JPH04505804A - 子癇前症の検出のための診断的検定 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 子層前症の　出のための診断的検定 発明の背景 発明の分野 本発明は、血液中のマイトジェン因子を測定する検定を使用する子層前症の診断 に関する。子局前症は妊婦にとって重大な問題である。それは生命に脅威を及ぼ す突発性疾患の高血圧性状態である。子層前症の婦人の状態は、重大な損傷が母 親、子供またはこれら両者に引き起す点までしばしば悪くする。子層前症は母親 および乳児の両者の死の主要な原因である。

情報の開示 子層前症は妊娠の７〜１０％の範囲で発生し、著しい母親および乳児の疾病率の 原因である（Ｒｏｂｅｒｔｓ、　ＪＪ、、　Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ−ｒｅｌａｔｅ ｄ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、　Ｉｎ：　Ｃｒｅａｓｙ、；Ｒ，に、：　Ｒｅ ５ｎｉｃ　Ｒ，、ＥＤＳ、、Ｍａｔｅｒｎａｌ−Ｆｅｔａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎ− Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃ狽奄モ■B Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ：　ｗ、ｓ、　５ａｕｎｄｅｒｓ、　１９８４．７０ ３−７５２）。幾多の関心および研究にもかかわらず、このような疾病の発病学 はなお十分に理解されていない。しかしながら、最近の資料は、内反細胞（ｅｎ ｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ）の損傷が子層前症の症候群において重要な役割 をはたしていることを示唆している。子癌前症の患者から得られた腎および贋の 脈管における内反病変の組織病理学の発見が認めらだ（Ｓｐａｒｇｏ、　Ｂ、Ｈ ，：ＭｃＣａｒｔｎｅｙ、　Ｃ，Ｐ、：　Ｗｉｎｅｗｉｌｌｅｒ、　Ｒ，、Ｇｌ ｏｍｅｒｕｌａｒ　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏ唐奄刀@ｉｎ ｔｏｘｅｍｉａ　ｏｆ　ｐｒｅｇｎａｎｃｙ、　ＡＭＡ　Ａｒｃｈ、　Ｐａｔｈ ｏｌ、、　１９５９．６８：５９３−５９７；　Ｄａｄａｋ@Ｃ，。

Ｕｌｒｉｃｈ　Ｌ、Ｓｉｎｚｉｎｇｅｒ　Ｈ，Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃ ｈａｎｇｅｓ　ｔｈｅ　ｕｍｂｌｉｃａｌ　ａｒｔｅｒｉｅ刀@ｏｆ ｂａｂｉｅｓ　ｂｏｒｎ　ｔｏ　ｐｒｅｅｃｌａｍｐｔｉｃ　＋＊ｏｔｈｅｒ： 　ａｎ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　５ｔｕｄｙ、　o！ｅｃｅｎｔａ １９８４、５：４］９〜４２６）。最近、幾多のレポートが子層前症の患者から 得た血清における生化学的異状を実証した。これらのレポートは、内反細胞の撹 乱（ｅｎｄｏｔｈｅｌ　１ａｌｃｅｌｌ　ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）およびこ れらの細胞の致死量以下の損傷が子層前症の発病の一因であるという概念をサポ ートしている。これらの研究の多くのものは、血清における内皮細胞生成物の高 められたレベルを間接的に示すものであった［例えばフィブロネクチン（Ｓｔｕ ｂｂｓ、　Ｔ、Ｍ、；　Ｌａｚａｒｃｈｉｃｋ、：　）ｌａｒｇｅｒ、　Ｅ、Ｏ ，、ｌ比Ｐｌａｓｍａｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ　１ｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｐｒｅｅ ｃｌａ＋ｇｐｓｉａ：　ａ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｂｉｏｃｅｍｉｃａｌ　ｍａｒ ｋ■秩@ｆｏｒ ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｄａｍａｇｅ、Ａ＠ｊ、０ｂｓｅ ｔ、Ｇｙｎｅｃｏｌ、１９８４，１５０：８８５−８８７）A　フ　ア クタ−Ｖｌｌ＋抗原（Ｒｅｄｍａｎ、　Ｃ，Ｗ、Ｇ、；　Ｂｅ１ｌｌｉｎ、　Ｌ 、Ｊ、；　５ｔｉｒｒａｔ、　に、Ｍ、、　ｅｔｑｌ、。

