JPH05507718A

JPH05507718A - 生物活性ペプチドおよびｄｎａギラーゼを阻害する抗生物質よりなる組成物と治療法

Info

Publication number: JPH05507718A
Application number: JP91511793A
Authority: JP
Inventors: バーコウィッツ，バリー
Original assignee: マゲイニン　サイエンセズ　インコーポレーテッド
Priority date: 1990-06-27
Filing date: 1991-06-20
Publication date: 1993-11-04
Also published as: WO1992000090A1; EP0559647A4; CA2045073A1; EP0559647A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】この発明は生物活性ペプチドおよび蛋白質、とりわけ生物活性ペプチドおよび蛋白質、およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質を含む組成物と用途に関する。

この発明の一局面に従って、少（とも一つの生物活性両親媒性ペプチド及びもしくは生物活性蛋白質、およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質を含む組成物が提供される。

この発明のも一つの局面に従って、イオンチャンネル形成ペプチドである少くとも一つの生物活性両親媒性ペプチドおよびもしくは生物活性蛋白質、およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質が宿主に投与される一つの方法が提供される。

イオンチャンネル形成ペプチドあるいは蛋白質すなわちイオノフオアは、天然もしくは合成脂質膜を通過するイオンの透過性を増すペプチドあるいは蛋白質である。Ｂ、クリステンセン他によるＰＮＡＳ　（全米科学アカデミ−議事録）第８巻、５０７２−７６頁（１９８８年７月）では、ペプチドあるいは蛋白質がイオンチャンネル形成性を有するかどうか、従ってイオノフオアであるかどうかを示す方法論が記載されている。ここで使用されるように、イオンチャンネル形成ペプチドあるいはイオンチャンネル形成蛋白質は、クリステンセン他の方法により定義されるイオンチャンネル形成性を有するペプチドあるいは蛋白質である。

両親媒性ペプチドは、疎水性および親水性ペプチド領域の双方を含むペプチドである。

生物活性ペプチドあるいは蛋白質、およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質が宿主に投与されるこの発明の一局面に従って、その生物活性ペプチドあるいは蛋白質およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は単一組成物あるいは別個の組成物として投与され、単一もしくは別個の組成物は、ペプチドもしくは蛋白質およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質に加えて活性およびもしくは不活性の追加物質を含むことがある。

この発明に使用されるイオンチャンネル形成ペプチドは、一般に中性ｐ）（の水に最小２０　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｑの濃度で可溶である。

加えて、この種のペプチドは非溶血性である。つまりペプチドは有効濃度で血球を破裂させない。加えてこの種のペプチド構造は、ペプチド分子の可撓性を提供する。ペプチドが水中にある際には、それは両親媒性の構造を執らない、ペプチドが油性表面あるいは油性膜に接すると、ペプチド連鎖はそれ自身の上に畳みこまれて棒状構造となる。

一般にこの種のペプチドは少くとも１６個のアミノ酸を有し、望ましくは少くとも２０個のアミノ酸をもつ。一般にこの種のペプチドは４０個以上のアミノ酸を有することはない。

ＤＮＡＮクギゼは、普通のバクテリアＤＮＡを複製するに際し１個々のらせん索の間で結合を形成するのに含まれる酵素の一種である。か（してＤＮＡＮクギゼはバクテリアＤＮＡの通常の復製に必要であり、従ってＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質はバクテリアＤＮＡの通常の復製を阻害するものとなる。

ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質の例としては、ナリジクス酸、オキツリニック酸、ジノキサジン、およびキノロン系抗生物質、すなわちシプロフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、エノキサシン、ペフロキサシン、ロメフロキサシン、フレロキサシン、トスルフロキサシン、テマフロキサシンおよびルフロキサシンなどが含まれる。下記のものがＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質の代表例の構造式である。

ナリジクス酸は下記の構造を有する。

オキツリニック酸は下記の構造を有する。

ＤＮＡＮクギゼを阻害し、かつキノロン系抗生物質である抗生物質については、下記の構造式が代表的である。

シプロフロキサシンは下記の構造を有する。

ノルフロキサシンは下記の構造を有する。

ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質については、「臨床および伝染１］Ｗ、Ｂ、　ソーンダース社（１９８７）に詳述されている。望ましい実施例としては、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質はキノロン抗生物質であり、とりわけキノロン抗生物質シプロフロキサシンが好適である。

イオンチャンネル形成生物活性両親媒性ペプチドあるいはイオンチャンネル形成蛋白質、およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質の双方を使用するに際し、羊 −組成物あるいは別個の組成物として投与されあるいは用意されるとに拘らず、標的細胞の成長を阻害しおよびもしくは妨げおよびもしくはｉｎするのに有効な量で使用される。事実キノロン抗生物質は、ペプチドあるいは蛋白質の作用を相乗強化し、ペプチドあるいは蛋白質はＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質の作用を相乗強化する。ここで使用される「相乗強化」という用語は、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質の量が標的細胞の成長を阻害するペプチドあるいは蛋白質の最小有効濃度を低減するのに有効であり、また、ペプチドあるいは蛋白質の量が標的細胞の成長を阻害するためにＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質の最小有効濃度を低減するのに有効であることを意味する。

一般にペプチドあるいは蛋白質は０．０５％から１０％までの濃度で局所投与される。全身投与される場合には、ペプチドあるいは蛋白質は、宿主の重量キログラムあたり１ｍｇから５００ｍｇまでのペプチドあるいは蛋白質処方の提供で使用される。

ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は、一般に０．０５％から１０％までの濃度で局所投与される。全身投与の場合にはＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は一般に１日宿主重量キログラム当り１．２５ｍｇから４５ｍｇの量で使用される。

この発明に従ってペプチドあるいは蛋白質およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質の併用は、一つの抗生物質として有効であり、細菌などの微生物の成長あるいは増殖を阻害し、妨げ、あるいは破壊するために使用することができる。

その組成物はダラム陽性菌およびグラム陰性菌を含む数多くの微生物に対し、広範な潜在抗生物質活性を有する。この種の組成物は、その組成物に対し敏感な生体により生じる微生物感染を治療し制御するのに使用される。この治療は、微生物感染を受容するあるいは密接な関係にある宿主の生体あるいは組織に対し、その種のペプチドあるいは蛋白質およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質の有効殺菌量を投与することよりなこの組成物は細菌感染を受け易い物質の防腐剤あるいは消毒薬としても利用することができる。

この発明の組成物は外部火傷の治療に使用され、皮膚および火傷感染の治療およびもしくは予防に使われる。特にその組成物は、必ずしもそれに限定されないが、Ｐ、ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　（緑膿菌）およびＳ、ａｕｒｅｕｓ　（黄色葡萄球菌）などの生体によりひき起こされる皮膚および火傷感染の治療に役立つ。

