JPH0469571A - カンジダ症の検出方法 - Google Patents
カンジダ症の検出方法Info
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- JPH0469571A JPH0469571A JP18062090A JP18062090A JPH0469571A JP H0469571 A JPH0469571 A JP H0469571A JP 18062090 A JP18062090 A JP 18062090A JP 18062090 A JP18062090 A JP 18062090A JP H0469571 A JPH0469571 A JP H0469571A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、カンジダ症の検出方法に関し、更に詳細には
ヒト尿試料を用いたカンジダ症の検出方法に関する。本
発明は、またこのような検出のための検出キットに関す
る。
ヒト尿試料を用いたカンジダ症の検出方法に関する。本
発明は、またこのような検出のための検出キットに関す
る。
カンジダ症はカンジダ（（ａｎｄｉｄａ）属の真菌によ
り引起される感染症で、深在性真菌症の中での頻度は最
も高く、近年の増加は著しい。
り引起される感染症で、深在性真菌症の中での頻度は最
も高く、近年の増加は著しい。
カンジダ症の検出方法としては、臨床検査材料より、被
検菌を分離培養し、純粋培養後、形態学的検査、生化学
的検査、及び血清学的検査を組合せ、被検菌の同定・検
出を行う方法や、患者血清中のカンジダ抗体を検出する
方法等が開発されている。また患者血清中の抗原物質や
、代謝物質を検出する方法も開発され、例えばモンソン
（Ｍｏｎｓｏｎ、 Ｔ、Ｐ、）らは、カンジダ症患者の
血清中の遊離型Ｄ−マンノース量が有意に上昇すること
を報告している〔クリニカル ケミストリー（ＣＩｉｎ
、Ｃｈｅｍ、 ）第２５巻、第１３８４頁（１９７９）
］。
検菌を分離培養し、純粋培養後、形態学的検査、生化学
的検査、及び血清学的検査を組合せ、被検菌の同定・検
出を行う方法や、患者血清中のカンジダ抗体を検出する
方法等が開発されている。また患者血清中の抗原物質や
、代謝物質を検出する方法も開発され、例えばモンソン
（Ｍｏｎｓｏｎ、 Ｔ、Ｐ、）らは、カンジダ症患者の
血清中の遊離型Ｄ−マンノース量が有意に上昇すること
を報告している〔クリニカル ケミストリー（ＣＩｉｎ
、Ｃｈｅｍ、 ）第２５巻、第１３８４頁（１９７９）
］。
上記各方法において、分離培養方法は、長時間を要する
こと、血清中のカンジダ抗体価を測定する方法は、カン
ジダが成体の正常フローラの構成員の一つであることか
ら、抗細菌剤の投与によってカンジダ菌が消化管内等に
大量に存在する場合に、感染巣の存在なしにカンジダ抗
体が検出される場合があること、また逆に一般的には流
血中抗体価が極めて低い、あるいは検出し得る抗体を作
らないこと等、使用する際に多々の問題点があった。
こと、血清中のカンジダ抗体価を測定する方法は、カン
ジダが成体の正常フローラの構成員の一つであることか
ら、抗細菌剤の投与によってカンジダ菌が消化管内等に
大量に存在する場合に、感染巣の存在なしにカンジダ抗
体が検出される場合があること、また逆に一般的には流
血中抗体価が極めて低い、あるいは検出し得る抗体を作
らないこと等、使用する際に多々の問題点があった。
モンソンらの血清中の遊離型Ｄ−マンノースを測定する
方法は簡便な方法ではあるが、この報告はあくまでも血
清中の遊離型Ｄ−マンノース量の変化について述べてい
るにすぎず、ヒト尿試料中の遊離型Ｄ−マンノース量と
カンジダ症の関係を報告した例はない。上記血清中のＤ
−マンノースの測定には採血という操作が必要であり、
大量試料が処理される集団検診には、その簡便性、大量
処理能力、コストの点で問題があった。
方法は簡便な方法ではあるが、この報告はあくまでも血