Ｆａｃｔｏｒ　Ｖｌｌｌ　ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｒｅｅｃｌｑｍｐ ｉｓａ、　Ｌａｎｃｅｔ　１９７７、１１１２４９−１２５Q）、また は小板および凝固異状（Ｒｏｂｅｒｔ、　Ｊ、Ｍ、、　Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ−ｒ ｅｌａｔｅｄ　ｈｙｐｅｒｔｅｎｔｉｏｎ、Ｉｎ：Ｃｒｅａｓｙ、　Ｒ，に、： 　Ｒｅ５ｎｉｋ、Ｒ，、ｅｄｓ、、　Ｍａｔｅｒｎａｌ−Ｆｅｔａｌ　Ｍｅｄｉ ｃｉｎｅ−Ｐｒｉｎｃｉｐａｌ■刀@ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ：　Ｗ、Ｂ、５ａｕｎｄｅｒｓ＋ 　１９８４．７０３−７５２）コ。我々は最近、子層前症の婦人から得た血清が 内反細胞をインビトロで損傷することを直接証明した（Ｒｏｄｇｅｒｓ、Ｇ、Ｍ 、；　Ｔａｙｌｅｒ、Ｒ，Ｎ、；Ｒｏｂｅｒｔｓ、　Ｊ、＋ｌ＋、、　Ｐｒｅｅ ｃｌａｍｐｓｉａ　ｉｓ　ａｓｓ盾モ奄≠狽■■ ｗｉｔｈ　ａ　ｓｅｒｕｍ　ｆａｃｔｏｒ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｔｏ　ｈｕｍ ａｎ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｃａｌ　ｃｅｌｌｓ、Ａｍ、Ｊ、Oｂｓｔｅｔ。

Ｇｙｎｅｃｏｌ、　１５９：９０８−９１４．１９８８）。

図面の簡単な説明 図１ 正常者および子層前症患者から得た血清に曝された培養された線維芽細胞のマイ トジェン用量−反応曲線。休止した線維芽細胞は、マテリアルアントメソード（ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ）において記述されたごとく、正 常者および子同前症患者から得た対になった分娩前、後の血清でインキュベート された。３日−チミジンの線維芽細胞ＯＮ＾への混入は、対数表式で用量に従っ て増大した。表示は正常者（Ａ）および子層前症の患者（Ｂ）から得た分娩前（ 白四角）および分娩後（黒四角）の血清のマイトジェン活性である。分娩後の子 層前症患者の血清に比較して分娩前の同血清の曲線には、正常な妊娠から得た対 の血清にはない著しい左移動があった　（Ｐ＜０．０１）　。

内旦 正常者および子層前症患者から得た血清のマイトジェン活性。（Ａ）２％の最終 濃度に希釈された矛盾前症患者および正常者から得た分娩前の血清の直接的比較 は、正常血清に比較して子層前症血清においてマイトジェン活性の４６％増加を 証明している（Ｐ〈０．０＋）。（Ｂ）分娩後２４〜４８時間に採取された血清 は２つの群間での相違は示されていない（ｐ＞ｏ、　６）。

図３ 子層前症患者から得た血清のマイトジェン活性に及ぼす硫酸マグネシウム（Ｍｇ ５ｏ４）処理の間接的影響無。子燭前症患者の２つの群が比較された。一方の群 （ｎ：４）は、分娩前の血液試料採取の以前に静脈内にＭｇ５Ｏ，を受け入れた 。他方の群（ｎ＝４）においては、血液被験体はＭｇＳＯ４処理以前に採集され た。マイトジェン刺激値（分娩前／分娩後Ｘ１００）は相違が無かった（Ｐ）０ ．８）。

