JPH05317088A - 腫瘍関連抗原に対するモノクローナル抗体、その製造方法およびその使用 - Google Patents
腫瘍関連抗原に対するモノクローナル抗体、その製造方法およびその使用Info
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 肺の腺癌の他に、主として乳房、卵巣および
前立腺の癌群の腫瘍に由来する腫瘍関連抗原に対するモ
ノクローナル抗体（これはさらに多形性上皮性ムチン
（ＰＥＭ）とも反応する）、殊にハイブリドーマ細胞株
ＢＷ８３５（DSM ACC 2022）から産生されるモノクロー
ナル抗体と、その製造並びにその使用に関する。 【効果】 該抗体により限定されるエピトープの診療お
よび治療のために有用である。
前立腺の癌群の腫瘍に由来する腫瘍関連抗原に対するモ
ノクローナル抗体（これはさらに多形性上皮性ムチン
（ＰＥＭ）とも反応する）、殊にハイブリドーマ細胞株
ＢＷ８３５（DSM ACC 2022）から産生されるモノクロー
ナル抗体と、その製造並びにその使用に関する。 【効果】 該抗体により限定されるエピトープの診療お
よび治療のために有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、肺の腺癌の他に、主と
して乳房、卵巣および前立腺の癌群に由来する腫瘍関連
抗原に対するモノクローナル抗体（これは、さらに多形
性上皮性ムチン（ＰＥＭ）とも反応する）、その製造お
よび使用並びに該抗体により限定される抗原決定基（エ
ピトープ）の診断および治療のための使用に関する。
して乳房、卵巣および前立腺の癌群に由来する腫瘍関連
抗原に対するモノクローナル抗体（これは、さらに多形
性上皮性ムチン（ＰＥＭ）とも反応する）、その製造お
よび使用並びに該抗体により限定される抗原決定基（エ
ピトープ）の診断および治療のための使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】ハイブリドーマ技術により、未精製の抗
原に対してすら特異的モノクローナル抗体（MAbs)を調
製することが可能となった。 この事実により、ある種の
ヒトの腫瘍上に存在するが、しかしまたヒト正常組織上
にも存在する、多数の腫瘍関連抗原（TAAs)を識別する
ことが可能となった。そのような腫瘍関連抗原の例は、
ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、Ｎ−ＣＡＭ（神経細胞粘着分
子）およびＰＥＭ（多形性上皮性ムチン）である。
原に対してすら特異的モノクローナル抗体（MAbs)を調
製することが可能となった。 この事実により、ある種の
ヒトの腫瘍上に存在するが、しかしまたヒト正常組織上
にも存在する、多数の腫瘍関連抗原（TAAs)を識別する
ことが可能となった。そのような腫瘍関連抗原の例は、
ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、Ｎ−ＣＡＭ（神経細胞粘着分
子）およびＰＥＭ（多形性上皮性ムチン）である。
【０００３】ＣＥＡは主として消化管の腺癌に発現し、
Ｎ−ＣＡＭは神経外胚葉から発生する腫瘍に存在し、Ｐ
ＥＭは主に乳房および卵巣の癌に出現する。前出の腫瘍
関連抗原は、ネズミの免疫系に対して多数の免疫原性エ
ピトープを担う高分子糖蛋白である。凍結保存ヒト組織
に関する比較免疫組織化学による研究により、腫瘍関連
抗原上のエピトープＩをそのイディオタイプ（可変領
域）で認識するモノクローナル抗体の特異性は、エピト
ープIIを識別するモノクローナル抗体とは異なる組織結
合性を示しうることが明らかになった（Bucheggerら (1
984)、Int. J. Cancer 33:643-649)。
Ｎ−ＣＡＭは神経外胚葉から発生する腫瘍に存在し、Ｐ
ＥＭは主に乳房および卵巣の癌に出現する。前出の腫瘍
関連抗原は、ネズミの免疫系に対して多数の免疫原性エ
ピトープを担う高分子糖蛋白である。凍結保存ヒト組織
に関する比較免疫組織化学による研究により、腫瘍関連
抗原上のエピトープＩをそのイディオタイプ（可変領
域）で認識するモノクローナル抗体の特異性は、エピト
ープIIを識別するモノクローナル抗体とは異なる組織結
合性を示しうることが明らかになった（Bucheggerら (1
984)、Int. J. Cancer 33:643-649)。
【０００４】この観察結果については様々な理由が考え
られる：ある種の組織におけるエピトープの隠蔽性、異
なる抗原上の交差反応性エピトープ、組織から血漿中へ
分泌された抗原の構造変化等である（Bossletら (198
8)、 Eur. J. Nucl. Med. 14: 523-528)。このことか
ら、モノクローナル抗体の特異性は、認識された抗原の
限定によって明確に与えられるものではなく、凍結保存
ヒト組織に対するその免疫組織化学的特異性およびヒト
血清または血漿中に循環している腫瘍関連抗原の構造に
ついてのその血清学的特異性と共に、モノクローナル抗
体可変領域の正確な読み取りにより与えられると結論付
けられよう。例えばヒトの母乳からShimizuによって分
離されたＰＥＭ（M. Shimizu および K. Yamauchi (198
2)、 J. Biochem. 91: 515-524）に対する多数のモノク
ローナル抗体が調製され、 これらは異なるエピトープに
結合し、従って、異なる特性を有する(Girlingら (198
9)、 43:1072-1076、 Taylor-Paradimitriouら (1981)、 I
nt. J. Cancer、 28: 17-21)。
られる：ある種の組織におけるエピトープの隠蔽性、異
なる抗原上の交差反応性エピトープ、組織から血漿中へ
分泌された抗原の構造変化等である（Bossletら (198
8)、 Eur. J. Nucl. Med. 14: 523-528)。このことか
ら、モノクローナル抗体の特異性は、認識された抗原の
限定によって明確に与えられるものではなく、凍結保存
ヒト組織に対するその免疫組織化学的特異性およびヒト
血清または血漿中に循環している腫瘍関連抗原の構造に
ついてのその血清学的特異性と共に、モノクローナル抗
体可変領域の正確な読み取りにより与えられると結論付
けられよう。例えばヒトの母乳からShimizuによって分
離されたＰＥＭ（M. Shimizu および K. Yamauchi (198
2)、 J. Biochem. 91: 515-524）に対する多数のモノク
ローナル抗体が調製され、 これらは異なるエピトープに
結合し、従って、異なる特性を有する(Girlingら (198
9)、 43:1072-1076、 Taylor-Paradimitriouら (1981)、 I
nt. J. Cancer、 28: 17-21)。
【０００５】ある種の抗ＰＥＭモノクローナル抗体（HM
FG1、2）は、 ヒトの乳房および卵巣の癌と強く反応する
が、しかしまた正常ヒト組織ともかなりの反応を示す(T
