JPH05199865A - シュ−ドモナス属細菌プラスミドの小型化方法 - Google Patents
シュ−ドモナス属細菌プラスミドの小型化方法Info
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- JPH05199865A JPH05199865A JP19021191A JP19021191A JPH05199865A JP H05199865 A JPH05199865 A JP H05199865A JP 19021191 A JP19021191 A JP 19021191A JP 19021191 A JP19021191 A JP 19021191A JP H05199865 A JPH05199865 A JP H05199865A
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- Japan
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- pseudomonas
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Abstract
(57)【要約】
【構成】シュ−ドモナス属細菌のプラスミドであるＩｎ
ｃＰ−１接合型広宿主域プラスミドＲＰ１、ＲＰ４、Ｒ
Ｋ２、またはこれらに由来するプラスミド誘導体を用い
て特定のシュ−ドモナス属細菌の形質転換を行ない、得
られた形質転換細菌よりプラスミドを抽出する。形質転
換の際に導入されたプラスミドは、シュ−ドモナス属細
菌の縮減効果により小型化される。形質転換するシュ−
ドモナス属細菌としては、Ｐ．セパチア、Ｐ．カリオフ
ィリ、Ｐ．グラジオリ、Ｐ．マレイ、Ｐ．シュ−ドマレ
イ、Ｐ．ピケッティおよびＰ．ソラナセアラムが好まし
い。 【効果】制限酵素によるプラスミドの切断および得られ
た断片の結合の操作がないため、元のプラスミドの制限
酵素切断部位に規定されることなく、より小型のプラス
ミドを容易に得ることができる。
ｃＰ−１接合型広宿主域プラスミドＲＰ１、ＲＰ４、Ｒ
Ｋ２、またはこれらに由来するプラスミド誘導体を用い
て特定のシュ−ドモナス属細菌の形質転換を行ない、得
られた形質転換細菌よりプラスミドを抽出する。形質転
換の際に導入されたプラスミドは、シュ−ドモナス属細
菌の縮減効果により小型化される。形質転換するシュ−
ドモナス属細菌としては、Ｐ．セパチア、Ｐ．カリオフ
ィリ、Ｐ．グラジオリ、Ｐ．マレイ、Ｐ．シュ−ドマレ
イ、Ｐ．ピケッティおよびＰ．ソラナセアラムが好まし
い。 【効果】制限酵素によるプラスミドの切断および得られ
た断片の結合の操作がないため、元のプラスミドの制限
酵素切断部位に規定されることなく、より小型のプラス
ミドを容易に得ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、シュ−ドモナス属細
菌のベクタ−として用いられるプラスミド、特に、Ｉｎ
ｃＰ−１接合型広宿主域プラスミドまたはこれに由来す
るプラスミド誘導体を小型化する方法に関する。
菌のベクタ−として用いられるプラスミド、特に、Ｉｎ
ｃＰ−１接合型広宿主域プラスミドまたはこれに由来す
るプラスミド誘導体を小型化する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】シュ−ドモナス（Pseudomonas ）属細菌
からは数種類のプラスミドが単離されており、それぞれ
ベクタ−として開発され、利用されている。しかしなが
ら、シュ−ドモナス属細菌のプラスミドのほとんどは50
Ｋbp程度の長さを有しており、そのままベクタ−として
利用するには大きすぎる。
からは数種類のプラスミドが単離されており、それぞれ
ベクタ−として開発され、利用されている。しかしなが
ら、シュ−ドモナス属細菌のプラスミドのほとんどは50
Ｋbp程度の長さを有しており、そのままベクタ−として
利用するには大きすぎる。
【０００３】一般に、プラスミドをベクタ−として使用
する場合には、プラスミドの長さは短いほうが都合がよ
