JPH04281789A - Prepared substance containing immobilized microbial cell and its production - Google Patents
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Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
Description
【0001】0001
【産業上の利用分野】本発明は、環境汚染物質の分解、
処理、及び生産工程などにおいて物質変換に利用される
、固定化微生物菌体を含む調製物及びその製造方法に関
するものである。[Industrial Application Field] The present invention is directed to the decomposition of environmental pollutants,
The present invention relates to preparations containing immobilized microbial cells that are used for material conversion in processing and production processes, and methods for producing the same.
【0002】0002
【従来の技術】従来より、産業廃棄物として排出される
有機性排ガス、有機性廃液、例えば、アルコール、カル
ボン酸、アルデヒド、ケトン、エステルなどの脱臭、除
去方法として、所謂バイオフィルターを利用した方法(
例えば、”VT−Biofilter, BHL J
J W”, Ing. Breau Van Tong
eren, Environ Technol, pp
. 358−360, 1987など)が知られている
。[Prior Art] Conventionally, a method using a so-called biofilter has been used as a method for deodorizing and removing organic exhaust gases and organic waste liquids discharged as industrial waste, such as alcohols, carboxylic acids, aldehydes, ketones, and esters. (
For example, “VT-Biofilter, BHL J
J W”, Ing. Breau Van Tong
Environ Technol, pp.
.. 358-360, 1987) are known.
【0003】このように、微生物を利用して環境汚染物
質の分解、処理、及び生産工程などにおいて物質変換に
利用するために、従来より、微生物の固定化として、天
然高分子又は合成高分子から成るゲル内に微生物を包埋
する所謂包括固定化法によるものが大部分であった(
例えば、千畑一郎,「固定化生体触媒」, pp. 6
9〜79,講談社, 1986年など) 。[0003] As described above, in order to utilize microorganisms for material conversion in decomposition, treatment, and production processes of environmental pollutants, it has been conventionally possible to immobilize microorganisms by using natural or synthetic polymers. Most of the methods were based on the so-called entrapping immobilization method, in which microorganisms are embedded in gel (
For example, Ichiro Chibata, "Immobilized Biocatalyst", pp. 6
9-79, Kodansha, 1986, etc.).
【0004】この方法では、微生物を固定化する工程と
、その後の保存、及び使用中の微生物の活性低下を防ぐ
ために、各種の固定化担体と固定化操作が検討され、使
用目的に応じて選択されている。すなわち、固定化操作
の難易、固定化担体の価格の面から、又、被固定化微生
物にとって苛酷な条件は好ましくないことから、固定化
の諸条件の面から、ならびに固定化担体の強度・寿命、
反応基質の透過性、担体内での微生物の増殖性および固
定化担体の活性などの面において、種々検討がなされて
いる。[0004] In this method, various immobilization carriers and immobilization operations have been studied in order to prevent the activity of microorganisms from decreasing during the process of immobilizing microorganisms, subsequent storage, and use, and the selection is made depending on the purpose of use. has been done. In other words, from the viewpoint of the difficulty of the immobilization operation, the price of the immobilization carrier, and the fact that harsh conditions are not favorable for the microorganisms to be immobilized, the strength and lifespan of the immobilization carrier are important. ,
Various studies have been conducted on the permeability of reaction substrates, growth of microorganisms within the carrier, and activity of immobilized carriers.
【0005】例えば、微生物を固定化し、長期性能を保
持する担体としては、アルギン酸カルシウム、カラギナ
ンなどの天然高分子などが公知であり、優れた効果があ
るとの報告がある。I.A. Veliky, R.E
. Williams, ”Biotechnol.
Lett.”, vol. 3, pp. 275,
1981では、菌体懸濁液とアルギン酸ナトリウム水溶
液を混合後、CaCl2 水溶液に接触して、アルギン
酸カルシウムに微生物を固定化する方法が報告されてい
る。また、T. Tosa 等, ”Biotechn
ol. Bioeng.”, vol. 21, pp
. 133, 1979では、菌体懸濁液とκ−カラギ
ーナン水溶液を混合後、(30 〜60℃) 冷却して
カラギナンに微生物を固定化する方法が報告されている
。For example, natural polymers such as calcium alginate and carrageenan are known as carriers that immobilize microorganisms and maintain long-term performance, and are reported to have excellent effects. I. A. Veliky, R. E
.. Williams, “Biotechnol.
Lett. ”, vol. 3, pp. 275,
In 1981, a method was reported in which microorganisms were immobilized on calcium alginate by mixing a bacterial cell suspension and an aqueous sodium alginate solution and then contacting the mixture with an aqueous CaCl2 solution. Also, T. Tosa et al., “Biotechn
ol. Bioeng. ”, vol. 21, pp.
.. 133, 1979, a method is reported in which microorganisms are immobilized on carrageenan by mixing a bacterial cell suspension and an aqueous κ-carrageenan solution and then cooling the mixture to 30 to 60°C.
【0006】また、合成高分子を利用したものとしては
、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコールなどを利
用する方法が一般に行われている。例えば、I. Ch
ibata等,”Microbiol.”, vol.
27, pp. 878, 1974では、菌体懸濁
液、アクリルアミドモノマー、アクリル酸誘導体の架橋
剤の混液に重合促進剤、開始剤を添加して混合してポリ
アクリルアミドに微生物を固定化する方法が報告されて
いる。また、特開昭61 139385号には、菌体
懸濁液とポリビニルアルコール水溶液を混合後、−20
〜−80℃の低温条件下に放置して、ポリビニルアルコ
ールに微生物を固定化する方法が開示されている。[0006] Furthermore, methods using synthetic polymers such as polyacrylamide and polyvinyl alcohol are generally used. For example, I. Ch
Ibata et al., “Microbiol.”, vol.
27, pp. 878, 1974, reported a method for immobilizing microorganisms on polyacrylamide by adding a polymerization accelerator and an initiator to a mixture of a bacterial cell suspension, an acrylamide monomer, and an acrylic acid derivative crosslinking agent and mixing them. . Furthermore, in JP-A-61-139385, after mixing a bacterial cell suspension and a polyvinyl alcohol aqueous solution, -20
A method is disclosed in which microorganisms are immobilized on polyvinyl alcohol by leaving it under low temperature conditions of ~-80°C.
