JPH04500679A - オリゴデオキシヌクレオチド化合物およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 ５′結合化学基を有する新規なオリゴデオキシヌクレオチド類、それらの生成お よび使用法 技術分野 本発明は中間体結合ホスホルアミダイト（ｐｂｏｓｐｂｏｔ＊＋ｕｄｉｔｅ）を 介して、共有結合化学基を５′位でリンクした新規なオリゴデオキシヌクレオチ ド類、並びにこれらの生成および使用法に関する。より具体的にＧ戴本発明の対 象は、自動合成器の外でホスホルアミダイト成分へのアントラキノン（または他 の）結合基の合成と、続いて自動合成器中で燐酸修飾したオリゴデオキシヌクレ オチドの５′末端の停止剤としての同化合物の利用を含む、この化合物はは乳類 遺伝子の発現またはウィルス活性の減員または破壊に使用される。

背景技術 分子遺伝学における最近の進歩、例えばオリゴデオキシヌクレオチドの自動合成 　相補的塩基結合に対する有望なターゲットとして利用しやすいｍＲＮＡの領域 を計算するためのコンピュータープログラムを使用することは、遺伝子の発現の 制御および「遺伝子擦洗」に対する可能性に新しくアプローチするための基盤を 提供する。

一つのアプローチは、相補ＤＮＡまたはｍＲＮＡ配列のための配列を持つ合成オ リゴヌクレオチドに化学療法剤が共有結合している結合生成物を調製することで あった。これら結合生成物を調製する標準的な方法（戴　自動合成器中で正燐酸 オリゴヌクレオチド（ｎｏｒｍ＊１−ｐｈｏｓｐｈ＊ｔｅ　ｏｌｉｌｏｎｕｃｌ ｅｏｔｉｄｅ）を合成し、続イテオリゴヌクレオチドの精製、並びに自動合成器 外で化学療法剤および／またはリンカ−基を共有結合させることである。　Ｈｅ １ｅｎｅ等はこの標準方法を使用して誘導された３′位に結合した挿入基（ｉｎ ｔｅｒｅ亀１＊ｔｉＢ　ｇｒｏｕｐ）（アクリジン）を持つオリゴデオキシヌク レオチドを構成した。　［Ｈｅ１ｅｎｅ、　Ｃ，、Ｍｏｎｔｅｎ＊７−Ｇｔｒａ ｓｔｉｅｒ、？、、　Ｓ＊ｉｇｏｎ、Ｔ、ａｔ　ｔｌ、、　０ｌｉ（ｏｄｅｏｘ ｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ　ｅｏｖｔｌｅ＋＋ＬＩ７１ｉｎｋｅｄ　ｔｏ　１ｌ ｅｒｅｔｌＮｉＢ　Ｂｅｎｔｓ：　ｔ　ｎｅｗ　ｃｌａｓｓ　ｏｆ（ｅ＋ｅ　ｒ Ｂｕｌ亀ｔｏｒ７５ｕｂｓｔｔｎｃｅｓ、　（挿入剤に共有結合したオリゴデオ キシヌクレオチド類：新しいクラスの遺伝子調節物質）　Ｂｉｏｃｂｅｍｉｅ、 　６フ：７７？−７８３，１９１１５］これらの結合生成物の望ましい性質は、 遺伝子発現の選択的抑制、ヌクレアーゼに対する安定恒　および水溶性と膜輸送 性との間の平衡などである。

オリゴデオキシヌクレオチドに対する活性基の共有結合のいくつかの例が完成さ れている０例えＩＬ　特定の一本ｔ！１ＩＤＮＡに相補的な正燐酸オリゴデオキ シヌクレオチドへの鉄ＥＤＴＡキレート基の合成法が開発されている、これらは ＤＮＡに近接して、反応性酸素含有ラジカルを生成することができる。これらの 化合物置　−重鎖ＤＮＡを開裂させる機能を有する。リンクしたＥＤＴＡキレー ト基を有する正燐酸オリゴデオキシヌクレオチドのもつ問題は、　１）完全な特 異性を達成しなイコと、　２）ＥＤＴ’ＡのＦｅ　（Ｉ　Ｉ）が−個のヌクレオ チド部位につなぎ留められないという非特異法　３）有効性の高い開裂剤自身に よってそれら自身の背骨が破壊されるような自己減成（ｓｏｔｏｄｅＢｔｄｘｔ ｉ。