清中の遊離型Ｄ−マンノース量の変化について述べてい
るにすぎず、ヒト尿試料中の遊離型Ｄ−マンノース量と
カンジダ症の関係を報告した例はない。上記血清中のＤ
−マンノースの測定には採血という操作が必要であり、
大量試料が処理される集団検診には、その簡便性、大量
処理能力、コストの点で問題があった。
本発明の目的は、カンジダ症を尿試料を用いて簡便に検
出する新規な検出方法及び定量用キットを提供すること
にある。
出する新規な検出方法及び定量用キットを提供すること
にある。
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明はカンジダ症
の検出方法に関し、ヒト尿試料中の遊離型Ｄ−マンノー
ス量を正常値と比較測定することを特徴とし、また第２
の発明はカンジダ症の検出用キットであって、遊離型Ｄ
−マンノースの２−アミノピリジル化試薬を含有するこ
とを特徴とする。
の検出方法に関し、ヒト尿試料中の遊離型Ｄ−マンノー
ス量を正常値と比較測定することを特徴とし、また第２
の発明はカンジダ症の検出用キットであって、遊離型Ｄ
−マンノースの２−アミノピリジル化試薬を含有するこ
とを特徴とする。
本発明において使用するカンジダ症検出用試料は、ヒト
尿から得られるものであり、通常は尿そのものを、また
場合によっては一定量のろ紙などの吸着材に染みこませ
、ここから抽出する方法などによって調製し用いること
もできる。
尿から得られるものであり、通常は尿そのものを、また
場合によっては一定量のろ紙などの吸着材に染みこませ
、ここから抽出する方法などによって調製し用いること
もできる。
尿試料中の遊離型Ｄ−マンノース量は、例えば前出クリ
ニカル ケミス） Ｕ−記載のガスクロマトグラフィ一
方法や、クリニカル ケミストリー第３巻、第２３９頁
（１９８４）記載の酵素学的方法を用い測定すれば良い
が、特開昭６４−１０１７７号公報記載の方法に準じ、
尿試料中の遊離型Ｄ−マンノースの２−アミノピリジル
化を行い、次いでＨＰＬＣで検出するのが最も高感度な
方法である。例えば尿試料２μｍを減圧乾固し、次いで
２−アミノピリジン１ｇを酢酸０．４６８ｒｎｌ及びメ
タノール０．６ ｒｎｌに溶解した２−アミノピリジル
化試薬７μｌを添加し、９０℃、１５分間の２−アミノ
ピリジル化反応を行う。反応終了後余剰の試薬を留去し
、次いでジメチルアミンボラン５９ｍｇを酢酸１艷に溶
解した還元剤１０μｌを添加し、９０℃、３０分間の還
元反応を行う。反応終了後余剰の試薬を留去する。この
場合、各段階で留去可能な試薬を用いており、この一連
の反応を同一容器内で行うことができる。この蛍光標識
物は、例えば水に溶解後、例えばイオン交換樹脂クロマ
トグラフィーを行うことにより少量の試料中の遊離型Ｄ
−マンノース量を効率よく、高感度に測定することがで
きる。
ニカル ケミス） Ｕ−記載のガスクロマトグラフィ一
方法や、クリニカル ケミストリー第３巻、第２３９頁
（１９８４）記載の酵素学的方法を用い測定すれば良い
が、特開昭６４−１０１７７号公報記載の方法に準じ、
尿試料中の遊離型Ｄ−マンノースの２−アミノピリジル
化を行い、次いでＨＰＬＣで検出するのが最も高感度な
方法である。例えば尿試料２μｍを減圧乾固し、次いで
２−アミノピリジン１ｇを酢酸０．４６８ｒｎｌ及びメ
タノール０．６ ｒｎｌに溶解した２−アミノピリジル
化試薬７μｌを添加し、９０℃、１５分間の２−アミノ
ピリジル化反応を行う。反応終了後余剰の試薬を留去し
、次いでジメチルアミンボラン５９ｍｇを酢酸１艷に溶
解した還元剤１０μｌを添加し、９０℃、３０分間の還
元反応を行う。反応終了後余剰の試薬を留去する。この
場合、各段階で留去可能な試薬を用いており、この一連
の反応を同一容器内で行うことができる。この蛍光標識
物は、例えば水に溶解後、例えばイオン交換樹脂クロマ
トグラフィーを行うことにより少量の試料中の遊離型Ｄ
−マンノース量を効率よく、高感度に測定することがで
きる。
