JPH04360690A - ジアシルグリセロリン脂質の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はジアシルグリセロリン脂
質の製造方法に関し、詳しくは、リパーゼを使用するこ
とにより、医薬品、化粧品、及び食品等の分野で利用で
きるジアシルグリセロリン脂質を簡単に合成する方法に
関するものである。

【０００２】

【従来の技術及び本発明が解決しようとする課題】グリ
セロリン脂質からリン脂質を合成する方法としては、下
記反応式に示すように、アシル化コエンザイムＡ（アシ
ル化ＣｏＡ）と大腸菌を利用する方法が公知である（生
化学実験講座９「脂質の代謝」　Ｐ．２３８，　１９７
５年，　日本生化学会編，東京化学同人発行）。

【０００３】

【化２】

【０００４】この方法は、高価なアシル化コエンザイム
Ａを使用し、菌体を利用するため、培養及び滅菌等の煩
雑な工程が必要であり、工業的な製造方法としては適さ
ない。

【０００５】一方、下記反応式に示すように、グリセロ
リン脂質をリパーゼで、α−、β−位の水酸基の一方の
みをアシル化し、モノアシルグリセロリン脂質（以下リ
ゾリン脂質と呼ぶ）を製造する方法も報告されている（
特開平２−１０７１９５号公報）　。

【０００６】

【化３】

【０００７】この方法は、あくまでもリゾリン脂質の製
造法であり、ジアシルグリセロリン脂質の製造法にはな
らない。更に、この方法には水分量に関する規定がない
。また、リゾリン脂質の製造は、基質のグリセロリン脂
質１モルの１個の水酸基をアシル化し、１モル当量の水
分を脱離させて生成することは明らかであり、この方法
でジアシルグリセロリン脂質を生成する保証はない。

【０００８】本発明の目的は、界面活性剤として有用な
ジアシルグリセロリン脂質を、汎用の酵素であるリパー
ゼを用い、更にこの酵素の活性発現に必要とする限界水
分量を付与して簡単に製造する方法を提供することにあ
る。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決すべく鋭意研究の結果、本発明を完成するに到った
。即ち、本発明は、リパーゼの活性発現に必要な限界水
分量を付与することで、下記一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）
　で表されるグリセロリン脂質の２個の水酸基をリパー
ゼによって、アシル化する事を特徴とするジアシルグリ
セロリン脂質の製造方法に係わるものである。

【００１０】

【化４】

【００１１】（式中、Ｘ　はアミン類、アルコール類又
はアミノ酸類の残基、或いはアルカリ金属類又はアルカ
リ土類金属類を示す。）本発明の方法においては、グリ
セロリン脂質と、リパーゼの活性発現に必要な限界量の
水分、リパーゼ、脂肪酸とを混合させ、リパーゼが活性
を示す温度からリパーゼが失活する温度以下で反応させ
て、ジアシルグリセロリン脂質を生成させる。

【００１２】本発明で用いられるグリセロリン脂質は、
上記一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるものであり、
天然に存在するものでも、天然に存在するジアシルグリ
セロリン脂質、またはリゾリン脂質を酵素で直接加水分
解したものでも、天然に存在するジアシルグリセロリン
脂質、またはリゾリン脂質を化学的に脂肪酸のエステル
部で加水分解したものでも、グリセリンと、リン酸、コ
リンリン酸、エタノールアミンリン酸、イノシトールリ
ン酸、セリンリン酸等のリン酸化合物から酵素的、また
は化学合成的に生成させたものでも良い。また、グリセ
リン骨格のα−位、β−位のどちらにホスホニル基また
はその誘導基が導入されたものでも使用する事ができる
。 さらにホスホニル基に、ナトリウム、カリウム等のアル
カリ金属、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類
金属が導入されたものでも使用できる。