aylor-Paradimitriouら (1981))。 他のモノクローナル
抗体（SM3、 Girlingら(1989))は、乳房および卵巣の癌
とは弱くかつ非均質的に反応するが、他方正常ヒト組織
とはそれ程には反応しない。
FG1、2）は、 ヒトの乳房および卵巣の癌と強く反応する
が、しかしまた正常ヒト組織ともかなりの反応を示す(T
aylor-Paradimitriouら (1981))。 他のモノクローナル
抗体（SM3、 Girlingら(1989))は、乳房および卵巣の癌
とは弱くかつ非均質的に反応するが、他方正常ヒト組織
とはそれ程には反応しない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題およびその手段】驚くべ
きことに、我々は、肺の腺癌の他、乳房、卵巣および前
立腺の癌と強く反応するが、正常ヒト組織とは弱く結合
するだけであり、その上、ヒト血清または血漿中のＰＥ
Ｍを極めて特異的に検出し得る抗ＰＥＭモノクローナル
抗体を産生することに成功した。免疫化学的抗原決定法
は、当業者にとり既知である(Gosling(1990)、 Clin. Ch
em. 36/8、 1408-1427 参照）。 この関連では、例えば粒
子補強比濁法つまり濁度測定のような均質分析と、固相
分析とも呼ばれる非均質法間には本質的な区別が為され
る。固相分析は、固相に結合させた捕捉用抗体により分
析対象抗原が被験サンプルから固定され、該固定化抗原
を検出用標識分子を付与された（連結させた）第二の抗
体によって検出できるようデザインされている。このタ
イプの検出用標識は、当業者にとり既知で、例えば、酵
素、化学蛍光物質もしくは電気化学的蛍光物質、放射性
または他の着色性標識である。
きことに、我々は、肺の腺癌の他、乳房、卵巣および前
立腺の癌と強く反応するが、正常ヒト組織とは弱く結合
するだけであり、その上、ヒト血清または血漿中のＰＥ
Ｍを極めて特異的に検出し得る抗ＰＥＭモノクローナル
抗体を産生することに成功した。免疫化学的抗原決定法
は、当業者にとり既知である(Gosling(1990)、 Clin. Ch
em. 36/8、 1408-1427 参照）。 この関連では、例えば粒
子補強比濁法つまり濁度測定のような均質分析と、固相
分析とも呼ばれる非均質法間には本質的な区別が為され
る。固相分析は、固相に結合させた捕捉用抗体により分
析対象抗原が被験サンプルから固定され、該固定化抗原
を検出用標識分子を付与された（連結させた）第二の抗
体によって検出できるようデザインされている。このタ
イプの検出用標識は、当業者にとり既知で、例えば、酵
素、化学蛍光物質もしくは電気化学的蛍光物質、放射性
または他の着色性標識である。
【０００７】モノクローナル抗体ＢＷ８３５を産生する
ハイブリドーマ細胞株ＢＷ８３５は、ＤＳＭ（Deutsche
Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen Gmb
H、 Mascheroder Weg 1b、 D-3300 Braunschweig）に、 寄
託番号ＤＳＭ ＡＣＣ２０２２の下に１９９１年１０月
１１日に寄託された。本発明にいう抗体には抗体断片も
含まれる。
ハイブリドーマ細胞株ＢＷ８３５は、ＤＳＭ（Deutsche
Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen Gmb
H、 Mascheroder Weg 1b、 D-3300 Braunschweig）に、 寄
託番号ＤＳＭ ＡＣＣ２０２２の下に１９９１年１０月
１１日に寄託された。本発明にいう抗体には抗体断片も
含まれる。
【０００８】このモノクローナル抗体(ＢＷ８３５)の調
製および特性は以下に記載する：本モノクローナル抗体
は、Ｂａｌｂ／ｃマウスをＭＣＦ−７およびＳＷ−６１
３乳癌細胞株を用いて、文献により既知である方法で免
疫して作製した。
製および特性は以下に記載する：本モノクローナル抗体
は、Ｂａｌｂ／ｃマウスをＭＣＦ−７およびＳＷ−６１
３乳癌細胞株を用いて、文献により既知である方法で免
疫して作製した。
【０００９】凍結保存ヒト癌および正常ヒト組織上の、
モノクローナル抗体ＢＷ８３５により限定されたエピト
ープの分布を、モノクローナル抗体ＳＭ−３（Girling
ら 1989)と比較しながら、 表１、表２にそれぞれ示す。
データは、ＡＰＡＡＰ法 (Cordellら (1984)、 J. Histo
chem. Cytochem. 32: 219）を用いる免疫組織化学的検
出に基づいている。 モノクローナル抗体ＢＷ８３５は、
１５の被験乳癌のうち１５のすべての乳癌と強く反応
し、一方モノクローナル抗体ＳＭ−３は、１５の被験乳
癌のうち１１しか検出できないことがはっきりとわか
る。
モノクローナル抗体ＢＷ８３５により限定されたエピト
ープの分布を、モノクローナル抗体ＳＭ−３（Girling
ら 1989)と比較しながら、 表１、表２にそれぞれ示す。
データは、ＡＰＡＡＰ法 (Cordellら (1984)、 J. Histo
chem. Cytochem. 32: 219）を用いる免疫組織化学的検
出に基づいている。 モノクローナル抗体ＢＷ８３５は、
１５の被験乳癌のうち１５のすべての乳癌と強く反応
し、一方モノクローナル抗体ＳＭ−３は、１５の被験乳
癌のうち１１しか検出できないことがはっきりとわか
る。
【００１０】卵巣の癌の場合、モノクローナル抗体ＢＷ
８３５は、８被験腫瘍のうち６腫瘍と強く反応し、モノ
クローナル抗体ＳＭ−３は、８腫瘍のうち６腫瘍中の数
個の細胞と反応した。テストした他のすべての腫瘍タイ
プについては、モノクローナル抗体ＢＷ８３５は、特に
肺の腺癌および前立腺の癌と量的に強い反応を示した。
これらのデータは、モノクローナル抗体ＢＷ８３５は、
文献に開示されたモノクローナル抗体ＳＭ−３よりも量
的に強い反応性を有し、より多くの悪性腫瘍を検出する
ことを示している。
８３５は、８被験腫瘍のうち６腫瘍と強く反応し、モノ
クローナル抗体ＳＭ−３は、８腫瘍のうち６腫瘍中の数
個の細胞と反応した。テストした他のすべての腫瘍タイ
プについては、モノクローナル抗体ＢＷ８３５は、特に
肺の腺癌および前立腺の癌と量的に強い反応を示した。
これらのデータは、モノクローナル抗体ＢＷ８３５は、
文献に開示されたモノクローナル抗体ＳＭ−３よりも量
的に強い反応性を有し、より多くの悪性腫瘍を検出する
ことを示している。
【００１１】モノクローナル抗体ＢＷ８３５の正常ヒト
組織への結合は表２に示した。この場合にもデータを得
るためにＡＰＡＡＰ技法を採用した。モノクローナル抗
体ＢＷ８３５により限定されるエピトープは、乳房の管
上皮および膵臓の管上皮上に強く発現し、肺の表層上皮
上、いくつかの神経繊維上および腎集合管および腎糸球
体上には弱く発現していた。他のすべての被験正常組織
については陰性であった。
組織への結合は表２に示した。この場合にもデータを得
るためにＡＰＡＡＰ技法を採用した。モノクローナル抗
体ＢＷ８３５により限定されるエピトープは、乳房の管
