JPH04342525A - ホスホリパーゼａ２抑制用薬剤の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野 本発明はホスホリパーゼＡ２　（ＰＬＡ２）　活性の抑
制に関する。 背　　景 ＰＬＡ２はリン脂質の２の位置から脂肪酸を加水分解す
る酵素である。アラキドン酸　（２０：４　ｎ−６、Ａ
Ａ）　は、この位置にしばしば大量に存在する。リン脂
質と結合しているＡＡは、その状態では炎症性前駆物で
はないが、リン脂質との結合が解除されて遊離状態にな
ると、シクロ−オキシゲナーゼおよび５−、１２−およ
び１５−リポキシゲナーゼを含む種々の酵素の活性によ
って生成する広範囲の酸素化誘導体を与える。これらの
誘導体には種々のプロスタグランジン、トロンボキサン
　（ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ）、ロイコトリエンおよび
他の化合物が含まれる。これらＡＡ誘導体の多くは炎症
の促進に重要な役目をはたす。

【０００２】多くの環境下において、炎症は外傷および
その他の刺激に対する適切な生理学的応答である。しか
しながら、あまりにもしばしば炎症は抑制不能となり、
有益である代りに短期間および長期間の被害を与える。 この被害の例には、種々のタイプの関節炎、皮膚炎、喘
息、および潰瘍性大腸炎のような炎症性腸疾患および他
の多くの疾患がある。ＰＬＡ２を抑制する薬剤、特にグ
ルココルチコイドの群は通常、強力な抗炎症剤である。 天然のグルココルチコイドおよび合成および半合成グル
ココルチコイド誘導体の全ては、経口、非経口、および
エアゾル、スプレイまたは上部および下部気道への他の
供給の形状のような皮膚への局所用として、あるいは腸
の炎症性疾患用の座薬および他の形状の直腸投与用薬剤
として広く使用されている。

【０００３】しかしながら、これらの薬剤は極めて広く
使用されてはいるが、多くの副作用があり、これら薬剤
に代る適切な薬剤に対する強い要求がある。 脂肪酸 体内における主要な多不飽和脂肪酸の変換経路を下記表
１に示す。

【０００４】

【０００５】表１の経路は通常では非可逆的であり、か
つヒトでは、ｎ−３およびｎ−６系酸相互の変換も行な
われない。表１の酸は天然では全シス構造であり、相当
するオクタデカン酸、エイコサン酸またはドコサン酸の
誘導体として、たとえばδ−９，　１２−オクタデカジ
エン酸またはδ−４，　７，　１０，　１３，　１６，
　１９−ドコサヘキサエン酸と組織的に命名されるが、
しかし夫々について１８：２　ｎ−６または２２：６　
ｎ−３のような数字的名称も便利である。 イニシャル、たとえば２０：５　ｎ−３酸　（エイコサ
ペンタエン酸、　ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａ−ｅｎｏｉｃ
　ａｃｉｄ）に対してＥＰＡ、または２２：６　ｎ−３
酸　（ドコサヘキサエン酸、ｄｏｃｏ−ｓａｈｅｘａｅ
ｎｏｉｃ　ａｃｉｄ）に対してＤＨＡも用いられるが、
同一鎖長および同一不飽和度のｎ−３酸およびｎ−６酸
が存在する場合、たとえば２２：５酸には役に立たない
。ｎ−６系で多少なりとも一般に使用されている通俗名
称も表１に示した。ｎ−３系では、ステアリドン酸の名
称が１８：４　ｎ−３酸に使用されるようになり、エイ
コサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸の名称自体
もまた使用されるが、１８：３　ｎ−３が一般に使用さ
れている通俗名称のα−リノレン酸を有するのみである
。古くはγ−リノレン酸よりもリノレン酸のα−異性体
が注目され、文献中、特に初期の文献中ではリノレン酸
に対して単にα−酸の名称が使用された。 本発明に関する議論 本発明者らはヒトの皮膚およびラットのマクロファージ
から分離したＰＬＡ２の一連の観察を行なった。この研
究の背景となるアイデアは、ＰＬＡ２によって遊離化さ
れたＡＡおよび他の脂肪酸がＰＬＡ２活性をフィード・
バック・コントロールするであろうことである。本発明
者らはこれが事実であることを見出した。より詳細には
、そして予期しなかったことには、本発明者らはｎ−３
およびｎ−６酸の二つの試験系において、試験をした全
ての酸の中でステアリドン酸　（１８：４ｎ−３、ＳＡ
）　が最も有効であることを見出した。ＰＬＡ２を抑制
するＡＡや或る種の他の脂肪酸とは異なり、ＳＡは著し
い炎症性前駆効果を有する誘導体に変換されることがな
いので、本発明者らはＳＡをＰＬＡ２を抑制する薬剤と
して使用すること、および効果的な量で上部および下部
気道に、腸に、および眼、耳および関節のような炎症を
生ずるであろう他の部位にＳＡを供与するであろう種々
のタイプの方法を含む、経口、局所および非経口用途の
ための抗炎症剤としてＳＡを用いることを提案する。更
にＳＡは体内において急速に２０：４　ｎ−３に鎖延長
され、投与されたＳＡは、事実２０：４　ｎ−３として
活性であると思われるので、本発明者らはこの酸をＳＡ
同様に使用することも提案する。