【００１３】本発明において、リパーゼとしては、微生
物、動物、植物起源のものを使用できる。１種類だけの
リパーゼでも、２種以上のリパーゼを混合して使用する
事もできる。具体的には、微生物由来のものでは、リゾ
プス・キネンシス　（Ｒｈｉｚｏｐｕｓｃｈｉｎｅｎｓ
ｉｓ）由来のもの、キャンデイダ・シリンドラッセ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅｓ）由来のもの、
ジオトリクム・キャンデイダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ
　ｃａｎｄｉｄｕｍ）　由来のもの、ペニシリウム・サ
イクロピュウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｙｃｌｏ
ｐｉｕｍ）　由来のもの、ムコール・ミイヘイ（Ｍｕｃ
ｏｒ　ｍｉｅｈｅｉ）由来のもの、アスペルギルス・ニ
ガー　（Ａｓｐｅｒｇｉ−ｌｌｕｓ　ｎｉｇａｒ）　由
来のもの、クロモバクテリウム・ビスコサム（Ｃｈｒｅ
ｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｖｉｓｃｏｓｕｍ）　由来のも
の等がある。また動物由来のものでは、人、牛、豚等の
膵臓リパーゼがある。また植物由来のものでは、ヒマワ
リ種子リパーゼ等がある。これらのリパーゼは、粉末の
まま、水溶液として、または固定化酵素の形のいずれの
形状で使用しても構わない。

【００１４】また、本発明に用いられる脂肪酸としては
、炭素数６〜２４のものが好ましい。この場合、飽和ま
たは不飽和については規定しない。また直鎖または分岐
鎖のものであっても良い。更に、１種類だけの脂肪酸で
も、２種類以上の脂肪酸を混合して使用することもでき
る。２種類以上の脂肪酸を混合する場合の比率は任意で
あり、特に規定するものではない。脂肪酸の具体例とし
ては、カプロン酸、カプリル酸、ラウリン酸、ミリスチ
ン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、アラキ
ジン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール酸
、α−及びγ−リノレイン酸、エルシン酸、アラキドン
酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テト
ラコサテトラエン酸等がある。

【００１５】本発明のエステル化反応は、原料として上
記一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表されるグリセロリン脂
質と脂肪酸の混合物を用い、それにリパーゼを添加し、
リパーゼの活性発現に必要な限界水分量を与えることに
よって行う。本反応には平衡が存在するため、系内の水
分量が反応の進行に大きな影響及ぼす。そのためには、
反応開始時にリパーゼの活性発現に必要な限界水分量を
与える。ここで、リパーゼの活性発現に必要とする限界
水分量としては、仕込み脂肪酸の体積に対して０．０１
〜３％であり、好ましくは０．０３〜１％である。更に
好ましくは０．０５〜０．５　％である。また、反応に
よって生成する水分は、できるだけ速やかに系外へ除去
し、系内の水分量を０．０１〜３％（対仕込み脂肪酸体
積）に保つことが望ましい。その水分の除去方法として
は、減圧脱水や水を選択的に吸着する物質を充填したカ
ラム中に反応液を通過させる方法、または膜による水分
の分離等があるが、その方法については限定されるもの
ではない。この系内の仕込み水分量及び反応中の水分量
を上記範囲に保持する理由としては、０．０１％未満で
は酵素の活性発現がなく、３％を越えると本反応に平衡
が存在するため、エステル化反応の進行が極端に遅くな
るために、上記の水分量を常に保持しなければならない
。また反応温度は用いるリパーゼの至適温度付近で良く
、一般には３０℃〜８０℃が好適であるが、更に好まし
くは４０〜６０℃である。

【００１６】本発明のエステル化反応において、グリセ
ロリン脂質１モルに対する脂肪酸の量は、　０．２〜４
０モルである。この量が　０．２モル未満では反応の進
行が遅く、４０モルを越えると反応後の精製が大変にな
る。この量は、所望のジアシルグリセロリン脂質の濃度
によって、任意に選択できる。