上皮および膵臓の管上皮上に強く発現し、肺の表層上皮
上、いくつかの神経繊維上および腎集合管および腎糸球
体上には弱く発現していた。他のすべての被験正常組織
については陰性であった。
【００１２】その高い選択性ゆえに、モノクローナル抗
体ＢＷ８３５は、またインターナルイメージ、抗パラト
ープモノクローナル抗体インデューサーとして用いるこ
ともできる。このタイプのモノクローナル抗体は、エピ
トープワクチンとしてヒト腫瘍の治療に利用できるかも
しれない。
体ＢＷ８３５は、またインターナルイメージ、抗パラト
ープモノクローナル抗体インデューサーとして用いるこ
ともできる。このタイプのモノクローナル抗体は、エピ
トープワクチンとしてヒト腫瘍の治療に利用できるかも
しれない。
【００１３】モノクローナル抗体ＢＷ８３５によって限
定されるエピトープは、モノクローナル抗体ＳＭ−３に
よって限定されるＰＥＭ上に存在することが示された
が、これは、二重抗原決定基分析法（double-determina
nt assay）によって確認された。
定されるエピトープは、モノクローナル抗体ＳＭ−３に
よって限定されるＰＥＭ上に存在することが示された
が、これは、二重抗原決定基分析法（double-determina
nt assay）によって確認された。
【００１４】
【表１】
【００１５】
【表２】
【００１６】トラップとして用いられたモノクローナル
抗体ＢＷ８３５は、Ｔ４７細胞株の培養上清から、酵素
標識モノクローナル抗体ＳＭ−３によって検出できる抗
原を捕捉することができた。さらにウエスターンブロッ
ティングでは、両モノクローナル抗体はＰＥＭの分子量
の位置に相当する分子を染色した。
抗体ＢＷ８３５は、Ｔ４７細胞株の培養上清から、酵素
標識モノクローナル抗体ＳＭ−３によって検出できる抗
原を捕捉することができた。さらにウエスターンブロッ
ティングでは、両モノクローナル抗体はＰＥＭの分子量
の位置に相当する分子を染色した。
【００１７】モノクローナル抗体ＢＷ８３５の免疫学的
特異性のデータが明らかとなるや、直ちに１０8個のモ
ノクローナル抗体ＢＷ８３５産生ハイブリドーマ細胞か
らｍＲＮＡを分離し、モノクローナル抗体ＢＷ８３５の
Ｈ鎖およびＬ鎖の可変領域（Ｖ）遺伝子をOrlandiら((1
989)、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 3833-3837）に
より記載された方法で分離した。 さらに、Ｖ遺伝子の本
質的エクソン領域の核酸シーケンスをSangerら（(197
7)、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 5463-5467）の記
載した方法で決定した（図１、図２）。
特異性のデータが明らかとなるや、直ちに１０8個のモ
ノクローナル抗体ＢＷ８３５産生ハイブリドーマ細胞か
らｍＲＮＡを分離し、モノクローナル抗体ＢＷ８３５の
Ｈ鎖およびＬ鎖の可変領域（Ｖ）遺伝子をOrlandiら((1
989)、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 3833-3837）に
より記載された方法で分離した。 さらに、Ｖ遺伝子の本
質的エクソン領域の核酸シーケンスをSangerら（(197
7)、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 5463-5467）の記
載した方法で決定した（図１、図２）。
【００１８】ヒトの治療のためにマウス由来のモノクロ
ーナル抗体、例えばモノクローナル抗体ＢＷ８３５を繰
り返し、高接種量で与えることにより、患者を免疫する
ことが可能である。およそ１０−１４日後に抗マウス免
疫グロブリン抗体（ＨＡＭＡ）を産生することができる
（Millerら、(1983)、 Blood 62:988; Josephら、(1988)、
European Journal of Nuclear Medicine 14:367)。こ
のようなＨＡＭＡは、モノクローナル抗体の薬物動態学
および薬力学上、好ましくない影響を有するかもしれ
ず、さらにそのような治療を継続するのを妨げるかもし
れない。
ーナル抗体、例えばモノクローナル抗体ＢＷ８３５を繰
り返し、高接種量で与えることにより、患者を免疫する
ことが可能である。およそ１０−１４日後に抗マウス免
疫グロブリン抗体（ＨＡＭＡ）を産生することができる
（Millerら、(1983)、 Blood 62:988; Josephら、(1988)、
European Journal of Nuclear Medicine 14:367)。こ
のようなＨＡＭＡは、モノクローナル抗体の薬物動態学
および薬力学上、好ましくない影響を有するかもしれ
ず、さらにそのような治療を継続するのを妨げるかもし
れない。
【００１９】可能な限り異種抗体の免疫原性を減少させ
るために、異種抗体のＶLおよびＶH分域（ドメイン）の
相補性決定領域（ＣＤＲ）ループのみをヒト抗体のＶL
およびＶHドメインに移す技術が開発された（P. T. Jon
esら、(1986)、 Nature 321：522)(G. Winter、 EP-A-873
02620)。 この方法はヒューマニゼーション（ヒト化、hu
manization)と呼ばれ、ＶHおよびＶL遺伝子レべルで行
われる。
るために、異種抗体のＶLおよびＶH分域（ドメイン）の
相補性決定領域（ＣＤＲ）ループのみをヒト抗体のＶL
およびＶHドメインに移す技術が開発された（P. T. Jon
esら、(1986)、 Nature 321：522)(G. Winter、 EP-A-873
02620)。 この方法はヒューマニゼーション（ヒト化、hu
manization)と呼ばれ、ＶHおよびＶL遺伝子レべルで行
われる。
【００２０】抗体のヒト化の技術的手順は、本質的には
３つのセクションに分けられる：特異的ＶHおよびＶL遺
伝子のクローニングおよびその核酸シーケンスの解析、
ヒトＶHおよびＶLドメインへのＣＤＲループ移転のため
のコンピューター支援オリゴヌクレオチド合成デザイン
および特異的突然変異誘発によるヒトＶHおよびＶLドメ
インへのＣＤＲループの移転である（L. Riechmannら、
(1988)、 Nature 332:323; M. Verhoeyenら、 (1988)、 Sc
ience 239:1534)。
３つのセクションに分けられる：特異的ＶHおよびＶL遺
伝子のクローニングおよびその核酸シーケンスの解析、
ヒトＶHおよびＶLドメインへのＣＤＲループ移転のため
のコンピューター支援オリゴヌクレオチド合成デザイン
および特異的突然変異誘発によるヒトＶHおよびＶLドメ
インへのＣＤＲループの移転である（L. Riechmannら、
(1988)、 Nature 332:323; M. Verhoeyenら、 (1988)、 Sc
ience 239:1534)。
【００２１】この種のヒト化は、またin vivoでの利用
性を高めるためにモノクローナル抗体ＢＷ８３５をもと