ｎ）、および４）○Ｈラジカルが多くの方向に拡散することであろう。

また正燐酸オリゴヌクレオチドの３′末端および５′末端の双方にアルキル化基 を結合する合成方法が開発されている。に＋＋ｏｚｅ等は、アミンリンカ−によ りオリゴデオキシヌクレオチドの３″末端に挿入フェナジン誘導体を、また５′ 末端にはアルキル化基を結合させた。　［Ｋｎｏ＋＋ｔ　ｅｌ　１１．ｌ　Ｒｅ ｔｃ＋ｉｖｅ　ｏｉ１ｇｏｎｕｃｌｅｏＬｉｄｅｄｅｒｉｖＩ日ｙｅｓ　ｔａｄ 　５ｅｑｕｅｎｃｅ　−５ｐｅｃｉｆｉｃ　ｍｏｄｉｌｉｃｓｔｉｏｎｏｆ　ｎ ｕｃｌｅｉｃ　＆ｃｉｄｓ、（反応性のオリゴヌクレオチド誘導体および核酸の 配列特異的修飾Ｉ　Ｂｉｏｃｂｉｍｉｅ、　６７：７８５−７８９．　１９８５ ］ 例えば、各ヌクレオチドにおける非架橋酸素原子の一個が硫黄原子によって置換 されているホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ｐｈｏｘｐｈｏ＋ ｏｌｈｉｏｘｔｅ　ｏｌｉ（ｏｄｅｏｘ７ｎｏｃｌｅｏｔｉｄｅ）といった燐酸 修飾オリゴデオキシヌクレオチド（ｐｈｏｘｐｂｌｔｅ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｏ ｌｉ（ｏｄｅｏｘｙ＋＋ｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）は、良好な水溶帳　ホスホルアミ ダイトを介した自動的な合成という有利な特性を有し、またこれらの抗ウイルス 効果が注目されている。中間体結合ホスホルアミダイト（＋ｎＬｅｒｍｅｄ＋ｍ ｔｅ　！１ｎｋｅｄ　ｐｂｏｘＰｂｏｒｔ＋ｕｄＮｅ）を介して５′位で共有結 合した化学基を有する燐酸修飾オリゴデオキシヌクレオチド類は従前は得られて いない。

発明の要約 中間体結合ホスホルアミダイトを介して共有結合した化学基を５′位でリンクし た新規なオリゴデオキシヌクレオチド類の合成方法が提供される。ホスホルアミ ダイト成分に共有結合した化学基の合成（Ｌ　自動合成器外で行われ、続いて自 動合成器で燐酸修飾オリゴデオキシヌクレオチドの５′末端の停止剤としてこの 複合体を利用する。このような化合物は、は乳類遺伝子の発現またはウィルスの 活性を減衰または破壊するために使用される０本発明の実質的または潜在的利点 は、生体外のＨＩＶ活也　蛋白質によるよりも寧ろターゲットとされる細胞の遺 伝子の塩基配列による特−異性、従来の医薬療法および耐性の減少についての改 善された選択性、並びにヌクレアーゼに対する安定性なとがある。

発明の詳細な説明 本発明は中間体結合ホスホルアミダイトを介して５′位で結合した化学基を有す る新規オリゴデオキシヌクレオチド類、およびこれらの合成、および使用を目的 とする。これらの新規化合物は、自動合成器外で共有結合した化学基に対するホ スホルアミダイト成分の合成によって誘導され、続いて精製せられ、そしてこの ホスホルアミダイト共有結合複合体は、自動合成器内で通常のまたは燐酸修飾さ れたオリゴデオキシヌクレオチドの５′末端の停止剤として利用される。

本合成方法により、実現可能で広範囲にわたる一般式Ｒ−Ｌ−○ＤＮの化合物（ 但しＯＤＮはオリゴデオキシヌクレオチド、Ｌはリンカ−アーム、Ｒは共有結合 した基である）が提供される０本方法によって合成された化合物の望ましい例は 、実施例１に見られるように、ヒロドロキシエチルービベラジル・リンカ−アー ム（ｈ７ｄ＋ｏｘｙｅｌｂ７！−ｐｉｐｅｒ！ｘｉＢ！　１ｉｎｋｅｒ　ｔｒｉ ）を介してホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ｐｈｏｘｐｈｏｒ ｏｔｈｉｏｔｌｅ　ｏｌｉ（ｏｄａｏｘ７ｎａｃｌｅｏｌｉｄｅ）に５′位結合 したアントラキノンである。