この種の組成物は眼の感染の予防および治療にも役立つ。このような感染は必ずしもそれに限定されないが、Ｐ、ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、　Ｓ、ａｕｒｅｕｓおよびＮ、ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ　（淋菌）などの細菌により生じる。

好適な実施例に従って、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質と併用されるペプチドは、塩基性（正電荷）ポリペプチドであり、ここでポリペプチドは少くとも１６個のアミノ酸を有し、少くとも８個の疎水性アミノ酸と少くとも８個の親水性アミノ酸を有する。さらにより詳細には疎水性アミノ酸は２個の隣接するアミノ酸グループ内にあり、２ｆＷの疎水性アミノ酸の各グループは疎水性アミノ酸以外の少（とも１個のアミノ酸（好ましくは少くとも２個のアミノ酸）以上で一般には４個を越えないアミノ酸により相互に隔離されており、また、各対疎水性アミノ酸の間にあるアミノ酸は、親水性アミノ酸でもあり、そうでないものもある。

また親木性アミノ酸も一般に２個の隣接したアミノ酸のグループよりなり、そこでは少くとも２個のアミノ酸の内の１１Ｗは塩基性親水性アミノ酸であり、２個の親水性アミノ酸のそのグループは親水性アミノ酸以外の少くとも１個のアミノ酸（好ましくは少（とも２個のアミノ酸）以上で、一般には４個を越えないアミノ酸によって相互に隔離されており、各対の親水性アミノ酸の間にあるアミノ酸は疎水性でもあり、そうでないものもある。

特に好適な一実施例に従って、このポリペプチドは一連の少くとも４個のグループのアミノ酸連鎖よりなり、各グループは４個のアミノ酸を有している。各グループの４個のアミノ酸の内の２個は疎水性アミノ酸であり、また各グループの４個のアミノ酸の内の２個は親水性であり、さらに各グループの親水性アミノ酸の少くとも１個は塩基性親木性アミノ酸であり、他のものは塩基性あるいは中性親水性アミノ酸である。

疎水性アミノ酸は、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ。

ｒ　ｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、ＴｒｐおよびＴｙｒからなるクラスから選択することができる。中性親水性アミノ酸は、Ａｓｎ、Ｇｉｎ、Ｓｅｒ！５よびＴｈｒからなるクラスから選択することができる。塩基性親水性アミノ酸はＬｙｓ、Ａｒｇ。

Ｈｉｓおよびオルニチン（０）からなるクラスより選択することができる。

４個のアミノ酸グループのそれぞれは、ＡＢＣＤ、ＢＣＤＡ、ＣＤＡＢあるいはＤＡＢＣの配列のいずれかであり、ここでＡとＢはそれぞれ疎水性アミノ酸で同種あるいは異種であってもよく、ＣあるいはＤのいずれかは塩基性あるいは中性親木性アミノ酸で同種あるいは異種のアミノ酸であってもよい。好適な実施例において、ポリペプチド連鎖はこの配列の５個乃至６個のグループよりなる。各グループにおいて、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのそれぞれは若干のグループあるいは全グループが同様であってもよ（、あるいは若干あるいは全グループが異種であってもよい。

ポリペプチド連鎖は少くとも２０個のアミノ酸を有し、また５０個以下のアミノ酸をもつことが望ましい。しかし、ポリペプチドは必ずしも全体として前記のグループよりなることに限定されない。ポリペプチドはポリペプチド連鎖を形成する前記のグループのいずれかの一端もしくは両端から伸長するアミノ酸をもつ場合もあり、またあるいは少くとも４個のグループの１個もしくは２個以上のグループの間にアミノ酸が位置するものであってもよく、しかもこの発明の範囲内にある。

アミノ酸のグループはアミノ酸の反復グループであってもよく５あるいは各種グループ内のアミノ酸が少くとも４個のグループのアミノ酸の各グループ内で、前記の２個の疎水性アミノ酸と２個の親水性アミノ酸が存在するという条件下で変化するものであってもよい。

かくして好適な実施例において、この生物活性ポリペプチドは、少くともアミノ酸の４個のグループを含む連鎖からなり、各グループには４個のアミノ酸が含まれる。各グループの４個のアミノ酸の内２個は疎水性アミノ酸であり、内少くとも１個のアミノ酸は塩基性親水性で残りの１個は塩基性もしくは中性親水性であり、ポリペプチド連鎖は少くとも２０個のアミノ酸よりなり、５０個を越えないものであることが望ましい。

一つの実施例において、ペプチド連鎖内にあるアミノ酸の少くとも４個のグループのそれぞれは、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ、Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ａ、Ｃ−Ｄ−Ａ−ＢあるいはＤ −Ａ−Ｂ−Ｃの配列であり、ここでＡおよびＢは疎水性アミノ酸、ＣあるいはＤのいずれかは塩基性親水性アミノ酸であり、ＣあるいはＤの他方は塩基性あるいは中性親水性アミノ酸である。従って生じたポリペプチド連鎖は次の各配列のいずれかになる。

（Ｘ、）、（Ａ−Ｂ−ｃ−Ｄ）。（Ｙｌ）。

（Ｘ！　）、（Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ａ）、（ｙｚ　）。

（Ｘ３）、（Ｃ−Ｄ−Ａ−Ｂ）　ｆｉ　（Ｙ、）。

（Ｘ、）、（Ｄ−Ａ−Ｂ−Ｃ）。（Ｙ４）。

ここでＸ、はり、Ｃ−Ｄ−、あるいはＢ−Ｃ−Ｄ−。

Ｙ、は−Ａ、あるいは−Ａ−Ｂ、あるいは−Ａ−Ｂ−Ｃ。

ｘ２はＡ−、Ｄ−Ａ−、あるいはＣ−Ｄ−Ａ−。

Ｙ２は−Ｂ、−Ｂ−Ｃ，あるいは−Ｂ−Ｃ−Ｄ。

Ｘ、はＢ−、Ａ−Ｂ−、Ｄ−Ａ−Ｂ− Ｙ３は−Ｃ，−Ｃ−Ｄ、−Ｃ−Ｄ−Ａ。

Ｘ４はＣ−、Ｂ−Ｃ，Ａ−Ｂ−Ｃ−。

Ｙ４は一〇、−Ｄ−Ａ、−Ｄ−Ａ−Ｂ。

であり、ａはＯあるいは１．ｂは０あるいは１．およびｎは少くとも４である。

前記の４個のアミノ酸グループが相互に間隔をあけていないペプチド連鎖とは著しく異なる連鎖に対し、親水性および正の電荷を付与し連鎖の折り畳み特性に不利な影響を与えないペプチド連鎖で、前記のグループ間の間隔およびアミノ酸の電荷がペプチド連鎖の特性を変化させないことを前提とするならば、ペプチド連鎖は４個のアミノ酸の前記グループの間にアミノ酸を含むことが可能であることが理解される。