に実施することもできる。 これにはモノクローナル抗体
ＢＷ８３５のＶHおよびＶLドメイン（E.A. Kabatらによ
り同定。 Sequences of Proteins of Immunological Int
erest 第4版、 US Dept. of Health and Human Service
s、 US Goverment Printing Office)の本物と同じＣＤＲ
領域、またはヒトＶHおよびＶLドメインに移されるいく
つかの変更アミノ酸をもつＣＤＲ領域をを必要とするで
あろう。ヒト化されたモノクローナル抗体ＢＷ８３５の
抗原結合特性における変化を最小限にするために、ＣＤ
Ｒ領域内に存在するフレームワーク領域のいくつかのア
ミノ酸は、マウス抗体からヒト化抗体（humanized anti
body）に引き継がれうる。
性を高めるためにモノクローナル抗体ＢＷ８３５をもと
に実施することもできる。 これにはモノクローナル抗体
ＢＷ８３５のＶHおよびＶLドメイン（E.A. Kabatらによ
り同定。 Sequences of Proteins of Immunological Int
erest 第4版、 US Dept. of Health and Human Service
s、 US Goverment Printing Office)の本物と同じＣＤＲ
領域、またはヒトＶHおよびＶLドメインに移されるいく
つかの変更アミノ酸をもつＣＤＲ領域をを必要とするで
あろう。ヒト化されたモノクローナル抗体ＢＷ８３５の
抗原結合特性における変化を最小限にするために、ＣＤ
Ｒ領域内に存在するフレームワーク領域のいくつかのア
ミノ酸は、マウス抗体からヒト化抗体（humanized anti
body）に引き継がれうる。
【００２２】ヒト化モノクローナル抗体ＢＷ８３５（hu
mMab BW 835)の可変ドメインは、従って、マウスモノク
ローナル抗体ＢＷ８３５のいくつかのアミノ酸が変更さ
れているか、または本物と同じマウスＣＤＲ領域が移さ
れたヒトモノクローナル抗体の可変ドメインのフレーム
ワーク領域（これは本物と同じかまたは数箇所において
修飾されている）から成る。
mMab BW 835)の可変ドメインは、従って、マウスモノク
ローナル抗体ＢＷ８３５のいくつかのアミノ酸が変更さ
れているか、または本物と同じマウスＣＤＲ領域が移さ
れたヒトモノクローナル抗体の可変ドメインのフレーム
ワーク領域（これは本物と同じかまたは数箇所において
修飾されている）から成る。
【００２３】
【実施例】下記の実施例では、Ｖ遺伝子のクローニング
および核酸シーケンス解析、並びにキメラモノクローナ
ル抗体としてのＢＷ８３５の特異性発現のために必要な
工程を述べる。実施例１−１２で用いられた技術は、特
に指定されない限り、分子クローニング、実験室手法
（Molecular Cloning, a Laboratory Manual; Sambroo
k、Fritsch、 Maniatis; Cold Spring Harbor Laborator
y、 1982 (11-44、 51-127、 133-134、 141、 146、 150-16
7、 170、 188-193、 197-199、 248-255、 270-294、310-32
8、 364-401、 437-506ページ)および分子クローニング、
実験室手法 第2版（Molecular Cloning, a Laboratory
Manual Second Edition; Sambrook、 Fritsch、 Maniati
s; Cold Spring Harbor Laboratory Press、 1989(16.2-
16.22、 16.30-16.40、 16.54-16.55ページ)から採用し
た。
および核酸シーケンス解析、並びにキメラモノクローナ
ル抗体としてのＢＷ８３５の特異性発現のために必要な
工程を述べる。実施例１−１２で用いられた技術は、特
に指定されない限り、分子クローニング、実験室手法
（Molecular Cloning, a Laboratory Manual; Sambroo
k、Fritsch、 Maniatis; Cold Spring Harbor Laborator
y、 1982 (11-44、 51-127、 133-134、 141、 146、 150-16
7、 170、 188-193、 197-199、 248-255、 270-294、310-32
8、 364-401、 437-506ページ)および分子クローニング、
実験室手法 第2版（Molecular Cloning, a Laboratory
Manual Second Edition; Sambrook、 Fritsch、 Maniati
s; Cold Spring Harbor Laboratory Press、 1989(16.2-
16.22、 16.30-16.40、 16.54-16.55ページ)から採用し
た。
【００２４】実施例１ ヒトIgG3△C遺伝子を含むプラスミドクローン54.1.24
（図３）（DE-A1-38 25615、 図３）をPstIで切断した。
これから生じたベクターを、生じたPstI挿入フラグメン
トのうち最大のものに連結し、 細菌にトランスフォーム
した。H1、H2およびH3エクソンが欠失している（IgG
3△)ヒトIgG3△C遺伝子を含むプラスミドクローンＡを
制限酵素分析および核酸シーケンス決定により同定し
た。
（図３）（DE-A1-38 25615、 図３）をPstIで切断した。
これから生じたベクターを、生じたPstI挿入フラグメン
トのうち最大のものに連結し、 細菌にトランスフォーム
した。H1、H2およびH3エクソンが欠失している（IgG
3△)ヒトIgG3△C遺伝子を含むプラスミドクローンＡを
制限酵素分析および核酸シーケンス決定により同定し
た。
【００２５】実施例２ 該プラスミドクローンＡをHindIIIおよびEcoRIで切断
し、 クレノーポリメラーゼで末端を補充し、IgG3△イン
サートを分離し、 SacIで切断しT4ポリメラーゼで平滑末
端としたpUC19ベクターに連結した。 HindIII切断部位が
pUC19ポリリンカーの５′末端に、EcoRIの切断部位が
３′末端に位置するような方向に、IgG3△遺伝子が挿入
されたプラスミドクローンＢを、制限地図および核酸シ
ーケンス分析で同定した（図４）。
し、 クレノーポリメラーゼで末端を補充し、IgG3△イン
サートを分離し、 SacIで切断しT4ポリメラーゼで平滑末
端としたpUC19ベクターに連結した。 HindIII切断部位が
pUC19ポリリンカーの５′末端に、EcoRIの切断部位が
３′末端に位置するような方向に、IgG3△遺伝子が挿入
されたプラスミドクローンＢを、制限地図および核酸シ
ーケンス分析で同定した（図４）。
【００２６】実施例３ プラスミドクローンＢをEcoRIおよびHindIIIで切断し、
IgG3△インサートを分離し、同様にHindIIIおよびEcoRI
で切断したKS+プラスミドベクター(pBluescript II KS