この２−アミノピリジル化試薬をそろえキットとしてお
くことで、目的試料中の遊離型Ｄ−マンノース量を簡便
に測定することができる。
くことで、目的試料中の遊離型Ｄ−マンノース量を簡便
に測定することができる。
キット中に含有される試薬としては、例えば２−アミノ
ピリジン、酢酸、メタノールをそれぞれ単独、又は混合
させたものを含有させれば良い。またこのほか、還元剤
を含有させても良い。
ピリジン、酢酸、メタノールをそれぞれ単独、又は混合
させたものを含有させれば良い。またこのほか、還元剤
を含有させても良い。
またＨＰＬＣを行う場合の標準物質として２アミノピリ
ジル化マンノースを含有させても良く、更にはＨＰＬＣ
用カラムをそろえておいても良い。
ジル化マンノースを含有させても良く、更にはＨＰＬＣ
用カラムをそろえておいても良い。
以下に本発明の実施例を示し、本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない
。
るが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない
。
実施例１
健常人１０例及びカンジダ症患者１７例の尿中遊離型Ｄ
−マンノース量を測定した。
−マンノース量を測定した。
尿２μｌを反応チューブに入れ、減圧下濃縮乾固した。
次いで２−アミノピリジル化試薬（２−アミノピリジン
１ｇを酢酸０．４６８ｍ１゜メタノール０．６ ｍ！！
に溶解して作製する） ７μｌを加え、封管した後９０
℃にて１５分間反応させた。反応後間管し、Ｎ２気流下
減圧にて濃縮乾固した。残渣に還元剤（ジメチルアミン
ボラン５９ｍｇを酢酸１−に溶解して作製する）１０μ
ｌを加え、封管した後９０℃、３０分間反応させた。反
応後メタノールを用いた共沸操作により余剰の試薬を留
去した。残渣を５００μ矛の水に溶解し、そのうち５μ
ｌをＨＰＬＣにて分析した。ＨＰＬＣの条件は、カラム
はパルバックＡ型（ＰＡＬＰＡＫ Ｔｙｐｅ Ａ ：宝
酒造社製、４，６Ｘ１５０ｍｍ）を用い、溶媒は１０％
Ｔ七ト二トリル含有０．７ Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ９，
０）で、流量は０．３ｍｊ’／分、カラム温度は６５℃
とした。
１ｇを酢酸０．４６８ｍ１゜メタノール０．６ ｍ！！
に溶解して作製する） ７μｌを加え、封管した後９０
℃にて１５分間反応させた。反応後間管し、Ｎ２気流下
減圧にて濃縮乾固した。残渣に還元剤（ジメチルアミン
ボラン５９ｍｇを酢酸１−に溶解して作製する）１０μ
ｌを加え、封管した後９０℃、３０分間反応させた。反
応後メタノールを用いた共沸操作により余剰の試薬を留
去した。残渣を５００μ矛の水に溶解し、そのうち５μ
ｌをＨＰＬＣにて分析した。ＨＰＬＣの条件は、カラム
はパルバックＡ型（ＰＡＬＰＡＫ Ｔｙｐｅ Ａ ：宝
酒造社製、４，６Ｘ１５０ｍｍ）を用い、溶媒は１０％
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０）で、流量は０．３ｍｊ’／分、カラム温度は６５℃
とした。
蛍光検出は励起波長３１０ ｎｍ、蛍光波長３８０ｎｍ
で行った。尿中の遊離型Ｄ−マンノース量をクレアチニ
ン量で補正し、健常人尿中とカンジダ症患者尿中の遊離
型Ｄ−マンノース量を比較した。その結果を第１図に示
す。すなわち第１図は本発明により測定した尿中遊離型
Ｄ−マンノース量のクレアチニン補正値（μｒｎｏｌ／
ｇ、 Ｃｒ。
で行った。尿中の遊離型Ｄ−マンノース量をクレアチニ
ン量で補正し、健常人尿中とカンジダ症患者尿中の遊離
型Ｄ−マンノース量を比較した。その結果を第１図に示
す。すなわち第１図は本発明により測定した尿中遊離型
Ｄ−マンノース量のクレアチニン補正値（μｒｎｏｌ／
ｇ、 Ｃｒ。
縦軸）をカンジダ症患者、健常人別（横軸）にプロット
したグラフである。第１図に示すようにカンジダ症患者
の遊離型Ｄ−マンノース量は健常人に比べ高値を示す。
