JPH0578256A - インターロイキン−２と５’−デオキシ−５−フルオロウリジンとを含有してなる免疫増強剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】インターロイキン−２と5'-デオキシ-5-フルオ
ロウリジンとを併用してなる、癌等の治療剤および治療
方法を提供する。 【構成】インターロイキン−２と5'-デオキシ-5-フルオ
ロウリジンとを組み合わせてなる、あるいは更に他の化
学療法剤および／または他の免疫療法剤を含有してなる
免疫増強剤であり、このものは抗腫瘍剤あるいは抗各種
ウィルス感染症剤として臨床適用することのできるもの
である。 【効果】ＩＬ−２と５'−ＤＦＵＲとを組み合せてなる
免疫増強剤は、それぞれの単独使用では得ることができ
ない強い免疫増強作用を奏し、抗腫瘍剤等として有効で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は各薬剤のもつ特徴を生か
し、生体への副作用を回避させ、且つ、単剤では引き出
せない新しい薬効を発揮する薬物を投与する免疫増強に
よる病気の治療方法そのための剤を提供するものであ
り、更に詳しくは、インターロイキン−２（以下、「イ
ンターロイキン−２」を「ＩＬ−２」と略記することが
ある。）と5'-デオキシ-5-フルオロウリジン（5'-deoxy
-5-fluorouridine）(一般名 doxifluridine、以下５’
−ＤＦＵＲと略称することもある）とを含有してなる、
臨床適用することのできる癌、各種ウィルス感染症等の
治療薬及び治療方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】近年、免疫増強剤および各種ウィルス感
染症治療薬として、ＩＬ−２のようなリンホカインを免
疫応答性を強める薬剤として用いる試みが為されている
〔ジャーナル・オブ・イムノロジー(J. Immunol.), 12
5, 1904 (1980)〕。また、ＩＬ−２として、近年、遺伝
子工学的に得られたＩＬ−２が知られている（特開昭６
０−１１５５２８、同６１−７８７９９号）。一方、5'
-デオキシ-5-フルオロウリジンは１９７９年に合成され
たが、臨床試験での有効性が見出された〔癌と化学療
法，12(1)，2044, 1985〕ことから、近年、抗悪性腫瘍
剤として上市された。今日、癌の治療は、手術療法や放
射線療法やホルモン療法による治療が試みられ、早期の
癌については有効な治療法となっているが、転移した癌
ならびに発見の遅れた癌については薬物治療を期待せざ
るを得ない。しかしながら、現在使用可能の制癌剤は、
有用な薬効を示すものの、なお生体に及ぼす副作用も強
く、患者にとって満足すべき治療法として完成されては
いない。近年、インターロイキン２などのいわゆるリン
ホカインを抗腫瘍剤として用い、ヒトの悪性腫瘍を治療
する試みが行われ〔癌と化学療法，13.， 977（198
6)〕、その治療効果も報告されている〔ニューイングラ
ンド・ジャーナル・オブ・メデシン(New England J. Me
d.),316, 889 (1987)〕。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明者らは悪性新生物
に対する免疫刺激作用による治療効果を高めるため、従
来から免疫療法剤ならびに癌の化学療法剤と「ＩＬ−
２」との併用投与による治療法について種々検討してき
た。その結果、種々の組み合せのうち、とりわけ５'-Ｄ
ＦＵＲと「ＩＬ−２」を組み合せて担癌動物に投与する
と、それぞれのもつ作用が相乗して発揮され、強い治療
効果が得られることを見出し、本発明を完成した。すな
わち、本発明は、有効量のインターロイキン−２と５'-
ＤＦＵＲあるいはその塩とを組み合せてなる免疫増強
剤、上記免疫増強剤を動物に投与することからなる病気
の治療方法、およびインターロイキン−２製剤と５'-Ｄ
ＦＵＲ製剤を含有するキットを提供するものである。上
記インターロイキン−２としては、ＩＬ−２活性、すな
わちＴ細胞をその機能を維持したまま継代維持しうる作
用を有する物質であればいずれでもよい。例えば動物体
内や動物細胞で産生される天然のＩＬ−２や遺伝子組み
換え技術で生産されるＩＬ−２やこれらの関連物質が挙
げられる。上記ＩＬ−２やこれらの関連物質は蛋白質で
ある場合、糖鎖を有していてもよくまた有さなくてもよ
い。具体的には、例えば図１（配列番号：１）で示され
るアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ｉ）(ヒトＩＬ
−２)や、その生物学的もしくは免疫学的活性に必要な
一部分のアミノ酸配列からなるフラグメントでもよい。
上記フラグメントとしては、例えばポリペプチド（Ｉ）
のアミノ末端から１個のアミノ酸（ＥＰＣ公開９１５３
９号公報）または４個のアミノ酸を欠くフラグメント
（特開昭６０−１２６０８８号公報）やカルボキシル末
端部の数個のアミノ酸を欠くフラグメント（特開昭６０
−１２６０８８号公報）などが挙げられる。さらに、図
１に示すアミノ酸配列を有するポリペプチド（Ｉ）の構
成アミノ酸の一部が欠損しているか他のアミノ酸に置換
されたもの、例えば、１２５位のシステイン残基がセリ
ン残基に置換されたもの（特開昭５９−９３０９３号公
報）でもよい。