【0007】[0007]
【発明が解決しようとする課題】ところで、微生物の固
定化物を装置内に組み込む場合には、流路内での耐圧性
、広範な化学物質などに対する安定性、ならびに汚染微
生物に対する安全性など多数の要求を満足することが必
須である。[Problems to be Solved by the Invention] When incorporating immobilized microorganisms into a device, there are many issues such as pressure resistance in the flow path, stability against a wide range of chemicals, and safety against contaminating microorganisms. It is essential to satisfy the requirements.
【0008】しかしながら、前述した従来のアルギン酸
カルシウム、カラギナンなどの天然高分子などを利用し
て微生物を固定化する方法では、担体が、酸に対して加
水分解する性質がある多糖質およびゲル状であるため、
耐酸性、機械的強度が不十分であり、処理すべき化学物
質の量、種類などによっては使用不可能であり、また、
繰り返し、長期使用などに到底耐え得るものとは言い難
いものであった。However, in the above-mentioned conventional method of immobilizing microorganisms using natural polymers such as calcium alginate and carrageenan, the carrier is a polysaccharide or a gel that has the property of being hydrolyzed by acids. Because there is
It has insufficient acid resistance and mechanical strength, and cannot be used depending on the amount and type of chemical substances to be treated.
It could hardly be said that it could withstand repeated and long-term use.
【0009】一方、前述したポリアクリルアミド、ポリ
ビニルアルコールなどの合成高分子を利用して微生物を
固定化する方法では、使用環境によっては、その毒性が
問題となり、さらにはこれらの合成高分子では、加熱に
よるか、可塑剤、溶剤などを加えて加工する方法が一般
に行われるが、この加工法では、微生物の死滅、活性の
低下を招くため使用できず、所望の形状に成形するのが
難しく、使用目的に応じた形態とすることは困難であっ
た。On the other hand, with the method of immobilizing microorganisms using synthetic polymers such as polyacrylamide and polyvinyl alcohol, toxicity becomes a problem depending on the usage environment, and furthermore, these synthetic polymers cannot be heated. Generally, processing is performed by adding plasticizers, solvents, etc., but this processing method kills microorganisms and reduces activity, so it cannot be used, and it is difficult to mold into the desired shape, making it difficult to use. It was difficult to create a form that suited the purpose.
【0010】また、これら以外の従来の包括固定化担体
においても、これらと同様な問題を包含するものであっ
た。さらに、前述した全ての従来の微生物固定化法にお
いては、ゲルであるため、機械的強度が不足して、微生
物菌体が簡単に短時間でゲルから漏洩してしまい、微生
物汚染、固定化物の使用回数の制限などの原因となった
り、さらには、ゲル内で微生物が増殖するために、ゲル
の崩壊が発生し、使用に耐えないものとなるなどの問題
があった。[0010] In addition, other conventional entrapping immobilization carriers have the same problems as these. Furthermore, in all the conventional microorganism immobilization methods mentioned above, since they are gels, they lack mechanical strength and microbial cells easily leak out of the gel in a short period of time, resulting in microbial contamination and immobilized materials. This causes problems such as a limit on the number of times of use, and furthermore, microorganisms proliferate within the gel, causing the gel to disintegrate and become unusable.
【0011】[0011]
【課題を解決するための手段】本発明は、前述した従来
技術の課題に鑑み発明なされたものであって、その目的
とするところは、広範な化学物質などに対する安定性、
汚染微生物に対する安全性、十分な機械的強度などを有
し、しかも毒性が問題とならず、簡単に調製でき、さら
には、繰り返し、長期使用に耐え得る固定化微生物菌体
を含む調製物及びその製造方法を提供することを目的と
する。[Means for Solving the Problems] The present invention has been made in view of the above-mentioned problems of the prior art, and aims to improve stability against a wide range of chemical substances, etc.
A preparation containing immobilized microorganisms that is safe against contaminating microorganisms, has sufficient mechanical strength, has no toxicity, can be easily prepared, and can withstand repeated and long-term use, and its preparations. The purpose is to provide a manufacturing method.
【0012】かかる目的を達成するために、本発明の固
定化微生物菌体を含む調製物は、微生物菌体を含有固定
した天然高分子ゲルを主成分とする微生物含有ゲル層と
、合成高分子を主成分とする組成物からなり、前記微生
物含有ゲル層を被包し硬化された硬化被包層から構成さ
れ、前記硬化被包層が前記微生物含有ゲル層全体を被包
して、該ゲル層の露出部分が存在しないように構成され
ることを特徴とするものである。In order to achieve this object, the preparation containing immobilized microbial cells of the present invention comprises a microorganism-containing gel layer mainly composed of a natural polymer gel containing immobilized microbial cells and a synthetic polymer gel layer. The composition is composed of a hardened enveloping layer which envelops and hardens the microorganism-containing gel layer, and the cured enveloping layer envelops the entire microorganism-containing gel layer to form the gel. The structure is characterized in that there are no exposed parts of the layer.
【0013】また、このような固定化微生物菌体を含む
調製物は、本発明によれば、(1) 微生物菌体を
、天然高分子ゲルを主成分とする組成物中に、含有固定
化して微生物含有ゲル層を調製する工程、(2)
合成高分子を主成分とする組成物によって、前記微生物
含有ゲル層を被包し、前記合成高分子を主成分とする組
成物を硬化させ、硬化被包層を形成せしめる工程、とか
ら製造することができる。[0013] Further, according to the present invention, such a preparation containing immobilized microbial cells comprises (1) containing and immobilizing microbial cells in a composition containing a natural polymer gel as a main component; (2) preparing a gel layer containing microorganisms;
The microorganism-containing gel layer is encapsulated with a composition whose main component is a synthetic polymer, and the composition whose main component is a synthetic polymer is cured to form a cured encapsulation layer. be able to.
【0014】[0014]
【実施例】A.微生物菌体固定化ゲルの調製方法本発明
に使用する微生物菌体を固定化するための固定化ゲルと
しては、従来より微生物を固定可能な周知の天然高分子
なら全て使用可能であり、例を挙げれば、アルギン酸カ
ルシウム、カラギナン、寒天、ゼラチンなどが使用可能
である。[Example] A. Preparation method of microbial cell immobilization gel As the immobilization gel for immobilizing microbial cells used in the present invention, any well-known natural polymer that can immobilize microorganisms can be used. Calcium alginate, carrageenan, agar, gelatin, etc. can be used, to name a few.