【０００６】ＰＬＡ２を抑制するであろう全ての脂肪酸
の中で、ＳＡは特に興味があり、とりわけその皮膚への
使用に興味がある。一般に、不飽和脂肪酸の代謝におけ
る脱飽和工程はおそく、一方、鎖延長工程は急速に行な
われる。脱飽和工程は皮膚では全く行なわれない。従っ
てＳＡは急速に２０：４　ｎ−３に変換されるが、徐々
に脱飽和されるのみであり、皮膚においては、かかる鎖
延長以後の変換は全く起こらない。ＳＡおよび２０：４
　ｎ−３自体のいずれも顕著な炎症性前駆作用を有する
であろう活性代謝産物に変化されないことが知られてい
る。ｎ−３およびｎ−６酸二つの試験系において、ＡＡ
はＰＬＡ２を抑制する能力においてＳＡに極めて類似す
る。しかしながら、ＡＡ自体はある範囲の炎症性前駆代
謝産物に変換されるので、その抑制効果を利用すること
は適切ではない。

【０００７】ＳＡおよび２０：４　ｎ−３は組合せでＰ
ＬＡ２を抑制する能力を有する。しかもたとえばそれら
自身が２０：５　ｎ−３から生ずるプロスタグランジン
のような炎症性前駆物質を与えることはない。 本発明の開示 本発明は一つの主題として炎症を支配するホスホリパー
ゼＡ２の抑制のための薬剤の製造方法を提供する。この
薬剤においては、δ−６，　９，　１２，　１５−オク
タデカテトラエン酸　（ステアリドン酸）　および／ま
たはδ−８，　１１，　１４，　１７−エイコサテトラ
エン酸が当該薬剤として単独で、または薬学的に許容さ
れる希釈剤または担体と共に存在する。上記炎症の抑制
とは、もちろん予防または治療である。

【０００８】本発明の他の主題は、炎症にかかっている
、または炎症の危険にさらされている患者の炎症を支配
するホスホリパーゼＡ２を抑制する方法を提供すること
にある。この方法においては、δ−６，　９，　１２，
　１５−オクタデカテトラエン酸　（ステアリドン酸）
　および／またはδ−８，　１１，　１４，　１７−エ
イコサテトラエン酸から成る薬剤が当該患者に酸単独の
有効量で、または薬学的に許容される希釈剤または担体
と共に投与される。

【０００９】ＳＡおよび２０：４　ｎ−３は希釈剤また
は担体としての他の脂肪酸または脂肪酸グリセライド共
に投与することができるが、アラキドン酸が存在しない
ことが望ましい。γ−リノレン酸およびジホモ−γ−リ
ノレン酸はそれ自体抗炎症性を有するので、ある種の環
境下では、特に皮膚では、これら他の酸をステアリドン
酸と組合せることが有効であるとの利点がある。

【００１０】上記酸または上記酸の夫々の　０．００１
〜３０％、好ましくは０．１〜５．０％、極めて好まし
くは０．５〜３．０％から成る局所用製剤が好都合な薬
剤である。この代りに、１日当り１ｍｇ〜５０ｇ、好ま
しくは１０ｍｇ〜１０ｇ、極めて好ましくは　１００ｍ
ｇ〜２ｇの経口、径腸、直腸用、エアゾルまたは非経口
投与に適した投与量単位形状の薬剤がある。この薬剤は
、経口的に、径腸的にまたは直腸から胃腸管に、または
適切な付与方法によって気道に、または非経口的に投与
することができる。 酸の形状と供給源 ＳＡおよび２０：４　ｎ−３は化学合成によって、また
はα−リノレン酸　（１８：３　ｎ−３）　からの酵素
による変換によって、または細菌、藻類または適切に加
工されたバクテリアを使用する微生物技術によって製造
することができる。

【００１１】ＳＡはまた、或る種の植物油、特に黒すぐ
りのようなＲｉｂｅｓ種の種子から得られた油中に見出
されている。しかしながら、本明細書に記した、あるい
は記していない、いずれの供給源からのＳＡも本発明に
おいて使用することができる。ＳＡおよび２０：４　ｎ
−３は酸自体として、または塩、アミド、エステル、た
とえばＣ１　〜Ｃ４　アルキルエステルおよびトリ−お
よび他のグリセライド、およびリン脂質のような適切な
誘導体として使用することができる。従って、特許請求
の範囲およびそれ以外の個所における酸に関する記述は
、かかる誘導体の記述を含むものであり、かかる誘導体
は酸を体内の適切な部位に付与し、その部位における酸
の濃度を高めることができる。