本方法によって合成された化合物のもう一つの有利な例は、実施例２に見られる ように、マレイミド中間体を介したリンケージのための９−アミノ位を除いては 未置換の５′位結合アクリジンを有する燐酸修飾オリゴデオキシヌクレオチドで ある。

５′位結合した化学基を有するこれらの新規なオリゴデオキシヌクレオチド化合 物の成分ｉＬ　以下のようにして調製出来る。

リンカ−アームは、中間体結合ホスホルアミダイト成分である。望ましいリンカ −アーム＋Ｌ　ピペラジニール誘導体（ｐｉｐｅｒｓｔｉＢＩ　ｄａｒｉｖｔｔ ｉｖｅ）、例えば１−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジンであるが、合成器で 使用される化学的条件に対して便利で適切なリンカ−アームならばどれを使用し てもよい０例えば。

第２アミンの方が第３アミンよりも安定であるにもかかわらず、Ｈｅ１ｅｎｅ等 によって調製されたように９−アミノ基を介してオリゴ類に結合したアクリジン リングは自動合成器中でアルカリ（アンモニア）加水分解を受ける。この場合、 望ましいリンカ−アーム（戴　オリゴデオキシヌクレオチドへの５′位結合９− アミノ−６−クロロアクリジンへのマレイミド中間体である。

マレイミド結合アクリジン・オリゴデオキシヌクレオチドの合成は、実施例２に ある。これは自動合成器中でアンモニアにより遮断されないあらゆる塩基を有す るオリゴデオキシヌクレオチド類の合成を可能にする。

さもなければアンモニアを使用することなく、唯一の遮断されない塩基である、 正（ｎｏｒｍｔｌ）のホスホロチオエートオリゴ−ｄＴ″　Ｓによってのみ６− チオフェノール置換アクリジンが高収率で得られるであろう。

共有結合した化学基４１　望ましくはアントラキノンまたはアクリジンである。

その他の共有結合した基は。

挿入基（ｉｌｅｒｅｘｌｉ口ＨＨｏｏｐ）、既知の薬剤、例えばアドリアマイシ ン、プレオマイシンおよびイミダゾールのような加水分解性基（ｂ７ｄｒｏｌｙ ｔｉｅ　Ｈｒｏｕｐ）などである、もう一つの例（Ｌ　ポリメチレンリンカ−を 介して結合したアントラキノンであろう。

５′位結合９−アミノ−６−クロロアクリジンの共有結合基（戴　ホスホトリエ ステル生成物を脱メチラートするために自動合成器中で使用されたチオフェノー ルにより、６位で置換されることが見出された。この問題を克服するために、リ ンケージのための９位を除いて未置換のアクリジンを使用した。マレイミド中間 体もまた、オリゴヌクレオチドにアクリジンを結合した。以前の論考および実施 例２を参照のこと。

５〜３０成分（Ｓ−３０ｎｅ＋）、望ましくは１２ｍｇ８成分（１２−２８ｍａ ｒ）のオリゴデオキシヌクレオチド類ｉ１本発明において使用されるハイブリッ ド形成のために適当かつ必要な長さを有する。オリゴデオキシヌクレオチドがよ り長ければ、それだけ高価である。また、オリゴデオキシヌクレオチドは、チオ ール含有オリゴデオキシヌクレオチドであってもよい。

オリゴデオキシヌクレオチド類は１種々の異なる塩基配列をもつものであってよ い、特定のオリゴデオキシヌクレオチド塩基配列は、ウィルスＤ　Ｎ　Ａ、ウィ ルスＲＮＡ、は乳類ＤＮＡ、またはは乳類ｍＲＮＡのある領域を補足（相補）す るために合成することができる。オリゴデオキシヌクレオチドは、特定のＤＮＡ またはｍ　ＲＮ　Ａ配列を標的とする生物学的部位に対して共有結合化学基を付 着させる手段として考えられる。

オリゴデオキシヌクレオチドは、正オリゴ（ａｏｒｍｘｌ　。

１１！Ｏ ）またはホスホロチオエートといった燐酸修飾オリゴのいずれか、または両方の 組み合わせによるコポリマーであってよい、燐酸修飾オリゴデオキシヌレオチド が有利である。従前＋ｉ、共有結合基を燐酸修飾オリゴヌクレオチドの５′末端 に結合した例はない。