【0015】また、固定化の方法は、使用する天然高分
子の種類に応じて、その濃度、添加すべき補助剤などを
適宜検討して使用するが、その際に重要なことは、固定
化すべき微生物の生理的性状に応じて、固定化時の温度
、pH、培地成分、攪拌混合方法など微生物学的に留意
すべき事項を満足し、固定化された微生物菌体が活性を
保持するようにすることが必須である。[0015] In addition, the immobilization method should be used after considering its concentration, adjuvants to be added, etc. as appropriate depending on the type of natural polymer used. Depending on the physiological properties of the microorganisms to be immobilized, microbiological considerations such as temperature, pH, medium components, and stirring/mixing method should be satisfied during immobilization, so that the immobilized microorganisms retain their activity. It is essential to do so.
【0016】実施例1 微生物固定化ゲルフィルムの
調製
アセトン分解性能を有するブレビバクテリウム sp.
MEOH−4 菌 (Brevibacterium
sp. MEOH−4)( 工業技術院微生物工業技
術研究所寄託菌( 微工研菌寄第11047号(FER
M P−11047)) を、ニュウトリエント・ブロ
ス (Difco社製) で37℃にて振盪培養して得
られた培養液を、5000 rpmで5 分間遠心分離
して菌体を集め、生理食塩水に懸濁して菌体懸濁液を調
製した。この菌体懸濁液を、2 %アルギン酸ナトリウ
ム水溶液に対して、10%加えて混合した。
これを、平板上に2 mmの厚さに拡げた後、0.05
MのCacl2 水溶液を入れた容器に5 分間浸漬
しゲル化させた。その後、直径2.5 cmの円板状に
切断しニュウトリエント・ブロス(Difco社製)
に浸漬して、5 日間培養(37 ℃静置培養) して
増殖固定することにより調製した。Example 1 Preparation of gel film with immobilized microorganism Brevibacterium sp. having acetone decomposition ability.
MEOH-4 Bacteria (Brevibacterium)
sp. MEOH-4) (Bacteria deposited at the Institute of Microbial Technology, Agency of Industrial Science and Technology (FER)
M P-11047)) was cultured with shaking at 37°C in nutrient broth (manufactured by Difco). The resulting culture solution was centrifuged at 5,000 rpm for 5 minutes to collect the bacterial cells, and the cells were added to physiological saline. to prepare a bacterial cell suspension. 10% of this bacterial cell suspension was added to a 2% aqueous sodium alginate solution and mixed. After spreading this on a flat plate to a thickness of 2 mm,
It was immersed in a container containing an aqueous solution of M Cacl2 for 5 minutes to form a gel. Thereafter, it was cut into disks with a diameter of 2.5 cm and mixed with nutrient broth (manufactured by Difco).
The cells were immersed in water and cultured for 5 days (static culture at 37°C) to fix the growth.
【0017】B.微生物含有ゲル層を被包する硬化被包
層の調製
前述のように調製した微生物菌体固定化ゲルを被包する
硬化被包層に使用する高分子組成物としては、種々の樹
脂を配合することが可能である。しかしながら、所期の
目的である親水性(吸水性)の保持、強度の保持、菌の
保持と増殖ならびに活性維持などの全ての性能を考慮に
入れれば、好ましくは、アクロイル基を有するもの、例
えばメチル( メタ) アクリレート、エチル( メタ
) アクリレートなどが使用可能であるが、N −メト
キシメチル化ナイロン及び/又はウレタンアクリレート
と、2 −ヒドロキシエチル(メタ) アクリレートの
混合物であるのが好適である。また、この場合、最終調
製物たる固定化微生物菌体を含む調製物の強度、親水性
(吸水性)の観点から、N −メトキシメチル化ナイロ
ン及び/又はウレタンアクリレートと、2 −ヒドロキ
シエチル( メタ) アクリレート樹脂の合計重量が、
調製物全体の重量の50重量%以上含有することが望ま
しい。B. Preparation of a hardened encapsulant layer for enclosing a microorganism-containing gel layer Various resins are blended into the polymer composition used for the cured encapsulant layer for enclosing the microorganism-immobilized gel prepared as described above. Is possible. However, if we take into account all of the intended objectives, such as maintaining hydrophilicity (water absorption), maintaining strength, retaining and propagating bacteria, and maintaining activity, we prefer those having an acroyl group, e.g. Methyl (meth)acrylate, ethyl (meth)acrylate, etc. can be used, but a mixture of N-methoxymethylated nylon and/or urethane acrylate and 2-hydroxyethyl (meth)acrylate is preferred. In this case, from the viewpoint of strength and hydrophilicity (water absorption) of the final preparation containing immobilized microbial cells, N-methoxymethylated nylon and/or urethane acrylate and 2-hydroxyethyl (meth) ) The total weight of acrylate resin is
It is desirable that the content be 50% by weight or more of the total weight of the preparation.
【0018】また、N −メトキシメチル化ナイロン及
び/又はウレタンアクリレートを、2−ヒドロキシエチ
ル( メタ) アクリレートに溶解、配合する場合には
、これらの樹脂がアクリル活性を有する樹脂であるため
、混合時の温度は100 ℃以下、好ましくは80℃に
する必要がある。さらに、この場合には、N −メトキ
シメチル化ナイロン及び/又はウレタンアクリレートの
溶解性、使用時の粘度、ゲル化などを考慮すれば、N
−メトキシメチル化ナイロン及び/又はウレタンアクリ
レートの含有量が、硬化被包層の重量の30%以下、好
ましくは3 〜30重量%であるのが実用上好適な濃度
である。[0018] Furthermore, when dissolving and blending N-methoxymethylated nylon and/or urethane acrylate with 2-hydroxyethyl (meth)acrylate, since these resins have acrylic activity, The temperature must be below 100°C, preferably 80°C. Furthermore, in this case, considering the solubility, viscosity during use, gelation, etc. of N-methoxymethylated nylon and/or urethane acrylate,
- A practically suitable concentration is such that the content of methoxymethylated nylon and/or urethane acrylate is 30% or less, preferably 3 to 30% by weight, of the weight of the cured encapsulation layer.
【0019】一方、最終調製物の柔軟性と耐水性が求め
られる場合には、さらに2 −ヒドロキシ−3 −フェ
ノキシプロピルアクリレート、フェノキシアクリレート
、ジメチルアミノエチルアクリレート、ポリエチレング
リコールメタアクリレート、エポキシアクリレートから
成るグループから選択した1種若しくは2種以上の樹脂
を適宜添加することも可能である。On the other hand, when flexibility and water resistance of the final preparation are required, a group consisting of 2-hydroxy-3-phenoxypropyl acrylate, phenoxy acrylate, dimethylaminoethyl acrylate, polyethylene glycol methacrylate, and epoxy acrylate may be used. It is also possible to appropriately add one or more resins selected from the following.
