JPH05320195A - インスリノーマで特異的に発現している遺伝子のコード蛋白質 - Google Patents
インスリノーマで特異的に発現している遺伝子のコード蛋白質Info
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- JPH05320195A JPH05320195A JP4291630A JP29163092A JPH05320195A JP H05320195 A JPH05320195 A JP H05320195A JP 4291630 A JP4291630 A JP 4291630A JP 29163092 A JP29163092 A JP 29163092A JP H05320195 A JPH05320195 A JP H05320195A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 インスリノーマないし膵臓癌等の膵臓疾患の
簡便な診断法に利用する新蛋白質、ＤＮＡ並びにその転
写ｍＲＮＡの開発。 【構成】 ストレプトゾトシン−ニコチン酸アミド又は
アロキサン−ニコチン酸アミドで誘発したラットインス
リノーマで特異的に発現している新遺伝子の全塩基配列
を決定し、ｒｉｇと命名した。更にBKウイルスで誘発し
たハムスターインスリノーマ及び手術摘出したヒトイン
スリノーマにおいても、ｒｉｇの塩基配列に酷似した新
遺伝子を見いだし、これら新遺伝子のコードする蛋白質
の全アミノ酸配列を推定し、新蛋白質を取得した。
簡便な診断法に利用する新蛋白質、ＤＮＡ並びにその転
写ｍＲＮＡの開発。 【構成】 ストレプトゾトシン−ニコチン酸アミド又は
アロキサン−ニコチン酸アミドで誘発したラットインス
リノーマで特異的に発現している新遺伝子の全塩基配列
を決定し、ｒｉｇと命名した。更にBKウイルスで誘発し
たハムスターインスリノーマ及び手術摘出したヒトイン
スリノーマにおいても、ｒｉｇの塩基配列に酷似した新
遺伝子を見いだし、これら新遺伝子のコードする蛋白質
の全アミノ酸配列を推定し、新蛋白質を取得した。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新しい遺伝子に関するも
のである。更に詳しくは本発明はラット、ハムスター及
びヒトの各インスリノーマで特異的に発現している遺伝
子にコードされる新しい蛋白質に関するものである。
のである。更に詳しくは本発明はラット、ハムスター及
びヒトの各インスリノーマで特異的に発現している遺伝
子にコードされる新しい蛋白質に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来ヒト及びヒト以外の動物のインスリ
ノーマで特異的に発現している遺伝子のＤＮＡ塩基配列
は全く見いだされておらず、従って、その遺伝子産物
（コード蛋白質）についても、全く知見がない。インス
リン産生細胞の発生、腫瘍（インスリノーマ）化、再
生、増殖についての機構も解明されておらず、従って、
インスリン産生細胞の腫瘍化を知る診断法もまだ開発さ
れていないのが現状である。
ノーマで特異的に発現している遺伝子のＤＮＡ塩基配列
は全く見いだされておらず、従って、その遺伝子産物
（コード蛋白質）についても、全く知見がない。インス
リン産生細胞の発生、腫瘍（インスリノーマ）化、再
生、増殖についての機構も解明されておらず、従って、
インスリン産生細胞の腫瘍化を知る診断法もまだ開発さ
れていないのが現状である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】このような状況におい
て、インスリン生合成の調節機構の解明、及び簡便なイ
ンスリノーマの診断法の開発が従来から待望されてい
た。
て、インスリン生合成の調節機構の解明、及び簡便なイ
ンスリノーマの診断法の開発が従来から待望されてい
た。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決すべく種々研究した結果、ストレプトゾトシン−ニ
コチン酸アミド、あるいはアロキサン−ニコチン酸アミ
ドで誘発したラットインスリノーマで特異的に発現して
いる新遺伝子の全塩基配列（４８７塩基）を相補的ＤＮ
Ａ（ｃＤＮＡ）ライブラリーより決定し、それをｒｉｇ
（ rat insulinoma gene）と命名した。またその新遺伝
子のコード蛋白質の全アミノ酸配列（１４５個のアミノ
酸）を推定し取得することに成功した。
解決すべく種々研究した結果、ストレプトゾトシン−ニ
コチン酸アミド、あるいはアロキサン−ニコチン酸アミ
ドで誘発したラットインスリノーマで特異的に発現して
いる新遺伝子の全塩基配列（４８７塩基）を相補的ＤＮ
Ａ（ｃＤＮＡ）ライブラリーより決定し、それをｒｉｇ
（ rat insulinoma gene）と命名した。またその新遺伝
子のコード蛋白質の全アミノ酸配列（１４５個のアミノ
酸）を推定し取得することに成功した。
【０００５】本発明を詳細に説明すると、ｒｉｇは、後
掲図１に見られるように正常な膵臓のランゲルハンス島
や再生増殖ランゲルハンス島Ｂ細胞では殆ど発現してい
ないことから、Ｂ細胞のインスリノーマ増殖に密接に関
与している可能性が考えられた。更に研究を重ねた結
果、ＢＫウイルスで誘発したハムスターインスリノー
マ、及び手術摘出したヒトインスリノーマにおいて、ｒ
ｉｇの塩基配列に酷似した新遺伝子が見いだされた。即
ち、ハムスターインスリノーマ、及びヒトインスリノー
マのｃＤＮＡライブラリーから分離した各遺伝子は、ラ
ットインスリノーマから分離したｒｉｇと塩基配列で90
％以上一致し、コードされているアミノ酸の配列では 1
00％一致していた。このアミノ酸配列を有する蛋白質
は、分子量17,040でシグナルペプチドを含まず塩基性ア
ミノ酸に富み、ニュクリアロケイションシグナルペプチ
ドと類似の構造を有していた。
掲図１に見られるように正常な膵臓のランゲルハンス島
や再生増殖ランゲルハンス島Ｂ細胞では殆ど発現してい
ないことから、Ｂ細胞のインスリノーマ増殖に密接に関
与している可能性が考えられた。更に研究を重ねた結
果、ＢＫウイルスで誘発したハムスターインスリノー
マ、及び手術摘出したヒトインスリノーマにおいて、ｒ
ｉｇの塩基配列に酷似した新遺伝子が見いだされた。即
ち、ハムスターインスリノーマ、及びヒトインスリノー