この発明によるペプチドの代表的な例としては下記のものがある。

Ｉ　Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−ＬｙｓＩＩ　Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ− ３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−、’Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａ　ｌａ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｙｓｍ　Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−ＡｌａＩＶ　５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−ＡＬａ−ＰｈｅＶ　Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ− Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ− ５ｅｒこのペプチドは連鎖の両端のいずれかより伸長するアミノ酸を有することが可能である。例えばペプチド連鎖は“Ａｌａ”末端の前に５ｅｒ−Ｌｙｓ配列を、およびもしくは“Ｌｙｓ”末端の後にＡｌａ−Ｐｈｅ配列を有することができる。

他のアミノ酸配列が“Ａｌａ”末端およびもしくは−Ｌｙｓ”末端に添加されてもよい。

同様に前記配列のアミノ酸の少くとも４個のグループをもついずれのポリペプチド連鎖においても、ペプチド連鎖は例えば第１のＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄグループの前にＣ−Ｄ配列をもつことが可能である。また他のアミノ酸配列は、これらポリペプチド連鎖の一つの“Ａ”およびもしくは“Ｄ”末端に付加されてもよい、あるいはまた、前記説明の４個のアミノ酸の１＠もしくは２個以上のグループを相互に隔離するアミノ酸がポリペプチド連鎖の中に存在してもよい。

これらのペプチドは公知の技術で生産され、はぼ純粋な形態で生成することができる。例えばペプチドは自動合成機で合成される。Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ　（米国化学基会誌）　Ｖｏｌ、８５．ＰＰ、２１４９−５４（１９６３１、またこのペプチドを遺伝子工学技術により生成することもできる。

も一つの好適な実施例において、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質と併用されるペプチドは、マゲイニンペプチドである。

マゲイニンベブチドは、マゲイニンＩ、ＩＩ、あるいは■、またはその同族体もしくは誘導体のいずれかである。マゲイニンベブチドは望ましくは下記の基本ペプチド構造のＸ１１を含む。

−Ｒ，ビＲ１１−Ｒｌ２−Ｒ１２−Ｒ１１−Ｒ１４−Ｒ１２”ＲＩ＋−Ｒ，、− Ｒ，、−Ｒ，、−Ｒ，、−Ｒ，、−Ｒ，、、−ｆＲ，ｓ）、−Ｒ，４，−Ｒ１４ −ここでＲ１１は疎水性アミノ酸であり、Ｒ＋ｉは塩基性親水性アミノ酸であり、Ｒ１２は親水性、中性親水性あるいは塩基性親水性アミノ酸であり、Ｒ１４およびＲ１４，は疎水性あるいは塩基性親水性アミノ酸であり、ＲＩｓはグルタミン酸あるいはアスパラギン酸、もしくは疎水性あるいは塩基性親水性アミノ酸であり、ｎは０もしくは１である。好適な実施例において、Ｒ１３は疎水性もしくは中性親水性アミノ酸であり、Ｒ１４，は疎水性アミノ酸またＲ　Ｉｓはグルタミン酸もしくはアスパラギン酸である。

かくして、例えばマゲイニンペプチドは下記の構造を有することができる。

−Ｙ　、、−Ｘ　、□− ここでＸ　１２は前記の基本ペプチド構造であり、Ｙ１２は［Ｌｉ１）　Ｒｚ　 −Ｒ１４１１−Ｒ１２（ｉｖｌ　Ｒｔ４１１−Ｒ１１−Ｒｌ４１１−Ｒ１２ここでＲ，、、Ｒ，□、Ｒ１４およびＲ１４，は前記定義の通りである。

マゲイニンペプチドは下記の構造もとりつる。

−Ｘ　＋２−　Ｚ　１２− ここでＸ　１２は前記定義の通りであり、Ｚ　１２は下記の（ｉｌ　あるいは（１１）である。

［ｔｌ　ＲＩｓ　；ここでＲ１８は塩基性親水性アミノ酸あるいはアスパラギンあるいはグルタミンである。

［ｉｉＩ　Ｒｔｓ　Ｒ１？ここでＲｔ７は中性親水性アミノ酸、疎水性アミノ酸あるいは塩基性親水性アミノ酸である。望ましくはＲ１？は中性親水性アミノ酸である。

マゲイニンベブチドは、さらに下記の構造を有する。

（Ｙ、２＋、−Ｘ、□−（Ｚ、、）ｌ。

ここでＸ１□、Ｙ＋ｚ＋およびＺ　１２は前記定義の通りであり、ａは０あるいは１でｂもＯあるいは１である。

さらにまたマゲイニンペプチドは下記の基本構造Ｘ＋３を有する。

Ｒ１４−Ｒ１１−Ｒ１４ｍ−ＲｌｆＲｌｌ−Ｒ１１１４−Ｒ１１−Ｒｔ４．、− Ｒ，４−Ｒ，、−Ｒ，、−Ｒ，ビＲ１□−ここでＲＩｌｌ　Ｒ１２１Ｒ＋ｘ＋　Ｒ１４およびＲ１４，は前記記載のアミノ酸である。

マゲイニンベブチドはさらにまた下記の構造をとることができる。

Ｘ　＋ｉ　Ｚ＋ｉここでＸ＋ｚは前記記載の基本ペプチド構造であり、Ｚ＋ｚは（Ｒ，、ｌ、ｌ− （Ｒ１，１，−（Ｒｔ　＋１．ｉＲ，４，ｌ　１ｌ−ｆＲ，ｓｌ　、ｌ−（Ｒ，、、ｌ　ａ−（Ｒ１４１，−ｆＲ，、ｌ、１−（Ｒ１？ｌ、ここでＲＩｌｌ　Ｒ１４１ＲＩ４１１　＋　Ｒ＋ｓ＋　ＲｔｓおよびＲ１ｆｆは前記記載の通りであり、ｎはＯもしくは１であり、ｎのそれぞれは同一もしくは異なる数であってよい。

マゲイニンベブチドは一般に少くとも１４個のアミノ酸よりなるが最大４０個のアミノ酸のものまである。マゲイニンベブチドは２２ないし２３個のアミノ酸のものが好適である。従って前記記載の基本ペプチド構造はアミノ末端あるいはカルボキシル末端もしくはその両端にアミノ酸を追加することができこの種のマゲイニンベブチドの代表例としては（単一文字コードで表される）次の一次配列をもつペプチド、およびその適切な同族体および誘導体が言及される。