【0020】また、その他には、天然高分子のアクリレ
ート、例えば、セルローズアクリレート、サッカロース
アクリレートなどを必要に応じて適宜配合することも可
能である。[0020] In addition, natural polymer acrylates such as cellulose acrylate and sucrose acrylate may be appropriately blended as required.
【0021】さらに、樹脂の混合を容易にするために、
水、アルコール類、油脂類、無機物、染料、顔料などを
添加することも可能である。Furthermore, in order to facilitate mixing of the resins,
It is also possible to add water, alcohols, oils and fats, inorganic substances, dyes, pigments, etc.
【0022】このように配合調製したものに、一般に使
用されている重合開始剤、例えばベンゾインエチルエー
テルを約1 %添加する。そして、微生物菌体固定化ゲ
ルを被包するには、ゲル体の表面にこの合成高分子組成
物を塗布、流延し、活性光を照射してアクリル系樹脂を
光硬化して固定化するか、又は合成高分子組成物の樹脂
の中に微生物菌体固定化ゲルを埋め込んだ後、光硬化す
る。この場合、光硬化の時間、波長などの諸条件は、樹
脂の種類、配合割合などにより左右されるが、重要なこ
とは、微生物を固定化したゲル体の温度が50℃以上に
ならないように慎重に選択することが必要である。To the mixture thus prepared is added a commonly used polymerization initiator such as benzoin ethyl ether in an amount of about 1%. Then, in order to encapsulate the microbial cell immobilization gel, this synthetic polymer composition is applied and cast on the surface of the gel body, and the acrylic resin is photocured and immobilized by irradiation with active light. Alternatively, the microbial cell-immobilized gel is embedded in a resin of a synthetic polymer composition and then photocured. In this case, various conditions such as photocuring time and wavelength depend on the type of resin and blending ratio, but the important thing is to ensure that the temperature of the gel body with immobilized microorganisms does not exceed 50°C. It is necessary to choose carefully.
【0023】具体的には、ガラス板の上に流延し、光硬
化して固定化する方法の他( 図2)、ガラス板の代わ
りに、半円球、スパイラル状などの型中に、合成高分子
組成物を流し込み光硬化すれば、任意の形状、例えば円
球状(図3)に本発明の固定化微生物菌体を含む調製物
を調製することが可能である。Specifically, in addition to the method of casting on a glass plate and fixing it by photocuring (Fig. 2), in place of the glass plate, in a mold such as a semicircular sphere or a spiral shape, By pouring the synthetic polymer composition and photocuring it, it is possible to prepare a preparation containing the immobilized microbial cells of the present invention in any desired shape, such as a spherical shape (FIG. 3).
【0024】実施例2 固定化微生物菌体を含む調製
物の調製( 微生物含有ゲル層を被包する硬化被包層の
形成)
10 gのN −メトキシメチル化ナイロンを、40
gの2 −ヒドロキシエチル( メタ) アクリレート
に、予め80℃で溶解し、50 gのジメチルアミノエ
チルアクリレートを加えて混合し、重合開始剤として1
g のベンゾインエチルエーテルを添加混合して感光
性樹脂を調製した。この樹脂を、厚さ2 mmのガラス
板の上に0.2 mmの厚さに流延して、上下から10
分間、近紫外線照射( 中心波長350 nm)して重
合固化せしめた。Example 2 Preparation of a preparation containing immobilized microbial cells (formation of a hardened encapsulant layer enclosing the microorganism-containing gel layer) 10 g of N-methoxymethylated nylon was
g of 2-hydroxyethyl (meth)acrylate was dissolved in advance at 80°C, 50 g of dimethylaminoethyl acrylate was added and mixed, and 1.5 g of dimethylaminoethyl acrylate was added as a polymerization initiator.
A photosensitive resin was prepared by adding and mixing g of benzoin ethyl ether. This resin was cast onto a 2 mm thick glass plate to a thickness of 0.2 mm, and 10 mm was cast from the top and bottom.
It was irradiated with near ultraviolet light (center wavelength: 350 nm) for a minute to polymerize and solidify.
【0025】この時、空気に接触する面は重合が妨害さ
れ、表面層は固化せず粘性を保っているので、この上に
、前述の実施例1 で調製した微生物固定化ゲルフィル
ムを並べて置き、さらにこの上に前述の感光性樹脂を
1 mm の厚さに流延した後、樹脂表面に透明のポリ
エステルフィルム(0.1mm の厚さ) を重ね、上
下から10分間、近紫外線照射( 中心波長 350
nm)して重合固化せしめて光硬化を完了した。[0025] At this time, polymerization is hindered on the surface that comes into contact with air, and the surface layer remains viscous without solidifying, so the microorganism-immobilized gel film prepared in Example 1 above is placed on top of this. , and then apply the aforementioned photosensitive resin on top of this.
After casting to a thickness of 1 mm, a transparent polyester film (0.1 mm thick) was placed on the resin surface, and near-UV irradiation (center wavelength 350 nm) was applied from the top and bottom for 10 minutes.
nm) to polymerize and solidify to complete photocuring.
【0026】実施例3 固定化微生物菌体を含む調製
物の活性
次に、前述の実施例2で調製した固定化微生物菌体を含
む調製物を、微生物固定化ゲルフィルムが切口から露出
しないように、直径5 cmの円盤状に切り取ったもの
を5 枚使用し、アセトンを0.5 %、0.005
%の酵母エキス (Difco 社製) を含む水溶液
100 ml に入れ(pH 6.5)、25℃で7
日間振盪培養(92 回/min, 振幅 6cm)
して、アセトンの消滅、固定化物の性状などの変化を
測定した。
その結果を下記の表1 に示した。Example 3 Activity of a preparation containing immobilized microbial cells Next, the preparation containing immobilized microbial cells prepared in Example 2 above was tested so that the microorganism-immobilized gel film would not be exposed through the cut. For this, use 5 discs cut out with a diameter of 5 cm, and add 0.5% acetone and 0.005% acetone.
% of yeast extract (manufactured by Difco) (pH 6.5) and incubated at 25°C.