したグラフである。第１図に示すようにカンジダ症患者
の遊離型Ｄ−マンノース量は健常人に比べ高値を示す。
実施例２
尿試料中道離型Ｄ−マンノース量を測定するためのキッ
トを作成した。
トを作成した。
遊離型Ｄ−マンノースの２−アミノピリジル化試薬（Ａ
剤）、及び還元剤として、ジメチルアミンボラン（Ｂ−
１剤）及びＢ−１剤の溶解剤としての酢酸（Ｂ−２剤）
より成るキットを作成した。
剤）、及び還元剤として、ジメチルアミンボラン（Ｂ−
１剤）及びＢ−１剤の溶解剤としての酢酸（Ｂ−２剤）
より成るキットを作成した。
表 １
Ａ剤：２−アミノピリジル ７００μｌ試薬
（２−アミノピリジン１ｇを
酢酸０．４６８ｍｆ、メタノ−
ル０．６ｍｊ２に溶解させたも
の）
Ｂ−１剤ニジメチルアミンボラン ５９ ｍｇＢ−２剤
：酢酸 １ｍ１１００回分 〔発明の効果〕 以上詳細に述べたように、本発明により尿試料中の遊離
型Ｄ−マンノース量がカンジダ症のマーカーとなること
が見出され、該疾病の新たな検出方法及び定量用キット
が開発された。
：酢酸 １ｍ１１００回分 〔発明の効果〕 以上詳細に述べたように、本発明により尿試料中の遊離
型Ｄ−マンノース量がカンジダ症のマーカーとなること
が見出され、該疾病の新たな検出方法及び定量用キット
が開発された。
第１図は各尿中の遊離型Ｄ−マンノース濃度の測定結果
を示す図である。 第 ／ 図
を示す図である。 第 ／ 図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヒト尿試料中の遊離型Ｄ−マンノース量を正常値と
比較測定することを特徴とするカンジダ症の検出方法。 ２、カンジダ症の検出用キットであって、遊離型Ｄ−マ
ンノースの２−アミノピリジル化試薬を含有することを
特徴とするカンジダ症の検出用キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18062090A JPH0469571A (ja) | 1990-07-10 | 1990-07-10 | カンジダ症の検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18062090A JPH0469571A (ja) | 1990-07-10 | 1990-07-10 | カンジダ症の検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0469571A true JPH0469571A (ja) | 1992-03-04 |
Family
ID=16086401
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18062090A Pending JPH0469571A (ja) | 1990-07-10 | 1990-07-10 | カンジダ症の検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0469571A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104101664A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-10-15 | 国家烟草质量监督检验中心 | 一种纸张中尿素含量的测定方法 |
-
1990
- 1990-07-10 JP JP18062090A patent/JPH0469571A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104101664A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-10-15 | 国家烟草质量监督检验中心 | 一种纸张中尿素含量的测定方法 |
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