【０００４】また、前記ＩＬ−２はポリエチレングリコ
ール誘導体等で化学修飾されたものでもよい（例えば特
開昭６０−２２６８２１号公報)。とりわけ、本発明に
おいては遺伝子組み換え技術で製造され、図１で示され
るアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−２を用いるのが好ま
しく、この場合、そのアミノ末端にさらにメチオニン残
基（Ｍet）を有するものと有さないものとの混合物（特
開昭６０−１１５５２８号公報、特開昭６１−７８７９
９号公報）であってもよく、また、アミノ末端にＭetを
有さずアラニン（Ａla）で始まるもの（特開昭６１−７
８７９９号公報）でもよい。また、糖鎖を有しているも
のであってもよい。 ５'-ＤＦＵＲは公知の化合物であ
り、例えばジャーナル・オブ・メデシナル ケミストリ
ー（Ｊ.Med. Chem.), 第22巻，11号，1330-1335頁，197
9年に記載されており、その方法と同様の５−フルオロ
ウリジンを出発原料とする方法で製造される。５'-ＤＦ
ＵＲは動物に対する毒性も低く、特に、免疫臓器に及ぼ
す影響が少ないことが知られている（癌と化学療法，15
巻，第５号，1747-1754頁、1988年）。インターロイキ
ン−２はリンパ球系細胞の反応力を増強させることで、
その生物活性を発揮することから、制癌剤の中でも免疫
抑制作用の少ない薬物との組み合せが望まれ、５'-ＤＦ
ＵＲはその目的に合った薬物であった。

【０００５】本発明に用いるＩＬ−２は低毒性である。
例えば、ＩＬ−２について、図１に示されるアミノ酸配
列を有するヒトＩＬ−２のアミノ末端にさらにＭetを有
するものと有さないものとの混合物を、特開昭６１−７
８７９９号公報に記載の方法と同様の等電点分画法で分
離した図１に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−
２をマウスやラットの静脈内に１０ｍｇ／ｋｇ（１ｍｇ
＝３.５×１０⁴ユニット）投与しても毒性によって死亡
するものはみられない。本発明に用いる５'-ＤＦＵＲは
他の既知の化学療法剤に比較して毒性が低く、例えば、
マウスに投与した場合、２０００ｍｇ／ｋｇの経口投与
または５００ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与でも死亡するものは
みられない。また、生体に投与してもナチュラル・キラ
ー細胞の活性を抑制することなく、この活性を抑制させ
ない化合物はＩＬ−２との併用投与に非常に適してい
る。