【００１７】また、リパーゼの量は、使用するリパーゼ
の種類、形状によっても異なるが、グリセロリン脂質１
ｇに対して１０００〜５０００００Ｕ（１Ｕは、１分間
に１μモルのオリーブ油を加水分解する酵素活性）を使
用する。

【００１８】本発明によるエステル化反応では、下記反
応式１及び２に示すように、主としてジアシルグリセロ
リン脂質を生成するが、グリセロリン脂質のα−位、ま
たはβ−位のいずれか一方がアシル化された下記一般式
（ＩＩＩ），　（ＩＶ）及び（Ｖ）で表されるリゾリン
脂質も副生する。このリゾリン脂質は、ジアシルグリセ
ロリン脂質の用途によって、分離生成されることもある
が、全く分離せずに使用することもできる。反応後は、
従来の分離方法（溶剤抽出、カラムクロマトグラフィー
等）によってジアシルグリセロリン脂質を得ることがで
きる。

【００１９】

【化５】

【００２０】（上記一連の式中、Ｒ　は炭素数６〜２４
の飽和又は不飽和脂肪酸残基、Ｘ　はコリン、エタノー
ルアミン、イノシトール、セリン等の残基、又はアルカ
リ金属、アルカリ土類金属を示す。）

【００２１】

【発明の効果】以上のように、本発明の方法によれば、
容易に且つ安価に入手できるリパーゼを用いて、α−位
またはβ−位に所望の脂肪酸が導入されたジアシルグリ
セロリン脂質を簡単に製造することができる。

【００２２】

【実施例】以下、実施例をもって本発明を詳細に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【００２３】実施例１ １００ｍｌの四つ口フラスコに、α−グリセロリン酸ナ
トリウム１ｇ、リパーゼＯＦ（名糖産業（株）製）１８
万Ｕ（３６万Ｕ／ｇ−リパーゼＯＦ粉末を　０．５ｇ）
　、水０．０３ｍｌにオレイン酸１０ｇ（α−グリセロ
リン酸ナトリウムに対して１１．５モル倍）　を加え、
３７℃にて２４時間反応した。反応後遠心分離にて油層
を回収し、内部標準としてホスファチジルコリンを用い
、生成したリン脂質について液体クロマトグラフィー（
ＵＶで検出）にて分析した。その結果、α−ジオレイル
グリセロリン酸ナトリウムが０．０２ｇ、α−リゾグリ
セロリン酸ナトリウムが　０．０１４ｇ生成した。

【００２４】実施例２ １００ｍｌの四つ口フラスコに、β−グリセロリン酸ナ
トリウム１ｇ、リパーゼＯＦ（名糖産業（株）製）１８
万Ｕ（３６万Ｕ／ｇ−リパーゼＯＦ粉末を　０．５ｇ）
　、水０．０３ｍｌにオレイン酸１０ｇ（β−グリセロ
リン酸ナトリウムに対して１１．５モル倍）　を加え、
３７℃にて２４時間反応した。反応後遠心分離にて油層
を回収し、内部標準としてホスファチジルコリンを用い
、生成したリン脂質について液体クロマトグラフィー（
ＵＶで検出）にて分析した。その結果、β−ジオレイル
グリセロリン酸ナトリウムが０．０５ｇ、β−リゾグリ
セロリン酸ナトリウムが　０．０２５ｇ生成した。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　リパーゼの活性発現に必要な限界水分
   量を付与することで、下記一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）　
   で表されるグリセロリン脂質の２個の水酸基をリパーゼ
   によって、アシル化する事を特徴とするジアシルグリセ
   ロリン脂質の製造方法。 【化１】 （式中、Ｘ　はアミン類、アルコール類又はアミノ酸類
   の残基、或いはアルカリ金属類又はアルカリ土類金属類
   を示す。）
2. 【請求項２】　　リパーゼの活性発現に必要な限界水分
   量が、仕込みの脂肪酸の体積に対して０．０１〜３％で
   ある請求項１記載のジアシルグリセロリン脂質の製造方
   法。