+; Stratagene、 La Jolla、 CA)に連結した。 IgG3△遺
伝子の５′末端および３′末端でBamHI切断部位と接す
るプラスミドクローンＣを分離した（図５）。
IgG3△インサートを分離し、同様にHindIIIおよびEcoRI
で切断したKS+プラスミドベクター(pBluescript II KS
+; Stratagene、 La Jolla、 CA)に連結した。 IgG3△遺
伝子の５′末端および３′末端でBamHI切断部位と接す
るプラスミドクローンＣを分離した（図５）。
【００２７】実施例４ プラスミドクローンＣをBamHIで切断し、IgG3△インサ
ートを分離し、同様にBamHIで切断した発現ベクターpAB
Stop (Wirthら (1988)、 Gene 73:419-426)に連結した。
図６に示した方向にIgG3△C遺伝子を含む発現プラスミ
ドＤを同定した。このクローニングでpABStopベクター
は、 二つのBamHI切断部位の間に位置するポリアデニル
化シグナルおよびSV40ストップを失った。
ートを分離し、同様にBamHIで切断した発現ベクターpAB
Stop (Wirthら (1988)、 Gene 73:419-426)に連結した。
図６に示した方向にIgG3△C遺伝子を含む発現プラスミ
ドＤを同定した。このクローニングでpABStopベクター
は、 二つのBamHI切断部位の間に位置するポリアデニル
化シグナルおよびSV40ストップを失った。
【００２８】実施例５ 発現プラスミドＤをBamHIで部分的に切断し、末端をク
レノーポリメラーゼで補充し再連結した。IgG3△遺伝子
から３′側のBamHI切断部位が破壊された発現プラスミ
ドＥを分離した（図７）。
レノーポリメラーゼで補充し再連結した。IgG3△遺伝子
から３′側のBamHI切断部位が破壊された発現プラスミ
ドＥを分離した（図７）。
【００２９】実施例６ ヒトＣカッパ遺伝子（Hieterら (1982)、 J.Biol.Chem.
257:No.3 1516-1522)を、 P.Leder教授(Harvard Medical
School)から分与されたpBR322でクローニングしたEcoR
Iフラグメントとして得た。 pBR322ベクターをEcoRIで切
断し、 EcoRI切断部位を補充し、 Ｃカッパインサートを
分離し、 SmaIで切断したpUC19ベクターに連結した。 Ｃ
カッパ遺伝子の５′末端でBamHI切断部位の後のHindIII
切断部位と接し、３′末端でEcoRI切断部位と接するプ
ラスミドクローンＦを分離した（図８）。
257:No.3 1516-1522)を、 P.Leder教授(Harvard Medical
School)から分与されたpBR322でクローニングしたEcoR
Iフラグメントとして得た。 pBR322ベクターをEcoRIで切
断し、 EcoRI切断部位を補充し、 Ｃカッパインサートを
分離し、 SmaIで切断したpUC19ベクターに連結した。 Ｃ
カッパ遺伝子の５′末端でBamHI切断部位の後のHindIII
切断部位と接し、３′末端でEcoRI切断部位と接するプ
ラスミドクローンＦを分離した（図８）。
【００３０】実施例７ プラスミドクローンＦをHindIIIおよびEcoRIで切断し、
Ｃカッパインサートを分離し、 HindIII/EcoRI切断KS＋
プラスミドでクローニングした。Ｃカッパインサートの
５′および３′末端でBamHI切断部位と接するプラスミ
ドクローンＧを分離した（図９）。
Ｃカッパインサートを分離し、 HindIII/EcoRI切断KS＋
プラスミドでクローニングした。Ｃカッパインサートの
５′および３′末端でBamHI切断部位と接するプラスミ
ドクローンＧを分離した（図９）。
【００３１】実施例８ プラスミドクローンＧをBamHIで切断し、Ｃカッパイン
サートを分離し、BamHIで切断したpABストップベクター
でクローニングした。 pABストップベクターのHindIII切
断部位がその５′末端側に位置するような方向に、Ｃカ
ッパ遺伝子が挿入されているクローンＨを、制限地図お
よび核酸シーケンス分析により同定した（図１０）。
サートを分離し、BamHIで切断したpABストップベクター
でクローニングした。 pABストップベクターのHindIII切
断部位がその５′末端側に位置するような方向に、Ｃカ
ッパ遺伝子が挿入されているクローンＨを、制限地図お
よび核酸シーケンス分析により同定した（図１０）。
【００３２】実施例９ クローンＨを部分的にBamHIで切断し、制限末端を補充
し再連結した。Ｃカッパ遺伝子の３′側のBamHI切断部
位が破壊されているクローンＩを制限地図で同定した
（図１１）。
し再連結した。Ｃカッパ遺伝子の３′側のBamHI切断部
位が破壊されているクローンＩを制限地図で同定した
（図１１）。
【００３３】実施例１０ モノクローナル抗体ＢＷ８３５のＶHおよびＶK遺伝子
を、ＰＣＲ技法およびOrlandiらの方法(1989)による特
異的オリゴヌクレオチドを用いて増幅し、適切な制限酵
素切断部位を有し、 ＶHおよびＶK遺伝子を含むKS＋ベク
ター(GuessowおよびSeemann (1991)、 Methods in Enzym
ology 203巻)（ＶHについては図１２ａ、ＶKについては
図１２ｂ）でクローニングした。モノクローナル抗体Ｂ
Ｗ８３５のＶH（K1)およびＶK(K2)遺伝子を含むクロー
ンＫ１およびＫ２を分離した（図１３）。
を、ＰＣＲ技法およびOrlandiらの方法(1989)による特
異的オリゴヌクレオチドを用いて増幅し、適切な制限酵
素切断部位を有し、 ＶHおよびＶK遺伝子を含むKS＋ベク
ター(GuessowおよびSeemann (1991)、 Methods in Enzym
ology 203巻)（ＶHについては図１２ａ、ＶKについては
図１２ｂ）でクローニングした。モノクローナル抗体Ｂ
Ｗ８３５のＶH（K1)およびＶK(K2)遺伝子を含むクロー
ンＫ１およびＫ２を分離した（図１３）。
【００３４】実施例１１ クローンＫ１およびＫ２からのモノクローナル抗体ＢＷ
８３５のＶHおよびＶK遺伝子の核酸シーケンスを、Sang
erら(1977)の方法で決定した（図１および図２）。Sara
goviらの方法(Saragoviら (1991)、 Science 253:792-79
5)によって、このシーケンスからのＣＤＲに基づき模倣
物を製作することができる。さらにＶHおよびＶK遺伝子
インサートを、制限酵素エンドヌクレアーゼHindIIIお
よびBamHIを用いてクローンＫ１およびＫ２から切り出
し、同様にHindIIIおよびBamHIで切断したベクターＤ
（ＶH）およびＩ（ＶK）でクローニングした。モノクロ
ーナル抗体ＢＷ８３５の可変遺伝子を有する免疫グロブ
リンＨ鎖（Ｌ1）（図１４）およびＬ鎖（Ｌ2）（図１
５）遺伝子を含む、発現ベクターＬ1およびＬ2を分離し
た。発現ベクターＬ1およびＬ2は、モノクローナル抗体
ＢＷ８３５の特異性を有するキメラモノクローナル抗体