【０００６】かくして、本発明の免疫増強剤は、通常、
これらの有効成分を薬理学的に許容されうる担体もしく
は賦形剤と混合してなる医薬組成物として経口または非
経口的に用いられる。例えば、各有効成分をあらかじめ
水溶液としたもの、各有効成分を凍結乾燥することによ
って固型状の混合物としたもの、それぞれの水溶液とし
たものを凍結乾燥することによってそれぞれの固型状の
ものとしたもの、いずれかが水溶液で別の有効成分が凍
結乾燥することによって固型状のもの、各有効成分を別
個に製剤としたキットなどの形態が挙げられる。本発明
の免疫増強剤は、これらの有効成分を、公知の製剤学的
製造法に準じ、所望により製剤学的に許容され得る希釈
剤、賦形剤などを用い、混合して一剤として投与でき
る。また、それぞれの有効成分を別途、所望により製剤
学的に許容され得る希釈剤、賦形剤などを用い、製剤化
し、用時希釈剤等を用いて一剤として投与することがで
きる。さらに、前記したようにそれぞれ別途製剤化した
ものをキットとしておき、これらを別個に、同時に、ま
たは時間差をおいて、同一対象に対して同一経路または
異なった経路で投与する剤形とすることもできる。

【０００７】本発明の免疫増強剤が溶液である場合は、
水性溶剤（例えば、蒸留水)、水溶性溶剤(例えば、生理
的食塩水、リンゲル液)、油性溶剤(例えば、ゴマ油、オ
リーブ油）等の溶剤を用いて、常套手段により製造され
る。この際、所望により溶解補助剤（例えば、サリチル
酸ナトリウム、酢酸ナトリウム)、緩衝剤(例えば、クエ
ン酸ナトリウム、グリセリン)、等張化剤(例えば、ブド
ウ糖、転化糖)、安定剤(例えば、ヒト血清アルブミン、
ポリエチレングリコール)、保存剤(例えば、ベンジルア
ルコール、フェノール)、無痛化剤(例えば、塩化ベンザ
ルコニウム、塩酸プロカイン）等の添加剤を用いること
もできる。溶液におけるＩＬ−２の濃度は、好ましくは
約３〜５００ｍｇ／ｍｌである。溶液における５'-ＤＦ
ＵＲの濃度は、好ましくは約１０〜５００ｍｇ／ｍｌで
ある。経口投与のための組成物としてはさらに、錠剤、
丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、
懸濁剤などが挙げられる。かかる組成物は自体公知の方
法によって製造され、担体もしくは賦形剤として、乳
糖、でんぷん、ショ糖、ステアリン酸マグネシウムなど
が用いられる。非経口投与のためには、例えば、注射
剤、坐剤などとすることができ、注射剤としてはたとえ
ば静脈注射剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉内注射
剤、点滴注射剤などとして用いられる。注射液は通常適
当なアンプルに充填されて提供される。直腸投与に用い
られる坐剤は自体公知の方法で調製される。本発明の免
疫増強剤の製剤化にあたっては、ＩＬ−２の活性の低下
を防ぐために特開昭６２−２２８０２６号公報で示され
た方法の如く、たとえば各製剤用材料を混合したものを
注射用蒸留水もしくは生理食塩水に溶解した場合、ヒト
血清アルブミン（ＨＳＡ）を約0.5〜１％添加すること
が望ましい。