マのｃＤＮＡライブラリーから分離した各遺伝子は、ラ
ットインスリノーマから分離したｒｉｇと塩基配列で90
％以上一致し、コードされているアミノ酸の配列では 1
00％一致していた。このアミノ酸配列を有する蛋白質
は、分子量17,040でシグナルペプチドを含まず塩基性ア
ミノ酸に富み、ニュクリアロケイションシグナルペプチ
ドと類似の構造を有していた。
【０００６】本発明により、下記のアミノ酸配列を有す
る新蛋白質が提供される。
る新蛋白質が提供される。
【表２】
【０００７】また、本発明の上記新蛋白質のアミノ酸配
列をコードするＤＮＡは下記のＤＮＡ塩基配列を含む。 ATGGCAGAAG TAGAGCAGAA GAAGAAGCGG ACCTTCCGCA AGTTCACCTA CCGCGGCGTG 60 GACCTCGACC AGCTGCTGGA CATGTCCTAC GAGCAGCTGA TGCAGCTGTA CAGTGCGCGC 120 CAGCGGCGGC GGCTGAACCG GGGCCTGCGG CGGAAGCAGC ACTCCCTGCT GAAGCGCCTG 180 CGCAAGGCCA AGAAGGAGGC GCCGCCCATG GAGAAGCCGG AAGTGGTGAA GACGCACCTG 240 CGGGACATGA TCATCCTACC CGAGATGGTG GGCAGCATGG TGGGCGTCTA CAACGGCAAG 300 ACCTTCAACC AGGTGGAGAT CAAGCCCGAG ATGATCGGCC ACTACCTGGG CGAGTTCTCC 360 ATCACCTACA AGCCCGTAAA GCATGGCCGG CCCGGCATCG GGGCCACCCA CTCCTCCCGC 420 TTCATCCCTC TCAAG 435
列をコードするＤＮＡは下記のＤＮＡ塩基配列を含む。 ATGGCAGAAG TAGAGCAGAA GAAGAAGCGG ACCTTCCGCA AGTTCACCTA CCGCGGCGTG 60 GACCTCGACC AGCTGCTGGA CATGTCCTAC GAGCAGCTGA TGCAGCTGTA CAGTGCGCGC 120 CAGCGGCGGC GGCTGAACCG GGGCCTGCGG CGGAAGCAGC ACTCCCTGCT GAAGCGCCTG 180 CGCAAGGCCA AGAAGGAGGC GCCGCCCATG GAGAAGCCGG AAGTGGTGAA GACGCACCTG 240 CGGGACATGA TCATCCTACC CGAGATGGTG GGCAGCATGG TGGGCGTCTA CAACGGCAAG 300 ACCTTCAACC AGGTGGAGAT CAAGCCCGAG ATGATCGGCC ACTACCTGGG CGAGTTCTCC 360 ATCACCTACA AGCCCGTAAA GCATGGCCGG CCCGGCATCG GGGCCACCCA CTCCTCCCGC 420 TTCATCCCTC TCAAG 435
【０００８】上記のＤＮＡ塩基配列としては、下記のヒ
トインスリノーマ、ラットインスリノーマ及びハムスタ
ーインスリノーマでそれぞれ特異的に発現している遺伝
子のＤＮＡ塩基配列があげられる。 ラット TTTTTCCCAG CAGCCGCCAA G ATG GCC GAA 30 GTG GAG CAG AAG AAA AAG CGA ACC TTC CGC 60 AAG TTC ACC TAC CGT GGC GTG GAC CTC GAC 90 CAG CTG CTG GAC ATG TCC TAT GAG CAG CTG 120 ATG CAG TTG TAC AGC GCC CGG CAG AGA CGG 150 CGC CTG AAC CGA GGC CTG CGG AGG AAG CAG 180 CAC TCA CTG CTC AAG CGC TTG AGG AAG GCC 210 AAG AAG GAG GCG CCA CCC ATG GAG AAG CCG 240 GAG GTC GTG AAG ACC CAC CTT AGG GAC ATG 270 ATC ATT CTG CCC GAG ATG GTC GGC AGC ATG 300 GTG GGT GTG TAC AAC GGC AAG ACC TTC AAC 330 CAG GTG GAG ATC AAA CCC GAG ATG ATC GGC 360 CAC TAC CTG GGC GAG TTC TCC ATC ACC TAC 390 AAG CCT GTG AAG CAC GGC CGG CCC GGC ATT 420 GGT GCC ACC CAC TCC TCC CGA TTT ATC CCC 450 CTC AAG TAGTGGGGAC AATAAAGACT CGTTTTCAGC C An 487+n ハムスター TTTTTACGAG AAGCCGTCAA A ATG GCC GAA 30 GTG GAG CAG AAG AAG AAG CGG ACC TTC CGC 60 AAG TTC ACC TAC CGC GGC GTG GAC CTG GAC 90 CAG CTG CTA GAC ATG TCC TAT GAG CAG CTC 120 ATG CAG CTT TAC AGC GCC AGG CAG AGG CGG 150 CGG CTG AAC CGC GGC CTG CGG CGG AAG CAG 180 CAC TCG CTG CTC AAG CGC CTG AGA AAG GCC 210 AAG AAG GAG GCG CCG CCC ATG GAG AAG CCC 240 GAG GTG GTG AAG ACG CAC CTG AGG GAC ATG 270 ATC ATC CTG CCC GAG ATG GTG GGC AGC ATG 300 GTG GGC GTG TAC AAC GGC AAG ACC TTC AAC 330 CAG GTG GAG ATC AAG CCT GAG ATG ATC GGC 360 CAC TAC CTG GGC GAG TTC TCC ATC ACC TAC 390 AAG CCG GTG AAG CAC GGC CGG CCC GGC ATC 420 GGT GCT ACC CAC TCC TCC CGG TTC ATC CCG 450 CTC AAG TAA CTGCCCAATA AAGACTCTAG