【００１２】有用な誘導体の間接的確認は、その誘導体
が酸自体の有効な効果を有することであるが、血液、体
脂または他の組成中の酸の濃度を標準技術、たとえば米
国イリノイ州、シャンペイン　（Ｃｈａｍｐａｉｇｎ）
、アメリカン・オイル・ケミスツ・ソサイティ、パーキ
ンス　（Ｐｅｒｋｉｎｓ）編集”Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏ
ｆ　Ｌｉｐｉｄｓ　ａｎｄ　Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ
”　第２３頁記載のペリック　（Ｐｅｌｉｃｋ）　らに
よるガス・クロマトグラフィ分析によって変換を直接知
ることができる。

【００１３】概要を述べれば、この方法では好適には血
漿試料　（１ｍｌ）をクロロホルム：メタノール　（２
：１）　で抽出した。抽出物を硫酸ナトリウムを通して
濾過し、蒸発乾固し、クロロホルムメタノール　０．５
ｍｌに溶解させた。脂質留分を薄層クロマトグラフィま
たはシリカゲル板によって分離した。必須脂肪酸含有量
を最も鋭敏に反映するリン脂質留分を三フッ化ホウ素−
メタノールを用いてメチル化した。得られた脂肪酸のメ
チルエステルを分離し、クロモソルブ　（ｃｈｒｏｍｏ
ｓｏｒｂ）　ＷＡＷ１０６／２３０−１０％シラール　
（ｓｉｌａｒ）を充填した６フィートカラムを有する　
Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ５８８０ガスクロマト
グラフィを用いて測定した。

【００１４】キャリア・ガスにはヘリウムを用いた　（
３０ｍｌ／分）　。炉温は　１６５℃から　１９０℃に
２℃／分で上昇するように調整した。検出器温度は　２
２０℃、注入温度は　２００℃である。保持時間および
ピーク面積は　Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ　Ｌｅ
ｖｅｌ４積算器によって自動的に測定した。ピークは標
準脂肪酸メチルエステルとの比較によって確認した。 食餌組成物 本発明を治療方法および薬学的組成物に関して主として
述べたが、γ−リノレン酸や他の必須脂肪酸は食餌用補
給物の性質を有するので、規定食マーガリンや他の食品
に加入することができ、かかる食餌組成物も特許請求の
範囲または他のいずれかの個所における薬学的組成物ま
たは薬剤の用語の内に含まれると理解されるべきである
。 医薬用製剤 薬学的製剤のための好適な組成物は、たとえば　Ｗｉｌ
ｌｉａｍｓ　の英国特許明細書第１，０８２，６２４　
号に詳細に論じられており、本発明においてもこれを参
考とすることができ、いずれの場合においてもいずれか
の特定の種類の製剤について一般に良く知られている。 すなわち、たとえば錠剤、硬質または軟質ゼラチンまた
は他のカプセル、腸溶皮カプセル、摂取可能な液体また
は粉末製剤、および酸が皮膚を通して、または他の直接
的適用によって吸収される場合には局所用製剤を要求に
応じて製造することができる。

【００１５】遊離酸を溶解させるための遊離アルブミン
の使用、または脂質乳濁液の製造、またはリチウムまた
はナトリウム塩のような水溶性塩の使用を含む種々の方
法によって注射用溶液を製造することができる。保存剤
を製剤中に添加するのが好都合である。約０．１重量％
の濃度のα−トコフェロールがこの目的に好適であるこ
とが見出され、この分野において良く知られている多数
の可能な安定剤の一つであり、またたとえばアスコルビ
ルパルミテートおよびステアレートが含まれる。

【００１６】いずれの投与量単位に存在する活性物質の
絶対量も使用されるべき投与割合いおよび方法に適切な
量を越えるべきではないが、他方では、少ない投与数に
よって望ましい投与割合いが達成されるべきことが理解
されるべきである。更に投与割合いは望ましい正確な薬
理学的作用に依存する。 実験の部 上述した議論のベースとなる実験操作においては、分離
したマウスまたはヒトの表面細胞から洗剤可溶化、イオ
ン交換クロマトグラフィおよびゲル濾過によって表面Ｐ
ＬＡ２を製造した。いずれの酵素も６８，０００の領域
の分子量、最適の９．０付近のｐＨおよびカルシウムイ
オンに対する絶対必要量を有する。リン脂質は一枚膜小
胞および洗剤ミセルの両方で製造した。ＰＬＡ２活性は
、極性頭部基に対する顕著な選択性を有しないこれら基
質を用いて容易に検出した。