一連のオリゴヌクレオチド（ｄ　Ｔ、、ｄＴ、、ｄＴ、、ａ’ｒ、２、ｄＴｌｓ 、ｄｃｔｓのオリゴ塩基配列、アンチセンスＣ−ｍｙｃ１５成分体（Ｉｓ−ｍａ ｒ）、および７ンチセンス抗ｒｅｖ　ＨＩＶ配列の）を構成し、かつヒドロキシ エチル−ピペラジニル誘導体を介して５°位でアクリジンまたはアントラキノン に結合させた。ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドを通常のオリゴ デオキシヌクレオチドの代わりに置換すると。

結果として一層効果的なＨＴＶ発現の抑制の効果が。

生体外のＴ細胞アッセイにおいて得られた。

以下の非限定的な例において本発明を詳述する。

実」Ｌ倒」。

″　−゛　−ン　・　１　ゴ　′　ぐ　し　・の」Ｌ成− １−クロロアントラキノン（１，ｇ）および１−（２−ヒドロキシエチル）ピペ ラジン（５ｇ）の混合物を１５０℃で３０分加熱する。室温迄冷却後、水を加え る。混合物を濾過する。　１−（１−（２−ヒドロキシエチル）ビペラジニルコ アントラキノン、融点１６８℃（ＣＨＣＩ　ｇから再結晶後）を得る。

１−［１−（２−ヒドロキシエチル）ビペラジニルコアントラキノン（３３６ｍ ｇ、１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２　（２ｍ　ｌ）に溶解し、かつＮ−エチル−ジ イソプロピルアミン（７６０ｍｇ、　４ｍｍｏｌ）を添加する。

続いて、Ｎ−Ｎ−シイソロビル−メチル−ホスホルアミシッククロリド（ｐｈｏ ｓｐｂｏｒｘｍｉｄｉｅ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ）　（１９４ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を 該溶液に添加する。３０分後、この溶液をエチルアセテ−）−（５ｍｌ、前ちっ て５％ＮａＨＣ○、で洗浄）に注入し、かつ５ｍｌの５％ＮａＨＣＯ３で２回、 　５ｍｌの飽和ＮａＣｌで２回抽出する。

エチルアセテート相をＮａ２５Ｏ，上で乾燥し、油になる迄蒸発させた。ジイソ プロピルホスファミダイト（ジーイソロビルアミノホスフエート）ｏ−メチルエ ステル（ｄ＋＋５ｏｐｒｏｐ７１　ｐｈｏｓｐｈ龜ｍ＋ｄ＋ｔｅ　（ｄ＋＋ｓｏ ｐｒｏｐ７１１ｍｉｎｏ　ｐｈｏｓｐｈｘｔｅ）　Ｏ−ｍｅｔｂ７１　ｅｓｔｅ ｒ）が得られる。　シリーカゲル上のＴＬＣ（エチルアセセテートコトリエチル アミン−９：ｌ）は、反応の完了を示した。スタート原料のＲｆ−０，３、生成 物のＲｆ＝０．　７．　３１Ｐ　ＮＭＲ分光ピークは１４８．更に精製すること なく、この油を適当量のアセトニトリルに溶解して、オリゴヌレオチドの調製に 直接使用した。収率は約６５％であった。

ホスホロチオエートの合成 アンチセンス抗ｒｅｖ　ＨＩＶ塩基配列のｄ　（５°−ＴＣＧ丁ＣＧ　ＣＴＧ丁 ＣＴ　ＣＣＧ　ＣＴＴ　Ｃ・ＴＴ　ＣＣＴ　ＧＣＣＡ）を有するホスホロチオエ ートオリゴデオキシヌクレオチド（ｐｂｏｓｐｂｏｒｏＬｂｉｏ！ｔｅ　ｏｌｉ （ｏｄｅｏｘ７ｎｕｃｌｅｏロｄｅ）の合成を標準のホスホルアミダイト技術を 使用して実施した。自動合成器中で（ＡＢＩ　３８０Ｂ）、ジイソプロピルホス ファミダイト（ジイソプロピルアミノホスフェート）〇−メチルエステルを標準 のヌクレオチドサイクルの方法によりホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレ オチドの５′末端に結合させる。かくしてオリゴデオキシヌクレオチドめ５′ア ントラキノンが得られ、続いてブロックが外され、ＨＰＬＣによって精製される 。