発明の概要 本発明は子層前症の婦人の血液中に存在するマイトジェン因子の発見に関する。

この因子は約１６０ｋＤａのタンパン質性成分である。この因子は子郷前症の予 知、検出および診断を可能にする。それは線維芽細胞の有糸分裂を刺激すること ができる。しかしながら、この因子は、血清が酸性化または熱処理後にマイトジ ェン活性のために測定される場合には、血清中で熱および酸に不安定である。

本明細書で記述したことはまた、妊婦から得た血液におけるマイトジェン活性の インビトロ検出を含む、子層前症の予知および検出のための診断的検定である。

検定は直接的または間接的である。この検定は本明細書では、マイトジェン活性 が線維芽細胞または平滑筋細胞のいずれかを使用して検出されることを特に開示 されている。より詳しくは、検定は、有糸分裂を開始するために直接的に刺激さ れた細胞による放射線標識化チミジンの摂取をモニターすることによるマイトジ ェン活性の検出を含む。

検定される血液は血清または血漿試料に分別されることが好ましい。

本明細書においてはまた、子層前症を伴う婦人から得た血液のマイトジェン活性 を測定することからなる子癲前症を検出するためのインビトロ法が記述されてい る。特に、この方法は線維芽細胞または平滑筋細胞のマイトジェン活性の直接的 検定を含む。この方法は好ましくはヒト細胞を使用する。特に記述されたことは 、子局前症の婦人の血清または血漿により活性化された細胞による放射線標識化 チミジンの摂取を検出するための方法である。

子層前症の婦人から得た血液におけるマイトジェン活性のための検定を行うキッ トもまた、本明細書に記述されている。キットは使用説明書、負および正の調節 物質、細胞培養手段のごとくマイトジェン活性の直接的または間接的測定のため の手段、および血液のマイトジェン活性を定置または測定するための手段を含む 。

好適実施態様の詳細な記述 本発明は有糸分裂を刺激する化合物が子層前症の婦人に存在することの発見を含 む。これらの婦人の血清は、有糸分裂の検出のための標準的検定におけるマイト ジェン活性において非常に異なる。このような活性の存在は、本明細書において 開示された診断的検定の基礎を構成する。

マイトジェン因子の特性 マイトジェン因子は約１６０ｋＤａのタンパク質性の化合物である。この因子は プロテアーゼに対する証明された感受性を持つ。加つるに、この因子を含んでい る血清はｐ）１３．０以下でそのマイトジェン活性を喪失する（血清の再中和後 に試験されたごとく）。この因子は中性のｐＨにおいて負の電荷を有する。成分 もまた熱感受性である。血清が加熱される場合、この因子は６０℃で１時間後に 有糸分裂生殖的に不活性化される。この因子の精製は標準的なタンパク質の精製 技術を使用して達成される。同精製技術はサイジングゲル、塩による選択性沈澱 、イオン交換カラム等を含む。

試料採取 記述された検定法は好ましくは血清または血漿を使用する。動脈または静脈の血 液が使用される。試料は静脈から得ることが好ましい。血液は１０時間以内に遠 心分離され、血清または血漿が採取される。検定は新鮮または凍結試料で実行さ れる。マイトジェン活性は一７０℃で４力月まで安定である。試料は妊娠の３力 月と終了前の間に得る。本発明の利益は分裂活性が高血圧性状態に先立つことで ある。

マイトジェン活性のためのインビトロ検定多くの異なる検定法がマイトジェン活 性を測定するために記述されている。これらの検定のレビューは以下にみられる 。Ｋｅｓｋｉ−Ｏｊａ、Ｊ、　、ｅｔ　ａｌ、　、ＴｒａｎｓｆｏｒｖｉｎｇＧ ｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｎｅｏｐｌａｓｔ ｉｃ　Ｃｅ１ｌ　Ｇｒｏｗｔｈ、　Ｊ、　Ｃｅ１１．　Ｂ奄盾モ■A、　３３ ：９５−１０７゜典型的には、これらの検定法は細胞の休止状態から複製状態へ の変異を伴う成る機能を測定する。このような機能は以下のもを含む。