【０００８】本発明の免疫増強剤は哺乳動物（例、マウ
ス、ネコ、イヌ、牛、馬、羊、山羊、家兎、ヒト）の免
疫増強作用活性を有し、マクロファージ活性化により各
種ウィルス感染症や腫瘍の治療または予防に有用であ
り、例えば腫瘍を保持する哺乳動物の延命に著効を奏す
る。かかる対象疾患としては各種白血病、悪性リンパ
腫、骨肉腫、悪性黒色腫、悪性絨毛上皮、筋肉腫、卵巣
癌、子宮癌、前立腺癌、膵癌、胃ならびに腸などの消化
器癌、肺癌、食道癌、頚頭部腫瘍、脳腫瘍、肝癌などの
ウィルス性腫瘍などが挙げられる。本発明の免疫増強剤
を投与するには、該組成物が水溶液のものである場合に
は、そのまま注射用溶解液として用いる。該組成物が凍
結乾燥により固型状のものである場合には、蒸留水もし
くは生理的食塩水などを用いて溶解し注射用溶解液とし
て用いる。なお、所望により前記したと同様の単糖類、
糖アルコール類、アミノ酸等を含有し、前記と同様にｐ
Ｈ調整された溶解液で溶解後使用することも出来る。本
発明の免疫増強剤の投与に際して、ＩＬ−２と５'-ＤＦ
ＵＲとの使用量は、その使用方法、対象とする腫瘍など
により異なるが、ＩＬ−２のタンパク質量１０μｇ〔Ｉ
Ｌ−２活性として３５０ユニット(Ｕ)、なおＩＬ−２活
性の測定方法に関しては特開昭６０−１１５５２８号公
報に示された如く、ＩＬ−２濃度に依存して増殖するマ
ウス細胞株を用いて行なった。〕に対し、５'-ＤＦＵＲ
約０．１〜１００ｍｇの割合で用いることが望ましく、
とりわけ約１〜５０ｍｇを用いるのがより好ましい。本
発明の免疫増強剤は、ヒトを含む哺乳動物に経口的また
は非経口的に投与することが出来る。また、本発明の免
疫増強剤の投与量は、使用するＩＬ−２の種類によって
異なるが、たとえば、マウスではＩＬ−２のタンパク量
を基準として、注射剤として投与する際には、マウスに
は約0.1〜500μｇ、マウス以外の哺乳動物には約0.001
〜４μｇが、坐剤として投与する際には約0.01〜20μ／
ｋｇが、点滴剤として投与する際には約0.001〜２μｇ
／ｋｇが、経口吸収剤として投与する際には、約0.2〜
４μｇ／ｋｇが、それぞれ好ましい。一方５'-ＤＦＵＲ
の投与量（ｍｇ）を基準として、注射剤として投与する
際には、マウスには、例えば、１日当り約１〜500ｍｇ
／ｋｇが好ましく、マウス以外の哺乳動物には約１〜10
0ｍｇ／ｋｇが好ましい。本発明の免疫増強剤におい
て、ＩＬ−２と５'-ＤＦＵＲとが別途製剤化したものを
同時に同一対象に投与することができ、また、時間差を
おいて同一対象に投与することができる。この場合の時
間差としては、たとえば、約１２時間から２４時間間隔
でもよいが、好ましくは約３時間から９時間間隔、さら
に望ましくは約２時間以内が良い。

【０００９】本発明の免疫増強剤は他の化学療法剤およ
び／または他の免疫療法剤を更に含有することができ、
他の化学療法剤としては、マイトマイシン、アドリアマ
イシン、シスプラチン、ビンデシン、ビンクリスチン、
サイクロフォスファミド、イフォマファミド、ブレオマ
イシン、ペプレオマイシンもしくはエトポシドのような
制癌剤が挙げられる。また免疫療法剤としては、微生物
もしくは細菌細胞壁骨核成分；免疫活性多糖天然型もし
くは遺伝子工学手法で得られるサイトカイン；またはコ
ロニー刺戟因子のようなものが挙げられ、上記免疫活性
多糖としてはレンチナンもしくはシゾフィラン等が、細
菌細胞壁骨核成分としてはムラミルジペプチド誘導体等
が、微生物としては乳酸菌等が、また天然型もしくは遺
伝子工学手法で得られるサイトカインとしてはインター
フェロン等が挙げられる。他の化学療法剤および／また
は他の免疫療法剤を更に含有させる場合の量としては、
治療に常用されている量が用いられる。

【００１０】

【作用】ＩＬ−２と免疫抑制作用の少ない５’−ＤＦＵ
Ｒとの組合せで、相乗効果を有すると共に副作用の少な
い免疫増強剤が得られる。ＩＬ−２と５’−ＤＦＵＲと
を含有する本発明の剤は抗腫瘍活性やマクロファージ活
性化活性のような顕著な免疫増強作用活性を示し、これ
はＩＬ−２、５’−ＤＦＵＲ単独使用では得ることので
きない効果である。本発明の免疫増強剤は少なくとも一
種の腫瘍をもつ哺乳動物の治療に用いると有効である。