Shaking culture for days (92 times/min, amplitude 6cm)
Then, the disappearance of acetone and changes in the properties of the immobilized product were measured. The results are shown in Table 1 below.
【0027】[0027]
【表1】[Table 1]
【0028】この表1から明らかなように、アセトンは
時間の経過とともに完全に消滅した。また、固定化物は
使用の前後に剥離、崩壊などの変化は見られず、繰り返
し再利用することができ、その場合にも活性の低下は殆
ど見られなかった。As is clear from Table 1, acetone completely disappeared over time. In addition, the immobilized product did not show any peeling, collapse, or other changes before and after use, and could be repeatedly reused, with almost no decrease in activity observed.
【0029】実施例4
20 gのウレタンアクリレート、30 gの2 −ヒ
ドロキシエチル( メタ) アクリレート、50 gの
ジメチルアミノエチルアクリレートを、80℃で攪拌溶
解混合し、重合開始剤として1 g の2 −ヒドロキ
シ−2 −エチル−1 −フェニル−1 −オンを添加
混合して感光性樹脂液を調製した。
この樹脂液を、厚さ0.1 mmのポリエステルフィル
ムの上に0.2 mmの厚さになるように流延して、こ
れをガラス板上に載せ、上下から 5分間、近紫外線照
射( 中心波長 350 nm)して、ポリエステル面
側を固化せしめ、重合固化せしめた。Example 4 20 g of urethane acrylate, 30 g of 2-hydroxyethyl (meth)acrylate, and 50 g of dimethylaminoethyl acrylate were dissolved and mixed with stirring at 80°C, and 1 g of 2-hydroxyethyl acrylate was added as a polymerization initiator. Hydroxy-2-ethyl-1-phenyl-1-one was added and mixed to prepare a photosensitive resin liquid. This resin liquid was cast onto a 0.1 mm thick polyester film to a thickness of 0.2 mm, placed on a glass plate, and irradiated with near ultraviolet light (from the top and bottom) for 5 minutes. (center wavelength 350 nm), and the polyester side was solidified to polymerize and solidify.
【0030】この上に、前述の実施例1 で調製した微
生物固定化ゲルフィルムを並べて置き、さらにこの上に
前述の感光性樹脂を 1 mm の厚さに流延した後、
樹脂表面に透明のポリエステルフィルム(0.1 mm
の厚さ) を重ね、上下から10分間、近紫外線照射
( 中心波長 350 nm)して重合固化せしめて光
硬化を完了した。The microorganism-immobilized gel film prepared in Example 1 above was placed on top of this, and the photosensitive resin described above was cast onto this to a thickness of 1 mm.
Transparent polyester film (0.1 mm) on the resin surface
(thickness of 350 nm) and irradiated with near ultraviolet rays (center wavelength 350 nm) from the top and bottom for 10 minutes to polymerize and solidify, completing photocuring.
【0031】次に、微生物固定化ゲルフィルムが切口か
ら露出しないように、直径5 cmの円盤状に切り取っ
たものを5 枚使用し、アセトンを0.5 %、0.0
05 %の酵母エキス(Difco 社製) を含む水
溶液 100 ml に入れ(pH 6.5)、25℃
で7 日間振盪培養(92 回/min, 振幅 6c
m) して、アセトンの消滅、固定化物の性状などの変
化を測定した。その結果を下記の表2 に示した。[0031] Next, in order to prevent the microorganism-immobilized gel film from being exposed from the cut end, five disk-shaped sheets with a diameter of 5 cm were used, and acetone was added at 0.5% and 0.0%.
Pour into 100 ml of an aqueous solution containing 0.5% yeast extract (manufactured by Difco) (pH 6.5) and store at 25°C.
Shaking culture for 7 days (92 times/min, amplitude 6c)
m) The disappearance of acetone and changes in the properties of the immobilized product were measured. The results are shown in Table 2 below.
【0032】[0032]
【表2】[Table 2]
【0033】この表2から明らかなように、アセトンは
時間の経過とともに完全に消滅した。また、固定化物は
使用の前後に剥離、崩壊などの変化は見られず、繰り返
し再利用することができ、その場合にも活性の低下は殆
ど見られなかった。As is clear from Table 2, acetone completely disappeared with the passage of time. In addition, the immobilized product did not show any peeling, collapse, or other changes before and after use, and could be repeatedly reused, with almost no decrease in activity observed.
【0034】実施例5
20 gのウレタンアクリレート、30 gの2 −ヒ
ドロキシエチル( メタ) アクリレート、50 gの
ジメチルアミノエチルアクリレートを、80℃で攪拌溶
解混合し、重合開始剤として1 g の2 −ヒドロキ
シ−2 −エチル−1 −フェニル−1 −オンを添加
混合して感光性樹脂液を調製した。
この樹脂液を、厚さ0.1 mmのポリエステルフィル
ムの上に0.2 mmの厚さになるように流延して、こ
れをのガラス板上に載せ、上下から 5分間、近紫外線
照射( 中心波長 350 nm)して、ポリエステル
面側を固化せしめ、重合固化せしめた。Example 5 20 g of urethane acrylate, 30 g of 2-hydroxyethyl (meth)acrylate, and 50 g of dimethylaminoethyl acrylate were dissolved and mixed with stirring at 80°C, and 1 g of 2-hydroxyethyl acrylate was added as a polymerization initiator. Hydroxy-2-ethyl-1-phenyl-1-one was added and mixed to prepare a photosensitive resin liquid. This resin liquid was cast onto a 0.1 mm thick polyester film to a thickness of 0.2 mm, placed on a glass plate, and irradiated with near ultraviolet rays from the top and bottom for 5 minutes. (center wavelength 350 nm) to solidify the polyester surface side and polymerize and solidify.
【0035】この上に、前述の実施例1 で調製した微
生物固定化ゲルフィルムを並べて置き、さらにこの上に
前述の感光性樹脂を 1 mm の厚さに流延した後、
樹脂表面に透明のポリエステルフィルム(0.1 mm
の厚さ) を重ね、上下から10分間、近紫外線照射
( 中心波長 350 nm)して重合固化せしめて光
硬化を完了した。The microorganism-immobilized gel film prepared in Example 1 above was placed on top of this, and the photosensitive resin described above was cast onto it to a thickness of 1 mm.
Transparent polyester film (0.1 mm) on the resin surface
(thickness of 350 nm) and irradiated with near ultraviolet rays (center wavelength 350 nm) from the top and bottom for 10 minutes to polymerize and solidify, completing photocuring.
