JPH04503405A - 選択された特性を現わす集団についての細胞または形成体をスクリーニングする方法および装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 選択された特性を現わす集団についての細胞または形成体をスクリーニングす る方法および装置 扶亙分団 本発明は、一般に研究、診断または工学的目的のために選択された特性を現わす 集団を数えるのに細胞または形成体（ｆｏｒｍｅｄｂｏｄｉｅｓ）をスクリーニ ングする方法および装置に関する。特に：本発明を電子技術および特異的な単ク ローン性抗体の結合した微小球の組合わせを用いる、ＷＢＣ集団および少なくと も１つのサブセットについての直接分析、形成体についての分析および数個の血 液細胞についての分析に指向するものである。

豊孟侠遣 本発明は、一般に研究、診断または工学的目的のために選択された特性を現わす 集団を数えるのに生体細胞または形成体をスクリーニングするのに用いる自動分 析装置および方法に関する。一般に、本発明における自動分析装置および方法は 、細胞および形成体を機能表現型に表わしくｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｐｈｅｎｏ ｔｙｐｉｎｇ）、特に白血病、リンパ腺および固体腫瘍細胞を類型に分け（ｔｙ ｐｉｎｇ）、および電子技術と、細胞および形成体の上記スクリーニングおよび 選択計数（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｅｎｎｍｅｒａｔｉｏｎ）のために選択生体分 子、例えば抗体の特異性との独特の組合わせを用いて、細胞および形成体を多数 部分に分類することができる。

自動血液細胞カウンターによりヒト末梢血液の通常の完全血液細胞（ｃｏｍｐｌ ｅｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌ）（ＣＢＣ）分析の自動化は、クールター　エレ クトロエックス　インコーポレーション（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉ ｃｓ、Ｉｎｃ、）の「クールター　カウンター（ＣＯυＬＴＥＲＣ０ＵＮＴＥＲ ）（商標登録）」モデルＡにより首尾よく達成されている。

この器機の電子粒子検知システム（ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　ｐａｒｔｉｃｌｅ　 ｓｅｎｓｉｎｇｓｙｓｔｅｍ）原理については米国特許第２．６５６．５０８号 明細書、１９５３年１０月２０日発行、ウォレス　エッチ、クールター（Ｗａｌ ｌａｃｅ　Ｈ。

ＣｏｕＨｅｒ）氏、に記載されている。厄介で経費の要する光学検知装置または レーザーの使用は、このクールター電子検知原理に基づく独特の操作により粒子 分析器機の使用によって回避されている。

このクールター検知原理は多くの高性能器機、例えば、ＣＢＣパラメータ、絶対 細胞数、血小板数および形態、赤血球（ＲＢＣ）形態、正常および異常血液検体 の解読に特別のコンピュータプログラムによりできる器機の「クールター　カウ ンター（商標登録）」モデルＳタイプに開発および発展されている。

クールター電子粒子検知原理は直流（ＤＣ）開口供給（ａｐｅｒｔｕｒｅｓｕｐ ｐｌｙ）を用いる開口検知回路（ａｐｅｒｔｕｒｅ　ｓｅｎｓｉｎｇ　ｃｉｒｃ ｎｉｔ）が用いられている。この粒子センサは構造が簡単で、極めてがんじょう で、かつその信頼性はアメリカおよびその他の世界じゅうの国における臨床研究 所に利用されている「クールター　カウンター（商標登録）」自動分析装置によ って証明されている。

この基本の開口検出回路についての改良については米国特許第３、５０２．９７ ４号明細書、（１９７０年発行、ウォレス　クールターおよびウオールター　ホ ブ（Ｗａｌｔｅｒ　Ｈｏｇｇ）氏）に記載されている。

標準直流開口供給のほかに、分類目的についての付加パラメータを検知できる高 周波開口電流が適用されている。この高周波開口電流は血液細胞の内部導電率（ ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｊｔｙ）およびその容量の関数である信 号を生じさせる。直流開口回路により同時に生じた信号は主として細胞容量を示 す通常のＤＣ増幅信号である。無線周波増幅器は高速ディバイダー回路を用いる 直流パルス増幅器によって分割し、細胞容量および「不透明度（ｏｐａｃｉｔｙ ）　Ｊと称され内部抵抗（ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）の関数で ある指数を得るようにしている。更に、この原理は米国特許第３．５０２．９７ ３号明細書、（１９７０年発行、ウォレン　クールターおよびウオールター　ホ ブ氏）に記載されている。このパラメータは細胞分類システムにおける適用性を 有している。単一または１対の個々の開口はこの目的に利用することができる。

異なる集団の分類は生ずる信号対、すなわち、一方における粒子容量の測定およ び他方における細胞内部抵抗率の測定のデータを照合することによって達成する 。このデータを表わす普通の形は散布プロット（ｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔｅ）ま たは散布図（ｓｃａｔｔｅｒｇｒａｍｓ）と称せられに二元プロット（ｔｗｏ− ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｐｌｏｔｓ）による。このプロットはフロー　サイト メトリー　アンド　ソーティング（Ｆｌｏｗ　Ｃｔｏｍｅｔｒ　ａｎｄ　Ｓｏｒ ｔｉｍ　）、３７１ページ、メラメド　メラネイおよびメデルソン氏編集、ジョ ン　ウィμ　アンド　ンンス出版（１９７９）に記載されている。

第５Ａ図は正常血液の試料のデータ　プロットの１例を示している。各点（ｄａ ｔ）は個々の細胞を示している。基線の上の高さは細胞の相対容量を示している 。直線基線の右側への点の距離は相対不透明度を示している。正常白血球（ＷＢ Ｃ）　（赤血球、除去による）のプロットは大きさおよび内部組成において本質 的な差異の結果による３つの別個の集団を表わす点の３つのクラスターを示して いる。必要に応じて、回路構成により、これらの集団はそれぞれの数を得るため に数えることができる。細胞はこれらの固有の差異に基づいて分類される。

クールター電子粒子検知原理は、最初、赤血球数に、次いで他の赤血球パラメー タの高性能測定に適用されている。赤血球を全末梢血液から除去することによっ て、白血球集団の分析は、赤血球除去が測定される残留白血球集団の特性を有意 に害さないかぎり実施されている。有利に、かつ広く適用されると思われる、こ の目的のために開発された赤血球溶解試薬（ｌｙｓｉｎｇｒｅａｇｅｎｔｓ）は 連続的白血球測定のすべての観点において全く満足されていない。

ＤＣ容量だけまたは種々の角度における光散乱を用いる白血球の流動分析（ｆｌ ｏｗ　ａｎａｌｙｓｉｓ）の従来の方法は好中球、好塩基球および好酸球集団を 含むリンパ球、単球および顆粒球に相当する白血球の３つのクラスターを示して いる。好酸球濃度の概算で、しかも有利な評価はある試料について得られる。第 ５の主な集団はこのアプローチのためには比較的に少なすぎる。また、好酸球は 特別の蛍光技術を用いる別個のクラスターとして観察されている。

これらの蛍光技術は流動細胞計測器機、例えばクールターコーポレーションから 入手される「エピシス（ＥＰＩＣ３）　（商標登録）」流動細胞計測器に用いら れている。この器機は、細胞を一列に整列させおよびレーザー　ビームをそれぞ れに通すようにシース　フロー（ｓｈｅａｔｈ　ｆｌｏｗ）によって制限された カラム流れ（ｃｏｌｕｍｎａｒ　ｓｔｒｅａｍ）に移動する細胞の原理を用いて いる。従って、細胞からの光散乱および／または蛍光信号を細胞集団の分類に利 用されている。吸収または蛍光染料による染色細胞は付加細胞集団分類を可能に する。更に、自動マルチパラメータ分析についての器機および蛍光色素の開発に ついてはＲ，Ｃ，レイフ氏ほか「クリニカル　ケミストリー（Ｃ１ｉｎｉｃａｌ 　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）ＪＶｏｌ、２３．ページ、１４９２〜９８　（１９７７ ）に記載されている。これらの開発は白血球を４種類、すなわち、リンパ球、単 球、好酸球および顆粒球（好中球および好塩基球）に分類する多くの同時集団分 類に展開されている。

もっとも最近の分析血液学器機は、光散乱技術を細胞のペルオキシダーゼ酵素染 色（吸収染料）と用いて５部分の区別された白血球（ｆｉｖｅ　ｐａｒｔ　１ｅ ｕｋｏｃｙｔｅ）を生成している。更に、単クローン性抗体のような特異的に反 応する生体分子と組合わせる染料は機能再分（ｆｕｎｃｌｉｏｎａｌ　５ｕｂｄ ｉｖｉｓｉｏｎｓ）を包含する多くの白血球分類を高めることを可能にする。

改良された単一自動器機およびこれを用いる方法については親の特許出願である 、米国出願特許第０２５．３４５号明細書、１９８７年３月１３日出願、名称： 選択された、　を　わす集・の数をえるために　胞または斤≦　をスクリーニン グ　る自置旦ヨ互左迭に記載されている。親の特許出願明細書では電子検知開口 原理、細胞または形成体の定められた集団を同定および／または数えるための選 択された生体分子の特異性、および微視的粒子技術を組合わせている。

選択的に付着する微視的粒子は少なくとも１つの集団の最初の位置に原因するパ ラメータの修正を可能にする。選択された標的集団に対する微視的粒子のバルク 付加（ｂｕｌｋ　ａｄｄｉｔｉｏｎ）は、１つの集団を現わす点の位置をシフト する場合における測定された容量および／または不透明度に影響を及ぼす。

既知の特異性の抗体は被覆微視的粒子に用いられる。この被覆は粒子に、抗体が 特異的である抗原を現わすある細胞に選択的に付着する能力を与える。これらの 被覆または標識細胞は粒子および新しい実体のようにふるまう細胞の組合わせで ある。

不透明度、容量、または不透明度および容量のパラメータは得られた信号におけ る細胞および粒子の作用の和を表わすものと思われる。成分の特性が異なる場合 には、新しい実体は最終的な結果により新しい位置に移動する。細胞だけの前の 位置とは反対の新しい位置は、かかる新しい実体または新しい実体のグループを 分類する。細胞に付着した粒子が磁性である場合には、勿論、慣例に従って、新 しい実体は磁石を用いて捕捉することができる。速やかに混合した場合には、細 胞の特性についての研究に悪い影響を与えないように集団を完全に捕捉される予 期しない結果が得られる。

細胞の３つだけの別個の集団は、上述するＤＣ容量および不透明度パラメータの 固有のおよび独特の特性を用いることによって血液試料から容易に確認および数 えることができる。改良された溶解システムのような付加段階は多くの集団の検 出および計数を可能にする。勿論、これらの付加集団はリンパ球、単球および顆 粒球と称される３つの基本集団の副次集団を表わす。

親の特許出願によって実施された段階はこれらの基本の３つの集団の副次集団が 得られるかについて説明している。

２個またはこれ以上の生体粒子と組合わせて上述する簡単な開口検知技術を用い る場合には、与えられた集団を表わす点クラスター（ｄｏｔ　ｃｌｕｓｔｅｒ） の独特のおよび新しい位置を生ずる。

点プロットまたは散布図における集団のこの選択的移動は再現することができ、 基本の３つの集団から個々の集団を分類するのに用いることができる。

ＤＣ容量および不透明度検知技術の独特のおよび本来の組合わせは微視的粒子の 選択された個々の粒子への付着を介して変えることができる。選択性は、表面に 被覆するのに用いられた生体分子、特に抗体の性質または特異性によって粒子に 与えられる。表面に粒子を有しない細胞だけの集団は、他の集団または副次集団 から異ならない点プロット位置を占め、今後、互いに区別することができない。

確認、計数および研究するのに探求される細胞の特異的集団への選択的引力を有 する粒子の添加にはこのアプローチを用いることができる。関係する別個の集団 への十分な質量の選択された粒子の選択的添加は、質量、容量および不透明度の 新しく、かつ独特の組合わせの結果として、集団の点プロット位置の推移を生ず る。

特異的細胞集団の分離は残留する細胞集団の特性に著しい影響を与えることなく 達成する。例えば、本発明により赤血球（ＲＢＣ）を全血液から除去することに よって、これまで入手することのできるＲＢＣ溶解試薬では不可能であったＴ４ および／またはＴａ２０５球の測定ができるようになった。Ｔ４対Ｔ８の数の割 合は、特にＡＩＤＳウィルスを含む著しいウィルス感染に矛盾しない免疫欠失を 示すように用いられている。細胞の表面における特異的受容体の存在は集団をサ ブセットに分類するのに用いることができ、これらの計数は病気の発生を見出す ことができる。例えば、白血球の優勢な形態の場合には、末梢血液リンパ球に鋭 い上昇が生ずる。すみやかに増殖するリンパ球の副次集団がＴｌｌ受容体を保持 する場合には、患者は免疫異常の危険にさらされる。

Ｔｌｌポジティブ　リンパ球の副次集団がＴ４受容体を保持する場合には、患者 は日本において共通するように分類される。

更に、Ｔ４受容体副次集団広がりが２８４ポジテイブである場合には、患者は多 重感染の傾向であることが証明されるばかりか、Ｔｌｌ、　Ｔ４．　２Ｈ４ポジ テイブ細胞におけるように急性白血病はサプレッションの誘発を受け、抗体を生 ずる患者の能力を機能的に抑制される。この場合、患者は多重感染を受け、白血 病および免疫欠失について治療する必要性が生ずる（Ｋ、タカツキ氏ほか、ｒＧ ＡＮＮ　ｍｏｎｏｇｒａｐｈ　ｏｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｊ　２ ８　：　１３〜２２（１９８２）　；　Ｃ，モリモト氏ほかｒｃｏｕｌｔｅｒ　 ｆａｐａｎ　ＳｙｍｐｏｉｕｍＪ（１９８４）　；ｃ、モリモト氏ほかｒｌｍｍ ｕｎｏｌｏｇｙＪ　１３４（３）　：　１５０８〜１５１５　（１９８５）　、 　Ｃ，モリモト氏ほかｒＮｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＭｅｄ ｉｃｉｎｅ」３１６（２）　：　６７〜７１　（１９８７）　）　、また、本発 明は特に細菌およびウィルスのような形成体懸濁物の分析に適用することができ る。

本発明を実施する方法お−よび装置は免疫反応体、例えば反応体および形成体ま たは細胞を含む免疫反応のような免疫反応の変種を用いることができる。ここに 用いているように、細胞とは別々にまたは全体として確認することのできる動物 または植物の細胞を意味する。細胞は独立の単位として機能することのできる生 きている物体の最小構造集塊である。例えば、組織からのまたは血液試料からの ヒトＲＢＣおよびＷＢＣ集団、ガンまたは他の異常な細胞である。形成体とは基 質に含まれる細菌、ウィルスおよび菌を意味する。本発明は患者の診断、監視ま たは治療に利用することができる。特に、本発明は、集団を除去または推移して 、他の手段では容易に確認することができない集団または副次集団を分析するの に用いることができる。適当に標識付けした細胞および形成体はヒト血液細胞の 例と同様に本発明の方法および装置を用いて予測することができる。パラメータ における変化は基質またはその欠乏に関係しないで感知することができる。