【００１１】

【実施例】以下に実験例および実施例を示し、本発明を
具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるもの
ではない。なお、実験例または実施例で用いたＩＬ−２
は、図１に示すアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−２すな
わちアミノ末端がアラニンで始まるＩＬ−２である。該
ＩＬ−２は、形質転換体エシェリヒア・コリ（Escheric
hia coli) Ｎ４８３０／ｐＴＢ２８５を用い、特開昭６
１−７８７９９号公報に記載の方法と同様の方法で培養
し、特開昭６０−１１５５２８号公報に記載された方法
と同様の方法で高度に精製され、特開昭６１−７８７９
９号公報に記載の方法と同様の等電点分画により分離さ
れ、製造されたものであり、その比活性は約３.５×１
０⁴単位／ｍｇである。前記形質転換体エシェリヒア・
コリＮ４８３０／ｐＴＢ２８５は、昭和６０年４月２５
日から財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に、受託番号ＩＦ
Ｏ１４４３７として寄託され、また昭和６０年４月３０
日から通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（Ｆ
ＲＩ）に、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−８１９９として寄託
され、該寄託はブダペスト条約に基づく寄託に切換えら
れて、受託番号ＦＥＲＭＢＰ−８５２として同研究所
（ＦＲＩ）に保管されている。

【００１２】

【実験例１】 皮下移植腫瘍に対する５'-ＤＦＵＲとＩ
Ｌ−２の抗腫瘍作用についての比較実験 体重約２５ｇの雄のＢＡＬＢ／ｃマウスの後肢ふくらは
ぎ部皮下にマウスのcolon carcinsna26（結腸癌No.２
６）の組織粥（ホモゲナイザーで腫瘍をすりつぶし懸濁
状態とした腫瘍細胞）を注射筒を用いて移植し、腫瘍移
植後１２日目に腫瘍が一定の大きさに達したものを選び
群分けを行い薬物投与を開始した。ＩＬ−２投与は腫瘍
移植後肢とは反対側の側腹部の皮下に１日１回連続１４
日間行った。ＩＬ−２は正常マウス血清を５％添加した
生理食塩水（溶解液）に溶解し、投与液量として０．１
ｍｌ／２０ｇマウス体重となるよう調製した。５'-ＤＦ
ＵＲはＩＬ−２投与の第１日目から１４日間１日１回ず
つ経口的に投与した。５'-ＤＦＵＲは生理食塩水に懸濁
させ、投与液量として０．２ｍｌ／２０ｇマウス体重と
なるよう調製した。抗腫瘍効果の評価は腫瘍移植後２８
日目の腫瘍重量を測定し、各実験群の平均腫瘍重量を求
め、薬物投与群（Ｔ、一群５匹）と薬物無処理対照群
（Ｃ、一群１０匹）との腫瘍重量比（Ｔ／Ｃ％）を求め
て行った。なお、薬物の１日当りの投与量はマウス１匹
当りの薬物重量（ＩＬ−２；μｇ、５'-ＤＦＵＲ；μ
ｇ）で表わした。表１に実験成績を示した。

【００１３】

【表１】

【００１４】

【実験例２】 皮下移植腫瘍に対する５'-ＤＦＵＲとＩ
Ｌ−２の抗腫瘍作用についての比較実験 体重約２０ｇの雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの側腹部皮下に
結腸癌No.２６の組織粥を実験例１の場合と同様に準備
して、注射筒を用いて移植し、腫瘍移植後７日目に腫瘍
が一定の大きさに達したものを選び群分けを行い薬物投
与を開始した。ＩＬ−２投与は腫瘍移植部位とは反対側
の側腹部の皮下に１日１回連続１５日間行った。５'-Ｄ
ＦＵＲはＩＬ−２投与の第１日目から１４日間１日１回
ずつ経口的に投与した。ＩＬ−２は正常マウス血清を５
％添加した生理食塩水（溶解液）に溶解し、投与液量と
して０．１ｍｌ／２０ｇマウス体重となるよう調製し
た。５'-ＤＦＵＲは、生理食塩水に懸濁し、投与液量と
して０．２ｍｌ／２０ｇマウス体重となるよう調製し
た。抗腫瘍効果の評価は腫瘍移植後２８日目の腫瘍重量
を測定し、各実験群の平均腫瘍重量を求め、薬物投与群
（Ｔ、一群５匹）と薬物無処理対照群（Ｃ、一群１０
匹）との腫瘍重量比（Ｔ／Ｃ％）を求めて行った。な
お、ＩＬ−２の１日当りの投与量はマウス１匹当りの薬
物重量（μｇ）で表わし、５'-ＤＦＵＲもマウス１匹１
日当りの量を重量（μｇ）で表わした。ＩＬ−２単独投
与ならびに本発明のＩＬ−２と５'-ＤＦＵＲとを投与し
た結果は表２のとおりである。