１、トリチン化チミジン（ｔｒｉｔｉａｔｅｄ　ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）の細胞Ｄ ＮＡへの結合。

２、色素生成染料ジフェニルアミンを使用する総ＤＮＡ濃度により測定されたＤ ＮＡ合成の刺激。

３、血球計数器またはクールター細胞計数器（ｃｏｕｌｔ、ｅｒ　ｃｅｌｌ　ｃ ｏｕｎｔｅｒ）を使用して測定されることき細胞数の増加により測定された細胞 増殖。

４、軟寒天における細胞コロニー形成により測定されるごとき足場−非依存性成 長の刺激。

ＤＮＡの合成を直接的に示すチミジンの摂取を測定することが特に便利である。

細胞培養パラメータが記述された補乳類の細胞が、本実施例における最初の使用 である。典型的にはこれらの細胞はマイトジェン刺激を受けやすく、また不ズミ のまたはヒト細胞を含む。上記検定法で使用された細胞はヒト組織から得ること が好ましい。より好ましくは線維芽細胞または平滑筋細胞であり、我々の試験に おいては、ヒト内皮細胞は本実施例で記述されたマイトジェン化合物に対して敏 感ではなかった。

マイトジェン活性を直接測定するためのキットは使用説明書、正常血液から得た 負の！１節物質、子何前症を伴う患者から得られた正の調節物質、およびマイト ジェン刺激に対して敏感な細胞を含む。細胞の成長のための培養手段は、培地お よび無菌の培養フラスコを含む。標識化栄養素または有糸分裂を測定するための 他の手段もまた含まれてもよい。

二１０愚呈 マイトジェン活性の直接的な測定のほかに、マイトジェン活性を間接的に検定す ることが可能である。間接的マイトジェン活性は、インビトロ検定において有糸 分裂生殖を活性化することに関係し、またはその−因となる特別の血液因子の測 定を含む。マイトツエン因子を同定しかつ定量するための方法は、ＨＰＬＣ（高 性能液体クロマトグラフィー）、電気泳動分離および免疫検定法（イムノアッセ イ）を含む。免疫検定法は好ましく、多くの標準的な免疫検定法が間接的測定に 有効である。これらはＥＬＩＳＡ　（イム／ソルベント使用酵素免疫検定法）　 、ＩＲＩＩ！Ａ　（免疫放射線測定検定法（ｉｍｍｕｎｏｒａｄｉｏｗｅｔｒｉ ｃ　ａｓｓａｙ））　、ＲＩＡ　（放射線免疫検定法）のごとき競合免疫検定法 を含む。間接的検出方法は迅速であり、より安価であり、かつすでに日常の診断 的使用に取り入れられているという利点を育する。上記した検定法の成るものは 、開示された発明における検定法のごとき機能に設計されることができる。

早々前症の予知 子艦前症の状態は、マイトジェン因子のレベルの統計的に顕著な上昇により、第 ２三カ月期の初期に予知される。この上昇は子何前症の臨床的発現の以前数カ月 に検出できる。

先を見越して採取された婦人のグループが妊娠の間追跡された。連続的な血漿試 料が採取され、２％に希釈され、後述するヒト包皮線維芽細胞の細胞検定を使用 してマイトジェン活性のために分析された。細胞によるチミジン摂取の比較が４ 人の矛盾前症と６人の正常な対象の初妊婦でなされた。比較はマンーホイットニ イテスト（Ｍａｎｎ−！１ｈｉｔｎｅｙ　ｔｅｓｔ）を使用して行われ、このテ ストは各患者の直接の妊娠後試料に対して標準化された血漿マイトジェン活性の 結果をもたらすものである。

分析のため、各患者のための標準化された分娩前値（ｐｒｅｄｅｌｉｖｅｒｙ　 ｖａｌｕｅｓ）が各三カ月期のために平均的、総合的かつ独立的に減少された。

総合的な平均化されたデータは以下のことを示した。子何前症の診断のための厳 密なアメリカの大学の産科および婦人科（ＡＣＯＧ）判定基準に応することを予 定した婦人は、先を見越して採取された正常な初妊婦に比較して、妊娠を通して 血漿マイトジェン因子活性の分娩前の後比率を著しく上昇した（１．７±０．２ 　ｖｓ、　０．８±０．１．　ｍｅａｎ±ＳＥＸ。