本発明は、電子粒子検知技術と臨床研究用におよび工業的用途における自動分析 装置の分野において大いに発展することのできる選択的生体分子の特異性との組 合わせを用いる用途の広い単一の分析装置およびこれを用いる方法を提供するこ とである。多数の白血球副次集団、およびヒト末梢血液における他の白血球副次 集団との関係の検出は医学研究およびヒトの病気の診断に重要である。このデー タは白血病のような病気の確認および分類のためのスクリーニング道具として有 用である。こ、の場合、本発明の実施によって確認された異常状態は、本明細書 およびこれに添付した図面から明らかなように白血球集団の検出にかぎらない研 究分野における診断的に関連する情報を与える。

本発明のもっとも有用な要点の１つは、単一のがんじょうな（ｒｕｇｇｅｄ）ク ールター検知操作を用いることができることである。

この操作は安定であって、かつ複雑で、高価な光学システムを必要としない。Ｒ Ｆ発生器および検出器を加えるのに要する回路構成は経済的で、小型でかつ信頼 性が高い単一の開口はすべての場合に要求されるが、第２または第３の開口を試 料処理量を経済的に高くするために加えることができる。

光馴２皿丞 本発明は、集団を数えて細胞または形成体またはそのサブセットにより現わされ た選択された特性または特性を確認するために細胞または形成体をスクリーニン グする方法をおよび装置を提供するものである。多数部分または５部分の区別さ れた白血球は全血液試料から、または赤血球、および／または白血球の集団を有 する試料から除去することができる。全血液試料またはその部分はＷＢＣ集団お よび、その少なくとも１つのＷＢＣ集団サブセットの直接分析によってスクリー ニングすることができる。ＲＢＣ集団は試料から、ＷＢＣ集団およびそのサブセ ットの関係する特性に実質的に影響を与えないようにして除去または予じめ除去 （ｐｒｅｒｍｏｖｅｄ）する。

関係する少な（ともＷＢＣ集団サブセット容量および／または不透明度パラメー タを修正し、次いで少なくとも集団およびそのサブセットを電子的に分析してＷ ＢＣ集団の少なくとも１つの特性を測定する。少なくとも１つのＷＢＣ集団サブ セットを、先づ集団およびそのサブセットの分析前に、試料から減らすことがで きる。２つのサブセットを同時に、異なる大きさの微小球を各サブセラ！・に結 合することによって修正する。更に、多（の微小球を関係するＷＢＣサブセット の細胞のそれぞれに結合することができる。これらの処理は光学／光波術を用い ないで任意の所望とするサブセットを含む直接ＷＢＣ分析を得るようにする。

厘皿旦固率ム脱肌 本発明の好適例を添付図面に基づいて説明する：第１〜１３図は親の特許出願第 ０２５．３４５号明細書に記載されている具体例について記載している。

第１図は親の特許出願において実施されている１つの細胞集団分析装置のブロッ ク図； 第２図は親の特許出願において実施されている第２の分析装置のブロック図； 第３図は第１および２図に相当する親の特許出願において実施されている１つの 特別の分析装置のブロック図；第４図は親の特許出願において実施されている他 の分析装置のブロック図； 第５Ａおよび５Ｂ図は第２および３図について説明したと同じ基本型の分析装置 システムを用いて得た１組の結果を示す散布図； 第６図は親の特許出願において実施されている他の分析装置のブロック図； 第７図は親の特許出願において実施されている更に他の分析装置のブロック図； 第８Ａおよび８Ｂ図、第９Ａおよび９Ｂ図、第１０Ａおよび１０８図、および第 １１Ａおよび１１８図は第６および７図について説明したと同じ基本型の分析装 置システムを用いて得たそれぞれの組の結果を示す散布図； 第１２図は親の特許出願において実施されている更に他の分析装置のブロック図 ；および 第１３図は第１２図について説明したと同じ基本型の分析装置システムを用いて 得た１組の結果を示す散布図である。

第１４〜２６Ｄ図は本発明を実施する具体例について記載している： 第１４図は本発明を実施する１つのＷＢＣ集団サブセット分析装置のブロック図 ； 第１５図は本発明を実施する他のＷＢＣ集団サブセット分析装置のブロック図； 第１６図は第１４および１５図に相当する本発明を実施する１、つの特別の分析 装置のブロック図： 第１７Ａおよび１７Ｂ図は第３および１６図について説明したと同じ基本型の分 析装置システムを用いて得た１組の結果を示す散布図； 第１８Ａおよび１８Ｂ図は第１６図について説明したと同じ基本型の分析装置シ ステムを用いて得た結果を示しており、この場合第１８Ａ図はり、　ＭおよびＧ 集団について、および第１８Ｂ図はり。

ＭおよびＢ集団について得た結果を示す散布図；第１９Ａ−Ｄ図、第２ＯＡ−Ｄ 図および第２１Ａ−Ｄ図は異なる患者の試料のＣＤ４．　ＣＤ８．　ＣＤ２およ びＣＤ２０サブセツト集団について得た結果を示す散布図； 第２２Ａ図は第１８Ａ図において示す同じ散布図であり、第２２Ｂ図はＥおよび Ｎ集団のシフトすることについて示す散布図であり、および第２２Ｃ図はＥ、　 ＮおよびＣＤ４集団をシフトすることによって示す散布図； 第２３Ａ−Ｄ図は関係するＷＢＣサブセットに結合した１つの微小球および第１ 微小球に結合した第２微小球を用いるＷＢＣサブセットの直接分析において得た 結果を示す散布図；第２４Ａ−Ｃ図は本発明のシフティング分析に用いた微小球 の大きさの効果を示す散布図； 第２５Ａ−Ｄ図は本発明の技術による２つのＷＢＣサブセット集団の同時分析に おいて得た結果を示す散布図；および第２６Ａ−Ｄ図は異なるパラメータ散布図 について説明した同じ集団において得た結果を示す散布図である。

日を　施するモード 第１−１３図は親の特許出願第０２５．３４５号明細書に記載されている具体例 について説明している。

第１図は親の特許出願第０２５．３４５号明細書に記載されている細胞集団を分 析する方法および装置の第１の例について示しており、これを実施する分析手段 を１０で示している。分析手段１０は全血液試料におけるまたは全血液試料から の少なくとも第１セツトの生存可能な（ｖｉａｂｌｅ）生体細胞（図に示してい ない）を含有する生体試料１２を含んでいる。生体試料１２の細胞は定量および ／または定性測定または分析における生物学的反応に含める。細胞を加える試料 １２に緩衝剤を含めることができる。

試料１２はライン１４を介し、ライン１８からの少な（とも１種の反応体１６と 混合する。次いで、赤血球（ＲＢＣ）を混合物から機能的に示すＲＢＣ除去ステ ーション２０によって除する。ＲＢＣは混合物から、ステーション２０により、 多くの手段で除去することができる。ＲＢＣは反応体Ｉ６における溶解剤（ｌｙ ｓｅ）によって溶解することができる。使用できるかかる選択的溶解剤および冷 却剤（ｑｕｅｎｃｈ）については、名称：全血°試　から白血球を　、確認およ び　または　る　法および試゛システムで１９８７年１０月１０日に出願された 特許出願第１３０，９１１号明細書（この出願明細書は同じ名称で１９８７年３ 月１３日に出願した特許出願第０２５、３０３号のＣＩＰである）に記載されて いる。反応体１６には多数の磁性微小球と微小球（図に示していない）に結合し たＲＢＣに特異的な抗体を含めることができる。この例において、使用した特別 の赤血球特異的抗体は名称：ヒト末　血液　の白血球を回収する単クローン性抗 体、およびこの　クローン性抗　を里見Ｍ工工方迭で１９８５年１１月１９日に 出願された特許出願第７９９、４８９号明細書に記載されている。また、反応体 １６は試料緩衝剤のほかに、または代りにある緩衝剤を含めることができる。

更に、反応体１６は選択的ＲＢＣ溶解剤およびＲＢＣ特異的微小球を組合わせる ことができる。

一旦、ＲＢＣを混合物から実質的に除去すると、混合物の１部分を白血球（ＷＢ Ｃ）分析装置２２にライン２４を介して供給する。ＷＢＣ分析装置２２は少なく とも混合物中の多数のＷＢＣを数える。、またＷＢＣ分析装置２２はＷＢＣの１ または２つ以上の容量または不透明度パラメータを測定する。分析装置２２から の結果をコンパレータ２６にライン２８を介して送る。

ＲＢＣを除去した混合物の第２の部分をＷＢＣサブセットを減らすステーション ３０にライン３２を介して送る。ＷＢＣは混合物から多くの手段により減らすこ とができる。微小球とＷＢＣサブセットの１つに特異的に結合した単クローン性 抗体とを混合物に加えることができる。非磁性微小球はＷＢＣに結合して細胞の 生成された不透明度または容量パラメータを変化またはシフトすることができる 。また、磁性微小球はＷＢＣに結合し、これを混合物から磁界によって除去する ことができる。

混合物と除去されたＷＢＣサブセット集団または１または２つ以上の変化された パラメータとをＷＢＣサブセット分析装置３４にライン３６を介して送る。分析 装置３４は分析装置２２と同じにすることができる。次いで、分析装置３４の結 果をコンパレータ２６にライン３８を介して送る。次いで、コンパレータ２６は 分析装置２２からのＷＢｃ結果を分析装置３４からの修正された結果と比較して 選択された白血球集団、例えば特定の範囲における多くの細胞の少なくとも１つ の特性を測定する。

第２図は親の特許出願において用いられている細胞集団を分析する方法および装 置の第２の例について示しており、これを実施する分析手段を４０で示している 。この分析手段４０には全血液試料におけるまたは全血液試料からの少なくとも 第１セツトの生存可能な生体細胞（図に示してない）を含有する生体試料４２を 含んでいる。生体試料４２の細胞は定量および／または定性測定または分析にお ける生物学的反応を含める。細胞に加える試料４２に緩衝剤を含めることができ る。

試料４２はライン４４を介し、ライン４８からの少なくとも１種の反応体４６と 混合する。分析手段４０においては、ＲＢＣを混合物から除去し、同時に少なく とも１つのＷＢＣサブセットの少なくとも１つの特性を機能的に示すＲＢＣ除去 およびＷＢＣシフティングステーション５０によって変化またはシフトする。上 述するように、ＲＢＣは混合物からステーションにより多くの手段で除去するこ とができ、予じめステーション２０に関して数える。同時に、同じ混合物部分に おいて、一般にＷＢＣを非磁性微小球に結合して細胞の生成された不透明度およ び／または容量パラメータを変化またはシフトする。

混合物と除去されたＲＢＣおよびシフトされたＷＢＣサブセット集団とを分析装 置５２にライン５４を介して送る。分析装置５２は分析装置２２と実質的に同じ にすることができる。これにより、分析手段４０は選定ＷＢＣ集団またはＷＢＣ サブセットの少なくとも１つの特性を速やかに直接分析することができる。

第１および第２の分析手段ＩＯおよび４０の分析方法を達成する、親の特許出願 を実施する分析器機の１つの特定の例を第３図の分析手段５６について説明する 。

分析手段５６において、１つの特定の計数について説明するが、これは親の特許 出願の原理に従って種々変更を加えることができる。

器機５６は関係する生体試料、例えば試料１２または４２を器機５６に誘引する のに用いるアスピレータ　ポンプ機構５８を備える。

アスピレータ５８をライン６０を介して試料採取弁６２に連結し、この弁６２を 試料プローブ６３に結合することができる。溶解剤ポンプ６４は反応体１８また は４６の一部分のような溶解剤を含むことができ、またライン６６を介して弁６ ２に連結される。弁６２およびポンプ５８は適当な場合にポンプ６４を介して溶 解剤と一緒に生体試料１２または４２を吸引することができる。

次いで反応体混合物または生体試料自体を排出ライン６８を介して混合装置７０ に供給する。混合装置７０は試料または反応体を供給する混合室を備える。この 点で分析装置１０および４０の操作は異なるので別々に記載する。

分析装置ＩＯの場合には、ＲＢＣがポンプ６４からの溶解剤により溶解した場合 には、次いで反応が完結した際冷却剤または固定剤をライン７６を介してステー ション７４から供給する。反応は７８で機能的に示すように室７２において溶解 剤と試料を混合することにより助けられる。

ここで用いることができる適当な混合装置７０の詳細は、参考のためここに記載 するメソッド・アンド・アパラタス・オア・ラピッド・ミキシング・オブ・スモ ール・ボリュムス・ホア・エンファンシング・バイオロジカル・レアクションズ １９８７年３月１３日提出されたシリーズＮｏ、０２５，３３７に開示されてい る。

混合装置７０を用いることにより反応は、反応温度を上げることにより起り得る ような細胞の関係ある性質を有意に損傷することなく、速度が著しく速くなる。

更に、一般に反応は１分よりかなり短く、一般に１５秒以下の程度で完結する。

このことにより自動高容量分析器機５６の迅速分析が可能である。

溶解剤により除去されるＲＢＣと冷却した反応体（ステーション２０からの如く ）をライン８０を介して滞留室８２に供給し、この場合滞留室は混合物の第２の 部分を保持する。混合物の第１の部分を室８２からライン８４を介してＷＢＣ分 析装置８Ｇ（即ち分析装置２２）に供給する。分析装置８６は米国特許第２．６ ５６．５０８号においてウォレース　エッチ、クールターにより記載され譲受人 、クールター　エレクトロニクス、インコーホレイテッドの多数の市販の血液細 胞カウンターに具体化されているカウンティング−サイジング技術による多くの 物理的タイプのものが、ある。

一般に、分析装置８６は流れセンサーまたは検出室８８を備える。

室８８は孔９２を宵する変換器９０を有する。室８８は流体と接触する第１電極 ９６を有する第１部分９９を備える。

室の部分９４および電極９６は孔９２を介して第２電極１００を有する第２の室 部骨９８と連通ずる。電極９６と１００を活性リード線１０２および１０４でＲ Ｆ／ＤＣ源および検出回路１０６に接続する。回路１０６は電極９６と１００と の間にＤＣ若しくは低周波数電流若しくは信号および高周波信号を結合する。

低周波数信号を用いて孔９２を通過する細胞により生ずる信号パルスの大きさを 検出する。高周波信号を用いて孔９２を通過する同じ細胞の電気不透明度を得る 。細胞の電気不透明度の評価は、米国特許第３．５０２．９７４号および若干の 特許および前記特許以来の譲受人、クールター　エレクトロニクス、インコーホ レイテッドの文献に記載されている。ここで使用することができる一つの特定回 路はここに参考のため記載する１９８６年１０月２１日出願され、現在米国特許 出願第９２１．６５４号である、ケース１６８゜００８におけるパーティクル・ アナライザー・ホア・メジャリング・ザ・レジスタンス・アンド・レジスタンス ・オブ・ア・パーティクルに開示されている。

回路１０６により発生する検出細胞からの信号をＤＣ信号リード線１０８および ＲＦ信号リード線１１０を介してコンパレータ１１２（コンパレータ２６と同様 ）に結合、する。コンパレータ１１２は第１部分から発生する信号を、即ち、減 らしたＷＢＣサブセットなしに、記載する第２部分からの結果と比較するために 保持することができる。