【0036】次に、、微生物固定化ゲルフィルムが切口
から露出しないように、直径5 cmの円盤状に切り取
ったものを5 枚使用し、アセトンを0.5 %、0.
005 %の酵母エキス (Difco 社製) を含
む水溶液 100 ml に入れ(pH 6.5)、2
5℃で7 日間振盪培養(92 回/min, 振幅
6cm) して、アセトンの消滅、固定化物の性状など
の変化を測定した。その結果を下記の表3に示した。Next, in order to prevent the microorganism-immobilized gel film from being exposed from the cut end, five discs each having a diameter of 5 cm were cut out and treated with 0.5% acetone and 0.5% acetone.
0.005% yeast extract (manufactured by Difco) (pH 6.5), and
Shaking culture at 5℃ for 7 days (92 times/min, amplitude
6 cm) to measure the disappearance of acetone and changes in the properties of the immobilized product. The results are shown in Table 3 below.
【0037】[0037]
【表3】[Table 3]
【0038】この表3から明らかなように、アセトンは
時間の経過とともに完全に消滅した。また、固定化物は
使用の前後に剥離、崩壊などの変化は見られず、繰り返
し再利用することができ、その場合にも活性の低下は殆
ど見られなかった。As is clear from Table 3, acetone completely disappeared over time. In addition, the immobilized product did not show any peeling, collapse, or other changes before and after use, and could be repeatedly reused, with almost no decrease in activity observed.
【0039】比較例1 従来の調製物の特性実験1従
来の通常の包括固定化操作による固定化物の特性を調べ
るために、固定化物の作成を実施した。すなわち、合成
高分子としてN −メトキシメチル化ナイロン20%と
2 −ヒドロキシエチル( メタ) アクリレート80
%の混合物(80℃で攪拌溶解混合)に、2 −ヒドロ
キシ−3 −フェノキシプロピルアクリレートを当量加
えて混合し、ベンゾインエチルエーテルを1 %添加し
て調製した樹脂(A) を調製した。次に、5%アルギ
ン酸ナトリウム水溶液1 重量部に対して、この樹脂(
A) をそれぞれ、1.25倍、2.0 倍、3.5
倍、8.0 倍の割合で加えて混合し、これを0.1M
の塩化カルシウム水溶液へ滴下して、球状にゲル化さ
せた後、ただちに10分間近紫外線照射( 中心波長
350 nm)して光硬化して球体を調製した。その結
果を下記の表4に示した。Comparative Example 1 Properties of Conventional Preparation Experiment 1 In order to examine the properties of an immobilized product obtained by a conventional general comprehensive immobilization operation, an immobilized product was prepared. That is, 20% N-methoxymethylated nylon and 80% 2-hydroxyethyl (meth)acrylate were used as synthetic polymers.
Resin (A) was prepared by adding and mixing an equivalent amount of 2-hydroxy-3-phenoxypropyl acrylate to a mixture of 1% (dissolved and stirred at 80°C) and 1% of benzoin ethyl ether. Next, this resin (
A) 1.25 times, 2.0 times, 3.5 times, respectively.
Add and mix at a ratio of 0.1M and 8.0x.
After dropping it into a calcium chloride aqueous solution to gel it into a spherical shape, it was immediately irradiated with near ultraviolet light for 10 minutes (center wavelength
Spheres were prepared by photocuring (350 nm). The results are shown in Table 4 below.
【0040】[0040]
【表4】[Table 4]
【0041】この表から明らかなように、アルギン酸ナ
トリウムの割合が多くなると樹脂(A) はその内部が
不均一になり、逆に樹脂(A) の量が多くなると硬化
( ゲル化) しにくくなった。また、水や培地に浸漬
するとどのような混合比でも崩壊した。As is clear from this table, as the proportion of sodium alginate increases, the interior of the resin (A) becomes non-uniform, and conversely, as the amount of resin (A) increases, it becomes difficult to harden (gel). Ta. Moreover, when immersed in water or culture medium, it collapsed regardless of the mixing ratio.
【0042】比較例2 従来の調製物の特性実験2微
生物菌体を含まない以外は実施例1の操作と同様にして
、天然高分子としてアルギン酸カルシウムのゲル体(B
) を調製してシート状としたものを、上記(A)の樹
脂を実施例2の操作と同様にシート状とし光硬化したも
のの上に置き、その上に樹脂(A) を流して10分間
近紫外線照射( 中心波長 350 nm)して光硬化
し、図1に示したような3 層からなるシートを作成し
、このシートの特性を調べるために、アセトンを0.5
%、0.005 %の酵母エキス (Difco 社
製) を含む生理食塩水に浸漬して種々の実験を実施し
た。その結果を下記の表5に示した。Comparative Example 2 Characteristic Experiment 2 of Conventional Preparation The procedure was the same as in Example 1 except that no microbial cells were included, and calcium alginate gel (B) was used as the natural polymer.
) was prepared in the form of a sheet and placed on top of the resin (A) which had been photocured into a sheet in the same manner as in Example 2, and the resin (A) was poured over it for 10 minutes. The material was photocured by near-field ultraviolet irradiation (center wavelength 350 nm) to create a sheet consisting of three layers as shown in Figure 1. In order to investigate the properties of this sheet, 0.5% of acetone was added.
% and 0.005% of yeast extract (manufactured by Difco). The results are shown in Table 5 below.
【0043】この表から明らかなように、水や培地に浸
漬すると、(B) 層に溶出や崩壊があり、各層の剥離
が発生した。As is clear from this table, when immersed in water or a medium, layer (B) elutes and collapses, and each layer peels off.
【0044】比較例3 本発明による調製物の特性実
験微生物菌体を含まない以外は実施例1の操作と同様に
して、天然高分子としてアルギン酸カルシウムのゲル体
(B) を調製してシート状としたものを、上記(A)
の樹脂を実施例2の操作と同様にシート状とし光硬化し
たものの上に置き、その上に樹脂(A) を流して被覆
し、10分間近紫外線照射( 中心波長 350 nm
)して光硬化して(B) のシートの切断面が露出して
いないもの、すなわちゲル体(B)が全て樹脂(A)
で被覆されているものを作成し(図2)、この特性を調
べるために比較例2と同様に種々の実験を実施した。そ
の結果を下記の表5に示した。Comparative Example 3 Characteristic experiment of the preparation according to the present invention A gel body (B) of calcium alginate as a natural polymer was prepared in the same manner as in Example 1 except that it did not contain microbial cells, and was shaped into a sheet. The above (A)
Resin (A) was formed into a sheet in the same manner as in Example 2, placed on top of the photocured material, poured resin (A) on top to cover it, and irradiated with near ultraviolet light (center wavelength 350 nm) for 10 minutes.
