝癌の鑑別診断 実施例１と同様の血清サンプルを用いて、LCHに替えてC
onA（ファルマシア・ファインケミカルズ社製）含有ア
ガロース板（ConA:600μg/ml）を用いる以外は実施例１
と同様の方法で行った。
標準羊水をConA−ACIEにより泳動すると、泳動距離によ
り決定されるａ峰およびｂ峰に分離されることが知られ
ているが（図２）、上記の実験で得られるConA−ACIEに
よる肝癌患者血清の代表的な泳動像は、（１）ａ峰のみ
出現するタイプ（１型），（２）ａ峰,b峰の２分画が出
現するタイプ（２型）および（３）ｂ峰のみ出現するタ
イプ（３型）に分かれる。
第２表および第３表に示される通り、原発性肝癌血清中
のAFPは１型（ａ峰のみ）および２型（ａ峰＞ｂ峰）に
分画されるが、転移性肝癌では２型（ａ峰＜ｂ峰）およ
び３型に分画され、原発性，転移性肝癌の鑑別に有用で
ある。
実施例3. PHA−Ｅ−ACIEによるAFP産生疾患の鑑別診断 原発性肝癌５例，転移性肝癌４例，卵巣腫瘍４例，睾丸
腫瘍１例の各血清について、LCHに替えてPHA−Ｅ（E.Y.
LABOLATORIES社製，アメリカ）含有アガロース板（PHA
−E:200μg/ml）を用いる以外は、実施例１と同様の方
法で行った。泳動のピークは第４表に示す泳動距離から
Ａ峰,B峰,C峰,D峰の４分画に命名した。
その結果、PHA−Ｅ−ACIEによる各種癌患者血清の泳動
像は、（１）Ｃ峰のみ,D峰のみまたはＣ峰,D峰の２分画
がそれぞれ出現するタイプ（１型）および（２）Ａ峰,C
峰の２分画,B峰のみ,B峰,C峰の２分画またはＢ峰,C峰,D
峰の３分画がそれぞれ出現するタイプ（２型）に分かれ
た。２型は、第５表中下線で示すようにＡ峰またはＢ峰
が出現することを特徴とする。
羊水中のAFPはPHA−Ｅ−ACIEにおいて胎令との間に特異
的な変動は認められない。しかし癌患者血清において
は、第５表に示す如く、一定の傾向が認められた。
実施例4. RCA−Ｉ−ACIEによるAFP産生疾患の鑑別診断 実施例３と同様の血清サンプルを用いて、LCHに替えてR
CA−Ｉ（E.Y.LABOLATORIES社製）含有アガロース板（RC
A−I:200μg/ml）を用いる以外は、実施例１と同様の方
法で行った。
泳動のピークは第４表に示す泳動距離からＡ峰,B峰,C
峰,D峰の４分画に命名した。
その結果、RCA−Ｉ−ACIEによる各種癌患者血清の泳動
像は（１）Ｃ峰のみ、Ｄ峰のみまたはＣ峰,D峰の２分画
がそれぞれ出現するタイプ（１型），（２）Ａ峰,C峰の
２分画,A峰,D峰の２分画またはＡ峰,C峰,D峰の３分画が
それぞれ出現するタイプ（２型）および（３）Ａ峰,B
峰,D峰の３分画またはＢ峰,D峰の２分画がそれぞれ出現
するタイプ（３型）に分かれた。２型および３型は、第
６表中下線で示すようにＡ峰および／またはＢ峰が出現
することを特徴とする。
羊水中のAFPは、RCA−Ｉ−ACIEにおいて胎令との間に特
異的な変動は認められない。しかし、癌患者血清におい
ては第６表に示す如く、一定の傾向が認められた。
実施例5. BSA−II−ACIEによるAFP産生疾患の鑑別診断 実施例３と同様の血清サンプルを用いて、LCHに替えてB
SA−II（E.Y.LABOLATORIES社製）含有アガロース板（BS
A−II:200μg/ml）を用いる以外は、実施例１と同様の
方法で行った。
泳動のピークは、第４表に示す泳動処理からＡ峰,B峰,C
峰,D峰の４分画に命名した。
その結果、BSA−II−ACIEによる各種癌患者血清の泳動
像は、（１）Ｃ峰のみまたはＤ峰のみ出現するタイプ
（１型）、および（２）Ａ峰,B峰,D峰の３分画、または
Ｂ峰,D峰の２分画が出現するタイプ（２型）に分かれ
た。２型は、第７表中下線で示すようにＡ峰および／ま
たはＢ峰が出現することを特徴とする。