AGTGCG An 485+n ヒト AAAGCGATCT CTTCTGAGGA TCCGGCAAG ATG GCA 35 GAA GTA GAG CAG AAG AAG AAG CGG ACC TTC 65 CGC AAG TTC ACC TAC CGC GGC GTG GAC CTC 95 GAC CAG CTG CTG GAC ATG TCC TAC GAG CAG 125 CTG ATG CAG CTG TAC AGT GCG CGC CAG CGG 155 CGG CGG CTG AAC CGG GGC CTG CGG CGG AAG 185 CAG CAC TCC CTG CTG AAG CGC CTG CGC AAG 215 GCC AAG AAG GAG GCG CCG CCC ATG GAG AAG 245 CCG GAA GTG GTG AAG ACG CAC CTG CGG GAC 275 ATG ATC ATC CTA CCC GAG ATG GTG GGC AGC 305 ATG GTG GGC GTC TAC AAC GGC AAG ACC TTC 335 AAC CAG GTG GAG ATC AAG CCC GAG ATG ATC 365 GGC CAC TAC CTG GGC GAG TTC TCC ATC ACC 395 TAC AAG CCC GTA AAG CAT GGC CGG CCC GGC 425 ATC GGG GCC ACC CAC TCC TCC CGC TTC ATC 455 CCT CTC AAG TAATGGCTCA GCTAATAAAG GCGCACATGA CTCC An 498+n
トインスリノーマ、ラットインスリノーマ及びハムスタ
ーインスリノーマでそれぞれ特異的に発現している遺伝
子のＤＮＡ塩基配列があげられる。 ラット TTTTTCCCAG CAGCCGCCAA G ATG GCC GAA 30 GTG GAG CAG AAG AAA AAG CGA ACC TTC CGC 60 AAG TTC ACC TAC CGT GGC GTG GAC CTC GAC 90 CAG CTG CTG GAC ATG TCC TAT GAG CAG CTG 120 ATG CAG TTG TAC AGC GCC CGG CAG AGA CGG 150 CGC CTG AAC CGA GGC CTG CGG AGG AAG CAG 180 CAC TCA CTG CTC AAG CGC TTG AGG AAG GCC 210 AAG AAG GAG GCG CCA CCC ATG GAG AAG CCG 240 GAG GTC GTG AAG ACC CAC CTT AGG GAC ATG 270 ATC ATT CTG CCC GAG ATG GTC GGC AGC ATG 300 GTG GGT GTG TAC AAC GGC AAG ACC TTC AAC 330 CAG GTG GAG ATC AAA CCC GAG ATG ATC GGC 360 CAC TAC CTG GGC GAG TTC TCC ATC ACC TAC 390 AAG CCT GTG AAG CAC GGC CGG CCC GGC ATT 420 GGT GCC ACC CAC TCC TCC CGA TTT ATC CCC 450 CTC AAG TAGTGGGGAC AATAAAGACT CGTTTTCAGC C An 487+n ハムスター TTTTTACGAG AAGCCGTCAA A ATG GCC GAA 30 GTG GAG CAG AAG AAG AAG CGG ACC TTC CGC 60 AAG TTC ACC TAC CGC GGC GTG GAC CTG GAC 90 CAG CTG CTA GAC ATG TCC TAT GAG CAG CTC 120 ATG CAG CTT TAC AGC GCC AGG CAG AGG CGG 150 CGG CTG AAC CGC GGC CTG CGG CGG AAG CAG 180 CAC TCG CTG CTC AAG CGC CTG AGA AAG GCC 210 AAG AAG GAG GCG CCG CCC ATG GAG AAG CCC 240 GAG GTG GTG AAG ACG CAC CTG AGG GAC ATG 270 ATC ATC CTG CCC GAG ATG GTG GGC AGC ATG 300 GTG GGC GTG TAC AAC GGC AAG ACC TTC AAC 330 CAG GTG GAG ATC AAG CCT GAG ATG ATC GGC 360 CAC TAC CTG GGC GAG TTC TCC ATC ACC TAC 390 AAG CCG GTG AAG CAC GGC CGG CCC GGC ATC 420 GGT GCT ACC CAC TCC TCC CGG TTC ATC CCG 450 CTC AAG TAA CTGCCCAATA AAGACTCTAG AGTGCG An 485+n ヒト AAAGCGATCT CTTCTGAGGA TCCGGCAAG ATG GCA 35 GAA GTA GAG CAG AAG AAG AAG CGG ACC TTC 65 CGC AAG TTC ACC TAC CGC GGC GTG GAC CTC 95 GAC CAG CTG CTG GAC ATG TCC TAC GAG CAG 125 CTG ATG CAG CTG TAC AGT GCG CGC CAG CGG 155 CGG CGG CTG AAC CGG GGC CTG CGG CGG AAG 185 CAG CAC TCC CTG CTG AAG CGC CTG CGC AAG 215 GCC AAG AAG GAG GCG CCG CCC ATG GAG AAG 245 CCG GAA GTG GTG AAG ACG CAC CTG CGG GAC 275 ATG ATC ATC CTA CCC GAG ATG GTG GGC AGC 305 ATG GTG GGC GTC TAC AAC GGC AAG ACC TTC 335 AAC CAG GTG GAG ATC AAG CCC GAG ATG ATC 365 GGC CAC TAC CTG GGC GAG TTC TCC ATC ACC 395 TAC AAG CCC GTA AAG CAT GGC CGG CCC GGC 425 ATC GGG GCC ACC CAC TCC TCC CGC TTC ATC 455 CCT CTC AAG TAATGGCTCA GCTAATAAAG GCGCACATGA CTCC An 498+n