Ｐ〈０．００５）。各三カ月期の平均マイトジェン活性の同様な統計的分析は、 子何前症が現れることを運命付けられた婦人を正常な仲間から第２三カ月期の初 期に区別することを明らかにした（２．０±０．４　ｖｓ、　０．８±０．１． 　Ｐ＜０．００５）。

次の実施例は本明細書に記述した発明の機能性を例示する。実施例は特許請求の 範囲を限定するものとして解釈されるものではない。さらに、当業者による手法 でのノンクリティカルな変形が可能であることは理解される。

実施例 から採る。多くの場合に、静脈血試料が集められた。

υ、Ｃ，５，Ｆ、セルカルチャーファンリティから入手し、４．５ｇ／リットル のグルコースを育し、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン／ストレプトマイシン（ １００Ｌｌ／ｍｌ）およびフンギシン（５００ｎｇ／ｍｌ）によって補足したダ ルベツコの修正イーグル培地（ＤＭＥＭ）の増殖培地を用いた培地に、３７℃に おいて、湿潤大気、５％ＣＯ２中に維持した。細胞は２４クエルのファルコン皿 内にウェル当たり５ＸＩＯ’細胞の密度においてまかれ、集密にいたるまで増殖 させ、それから患者血清に曝す前に無血清培地を用いて４８ないし７２時間静止 状態に維持した。無血清培地は、ＯＭＥＮを用いて調製したが、これはウシ胎児 血清の代わりに、２０　ｒｘＭ　ＨＥＰＥＳ、インシュリン（１Ｈｇ／ｍｌ）、 ）ランスフェリン（０，５μｇ＃＋Ｉ）およびクシ血清アルブミン（５００μｇ ／ｍｌ、シグマ）によって補血清のマイトジェン活性は、ＤｉＣｏｒ　１ｅｔｏ およびＢｏ＋ｒｅｎ−Ｐｏｐｅ（Ｄｉｃｏｒｌｅｔｏ、　Ｐ、Ｅ、；Ｂｏｗｅｎ −Ｐｏｐｅ、　Ｄ、Ｆ、、　Ｃｕ１ｔｕｒｅｄ　ｅｎｄｏｔｈｅｒｉａｌ　ｃｅ ｌｌｓ　ｐｒｏｄｕｃｅ　ａ　ｐｌａｔｅｌｅｔ|ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ−１ｉｋｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａ ｔｌ、＾ｃａｄ、　５ｃｉ、　Ｕ、Ｓ、＾、、　１９８３．W０：１９］９ −１９２３）によって記載されているように、線帷芽細胞による発生ＮＤＮＡ中 へのＢＨ−チミジンの組み込みを測定することによって決定された。簡単に言え ば、患者血清のアリコオートを集密静止の線維芽細胞培養物を含有する三重ウェ ル（ｔｒｉｐｌ　１ｃａｔｅ鴨・ａｌｌ）へ添加し、２％の終末血清濃度（終末 タンパク質濃度±５０　＝　］。

５±０．４■ｇ／■１）を得た。２０時間培１ｍ後、３Ｈ−チミジン（０，５μ Ｃｉ／ウエル、　１５．７Ｃ１／■■ｌ、ニューイングランドニューフレア）を 各ウェルに添加し、４時間標識を施した。１０％トリクロルアセチックアシド不 溶核酸中へのチミジン組み込みは、シンチレーンｅン計数によって測定した。

マイトジェン活性は、集密線維芽細胞の各ウェル当たり組み込まれた全体のａｐ ｌ’Ｈ−チミジンとして、または有糸分裂刺激のパーセントとして示した。後者 は（分娩前組み込みｃｐｓ）　／　（分娩後組み込みｃｐ■）　Ｘ　ｔｏｏとし て定義した。全ての値は、三重検定の平均±ＳＥとして示した。