ｆａｔ　（ＮＨ，ｌ　ＧＩＧＫＦＬＨＳＡＧＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＫＳ（ＯＨＩ　あるいは（ＮＨｌｌ（マゲイニンＩ）ｆｂｌ　［ＮＨ，ｌ　ＧＩＧｉｔＦｕ＋ＳＡＫＫＦＧＫＡＦｖＧＥＩＭＮＳｆＯＨ１あるいは（ＮＨｚｌ（マゲイニン■）（ｃｌ　（ＮＨｇｌ　ＧＩＧＫＦＬＨＳＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＮ（ＯＨＩあるいは（Ｎｕ、１（マゲイニン［Ｉｒ）下記のものは、基本構造をもつペプチド誘導体あるいは同族体の例である。

（ｄｉ　（ｏａｌ　ＩＧＫＦＬＨ３ＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＮＳ（ＯＨＩあるいは（ＮＨａｌｔｅｌ　（ＮＨ，ｌ　ＧＫＦＬＨ５ＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＮＳｉＯＨ１あるいは（ＮＨ，］（ｆｌ　（ＮＨｌｌ　ＫＦＬＨ３ＡＫＫＦＧＫＡＦＶＧＥＩＭＮＳ（ＯＨ）あるいは（ＮＨｚｌマゲイニンペプチドは、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　（全米科学アカデミ−議事録）　Ｖｏｌ、８４．ＰＰ、５４９９−５３　（Ａｕｇｕｓｔ　１９８７１　に記述されテイル、「マケイニンヘブチド」の名称は、基本マゲイニン構造およびその誘導体あるいは同族体を指示すると共に、必ずしもそれに限定されないが、代表的な誘導体もしくは同族体を含むものとする。

さらに別の実施例に従って、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質と併用されるペプチドは、ＰＧＬａペプチドあるいはＸＰＦペプチドであり得る。

ＰＧＬａペプチドは、ＰＧＬａあるいはその同族体もしくは誘導体である。ＰＧＬａペプチドの好例としては下記の基本ペプチド構造Ｘ　１４が含まれる。

−Ｒ，，−Ｒ，ｔ−Ｒ，□−Ｒｌｌ−Ｒ１４−Ｒｔ４−Ｒ１１−Ｒｌｌ−Ｒ１４ −Ｒ１＋４１Ｆ−Ｒ１＋４１Ｆ−Ｒｌｌ　−ＲＩ　＋−Ｒｔ　１−Ｒｌｌ− ここでＲ，、、Ｒ，□、Ｒ３４およびＲｌ？は前記定義の通りである。

ＰＧＬａペプチドは、一般に１７個のアミノ酸を有し４０個のアミノ酸を越えることはない。従って、前記記載のＰＧＬａ基本ペプチド構造は、アミノ末端あ葛いはカルボキシル末端もしくはアミノ、カルボキシルの両端に追加のアミノ酸を有することができる。

かくして、ＰＧＬａペプチドは下記の構造で例示することがここでＸ　＋４は前記定義の通りであり、Ｙ１４はであり、Ｒ１およびＲ１４も前記定義の通りである。

例えば、ＰＧＬａペプチドはさらに下記の構造を有する。

−Ｘ　１４−　Ｚ　１４− ここでＸ　１４は前記定義の通りであり、ＺＩ４は（ｉｔ　Ｒｌｌもしくは（ｉｉ）Ｒｚ　−Ｒｚであり、Ｒ８は前記定義の通りである。

さらにＰＧＬａペプチドは下記の構造を有する。

（Ｙ、、１．−Ｘ、、−（Ｚ、４１゜ここでＸ１４１ＹＩ４およびＺ　１４は前に定義されており、ａはＯあるいは１であり、ｂもＯあるいは１である。

ＸＰＦペプチドは、ＸＰＦあるいはその同族体もしくは誘導体である。好適なＸＰＦペプチドは、下記の基本ペプチド構造Ｘ　１８を有している。

−Ｒ，、−Ｒ，７−Ｒ，□−Ｒｌｌ−Ｒ１４−Ｒｌｌｌ−Ｒ１７−Ｒ，、−Ｒ，、−Ｒ，、−Ｒ，、−Ｒ，、−Ｒ，□−Ｒ１ビＲ１，−Ｒ，，−Ｒ，２−［Ｒ，、ｌ、、−Ｒ，、−ここでＲ＋＋、　Ｒ１２＋　Ｒ１４，Ｒ１６およびＲｌ？は前記定義の通りであり、ＲＩｌｌはグルタミンあるいはアスパラギンもしくは塩基性親水性あるいは疎水性アミノ酸であり、ｎは０もしくは１である。

ＸＰＦペプチドは一般に少くとも１９個のアミノ酸を有し、４０個までのアミノ酸を持つことができる。従って、前記記載のＸＰＦ基本ペプチド構造は、アミノ末端、あるいはカルボキシル末端もしくはアミノ、カルボキシル両端に追加のアミノ酸を有することができる。

かくして、ＸＰＦは一例として下記の基本構造をもつ。

Ｙ　＋ｓ−Ｘ　Ｉｓ− ここでＸ１８は前記定義の通りであり、Ｙｅｓは（ｉｌ　Ｒ，、もしくはｆｉｉｌ　Ｒ＋４−　Ｒ＋＋であり、Ｒ１１およびＲ＋４は前記定義の通りである。

ＸＰＦペプチドは下記の構造をもつことができる。

Ｘ１ｓＺ１８− ここでＸ　＋＋ｔは前記定義の通りであり、２１６はｆｔｌ　Ｒ１１もしくは（ｉｘｌ　Ｒ＋＋　ＲＩｓもしくは（０１１Ｒｚ　−Ｒ＋ａミープロリンもしくは（ＩＶＩ　Ｒ＋＋　ｌＲ＋ｓ−ブロワ：／−Ｒ＋ｚである。

ＸＰＦペプチドはさらに下記の構造を有する。

（Ｙ　、８１．−　Ｘ　、、　（Ｚ　、、１１゜ここでＸ　＋　８＋　Ｙ　＋　ａおよび２１８は前記定義の通りであり、ａはＯか１で、ｂもＯか１である。

好適なペプチドとしては、ＸＰＦペプチドあるいはＰＧＬａペプチドがあり、それは下記の一次アミノ酸配列（単一文字アミノ酸コード）で特徴づけられる。

ＰＧＬａ：　ＧＭＡＳＫＡＧＡＩＡＧＫＩＡＫＶＡＬＫＡＬ（ＮＨｉｌＸＰＦ　：　ＧＷＡＳＫＩＧＱＴＬＧＫＩＡＫＶＧＬＫＥＬＩＱＰＫＸＰＦおよびＰＧＬａについての論評は、ＥＭＢＯＪ、２ニア１１−７１４．１９８３．ホフマン他；　Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ　１４９：５３１−５３５．１９８５．アンドリュー他；　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋ｉ、　２６１　：５３４１−５３４９．１９８６．ギプソン他；ＢｉｏｃｈｅＩＩ＋　Ｊ、２４３：１１３−１２０．１９８７．ジョヴアンニー二他に見ることができる。