【００１５】

【表２】

【００１６】

【実験例３】 皮下移植腫瘍に対する５'-ＤＦＵＲとＩ
Ｌ−２を他の制癌剤との組み合せによる抗腫瘍作用の検
討 体重約２０ｇの雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの腹部皮下に結
腸癌No.２６の組織粥を実験２の場合と同様に移植し
た。５'-ＤＦＵＲとＩＬ−２は腫瘍移植後１４日目から
１日１回連続１０回投与した。５'-ＤＦＵＲは経口投与
し、ＩＬ−２は実験２の場合と同様、腫瘍移植部位とは
反対側の腹部皮下に投与した。また、抗癌剤であるマイ
トマイシン（以下、ＭＭＣと称する。)、アドリアマイ
シン（以下、ＡＤＲ）ならびにサイクロフォスファミド
（以下、ＣＰＡ）は腫瘍移植後７日と１０日目に静脈内
に投与した。薬物の投与量はいずれもマウス当りの重量
(μｇ)で表した。本発明の５'-ＤＦＵＲとＩＬ−２を腫
瘍が増殖してしまった後期にわずか１０日投与するだけ
でも、他の制癌剤投与と組み合せるとき優れた効果が発
揮出来た成績（腫瘍移植後２８日目の腫瘍重量）を表３
に示す。

【００１７】

【表３】

【００１８】

【実験例４】 皮下移植腫瘍に対する５'-ＤＦＵＲ，Ｉ
Ｌ−２ならびに５'-ＤＦＵＲとＩＬ−２投与時の延命作
用についての比較実験 体重約２５ｇの雄のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿部皮下に
結腸癌No.２６の組織粥を実験例１の場合と同様に準備
して、注射筒を用いて移植し、腫瘍移植後２０日目に腫
瘍が一定の大きさに達したものを選び群分けを行い薬物
投与を開始した。ＩＬ−２投与は腫瘍移植部位とは反対
側の側腹部の皮下に１日１回連続１５日間行った。５'-
ＤＦＵＲはＩＬ−２投与の第１日目から１５日間１日１
回ずつ経口的に投与した。ＩＬ−２は正常マウス血清を
５％添加した生理食塩水（溶解液）に溶解し、投与液量
として０．１ｍｌ／２０ｇマウス体重となるよう調製し
た。５'-ＤＦＵＲは、生理食塩水に懸濁し、投与液量と
して０．２ｍｌ／２０ｇマウス体重となるよう調製し
た。抗腫瘍効果の評価は担癌マウスの生存日数を観察
し、各実験群の平均（中央値）生存日数を求め、薬物投
与群（Ｔ、一群５匹）と薬物無処理対照群（Ｃ、一群５
匹）との生存日数比（Ｔ／Ｃ％）を求めて行った。な
お、ＩＬ−２の１日当りの投与量はマウス１匹当りの薬
物重量（μｇ）で表わし、５'-ＤＦＵＲもマウス１匹１
日当りの量を重量（μｇ）で表わした。ＩＬ−２あるい
は５'-ＤＦＵＲ単独投与ならびに本発明のＩＬ−２と
５'-ＤＦＵＲとを投与した結果は表４のとおりである。