１工旦」 マレ　々φ　ム　１ｃン　１ゴ′　０　し！　ｍｘｌｅｉｎｉｄｅ　１ｉｎｋｅ ｄ　ｔｃｒｉｄｉ　ｅ　ｏｌｉ　ｏｄｅｏｘ　＋＋ｕｃｌｅｏｔｉ紅り鋸釣虹 ｓ−トリチル−３−メルカプトプロパツール（１）オール（ｓ−ｔｒｉｔ７１− ３−ｍｅｒｃ＊ｐｔｏｐｒｏｐ＊ｎｏｌ（Ｉｌｏｌ）　（３３４ｍｇ、　１ｍｍ ｏｌ）をメチレンクロリド（２ｍｌ）に溶解した。Ｎ−エチルジイソプロピルア ミン（７６０，４ｍｍｏｌ）を添加し、またメトキシジイソプロピルクロリオホ スファイト（ｍｅ（ｈｏｘ７ｄｉｉｘｏｐ＋ｏｐｙｌｃｈｏｒｉｏｐｂｏｓｐｂ Ｎｅ）　（１８０ｍ　ｇ、　１．　２ｍｍｏｌ）を徐々に０℃で添加した。この 混合物を更に１５分間、　０℃に放置した。これらの溶液をエチルアセテート（ ５ｍｌ）（トリエチルアミン０．５ｍｌ含有）中に注入し。

５ｍｌの５％Ｎ　ａ　ＨＣＯｓで２回、また５ｍｌの飽和ＮａｃＩで２回洗浄し た。有機相をＮ　ａ　２　Ｓ　Ｏ４上で乾燥し、油になる迄蒸発させた。”Ｐ　 ＮＭＲスペクトルは１４６の単一のピークを示し、またシリカゲル上のＴＬＣ（ 石油エーテル９、　トリエチルアミンｌ；スタート原料のＲｆは０８３、生成物 のＲｆは０．４５）。

更に精製することなしに、透明な油を乾燥アセトニトリルに溶解し、　１００ｍ Ｍ溶液とした。典型的な収率は約４０％であった。

オリゴデオキシヌクレオチドの合成は、標準固相ホスホルアミダイト技術を使用 して実施されたが、その際　炭素鎖を介して５″位の燐酸基に結合したＳ−トリ フェニルメチル基（Ｓ−ｔ＋１ｐｈｅｏｙｌｎｅ＋ｈｙｌ　（ｒｏｕｐ）を含む オリゴデオキシヌクレオチドが得られた。ｓ−トリフェニルメチル基は、Ｃｏｎ ｎｏｌ１７．　Ｂ、、ｌコＮｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ！ｅｘｒｃｂ　４ ４８５　（１９８５）　の記載に従って銀を使用して分離される。チオール含有 オリゴデオキシヌクレオチド類が得られる。

チオール含有オリゴデオキシヌクレオチド（１ｍ。

ｌスケールの合成）を１％Ｎ　ａ　ＨＣＯｓ　（２ｍ　ｌ　）に溶解して、Ｎ− （９−アクリジニル）マレイミド（Ｎ−＋９−＊ｃ＋１ｄｉｌｌ）　ｎａｌｅｉ ｍｉｄｅ）を添加した。Ｎ−（９−ｙクリジニル）マレイミドは、Ｎ１ｒｘ、Ｙ 、とＴａｘｉｍｕ＋ｔ、　Ｋ、による４２　ＡＨｒｉｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｉ ｎ、７Ｎ、　１９７８の記載に従って合成された。この混合物を４℃に１６時間 維持してから２　ｍ　ｌのエチルアセテートで３回抽出した。かくしてマレイミ ド結合アクリジンオリゴデオキシヌクレオチドが得られる。二の混合物（水相） をフラッシュＮ２ガスにより濃縮した。生成物をＨＰＬＣで精製した。

１ｍｏ　１スケールの合成で３５〜４０％の収量が得られた。

望ましい発明の実施態様がここに記載されているが、種々の塩基配列のオリゴデ オキシヌクレオチド類が使用可能であることは、　５″位結合アントラキノンま たは他の化学基を使用して合成された特定のオリゴデオキシヌクレオチドの塩基 配列に関する上記記載から当業者にとって明らかであろう０種々の変化および修 正が、特に共有結合した化学基に関して、本発明の意図から離れることなく、な されうる。