【０００９】更に、上記ＤＮＡから転写されるｍＲＮＡ
が提供される。
が提供される。
【００１０】
【作用】本発明の背景並びに作用について述べると下記
のごとくである。即ち、実験的に糖尿病を発症させる物
質としてアロキサンとストレプトゾトシンが知られてお
り、最近になりこれらの物質は、極めて短時間にランゲ
ルハンス島ＤＮＡを損傷し、断片化することが見いださ
れている。アロキサンによるＤＮＡの切断は活性酸素、
ハイドロキシラジカル（ＯＨ・）によるものと考えられ
ており、ストレプトゾトシンのＤＮＡ切断作用はＤＮＡ
のアルキル化に起因するものと考えられている。真核細
胞では、ＤＮＡが損傷されるとこれを修復するために、
核クロマチンに存在するポリアデノシン２リン酸（ポリ
ＡＤＰ）リボース合成酵素が活性化されることが考えら
れる。ランゲルハンス島細胞核のポリＡＤＰリボース合
成酵素は、ＤＮＡ切断の時間経過とほぼ同様の経過で著
しく活性化され、この酵素の基質であるニコチン酸アミ
ドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）がランゲルハンス
島内でほとんど消費され、プロインスリン合成も著しく
低下する。
のごとくである。即ち、実験的に糖尿病を発症させる物
質としてアロキサンとストレプトゾトシンが知られてお
り、最近になりこれらの物質は、極めて短時間にランゲ
ルハンス島ＤＮＡを損傷し、断片化することが見いださ
れている。アロキサンによるＤＮＡの切断は活性酸素、
ハイドロキシラジカル（ＯＨ・）によるものと考えられ
ており、ストレプトゾトシンのＤＮＡ切断作用はＤＮＡ
のアルキル化に起因するものと考えられている。真核細
胞では、ＤＮＡが損傷されるとこれを修復するために、
核クロマチンに存在するポリアデノシン２リン酸（ポリ
ＡＤＰ）リボース合成酵素が活性化されることが考えら
れる。ランゲルハンス島細胞核のポリＡＤＰリボース合
成酵素は、ＤＮＡ切断の時間経過とほぼ同様の経過で著
しく活性化され、この酵素の基質であるニコチン酸アミ
ドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）がランゲルハンス
島内でほとんど消費され、プロインスリン合成も著しく
低下する。
【００１１】一方、ランゲルハンス島Ｂ細胞の腫瘍化の
機構としては、上述の一連の機構において、ニコチン酸
アミドなどのポリＡＤＰリボース合成酵素阻害物質で、
この酵素活性を制御すると、ＮＡＤ量の低下、プロイン
スリン合成の低下は阻止され、ＤＮＡ切断の修復は遅延
する。このようなＤＮＡ切断修復の遅延は、遺伝子の構
造変化の可能性を高め、がん遺伝子、増殖因子の遺伝子
の構造変化が起こってＢ細胞が腫瘍化するものと考えら
れる。
機構としては、上述の一連の機構において、ニコチン酸
アミドなどのポリＡＤＰリボース合成酵素阻害物質で、
この酵素活性を制御すると、ＮＡＤ量の低下、プロイン
スリン合成の低下は阻止され、ＤＮＡ切断の修復は遅延
する。このようなＤＮＡ切断修復の遅延は、遺伝子の構
造変化の可能性を高め、がん遺伝子、増殖因子の遺伝子
の構造変化が起こってＢ細胞が腫瘍化するものと考えら
れる。
【００１２】インスリン依存性糖尿病発生の場合には、
Ｂ細胞のＤＮＡが損傷を受けると、元来Ｂ細胞は分裂、
増殖をしにくい分化した細胞であることから、ＤＮＡ損
傷それ自体が直ちにＢ細胞の生存に致命的な結果をもた
らすというよりは、損傷されたＤＮＡを修復しようとす
る自滅応答によりＢ細胞が壊死し、プロインスリン合成
が低下するものと考えられる。
Ｂ細胞のＤＮＡが損傷を受けると、元来Ｂ細胞は分裂、
増殖をしにくい分化した細胞であることから、ＤＮＡ損
傷それ自体が直ちにＢ細胞の生存に致命的な結果をもた
らすというよりは、損傷されたＤＮＡを修復しようとす
る自滅応答によりＢ細胞が壊死し、プロインスリン合成
が低下するものと考えられる。
【００１３】一方、ポリＡＤＰリボース合成酵素阻害物
質は、この自滅応答を阻止しＢ細胞のＮＡＤ量は保た
れ、Ｂ細胞は壊死から免れるが、ＤＮＡ修復異常からＢ
細胞が腫瘍化する可能性が考えられる。即ち、細胞機能
を犠牲にしてまでも遺伝情報であるＤＮＡを正常に修復
しようとする応答がインスリン依存性糖尿病の発症の方
向であり、遺伝子（ＤＮＡ）の若干の修復異常は残した
まま細胞機能をそのまま維持してＢ細胞が生き続けよう
とすることがインスリノーマ発生の方向ではないかと推
定される。
質は、この自滅応答を阻止しＢ細胞のＮＡＤ量は保た
れ、Ｂ細胞は壊死から免れるが、ＤＮＡ修復異常からＢ
細胞が腫瘍化する可能性が考えられる。即ち、細胞機能
を犠牲にしてまでも遺伝情報であるＤＮＡを正常に修復
しようとする応答がインスリン依存性糖尿病の発症の方
向であり、遺伝子（ＤＮＡ）の若干の修復異常は残した
まま細胞機能をそのまま維持してＢ細胞が生き続けよう
とすることがインスリノーマ発生の方向ではないかと推
定される。
【００１４】
【実施例】以下、本発明を更に実施例について詳述す
る。 実施例１ （ａ） ｍＲＮＡの調製 任意に飼育した体重 150-200ｇの雄ウィスターラットを
用いストレプトゾトシン−ニコチン酸アミド併用投与あ
るいはアロキサン−ニコチン酸アミド併用投与により、
インスリノーマを誘発し、ランゲルハンス島をMol. Cel
l. Biochem. 37, 43−61（1981）に記載のコラゲナーゼ
消化法により得た。再生ランゲルハンス島はDiabetes 3
3, 401-404（1984）に記載のYonemuraらの方法により調
製した。これらのランゲルハンス島から、Biochemistr
y, 18, 5294−5299（1979）に記載のChirgwinらの方法
に従ってそれぞれＲＮＡを抽出した。これらのＲＮＡか
ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 1408−1412（19
72）に記載のAvivらの方法に従って、オリゴ（dT）−セ
ルロースカラムクロマトグラフィーによりポリ（Ａ） +
ＲＮＡを分離した。
る。 実施例１ （ａ） ｍＲＮＡの調製 任意に飼育した体重 150-200ｇの雄ウィスターラットを