分析装置８６は、良く知られた方法で、センサ８８において細胞を集中させるた めシース　フローを含むことができる。シースフローは既知方法で一対のライン １１６と１１８によりセンサ８８に結合する流体系１１４により与えられる。試 料反応混合物を導入管１２０を介してセンサ８８に供給することができまたセン サ８８から出口管１２２を介して廃液容器１２４に供給することができる。

混合物の第１部分を分析装置８６において分析する間第２部分を室８２に保持し 、一方混合物７２を洗浄ライン１２６を介して浄化またはフラッジし廃液ライン １２８を介して排出する。室７２を浄化した場合、第２部分を室７２にライン１ ３０を介して戻す。ステーション３０と同様に、ＷＢＣサブセットをライン１３ ４、弁１３６および室ライン１３８を介してＷＢＣ微小球をステーション１３２ から添加することにより減られる。

ＷＢＣ微小球を混合機構７８により第２部分と混合する。ＷＢＣ微小球が非磁性 である場合には、結合したＷＢＣ微小球との反応混合物をライン８０、室８２お よびライン８４を介して分析装置８６（即ち分析装置３４）に供給し、第２部分 を第１部分と同様に分析し次いで結果をコンパレータ１１２（即ちコンパレータ ２６）で比較する。少なくとも１つのＷＢＣサブセット細胞パラメータ、例えば ＷＢＣサブセット結合微小球による細胞不透明度を、第２部分で変化させて分析 することができる変化した結果を得る。

ＷＢＣ微小球が磁性である場合には、これに結合するＷＢＣサブセットを次いで 磁界または磁石１４０により混合中および／または混合後磁界により除去する。

磁界は室７２に対して物理的に動いて磁気的に結合したＷＢＣサブセットを捕獲 する磁石１４０または電磁手段により与えることができる。結合したＷＢＣサブ セットなしに第２部分をライン８０、室８２およびライン８４を介して前記方法 で分析装置８６に前記方法で供給して分析を行う（分析装置３４と同様）。

次いで器機５６を用意して次の分析のための次の試料を採取する。プローブ６３ をプローブ洗浄機構１４２により洗浄することができラインおよび室７２と８２ を従来法でフラッシュすることができる。引続く試料混合物の各分析は迅速な自 動法で行われる。

引き続く試料混合物の分析を行う間の期間は数分以下の程度である。

分析器機５６を操作する際、分析装置４０と同様にＲＢＣ分解剤／反応体４６お よび試料４２との反応混合物を室７２において、ＷＢＣサブセットの一つに結合 する、ステーション１３２からの非磁性ＷＢＣ微小球と一緒に混合する。冷却剤 ７４を活性混合物に添加し次いでこれをライン８０、室８２およびライン８４を 介してＷＢＣ分析装置８６に供給して分析する（即ち分析装置５２と同様）。

或いはまた分析装置１０および４０のいずれかにおいて、分解剤を使用するため 、試料１２または４２を弁６２を介して混合装置７０に分解剤を全く用いること なく供給することができる。この場合、ＲＢＣは微小球をこれに結合するＲＢＣ 特異抗体と一緒に使用することによりＲＢＣ微小球ステーション１４４から磁気 的に除去し、ライン１４６を介して弁１３６に従ってライン１３８を介して室７ ０に供給する。分解剤を利用しない場合には、結合したＲＢＣを上記磁気的に結 合したＷＢＣとほぼ同様の方法で混合した後磁石１４０により磁気的に除去する 。

更に、反応の速度を加速するため第２の場合では、試料とＲＢＣ分解剤およびＲ ＢＣ磁性ビーズとの反応混合物を使用することができる。反応混合物を混合する 場合には、分解剤を冷却し、結合したＲＢＣを磁気的に除去し次いでＷＢＣを前 述の如く分析する。

第４図に、原出願を使用する細胞集団分析法および装置の他の例を一般に１４８ で示す。分析装置１４８は再び全血試料におけるまたは全血試料からの生存し得 る少なくとも第１組の生物細胞を含有する生体試料１５０を含む。再び試料１５ ０は緩衝剤を含みこれに細胞を添加する。

ライン１５２を介して試料１５０を少なくとも１つの反応体１５４とライン１５ ６を介して混合する。次いで前述の如く機能的に示すＲＢＣ除去ステーション１ ５８により除去する。除去したＲＢＣとの反応混合物をライン１６０を介してＷ ＢＣ分析装置１６２に供給する。分析装置１６２からの結果をライン１６６を介 してコンパレータ１６４に供給し、単球（Ｍ）、リンパ球（Ｌ）および顆粒球（ Ｇ）に対する結果で区別されている３部分ＷＢＣを得る。

次に混合物をライン１７０を介して好中球（Ｎ）の機能的に示す除去ステーショ ン１６８に供給する。好中球は、前述の如く、不透明度の如き１つのパラメータ を移動するかまたは変えることによるかまたは磁気的除去により除去することが できる。この例においては、使用される特定のＮ特異抗体は１９８６年１２月８ 日に出願し、現在米国特許出願第９３８．８６４号である、ケース１６８゜除去 または移動されたＮとの混合物をライン１７４を介して他のＷＢＣ分析装置１７ ２に供給する。分析装置１７２の結果をライン１７６を介してコンパレータ１６ ４に供給する。分析装置１７２の結果を用いて再びＭとＬに対する結果で区別さ れている４部分ＷＢＣが得られるが、更にＮが移動されるかまたは除去されるの で好酸球（ＩＥ）および好塩基球（Ｂ’）が得られる。次いで分析装置１６２と １７２からの２つの分析結果をコンパレータ１６４により比較して区別されてい る５部分ＷＢＣを形成することができる。

特に、Ｇの数からＢとＥの数を減すると除去したＮの数になる。

第５Ａ図および第５Ｂ図において、分析装置１４８と同様の基本型分析方法を用 いて全血試料から得た２組の散布図の結果を示す。

生体試料１５０は２０μｌの全血試料で、これを磁性微小球とこれに結合したＲ ＢＣ特異抗体４０ｍ１と緩衝液１４０ｍ１と混合して反応体１５４を形成した。

反応混合物を１５秒間混合しステーション１５８における磁界にｌＯ秒間装いた 。除去したＲＢＣとの混合物を第５Ａ図の散布図に示すように分析装置１６２に より分析してＬ４５．６（１）、　ＭＳ、６（２）および０４８．７（３）のカ ウントを得た。

次いで混合物を磁性微小球とこれに結合するＮ特異抗体１０ｍ１と混合した。混 合物を３０秒混合し次いで磁界に１０秒秒間−た。

次いで除去したＮとの混合物を分析装置１７６に供給し第５Ｂ図の散布図を得、 Ｌ　８１．０（１）　、　Ｍ　Ｏ，６（２）、　８１１．０（３）および８１． ８（４）のカウントを得た。次いでコンパレータ１６４によりＬ４５．６゜Ｍ　 ５．６　、　Ｎ　４１．６．　Ｅ　６．０およびＢ１．２のカウントの区別され ている５部分ＷＢＣを得た。これはスライド上の試料に対しライト染色を使用す る標準顕微鏡の区別されている５部分ＷＢＣに相当し、この場合のカウントはＬ 　４４．０．　Ｍ　３．４　、　Ｎ　４５．０．　Ｅ　６．１およびＢＯ０４で ある。

第６図は、一般的に１７８で表わす、原出願を使用する細胞集団分析法および装 置の他の例を示す。分析装置１７８は生体試料１８０を有しこの試料１８０は再 び少なくとも第１組の生存し得る生体細胞を含みまた緩衝液を含むことができる 。

試料１８０はライン１８２を介して反応体１８４とライン１８６を介して混合す る。機能的に示す混合物の第Ｉの部分をライン１８８を介して機能的に示すＲＢ ＣおよびＮ除去ステーション１９０に供給する。前述の如＜ＲＢＣとＮを除去す るかまたは移動する第１の部分をライン１９２を介してＷＢＣ分析装置１９４に 供給する。

これにより分析装置１９４からの結果が得られこれをライン１９６を介してコン パレータ１９８に供給する。これ等の結果はＭ、　Ｌ。

ＥおよびＢを含む区別されている前記４部分を含む。

同時に、試料１８０と反応体１８４の混合物の第２の部分をライン２００を介し て機能的に示すＲＢＣ除去ステーション２０２に供給する。除去したＲＢＣとの 混合物をライン２０４を介して他のＷＢＣ分析装置２０６に供給する。分析装置 ２０６の結果をライン２０８を介してコンパレータ１９８に供給する。分析装置 ２０６の結果はＭ、ＬおよびＧを含む区別されている上記３部分ＷＢＣを直接合 む。次いで分析装置１９４と２０６の結果をコンパレータ１９８により比較して 区別されている５部分ＷＢＣを得る。

分析装置１７８の方法および装置を組み込んだ特定の分析装置の例を第７図に一 般的に２１０で示す。再び、唯一特定装置の細目を示したが、分析装置５６と同 様に分析装置２１０は多くの構成で形成することができる。

装置２１０はアスピレータ　パージ機構２１２を備えこれをライン２１６を介し て試料採取弁２１４に連結する。弁２１４は試料プローブ２１８を備え関係する 生体試料、例えば試料１８０を吸引する。

希釈剤供給ポンプ２２０をライン２２２を介して弁２１４に連結して試料、例え ば所要に応じて全血試料用希釈剤を供給する。混合物の第１の部分をライン２２ ４および２２６を介し第１混合装置２２８に供給する。同時に、混合物の第２の 部分をライン２２４およびライン２３０を介して第２混合装置２３２に供給する 。

ミキサー２２８（ステーション１９０に匹敵する）はミキサー２３２（ステーシ ョン２０２に匹敵する）にほぼ等しく最初に記載する。

ミキサー２２８は混合室２３４を備えこの室に第１の混合物部分を供給する。ミ キサー２２８は上記の種々の選択し得るものすべてを含み所要に応じてＲＢＣ分 解剤に対する分解剤供給ライン２３６を備えることができる。

分解剤を用いる場合には、２３８で機能的に示すように混合後冷却剤を冷却剤ラ イン２４０を介して添加する。同時に、適切な磁性または非磁性微小球をＮ特異 抗体の結合したうイン２４４を介して室２３４に供給される微小球の給源２４２ から添加することにより除去されている。磁性微小球をＮまたはＲＢＣに対して 使用する場合には、磁石２４６または磁界を用いて磁気的に結合した細胞を除去 する。

次いで混合し冷却（所要に応じ）した混合物をライン２４８を介し弁２５０およ びライン２５２を通してＷＢＣ分析装置２５４（即ち分析装置１９４）に供給す る。分析装置２５４は分析装置８６と同じであり詳細には記載しない。再び、分 析装置２５４は混合物および細胞が通過す孔２５８を有する検知室２５６を備え る。シースプロー流体系２６０を室２５６に連結することができる。細胞により 発生する信号をＲＦ／ＤＣ源および検知回路により検出し、その出力を、前記の 如く、コンパレータ２６４に供給する。

同時に、第２の混合物部分を混合室２６６に供給する。第２の部分において、Ｒ ＢＣだけが除去され（即ちステーション２０２と同様）ＲＢＣはライン２６８を 介して室２６６に供給されるＲＢＣ分解剤により除去することができる。分解剤 を試料と混合し次いで冷却剤を冷却剤ライン２７０を介して添加する。或いはま たＲＢＣは微小球給源２７２からライン２７４を介して室２６６に供給するＲＢ Ｃ特異抗体の結合した磁性微小球により除去することができる。微小球は機能的 に示す２７６において混合し、次いで磁気的に結合したＲＢＣ微小球を磁石２７ ８により除去する。

ＲＢＣが除去された混合物を次いでライン２８０を介して弁２５０へ供給しライ ン２５２を介して分析装置２５４に供給して上記結果を得る。ミキサー２２８お よび２３２は適切な夫々の洗浄ライン２８２および２８４並びに廃液ライン２８ ６および２８８並びにプローブ洗浄機構２９０を備え分析する試料または次の試 料を吸引する前に装置２１０を洗浄する。

第８Ａ図および第８Ｂ図は分析装置１７８に類似す分析方法を用い全血試料から 得た散布図の結果を示す。この例においては２０μｌの全血が試料１８０を形成 し、ＲＢＣ特異抗体の結合した磁性微小球４０μｌと１４０μｌの緩衝液の混合 液が反応体１８４を形成する。混合物の一部分をステーション２０２において２ ０秒間混合し次いで磁界に１０秒問おく。ＲＢＣが除去された混合物を分析装置 ２０６で分析してＬ　２９，４（１）　、　Ｍ　８．１（２）およびＧ　６２． ４（３）のカウントを与える第８Ａ図の散布図を得る。

同時に、同じ混合物の他の部分をＮ特異抗体の結合したｌＯμｌの磁性微小球と 混合してステーション１９０においてＲＢＣとＮを除去する。混合物を３０秒間 混合し、次いで磁界に１０秒問おく。

除去したＮとＲＢＣとの混合物を次いで分析装置１９４により分析してＬ　７３ ．５（１）　、　Ｍ　２１．７（２）　、　Ｂ　３．４（３）および８１．４（ ４）のカウントを与える第８Ｂ図の散布図を得る。２つのカウントをコンパレー タで比較して、Ｌ２９．４．　Ｍ８．０．　Ｎ６０．８．　８１．２およびＢｅ ２Ｃの区別されている５部分ＷＢＣのカウントを得た。再び顕微鏡による比較を 行った結果Ｌ　２９．４．　Ｍ　５．０．　Ｎ　６５．０．　Ｅｌ、０およびＢ １．０より小のカウントを得た。

第９Ａ図および第９Ｂ図は第８Ａ図と第８Ｂ図と同様の区別されている５部分Ｗ ＢＣの例の散布図の結果を示す。２０μｌの全血試料を第８Ａ図および第８Ｂ図 に対して記載したと同様の工程で分析しＬ　３５．４（１）　、　Ｍ　１４．６ （２）およびＧ　５０．０（３）のカウントを与える第９Ａ図の散布図を得た。

第９Ｂ図の散布図はＬ　６６．４（１）　、　Ｍ　２５．０（２）　、　８６． ６（３）および８２．０（４）のカウントを与える。得られた区別されている５ 部分ＷＢＣのＬ　３５．４．　Ｍ　１４．６．　Ｎ　４５．５　、　Ｂ　３．５ およびＢ１．１のカウントの結果をＬ３６．Ｍｌｌ、Ｎ４９．Ｅ３およびＢｌの 顕微鏡によるカウントと比較した。

第１０Ａ図および第１０Ｂ図は第８Ａ図、第８Ｂ図および第９Ａ図、第９Ｂ図と 同様の区別されている５部分ＷＢＣの散布図の結果を示すが、本例では分解剤を 用いた。本例においては、２０μＩの全血を８０μｍの緩衝液および２４０μｌ の上記ＲＢＣ優先分解剤と混合した。混合物を６秒間混合し次いで冷却剤を添加 した。時間の長さは、約１０秒より長い時間冷却されないままの分解剤がＷＢＣ の重要な性質に影響を与え始めるので、重要である。除去されたＲＢＣとの混合 物を分析して第１０Ａ図の散布図を得この結果Ｌ　２５．７（１）　、　Ｍ　９ ．６（２）およびＧ　６５．０（３）のカウントを得た。