タンパク質の定量 血清試料のタンパク質濃度は、ブラッドフォードの方法（Ｂｒａｄｆｏｒｄ、　 ＭＪ、、＾ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　５ｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　 ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｇｒａｍ　ｑｕ≠獅狽狽 狽奄≠■ ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ　ｏ ｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｙｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ、＾ｎａ１．@Ｂｉｏｃｈｅ＋＋ 。

＋９７６、７２°２４８−２５４）によって定量した。

スト（ツウ−ティルト分析）を用いて行った。Ｐ＜０．０１を有するテストは、 有意差を反映するものと考えた。

期の単生児妊娠であって、子何前症の診断は、次のような判定基準に基づいて行 った。すなわち、高血圧症または腎臓病の前歴のないこと、収縮時最低３０■■ Ｈｇもしくは弛緩時！５　＋ｎＨｇの血圧上昇、またはこれらが未知の場合には 血圧として収縮時最低１４０　ｍｍＨｇもしくは弛緩時９０■■）Ｉｇ（最少６ 時間間隔の２つの読みによって表られた血圧の読みの平均から計算した（ＭＡＰ 　＝弛緩時＋［収縮時−弛緩時コ／３）。

書に従って、分娩前および分娩後２４−４８時間に再び集めた。血清部分は、遠 心法によって分離し、検定前４か月までの間−７０℃において冷凍貯蔵した。

ＳＨ−チミジン組み込み物において用量に依存する増加が見られた。正常な分娩 婦からの対になった血清においては、有糸分裂性能に何らの差が見られなかった （図示した（１−ｇ／腸ｌタンパク質より大きな血清濃度に対してＰ＜０．０１ 、図ＩＢ）。これらのデータは、後の横断面的分析において差異の検出を可能に する血清タンパク質濃度の範囲を限定した。より多くの患者を比較した実験は、 ２％という固定した最終の血清濃度において行った（最終血清タンパク質濃度士 ＳＤ＝　１．５±−１０，４−ｇ／■ｌ）。１３人の子層前症分娩婦と１０人の 対照分娩婦との分娩前と分娩後の対になった血清試料を比較し、各患者に対して 分娩後の値を用いて規準化した。有糸分裂刺激のパーセント（前−／後−Ｘ　１ ００）は、対になった矛盾前症血清において有意に増加した（平均上ＳＥ　＝　 １０７±６Ｘ；　Ｐ＜０．０１）。チミジン組み込み検定の変動係数は、１２％ であった。冷凍−解氷サイクルを繰り返した後でも、血清−誘導のマイトジェン 活性には変化が見られなかった。

分娩前血清におけるマイトジェン活性 対になった子層前症血清に見られる有糸分裂刺激の高まりが、分娩前の活性が大 きいためか、分娩後の活性の減少のためか、または両者のためかどうかを決定す るために、分娩前血清と分娩後血清との比較を行った。１５人の子同前症患者と １４人の正常患者からの分娩前血清の直接的比較では、子癌前症試料のチミジン 組み込み物の平均水準が、正常試料の値よりも４６％の増加を示した（Ｐ＜０． ０１、図２Ａ）。しかしながら、別の実験において、分娩後２４−４８時間に集 めた分娩後血清の直接的比較では、正常患者と矛盾前症患者との間のマイトジェ ン活性には何ら有意の差を示さなかった（ｎ　＝　１２、図２Ｂ）。

マイトジェン活性に及ぼす硫酸マグネシウムの効果正常血清に対する子層前症血 清のマイトジェン活性の増加が、われわれの施設において子層前症患者に一様に 施されている硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）治療から派生したものかどうかの 可能性について取り扱った。対照分娩前血清への２および６■ｇ／ｄｉの濃度（ 治療患者の血清水準に匹敵できる水準）におけるＭｇＳＯ４の直接添加は、これ らの試料によって３８−チミジンの組み込み物に杉響を与えなかった（Ｐ＞０． ６、表ＩＩ）。患者群の間のマイトジェン活性の差が、ＭｇＳＯ４治療の間接的 効果に帰せられるかどうかを決定するために、矛盾前症患者の２つの群からの分 娩前、分娩後の対になった血清を比較した。１つのｇ＄（１、ｎ＝４）は、分娩 前血液試料を収集する前にＭ、Ｓ０４の静脈注射を受けた。他の群（ＴＩ、ｎ＝ ４）は、ＭｇＳＯ４治療の前に試料を収集した。有糸分裂刺激値のパーセントは （Ｍ■：平均上ＳＥ　＝　１３５±９．５％；群Ｉ■：平均±ＳＥ　＝　１４］ ±５．９％、Ｐ＞０．６：図３）であった。