用いストレプトゾトシン−ニコチン酸アミド併用投与あ
るいはアロキサン−ニコチン酸アミド併用投与により、
インスリノーマを誘発し、ランゲルハンス島をMol. Cel
l. Biochem. 37, 43−61（1981）に記載のコラゲナーゼ
消化法により得た。再生ランゲルハンス島はDiabetes 3
3, 401-404（1984）に記載のYonemuraらの方法により調
製した。これらのランゲルハンス島から、Biochemistr
y, 18, 5294−5299（1979）に記載のChirgwinらの方法
に従ってそれぞれＲＮＡを抽出した。これらのＲＮＡか
ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69, 1408−1412（19
72）に記載のAvivらの方法に従って、オリゴ（dT）−セ
ルロースカラムクロマトグラフィーによりポリ（Ａ） +
ＲＮＡを分離した。
【００１５】（ｂ） ｃＤＮＡの調製 前記（ａ）で得られたストレプトゾトシン−ニコチン酸
アミドで誘発したインスリノーマからのポリ（Ａ）+ Ｒ
ＮＡ（２μg ) を鋳型としてMol. Cell. Biol.2, 161
−170 （1982）に記載の Okayama−Berg法によりｃＤＮ
Ａを調製した。次にそのｃＤＮＡをJ. Biol. Chem. 26
1, 6156−6159（1986）に記載のYamamotoらの方法に従
い、Escherichia Coli K12のDH１株に形質転換し、 17
0,000個の形質転換細胞、ｃＤＮＡライブラリーを調製
した。なお、ハムスターインスリノーマはＢＫウイルス
で誘発し、ヒトインスリノーマは手術摘出したものを用
い同様にｃＤＮＡライブラリーを調製した。
アミドで誘発したインスリノーマからのポリ（Ａ）+ Ｒ
ＮＡ（２μg ) を鋳型としてMol. Cell. Biol.2, 161
−170 （1982）に記載の Okayama−Berg法によりｃＤＮ
Ａを調製した。次にそのｃＤＮＡをJ. Biol. Chem. 26
1, 6156−6159（1986）に記載のYamamotoらの方法に従
い、Escherichia Coli K12のDH１株に形質転換し、 17
0,000個の形質転換細胞、ｃＤＮＡライブラリーを調製
した。なお、ハムスターインスリノーマはＢＫウイルス
で誘発し、ヒトインスリノーマは手術摘出したものを用
い同様にｃＤＮＡライブラリーを調製した。
【００１６】（ｃ） ノーザンブロットハイブリダイゼ
ーション Biochem. Biophys. Res. Commun. 132, 885 −891 （19
85）に記載のOhsawaらの方法に従い25μg の前記（a ）
で得られたＲＮＡを 1.1M ホルムアルデヒドを含む 1.5
％（ｗ／ｖ）アガロースゲル上で電気泳動した後、ニト
ロセルロースフィルターに転写した。次に、このフィル
ターを80℃で２時間熱処理し、後記の実施例３で得られ
た32Ｐ−ＰstＩ−ＮaeＩＤＮＡフラグメントとハイブリ
ダイズさせオートラジオグラフィを行った。
ーション Biochem. Biophys. Res. Commun. 132, 885 −891 （19
85）に記載のOhsawaらの方法に従い25μg の前記（a ）
で得られたＲＮＡを 1.1M ホルムアルデヒドを含む 1.5
％（ｗ／ｖ）アガロースゲル上で電気泳動した後、ニト
ロセルロースフィルターに転写した。次に、このフィル
ターを80℃で２時間熱処理し、後記の実施例３で得られ
た32Ｐ−ＰstＩ−ＮaeＩＤＮＡフラグメントとハイブリ
ダイズさせオートラジオグラフィを行った。
【００１７】（ｄ） ＤＮＡ塩基配列決定 Methods Enzymol. 101, 20−78（1983）に記載の Messi
ngのジデオキシ・チェーン・ターミネイション法により
決定した。即ち、ラットインスリノーマにおいて増加し
ているｍＲＮＡに対応するクローン化したｃＤＮＡを制
限酵素により切断したものと制限酵素で切断したＭ13フ
ァージＤＮＡとをＴ4 ＤＮＡリガーゼで処理することに
より、ｃＤＮＡのベクターへの結合を行い、組換え体フ
ァージ２本鎖ＤＮＡを調製した。次に塩化カルシウム処
理した宿主菌にリガーゼ処理したベクターＤＮＡを加え
ることによりトランスフェクション（ＤＮＡ感染）を行
い、Ｘ-gal（５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル
−β−Ｄ−ガラクトシド）溶液を含む寒天プレート上で
培養し、感染菌を選び出す。このようにして得られた感
染菌のファージを増殖させ、ポリエチレングリコール処
理することにより組替え体ファージ１本鎖ＤＮＡを調製
した。
ngのジデオキシ・チェーン・ターミネイション法により
決定した。即ち、ラットインスリノーマにおいて増加し
ているｍＲＮＡに対応するクローン化したｃＤＮＡを制
限酵素により切断したものと制限酵素で切断したＭ13フ
ァージＤＮＡとをＴ4 ＤＮＡリガーゼで処理することに
より、ｃＤＮＡのベクターへの結合を行い、組換え体フ
ァージ２本鎖ＤＮＡを調製した。次に塩化カルシウム処
理した宿主菌にリガーゼ処理したベクターＤＮＡを加え
ることによりトランスフェクション（ＤＮＡ感染）を行
い、Ｘ-gal（５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル
−β−Ｄ−ガラクトシド）溶液を含む寒天プレート上で
培養し、感染菌を選び出す。このようにして得られた感
染菌のファージを増殖させ、ポリエチレングリコール処
理することにより組替え体ファージ１本鎖ＤＮＡを調製
した。
【００１８】この組替え体ファージ１本鎖ＤＮＡを鋳型
として、クローニング部位に隣接したファージＤＮＡの
領域と相補的なプライマーをアニーリングさせるために
55℃で５分間加熱した後、37℃に30分間放置する。次に
アニーリング処理した反応液に［α−32Ｐ］ｄｃＴＰ，
ＤＮＡポリメラーゼＩ Kelnow酵素溶液を加え混和後、
４本のチューブに分注し、それぞれに４種のデオキシヌ
クレオチドと１種の2′，3 ′−ジデオキシヌクレオチ
ドを混合した後、相補鎖伸長反応を行う。2 ′，3 ′−
ジデオキシヌクレオチドが取り込まれた位置でＤＮＡ鎖
の伸長が停止する。次に、この相補鎖伸長反応を停止