さらにもう一つの実施例に従って、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質と併用されるペプチドは、ＣＰＦペプチドあるいはその適切な同族体あるいは誘導体である。

ＣＰＦペプチドおよびその同族体および誘導体はここで時々集合的にＣＰＦペプチドとして引用される。

ＣＰＦペプチドの好例は下記のペプチド構造Ｘ３゜を有する。

−Ｒ２，−Ｒ２，−Ｒ，□−Ｒ２□−Ｒ２１−Ｒ２ビＲ１３−Ｒ２１−Ｒｚ＋− Ｒｚ＋−Ｒｚｚ−Ｒｉ＋−Ｒ＊＋−Ｒｘ４−Ｒｉｓ−Ｒｚ＋−ここでＲｍｌは疎水性アミノ酸であり、Ｒ２□は疎水性アミノ酸もしくは塩基性親水性アミノ酸であり、Ｒ２３は塩基性親水性アミノ酸であり、Ｒ２４は疎水性もしくは中性親水性アミノ酸であり、Ｒｉｓは塩基性あるいは中性親水性アミノ酸である。

前記の基本構造はこの後ｘ３゜とじて記号表示される。

疎水性アミノ酸は、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ。

Ｉ　ｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、ＴｒｐおよびＴｙｒである。

中性親水性アミノ酸は、Ａｓｎ、Ｇｉｎ、ＳｅｒおよびＴｈｒである。

塩基性親水性アミノ酸は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓおよびオルニチンである。

ＣＰＦペプチドは前記記載のアミノ酸のみを有することもできるし、アミノ末端あるいはカルボキシル末端もしくはアミン、カルボキシルの両端に追加のアミノ酸を有することもできる。一般にペプチドは４０個以上のアミノ酸を持つことはない。

前記の基本ペプチド構造を含むＣＰＦペプチドはアミン末端で１個乃至４個のアミノ酸を付加することができる。従つて、そのような好適のペプチドは、下記の構造式で表示できる。

Ｙ、。−ｘ３゜ここでＸ　ｓｏは前記記載の基本ペプチド構造であり、Ｙ３ｏは下記の通りである。

（ｉｔ　Ｒｘ５あるいはｆｉｌｌ　Ｒｉａ　Ｒｉｓあるいは（１１１１ＲｚｌＲ２，−Ｒ２ｓあるいは［ｉｖｌ　Ｒ、、−Ｒ、、−Ｒ、、− Ｒ＊ｓ、好ましくはグリシン−Ｒｚ＋ＲｉａＲｚｓここでＲ，、、Ｒ，□およびＲｚｓは前記定義の通りである。

基本ペプチド構造のカルボキシル末端にはさらに１個乃至１３個までのアミノ酸を追加することができる。

好適な実施例において、基本構造は１個乃至７個のアミノ酸をカルボキシル末端に追加することができ、下記の通り表示される。

−Ｘ、、−Ｚ、。

ここでＸ、。は前記定義の通りであり、Ｚ３゜は（１１１１Ｒ２＋　Ｒｘｌ　Ｒ２４（ｉｖｌ　Ｒ１１Ｒｔ＋　Ｒａ４ＲｚａＭ　Ｒｉｔ　Ｒｘｌ−Ｒｗ４−　Ｒｔ４Ｒ１ｓ（ｖｉｌ　Ｒｚ＋　Ｒｚ＋−Ｒｘ４−Ｒｘ４−Ｒｚｓ　Ｇｉｎ、あるいは（ｖｉｉｌ　Ｒｉ＋−Ｒ２１−Ｒ２４−Ｒ２４−Ｒｉｇ−Ｇ　１　ｎ−Ｇ　１　ｎであり、Ｒ２，およびＲ２４は前記定義の通りであり、Ｒｚａはプロリンあるいは疎水性アミノ酸である。

好適なペプチドは下記の構造式で表される。

（Ｙ、。）４−Ｘユ。（Ｚ、。）。

ここでＸ、。、Ｙ、。およびＺ２゜は前記定義の通りであり、ａは０か１、またｂも０あるいはｌである。

この発明に利用でき、また文献等にも一部記述されているＣＰＦペプチドの代表例は、下記の配列（単一アミノ酸コード）よりなる。

（１１ＧＦＧＳＦＬＧＬＡＩＪＡＡＬＫＩＧＡＮＡＬＧＧＡＰＱＱ（２１ＧＬＡＳＦＬＧＫＡＬＫＡＧＬＫＩＧＡＨＬＬＧＧＡＰＱＱ（３１ＧＬＡＳＬＬＧＫＡＬＫＡＧＬＫＩＧＴＨＦＬＧＧＡＰＱＱ（４１ＧＬＡＳＬＬＧＫＡＬＫＡＴＬＫＩＧＴＨＦＬＧＧＡＰＱＱ＋５１　ＧＦＡＳＦＬＧＫＡＬＫＡＡＬＫＩＧＡＮＭＬＧＧＴＰＱＱ＋６１　ＧＦＧＳＦＬＧＫＡＬＫＡＡＬＫＩＧＡＮＡＬＧＧＡＰＱＱｆ７１　ＧＦＧＳＦＬＧＫＡＬＫＡＡＬＫＩＧＡＮＡＬＧＧＳＰＱＱ（８１ＧＦＡＳＦＬＧＫＡＬＫＡＡＬＫＩＧＡＮＬＬＧＧＴＰＱＱＣＰＦペプチドに関する論評は、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅ＋ｗ、２６１：３６７６−３６８０Ｆ１９８６１　Ｋ、リヒター、Ｒ，エツガー、クレール；Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、１３：１８１７−１８２８．　（１９８５１Ｔ、若株、Ｈ１加藤およびＳ、橘；　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６１：５３４１−５３４９ｆ１９８６１　ＢＪ、ギプソン、Ｌ、ボールター、　Ｄ、ＨウィリアムスおよびＪ、　Ｅ、マッジョにみられる。

この発明に利用されるＣＰＦペプチドは下記（単一アミノ酸コード）に表される。

Ｇ１２Ｓ３ＬＧ４ＡＬＫＡ５ＬＫＩＧ６７８ＬＧＧ９（１０１ＱＱここで各数字は以下のコードである。

８　＝　Ａ、Ｍ、Ｆ、Ｌ番号を付与されたアミノ酸は、組合せのそれぞれに記載されたように、基本ＣＰＦペプチド構造あるいはその同族体もしくは類似体のいずれかを提供するために利用できる。ＣＰＦペプチドの名称は、基本ペプチド構造の他にその同族体あるいは類似体をも含む。