第２の２０μｌの全血試料を含む混合物の第２の部分を１２０μＩの緩衝剤およ び特異抗体の結合した磁性微小球ｌＯμｌと組合せ３０秒間混合し、次いで磁界 に１０秒問おいた。

ＲＢＣ優先分解剤を次いでＮが除去された混合物に添加しこれを冷却する前６秒 間混合した。得られた散布図第１０８図ではＬ　７４．６（１）　、　Ｍ　２１ ．６（２）　、　８２．９（３）および８０．８（４）のパーセント　カウント となった。得られた区別されている５部分ＷＢＣではＬ　２５．６．　Ｍ　９． ６　、　Ｎ　６３．５．８１．０６およびＢＯ０３のパーセントカウントとなっ た。再び顕微鏡による比較の結果Ｌ　２９．４．　Ｍ５．０　、　Ｎ　６５．０ ．　Ｅ　１．０およびＢ１より小のカウントとなった。

第１０Ａ図および第１０Ｂ図と同様の区別されている５部分ＷＢＣの散布図の結 果の他の例を第１昆図および第１１Ｂ図に示す。

全血試料は２つの試料を第１０Ａ図および第１０Ｂ図に対して記載したと同様の 工程で同時に分析した。第１１Ａ図の散布図からし３１．９（１）　、　Ｍ　１ ７．６（２）およびＧ　５０．４（３）のカウントが得られた。

第１１Ｂ図の散布図からＬ　６７、１（１）、　Ｍ　２４．１（２）、　８７． ６（３）および分ＷＢＣではＬ　３６．　Ｍ　１１．　Ｎ　４９．　Ｅ　３およ びＢｌの顕微鏡力、ラントに比較してＬ　３１．９．　Ｍ　１１．４．　Ｎ　４ ６．０．８３．６および８０．７のカウントとなった。

尚原出願を具体化する細胞集団分析法の他の例を第１２図で一般的に２９２によ り示す。分析装置２９２は生体試料２９４を有し、再び少なくとも第１組の生存 し得る生体細胞を含み所要に応じて緩衝剤を含む。

試料２９４をライン２９６を介し少なくとも１種の反応体２９８をライン３００ を介して両者を混合する。分析装置２９２において、ＲＢＣを除去し引続きまた は同時にＮを機能的に示すステーション３０２で移動する。ＲＢＣ除去機能を３ ０４で示し、Ｎの運動または移動部分を３０６で示しこれ等の機能を同時にまた は引続き行なうことができることを示す。ＲＢＣは前記の如く磁気的にまたは分 解剤を用いて或いは両者を組合せて除去することができる。ＮはＮ特異抗体の結 合した微小球を混合物に添加することにより除去または移動させる。

ＲＢＣが除去され且つＮが運動または移動するとその際得られた混合物をライン ３０８を介して分析装置３１０に供給する。この場合、ＮＣ；！Ｍ、Ｌ、Ｅ、Ｂ およびＮの区別される５部分ＷＢＣが直接得られＥおよびＢのパターンから十分 に移動する。分析装置２９２の機能は装置５６および２１０またはそれ等を僅か に変えたもので行なうことができる。

分析装置２９２による区別されている直接の５部分ＷＢＣの一例の散布図の結果 を第１３図に示す。この例においては、生体試料２９４は２０μｍの全血試料で あり反応体２９８はＮ特異抗体の結合した非磁性微小球１０μｍにｌＯＯμＩの 緩衝剤を組合せサブステーション３０６で３０秒間混合したものである。ＲＢＣ 優先部会剤ＩＯμｍを、次いで混合物に添加しこれをサブステーション３０４で ６秒間混合し然る後冷却剤を添加する。ＲＢＣが除去されＮが移動した混合物を 次いで分析装置３１０で分析して第１３図の散布図が得られこれによりＬ３５． 　Ｍ５．　Ｎ５６．　Ｂ４でＢがＯである顕微鏡測定と比較してＬ　２９．６． 　Ｍ　１３．６．　Ｎ　５２．２．　Ｅ　３．４およびＢ１．０６の直接のカウ ントが得られる。この特殊な例では、また全血試料をクールター・エクレトロニ クス・インコーホレーテッドの一般の細胞計算装置で分析し、Ｌ　２９．　Ｍ　 １１．１およびＧ５９．９（Ｎ、　ＥおよびＢ）を得た。

図１４〜２６Ｄを参照して本発明の例を説明する。

図１４では、白血球集団サブセット分析方法および分析装置の第１の例を全般的 に符号３２０で示す。分析装置３２０は生体試料３２２を有し、試料３２２は全 血試料中または全血試料からのような少なくとも１個の限定可能なサブセットを 有する少なくとも１個の白血球集団を含む生存可能な生体細胞の少なくとも第１ セツト（図示せず）を含有する。ここに使用するように、白血球サブセットとは 特異モノクローナル抗体が結合することができる白血球集団のサブセットである 。命名法は今日ではワールド・ヘルス・オルガニゼイション（Ｗｏｒｄ　Ｈｅａ ｌｔｈ　Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）およびインターナショナル・イムノロシイ ・ソサイエティ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　５ｏｃ ｉｅｔｙ）によってモノクローナル抗体について定義されている。モノクローナ ル抗体は区別群（クラスター・オブ・ディファレンティエーション（ｃｌｕｓｔ ｅｒ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ））　（ＣＤ）命名法によって定 義されており、この命名法は細胞または細胞群に対する特殊な特異性およびＣＤ グループに特異的なモノクローナル抗体を定義している。例の目的のためのみに 、次の例ではＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２およびＣＤ２０という４種のＣＤクループ を使用した。ＣＤ命名法、特異性およびモノクローナル抗体のいくつかの商業的 供給源を表１に示す。

区別群　抗体（商業的供給源）ｂ　特異性ＣＤ８（ｇｐ３２〜　Ｔ８　（クール ター）　細胞障害性／３３）　０ＫＴ８（オルト）；Ｌｅｕ２．　（ＨＤ）　サ プレッサーＴ°ｇｐ　−糖タンパク質、分子量キロダルトン生体試料３２２の細 胞は、定量的および定性的の一方または両方の測定または分析における生物学的 反応に関与する。試料３２２は緩衝剤を含有することができ、緩衝剤には細胞を 添加する。

ライン３２４からの試料３２２をライン３２８からの少なくとも１種の反応体３ ２６と組み合わせる。分析装置３２０において、この混合物から赤血球を除去し 、これと同時またはこれに次いで、少なくとも１個の白血球サブセットの少なく とも１個の特性を、機能的に名付けられた赤血球除去および白血球サブセット移 動ステーション３３０によって変化または移動させる。親の特許出願に記載され ているように、混合物から赤血球を、ステーション２０に関して述べたようない くつかの方法で、ステーション３３０により除去することができる。これと同時 にあるいはこれに次いで、同じ混合物部分中で、少なくとも１個の白血球サブセ ットを該サブセットに特異的なモノクローナル抗体を有する白血球微小球に結合 させて、その結果生じる細胞の不透明度および／または容量パラメータを変更（ 変化または移動）させる。

次いで、赤血球が除去されかつ白血球サブセット集団が移動されている混合物を 、ライン３３４を経て分析装置３３２に供給する。分析装置３３２は分析装置２ ２と実質的に同一にすることができる。関係ある白血球サブセットは一般的に関 係ある白血球集団のパーセントとして関係づけられる。従って、分析装置３２０ は白血球集団の選択されたサブセットの少なくとも１個の特性を迅速に直接分析 する。分析装置３２０は、移動した白血球サブセットが他の一層多数の細胞によ って不明瞭になる場合、あるいは白血球サブセットの移動した細胞の数が不明瞭 にするが識別可能にするのに十分なパーセントである場合に、使用することがで きる。

図１５では、白血球集団サブセット分析方法および分析装置の第２の例を全般的 に符号３４０で示す。分析装置３４０は生体試料３４２を有し、試料３４２は全 血試料中または全血試料からのような少な（とも１個のサブセットを有する少な くとも１個の白血球集団を含む生存可能な生体細胞の少なくとも第１セツト（図 示せず）を含有する。この例においても、生体試料３４２の細胞は、定量的およ び定性的の一方または両方の測定または分析における生物学的反応に関与する。

試料３４２は緩衝剤を含有することができ、緩衝剤には細胞を添加する。

ライン３４４からの試料３４２をライン３４８からの少なくとも１種の反応体３ ４６と組み合わせる。分析装置３４０において、この混合物から赤血球を除去し 、これと同時またはこれに次いで、少なくとも１個の白血球サブセットの少なく とも１個の特性を、機能的に名付けられた赤血球除去および白血球サブセット移 動ステーション３５０によって変化または移動させる。前述のように、混合物か ら赤血球を、ステーション２０に関して述べたようないくつかの方法で、ステー ション３５０により除去することができる。この例においても、これと同時にあ るいはこれに次いで、同じ混合物部分中で、少なくとも１個の白血球サブセット を微小球に結合させて、その結果生じる細胞の不透明度および／または容量パラ メータを変更（変化または移動）させる。

これと同時にあるいはこれに次いで、混合物から少なくとも１個の白血球集団ま たはサブセットを除去する。白血球集団またはサブセットは、関係ある白血球サ ブセットが白血球集団によって不明瞭にならないように除去する。これは、白血 球集団に特異的なモノクローナル抗体が結合している磁性微小球に結合させた後 に、白血球集団を磁気的に除去することにより達成するのが好ましい。

次いで、赤血球および白血球集団が除去されかつ白血球サブセット集団が移動さ れている混合物を、ライン３５４を経て分析装置３５２に供給する。この例にお いても分析装置３５２は分析装置２２と実質的に同一にすることができる。

図１６では、親の特許出願を具体化し、第１および第２の分析装置３２０および ３４０による分析方法を達成することができる分析機器の１つの特定例を全般的 に符号３６０で示す。

機器３６０については、機器５６と同様に、１つの特定例のみを示したが、この 例は最初の親の特許出願の発明思想に従って、極めて詳細に変えることができる 。さらに、機器３６０は全般的に機能上詳細に示されており、種々の特定例を構 造上多数の既知の手段で実施することができる。

機器３６０はアスピレータポンプ機構３６２を具え、アスピレータポンプ３６２ を使用して関係する生体試料、例えば試料３２２または３４２を機器３６０中に 吸引する。アスピレータポンプ３６２はライン３６４によって試料採取弁３６６ に連結され、弁３６６は試料プローブ３６８に連結することができる。溶解剤ポ ンプ３７０は反応体３２６または３４６の一部のような溶解剤を含むことができ 、またライン３７２によって弁３６６に連結されている。弁３６６およ３４２を ポンプ３７０からの溶解剤と共に吸引することができる。

生体試料３２２または３４２は溶解剤とは別個に添加するのが好ましい。

次いで、反応体混合物または生体試料そのものを、排出ライン３７４を経て混合 装置３７６内に供給する。混合装置３７６は混合室３７８を具え、混合室３７８ には試料または反応体が供給される。

分析装置３２０と３４０とは操作の点で僅か異なるにすぎないので、これらを− 緒に説明する。

操作の際に、赤血球がポンプ３７０からの溶解剤によって溶解されている場合に は、反応が完結した際に冷却剤または固定剤をステーション３８０からライン３ ８２を経て供給する。そこで赤血球除去反応が完結する。この反応は機能上３８ ４で示すように混合室３７８内において溶解剤と試料とを混合することによって 促進される。

赤血球の除去前、除去後あるいは除去と同時に赤血球を移動させ、分析装置３４ ０の場合にはまた１個の白血球集団またはサブセットを除去する。白血球サブセ ットは特異的白血球微小球をステーション３８６からライン３８８、弁３９０お よび混合室へのライン３９２を経て添加することにより移動させる。この白血球 微小球と混合物または試料とを混合機構３８４によって混合する。

適当な混合装置３７６の詳細は混合装置７０と実質的に同一とすることができる 。混合装置３７６を使用することにより、反応は例えば温度を上昇させることに よって起こることがあるように速度が著しく大きくなるが、細胞の関係ある性質 が有意に損傷を受けることはない。さらに、一般的に反応は数分より有意に短い 時間で完結し、一般的に２分以内程度で可能である。これは自動的高容量分析機 器３６０による迅速な分析を可能にする。

次いで、分析装置３２０においては、冷却された反応体を溶解剤によって（ステ ーション２０らと同様に）除去された赤血球および修正白血球サブセットと共に 、ライン３９４を経て赤血球分析装置３９６（すなわち、分析装置３３２）に供 給する。分析装置３９６は、米国特許第２．６５６．５０８号中にウォーレス・ エッチ・クールターによって記載され、クールター・エレクトロニクス社の多数 の市販の血球カウンターに具体化されているカウンティング−サイジング技術に よる多くの物理的タイプのものとすることができる。

前述のように、一般的に、分析装置３９Ｇはフローセンサまたはフロー検知室３ ９８を具える。室３９８は変換器４００を具え、変換器４０Ｑはこれを貫通する 開口４０２を有する。フロー検知室３９８は第１部分４０４を具え、第１部分４ ０４はこのなかの流体と接触する第１電極４０６を有する。第１室部分４０４お よび電極４０６は開口４０２によって第２室部分４０８と連通し、第２室部分４ ０８はそのなかに第２電極４１０を有する。電極４０６および４１０は活性リー ド線４１２および４１４によってＲＦ／ＤＣ電源および検知回路４１６に連結さ れている。回路４１６は電極４０６と４１０との間において直流または低周波の 電流または信号と高周波信号との両者を結び付ける。

低周波信号は開口１０２を通る細胞によって生じる信号パルスの振幅を検知する のに使用される高周波信号は開口４０２を通る同じ細胞の電気的不透明度を得る ために使用される。

細胞の電気的不透明度の測定は、米国特許第３．５０２．９７４号およびこの特 許以降のクールター・エレクトロニクス社のいくつかの特許および刊行物中にウ ォーレス・エッチ・クールターおよびウォルター・アール・ホフによって記載さ れている。ここに使用することができる特定の１つの回路はここに参考して記載 する米国特許出願第９２１．６５４号明細書に開示されている。

回路４１６によって生じた信号は検知された細胞からＤＣ信号リード線４１８お よびＲＦ信号リード線４２０を経てコンパレータ４２２（コンパレータ２６と同 様のもの）に結び付けられている。

分析装置３９６は、よく知られているように、細胞をセンサ３９８に集中させる シースフローを含むことができる。シースフローは流体系４２４によって提供す ることができ、流体系４２４は既知のように１対のライン４２６および４２８に よってセンサ３９８に連結されている。試料反応混合物は導入管４３０を経てセ ンサ３９８に供給することができ、センサ３９８から出口管４３２を経て廃棄物 容器４３４に供給することができる。

各操作に次いで、混合室３７８を、洗浄ライン４３６を経て清浄にするかあるい は水で洗い流し、廃液ライン４３８を経て空にする。混合室３７８が清浄になっ たら、別の試料または試料部分を機器３６０に供給することができる。