い。プラスミドが大きいと、制限酵素による切断部位が
多くなる、菌内に入り難くなる、コピ−数が少なくなり
収率が落ちる等の問題が生じる。
する場合には、プラスミドの長さは短いほうが都合がよ
い。プラスミドが大きいと、制限酵素による切断部位が
多くなる、菌内に入り難くなる、コピ−数が少なくなり
収率が落ちる等の問題が生じる。
【０００４】したがって、大きなプラスミドは短くする
必要がある。そのため、プラスミドを適当な制限酵素で
切断した後、切断部位をリガ−ゼで結合させる方法が従
来取られている。
必要がある。そのため、プラスミドを適当な制限酵素で
切断した後、切断部位をリガ−ゼで結合させる方法が従
来取られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、この方
法では、プラスミドの切断と結合の操作を行なわなけれ
ばならず、場合によっては、この操作を繰り返す必要が
ある。また、シュ−ドモナス属細菌のプラスミドは制限
酵素切断部位が少なく、特にＩｎｃＰ−１接合型広宿主
域プラスミドでは20.0Ｋbp以下の長さのベクタ−は作製
されていない。
法では、プラスミドの切断と結合の操作を行なわなけれ
ばならず、場合によっては、この操作を繰り返す必要が
ある。また、シュ−ドモナス属細菌のプラスミドは制限
酵素切断部位が少なく、特にＩｎｃＰ−１接合型広宿主
域プラスミドでは20.0Ｋbp以下の長さのベクタ−は作製
されていない。
【０００６】このように、制限酵素を用いる従来の方法
では、数段階の処理を必要とするため操作が繁雑とな
り、また、制限酵素切断部位が限られているため小型化
に限界があるという問題点があった。したがって、この
発明の目的は、シュ−ドモナス属細菌由来プラスミドを
容易に小型化することが可能な方法を提供することにあ
る。
では、数段階の処理を必要とするため操作が繁雑とな
り、また、制限酵素切断部位が限られているため小型化
に限界があるという問題点があった。したがって、この
発明の目的は、シュ−ドモナス属細菌由来プラスミドを
容易に小型化することが可能な方法を提供することにあ
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記事情に
鑑み、鋭意研究の結果、シュ−ドモナス属細菌のプラス
ミド、特にＩｎｃＰ−１接合型広宿主域プラスミドＲＰ
１、ＲＰ４、ＲＫ２、またはこれらに由来するプラスミ
ド誘導体を用いて特定のシュ−ドモナス属細菌を形質転
換することにより、菌体内に導入されたプラスミドから
プラスミドの保持に不必要な部分が除去され、導入前よ
りも短いプラスミドが得られることを見出し、この発明
を完成するに至った。
鑑み、鋭意研究の結果、シュ−ドモナス属細菌のプラス
ミド、特にＩｎｃＰ−１接合型広宿主域プラスミドＲＰ
１、ＲＰ４、ＲＫ２、またはこれらに由来するプラスミ
ド誘導体を用いて特定のシュ−ドモナス属細菌を形質転
換することにより、菌体内に導入されたプラスミドから
プラスミドの保持に不必要な部分が除去され、導入前よ
りも短いプラスミドが得られることを見出し、この発明
を完成するに至った。
【０００８】すなわち、この発明は、シュ−ドモナス属
細菌のプラスミドであるＩｎｃＰ−１接合型広宿主域プ
ラスミドＲＰ１、ＲＰ４、ＲＫ２、またはこれらに由来
するプラスミド誘導体を用いて、シュ−ドモナス属細菌
の形質転換を行ない、得られた形質転換細菌よりプラス
ミドを抽出することを特徴とする。
細菌のプラスミドであるＩｎｃＰ−１接合型広宿主域プ
ラスミドＲＰ１、ＲＰ４、ＲＫ２、またはこれらに由来
するプラスミド誘導体を用いて、シュ−ドモナス属細菌
の形質転換を行ない、得られた形質転換細菌よりプラス
ミドを抽出することを特徴とする。
【０００９】上記ＩｎｃＰ−１接合型広宿主域プラスミ
ドＲＰ１、ＲＰ４、ＲＫ２、またはこれらに由来するプ
ラスミド誘導体はシュ−ドモナス属細菌に用いられるベ
クタ−として公知のプラスミドである。このプラスミド
を用いたシュ−ドモナス属細菌の形質転換は、通常用い
られる方法により行なうことができる。