さらにも一つの実施例に従って、生物活性ペプチドは下記の基本構造ｘ４゜を有する。

［Ｒ−１−Ｒ４□−Ｒ，、−８４，−Ｒ，、−Ｒ，□−Ｒ４□１．。

ここでＲ４Ｉは塩基性親水性アミノ酸であり、Ｒ４□は疎水性アミノ酸であり、Ｒ４２は中性親水性もしくは疎水性アミノ酸であり、ｎは２から５までの整数である。

一つの実施例において、このペプチドは下記の構造をとることもある。

Ｙ、。−ｘ４゜ここでＸ４゜は前記記載の通りであり、Ｙ４゜は（ｉｌｌ）　Ｒ４１Ｒａ□−Ｒ４１ｆｉｖｌ　Ｒ４１Ｒ４１Ｒ４ｇ−Ｒ４ｇＭ　Ｒ４ｘ　Ｒ４ｓ−Ｒ４１−Ｒ４ｚ　Ｒ４２あるいは（Ｖｌｌ　Ｒ（２Ｒ４ｚ　Ｒａｓ　Ｒ４１Ｒ４２Ｒ４２ここでＲ４１１Ｒ４２およびＲ４３は前記記述の通りである。

さらに一つの実施例に従って、このペプチドは次の構造を有する。

Ｘ　４．−　Ｚ、。

ここでｘ４゜は前記記載の通りであり、Ｚ４゜は（ｉｉｉｌ　Ｒ，、−Ｒ，□− Ｒ４２（ｉｖｌ　Ｒ４１Ｒ４１Ｒ４ｚ−Ｒ４ｇＭ　Ｒ４＋−Ｒａｇ　Ｒ４□−Ｒ４ｍ− Ｒ４１あるいは（ｖｉｌ　Ｒ４１Ｒ４１Ｒ＜ｉ　Ｒ４ｉ　Ｒａ＋−Ｒ４ｘである。

さらに一実施例に従って、このペプチドは下□記の構造を有する。

（Ｙ、、Ｌ−Ｘ４．（Ｚ、、ｌ。

ここでＹおよび２は前記定義の通りであり、ａはＯか１、ｂは０か１である。

一つの実施例において、ｎは３であり、また最も好適なペプチドは、単一アミノ酸コードで示される下記の構造を有する。

［ＫＩＡＧＫＩＡ］　。

さらに一つの実施例において、ｎは２であり、好適なペプチド構造は単一アミノ酸コードで示される下記の構造を有する。

ＫｒＡ　（ＫＩＡＧＫＩＡ）、ＫＩＡＧさらにまた一実施例に従って、生物活性両親媒性ペプチドは、下記の基本構造Ｘ、。を含も生物活性両親媒性ペプチドであり得る。

Ｒ４，−Ｒ，□−Ｒ，２−Ｒ４１−Ｒ４，−Ｒ４□−Ｒ，、−Ｒ４，−Ｒ４□− Ｒ４□〜Ｒ４□−Ｒ４１−Ｒ，□−Ｒ４□ ここでＲ４１＋　Ｒ４，およびＲ４３は前記記載の通りである。

ある実施例に従って、このペプチドは下記の構造をとることここでＸ、。は前記記載の通りであり、Ｙ、。は（ｉｉｉｌ　Ｒ４１Ｒ４□−Ｒ４２（ｘｖｌ　Ｒ４ｓ　Ｒ４１Ｒａ＊−Ｒ４ｔ（ＶＩ　Ｒ４ｉ　Ｒ４２Ｒ４１−Ｒ４ｇ−Ｒ４ｍ（ｖｉｌ　Ｒ＜ｘ−Ｒ４ｗ　Ｒ＋１−Ｒ４＋−Ｒ４ｉ　Ｒ４１あるいはｆＶｌｌｌ　Ｒ４＋−Ｒａ２−Ｒａｗ　Ｒ＜ｓ−Ｒ＊ｌ−Ｒ４＊　Ｒ４ｇであり、Ｒａ　（、Ｒ４２およびＲ４ｓは前記記載の通りである。

も一つの実施例に従って、このペプチドは下記の構造を有することができる。

ｘも。−Ｚ、。

ここでＸ　ｓｏは前記記載の通りであり、２．。は１ｉｉｉＩ　Ｒ４１−Ｒ４□ −Ｒ４□ （ｉｖｌ　Ｒ４＋−Ｒ４ｔ　Ｒ４ｚ−Ｒ４ｓＭ　Ｒ４１−Ｒ４４Ｒ４ｚ−Ｒａ３Ｒａｔ［ｖｉｌ　Ｒ４１Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４３−Ｒ４１Ｒ４２あるいはｔＶｉｌｌ　Ｒ４＋−Ｒｎａ−Ｒ４ｉ　Ｒ４１−Ｒ４＋　Ｒ４２Ｒ４２であり、Ｒ４１＋　Ｒ４２およびＲ４！は前記記載の通りである。

さらにまた一つの実施例に従って、ペプチドは下記の構造を有する。

（Ｙ、、１．−　Ｘｓｏ　（ｚｓ。）。

ここでＸおよびＹは前記定義されており、ａは０がｔ、ｂも０か１である。一つの実施例において、ペプチドは下記の［造式をもち、隼−アミノ酸コードで示される。

ＫＬＡＳＫＡＧＫＩＡＧＫＩＡＫＶＡＬＫＡＬも一つの実施例において、ペプチドは下記の構造式をもち、単一文字アミノ酸コードで示される。

ＫＩＡＧＫＩＡＫＩＡＧＯＩＡＫＩＡＧＫＩＡさらに他の実施例において、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質と併用されるペプチドはセクロビンである。セクロビンおよびその同族体および誘導体は、Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、Ｍｉｃｒａｂｉｏｌ、　１９８７、Ｖｏｌ、４１．ＰＰ、　１０３−１２６、とりわけＰ−１０８、およびＰＮＡＳ　Ｖｏｌ。

８５、ＰＰ、　５０７２−７６でクリステンセン他により記述されており、参考文献としてここに引用する。

セクロピンの名称は、基本構造および同族体、誘導体の総称である。

さらに一実施例において、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質と併用されるペプチドはサルコトキシンである。サルコトキシンおよびその同族体、誘導体については、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＥｎｔｏｆｆｉｏｌｏｇｙ　１９８７．Ａｌａｎ　Ｒ，Ｌｉ５ｓ　Ｉｎｃ、、ＰＰ、３６９−３７８とりわけＲ３７５に記述されており、参考文献としてここに引用する。

サルコトキシンの名称はその基本物質ならびに同族体、誘導体の総称である。

さらにまた、この発明の範囲内において、前記記載の生物活性両親媒性ペプチド構造のアミノ酸残基のそれぞれは、Ｄ−アミノ酸残基あるいはグリシン残基であることもＨ照される。