) and photocuring, the cut surface of the sheet (B) is not exposed, that is, the gel body (B) is completely resin (A).
(FIG. 2), and various experiments were conducted in the same manner as in Comparative Example 2 to examine the characteristics. The results are shown in Table 5 below.
【0045】[0045]
【表5】[Table 5]
【0046】この表から明らかなように、水や培地に浸
漬しても、(B) 層に溶出や変形、崩壊が一切発生し
なかった。As is clear from this table, no elution, deformation, or collapse occurred in layer (B) even when immersed in water or medium.
【0047】このように、比較例1及び比較例2の従来
の包括固定化による場合には、微生物菌体を含有固定化
すべき(B) 層に溶出や崩壊があり、各層の剥離が発
生し、使用に耐え得ないものであるのに対して、比較例
3に示されたように、本発明による固定化調製物では、
微生物菌体を含有固定化すべき(B) 層が、光硬化さ
れた(A) 層で全体が被包(保護)されているので、
溶出や崩壊が起こることがなく、本発明の方法、調製物
が微生物固定化物として有効であることがわかる。[0047] As described above, in the case of conventional comprehensive immobilization in Comparative Examples 1 and 2, the layer (B) containing microbial cells and to be immobilized may elute or disintegrate, and peeling of each layer may occur. , which is unacceptable for use, whereas in the immobilized preparation according to the invention, as shown in Comparative Example 3,
Since the (B) layer containing microbial cells and to be immobilized is entirely encapsulated (protected) by the light-cured (A) layer,
It can be seen that the method and preparation of the present invention are effective as a microorganism immobilized product without elution or disintegration.
【0048】[0048]
【作用・効果】本発明による固定化微生物菌体を含む調
製物及びその製造方法によれば、広範な化学物質などに
対する安定性、汚染微生物に対する安全性、十分な機械
的強度などを有し、しかも毒性が問題とならず、簡単に
調製でき、さらには、繰り返し、長期使用に耐え得る固
定化微生物菌体を含む調製物及びその製造方法を提供す
ることができる。具体的には、(1) ゲル内の微生物
菌体がゲルを被包している合成高分子に保護されている
ので、処理装置内に組み込んだ場合の苛酷な条件の下に
おいても、長期にわたり活性を維持することが可能で、
環境汚染物質の処理、生体触媒として使用する物質変換
など、工業的用途に対して極めて有効である。[Operation/Effect] According to the preparation containing immobilized microbial cells and the method for producing the same according to the present invention, it has stability against a wide range of chemical substances, safety against contaminating microorganisms, sufficient mechanical strength, etc. Moreover, it is possible to provide a preparation containing immobilized microbial cells that does not pose a problem of toxicity, can be easily prepared, and can withstand repeated and long-term use, and a method for producing the same. Specifically, (1) the microorganisms inside the gel are protected by the synthetic polymer that encapsulates the gel, so it will last for a long time even under harsh conditions when installed in a processing device. It is possible to maintain activity,
It is extremely effective for industrial applications such as the treatment of environmental pollutants and the conversion of substances used as biocatalysts.
【0049】(2) 被包に使用する合成高分子がアク
ロイル基を有するので、短時間の処理で光硬化でき、温
度変化は殆どなく、固定化すべき微生物への影響がない
。(2) Since the synthetic polymer used for encapsulation has an acroyl group, it can be photocured in a short time, with almost no temperature change, and there is no effect on the microorganisms to be immobilized.
【0050】(3) 微生物菌体の固定化ゲル層を被包
する合成高分子物質として、N −メトキシメチル化ナ
イロンを含有しているため、ゲルを圧縮することなく被
包できるので、ゲル内の微生物が安定で、固定化物の外
部から被処理物質である汚染物質や原料が容易に滲入し
、反応後の生成物を速やかにゲル外へ浸出して系外へ移
動することができるので極めて有効である。(3) Immobilization of microbial cells Since N-methoxymethylated nylon is contained as a synthetic polymer material for encapsulating the gel layer, it is possible to encapsulate the gel without compressing it. The microorganisms in the gel are stable, contaminants and raw materials to be treated can easily seep in from the outside of the immobilized material, and the products after reaction can quickly leach out of the gel and move out of the system. It is valid.
【0051】(4) さらに、被包硬化する合成高分子
の組成物を適宜選択して添加することにより、比重を調
整できるので、装置内への組み込み、処理環境に応じた
対応が可能となる。などの幾多の作用・効果を奏する極
めて優れた発明である。(4) Furthermore, the specific gravity can be adjusted by appropriately selecting and adding a synthetic polymer composition that is encapsulated and hardened, making it possible to incorporate it into the equipment and adapt it to the processing environment. . This is an extremely excellent invention that has numerous functions and effects such as.
【図1】従来の固定化物の拡大断面図である。FIG. 1 is an enlarged cross-sectional view of a conventional immobilized product.
【図2】本発明の固定化物の一実施例の拡大断面図であ
る。FIG. 2 is an enlarged cross-sectional view of one embodiment of the immobilized product of the present invention.
【図3】本発明の固定化物の別の一実施例の拡大断面図
である。FIG. 3 is an enlarged sectional view of another embodiment of the immobilized product of the present invention.
A…硬化被覆層 B…微生物固定化ゲル層 A...cured coating layer B...Gel layer with immobilized microorganisms
Claims (13)
ゲルを主成分とする微生物含有ゲル層と、合成高分子を
主成分とする組成物からなり、前記微生物含有ゲル層を
被包し硬化された硬化被包層から構成され、前記硬化被
包層が前記微生物含有ゲル層全体を被包して、該ゲル層
の露出部分が存在しないように構成されることを特徴と
する固定化微生物菌体を含む調製物。Claim 1: A microorganism-containing gel layer consisting of a natural polymer gel containing immobilized microbial cells as a main component, and a composition containing a synthetic polymer as a main component, which encapsulates and hardens the microorganism-containing gel layer. An immobilized microorganism, characterized in that the hardened enveloping layer is configured to enclose the entire microorganism-containing gel layer so that no exposed portion of the gel layer is present. Preparation containing bacterial cells.