分析装置３４０においては、操作は分析装置３２０と同じであり、磁性白血球集 団またはサブセット微小球を添加する。次いで、微小球に結合した白血球サブセ ットを、磁界または磁石４４０による混合プロセス中および／または混合プロセ ス後に磁界によって除去する。磁界は電磁気手段または磁石４４０によって提供 することができ、電磁気手段または磁石４４０を混合室に関して物理的に移動さ せて磁気的に結合している白血球サブセットを捕捉する。次いで、結合した白血 球サブセットの存在していない混合物を、ライン３９４を経て前述と同様にして 分析装置３９６に供給して分析を達成する（分析装置３２０と同様である）。

次いで、次の分析のために次の試料を採取するよう機器３６０を準備する。プロ ーブ３６８はプローブ洗浄機構４４２によって清浄にすることができ、ラインお よび混合室３７８は常法により水で洗い流すことができる。逐次の試料混合物の 分析はいずれも迅速かつ自動的に達成される。逐次の分析試料混合物の分析間の 期間は５分以内程度とすることができる。

分析装置３２０および３４０のいずれかにおいて、溶解剤を使用する代りに、溶 解剤を使用せずに試料３２２または３４２を、弁３６６を経て混合装置３７６に 供給することができる。この場合には、赤血球微小球ステーション４４４からの 赤血球特異抗体が結合している微小球を使用することにより、赤血球を磁気的に 除去し、ライン４４６を経て弁３９０に、従ってライン３９２を経て混合室３７ ８に供給することができる。溶解剤を使用しない場合には、結合赤血球も、上述 の磁気的に結合した白血球と実質的に同様にして、混合後に磁石４４０により磁 気的に除去される。

さらに、反応の速度または効率を促進させる第２の場合には、試料と赤血球溶解 剤および赤血球磁性ビーズとの反応混合物を使用することができる。この反応混 合物を混合し、溶解剤を冷却し、結合赤血球を磁気的に除去し、次いで白血球を 前述のようにして分析する。

図１７Ａおよび１７Ｂには、機器３６０に類似した基本型分析装置を使用して全 血試料がら得た２組の結果を散布図として示す。

２個の白血球集団を取゛り出じ、Ｔ、サブセットを直接分析する。

Ｔ８サブセットは、Ｔ８特異抗体が結合している受容体または抗原を有する細胞 または形成体である。図面にはこれらをＴ８＋とじて表示する。Ｔ８特異抗体が 結合している受容体または抗原を有していない細胞または形成体はＴ、−と表示 する。これらの例において、生成試料３４２は混合装置３７６を使用して得た２ ０マイクロリツトルの全血試料である。図１７Ａおよび１７Ｂの両方において、 ２０マイクロリツトルの全血試料、すなわち生体試料３４２を、赤血球特異抗体 が結合している磁性微小球４０マイクロリツトルと組み合わせ、緩衝液１２０マ イクロリツトルおよびＮおよびＥ特異抗体が結合している磁性微小球１０マイク ロリツトルと組み合わせ、−緒に反応体３４６を形成する緩衝液３０マイクロリ ツトルと組み合わせた。このようなＮおよびＥ特異抗体の具体例の１つは、こ、 こに参考として記載する１９８７年６月３日付けにて出願された「好中球および 好酸球の共通の決定部位に特異的なモノクローナル抗体」という名称の米国特許 出願第０６８、６１８号明細書に開示されている。

磁性微小球は任意の適当なタイプのものとすることができ、この例では米国イン ディアナ州、インディアナポリス所在のセラジン社（Ｓｅｒａｄｙ口、　Ｉｎｃ 、）から販売されている直径０．７ミクロン、固形分１０重量／容量％のポリス チレン磁性微小球である。

次いで、反応混合物を混合装置３７６内でｌＯ秒間混合し、磁石４４０の磁界内 に１５秒間置き、次いで除去された赤血球とＥとＮとの生成混合物を分析装置３ ９６で分析した。得られた散布図Ａを図１７Ａに示す。

図１７Ｂの散布図は、Ｔ８特異抗体が結合している非磁性微小球１２．５マイク ロリツトルを緩衝液１２．５マイクロリツトルと組み合わせて添加して反応体３ ４６を形成し、同様な操作によって得たものである。Ｔ８特異抗体はクールター 社のクールター・イムノロシイ−ディビジョン（Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏ ｌｏｇｙ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）により「クールター・クローン（ＣＯＵＬＴＥＲ ＣＬＯＮＥ■」という登録商標名で販売されている。この場合にも、非磁性微小 球は適当なタイプのものとすることができ、これらの例では米国、オレゴン州ポ ートランド所在のインターフェイシャル・ダイナミクス社（Ｉｎｔｅｒｆａｃｉ ａｌ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ）によりＩＤＣ微小球として販売されている直径１．７ ８　ミクロン、界面活性剤を含有していない固形分８重量／容量％の硫酸化ポリ スチレンラテックス微小球である。

Ｔ８微小球の添加により結合ＣＤ８細胞は区域Ｂに移動し、図１７Ａおよび１７ Ｂの散布図を比較することにより分るように、区域Ｂでは結合ＣＤ８細胞を別々 に識別し、計数することができる。図１７Ａでは、ＣＤ８細胞は残っている白血 球によって隠されている。ＮおよびＥは散布図から除去されているか、あるいは ＮおよびＥは図１７Ｂにおける移動ＣＤ８細胞の識別を不明瞭にする。図１７Ａ はＮおよびＥが除去されていることを示すが、図１７８はＣＤ８結合細胞が区域 Ａから区域Ｂに移動したことを明瞭に示している。緩衝液は米国ミズーリ州セン トルイス所在のジグ？−ケミカル社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐ ａｎｙ）によって販売されているリン酸塩でｐＨを調節した食塩水とすることが できる。

さらに、図１８Ａは分析装置３５２からの細胞集団Ｍ、ＬおよびＧの通常の散布 図、すなわち３種のパラメータのヒストグラム位置を示す。Ｇを除去しない場合 には、図１７Ｂで分るように、移動した白血球サブセットの区域Ｂは数の点で遥 かに多数であるＧによって不明瞭になる。図１８ＢはＥおよびＮを除去した後に 残っている白血球集団Ｍ、　ＬおよびＢを示す散布図である。

Ｂがなお関係ある区域を部分的に不明瞭にしているかもしれないが、白血球集団 のＢパーセント数はサブセットパーセントの所望の計算に実質的に影響を与えな いのに十分な小さい値である。しかし、Ｂの寄与を所望に応じてサブセットパー セントから減らすことができる。

図１９Ａ−Ｄ、図２０Ａ−Ｄおよび図２１Ａ−Ｄには、３人の患者からの各自の 試料のＣＤ２．ＣＤ４．ＣＤ８およびＣＤ２０白血球サブセット集団の直接サブ セット分析を示す。各サブセット集団の場合には、２８マイクロリツトルの全血 試料を、ＮおよびＥ特異抗体が結合している２０マイクロリツトルの磁性微小球 （２，５重量／容量％溶液）と組み合わせた。さらに、非磁性微小球をそれぞれ の白血球サブセットに対するそれぞれのモノクローナル抗体と一緒に試料と組み 合わせた。Ｔ４　、Ｔｓ　、Ｔ＋□またはＢ＋被覆微小球のそれぞれの量はいず れも４０マイクロリツトルである（それぞれ１重量／容量％溶液）。それぞれの 全混合物、すなわち例えばＮおよびＥ微小球をＴ８と共に、１％のウシの血清ア ルブミンを含有しかつリン酸塩でｐＨを７．２〜７．４に調節した食塩水である 緩衝液と組み合わせて全容積を１５０マイクロリツトルにした。それぞれの混合 物を混合室３７８内で混合装置３７６により２分間混合し、次いで磁界４４０内 に１分間室いた。これらの例では、上述の溶解剤を使用して赤血球を逐次除去し た。先ず白血球微小球を加え、次いで例えば溶解剤ポンプ３７０からの、クール ター・エレクトロニクス社から販売されているエリスロライズ（Ｅｒｙｔｈｒｏ ｌｙｓｅ）溶血試薬のような溶解剤３００マイクロリツトルによって溶解するこ とにより赤血球を除去する。次いで、この混合物をステーション３８０からの、 クールター・エレクトロニクス社により販売されている白血球保存剤であるスタ ビライズ（Ｓｔａｂｉｌｙｓｅ）のような冷却剤１２０マイクロリツトルで冷却 する。

各散布図における右手ブロック（１）は関係あるそれぞれの白血球サブセット集 団を示す。図面に示されているブロック１゜２．３等を、関係ある白血球集団ま たはサブセットのまわりに目視によりあるいは自動的に適合させて設ける。

従来の流動細胞計測法を使用して結果を比較し、本発明方法（Ｓｈｉｆｔ）と流 動細胞計測法（ＣＹＴ）とにより３種の試料に関して次のパーセントで示す比較 結果を得た。

図２２Ａも分析装置３５２からの細胞集団Ｍ、ＬおよびＧの通常の散布図、すな わち３種のパラメータの位置を示す。ＮおよびＥを除去しない場合には、ＣＤ４ 細胞集団は不明瞭になる。ＮおよびＥをＮおよびＥ特異モノクローナル抗体微小 球と共に図２２Ｂに示す区域すなわちブロックｌに移動させることにより、ＣＤ ４集団を移動させ、ブロックすなわち区域２内に見ることができる。この区域は 図２２Ａから分るようにＮおよびＥによって不明瞭になっていた。図２２Ｃに示 す例では、２８マイクロリツトルの全血試料を、ＮおよびＥ特異モノクローナル 抗体が結合している２、２ミクロン微小球５０マイクロリットルおよびＴ４特異 モノクローナル抗体が結合している微小球５０マイクロリツトルおよび希釈剤２ ２マイクロリツトルと組み合わせた。図２２８はＴ４微小球が存在せず、希釈剤 が７２マイクロリツトルである点を除けば同じであり、図２２Ａはどのような微 小球も存在せず、希釈剤が１２２マイクロリツトルである点を除けば同一である 。

図２３Ａ−Ｄには、関係ある白血球サブセットに結合している複数個の微小球を 使用する白血球直線分析の結果を示す。図２３Ａおよび図２３ＢはそれぞれＬ集 団のみの散布図を示し、Ｔ４４白血サブセットおよびＴ　１１白血球サブセット はそれぞれ０．８ミクロン非磁性微小球と共に移動されている。この移動は図２ ３Ａおよび図２３Ｂにおいて白血球サブセット集団を区別するのに不十分である 。図２３Ｃおよび図２３ＤはそれぞれＬ集団のみの散布図を示し、Ｔ、白血球サ ブセットおよびＴＩＪ白血球サブセットは０．８ミクロンおよび２．２ミクロン の両微小球に結合させることにより移動されている。０．８ミクロン微小球に結 合したＴ４またはＴｌｌ抗体に結合するボート（Ｇｏａｔ）抗マウスＩｇＧ抗体 を結合させることにより２．２ミクロン微小球を０．８ミクロン微小球に結合さ せる。

関係ある白血球サブセットに結合させた非磁性微小球の大きさの影響を図２４Ａ −Ｃに示す。この例では、２８マイクロリツトルの全血試料を、ＮおよびＥ特異 抗体が結合している磁性微小球（２，５重ｊｌ／容量％溶液）１０マイクロリツ トルおよびＴ８特異抗体が結合している非磁性微小球（１重量／容量％溶液）４ ０マイクロリツトルと組み合わせた。Ｔ８微小球は２種の大きさの異なるものか らなり、これは散布図において移動における差を示す。この場合にも、緩衝液を 加えて容積１５０マイクロリツトルの混合物を形成した。この混合物を２分間混 合し、磁界内に１分間置いた。次いでＮおよびＥが除去された生成混合物を溶解 して赤血球を除去し、次いで分析した。図２４Ａは微小球が結合していないコン トロール白血球サブセット、２．２ミクロン非磁性微小球が結合しているＴ８８ 白血サブセット、および３．０ミクロン非磁性微小球が結合しているＴ８８白血 サブセットを示す。幅および高さは検出された信号の標準偏差を示す。図２４Ｂ は３．０ミクロン微小球が結合しているＴ８８白血サブセットの移動を示す散布 図であり、他方図２４Ｃは２．２ミクロン微小球が結合しているＴ８８白血サブ セットの移動を示す散布図である。

微小球が異なる場合についてＴ８８白血サブセットの分析でめたパーセントはそ れぞれ２０．９および１９．３であった。図２４８に示すように、微小球が大き い程はっきりと区別された散布図パターンが得られるは明らかである。

図２５Ａ　−Ｄには、本発明による２種の白血球サブセット集団の同時の直接分 析の結果を示す。この例では、２８マイクロリツトルの全血試料を、ＮおよびＥ 特異抗体が結合している磁性微小球ｌＯマイクロリットル、緩衝液５２マイクロ リツトルおよびＴ８特異抗体が結合している３、０ミクロン非磁性微小球４０マ イクロリットルと組み合わせ、２分間混合した。次に、この混合物を磁界内に１ 分間置き、次いでＮおよびＥの除去された生成混合物を溶解して赤血球を除去し 、次いで分析した。図２５Ａは微小球が結合していないコントロール白血球サブ セット試料、２．２ミクロン非磁性微小球が結合しているＴ４リーディング（ｒ ｅａｄｉｎｇ）および３．０ミクロン非磁性微小球が結合しているＴ８リーディ ングを示す。これは２種の移動した白血球サブセット集団の間の分離を示す。図 ２５Ｂは２．２ミクロン微小球に結合しているＴ４４白血サブセット集団のみが 区域Ａに移動している散布口分析を示し、図２５Ｃは３．０ミクロン微小球に結 合しているＴ８８白血サブセット集団のみが区域Ｂに移動している散布口分析を 示す。図２５ＤはＴ、およびＴ８の両口血球サブセット集団がそれぞれ区域Ａお よびＢに移動している散布口分析を示す。これはＴ、およびＴ８の両サブセット 集団の同時分析を可能にする。

図２６Ａ−Ｄには、Ｌ、　ＭおよびＧの３種の集団を、異なるパラメータを使用 した４個の異なる散布図に示す。前述の諸例はＤＣ対不透明度（ＲＦ／Ｄ　Ｃ） を使用して示したが、実際には２種の異なる任意のパラメータを使用して散布図 を作ることができる。図２６ＡはＤＣ対ＲＦ単独を使用する散布図を示し、図２ ６８はＲＦ対不透明度を使用し、図２６ＣはＤＣ−ＲＦ対不透明度を使用し、図 ２６Ｄは先に示したようにＤＣ対不透明度を使用している。さらに、ＤＣ対ＲＦ またはＲＦ／ＤＣを使用したが、周波数スペクトルの位置および／または位相の 相互関係における差異のために、信号を互に分離できる限り２種の異なる任意の 周波数が適当である。不透明度は本質的にＲＦ倍信号標準化（ｎｏｒｍａｌｉｚ ａｔｉｏｎ）であるから好ましいパラメータである。図２６Ａ−Ｄに示すように 、明らかに、データの表示は所望のように変えることができる。ＤＣは細胞また は形成体の容積の関数であるが、ＲＦは検知された細胞または形成体の内部導電 性および容積の関数である。