も一つの実施例において、イオンチャンネル形成蛋白質はＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質と併用することができる。使用されるイオンチャンネル形成蛋白質には、大好中球殺菌ペプチド（ＨＮＰ）で知られるデフエンジン、好酸球性主要塩基性蛋白質（ＭＢＰ）、細菌透過性促進蛋白質（ＢＰＩ）、およびバーフォリン、サイトリシンあるいは空孔形成蛋白質等種々な名称で呼ばれる空孔形成サイトトキシンがある。デフエンジンはＪ、Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、Ｖｏｌ、７６、ＰＰ、　１４３６−１４３９（１９８５１にセルステッド他により記述されている。ＭＢＰ蛋白質はＪ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、Ｖｏ１２６３、　ＰＰ、　１２５５９−１２５６３　（１９８８１にウォスメン他により記述されている。ＢＰＩ蛋白質はＪ、　Ｒｉｏｔ、　Ｃｈｅｗ、　Ｖｏｌ、　２６２．　ＰＰ、　１４８９１−１４８９４（１９８７１に大井他が記述している。バーフォリンは、Ｊ、Ｅ’ｘｐ、Ｍｅｄ。

１６０：Ｐ、　７５１１１８４１にヘンカート他により、またＪ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、　１６０＋Ｐ。

６９５　（１９８４１にボダック他により記述されている。前記各文献はここに参考文献として引用する。

イオンチャンネル形成蛋白質の名称は、イオン形成蛋白質の基本構造と共に同族体および誘導体を含むものとする。

この発明は下記の実施例でさらに詳述されるが、しかし、この発明の範囲はそれに留るものではない。

１五豊−ユトリブチケース大豆肉汁培地（ＴＳＢ）　１００ｕｆ２に分散した約１〜５Ｘ１０’コロニー形成単位（ＣＦＵｓ）のＰ、　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ菌株２７８５３あるいはＰ、　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ菌株１０７（ゲンタマイシン耐性のあるもの）が、各試験ウェルに添加された。ペプチド１．ペプチド２あるいはペプチド３が、最小阻害濃度（ＭＩＣ）２０％のシプロフロキサシンの存在しないあるいは存在する下で０．２５μｇ／ｍｊ２から２５６　ｕ　ｇ　／　ｍ　１２まで増量しながら、各試験ウェルに添加された。この実施例のために、ペプチド１はアミノ基端末のマゲイニン■であり、ペプチド２は下記の構造式％式％を有し、ペプチド３は下記の構造式のものである。

ＫＬＡＳＫＡＧＫＩＡＧＫＩＡＫＶＡＬＫＡＬＰ、　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ菌株２７８５３に対するシプロフロキサシン単独のＭＩＣはｌｕｇ／ｍＩ２で、またＰ、　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ菌株１ｏ７へのＭＩＣは２ＬＬｇ／ｍｊ２であった。ペプチド１．２および３単独もしくは２０％のシプロフロキサシンＭＩＣと併用する際のペプチドのＭＩＣの値は下記表１で示される。

１、ペプチド１単独　＞３２　＞３２２、ペプチド１および　３２３２２０％ＭＩＣのシプロフロキサシン３、ペプチド２車独　３２３２４、ペプチド２および　１６　１６２０％ＭＩＣのシプロフロキサシン５、ペプチド３単独　１６３２６、ペプチド３および　８８２０％ＭＩＣのシプロフロキサシン実ＩＬ一旦実施例２から実施例４にわたり、評価分析に採用された微生物は、　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ａｇｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｃｈｅ＋５ｏｔｈｅｒａｐｙ、Ｖｏｌ、３４．Ｊｕｌｙ　１ｇ９０でスタットマン他により記載された方法に従い成長し実施例２から実施例４まで、微生物は寒天培地で準培養され、その後トリブチケース大豆間培地（ＴＳＢＩもしくはメラーヒントン培地で成長した。最終評価分析は、その後メラーヒントン大豆肉を含むマイクロ力価培地に導かれた。１０ ’の生体が各ウェルに添加された。

前記実施例１に記載されたシプロフロキサシン単独、ペプチド１単独、ペプチド１が添加された際のシプロフロキサシン（シプロフロキサシン中ペプチド１）、シプロフロキサシンが添加された際のペプチド１　（ペプチド１＋シプロフロキサシン）の最小阻害濃度（ＭＩＣ’Ｓ）が、Ｍ　Ｒ−Ｐ　Ｓ　Ａ　Ｐｓｅｕｄｏａ＋ｏｎａｓａｅｒｕｇｉｒｏｓａ　（緑膿菌）菌株の各種分離物に対し試験された。

相乗作用を確立する第二化合物（すなわちペプチド１＋シプロフロキサシン化合ＯＪ）膜量は、単独では殺菌効果を欠いている相乗作用薬剤の最小膜量であったし、また相乗作用薬剤単独のもののＭＩＣより、少くとも５０％は少い膜量であった。この結果は下記表２に示される。

及−ユＭｒｃ　（μｇ／ｍβ）ノブロア０キサノン　ノブロア０キザンン　ペプチド１　＋乏し責Ｌ３翅　勇（王丸−−−−−−　＋ペプチドｌ　４１ｉＬ上−１（工１−　シプロフロキサシン！五±−ユ実施例２の手順に従い、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのＭＲ −ＰＳＡ菌株の各分離物に対して最小阻害濃度（ＭＩＣ’　Ｓ）が試験された。

但し、今回はペプチド１に代えてペプチド４が使用された。ペプチド４は下記の構造式を有している。

ＧＩＧＫＦＬＫＳＡＫＫＦＧＫＡＦＶＫＬＭＮＳその結果は下記表３に示される。

Ｌ一旦ＭＩＣ（ＬＬｇ／ｍｊ２）シプロフロキサシン　ノブロア０キサノン　ペプチド４　＋２　０．２５　０．２５　４　４３　０．２５　０．２５　８　８４　０．０６３　０．２５　８　８５　０．２５　０．０６３　８　４６　４　≦０．５　３２　８７　０．１２５　０．２５　１６　１６８　０、５　０．５　１６　１６９　２　５０、５　３２　１６１０　０．２５　０．２５　８　８ヌＬ方【ｆｌ−−二り実施例３の手順に従って、ペプチド４及びシプロフロキサシンの単独もしくは相互に組み合わせた最小阻害濃度（ＭＩＣ’　ｓ）が、５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　（黄色葡萄球菌）の各種分離物に対し試験された。この結果は下記表４に示される。