ドＲＰ１、ＲＰ４、ＲＫ２、またはこれらに由来するプ
ラスミド誘導体はシュ−ドモナス属細菌に用いられるベ
クタ−として公知のプラスミドである。このプラスミド
を用いたシュ−ドモナス属細菌の形質転換は、通常用い
られる方法により行なうことができる。
【００１０】上記プラスミドにより形質転換されるシュ
−ドモナス属細菌としては、例えば、Ｐ．セパチア（Ps
eudomonas cepacia ）、Ｐ．カリオフィリ（P.caryophy
lli）、Ｐ．グラジオリ（P.gladioli）、Ｐ．マレイ
（P.mallei）、Ｐ．シュ−ドマレイ（P.pseudomalle
i）、Ｐ．ピケッティ（P.pickettii ）、およびＰ．ソ
ラナセアラム（P.solanacearum）を挙げることができ
る。形質転換された細菌からのプラスミドの抽出も、常
法により行なうことができる。
−ドモナス属細菌としては、例えば、Ｐ．セパチア（Ps
eudomonas cepacia ）、Ｐ．カリオフィリ（P.caryophy
lli）、Ｐ．グラジオリ（P.gladioli）、Ｐ．マレイ
（P.mallei）、Ｐ．シュ−ドマレイ（P.pseudomalle
i）、Ｐ．ピケッティ（P.pickettii ）、およびＰ．ソ
ラナセアラム（P.solanacearum）を挙げることができ
る。形質転換された細菌からのプラスミドの抽出も、常
法により行なうことができる。
【００１１】
【作用】形質転換の手法によりシュ−ドモナス属細菌に
導入されたプラスミドは、シュ−ドモナス属細菌のプラ
スミド縮減効果により、プラスミドの保持に不必要な部
分が除去されて導入前よりも短いプラスミドとなる。
導入されたプラスミドは、シュ−ドモナス属細菌のプラ
スミド縮減効果により、プラスミドの保持に不必要な部
分が除去されて導入前よりも短いプラスミドとなる。
【００１２】
実施例１ Ａ．プラスミドの分離
【００１３】シュ−ドモナス菌プラスミドベクタ−ｐＶ
Ｋ101 （ＡＴＣＣ 37159）を保持する大腸菌ＨＢ101 の
シングルコロニ−を 1.5ｍｌのＬＢ培地（10ｍｇ／ｍｌ
テトラサイクリンおよび50ｍｇ／ｍｌカナマイシンを含
有する）に移し、37℃で24時間振とう培養した。その
後、エッペンドルフ小型遠心機（HITACHI HITAC CR15
T）を用いて、得られた培地を 15,000 rpm で30秒間遠
心した。遠心により得られた菌体を 100μｌの溶液Ｉ
（50ｍＭグルコ−ス、10ｍＭ ＥＤＴＡ、25ｍＭトリス
-Ｃｌ pH 8.0 ）に懸濁し、 4℃で 5分間放置した。次
いで、この懸濁液に、200μｌの溶液II（ 0.2Ｎ Ｎａ
ＯＨ、 1.0％ＳＤＳ）を加えて静かに撹拌し、4℃で 5
分間放置した。さらに、この懸濁液に 150μｌの溶液 I
II（ 3Ｍ Ｋ+ 、 5Ｍ ＣＨ3 ＣＯＯＨ）を加えて撹拌
し、 4℃で 5分間放置した。その後、 400μｌのＴＥ飽
和フェノ−ルを加えて撹拌し、15,000 rpmで10分間遠心
を行なって水層を分取した。この水層に、水層の２倍量
の99.5％冷エタノ−ルを加え、 4℃で 5分間放置した
後、さらに15,000 rpmで15分間遠心してＤＮＡ沈殿を得
た。得られたＤＮＡ沈殿を70％冷エタノ−ルで洗浄して
乾燥した後、20μｌのＴＥ緩衝液（50ｍＭトリス- Ｃｌ
pH 0.8 、0.10ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解した。 Ｂ．シュ−ドモナス属細菌の形質転換
Ｋ101 （ＡＴＣＣ 37159）を保持する大腸菌ＨＢ101 の
シングルコロニ−を 1.5ｍｌのＬＢ培地（10ｍｇ／ｍｌ
テトラサイクリンおよび50ｍｇ／ｍｌカナマイシンを含
有する）に移し、37℃で24時間振とう培養した。その
後、エッペンドルフ小型遠心機（HITACHI HITAC CR15
T）を用いて、得られた培地を 15,000 rpm で30秒間遠
心した。遠心により得られた菌体を 100μｌの溶液Ｉ
（50ｍＭグルコ−ス、10ｍＭ ＥＤＴＡ、25ｍＭトリス
-Ｃｌ pH 8.0 ）に懸濁し、 4℃で 5分間放置した。次