【００１９】

【表４】

【００２０】

【実験例５】 皮下移植腫瘍に対する５'-ＤＦＵＲとＩ
Ｌ−２の延命作用についての比較実験 体重約２５ｇの雄のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿部皮下に
結腸癌No.２６の組織粥を実験例１の場合と同様に準備
して、注射筒を用いて移植し、腫瘍移植後１４日目に腫
瘍が一定の大きさに達したものを選び群分けを行い薬物
投与を開始した。ＩＬ−２投与は腫瘍移植部位とは反対
側の側腹部の皮下に各週１日１回連続４日間の投与を５
週間繰り返し行った。５'-ＤＦＵＲはＩＬ−２投与の第
１日目から各週連続４日間１日１回の経口投与を５週間
繰り返した。ＩＬ−２は正常マウス血清を５％添加した
生理食塩水（溶解液）に溶解し、投与液量として０．１
ｍｌ／２０ｇマウス体重となるよう調製した。５'-ＤＦ
ＵＲは、生理食塩水に懸濁し、投与液量として０．２ｍ
ｌ／２０ｇマウス体重となるよう調製した。抗腫瘍効果
の評価は担癌マウスの生存日数を観察し、各実験群の平
均生存日数を求め、薬物投与群（Ｔ、一群５〜１０匹）
と薬物無処理対照群（Ｃ、一群１０匹）との生存日数比
（Ｔ／Ｃ％）を求めて行った。なお、ＩＬ−２の１日当
りの投与量はマウス１匹当りの薬物重量（μｇ）で表わ
し、５'-ＤＦＵＲもマウス１匹１日当りの量を重量（μ
ｇ）で表わした。ＩＬ−２あるいは５'-ＤＦＵＲ単独投
与ならびに本発明のＩＬ−２と５'-ＤＦＵＲとを投与し
た結果は表５のとおりである。

【００２１】

【表５】

【００２２】

【実験例６】 皮下移植腫瘍に対する５'-ＤＦＵＲとＩ
Ｌ−２を他の制癌剤との組み合せることによる抗腫瘍作
用の検討 体重約２５ｇの雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの大腿部皮下に
結腸癌No.２６の組織粥を実験例１の場合と同様に準備
して移植した。５'-ＤＦＵＲとＩＬ−２は腫瘍移植後２
０日目から１日１回連続４日間の投与を４週間繰り返し
た。５'-ＤＦＵＲは経口投与し、ＩＬ−２は実験例１の
場合と同様、腫瘍移植部位とは反対側の腹部皮下に投与
した。また、抗癌剤であるマイトマイシン（以下、ＭＭ
Ｃと称する。)は腫瘍移植後１７、２４、３１ならびに
３８日目に静脈内に投与した。薬物の投与量はいずれも
マウス当りの重量(μｇ)で表した。本発明の５'-ＤＦＵ
ＲとＩＬ−２を腫瘍が増殖してしまった後期に投与して
も、他の制癌剤投与と組み合せるとき優れた延命効果が
発揮出来た成績（実験を２回行った）を表６に示す。

【００２３】

【表６】

【００２４】

【実施例１】 この割合で、各成分を混合したのち注射用蒸留水もしく
は生理食塩水に溶解し、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）
を０．５％になるよう添加してメンブランフィルター
（孔径０．２２μｍ）を用いてろ過した。得られたろ液
を無菌的に１ｍｌずつバイアル瓶に分注して凍結乾燥
し、注射用抗腫瘍剤を調製した。本注射用製剤は、用時
注射用蒸留水５ｍｌに溶解する。

【００２５】

【実施例２】 この割合で、各成分を混合したのち注射用蒸留水もしく
は生理食塩水に溶解し、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）
を０．５％になるよう添加してメンブランフィルター
（孔径０．２２μｍ）を用いてろ過した。得られたろ液
を無菌的に１ｍｌずつバイアル瓶に分注して凍結乾燥
し、注射用抗腫瘍剤を調製した。本注射用製剤は、用時
注射用蒸留水５ｍｌに溶解する。

【００２６】

【実施例３】 この割合で、各成分を混合したのち注射用蒸留水もしく
は生理食塩水１，０００ｍｌに溶解し、ヒト血清アルブ
ミン（ＨＳＡ）を０．５％になるよう添加してメンブラ
ンフィルター（孔径０．２２μｍ）を用いてろ過した。
得られたろ液を無菌的に１０ｍｌずつバイアル瓶に分注
して凍結乾燥し、注射用坑腫瘍剤を調製した。本注射用
製剤は、用時注射用蒸留水１０ｍｌに溶解する。

【００２７】

【実施例４】 この割合で、各成分を混合したのち注射用蒸留水もしく
は生理食塩水１，０００ｍｌに溶解し、ヒト血清アルブ
ミン（ＨＳＡ）を０．５％になるよう添加してメンブラ
ンフィルター（孔径０．２２μｍ）を用いてろ過した。
得られたろ液を無菌的に１０ｍｌずつバイアル瓶に分注
して凍結乾燥し、注射用抗腫瘍剤を調製した。本注射用
製剤は、用時注射用蒸留水１０ｍｌに溶解する。