羊水中のAFPは、BSA−II−ACIEにおいて、胎令との間に
特異的な変動は認められない。しかし、癌患者血清にお
いては第７表に示す如く、一定の傾向が認められた。
実施例6. ConAとLCHの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例２において鑑別が曖昧な病例、すなわちConAで２
型に属した患者血清中、原発性肝癌でｂ峰が高値（14％
以上）を示した病例（４例）および、転移性肝癌でｂ峰
が低値（45％以下）を示した症例（６例）について、LC
Hによる分画パターン（実施例１）の結果を照合した。
その結果、原発性肝癌はすべてIII型に、転移性肝癌は
すべてIV型に属した。
実施例7. ConAとPHA−Ｅの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例２において鑑別が曖昧な症例、すなわちConAで２
型に属した患者血清中、原発性肝癌でｂ峰が高値（14％
以上）を示した症例、および転移性肝癌でｂ峰が低値
（45％以下）を示した症例のうち、その数例の患者血清
について、PHA−Ｅでの分画パターンを検討した実施例
３の結果を照合した。
その結果、原発性肝癌は１型に、転移性肝癌はいずれも
２型に属した。
実施例8. PHA−ＥとRCA−Ｉの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例３および実施例４において鑑別が曖昧な症例、す
なわちPHA−Ｅにおいて、１型を示した卵巣腫瘍患者血
清は、RCA−Ｉでは３型に分類された。
また、RCA−Ｉで１型を示した転移性肝癌患者血清は、R
HA−Ｅでは２型に分類された。
実施例9. PHA−ＥとBSA−IIの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例３および実施例５において鑑別が曖昧な症例、す
なわちPHA−Ｅにおいて、１型を示した卵巣腫瘍患者血
清は、BSA−IIでは１型に分類された。
また、BSA−IIで１型を示した転移性肝癌患者血清は、P
HA−Ｅでは２型に分類された。
実施例10. RCA−ＩとLCHの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例４において鑑別が曖昧な症例、すなわちRCA−Ｉ
において、１型を示した転移性肝癌患者血清は、LCH
（実施例２）ではIVb型に分類された。
実施例11. RCA−ＩとBSA−IIの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例４および実施例５において鑑別が曖昧な症例、す
なわちRCA−Ｉにおいて１型を示した転移性肝癌患者血
清は、BSA−IIでは２型に分類された。
また、BSA−IIで１型を示した転移性肝癌患者血清は、R
CA−Ｉでは３型に分類された。
実施例12. BSA−IIとLCHの組み合わせによる癌の鑑別診断 実施例５において鑑別が曖昧な症例、すなわちBSA−II
で１型を示した転移性肝癌患者血清は、LCH（実施例
２）ではIVb型に分類された。
上記の如く、ConA,LCH,PHA−E,RCA−I,BSA−IIの５種類
のレクチンを相補的に任意組み合わせることにより、癌
をより明確に鑑別診断することが可能となった。
発明の効果 上記の如く本発明によれば、体液中の癌関連糖抗原を有
利に分析し、これにより癌を鑑別診断することができ
る。臨床的に非常に有用である。
【図面の簡単な説明】
図１、LCH−ACIEによる標準羊水の泳動像。 符号の説明 A:A峰 B:B峰 C:C峰 CSA:ニワトリ血清アルブミン 図２、ConA−ACIEによる標準羊水の泳動像。 符号の説明 a:a峰 b:b峰 CSA:ニワトリ血清アルブミン