の発現のために用いることができる。
８３５のＶHおよびＶK遺伝子の核酸シーケンスを、Sang
erら(1977)の方法で決定した（図１および図２）。Sara
goviらの方法(Saragoviら (1991)、 Science 253:792-79
5)によって、このシーケンスからのＣＤＲに基づき模倣
物を製作することができる。さらにＶHおよびＶK遺伝子
インサートを、制限酵素エンドヌクレアーゼHindIIIお
よびBamHIを用いてクローンＫ１およびＫ２から切り出
し、同様にHindIIIおよびBamHIで切断したベクターＤ
（ＶH）およびＩ（ＶK）でクローニングした。モノクロ
ーナル抗体ＢＷ８３５の可変遺伝子を有する免疫グロブ
リンＨ鎖（Ｌ1）（図１４）およびＬ鎖（Ｌ2）（図１
５）遺伝子を含む、発現ベクターＬ1およびＬ2を分離し
た。発現ベクターＬ1およびＬ2は、モノクローナル抗体
ＢＷ８３５の特異性を有するキメラモノクローナル抗体
の発現のために用いることができる。
【００３５】実施例１２および１３は悪性腫瘍の血清学
的診断のためのモノクローナル抗体ＢＷ８３５の使用を
説明するためのものである。実施例１２ マイクロタイタープレート（NUNC)の穴の壁にモノクロ
ーナル抗体ＢＷ８３５を、 当業者にとり既知の方法で吸
着により結合させた(P.Tijssen "Practice andtheory o
f enzyme immunoassay" Elsevier (1988)、 297-328)。
上記のように準備し、さらに各々１００μｌの緩衝液(O
SND、 Behringwerke)を含む各穴に、１０μｌのサンプル
をピペットで分注し、さらに３７℃で２時間インキュベ
ートした。希釈Enzygnost洗浄用緩衝液(OSEW、 Behringw
erke)で３度洗浄後、既知の方法でペルオキシダーゼと
結合させたモノクローナル抗体ＢＷ８３５の１００μｌ
（1μg/ml)を各穴に加えた。 その後３７℃で２時間イン
キュベートし、該工程後３度洗浄した。続いて３番目の
室温でのインキュベーション工程のために、１００μｌ
の緩衝液／基質色原体溶液（OUVG/OUVF、 Behringwerke)
を、 各穴にピペットで分注し、酵素反応を１００μｌの
Enzygnost停止溶液(OSFA、 Behringwerke)で３０分後に
停止させた。サンプルの消光を４５０ｎｍで測定した。結果 この方法で測定した消光の程度は、サンプル中の抗原濃
度に対応する。悪性腫瘍をもつ患者の血清または血漿中
の、モノクローナル抗体ＢＷ８３５に特異的に結合する
ことにより識別される抗原の濃度は、健康な患者のそれ
と比較して明らかに上昇していた（図１６）。このこと
は、特に乳房の癌の後期にある患者に当てはまり、しか
も驚くべきことに、血清中の乳癌関連抗原検出用の市販
腫瘍マーカーテストで非常にしばしば偽陰性を示す初期
癌患者にも当てはまり、従って、記載したような同種例
では、全体的に優れた感度が認められた。
的診断のためのモノクローナル抗体ＢＷ８３５の使用を
説明するためのものである。実施例１２ マイクロタイタープレート（NUNC)の穴の壁にモノクロ
ーナル抗体ＢＷ８３５を、 当業者にとり既知の方法で吸
着により結合させた(P.Tijssen "Practice andtheory o
f enzyme immunoassay" Elsevier (1988)、 297-328)。
上記のように準備し、さらに各々１００μｌの緩衝液(O
SND、 Behringwerke)を含む各穴に、１０μｌのサンプル
をピペットで分注し、さらに３７℃で２時間インキュベ
ートした。希釈Enzygnost洗浄用緩衝液(OSEW、 Behringw
erke)で３度洗浄後、既知の方法でペルオキシダーゼと
結合させたモノクローナル抗体ＢＷ８３５の１００μｌ
（1μg/ml)を各穴に加えた。 その後３７℃で２時間イン
キュベートし、該工程後３度洗浄した。続いて３番目の
室温でのインキュベーション工程のために、１００μｌ
の緩衝液／基質色原体溶液（OUVG/OUVF、 Behringwerke)
を、 各穴にピペットで分注し、酵素反応を１００μｌの
Enzygnost停止溶液(OSFA、 Behringwerke)で３０分後に
停止させた。サンプルの消光を４５０ｎｍで測定した。結果 この方法で測定した消光の程度は、サンプル中の抗原濃
度に対応する。悪性腫瘍をもつ患者の血清または血漿中
の、モノクローナル抗体ＢＷ８３５に特異的に結合する
ことにより識別される抗原の濃度は、健康な患者のそれ
と比較して明らかに上昇していた（図１６）。このこと
は、特に乳房の癌の後期にある患者に当てはまり、しか
も驚くべきことに、血清中の乳癌関連抗原検出用の市販
腫瘍マーカーテストで非常にしばしば偽陰性を示す初期
癌患者にも当てはまり、従って、記載したような同種例
では、全体的に優れた感度が認められた。
【００３６】実施例１３ モノクローナル抗体ＢＷ８３５と組み合わせた二重抗原
決定基分析において、血清中のＰＥＭを検出するため
に、該抗体により識別される腫瘍関連抗原上の別のエピ
トープを認識する他のペルオキシダーゼ標識抗体を用い
ることも可能である。このために、例えば、実施例１２
と類似のテストを、文献に開示されたDF3抗体（Kufe (1
984)、 Hybridoma 3:223)を連結用成分としてペルオキシ
ダーゼ標識形(CA15-3-Test、Boehringer Mannheim)を用
いて実施した。結果 固相結合ＢＷ８３５を補足するために連結用成分とし
て、 例えばDF3-PODを使用することにより、正常血清プ
ールおよび良性疾患患者と比較して、腫瘍血清は明らか
に高い血清値を示した。このことにより、重ねて、モノ
クローナル抗体ＢＷ８３５の、腫瘍マーカーテストのた
めの特異的な成分としての有用性が強調される（図１
７）。
決定基分析において、血清中のＰＥＭを検出するため
に、該抗体により識別される腫瘍関連抗原上の別のエピ
トープを認識する他のペルオキシダーゼ標識抗体を用い
ることも可能である。このために、例えば、実施例１２
と類似のテストを、文献に開示されたDF3抗体（Kufe (1
984)、 Hybridoma 3:223)を連結用成分としてペルオキシ
ダーゼ標識形(CA15-3-Test、Boehringer Mannheim)を用
いて実施した。結果 固相結合ＢＷ８３５を補足するために連結用成分とし
て、 例えばDF3-PODを使用することにより、正常血清プ
ールおよび良性疾患患者と比較して、腫瘍血清は明らか
に高い血清値を示した。このことにより、重ねて、モノ
クローナル抗体ＢＷ８３５の、腫瘍マーカーテストのた
めの特異的な成分としての有用性が強調される（図１
７）。
【図１】ＢＷ８３５ ＶＨの核酸シーケンスを示す。
【図２】ＢＷ８３５ ＶＫの核酸シーケンスを示す。
【図３】ヒトIgG3△遺伝子を含むプラスミドクローン5
4.1.24からの、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３エクソンが欠失し