【００２８】

【実施例５】 注射用キット製剤： 〔Ａ〕ＩＬ−２ １０ｍｇ 乳糖 ８５ｍｇ ＨＰＣ−Ｌ(オキシプロピルセルロース) ５ｍｇ 計１００ｍｇ 上記の割合で、三者を混合したのち１，０００ｍｌの注
射用蒸留水もしくは生理食塩水に溶解し、ヒト血清アル
ブミン（ＨＳＡ）を０．５％になるよう添加してメンブ
ランフィルター（孔径０．２２μｍ）を用いてろ過す
る。得られたろ液を無菌的に５ｍｌずつバイアル瓶に分
注して凍結乾燥し、キットＡとする。 〔Ｂ〕５’−ＤＦＵＲ １２０，０００ｍｇ ラウリル硫酸ナトリウム ２０，０００ｍｇ 計１４０，０００ｍｇ 上記の割合で、二者を混合したのち１，０００ｍｌの注
射用蒸留水もしくは生理食塩水に溶解し、ヒト血清アル
ブミン（ＨＳＡ）を０．５％になるよう添加してメンブ
ランフィルター（孔径０．２２μｍ）を用いてろ過す
る。得られたろ液を無菌的に５ｍｌずつバイアル瓶に分
注して凍結乾燥し、キットＢとする。 〔Ｃ〕注射用蒸留水 １０ｍｇ 本キットは、用時にキットＡをキットＣを用いて溶解
し、続けてキットＢを溶解して注射用溶液を調製する。
あるいは、キットＢをキットＣを用いて溶解し、続けて
キットＡを溶解して注射用溶液を調製する。または、キ
ットＡとキットＢを、キットＣを用いて別々に溶解し
て、キットＡ溶液とキットＢ溶液の２つの注射用溶液を
調製し、同時にあるいは時間をおいて、別々に投与す
る。

【００２９】

【発明の効果】本発明のＩＬ−２と５'−ＤＦＵＲとを
組み合せてなる免疫増強剤は、それぞれの単独使用では
得ることができない強い免疫増強作用を奏する。

【００３０】

【００３１】

【配列表】配列番号：1 配列の長さ：133

【００３２】

【配列の型】アミノ酸

【００３３】

【配列の種類】タンパク質

【００３４】

【配列】 Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His 1 5 10 15 Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｌｅｕ
Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｌｙｓ 20 25 30 Ａｓｎ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｔｈｒ
Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ｌｙｓ 35 40 45 Ｌｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｎ
Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ 50 55 60 Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ａｌａ
Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｐｈｅ Ｈｉｓ Ｌｅｕ ６５ 70 75 80 Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｉｌｅ
Ａｓｎ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｌｅｕ 85 90 95 Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｍｅｔ Ｃｙｓ
Ｇｌｕ Ｔｙｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ａｌａ 100 105 110 Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｔｒｐ
Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｉｌｅ 115 120 125 Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ 130。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明で使用するＩＬ−２のアミノ酸配列の一
例を示す図面である。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】インターロイキン−２と5'-デオキシ-5-フ
   ルオロウリジンあるいはその塩とを組み合わせてなる免
   疫増強剤。
2. 【請求項２】インターロイキン−２と5'-デオキシ-5-フ
   ルオロウリジンあるいはその塩とを混合してなる請求項
   １記載の免疫増強剤。
3. 【請求項３】インターロイキン−２製剤と5'-デオキシ-
   5-フルオロウリジンあるいはその塩の製剤とを含有する
   請求項１記載の免疫増強剤キット。
4. 【請求項４】他の化学療法剤および／または他の免疫療
   法剤を更に含有してなる請求項１記載の免疫増強剤。
5. 【請求項５】インターロイキン−２と5'-デオキシ-5-フ
   ルオロウリジンあるいはその塩とを組み合わせてなる免
   疫増強剤を動物に投与することからなる、免疫作用を高
   めることによる病気の治療方法。
6. 【請求項６】動物が担癌動物である、請求項５記載の治
   療方法。
7. 【請求項７】免疫増強剤が他の化学療法剤および／また
   は他の免疫療法剤を更に含有してなる請求項５記載の治
   療方法。