いで、この懸濁液に、200μｌの溶液II（ 0.2Ｎ Ｎａ
ＯＨ、 1.0％ＳＤＳ）を加えて静かに撹拌し、4℃で 5
分間放置した。さらに、この懸濁液に 150μｌの溶液 I
II（ 3Ｍ Ｋ+ 、 5Ｍ ＣＨ3 ＣＯＯＨ）を加えて撹拌
し、 4℃で 5分間放置した。その後、 400μｌのＴＥ飽
和フェノ−ルを加えて撹拌し、15,000 rpmで10分間遠心
を行なって水層を分取した。この水層に、水層の２倍量
の99.5％冷エタノ−ルを加え、 4℃で 5分間放置した
後、さらに15,000 rpmで15分間遠心してＤＮＡ沈殿を得
た。得られたＤＮＡ沈殿を70％冷エタノ−ルで洗浄して
乾燥した後、20μｌのＴＥ緩衝液（50ｍＭトリス- Ｃｌ
pH 0.8 、0.10ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶解した。 Ｂ．シュ−ドモナス属細菌の形質転換
【００１４】Ｐ．セパチア（ＡＴＣＣ 10856）菌のシン
グルコロニ−をＬＢ培地に移し、26℃で24時間程度振と
う培養した。さらに、この培養液 750μｌを新しいＬＢ
培地10ｍｌに加えて26℃で 4時間程度振とう培養した。
この培養により、ＯＤ600 が0.4となった時点で培養液
を 4℃に冷却し、冷却高速遠心機（HITACHI 20PR-5）を
用いて 15,000 rpm で30秒間遠心した。上清を捨て、沈
殿した菌体に 5ｍｌの冷却した溶液１（10ｍｌ 3-（N-
モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、10ｍＭ
ＲｂＣｌ pH 7.0 ）を加えて菌を懸濁し、再び 15,00
0 rpm で30秒間遠心して菌を沈殿させた。この菌体に、
5ｍｌの冷却した溶液２（ 100ｍＭ ＭＯＰＳ、50ｍＭ
ＣａＣｌ2 、10ｍＭ ＲｂＣｌ pH 6.5 ）を加えて菌
を懸濁し、 4℃で20分間放置した。この懸濁液を再び 1
5,000 rpm で30秒間遠心した後上清を捨て、得られた菌
体に 1ｍｌの冷却した溶液２を加えて懸濁した。この懸
濁液を 200μｌずつ分注し、 1μｇ相当のｐＶＫ101 を
50μｌずつ加えて 4℃で30分間放置した。その後、42℃
で 2分間加熱し、 1ｍｌのＬＢ培地を加えて26℃で1.5
時間培養した。この培養液を、テトラサイクリン10ｍｇ
／ｍｌ、カナマイシン50ｍｇ／ｍｌおよびアンピシリン
50ｍｇ／ｍｌを含有するＬＢ-agar プレ−ト（直径 9ｃ
ｍ）に撒き拡げ、24ないし48時間培養した。その結果、
1×10-6の頻度で形質転換体が得られた。 Ｃ．形質転換体からのプラスミドの分離
グルコロニ−をＬＢ培地に移し、26℃で24時間程度振と
う培養した。さらに、この培養液 750μｌを新しいＬＢ
培地10ｍｌに加えて26℃で 4時間程度振とう培養した。
この培養により、ＯＤ600 が0.4となった時点で培養液
を 4℃に冷却し、冷却高速遠心機（HITACHI 20PR-5）を
用いて 15,000 rpm で30秒間遠心した。上清を捨て、沈
殿した菌体に 5ｍｌの冷却した溶液１（10ｍｌ 3-（N-
モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、10ｍＭ
ＲｂＣｌ pH 7.0 ）を加えて菌を懸濁し、再び 15,00
0 rpm で30秒間遠心して菌を沈殿させた。この菌体に、
5ｍｌの冷却した溶液２（ 100ｍＭ ＭＯＰＳ、50ｍＭ
ＣａＣｌ2 、10ｍＭ ＲｂＣｌ pH 6.5 ）を加えて菌
を懸濁し、 4℃で20分間放置した。この懸濁液を再び 1
5,000 rpm で30秒間遠心した後上清を捨て、得られた菌
体に 1ｍｌの冷却した溶液２を加えて懸濁した。この懸
濁液を 200μｌずつ分注し、 1μｇ相当のｐＶＫ101 を
50μｌずつ加えて 4℃で30分間放置した。その後、42℃
で 2分間加熱し、 1ｍｌのＬＢ培地を加えて26℃で1.5
時間培養した。この培養液を、テトラサイクリン10ｍｇ
／ｍｌ、カナマイシン50ｍｇ／ｍｌおよびアンピシリン