ているヒトIgG3△遺伝子を含むプラスミドクローンＡの
構築過程を示す。
4.1.24からの、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３エクソンが欠失し
ているヒトIgG3△遺伝子を含むプラスミドクローンＡの
構築過程を示す。
【図４】プラスミドクローンＡをHindIIIおよびEcoRIで
切断した断片をpUC19ベクターに連結するIgG3△遺伝子
が挿入されたプラスミドクローンＢの構築過程を示す。
切断した断片をpUC19ベクターに連結するIgG3△遺伝子
が挿入されたプラスミドクローンＢの構築過程を示す。
【図５】プラスミドクローンＢをEcoRIおよびHindIIIで
切断してIgG3△インサートを分離し、同様にHindIIIお
よびEcoRIで切断したＫＳ＋プラスミドベクターと連結
してIgG3△遺伝子の５′および３′末端でBamHIと接す
るプラスミドクローンＣを構築する過程を示す。
切断してIgG3△インサートを分離し、同様にHindIIIお
よびEcoRIで切断したＫＳ＋プラスミドベクターと連結
してIgG3△遺伝子の５′および３′末端でBamHIと接す
るプラスミドクローンＣを構築する過程を示す。
【図６】プラスミドクローンＣをBamHIで切断し、同様
にBamHIで切断した発現ベクターpAB Stopと連結してIgG
3△遺伝子を含むプラスミドＤを構築する過程を示す。
にBamHIで切断した発現ベクターpAB Stopと連結してIgG
3△遺伝子を含むプラスミドＤを構築する過程を示す。
【図７】発現プラスミドＤをBamHIで切断し、末端補充
し再連結してIgG3△遺伝子から３′側のBamHI切断部位
が破壊された発現プラスミドＥの構築の過程を示す。
し再連結してIgG3△遺伝子から３′側のBamHI切断部位
が破壊された発現プラスミドＥの構築の過程を示す。
【図８】pBR322でクローニングしたヒトＣカッパ遺伝子
をSmalで切断したpUC19ベクターに連結してＣカッパ遺
伝子を含むプラスミドクローンＦを構築する過程を示
す。
をSmalで切断したpUC19ベクターに連結してＣカッパ遺
伝子を含むプラスミドクローンＦを構築する過程を示
す。
【図９】プラスミドクローンＦをHindIIIおよびEcoRIで
切断した断片をＫＳ＋プラスミドに連結してＣカッパイ
ンサートを有するプラスミドクローンＧを構築する過程
を示す。
切断した断片をＫＳ＋プラスミドに連結してＣカッパイ
ンサートを有するプラスミドクローンＧを構築する過程
を示す。
【図１０】プラスミドクローンＧをBamHIで切断してＣ
カッパインサートを分離し、同様にBamHIで切断したｐ
ＡＢストックベクターと連結してＣカッパ遺伝子が挿入
されたクローンＨを構築する過程を示す。
カッパインサートを分離し、同様にBamHIで切断したｐ
ＡＢストックベクターと連結してＣカッパ遺伝子が挿入
されたクローンＨを構築する過程を示す。
【図１１】クローンＨを部分的にBamHIで切断し、末端
補充し再連結してＣカッパ遺伝子の３′側のBamHI切断
部位が破壊されたクローンＩを構築する過程を示す。
補充し再連結してＣカッパ遺伝子の３′側のBamHI切断
部位が破壊されたクローンＩを構築する過程を示す。
【図１２】ａはモノクローナル抗体ＢＷ８３５のＶH遺
伝子、ｂはモノクローナル抗体ＢＷ８３５のＶK遺伝子
を示す。
伝子、ｂはモノクローナル抗体ＢＷ８３５のＶK遺伝子
を示す。
【図１３】モノクローナル抗体ＢＷ８３５のＶHおよび
ＶK遺伝子をＰＣＲによって増幅し、夫々ＫＳ＋ベクタ
ーに挿入して得られるモノクローナル抗体ＢＷ８３５の
ＶHおよびＶH遺伝子を含むクローンＫ１およびクローン
Ｋ２を示す。
ＶK遺伝子をＰＣＲによって増幅し、夫々ＫＳ＋ベクタ
ーに挿入して得られるモノクローナル抗体ＢＷ８３５の
ＶHおよびＶH遺伝子を含むクローンＫ１およびクローン
Ｋ２を示す。
【図１４】遺伝子インサートをクローンＫ１から切り出
し、HindIIIおよびBamHIで切断したベクターＤと連結し
て発現ベクターＬ1を構築する過程を示す。
し、HindIIIおよびBamHIで切断したベクターＤと連結し
て発現ベクターＬ1を構築する過程を示す。
【図１５】ＶK遺伝子インサートをクローンＫ２から切
り出し、HindIIIおよびBamHIで切断したベクターＩと連
結して発現ベクターＬ2を構築する過程を示す。
り出し、HindIIIおよびBamHIで切断したベクターＩと連
結して発現ベクターＬ2を構築する過程を示す。
【図１６】血清試料中の抗原濃度をモノクローナル抗体
ＢＷ８３５を用いて測定した結果を示す。
ＢＷ８３５を用いて測定した結果を示す。
【図１７】DF3-PODを使用することによりＢＷ８３５が
腫瘍マーカーテストのための特異成分として有用である
ことを示す試験結果を示す。
腫瘍マーカーテストのための特異成分として有用である
ことを示す試験結果を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ 9015−2Ｊ // Ａ６１Ｂ 10/00 Ｔ Ｃ１２Ｎ 15/06 15/13 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 ペーター・プフライデラー ドイツ連邦共和国デー−3550マルブルク. アウフデムシヤウムリユク１ (72)発明者 ゲールハルト・ゼーマン ドイツ連邦共和国デー−3550マルブルク. ヴアイスドルンヴエーク32
Claims (18)
- 【請求項１】 腫瘍関連抗原に対するモノクローナル抗
体であって、該抗原が、肺の腺癌だけでなく、乳房、卵
巣および前立腺の癌群からの腫瘍に主に由来し、該抗体
がさらに多形性上皮性ムチンとも反応するものである、
モノクローナル抗体。 - 【請求項２】 該抗体がモノクローナル抗体ＢＷ８３５
である、請求項１記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項３】 参照抗体ＢＷ８３５が結合するエピトー
プと結合する、請求項１記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項４】 ハイブリドーマ細胞株ＢＷ８３５が産生
する、請求項１記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項５】 請求項１記載のモノクローナル抗体を産
生するハイブリドーマ細胞株。 - 【請求項６】 参照抗体が結合するのと同じエピトープ
に結合する、例えばモノクローナル抗体のような特異的
結合相手。 - 【請求項７】 参照抗体ＢＷ８３５と結合する抗原。
- 【請求項８】 参照抗体ＢＷ８３５と結合するエピトー
プ。 - 【請求項９】 請求項１に記載の抗体との免疫吸着によ
り得られる抗原。 - 【請求項１０】 in vitro診断補助における、 請求項１
記載の抗体の使用。 - 【請求項１１】 in vivo診断補助における、請求項１
記載の抗体の使用。 - 【請求項１２】 哺乳類に免疫応答を引き起こすため