後、ポリアクリルアミドゲル（６％または８％）に重層
し、電気泳動にかけ、ついでオートラジオグラフィーを
行い塩基配列を解読することにより、ラットインスリノ
ーマにおいて増加しているｍＲＮＡに対応するクローン
化したｃＤＮＡの塩基配列を決定した。
として、クローニング部位に隣接したファージＤＮＡの
領域と相補的なプライマーをアニーリングさせるために
55℃で５分間加熱した後、37℃に30分間放置する。次に
アニーリング処理した反応液に［α−32Ｐ］ｄｃＴＰ，
ＤＮＡポリメラーゼＩ Kelnow酵素溶液を加え混和後、
４本のチューブに分注し、それぞれに４種のデオキシヌ
クレオチドと１種の2′，3 ′−ジデオキシヌクレオチ
ドを混合した後、相補鎖伸長反応を行う。2 ′，3 ′−
ジデオキシヌクレオチドが取り込まれた位置でＤＮＡ鎖
の伸長が停止する。次に、この相補鎖伸長反応を停止
後、ポリアクリルアミドゲル（６％または８％）に重層
し、電気泳動にかけ、ついでオートラジオグラフィーを
行い塩基配列を解読することにより、ラットインスリノ
ーマにおいて増加しているｍＲＮＡに対応するクローン
化したｃＤＮＡの塩基配列を決定した。
【００１９】実施例２ 後記の実施例３で得られたＰstＩ−ＮaeＩＤＮＡフラグ
メントを前記実施例１（ａ）で得られたＲＮＡとハイブ
リダイズした（ 0.7ｋベース）。ラットインスリノーマ
で増加しているｍＲＮＡのノーザンブロット法によるオ
ートラジオグラムを示す図１において、レーン１はラン
ゲルハンス島からのＲＮＡ、レーン２−４はストレプト
ゾトシン−ニコチン酸アミド併用投与による誘発インス
リノーマからのＲＮＡ、レーン５−７はアロキサン−ニ
コチン酸アミド併用投与による誘発インスリノーマから
のＲＮＡ、レーン８は再生ランゲルハンス島からのＲＮ
Ａ、レーン９−11は未処理ラットの肝臓、腎臓及び脳か
らのそれぞれのＲＮＡ、レーン12、13はストレプトゾト
シン−ニコチン酸アミド、あるいはアロキサン−ニコチ
ン酸アミドの併用投与したインスリノーマ形成ラット肝
臓からのＲＮＡを示す。矢印は試料ゲル上の28Ｓ、18Ｓ
及び４ＳのＲＮＡの泳動位置を示す。
メントを前記実施例１（ａ）で得られたＲＮＡとハイブ
リダイズした（ 0.7ｋベース）。ラットインスリノーマ
で増加しているｍＲＮＡのノーザンブロット法によるオ
ートラジオグラムを示す図１において、レーン１はラン
ゲルハンス島からのＲＮＡ、レーン２−４はストレプト
ゾトシン−ニコチン酸アミド併用投与による誘発インス
リノーマからのＲＮＡ、レーン５−７はアロキサン−ニ
コチン酸アミド併用投与による誘発インスリノーマから
のＲＮＡ、レーン８は再生ランゲルハンス島からのＲＮ
Ａ、レーン９−11は未処理ラットの肝臓、腎臓及び脳か
らのそれぞれのＲＮＡ、レーン12、13はストレプトゾト
シン−ニコチン酸アミド、あるいはアロキサン−ニコチ
ン酸アミドの併用投与したインスリノーマ形成ラット肝
臓からのＲＮＡを示す。矢印は試料ゲル上の28Ｓ、18Ｓ
及び４ＳのＲＮＡの泳動位置を示す。
【００２０】上記のＲＮＡは、図１に示されているよう
に明らかに正常ランゲルハンス島（レーン１）において
よりもストレプトゾトシン−ニコチン酸アミド誘発イン
スリノーマ（レーン２−４）において非常に高いレベル
で存在していた。同様にアロキサン−ニコチン酸アミド
誘発インスリノーマ（レーン５−７）においても 0.7ｋ
ベースのＲＮＡ量は増加していた。一方、再生ランゲル
ハンス島（レーン８）、未処理ラットの肝臓（レーン
９）、肝臓（レーン10）、脳（レーン11）、ストレプト
ゾトシン−ニコチン酸アミド併用投与した腫瘍形成ラッ
トの肝臓（レーン12）、アロキサン−ニコチン酸アミド
併用投与した腫瘍形成ラットの肝臓（レーン13）、にお
いては、 0.7ｋベースのＲＮＡ量は低かった。また、デ
ータは示していないがBKウイルスで誘発したハムスター
インスリノーマや手術摘出したヒトインスリノーマにお
いて 0.7ｋベースのＲＮＡ量は増加していたが、胃硬性
癌、胸部侵入管癌、甲状腺乳頭腺癌のような他のヒト腫
瘍においては 0.7ｋベースのＲＮＡ量は低かった。
に明らかに正常ランゲルハンス島（レーン１）において
よりもストレプトゾトシン−ニコチン酸アミド誘発イン
スリノーマ（レーン２−４）において非常に高いレベル
で存在していた。同様にアロキサン−ニコチン酸アミド
誘発インスリノーマ（レーン５−７）においても 0.7ｋ
ベースのＲＮＡ量は増加していた。一方、再生ランゲル
ハンス島（レーン８）、未処理ラットの肝臓（レーン
９）、肝臓（レーン10）、脳（レーン11）、ストレプト
ゾトシン−ニコチン酸アミド併用投与した腫瘍形成ラッ
トの肝臓（レーン12）、アロキサン−ニコチン酸アミド
併用投与した腫瘍形成ラットの肝臓（レーン13）、にお
いては、 0.7ｋベースのＲＮＡ量は低かった。また、デ
ータは示していないがBKウイルスで誘発したハムスター
インスリノーマや手術摘出したヒトインスリノーマにお
いて 0.7ｋベースのＲＮＡ量は増加していたが、胃硬性
癌、胸部侵入管癌、甲状腺乳頭腺癌のような他のヒト腫
瘍においては 0.7ｋベースのＲＮＡ量は低かった。
【００２１】実施例３ 実施例１（ｂ）で得られた 170,000クローンの形質転換
細胞ｃＤＮＡライブラリーから約 5,000クローンをディ
ファレンシャルスクリーニングのためにニトロセルロー
スフィルター上に転写した。その一組のフィルターはプ
ライマーとしてオリゴ（ｄＴ）と32Ｐ−ｄｃＴＰを用い
てインスリノーマのポリ（Ａ）+ ＲＮＡから逆転写して
調製した32Ｐ−ｃＤＮＡとハイブリダイズした。他の一
組のフィルターは正常ランゲルハンス島からのポリ
（Ａ）+ ＲＮＡから上記インスリノーマの場合と同様に
調製した32Ｐ−ｃＤＮＡとハイブリダイズした。 5,000
クローンのディファレンシャルスクリーニングで１個の
クローンの割合でインスリノーマからの32Ｐ−ｃＤＮＡ
と特異的にハイブリダイズした。プラスミドＤＮＡを上
記特異クローンから分離し、ＰstＩとＮaeＩで切り出し
た。
細胞ｃＤＮＡライブラリーから約 5,000クローンをディ
ファレンシャルスクリーニングのためにニトロセルロー
スフィルター上に転写した。その一組のフィルターはプ
ライマーとしてオリゴ（ｄＴ）と32Ｐ−ｄｃＴＰを用い
てインスリノーマのポリ（Ａ）+ ＲＮＡから逆転写して
調製した32Ｐ−ｃＤＮＡとハイブリダイズした。他の一