50ｍｇ／ｍｌを含有するＬＢ-agar プレ−ト（直径 9ｃ
ｍ）に撒き拡げ、24ないし48時間培養した。その結果、
1×10-6の頻度で形質転換体が得られた。 Ｃ．形質転換体からのプラスミドの分離
【００１５】プラスミドを保持するＰ．セパチアを、 1
50ｍｌのＬＢ培地（10ｍｇ／ｍｌテトラサイクリン、50
ｍｇ／ｍｌカナマイシンおよび50ｍｇ／ｍｌアンピシリ
ンを含有する）において、26℃で48時間振とう培養し
た。この培養液を冷却高速遠心機（HITACHI 20PR-5）を
用いて 15,000 rpm で30秒間遠心した。遠心後、上清を
捨て、沈殿した菌体を 150ｍｌのＴＥ緩衝液（50ｍＭト
リス- Ｃｌ pH 0.8 、10ｍＭ ＥＤＴＡ）で洗浄して 4
ｍｌのＴＥ緩衝液に懸濁した。次いで、48ｍｌの溶菌緩
衝液（ＴＥ、 4％ＳＤＳ pH12.42）を加えて静かに撹拌
し、37℃で20分間放置した。この液に、さらに 4ｍｌの
2Ｍトリス- Ｃｌ（pH 7.0）および12.8ｍｌの 5Ｍ Ｎ
ａＣｌを加えて撹拌し、 4℃で 1時間放置した。次に、
15,000 rpmで 5分間遠心し、上清に等量のイソプロパノ
−ルを加えて -80℃で15分間放置した。その後、さらに
15,000 rpm で10分間遠心してＤＮＡを沈殿させた。得
られたＤＮＡは乾燥させ、さらに40μｌのＴＥ緩衝液に
溶解した。 Ｄ．制限酵素によるＤＮＡの切断、解析および制限酵素
切断地図の作成
50ｍｌのＬＢ培地（10ｍｇ／ｍｌテトラサイクリン、50
ｍｇ／ｍｌカナマイシンおよび50ｍｇ／ｍｌアンピシリ
ンを含有する）において、26℃で48時間振とう培養し
た。この培養液を冷却高速遠心機（HITACHI 20PR-5）を
用いて 15,000 rpm で30秒間遠心した。遠心後、上清を
捨て、沈殿した菌体を 150ｍｌのＴＥ緩衝液（50ｍＭト
リス- Ｃｌ pH 0.8 、10ｍＭ ＥＤＴＡ）で洗浄して 4
ｍｌのＴＥ緩衝液に懸濁した。次いで、48ｍｌの溶菌緩
衝液（ＴＥ、 4％ＳＤＳ pH12.42）を加えて静かに撹拌
し、37℃で20分間放置した。この液に、さらに 4ｍｌの
2Ｍトリス- Ｃｌ（pH 7.0）および12.8ｍｌの 5Ｍ Ｎ
ａＣｌを加えて撹拌し、 4℃で 1時間放置した。次に、
15,000 rpmで 5分間遠心し、上清に等量のイソプロパノ
−ルを加えて -80℃で15分間放置した。その後、さらに
15,000 rpm で10分間遠心してＤＮＡを沈殿させた。得
られたＤＮＡは乾燥させ、さらに40μｌのＴＥ緩衝液に
溶解した。 Ｄ．制限酵素によるＤＮＡの切断、解析および制限酵素
切断地図の作成
【００１６】上記Ｃにおいて得られたプラスミド（以
下、c-ｐＶＫ101 と称する） 2μｌ（0.1μｇ）に対
し、制限酵素 2μｌ（約 1ユニット）、各制限酵素に適
する制限酵素分解用緩衝液 2μｌおよび蒸留水14μｌを
加え、37℃で 2時間程度ＤＮＡの切断を行なった。ここ
で用いた制限酵素は全て宝酒造（株）社製である。
下、c-ｐＶＫ101 と称する） 2μｌ（0.1μｇ）に対
し、制限酵素 2μｌ（約 1ユニット）、各制限酵素に適
する制限酵素分解用緩衝液 2μｌおよび蒸留水14μｌを
加え、37℃で 2時間程度ＤＮＡの切断を行なった。ここ
で用いた制限酵素は全て宝酒造（株）社製である。
【００１７】使用した制限酵素と、それにより得られた
ＤＮＡ断片の長さを下記表１に示す。また、プラスミド
ｐＶＫ101 およびc-ｐＶＫ101 の制限酵素切断地図を、
それぞれ図１および図２に示す。
ＤＮＡ断片の長さを下記表１に示す。また、プラスミド
ｐＶＫ101 およびc-ｐＶＫ101 の制限酵素切断地図を、
それぞれ図１および図２に示す。
【００１８】表１、図１および図２より明らかなよう
に、この発明の方法により得られたc-ｐＶＫ101 の長さ
は、元のシュ−ドモナス属細菌プラスミドベクタ−ｐＶ
Ｋ101の長さが21.3Ｋbpであるのに対して、約１／３の
7.0Ｋbpである。
に、この発明の方法により得られたc-ｐＶＫ101 の長さ
は、元のシュ−ドモナス属細菌プラスミドベクタ−ｐＶ