全血試料を使用して本発明の方法および装置を説明したが、赤血球および／また は若干の白血球集団が除去されている試料の一部を使用するのが望ましい場合も ある。明らかに赤血球を除去しているが、これは議論の余地のあることで、外部 で行われ、本発明の装置内では行わない。このような除去すなわち調整は、フィ コール（ｆｉｃｏｌｌ）　、デキストラン、「バフィーコート」等のような溶解 剤、密度または遠心分離の技術を使用するような多くの従来方法で行うことがで きる。本発明を使用する自動化された分析装置では、試料を分析する際の速度お よび一体性（ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）の点から全血試料を使用するのが好ましい。

上述の説明を考慮すれば、本発明の多くの変形および変更が可能である。試料１ ２．４２．１５０．１８０．２９４．３２２および３４２は全血、細胞を含有す るヒトの体液、または細菌、ウィルスあるいは真菌のような形成体を含有する他 の流体とすることができる。

特定した微小球の量は希釈剤容量に対する微小球重量で表わされている。いくつ かの例は逐次工程で実施したが、これらの工程は同時に行うことも可能である。

同時分析は複雑さの極めて小さい機器モジュールの使用を可能にする。従って、 本発明は、請求の範囲に記載した範囲内において、特定の例について説明したこ ととは異なるように実施することができる。