組のフィルターは正常ランゲルハンス島からのポリ
（Ａ）+ ＲＮＡから上記インスリノーマの場合と同様に
調製した32Ｐ−ｃＤＮＡとハイブリダイズした。 5,000
クローンのディファレンシャルスクリーニングで１個の
クローンの割合でインスリノーマからの32Ｐ−ｃＤＮＡ
と特異的にハイブリダイズした。プラスミドＤＮＡを上
記特異クローンから分離し、ＰstＩとＮaeＩで切り出し
た。
【００２２】ラット、ハムスター及びヒトの各インスリ
ノーマで特異的に発現している遺伝子のＤＮＡ塩基配列
決定法を示す図２において、右側の各数値はヌクレオチ
ド数を、各括弧内数値は制限酵素切断部位の5 ′端のヌ
クレオチド数を、太い実線は読み取り枠を、白抜き部分
はポリＡ（Ａｎ）を、矢印は塩基配列決定法の初めと方
向及び範囲を示している。
ノーマで特異的に発現している遺伝子のＤＮＡ塩基配列
決定法を示す図２において、右側の各数値はヌクレオチ
ド数を、各括弧内数値は制限酵素切断部位の5 ′端のヌ
クレオチド数を、太い実線は読み取り枠を、白抜き部分
はポリＡ（Ａｎ）を、矢印は塩基配列決定法の初めと方
向及び範囲を示している。
【００２３】図２に示すように 421塩基対（ヒトの場合
は 430塩基対）を持つＰstＩ−ＮaeＩＤＮＡフラグメン
トをニックトランスレーション法により32Ｐ−ｄＣＴＰ
で標識し、ラットインスリノーマの特異的相応ｍＲＮＡ
の水準測定のプローブとした。
は 430塩基対）を持つＰstＩ−ＮaeＩＤＮＡフラグメン
トをニックトランスレーション法により32Ｐ−ｄＣＴＰ
で標識し、ラットインスリノーマの特異的相応ｍＲＮＡ
の水準測定のプローブとした。
【００２４】実施例４ ラットインスリノーマにおいて増加しているｍＲＮＡに
対応するクローン化したｃＤＮＡの塩基配列を決定し、
それをそれから推定されたアミノ酸配列と共に図３に示
す。また、ハムスター及びヒトの各インスリノーマで特
異的に増加していることが認められたｍＲＮＡに相当す
るクローン化されたｃＤＮＡの塩基配列並びにそれから
推定されたアミノ酸配列をも同時に示す。ヌクレオチド
は5 ′から3 ′方向へ番号をつけ、最初のメチオニンを
コードしているＡＴＧから始まっている。推定アミノ酸
配列は塩基配列の上に示してあり、アミノ酸残基はメチ
オニンを１として始まる番号を付してある。アンダーラ
インはポリアデニル化シグナル（AATAAA）を、星印は、
ラットの上記ｃＤＮＡの塩基配列を基準にしてそれと異
なったハムスター及びヒトのｃＤＮＡの塩基配列部分に
付されている。
対応するクローン化したｃＤＮＡの塩基配列を決定し、
それをそれから推定されたアミノ酸配列と共に図３に示
す。また、ハムスター及びヒトの各インスリノーマで特
異的に増加していることが認められたｍＲＮＡに相当す
るクローン化されたｃＤＮＡの塩基配列並びにそれから
推定されたアミノ酸配列をも同時に示す。ヌクレオチド
は5 ′から3 ′方向へ番号をつけ、最初のメチオニンを
コードしているＡＴＧから始まっている。推定アミノ酸
配列は塩基配列の上に示してあり、アミノ酸残基はメチ
オニンを１として始まる番号を付してある。アンダーラ
インはポリアデニル化シグナル（AATAAA）を、星印は、
ラットの上記ｃＤＮＡの塩基配列を基準にしてそれと異
なったハムスター及びヒトのｃＤＮＡの塩基配列部分に
付されている。
【００２５】図３に示すように、ラットインスリノーマ
において増加しているｍＲＮＡに対応するクローン化し
たｃＤＮＡは 487個（ヒト及びハムスターの場合は各々
498個、 485個）のヌクレオチドとポリ（Ａ）より成
り、１つの大きな読み取り枠を持ち、ヌクレオチド１−
３番目のＡＴＧが開始コドンで、ヌクレオチド 436-438
番目のＴＡＧが停止コドンであるという仮定のもとに 1
45個のアミノ酸（分子量17,040）からなる蛋白質をコー
ドしていた。メチオニンコドン周辺の塩基配列 CCAAGAT
GGは、多くの真核細胞のｍＲＮＡに特徴的な開始配列に
よく一致していた。塩基配列から推定された蛋白質はア
ミノ酸残基61−68番目に推定上のnuclearlocationシグ
ナルを持つ非常に塩基性の蛋白質（アルギニンとリジン
31残基に対してグルタミン酸とアスパラギン酸14残基）
であった。そしてシグナルペプチドに特徴的な疎水性ア
ミノ酸集団は存在しなかった。
において増加しているｍＲＮＡに対応するクローン化し
たｃＤＮＡは 487個（ヒト及びハムスターの場合は各々
498個、 485個）のヌクレオチドとポリ（Ａ）より成
り、１つの大きな読み取り枠を持ち、ヌクレオチド１−
３番目のＡＴＧが開始コドンで、ヌクレオチド 436-438
番目のＴＡＧが停止コドンであるという仮定のもとに 1
45個のアミノ酸（分子量17,040）からなる蛋白質をコー
ドしていた。メチオニンコドン周辺の塩基配列 CCAAGAT
GGは、多くの真核細胞のｍＲＮＡに特徴的な開始配列に
よく一致していた。塩基配列から推定された蛋白質はア
ミノ酸残基61−68番目に推定上のnuclearlocationシグ
ナルを持つ非常に塩基性の蛋白質（アルギニンとリジン
31残基に対してグルタミン酸とアスパラギン酸14残基）
であった。そしてシグナルペプチドに特徴的な疎水性ア
ミノ酸集団は存在しなかった。
【００２６】これらの結果は、その蛋白質がＤＮＡのよ
うな核内酸性巨大分子と相互に作用していることを示し
ている。正常ランゲルハンス島における弱いハイブリダ
イゼーションシグナルは、正常細胞中の低いｍＲＮＡレ
ベル（図１レ−ン１）或は、腫瘍と正常細胞間のｍＲＮ
Ａの構造上の違いによるものとされる。J. Biol. Chem.
261, 6156−6159（1986）に記載のYamamotoらの方法に
従って調製したラット膵臓ランゲルハンス島ｃＤＮＡラ
イブラリーから正常ｃＤＮＡを分離し、その塩基配列が
決定された。この塩基配列はインスリノーマのものと一
致していることが見いだされた。このことはノーザンブ
ロットハイブリダイゼーション（図１）で観察されたバ
ンドの強度の違いは、専ら腫瘍と正常細胞におけるｍＲ
ＮＡ量の違いによるものであることを示している。
うな核内酸性巨大分子と相互に作用していることを示し
ている。正常ランゲルハンス島における弱いハイブリダ
イゼーションシグナルは、正常細胞中の低いｍＲＮＡレ
ベル（図１レ−ン１）或は、腫瘍と正常細胞間のｍＲＮ
Ａの構造上の違いによるものとされる。J. Biol. Chem.