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】レクチン、パーオキシダーゼ標識プロテイ
    ンＡ、抗α−フェトプロテイン血清、４−メトキシ−１
    −ナフトールおよび過酸化水素からなることを特徴とす
    る吸着交叉免疫電気泳動法による癌の鑑別用キット。
JP59165351A 1984-08-07 1984-08-07 癌の測定用キット Expired - Lifetime JPH06105257B2 (ja)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP59165351A JPH06105257B2 (ja) 1984-08-07 1984-08-07 癌の測定用キット
EP85305362A EP0171243B1 (en) 1984-08-07 1985-07-26 Method for diagnosing cancer
DE8585305362T DE3586614T2 (de) 1984-08-07 1985-07-26 Verfahren zur diagnose von krebs.
AU45654/85A AU584346B2 (en) 1984-08-07 1985-07-31 Method for diagnosing cancer
CA000488106A CA1260388A (en) 1984-08-07 1985-08-06 Method for diagnosing cancer
DK357185A DK169156B1 (da) 1984-08-07 1985-08-06 Fremgangsmåde til diagnosticering af cancer
US06/762,970 US4791066A (en) 1984-08-07 1985-08-06 Immunoelectrophoresis method for diagnosing and differentiating cancer using lectins

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP59165351A JPH06105257B2 (ja) 1984-08-07 1984-08-07 癌の測定用キット

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS6144355A JPS6144355A (ja) 1986-03-04
JPH06105257B2 true JPH06105257B2 (ja) 1994-12-21

Family

ID=15810706

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP59165351A Expired - Lifetime JPH06105257B2 (ja) 1984-08-07 1984-08-07 癌の測定用キット

Country Status (7)

Country Link
US (1) US4791066A (ja)
EP (1) EP0171243B1 (ja)
JP (1) JPH06105257B2 (ja)
AU (1) AU584346B2 (ja)
CA (1) CA1260388A (ja)
DE (1) DE3586614T2 (ja)
DK (1) DK169156B1 (ja)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4857457A (en) * 1986-07-24 1989-08-15 Shamsuddin Abulkalam M Screening test for large intestinal cancer
DE3900639A1 (de) * 1988-12-23 1990-06-28 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zum nachweis von kohlenhydrathaltigen verbindungen und dazu geeignetes reagenz
US5137810A (en) * 1989-04-26 1992-08-11 The University Of North Carolina Method of determining the gram sign of bacteria
US5411868A (en) * 1989-10-24 1995-05-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Diagnostic and premonitoring uses of a 65 kDa tumor-associated protein in companion and domestic animal malignancy
ES2083152T3 (es) * 1990-11-30 1996-04-01 Monoclonetics Int Metodos para el diagnostico de dolores cronicos lumbares y cervicales.
US5844097A (en) * 1990-11-30 1998-12-01 Monoclonetics International, Inc. Methods for the diagnosis of peripheral nerve damage
FR2679034A1 (fr) * 1991-07-10 1993-01-15 Centre Nat Rech Scient Determination de la malignite des cellules de tumeurs humaines ou animales, au moyen de lectines endogenes.
IL137836A0 (en) * 1998-02-13 2001-10-31 Oxford Glycosciences Uk Ltd Methods and compositions for diagnosis of hepatoma
US6150123A (en) * 1998-09-03 2000-11-21 Centre Integre De Recherches Biocliniques Sur Le Sida (Cirbs) Affinity biotinylation
US20030077603A1 (en) * 1999-08-18 2003-04-24 Parekh Rajesh Bhikhu Methods and compositions for diagnosis of hepatoma
GB9919597D0 (en) * 1999-08-18 1999-10-20 Oxford Glycosciences Uk Ltd Methods and compositions for diagnosis of hepatoma
US20040115754A1 (en) * 2002-12-11 2004-06-17 Umax Data Systems Inc. Method for establishing a long-term profile of blood sugar level aiding self-control of the same
TW200411178A (en) * 2002-12-31 2004-07-01 Veutron Corp Method for determining the resolution of blood glucose by using rising time curve
US20140274876A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Patricia Denny Caries risk test for predicting and assessing the risk of disease
TW592667B (en) * 2003-04-04 2004-06-21 Veutron Corp Method for determining the resolution of blood glucose
GB2404734A (en) * 2003-08-05 2005-02-09 Secr Defence A method of screening a sample for abnormally glycosylated and/or expressed proteins
US20100104572A1 (en) * 2006-11-02 2010-04-29 Sylvie Luria Methods for screening for therapeutic molecules and use of the molecules therefrom
JPWO2009110517A1 (ja) * 2008-03-04 2011-07-14 味の素株式会社 癌種の評価方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1979000044A1 (en) * 1977-07-14 1979-02-08 H Elwing Method for the determination of biological substances by diffusion in a porous matrix or by electrophoresis
NL8000536A (nl) * 1979-01-30 1980-08-01 Otsuka Pharma Co Ltd Bepaling van met tumor gepaard gaande glycobrug en kankerdiagnose.
SE462186B (sv) * 1982-01-29 1990-05-14 Otsuka Pharma Co Ltd Foerfarande foer bestaemning av halten tumoerassocierade glykobindningar i kroppsvaetskor