ＦＩＧ、　６ ＦＩＧ、　９Ａ　ＦＩＧ、　９Ｂ ＦＩＧ、　１４ ＦＩＧ、　１５ ＦＩＧ、旧 ＦＩＧ、１７Ａ ＦＩＧ、ｌ８Ａ ＲＦ／ＤＣ ＲＦ／ＤＣ ＦＩＧ、　１９Ａ　ＦＩＧ、　１９８ ＦＩＧ、　＋９ＣＦＩＧ、　＋９Ｄ ＦＩＧ、２０Ａ　ＦＩＧ、　２０日 ＦＩＧ、２０ＣＦＩＧ、　２０Ｄ ＦＩＧ、　２１Ａ　ＦＩＧ、　２１８ ＦＩＧ、　２１ＣＦＩＧ、　２１Ｄ ｐｃ　ＦＩＧ、　２２Ａ　ＤＣＦｔＧ、　２２ＢＲＦ／ＤＣＲＦ／ＤＣ ＲＦ／ＤＣ ＦＩＧ、　２３Ａ　ＦＩＧ、　２３８ ＦＩＧ、　２３ＣＦＩＧ、　２３Ｄ ＦＩＧ、２４Ａ Ｄｃ　Ｆ　ＩＧ、　２４８　Ｆ　ＩＧ、　２４ＣＣ ＦＩＧ、　２５Ａ ＲＦ／ＤＣ ＦＩＧ、２５Ｃ ＲＦ／′ＤＣ ＲＦ／ＤＣ ＤＣＦＩＧ、　２６Ａ　ｖｃ　ＦＩＧ、　２６ＢＤＣＦＩＧ、２６ＣＤｃ　ＦＩ Ｇ、２６Ｄ補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）平成３年６ 月１７日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．少なくとも１つの白血球集団が少なくとも１つのサブセットを有する、少な くとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から少なくとも１つの 白血球集団を分析する方法において、関係する前記白血球集団の少なくとも１つ の白血球集団サブセットの容量および／または不透明度パラメータを修正し；お よび前記修正白血球集団サブセットおよび関係する前記選定白血球集団を電子的 に分析して前記選択白血球集団の少なくとも１つの特性を測定することを特徴と する少なくとも１つの白血球集団を分析する方法。 ２．前記修正白血球集団サブセットを分析する前に、少なくとも１つの白血球集 団を前記白血球集団から減らす請求の範囲１記載の方法。 ３．前記白血球集団に特異的に結合した単クローン性抗体を有する磁性微小球を 与え、前記磁性微小球を前記試料と混合して前記白血球集団に結合し、および前 記磁性微小球を磁界に引付けながら前記試料の残留物の少なくとも１部分を減少 させることによって前記白血球集団を除去することによって前記白血球集団を減 らす請求の範囲１記載の方法。 ４．前記修正白血球集団サブセットを分析する前に、少なくとも好中球および好 酸球集団を前記白血球集団から減らす請求の範囲１記載の方法。 ５．前記好中球および好酸球集団に特異的に結合した単クローン性抗体を有する 磁性微小球を与え、前記磁性微小球を前記試料と混合して前記好中球および好酸 球集団に結合し、および前記磁性微小球を磁界に引付けながら、前記試料の残留 物の少なくとも１部分を除去して前記好中球および好酸球を除去することによっ て前記好中球および好酸球を減らす請求の範囲４記載の方法。 ６．ＣＤ４白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有する 微小球を与え、前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ４サブセット集団に結 合し前記ＣＤ４サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフトすること によって前記ＣＤ４白血球集団サブセットを修正する請求の範囲１記載の方法。 ７．前記ＣＤ８白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有 する微小球を与え、および前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ８サブセッ ト集団に結合し前記ＣＤ８サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフ トすることによってＣＤ８白血球集団サブセットを修正する請求の範囲１記載の 方法。 ８．前記ＣＤ２白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有 する微小球を与え、および前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ２サブセッ ト集団に結合し前記ＣＤ２サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフ トする請求の範囲１記載の方法。 ９．前記ＣＤ２０白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を 有する微小球を与え、および前記微小球を試料と混合して前記ＣＤ２０サブセッ ト集団に結合し前記ＣＤ２０サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシ フトする請求の範囲１記載の方法。 １０．前記全血液試料は赤血球集団を含み、赤血球集団を前記試料から、少なく とも１つの関係する前記白血球集団の関連する特質および／または量に有意に悪 影響を与えることなく除去する請求の範囲１記載の方法。 １１．赤血球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、およ び前記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団に結合することによっ て前記赤血球集団を除去し；および前記微小球を前記結合赤血球と前記全血液試 料から除去する請求の範囲１０記載の方法。 １２．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けながら 前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲１１記載の 方法。 １３．赤血球溶解剤を与えて前記赤血球集団を実質的に除去することによって前 記赤血球集団を除去する請求の範囲１０記載の方法。 １４．関係する前記白血球集団の少なくとも１つの第２白血球サブセットの容量 および／または不透明度パラメータを修正し；および少なくとも１つの前記修正 白血球サブセットおよび関係する選定白血球集団を電子的に分析して前記選定白 血球集団の少なくとも１つの特性を測定する請求の範囲１記載の方法。 １５．両方の前記修正白血球サブセットを電子的に分析する請求の範囲１４記載 の方法。 １６．前記第１白血球サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有する 第１大きさの微小球を与え、前記第２白血球サブセットに特異的に結合した単ク ローン性抗体を有する前記第１大きさから異なる第２大きさの微小球を与え、お よび前記微小球を前記試料と混合して前記白血球集団に結合することによって前 記２つの白血球サブセットを修正する請求の範囲１４記載の方法。 １７．前記白血球サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有する第１ セットの微小球を与え、前記微小球を前記試料と混合して前記白血球集団に結合 し、次いで前記第１セットの微小球に結合した前記単クローン性抗体に特異的に 結合した単クローン性抗体を有する第２セットの微小球を与え、および前記第２ セットの微小球を前記試料およびこれに結合する前記第１セットの微小球と混合 することによって前記白血球集団サブセットを修正する請求の範囲１記載の方法 。 １８．前記白血球集団サブセットを修正し、および前記赤血球集団を実質的に同 時に除去する請求の範囲１０記載の方法。 １９．前記白血球集団サブセットを修正し、および前記赤血球集団を連続的に除 去する請求の範囲１０記載の方法。 ２０．少なくとも１つの白血球集団が少なくとも１つのサブセットを有する、少 なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から少なくとも１つ の白血球集団を分析する装置において、関係する前記白血球集団の少なくとも１ つの白血球集団サブセットの容量および／または不透明度パラメータを修正する 手段（３３０，３５０，３７６）；および前記修正白血球集団サブセットおよび 関係する前記選定白血球集団を電子的に分析して前記選定白血球集団の少なくと も１つの特性を測定する手段（３３２，３５２，４１６）を含むことを特徴とす る少なくとも１つの白血球集団を分析する装置。 ２１．前記修正白血球集団サブセットを分析する前に、少なくとも１つの白血球 集団を前記白血球集団から減らす手段（３５０，３７６）を含む請求の範囲２０ 記載の装置。 ２２．前記白血球集団に特異的に結合した単クローン性抗体を有する磁性微小球 を与えて前記白血球集団を減らす手段（３８６）、前記磁性微小球を前記試料と 混合して前記白血球集団に結合する手段（３８４）、および前記磁性微小球を磁 界に引付けながら前記試料の残留物の少なくとも１部分を除去することによって 前記白血球集団を除去する手段（４４０）を含む請求の範囲２１記載の装置。 ２３．前記修正白血球集団サブセットを分析する前に、少なくとも好中球および 好酸球集団を前記白血球集団から減らす手段（３８６）を含む請求の範囲２０記 載の装置。 ２４．前記好中球および好酸球集団に特異的に結合した単クローン性抗体を有す る磁性微小球を与えることによって前記好中球および好酸球を減らす手段（３８ ６）、前記磁性微小球を前記試料と混合して前記好中球および好酸球集団を結合 する手段（３８４）、および前記磁性微小球を磁界に引付けながら前記試料の残 留物の少なくとも１部分を除去することによって前記好中球および好酸球を除去 する手段（４４０）を含む請求の範囲２３記載の装置。 ２５．ＣＤ４白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有す る微小球を与えることによって前記ＣＤ４白血球集団サブセットを修正する手段 （３８６）、および前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ４サブセット集団 に結合し前記ＣＤ４サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフトする 手段（３８４）を含む請求の範囲２０記載の装置。 ２６．ＣＤ８白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有す る微小球を与えることによって前記ＣＤ８白血球集団サブセットを修正する手段 （３８６）、および前記徴小球を前記試料と混合して前記ＣＤ８サブセット集団 に結合し前記ＣＤ８サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフトする 手段（３８４）を含む請求の範囲２０記載の装置。 ２７．ＣＤ２白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有す る微小球を与えることによって前記ＣＤ２白血球集団サブセットを修正する手段 （３８６）および前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ２サブセット集団に 結合し前記ＣＤ２サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフトする請 求の範囲２０記載の装置。 ２８．ＣＤ２０白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有 する微小球を与えることによって前記ＣＤ２０白血球集団サブセットを修正する 手段（３８６）、および前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ２０サブセッ ト集団に結合し前記ＣＤ２０サブセット集団の少なくとも１つの特性をシフトす る手段（３８４）を含む請求の範囲２０記載の装置。 ２９．前記全血液試料は赤血球集団を含み、および赤血球集団を前記試料から、 少なくとも１つの関係する前記白血球集団の関連する特質および／または量に有 意に悪影響を与えないように除去する手段（３３０，３５０，３７０，４４４） を含む請求の範囲２０記載の装置。 ３０．赤血球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、およ び前記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団に結合する手段（３８ ４）；および前記微小球を前記結合赤血球と前記全血液試料から除去する手段（ ４４０）を含む請求の範囲２９記載の装置。 ３１．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けながら 前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する手段（４４０）を含む 請求の範囲３０記載の装置。 ３２．前記赤血球集団を除去する前記手段は、前記赤血球集団を実質的に除去す る赤血球溶解剤（３７０）を与えることを含む請求の範囲２９記載の装置。 ３３．関係する前記白血球集団の少なくとも第２白血球サブセットの容量および ／または不透明度パラメータを修正する手段（３５０）；および少なくとも１つ の前記修正白血球サブセットおよび関係する前記選定白血球集団を電子的に分析 して前記選定白血球集団の少なくとも１つの特性を測定する手段（３５２）を含 む請求の範囲２０記載の装置。 ３４．両方の前記修正白血球サブセットを電子的に分析する手段（３５２，４１ ６，４２２）を含む請求の範囲３３記載の装置。 ３５．前記第１白血球サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有する 第１大きさの微小球を与えおよび前記第２白血球サブセットに特異的に結合した 単クローン性抗体を有する第１大きさと異なる第２大きさの微小球を与えること によって前記２つの白血球サブセットを修正する手段（３５０）、および前記微 小球を前記試料と混合して前記白血球集団に結合する手段（３８４）を含む請求 の範囲３３記載の装置。 ３６．前記白血球サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有する第１ セットの微小球を与えることによって前記白血球集団サブセットを修正する手段 （３５０）、前記微小球を前記試料と混合して前記白血球集団に結合させ、次い で前記第１セットの微小球に結合した前記単クローン性抗体に特異的に結合した 単クローン性抗体を有する第２セットの微小球を与える手段（３８４）、および 前記第２セットの微小球を前記試料およびこれに結合した前記第１セットの微小 球を混合する手段（３８４）を含む請求の範囲２０記載の装置。 ３７．前記白血球集団サブセットを修正する手段（３３０，３５０）および前記 赤血球集団を実質的に同時に除去する手段を含む請求の範囲２９記載の装置。 ３８．前記白血球集団サブセットを修正する手段および前記赤血球集団を連続的 に除去する手段を含む請求の範囲２９記載の装置。 ３９．少なくとも１つの白血球集団が少なくとも１つのサブセットを有する、少 なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から少なくとも１つ の白血球集団を分析する方法において、関係する前記白血球集団の少なくとも１ つの白血球集団サブセットの容量および不透明度パラメータを修正し；および前 記修正白血球集団サブセットおよび関係する前記選定白血球集団を電子的に分析 して前記選定白血球集団の少なくとも１つの特性を測定することを特徴とする少 なくとも１つの白血球集団を分析する方法。 ４０．前記修正白血球集団サブセットを分析する前に、少なくとも１つの白血球 集団を前記白血球集団から減らす請求の範囲３９記載の方法。 ４１．前記白血球集団に特異的に結合した単クローン性抗体を有する磁性微小球 を与え、および前記磁性微小球を前記試料と混合した前記白血球集団に結合しお よび前記磁性微小球を磁界に引付けながら前記試料の残留物の少なくとも１部分 を除去して前記白血球集団を除去することによって前記白血球集団を減らす請求 の範囲４０記載の方法。 ４２．前記修正白血球集団サブセットを分析する前に、少なくとも好中球および 好酸球集団を前記白血球集団から減らす請求の範囲３９記載の方法。 ４３．前記好中球および好酸球集団に特異的に結合した単クローン性抗体を有す る磁性微小球を与え、および前記磁性微小球を前記試料と混合して前記好中球お よび好酸球集団に結合しおよび前記磁性微小球を磁界に引付けながら前記試料の 残留物質の少なくとも１部分を除去することによって前記好中球および好酸球集 団を減らす請求の範囲４２記載の方法。 ４４．ＣＤ４白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有す る微小球を与え、および前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ４サブセット 集団に結合し前記ＣＤ４サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフト することによって前記ＣＤ４白血球集団を修正する請求の範囲３９記載の方法。 ４５．ＣＤ８白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有す る微小球を与え、および前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ８サブセット 集団に結合し前記ＣＤ８サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフト することによって前記ＣＤ８白血球集団を修正する請求の範囲３９記載の方法。 ４６．ＣＤ２白血球集団に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を 与え、および前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ２サブセット集団に結合 し前記ＣＤ２サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフトすることに よって前記ＣＤ２白血球集団サブセットを修正する請求の範囲３９記載の方法。 ４７．ＣＤ２０白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有 する微小球を与え、および前記微小球を前記試料と混合して前記ＣＤ２０サブセ ット集団に結合して前記ＣＤ２０サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性 をシフトすることによって前記ＣＤ２０白血球集団サブセットを修正する請求の 範囲３９記載の方法。 ４８．前記全血液試料は赤血球集団を含み、および前記赤血球集団を前記試料か ら少なくとも１つの前記白血球集団の関連する特質および／または量に有意に悪 影響を与えることなく除去する請求の範囲３９記載の方法。 ４９．前記赤血球集団の除去が、赤血球に特異的に連結した単クローン性抗体を 有する微小球を与えおよび前記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集 団に結合することを含み；および前記微小球を前記結合赤血球と前記全血液試料 から除去する請求の範囲４８記載の方法。 ５０．前記磁性微小球および磁界を与え、および前記磁性微小球を前記磁界に引 付けながら前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲 ４９記載の方法。 ５１．前記赤血球集団を実質的に除去する赤血球溶解剤を与えることによって前 記赤血球集団を除去する請求の範囲４８記載の方法。 ５２．関係する前記白血球集団の少なくとも第２白血球サブセットの容量および ／または不透明度パラメータを修正し；および少なくとも１つの前記修正白血球 サブセットおよび関係する前記選定白血球集団を電子的に分析して前記選定白血 球集団の少なくとも１つの特性を測定する請求の範囲３９記載の方法。 ５３．両方の前記修正白血球サブセットを電子的に分析する請求の範囲５２記載 の方法。 ５４．第１白血球サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有する第１ 大きさの微小球を与えおよび第２白血球サブセットに特異的に結合した単クロー ン性抗体を有する前記第１大きさと異なる第２大きさの微小球を与え、および前 記微小球を前記試料と混合して前記白血球集団に結合することによって前記２種 の白血球サブセットを修正する請求の範囲５２記載の方法。 ５５．前記白血球サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有する第１ セットの微小球を与え、前記微小球を前記試料と混合して前記白血球集団に結合 し、次いで前記第１セットの微小球に結合した前記単クローン性抗体に特異的に 結合した単クローン性抗体を有する第２セットの微小球を与え、および前記第２ セットの微小球を前記試料およびこれに結合する前記第１セットの微小球と混合 することによって前記白血球集団を修正する請求の範囲３９記載の方法。 ５６．前記白血球集団サブセットを修正し、および前記赤血球集団を実質的に同 時に除去する請求の範囲４８記載の方法。 ５７．前記白血球集団サブセットを修正し、前記赤血球集団サブセットを除去し 、および前記赤血球集団を連続的に除去する請求の範囲４８記載の方法。 ５８．少なくとも１つの白血球集団が少なくとも１つのサブセットを有する、少 なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から少なくとも白血 球集団を分析する装置において、関係する前記白血球集団の少なくとも１つの白 血球集団サブセットの容量および不透明度パラメータを修正する手段（３０，５ ０，７０，１６８，１９０，２２８，２３２）；および前記修正白血球集団サブ セットおよび関係する前記選定白血球集団を電子的に分析して前記白血球集団の 少なくとも１つの特性を測定する手段（２２，３４，５２，１０６，１６２，１ ７２，１９４，２０６，２６２）を含むことを特徴とする少なくとも１つの白血 球集団を分析する装置。 ５９．前記修正白血球集団サブセットを分析する前に、少なくとも１つの白血球 集団を前記白血球集団から減らす手段（３０，５０，７０，１６８，１９０，２ ２８，２３２）を含む請求の範囲５８記載の装置。 ６０．前記白血球集団に特異的に結合した単クローン性抗体を有する磁性微小球 を与えることによって前記白血球集団を減らす手段（２２８）、前記磁性微小球 を前記試料と混合して前記白血球集団に結合する手段（２３８）、および前記磁 性微小球を磁界に引付けながら前記試料の残留物の少なくとも１部分を除去する ことによって前記白血球集団を除去する手段を含む請求の範囲５９記載の装置。 ６１．前記修正白血球集団サブセットを分析する前に、少なくとも好中球および 好酸球を前記白血球集団から減らす手段（３０，５０，７０，１６８，２２８， ２８４）を含む請求の範囲５８記載の装置。 ６２．前記好中球および好酸球集団に特異的に結合した単クローン性抗体を有す る磁性微小球を与えて前記好中球および好酸球集団を減らす手段、および前記磁 性微小球を前記試料と混合して前記好中球および好酸球集団に結合しおよび前記 磁性微小球を磁界に引付けながら前記試料の残留物の少なくとも１部分を除去す ることによって前記好中球および好酸球集団を除去する手段（７８，２３８，２ ７６）を含む請求の範囲６１記載の装置。 ６３．ＣＤ４白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有す る微小球を与えることによって前記ＣＤ４白血球集団サブセットを修正する手段 （３０，５０，７０，２２８，２３２）、および前記微小球を前記試料と混合し て前記ＣＤ４サブセット集団の少なくとも１つの電子的特性をシフトする手段を 含む請求の範囲５８記載の装置。 ６４．ＣＤ８白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有す る微小球を与えることによって前記ＣＤ８白血球集団サブセットを修正する手段 （３０，５０，７０，２２８，２３２）、および前記微小球を前記試料と混合し て前記ＣＤ８サブセット集団に結合し前記ＣＤ８サブセット集団の少なくとも１ つの電子的特性をシフトする手段を含む請求の範囲５８記載の装置。 ６５．ＣＤ２白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有す る微小球を与えることによって前記ＣＤ２白血球集団サブセットを修正する手段 （３０，５０，７０，２２８，２３２）、および前記微小球を前記試料と混合し て前記ＣＤ２サブセット集団に結合し前記ＣＤ２サブセット集団の少なくとも１ つの電子的特性をシフトする手段を含む請求の範囲５８記載の装置。 ６６．ＣＤ２０白血球集団サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有 する微小球を与えることによって前記ＣＤ２０白血球集団サブセットを修正する 手段（３０，５０，７０，２２８，２３２）、および前記微小球を前記試料と混 合して前記ＣＤ２０サブセット集団に結合し前記ＣＤ２０サブセット集団の少な くとも１つの電子的特性をシフトする手段を含む請求の範囲５８記載の装置。 ６７．前記白血球試料が赤血球集団を含み、および関係する少なくとも１つの前 記白血球集団の関連する特質および／または量に有意に悪影響を与えることなく 赤血球集団を前記試料から除去する手段（３０，５０，７０，１５８，１９０， ２０２，２２８，２３２）を含む請求の範囲５８記載の装置。 ６８．前記赤血球集団を除去するのに、赤血球に特異的に結合した単クローン性 抗体を有する微小球を与え、および前記微小球を前記全血液試料と混合して前記 赤血球集団に結合する手段（７８，２３８，２７６）；および前記微小球を前記 結合赤血球と前記全血液試料から除去する手段（１４０，２４６，２７８）を含 む請求の範囲６７記載の装置。 ６９．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けながら 前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する手段（４４０）を含む 請求の範囲６８記載の装置。 ７０．前記赤血球集団を除去する前記手段は前記赤血球集団を実質的に除去する 赤血球溶解剤（３７０）を与えることを含む請求の範囲６７記載の装置。 ７１．関係する前記白血球集団の少なくとも第２白血球サブセットの容量および ／または不透明度パラメータを修正する手段（３５０）；および少なくとも１つ の前記修正白血球サブセットおよび関係する前記選定白血球集団を電子的に分析 して前記選定白血球集団の少なくとも１つの特性を測定する手段（３５２）を含 む請求の範囲５８記載の装置。 ７２．両方の前記修正白血球サブセットを電子的に分析する手段（３５２，４１ ６，４２２）を含む請求の範囲７１記載の装置。 ７３．前記第１白血球サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有する 第１大きさの微小球を与えることにより、および前記第２白血球サブセットに特 異的に結合した単クローン性抗体を有し、前記第１大きさと異なる第２大きさの 微小球を与えることによって前記２つの白血球サブセットを修正する手段（３５ ０）、および前記微小球を前記試料と混合して前記白血球集団に結合する手段（ ３８４）を含む請求の範囲７１記載の装置。 ７４．前記白血球サブセットに特異的に結合した単クローン性抗体を有する第１ セットの微小球を与えることによって前記白血球集団サブセットを修正する手段 （３５０）、および前記微小球を前記試料と混合して前記白血球集団に結合し、 次いで前記第１セットの微小球に結合した前記単クローン性抗体に特異的に結合 した単クローン性抗体を有する第２セットの微小球を与える手段（３８４）、お よび前記第２セットの微小球を前記試料およびこれに結合した前記第１セットの 微小球と結合する手段（３８４）を含む請求の範囲５８記載の装置。 ７５．前記白血球集団サブセットを修正する手段（３３０，３５０）、および前 記赤血球集団を実質的に同時に除去する手段を含む請求の範囲６７記載の装置。 ７６．前記白血球集団サブセットを修正する手段、および前記赤血球集団を連続 的に除去する手段を含む請求の範囲６７記載の装置。 ７７．少なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から多部分 の区分された白血球集団を得る方法において、顆粒球；単球およびリンパ球の少 なくとも前記白血球集団を電子的に数え；好中球集団寄与を前記白血球集団から 減らし；単球、リンパ球、好酸球および好塩基球の少なくとも前記残留白血球集 団を電子的に数え；および前記２つのカウントを比較して好中球の前記白血球集 団のカウントを得、これによって少なくとも５部分の区別された白血球を得るこ とを特徴とする全血液試料の１部分から多部分の区別された白血球集団を得る方 法。 ７８．前記全血液試料が赤血球集団を含み、前記赤血球集団を前記試料から、前 記白血球集団の関連する物質および／または量に悪影響を与えないように除去す る請求の範囲７７記載の方法。 ７９．前記赤血球集団を除去するのに、赤血球に特異的に結合した単クローン性 抗体を有する微小球を与え、および前記微小球を前記全血液試料と混合して前記 赤血球集団に結合し；および前記微小球を前記結合赤血球と前記全血液試料から 除去する請求の範囲７８記載の方法。 ８０．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けながら 前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲７９記載の 方法。 ８１．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記赤血球集団を前記微 小球に６０秒以下で結合する請求の範囲７９記載の方法。 ８２．赤血球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、前記 微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団に結合しおよび赤血球溶解剤 を前記微小球と与えて前記赤血球集団の１部分を除去して前記赤血球集団を除去 するのに必要な多数の微小球を減少させることによつで前記赤血球集団を除去し ；および前記微小球をこれに結合した前記赤血球と前記全血液試料から除去する 請求の範囲７８記載の方法。 ８３．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けながら 前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲８２記載の 方法。 ８４．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記赤血球集団を前記微 小球に６０秒以下で結合させ、前記溶解作用を与えるようにする請求の範囲８２ 記載の方法。 ８５．前記赤血球集団を実質的に除去する赤血球溶解剤を与えることによって前 記赤血球集団を除去する請求の範囲７８記載の方法。 ８６．好中球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、前記 微小球を前記試料と混合して前記好中球集団に結合して前記好中球集団の少なく とも１つの電子的特性をシフトすることによって好中球集団を減らす請求の範囲 ７７記載の方法。 ８７．好中球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、前記 微小球を前記試料と混合して前記好中球集団に結合することによって好中球集団 を減らし；および前記微小球をこれに結合した好中球集団と前記試料から除去す る請求の範囲７７記載の方法。 ８８．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けながら 前記好中球集団を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲８７記 載の方法。 ８９．前記微小球を前記試料と速やかに混合して前記好中球集団を前記微小球に ６０秒以下で結合する請求の範囲８７記載の方法。 ９０．少なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から多部分 の区別された白血球集団を得る装置において、顆粒球、単球およびリンパ球の少 なくとも前記白血球集団を電子的に数える手段（２２，１０６，１６２，２０６ ，２６２）；好中球集団寄与を前記白血球集団から減らす手段（３０，７０，１ ６８，１９０，２２８，２３２）；単球、リンパ球、好酸球および好塩基球の少 なくとも前記残留白血球集団を電子的に数える手段（３４，５２，１０６，１７ ２，２６２）；および前記２つのカウントを比較して好中球の前記白血球集団の カウントを得、これにより少なくとも５部分の区別された白血球を得る手段（２ ６，１１２，１６４，１９８，２６４）を含むことを特徴とする全血液試料の１ 部分から多部分の区別された白血球集団を得る方法。 ９１．前記全血液試料が赤血球集団を含み、前記赤血球集団を前記試料から前記 白血球集団の関連する特質および／または量に悪影響を与えることなく除去する 手段（２０，５０，７０，１５８，１９０，２０２，２２８，２３２）を含む請 求の範囲９０記載の装置。 ９２．前記赤血球集団を除去するのに、赤血球に特異的に結合した単クローン性 抗体を有する微小球を与え、前記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球 集団に結合する手段（７８，２３８，２７６）を含み；および前記微小球を前記 結合赤血球と前記全血液試料から除去する手段（１４０，２４６，２７８）を含 む請求の範囲９１記載の装置。 ９３．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けながら 前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲９２記載の 装置。 ９４．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記赤血球集団を前記微 小球に６０秒以下で結合する手段を含む請求の範囲９２記載の装置。 ９５．前記赤血球集団を除去する手段は、赤血球に特異的に結合した単クローン 性抗体を有する微小球を与え、前記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血 球集団に結合し、および赤血球溶解剤を前記微小球と与えて前記赤血球集団の１ 部分を除去して前記赤血球集団を除去するのに必要な多数の微小球を減少する手 段（７８，２３８，２７６）を含み；および前記微小球をこれに結合した前記赤 血球と前記全血液試料から除去する手段を含む請求の範囲９１記載の装置。 ９６．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けながら 前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲９５記載の 装置。 ９７．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記赤血球集団を前記微 小球に６０秒以下で結合しおよび前記溶解作用を与える手段（７８，２３８，２ ７６）を含む請求の範囲９５記載の装置。 ９８．前記赤血球集団を除去する前記手段は、赤血球溶解剤（６４，２３６）を 与えて前記赤血球集団を実質的に除去することを含む請求の範囲９１記載の装置 。 ９９．前記好中球集団を減らす前記手段は、好中球に特異的に結合した単クロー ン性抗体を有する微小球を与え、前記微小球を前記試料と混合して前記好中球集 団に結合させて前記好中球集団の少なくとも１つの電子的特性をシフトする手段 を含む請求の範囲９０記載の装置。 １００．好中球集団を減らす前記手段は好中球に特異的に結合した単クローン性 抗体を有する微小球を与え、前記微小球を前記試料と混合して前記好中球集団に 結合する手段を含み；および前記微小球をこれに結合した前記好中球集団と前記 試料から除去する手段を含む請求の範囲９０記載の装置。 １０１．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けなが ら前記好中球集団を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲１０ ０記載の装置。 １０２．前記微小球を前記試料と速やかに混合して前記好中球集団を前記微小球 に６０秒以下で結合する手段を含む請求の範囲１００記載の装置。 １０３．少なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部から多部分 の区分された白血球集団を得る方法において、前記試料の第１部分における顆粒 球、単球およびリンパ球の少なくとも前記白血球集団を電子的に数え；好中球集 団寄与を前記試料の第２部分からの前記白血球集団から前記残留白血球集団の関 連する特質および／または量に悪影響を与えることなく減らし；前記第２部分に おける単球、リンパ球、好酸球および好塩基球の少なくとも前記残留白血球集団 を電子的に数え；および前記２つのカウントを前記第１および第２部分から比較 して好中球の前記白血球集団のカウントを得、これにより少なくとも５部分の区 別された白血球を得ることを特徴とする全血液試料の少なくとも１部分から多部 分の区分された白血球集団を得る方法。 １０４．前記全血液試料は赤血球集団を含み、前記赤血球集団を前記試料から、 前記第１部分を数える前に前記白血球集団の関連する特質および／または量に悪 影響を与えることなく除去し、および前記第２部分を数える前に前記第２部分か ら前記赤血球集団を除去する請求の範囲１０３記載の方法。 １０５．赤血球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、前 記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団に結合させることによって 前記赤血球集団を少なくとも１つの前記部分から除去し；および前記微小球をこ れに結合した赤血球と前記全血液試料から除去する請求の範囲１０４記載の方法 。 １０６．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けなが ら前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲１０５記 載の方法。 １０７．前記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団を前記微小球に ６０秒以下で結合する請求の範囲１０５記載の方法。 １０８．赤血球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、前 記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団に結合し、および赤血球溶 解剤を前記微小球と与えて前記赤血球集団の１部分を除去して前記赤血球集団を 除去するのに必要な多くの微小球を減少させることによって前記赤血球集団を前 記部分の少なくとも１部分から除去し；および前記微小球をこれに結合した前記 赤血球と前記全血液試料から除去する請求の範囲１０４記載の方法。 １０９．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けなが ら前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲１０８記 載の方法。 １１０．前記微小球を前記全血液試料部分と速やかに混合して前記赤血球集団を 前記微小球に６０秒以下で結合させおよび前記溶解作用を与える請求の範囲１０ ８記載の方法。 １１１．前記赤血球集団を実質的に除去する赤血球溶解剤を与えることによって 前記赤血球集団を前記部分の少なくとも１部分から除去する請求の範囲１０４記 載の方法。 １１２．好中球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、前 記微小球を前記全血液試料と混合して前記好中球集団に結合させて前記好中球集 団の少なくとも１つの電子的特性をシフトすることによって前記第２部分におけ る好中球集団を減らす請求の範囲１０３記載の方法。 １１３．好中球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、前 記微小球を前記全血液試料と混合して前記好中球集団に結合することによって前 記第２部分における好中球集団を減らし；および前記微小球をこれに結合した前 記好中球集団と前記試料から除去する請求の範囲１０３記載の方法。 １１４．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けなが ら前記好中球集団を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲１１ ３記載の方法。 １１５．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記好中球集団を前記 微小球に６０秒以下で結合する請求の範囲１１３記載の方法。 １１６．少なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から多部 分の区別された白血球集団を得る装置において、前記試料の第１部分における顆 粒、単球およびリンパ球の少なくとも前記白血球集団を電子的に数える手段（２ ２，１０６，１６２，２０６，２６２）；前記白血球集団から好中球集団寄与を 前記試料の第２部分から前記残留白血球集団の関連する特質および／または量に 悪影響を与えることなく減らす手段（３０，５０，７０，１６８，１９０，２２ ８，２３２）；前記第２部分における単球、リンパ球、好酸球および好塩基球の 少なくとも前記残留白血球集団を電子的に数える手段（３４，１０６，１７２， １９４，２６２）；および前記２つのカウントを前記第１および第２部分から比 較して好中球の前記白血球集団のカウントを得、これにより少なくとも５部分の 区別された白血球を得る手段（２６，１１２，１６４，１９８，２６４）を含む ことを特徴とする全血液試料の少なくとも１部分から多部分の区別された白血球 集団を得る装置。 １１７．前記全血液試料は赤血球集団を含み、および前記赤血球集団を前記試料 から、前記第１部分を数える前に前記白血球集団の関連する特質および／または 量に悪影響を与えないで除去し、および前記赤血球集団を前記第２部分からその 被覆前に除去する手段（３３０，３５０，３７０，４４４）を含む請求の範囲１ １６記載の装置。 １１８．前記部分の少なくとも１部から前記赤血球集団を除去する前記手段は、 赤血球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、および前記 微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団に結合する手段（３８４）を 含み；および前記微小球をこれに結合した前記赤血球と前記全血液試料から除去 する手段（４４０）を含む請求の範囲１１７記載の装置。 １１９．磁性微小球および磁界を与え、および前記磁性微小球を前記磁界に引付 けながら前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する手段（４４０ ）を含む請求の範囲１１８記載の装置。 １２０．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記赤血球集団を前記 微小球に６０秒以下で結合する手段を含む請求の範囲１１８記載の装置。 １２１．前記部分の少なくとも１部から前記赤血球集団を除去する前記手段は、 赤血球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、および前記 微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団に結合させおよび赤血球溶解 剤を前記微小球を与えて前記赤血球集団の１部分を除去し前記赤血球集団を除去 するのに必要な多数の微小球を減少させる手段を含む請求の範囲１１７記載の装 置。 １２２．磁性微小球および磁界を与え、および前記磁性微小球を前記磁界に引付 けながら前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する手段を含む請 求の範囲１２１記載の装置。 １２３．前記微小球を前記全血液試料部分と速やかに混合して前記赤血球集団を 前記微小球に６０秒以下で結合させおよび前記溶解作用を与える手段を含む請求 の範囲１２１記載の装置。 １２４．前記部分の少なくとも１部から前記赤血球集団を除去する前記手段は、 前記赤血球集団を実質的に除去する赤血球溶解剤を与えることを含む請求の範囲 １１７記載の装置。 １２５．前記第２部分におてる好中球手段を減らす前記手段は、好中球に特異的 に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、および前記微小球を前記全 血液試料と混合して前記好中球集団に結合し前記好中球集団の少なくとも１つの 電子的特性をシフトする手段を含む請求の範囲１１６記載の装置。 １２６．前記第２部分における好中球集団を減らす前記手段は好中球に特異的に 結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、および前記微小球を前記全血 液試料と混合して前記好中球集団に結合する手段を含み；および前記微小球をこ れに結合した前記好中球集団と前記試料から除去する手段を含む請求の範囲１１ ６記載の装置。 １２７．磁性微小球および磁界を与え、および前記磁性微小球を前記磁界に引付 けながら前記好中球集団を除去することによって前記微小球を除去する手段を含 む請求の範囲１２６記載の装置。 １２８．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記好中球集団を前記 微小球に６０秒以下で結合する手段を含む請求の範囲１２６記載の装置。 １２９．少なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から多部 分の区別された白血球集団を得る方法において、好中球集団特性寄与を他の白血 球集団に関してシフトし；および単球、リンパ球、好中球、好酸球および好塩基 球の少なくとも前記白血球集団を電子的に数え、これにより少なくとも５部分の 区別された白血球を得ることを特徴とする多部分の区別された白血球集団を得る 方法。 １３０．前記全血液試料は赤血球集団を含み、および前記赤血球集団を前記試料 から、前記白血球集団の関連する物質および／または量に悪影響を与えないで除 去する請求の範囲１２９記載の方法。 １３１．赤血球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、前 記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団に結合させることによって 前記赤血球集団を除去し；および前記微小球をこれに結合した前記赤血球と前記 全血液試料から除去する請求の範囲１３０記載の方法。 １３２．磁性微小球および磁界を与え、前記磁性微小球を前記磁界に引付けなが ら前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲１３１記 載の方法。 １３３．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記赤血球集団を前記 微小球に６０秒以下で結合する請求の範囲１３１記載の方法。 １３４．赤血球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、前 記微小球を前記全血液試料と混合して前記赤血球集団に結合し、および赤血球溶 解剤を前記微小球と与えて前記赤血球集団の１部分を除去して前記赤血球集団を 除去するのに必要な多数の微小球を減少させ；および前記微小球をこれに結合し た前記赤血球と前記全血液試料から除去する請求の範囲１３０記載の方法。 １３５．磁性微小球および磁界を与え、および前記磁性微小球を前記磁界に引付 けながら前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲１ ３４記載の方法。 １３６．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記赤血球集団を前記 微小球に６０秒以下で結合する請求の範囲１３４記載の方法。 １３７．前記赤血球集団を実質的に除去する赤血球溶解剤を与えることによって 前記赤血球集団を除去する請求の範囲１３０記載の方法。 １３８．好中球に特異的に結合した単クローン性抗体を有する微小球を与え、お よび前記微小球を前記試料と混合して前記好中球集団に結合させて前記好中球集 団の少なくとも１つの電子的特性をシフトすることによって前記好中球集団をシ フトする請求の範囲１２９記載の方法。 １３９．前記微小球を前記試料と速やかに混合して前記好中球集団を前記微小球 に６０秒以下で結合させる請求の範囲１３８記載の方法。 １４０．少なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から多部 分の区別された白血球集団を得る装置において、好中球集団特性寄与を他の白血 球集団に関してシフトする手段（３０，７０，２２８，２３２）；および単球、 リンパ球、好中球、好酸球および好塩基球の少なくとも前記白血球集団を電子的 に数え、これにより少なくとも５部分の区別された白血球を得る手段（２６，１ ０６，２６２）を含むことを特徴とする多部分の区別された白血球集団を得る装 置。 １４１．前記全血液試料は赤血球集団を含み、および前記赤血球集団を前記試料 から、前記白血球集団の関連する特質および／または量に悪影響を与えないで除 去する手段（３３０，３５０，３７０，４４４）を含む請求の範囲１４０記載の 装置。 １４２．前記赤血球集団を除去する手段は赤血球に特異的に結合した単クローン 性抗体を有する微小球を与え、および前記微小球を前記全血液試料と混合して前 記赤血球集団に結合させる手段（３８４）を含み；および前記微小球をこれに結 合した前記赤血球と前記全血液試料から除去する手段（４４０）を含む請求の範 囲１４１記載の装置。 １４３．磁性微小球および磁界を与え、および前記磁性微小球を前記磁界に引付 けながら前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する手段を含む請 求の範囲１４２記載の装置。 １４４．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記赤血球集団を前記 微小球に６０秒以下で結合する手段を含む請求の範囲１４２記載の装置。 １４５．前記赤血球集団を除去する前記手段は赤血球に特異的に結合した単クロ ーン性抗体を有する微小球を与え、および前記微小球を前記全血液試料と混合し て前記赤血球集団に結合させおよび赤血球溶解剤を前記微小球と与えて前記赤血 球集団の１部分を除去して前記赤血球集団の除去に必要な多数の微小球を減少さ せる手段（３８４）を含み；および前記微小球をこれに結合した前記赤血球と前 記全血液試料から除去する手段を含む請求の範囲１４１記載の装置。 １４６．磁性微小球および磁界を与え、および前記磁性微小球を前記磁界に引付 けながら前記赤血球を除去することによって前記微小球を除去する請求の範囲１ ４５記載の装置。 １４７．前記微小球を前記全血液試料と速やかに混合して前記赤血球集団と前記 微小球に６０秒以下で結合しおよび前記溶解作用を与える手段を含む請求の範囲 １４５記載の装置。 １４８．前記赤血球を除去する前記手段は前記赤血球集団を実質的に除去する赤 血球溶解剤を与えることを含む請求の範囲１４１記載の装置。 １４９．好中球集団をシフトする手段は好中球に特異的に結合した単クローン性 抗体を有する微小球を与え、および前記微小球を前記試料と混合して前記好中球 集団に結合させて前記好中球集団の少なくとも１つの電子的特性をシフトする手 段を含む請求の範囲１４０記載の装置。 １５０．前記微小球を前記試料と速やかに混合して前記好中球集団を前記微小球 に６０秒以下で結合する手段を含む請求の範囲１４９記載の装置。 １５１．少なくとも１種の白血球集団が少なくとも２つのサブセットを有する、 少なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から少なくとも１ つの白血球集団を分析する方法において、少なくとも１つのサブセット寄与をそ の特異的白血球集団から減らし；前記減少した白血球集団サブセットおよび前記 選定白血球集団を電子的に分析して前記選定白血球集団の少なくとも１つの特性 を測定することを特徴とする少なくとも１つの白血球集団を分析する方法。 １５２．前記全血液試料が赤血球集団を含み、前記赤血球集団を前記試料から、 前記白血球集団の関連する特質および／または量に悪影響を与えることなく除去 する請求の範囲１５１記載の方法。 １５３．少なくとも１つの白血球集団が少なくとも２つのサブセットを有する、 少なくとも白血球集団を有する全血液試料の少なくとも１部分から少なくとも１ つの白血球集団を分析する装置において、少なくとも１つのサブセット寄与をそ の特異的白血球集団から減らす手段（３０，７０，１６８，１９０，２２８，２ ８４）；および前記減少した白血球集団サブセットおよび前記選定白血球集団を 電子的に分析して前記選定白血球集団の少なくとも１つの特性を測定する手段（ ２２，３４，１０６，１７２，１９４，２６２）を含むことを特徴とする少なく とも１つの白血球集団を分析する装置。 １５４．前記全血液試料は赤血球集団を含み、および前記赤血球集団を前記試料 から、前記白血球集団の関連する特質および／または量に悪影響を与えることな く除去する手段を含む請求の範囲１５２記載の装置。 １５５．関係する細胞または形成体の少なくとも１つの集団の容量および／また は不透明度パラメータを修正し；および関係する前記修正細胞または形成体を電 子的に分析しおよび前記細胞または関係する形成体の少なくとも１つの特性を測 定することを特徴とする細胞または形成体試料を分類する方法。 １５６．関係する細胞の少なくとも１つの集団の容量および不透明度パラメータ を修正する請求の範囲１５５記載の方法。 １５７．関係する形成体の少なくとも１つの集団の容量および不透明度パラメー タを修正する請求の範囲１５５記載の方法。 １５８．関係する細胞または形成体の少なくとも１つの集団の容量および／また は不透明度パラメータを修正する手段（３０，５０，７０，１６８，１９０，２ ２８，２３２）；および前記関係する修正細胞または形成体を電子的に分析して 前記細胞または関係する形成体の少なくとも１つの特性を測定する手段（２２， ２６，３４，５２，１０６，１６４，１７２，１９４，１９８，２６２，２６４ ）を含むことを特徴とする細胞または形成体試料を分類する装置。 １５９．関係する細胞の少なくとも１つの集団の容量および不透明度パラメータ を修正する手段を含む請求の範囲１５８記載の装置。 １６０．関係する形成体の少なくとも１つの集団の容量および不透明度パラメー タを修正する手段を含む請求の範囲１５８記載の装置。