Ｋ101の長さが21.3Ｋbpであるのに対して、約１／３の
7.0Ｋbpである。
【００１９】
【発明の効果】以上のように、この発明によると、シュ
−ドモナス属細菌のプラスミドを制限酵素切断部位に関
わりなく比較的容易に小型化することが可能となる。
−ドモナス属細菌のプラスミドを制限酵素切断部位に関
わりなく比較的容易に小型化することが可能となる。
【図１】21.3Ｋbpの長さを有する、シュ−ドモナス属細
菌プラスミドベクタ−ｐＶＫ101 の制限酵素切断地図を
表わす。
菌プラスミドベクタ−ｐＶＫ101 の制限酵素切断地図を
表わす。
【図２】この発明の方法により小型化されたｐＶＫ101
（c-ｐＶＫ101 ）の制限酵素切断地図を表わす。
（c-ｐＶＫ101 ）の制限酵素切断地図を表わす。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:38）
Claims (2)
- 【請求項１】 シュ−ドモナス属細菌のプラスミドであ
るＩｎｃＰ−１接合型広宿主域プラスミドＲＰ１、ＲＰ
４、ＲＫ２、またはこれらに由来するプラスミド誘導体
を用いてシュ−ドモナス属細菌の形質転換を行ない、得
られた形質転換細菌よりプラスミドを抽出するシュ−ド
モナス属細菌プラスミドの小型化方法。 - 【請求項２】 形質転換されるシュ−ドモナス属細菌
が、Ｐ．セパチア、Ｐ．カリオフィリ、Ｐ．グラジオ
リ、Ｐ．マレイ、Ｐ．シュ−ドマレイ、Ｐ．ピケッティ
およびＰ．ソラナセアラムである請求項１記載のシュ−
ドモナス属細菌プラスミドの小型化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19021191A JPH05199865A (ja) | 1991-07-30 | 1991-07-30 | シュ−ドモナス属細菌プラスミドの小型化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19021191A JPH05199865A (ja) | 1991-07-30 | 1991-07-30 | シュ−ドモナス属細菌プラスミドの小型化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05199865A true JPH05199865A (ja) | 1993-08-10 |
Family
ID=16254319
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19021191A Pending JPH05199865A (ja) | 1991-07-30 | 1991-07-30 | シュ−ドモナス属細菌プラスミドの小型化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05199865A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010500013A (ja) * | 2006-08-10 | 2010-01-07 | インターナショナル インベストメント アンド パテンツ ソシエテ アノニム | 免疫学的作用を有するプラスミド |
-
1991
- 1991-07-30 JP JP19021191A patent/JPH05199865A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2010500013A (ja) * | 2006-08-10 | 2010-01-07 | インターナショナル インベストメント アンド パテンツ ソシエテ アノニム | 免疫学的作用を有するプラスミド |
| US8691959B2 (en) | 2006-08-10 | 2014-04-08 | Cosmo Bio-Technologies Srl | Plasmids with immunological action |
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