261, 6156−6159（1986）に記載のYamamotoらの方法に
従って調製したラット膵臓ランゲルハンス島ｃＤＮＡラ
イブラリーから正常ｃＤＮＡを分離し、その塩基配列が
決定された。この塩基配列はインスリノーマのものと一
致していることが見いだされた。このことはノーザンブ
ロットハイブリダイゼーション（図１）で観察されたバ
ンドの強度の違いは、専ら腫瘍と正常細胞におけるｍＲ
ＮＡ量の違いによるものであることを示している。
【００２７】上記の如くして特徴付けられたｃＤＮＡの
塩基配列、及び推定されるアミノ酸配列と、European M
olecular Biology Laboratory （Heidelberg）, Gen Ba
nk（Cambridge, MA ）、及びNational Biomedical Rese
arch Foundation （Washington, D. C. ）の核酸及び蛋
白質のデータバンクに蓄えられている他の遺伝子、及び
蛋白質との関連をProc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 7
26− 730（1983）に記載のWilburらの rapid similarit
y search algorithmにより調べた。
塩基配列、及び推定されるアミノ酸配列と、European M
olecular Biology Laboratory （Heidelberg）, Gen Ba
nk（Cambridge, MA ）、及びNational Biomedical Rese
arch Foundation （Washington, D. C. ）の核酸及び蛋
白質のデータバンクに蓄えられている他の遺伝子、及び
蛋白質との関連をProc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 7
26− 730（1983）に記載のWilburらの rapid similarit
y search algorithmにより調べた。
【００２８】その結果、ｃＤＮＡのヌクレオチド残基99
− 174とラットc −mos の3 ′末端部分（ヌクレオチド
残基1070−1145）との間に僅かに相同性（52％）があっ
たけれどもこのｃＤＮＡに一致、或は強い相同性を有す
る遺伝子、及び遺伝子産物は存在しなかった。
− 174とラットc −mos の3 ′末端部分（ヌクレオチド
残基1070−1145）との間に僅かに相同性（52％）があっ
たけれどもこのｃＤＮＡに一致、或は強い相同性を有す
る遺伝子、及び遺伝子産物は存在しなかった。
【００２９】ｒｉｇと命名した全く新しい遺伝子がスト
レプトゾトシン−ニコチン酸アミド誘発インスリノーマ
とアロキサン−ニコチン酸アミド誘発インスリノーマの
両方において見いだされた。ストレプトゾトシンやアロ
キサンは、化学構造ばかりでなく、ＤＮＡ鎖損傷の様式
においても異なっている。ストレプトゾトシン、或はア
ロキサンより誘発されるインスリノーマの研究は、ｒｉ
ｇの活性化が膵臓Ｂ細胞腫瘍化の一般的な特徴であるこ
とを示している。実際に、ｒｉｇは、Experientia 36,
187− 188（1980）に記載のYamamotoらの方法でBKウイ
ルスを用いて誘発したハムスターインスリノーマや手術
摘出されたヒトインスリノーマにおいて活性化されてい
た。
レプトゾトシン−ニコチン酸アミド誘発インスリノーマ
とアロキサン−ニコチン酸アミド誘発インスリノーマの
両方において見いだされた。ストレプトゾトシンやアロ
キサンは、化学構造ばかりでなく、ＤＮＡ鎖損傷の様式
においても異なっている。ストレプトゾトシン、或はア
ロキサンより誘発されるインスリノーマの研究は、ｒｉ
ｇの活性化が膵臓Ｂ細胞腫瘍化の一般的な特徴であるこ
とを示している。実際に、ｒｉｇは、Experientia 36,
187− 188（1980）に記載のYamamotoらの方法でBKウイ
ルスを用いて誘発したハムスターインスリノーマや手術
摘出されたヒトインスリノーマにおいて活性化されてい
た。
【００３０】図３で明らかなようにハムスターインスリ
ノーマ及びヒトインスリノーマの各ライブラリーから分
離した各新遺伝子は、ラットインスリノーマから分離し
たｒｉｇと塩基配列で各々92％、91％、またコードして
いる 145個のアミノ酸配列では 100％一致していた。し
かし、胃硬性癌、胴部侵入管癌、及び甲状腺乳頭腺癌の
ような他のヒト腫瘍においては、ｒｉｇは、特異的には
発現が見られなかった。
ノーマ及びヒトインスリノーマの各ライブラリーから分
離した各新遺伝子は、ラットインスリノーマから分離し
たｒｉｇと塩基配列で各々92％、91％、またコードして
いる 145個のアミノ酸配列では 100％一致していた。し
かし、胃硬性癌、胴部侵入管癌、及び甲状腺乳頭腺癌の
ような他のヒト腫瘍においては、ｒｉｇは、特異的には
発現が見られなかった。
【００３１】
【発明の効果】これらの新蛋白質及び上記のＤＮＡ塩基
配列を有するＤＮＡ並びに上記のｍＲＮＡは、インスリ
ノーマないし膵臓癌の診断など膵臓疾患の医療上の目的
に極めて有用に用いることができる。
配列を有するＤＮＡ並びに上記のｍＲＮＡは、インスリ
ノーマないし膵臓癌の診断など膵臓疾患の医療上の目的
に極めて有用に用いることができる。
【図１】図１は、ラットインスリノーマで増加している
ｍＲＮＡのノーザンブロット法によるオートラジオグラ
ムである。
ｍＲＮＡのノーザンブロット法によるオートラジオグラ
ムである。
【図２】図２は、ラット、ハムスター及びヒトの各イン
スリノーマで特異的に発現している遺伝子のＤＮＡ塩基
配列決定法を示すものである。
スリノーマで特異的に発現している遺伝子のＤＮＡ塩基
配列決定法を示すものである。
【図３】図３は、ラット、ハムスター及びヒトの各イン
スリノーマで特異的に増加していることが認められたｍ
ＲＮＡに相当するクローン化されたｃＤＮＡの塩基配列
ならびにそれから推定されたアミノ酸配列である。
スリノーマで特異的に増加していることが認められたｍ
ＲＮＡに相当するクローン化されたｃＤＮＡの塩基配列
ならびにそれから推定されたアミノ酸配列である。
【図４】図４は、図３に示したｃＤＮＡの塩基配列なら
びにアミノ酸配列の続き部分である。
びにアミノ酸配列の続き部分である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 15/62 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｅ 8214−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｐ 7055−2Ｊ 33/574 Ａ 9015−2Ｊ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (1)
- 【請求項１】 下記のアミノ酸配列を有する新蛋白質。 【表１】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4291630A JP2700045B2 (ja) | 1986-08-22 | 1992-10-29 | インスリノーマで特異的に発現している遺伝子のコード蛋白質 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61195168A JP2560213B2 (ja) | 1986-08-22 | 1986-08-22 | インスリノ−マで特異的に発現している遺伝子のｄｎａ |
| JP4291630A JP2700045B2 (ja) | 1986-08-22 | 1992-10-29 | インスリノーマで特異的に発現している遺伝子のコード蛋白質 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61195168A Division JP2560213B2 (ja) | 1986-08-22 | 1986-08-22 | インスリノ−マで特異的に発現している遺伝子のｄｎａ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05320195A true JPH05320195A (ja) | 1993-12-03 |
| JP2700045B2 JP2700045B2 (ja) | 1998-01-19 |
Family
ID=16336567
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61195168A Expired - Lifetime JP2560213B2 (ja) | 1986-08-22 | 1986-08-22 | インスリノ−マで特異的に発現している遺伝子のｄｎａ |
| JP4291630A Expired - Lifetime JP2700045B2 (ja) | 1986-08-22 | 1992-10-29 | インスリノーマで特異的に発現している遺伝子のコード蛋白質 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61195168A Expired - Lifetime JP2560213B2 (ja) | 1986-08-22 | 1986-08-22 | インスリノ−マで特異的に発現している遺伝子のｄｎａ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4994565A (ja) |
| EP (1) | EP0258000B1 (ja) |
| JP (2) | JP2560213B2 (ja) |
| DE (1) | DE3777723D1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5241050A (en) * | 1986-08-22 | 1993-08-31 | Tohoku University | Nucleotide sequence of gene specifically expressed in insulinoma and protein encoded thereby |
| ES2052630T3 (es) * | 1987-04-09 | 1994-07-16 | Shionogi & Co | Gen reg y proteina codificada por el gen. |
| JPH01137994A (ja) * | 1987-08-10 | 1989-05-30 | Shionogi & Co Ltd | ｒｅｇ蛋白質 |
| US6225049B1 (en) | 1992-06-17 | 2001-05-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Human insulinoma-associated cDNA |
| JP6073295B2 (ja) * | 2011-05-27 | 2017-02-01 | コナヴィ メディカル インコーポレーテッド | 流体回転ジョイントを備える医療用プローブ |
-
1986
- 1986-08-22 JP JP61195168A patent/JP2560213B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1987
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