表Ｉ 正常　子層前症 （ｎ＝１４）　（ｎ＝１５） 妊娠年齢（週）　３９．５±１．５　３８．５±１．９平均動脈圧（１１８ｇ） 　８４±３．１　１０７±ｌ０８７★尿タンパク質（諺ｇ／ｄｉ）　Ｏ−痕跡　 ３０−３００尿酸（■ｇ／ｄｉ）　ＮＤ）　５．８±１．８血小板ＣＫ／■Ｉ） 　ＮＤ　Ｎ　２６１±６５値は平均上ＳＤとして表す ★Ｐ＜０．０１ ＮＯ＝測定せず ）　３７−４０週における正常値＝４．４±０．８−ｇ／ｄｌ會正常値（非妊娠 ）　＝　１５０−４００　Ｋ／■１ＦＩＬ３゜ 国際調査報告

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）妊婦から血液を採集すること、および（ｂ）前記血液のマイトジェン 活性を検出することからなる子癇前症の検出および予知のための診断的検定法。
2. ２．前記マイトジェン活性の検出が線維芽細胞および平滑筋細胞からなる群から 選択された動物の細胞における有糸分裂を測定することにより達成される第１項 に記載の検定法。
3. ３．血清または血漿試料が血液から調製され、かつマイトジェン活性が動物細胞 をこれらの血清または血漿試料に曝すことにより検出される第２項に記載の検定 法。
4. ４．前記検出ステップ（ｂ）が試料に曝された動物細胞による放射線標識化チミ ジンの摂取を測定することを含む第２項に記載の診断的検定法。
5. ５．（ａ）妊婦から血液を採集すること、および（ｂ）血液中のマイトジェン因 子を検出することからなる子癇前症の診断のための方法であり、当該方法におい て前記因子は約１６０ＫＤａの分子量を有し、タンパク質成分を有し、プロテア ーゼ感受性であり、かつ中性ｐＨで負の電荷を有するとともに線維芽細胞有糸分 裂を刺激することができ、血清中で存在する場合マイトジェン活性に関して酸お よび熱不安定性を示すことを特徴とする診断方法。
6. ６．前記マイトジェン活性の検出が、さらに線維芽細胞および平滑筋細胞からな る群から選択された動物細胞におけるマイトジェン活性の測定を含む第５項に記 載の方法。
7. ７．前記マイトジェン活性が血清により活性化された細胞による放射線標識化チ ミジンの摂取を検出することにより測定される第６項に記載の方法。
8. ８．前記血清または血漿試料が血液から調製され、かつマイトジェン活性が動物 細胞を血清または血漿試料に曝すことにより検出される第６項に記載の方法。
9. ９．子癇前症を伴う婦人からの血液中のマイトジェン活性に応答するヒト細胞を 包含する容器、放射線標識化チミジンを包含する容器、および子癇前症の婦人の 血液から誘導されたマイトジュン因子を包含する容器からなる子癇前症の診断の ためのキット。
10. １０．子癇前症を診断しかつ予知するための血液のマイトジェン因子であり、当 該因子は約１６０ＫＤａの分子量を有し、タンパク質成分を有し、プロテアーゼ 感受性であり、かつ中性ｐＨで負の電荷を有するとともに線維芽細胞有糸分裂を 刺激することができ、血清中で存在する場合マイトジェン活性に関して酸および 熱不安定性を示すことを特徴とするマイトジェン因子。