【００１７】標準検定には１−パルミトイル２−１−１
４Ｃパルミトイルホスホアチジルコリンを用いた。反応
は精製した酵素の添加によって開始され、クロロホルム
／メタノール／酢酸　（３：４：１）　の添加によって
終了した。遊離脂肪酸を抽出し、薄層クロマトグラフィ
によって分離し、シンチレーション計測によって数量化
した。 種々の濃度範囲の脂肪酸を反応混合物中に加えてＰＬＡ
２を抑制する、それらの能力を評価した。投与量に対応
する曲線を作成し、ＩＣ５０値　（酵素活性を５０％に
まで抑制するに必要な脂肪酸の濃度）　を推定した。同
様な実験を、洗浄によってラット腹腔から分離したマク
ロファージを用いて行なった。結果を下記表２および表
３に示す。

【００１８】

【００１９】

【００２０】

【実施例】炎症の治療または予防において、ＰＬＡ２抑
制のために下記薬剤を投与した。 １．　ＳＡまたは２０：４　ｎ−３の１％を含むクリー
ムまたは軟膏を局所用用途のために１日当り２〜４回、
体の患部に適用した。 ２．　ＳＡまたは２０：４　ｎ−３の０．７５％を含む
クリームまたは軟膏を局所用用途のために１日当り２〜
４回、体の患部に適用した。 ３．　ＳＡまたは２０：４　ｎ−３の２％を含む直腸用
投与のための液体を１日当り２回、夫々の場合に５０ｍ
ｌを投与した。 ４．　ＳＡまたは２０：４　ｎ−３の２％を含む気道用
のエアゾルを１日当り４回用い、夫々の場合に該酸の４
ｍｇを適用した。 ５．　１０ｍｌの適切な希釈剤と０．５ｇのリチウム−
ＳＡを含む、静脈内、筋肉内または関節内用非経口注射
液を要求に応じた適切な間隙で、夫々の場合に１〜５ｍ
ｌ用いた。 ６．　１０ｍｌ中にＳＡトリグリセリド０．５を含む静
脈内投与量の乳濁液を要求に応じた適切な間隙で用いた
。 ７．　夫々が４００ｍｇ　のＳＡを含む、経口投与用の
、好ましくは腸溶皮の軟質または硬質ゼラチンカプセル
を１錠づつ１日に４回投与した。 ８．　ＳＡトリグリセリドの２０重量％を含む、澱粉ま
たは他の適切な材料から製造した微細粒を、１日当り、
５ｇずつ３回投与した。 ９．　上記実施例１〜８におけるＳＡまたは２０：４　
ｎ−３と同一量のγ−リノレン酸またはジホモ−γ−リ
ノレン酸を更に含む製剤。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　炎症を抑制するための、ホスホリパー
   ゼＡ２の抑制用薬剤の製造方法であり、δ−６，　９，
   　１２，　１５−オクタデカテトラエン酸　（ステアリ
   ドン酸）　および／またはδ−８，　１１，１４，　１
   ７−エイコサテトラエン酸がそれのみで、または薬学的
   に許容される希釈剤または担体と共に前記薬剤として提
   供されることを特徴とするホスホリパーゼＡ２の抑制用
   薬剤の製造方法。
2. 【請求項２】　　炎症にかかっている、または炎症の危
   険性のある患者における炎症を制御するためのホスホリ
   パーゼＡ２の抑制方法であり、有効量のδ−６，　９，
   　１２，　１５−オクタデカテトラエン酸　（ステアリ
   ドン酸）　および／またはδ−８，　１１，　１４，　
   １７−エイコサテトラエン酸がそれのみで、または医学
   的に許容される希釈剤または担体と共に前記患者に投与
   されたことを特徴とするホスホリパーゼＡ２の抑制方法
   。
3. 【請求項３】　　前記薬剤が、１日当り１ｍｇ〜５０ｇ
   、好ましくは１０ｍｇ〜１０ｇを皮膚、腸または気道に
   適用するのに適した、前記酸または前記酸の夫々の０．
   ００１〜３０％、好ましくは０．１〜５．０％、極めて
   好ましくは０．５〜３．０％から成る局所用製剤である
   請求項１または２記載の方法。
4. 【請求項４】　　前記薬剤が１日当り１ｍｇ〜５０ｇ、
   好ましくは１日当り１０ｍｇ〜１０ｇ、極めて好ましく
   は１日当り１００ｍｇ　〜２ｇの請求項３記載の夫々の
   酸の経口、径腸または非経口投与に適した投与量単位形
   状である請求項１または２記載の方法。
5. 【請求項５】　　γ−リノレン酸またはジホモ−γ−リ
   ノレン酸が請求項３または４記載の酸に加えて、便利的
   にはこれら酸について述べた量で用いられて請求項１ま
   たは２記載の方法。