表−ＡＭＩＣ（μｇ／ｍ　１２　）シプロフロキサシン　ノブロア０キサノン　ペプチド４　＋３　０、５　０．１２５　３２　２４　＞０．２５　０．０６３　６４　３２前記記載のペプチドあるいは蛋白質およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は、各種多様の宿主の治療に利用することができる。好適な実施例に従って、宿主は動物であり、その動物は人間あるいは人間以外の動物であってもよい。ペプチドあるいは蛋白質およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は、単一の組成物として一緒に、もしくは異なった組成物として利用できる。さらに、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質およびペプチドあるいは蛋白質は、異なった形態で受渡されあるいは投与することができる。例えばＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は全身投与され、一方ベブチドあるいは蛋白質は局所投与され得るゆペプチドあるいは蛋白質およびもしくはＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は、充填剤、無毒緩衝剤あるいは生理食塩液などの無毒の薬品キャリアもしくは便薬と併用して多種多様な薬品組成物に利用できる。この薬品組成物は局所あるいは全身投与され、また、液状、固型、半固型、注射液１錠剤、軟膏。

ローション、ペースト、カプセルその他あらゆる適切な形態で使用できる。ペプチドあるいは蛋白質および、もしくはＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は、さらに補助薬、蛋白酵素阻害剤、あるいは相溶性薬剤と併用して使用され、その場合有害な微生物、とりわけ細菌により生じた感染は抑制するのにこの種の組み合わせが望ましく、あるいは有効であることが示されている。

この発明によるペプチドあるいは蛋白質は、宿主とりわけ動物に対し、有効殺菌量でとりわけ有効抗細菌量で、ペプチドあるいは蛋白質の活性を相乗強化する目的でＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質と併用して局所投与することができる。

局所投与されるペプチドあるいは蛋白質およびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質の投与の代表例として、ペプチドは重量比的１％までの量で、またＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は約５０ｍＭ（約０．１％）の量で受渡される。代替案としては、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は局所投与され、ペプチドおよびもしくは蛋白質の全身投与と併用することができる。例えばペプチドあるいは蛋白質はミリリットル当り１００マイクログラム（キログラム当り１０ミリグラム）の血清量を達成するようにＥＶ（静脈内）あるいはＩＰ投与されると共に、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質が、約４μｇ　／　ｍ　ｉｌから約１００μｇ　／　ｍ　ｉの範囲で局所投与される。

この発明には数多くの部分的変形および変種が前記の教旨に照らして可能であり、従って添付の請求の範囲内において、この発明は特に記載されたもの以外にも実施可能である。

要約書ペプチドあるいは蛋白質がイオンチャンネル汁ａ成ペプチドあるいは蛋白質であり、少くともその一つの生物活性両親媒性ペプチドあるいは蛋白質と、ＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質よりなる組成物。生物活性両親媒性ペプチドおよびＤＮＡＮクギゼを阻害する抗生物質は細菌等の標的細胞の成長を阻害するのに有効な量で投与すること力≦できる。

Claims

【特許請求の範囲】

１．ペプチドあるいは蛋白質がイオンチャンネル形成ペプチドあるいは蛋白質であり、少なくとも１種の生物活性両親媒性ペプチドおよび、もしくは生物活性蛋白質、およびＤＮＡギラーゼを阻害する抗生物質を宿主に投与し、前記成分が宿主の標的細胞の成長を阻害するために投与されることを特徴とする方法。
２．ペプチドがマゲイニンペプチドであることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
３．ペプチドが下記の基本構造Ｘ４０［Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４３−Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２］ｎを有し、ここでＲ４１は塩基性親水性アミノ酸、Ｒ４２は疎水性アミノ酸、Ｒ４２は中性親水性あるいは疎水性アミノ酸で、ｎは２から５までの整数であることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
４．ペプチドが下記の基本構造Ｘ５０Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４３−Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４１−Ｒ４２− Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２を有し、Ｒ４１は塩基性親水性アミノ酸、Ｒ４２は疎水性アミノ酸、Ｒ４３は中性親水性もしくは疎水性アミノ酸であることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
５．ＤＮＡギラーゼを阻害する前記抗生物質がキノロン抗生物質であることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
６．前記キノロン抗生物質がシプロフロキサシンであることを特徴とする請求の範囲第５項記載の方法。
７．ＤＮＡギラーゼを阻害する前記抗生物質がナリジクス酸であることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
８．ＤＮＡギラーゼを阻害する前記抗生物質がオキソリユウ酸であることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
９．ＤＮＡギラーゼを阻害する前記抗生物質がシノキサシンであることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
１０．（ａ）ペプチドあるいは蛋白質がイオンチャンネル形成ペプチドあるいは蛋白質である少くとも１個の生物活性両親媒性ペプチドおよびもしくは生物活性蛋白質、および（ｂ）ＤＮＡギラーゼを阻害する抗生物質よりなる組成物。
１１．前記成分（ａ）および（ｂ）が標的細胞の成長を阻害する量で存在することを特徴とする請求の範囲第１０項記載の組成物。
１２．ペプチドがマゲイニンペプチドであることを特徴とする請求の範囲第１０項記載の組成物。
１３．ペプチドが下記の基本構造Ｘ４０［Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４３−Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２］ｎを有し、ここでＲ４１は塩基性親水性アミノ酸、Ｒ４２は疎水性アミノ酸、Ｒ４３は中性親水性もしくは疎水性アミノ酸であることを特徴とする請求の範囲第１０項記載の組成物。
１４．ペプチドが下記の基本構造Ｘ５０Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４３−Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４２−Ｒ４１−Ｒ４２−Ｒ４２を有し、Ｒ４１は塩基性親水性アミノ酸、Ｒ４２は疎水性アミノ酸、Ｒ４３は中柱親水性あるいは疎水性アミノ酸であることを特徴とする請求の範囲第１０項記載の組成物。
１５．ＤＮＡギラーゼを阻害する前記抗生物質がキノロン抗生物質であることを特徴とする請求の範囲第１０項記載の組成物。
１６．前記キノロン抗生物質がシプロフロキサシンであることを特徴とする請求の範囲第１５項記載の組成物。
１７．ＤＮＡギラーゼを阻害する前記抗生物質がナリジクス酸であることを特徴とする請求の範囲第１０項記載の組成物。
１８．ＤＮＡギラーゼを阻害する前記抗生物質がオキソリユウ酸であることを特徴とする請求の範囲第１０項記載の組成物。
１９．ＤＮＡギラーゼを阻害する前記抗生物質がシノキサシンであることを特徴とする請求の範囲第１０項記載の組成物。
２０．前記ペプチドが下記の構造［ＫＩＡＧＫＩＡ］３を有することを特徴とする請求の範囲第１３項記載の組成物。
２１．前記ペプチドが下記の構造ＫＬＡＳＫＡＧＫＩＡＧＫＩＡＫＶＡＬＫＡＬ２２．前記マゲイニンペプチドがマゲイニンＩＩであることを特徴とする請求の範囲第１２項記載の組成物。