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
「肝臓」第２２巻１９８１年Ｐ１５５９〜１５６７
Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，Ｖｏｌ．４，（１９８３）Ｐ３７１〜３７３

Also Published As

Publication number Publication date
DK357185D0 (da) 1985-08-06
DE3586614T2 (de) 1993-04-08
DK169156B1 (da) 1994-08-29
CA1260388A (en) 1989-09-26
DE3586614D1 (de) 1992-10-15
EP0171243A2 (en) 1986-02-12
EP0171243A3 (en) 1988-07-27
AU4565485A (en) 1986-02-13
DK357185A (da) 1986-02-08
AU584346B2 (en) 1989-05-25
US4791066A (en) 1988-12-13
EP0171243B1 (en) 1992-09-09
JPS6144355A (ja) 1986-03-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH06105257B2 (ja) 癌の測定用キット
Ganrot Crossed immunoelectrophoresis
Breborowicz et al. Microheterogeneity of alpha-fetoprotein in patient serum as demonstrated by lectin affino-electrophoresis.
AU764444B2 (en) Analytical test device and method
US5843680A (en) Differential separation assay methods and test kits
JP4665069B2 (ja) 癌検出法および試薬
KR880001533B1 (ko) 항원 항체반응의 측정방법 및 그 시약
JPS598779B2 (ja) 抗体、抗原または抗体：抗原複合体の分析法
KR100394940B1 (ko) 간 질환 진단을 위한 혈중 아사이알로당단백질양의측정방법 및 측정용 킷트
US4738920A (en) Method for assaying a biocomponent using 4-methoxy-1-naphthol and hydrogen peroxide
SE439550B (sv) Forfarande vid immunodiffusion eller immunoelektrofores
JPH0664060B2 (ja) 分析物の検出法及び検出剤
Krøll Quantitative immunoelectrophoresis
US20030027222A1 (en) Test device for detecting human blood and method of use
Tracy et al. Two-dimensional gel electrophoresis as an aid in the analysis of monoclonal gammopathies
Stastny et al. Tissue proteins in breast cancer, as studied by use of two-dimensional electrophoresis.
Cahill et al. Soluble and membrane lectin‐binding glycoproteins of the chromaffin granule
ES2221308T3 (es) Deteccion prenatal de anomalia cromosomica.
Bręborowicz et al. Microheterogeneity of Alpha‐fetoprotein in Patient Serum as Demonstrated by Lectin Affino‐electrophoresis
EP1368632B1 (en) Direct detection of biomolecules in polyacrylamide gel
McLachlan Monoclonal immunoglobulins: affinity blotting for low concentrations in serum.
Albanese et al. Analysis of α-fetoprotein heterogeneity by an improved crossed immunoaffinoelectrophoretic technique
Magne et al. Factors influencing the reaction of α1-fetoprotein with concanavalin A and Lens culinaris agglutinin in crossed affinoimmunoelectrophoresis
JP2630436B2 (ja) 肝癌診断薬
Christenson et al. Oligoclonal banding in cerebrospinal fluid assessed by electrophoresis on agarose after centrifugal sample concentration through a microconcentrator membrane.