補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の８） 平成３年ｌθ月１８日 璽

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. １．オリゴデオキシヌクレオチドの５′末端でリンカーアームによって共有結合 基にリンクしたヌクレオチドからなる化合物において、ａ）該オリゴデオキシヌ クレオチドが燐酸修節アナログであり、ｂ）該リンカーアームが中間体結合ホス ホルアミダイト成分の一部であり、かつｃ）該共有結合基が該化合物に生物学的 活性を付与することを特徴とする化合物。
2. ２．オリゴデオキシヌクレオチドがホスホロチオエートである請求の範囲第１項 に記載の化合物。
3. ３．オリゴデオキシヌクレオチドが正オリゴデオキシヌクレオチドおよび燐酸修 飾オリゴデオギシヌクレオチドのコポリマー結合からなる請求の範囲第１項に記 載の化合物。
4. ４．リンカーアームがピペラジニル誘導体である請求の範囲第１項に記載の化合 物。
5. ５．共有結合基が挿入基である請求の範囲第１項に記載の化合物。
6. ６．共有結合基がアントラキノンである請求の範囲第１項に記載の化合物。
7. ７．共有結合基がアドリアマイシン、ブレオマイシン、イミダゾール、および加 水分解性化合物からなる基から選択される請求の範囲第１項に記載の化合物。
8. ８．オリゴデオキシヌクレオチドがチオール含有オリゴデオキシヌクレオチドで あり、共有結合基がリンケージのための９−アミノ部位を除いて未置換のアクリ ジンであり、またリンカーアームがマレイミド中間体である請求の範囲第１項に 記載の化合物。
9. ９．該共有結合基を自動合成器外で該リンカーアームに結合させて合成しリンカ ーアーム結合基複合体を生成させ、続いて該リンカーアーム結合基複合体を自動 合成器中で該オリゴデオキシヌクレオチドの５′末端に結合せしめ、該リンカー アームは該自動合成器において使用された化学的条件に対して適切である請求の 範囲第１項記載の化合物の生成法。
10. １０．該オリゴデオキシヌクレオチドを自動合成器内で合成し、続いて自動合成 器外でリンカーアームおよび／または共有結合基を共有結合させる請求の範囲第 １項に記載の化合物を生成する方法。
11. １１．該チオール含有オリゴデオキシヌクレオチドを自動合成器で合成し、続い て自動合成器外でアクジンおよびマレイミド中間体を共有結合させる請求の範囲 第８項に記載の化合物を生成する方法。
12. １２．オリゴデオキシヌクレオチドが３′末端でリンカーアームにより共有結合 基に結合している請求の範囲第１項に記載の化合物。
13. １３．オリゴデオキシヌクレオチドがそれの内部の中間体部位でリンカーアーム によって共有結合基に結合している請求の範囲第１項に記載の化合物。
14. １４．ウイルス活性を破壊しまたは減衰させる方法において、請求の範囲第１項 に記載した化合物の有効量を該ウイルスに感染したほ乳類に投与することからな り、該オリゴデオキシヌクレオチドの塩基配列がウイルスＤＮＡまたはウイルス ＲＮＡのある領域を補足し、共有結合基を標的となる生物学的部位に渡すことを 特徴とする方法。
15. １５．ほ乳類の遺伝子発現を破壊し減衰する方法において、請求の範囲第１項に 記載した化合物の有効量を該遺伝子を有する乳類に投与することからなり、該オ リゴデオキシヌクレオチドの塩基配列が該ほ乳類遺伝子のＤＮＡまたはほ乳類ｍ ＲＮＡのある領域を補足し、共有結合基を標的となる生物学的部位に渡すことを 特徴とする該方法。
16. １６．生体外Ｔ細胞におけるＨＩＶ発現を抑制する方法において、請求の範囲第 １項に記載された化合物の有効量を投与することからなり、該オリゴデオキシヌ クレオチドがウイルスＤＮＡまたは該ＨＩＶのウィルスＲＮＡのある領域を補足 し、かつ該共有結合基がアントラキノンまたはアクリジンであることを特徴とす る方法。
17. １７．生体外Ｔ細胞におけるＨＩＶ発現を抑制する方法において、請求の範囲第 １項に記載の化合物の有効量を投与することからなり、該オリゴデオキシヌクレ オチドの塩基配列がｒｅｖに対するアンチセンスのオリゴマーであり、かつ該共 有結合基がアントラキノンまたはアクリジンであることを特徴とする方法。