の、請求項７記載の抗原の使用。 - 【請求項１３】 治療物質としての請求項７記載の抗原
の使用。 - 【請求項１４】 生物学的サンプル中の腫瘍関連抗原を
検出するための診断補助における、請求項１記載の抗体
の使用。 - 【請求項１５】 治療物質としての請求項１記載の抗体
の使用。 - 【請求項１６】 請求項１に記載の抗体の核酸シーケン
スまたは核酸シーケンス部分およびそれらに由来するア
ミノ酸シーケンス。 - 【請求項１７】 請求項１に記載の抗体の抗原結合特性
を担う融合蛋白。 - 【請求項１８】 抗原非結合部位のアミノ酸シーケンス
がヒトのシーケンスに一致する、請求項１記載の抗体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4133791A DE4133791A1 (de) | 1991-10-11 | 1991-10-11 | Monoklonale antikoerper gegen tumorassoziierte antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE4133791.3 | 1991-10-11 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05317088A true JPH05317088A (ja) | 1993-12-03 |
| JP3996649B2 JP3996649B2 (ja) | 2007-10-24 |
Family
ID=6442537
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29657492A Expired - Fee Related JP3996649B2 (ja) | 1991-10-11 | 1992-10-09 | 腫瘍関連抗原に対するモノクローナル抗体、その製造方法およびその使用 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US5674994A (ja) |
| EP (1) | EP0537489B1 (ja) |
| JP (1) | JP3996649B2 (ja) |
| AT (1) | ATE187463T1 (ja) |
| AU (1) | AU670247B2 (ja) |
| CA (1) | CA2080260C (ja) |
| DE (2) | DE4133791A1 (ja) |
| ES (1) | ES2141095T3 (ja) |
| FI (1) | FI924543A (ja) |
| NZ (1) | NZ244661A (ja) |
| ZA (1) | ZA927785B (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69329643T2 (de) * | 1992-04-13 | 2001-03-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Gegen karzinom-assoziierte antigene gerichtete antikörper |
| US6030797A (en) * | 1992-10-08 | 2000-02-29 | Dade Behring Marburg Gmbh | Monoclonal antibodies against tumor-associated antigens, processes for the preparation thereof and the use thereof |
| US6207805B1 (en) | 1997-07-18 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Prostate cell surface antigen-specific antibodies |
| AU768002B2 (en) | 1998-06-15 | 2003-11-27 | Oncoquest Inc. | Immunotherapeutic composition and method for the treatment of prostate cancer |
| NZ534864A (en) * | 2000-05-08 | 2006-04-28 | Celldex Therapeutics Inc | Human monoclonal antibodies to dentritic cells |
| US6949629B2 (en) * | 2002-03-13 | 2005-09-27 | Aspenbio, Inc. | Methods for purifying selected CEA family member proteins |
| WO2007081779A2 (en) * | 2006-01-05 | 2007-07-19 | Genentech, Inc. | Methods of determining cutoff points |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5640033A (en) * | 1979-09-07 | 1981-04-16 | Fujitsu Ltd | Cold water type cooling system utilizing open air for cooling water |
| DE3329184A1 (de) * | 1983-08-12 | 1985-02-21 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Monoklonale antikoerper mit spezifitaet fuer membran-assoziierte antigene |
| GB8607679D0 (en) * | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
| DE3751908T2 (de) * | 1986-07-07 | 1997-02-06 | Centocor Inc | Chimärisches Murine-Mensch-Immunoglobulin, spezifisch für tumorassoziertes 17-1A Antigen |
| DE3825615A1 (de) * | 1988-07-28 | 1990-02-01 | Behringwerke Ag | Antigenkonstrukte von "major histocompatibility complex" klasse i antigenen mit spezifischen traegermolekuelen, ihre herstellung und verwendung |
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