する合成高分子を主体としたものであることを特徴とす
る請求項1に記載の固定化微生物菌体を含む調製物。2. The preparation containing immobilized microbial cells according to claim 1, wherein the synthetic polymer is mainly a synthetic polymer having an acroyl group.
チル化ナイロン及び/又はウレタンアクリレートと、2
−ヒドロキシエチル( メタ) アクリレートの混合
物を含有することを特徴とする請求項1又は2に記載の
固定化微生物菌体を含む調製物。3. The synthetic polymer comprises N-methoxymethylated nylon and/or urethane acrylate;
A preparation containing immobilized microbial cells according to claim 1 or 2, characterized in that it contains a mixture of -hydroxyethyl (meth)acrylate.
及び/又はウレタンアクリレートの含有量が、前記硬化
被包層の重量の3 〜30重量%であることを特徴とす
る請求項3に記載の固定化微生物菌体を含む調製物。4. Immobilization according to claim 3, characterized in that the content of the N-methoxymethylated nylon and/or urethane acrylate is 3 to 30% by weight of the weight of the cured encapsulation layer. A preparation containing microbial cells.
ロキシ−3 −フェノキシプロピルアクリレート、フェ
ノキシアクリレート、ジメチルアミノエチルアクリレー
ト、ポリエチレングリコールメタアクリレート、エポキ
シアクリレートから成るグループから選択した1種若し
くは2種以上の合成樹脂を含有することを特徴とする請
求項3又は4のいずれか1項に記載の固定化微生物菌体
を含む調製物。5. The synthetic polymer further comprises one or more selected from the group consisting of 2-hydroxy-3-phenoxypropyl acrylate, phenoxy acrylate, dimethylaminoethyl acrylate, polyethylene glycol methacrylate, and epoxy acrylate. The preparation containing immobilized microbial cells according to claim 3 or 4, characterized in that it contains a synthetic resin.
が、さらに、セルロースアクリレート、サッカロースア
クリレートなどの天然高分子を含有することを特徴とす
る請求項1から5のいずれか1項に記載の固定化微生物
菌体を含む調製物。6. The composition according to claim 1, wherein the composition containing a synthetic polymer as a main component further contains a natural polymer such as cellulose acrylate or sucrose acrylate. A preparation containing immobilized microbial cells.
方法であって、下記の工程、すなわち、(1) 微
生物菌体を、天然高分子ゲルを主成分とする組成物中に
、含有固定化して微生物含有ゲル層を調製する工程、(
2) 合成高分子を主成分とする組成物によって、
前記微生物含有ゲル層を被包し、前記合成高分子を主成
分とする組成物を硬化させ、硬化被包層を形成せしめる
工程、とからなることを特徴とする固定化微生物菌体を
含む調製物の製造方法。7. A method for producing a preparation containing immobilized microbial cells, comprising the following steps: (1) containing microbial cells in a composition containing a natural polymer gel as a main component; Step of immobilizing and preparing a microorganism-containing gel layer (
2) By using a composition whose main component is a synthetic polymer,
A preparation containing immobilized microorganism cells, comprising the steps of encapsulating the microorganism-containing gel layer and curing the composition containing the synthetic polymer as a main component to form a cured encapsulation layer. How things are manufactured.
する合成高分子を主体としたものであることを特徴とす
る請求項7に記載の固定化微生物菌体を含む調製物の製
造方法。8. The method for producing a preparation containing immobilized microbial cells according to claim 7, wherein the synthetic polymer is mainly a synthetic polymer having an acroyl group.
チル化ナイロン及び/又はウレタンアクリレートと、2
−ヒドロキシエチル( メタ) アクリレートの混合
物を含有することを特徴とする請求項7又は8に記載の
固定化微生物菌体を含む調製物の製造方法。9. The synthetic polymer comprises N-methoxymethylated nylon and/or urethane acrylate;
A method for producing a preparation containing immobilized microbial cells according to claim 7 or 8, characterized in that it contains a mixture of -hydroxyethyl (meth)acrylate.
ン及び/又はウレタンアクリレートの含有量が、前記硬
化被包層の重量の3 〜30重量%であることを特徴と
する請求項9に記載の固定化微生物菌体を含む調製物の
製造方法。10. Immobilization according to claim 9, characterized in that the content of the N-methoxymethylated nylon and/or urethane acrylate is 3 to 30% by weight of the weight of the cured encapsulation layer. A method for producing a preparation containing microbial cells.
ドロキシ−3 −フェノキシプロピルアクリレート、フ
ェノキシアクリレート、ジメチルアミノエチルアクリレ
ート、ポリエチレングリコールメタアクリレート、エポ
キシアクリレートから成るグループから選択した1種若
しくは2種以上の合成樹脂を含有することを特徴とする
請求項9又は10のいずれか1項にに記載の固定化微生
物菌体を含む調製物の製造方法。11. The synthetic polymer further comprises one or more selected from the group consisting of 2-hydroxy-3-phenoxypropyl acrylate, phenoxy acrylate, dimethylaminoethyl acrylate, polyethylene glycol methacrylate, and epoxy acrylate. 11. A method for producing a preparation containing immobilized microbial cells according to claim 9 or 10, characterized in that it contains a synthetic resin.
物が、さらに、セルロースアクリレート、サッカロース
アクリレートなどの天然高分子を含有することを特徴と
する請求項7から11のいずれか1項に記載の固定化微
生物菌体を含む調製物。12. The composition according to claim 7, wherein the composition containing a synthetic polymer as a main component further contains a natural polymer such as cellulose acrylate or sucrose acrylate. A preparation containing immobilized microbial cells.
物の硬化が、光硬化によって行われることを特徴とする
請求項7から12のいずれかに記載の固定化微生物菌体
を含む調製物の製造方法。13. The preparation containing immobilized microbial cells according to claim 7, wherein the composition containing the synthetic polymer as a main component is cured by photocuring. manufacturing method.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP04664791A JP3207447B2 (en) | 1991-03-12 | 1991-03-12 | Preparation containing immobilized microbial cells and method for producing the same |
Applications Claiming Priority (1)
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Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
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JPH04281789A true JPH04281789A (en) | 1992-10-07 |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20200115263A1 (en) * | 2017-07-06 | 2020-04-16 | Hohai University | Nanometer photocatalyst-microbe composite multilayer light transmission combination carrier |
-
1991
- 1991-03-12 JP JP04664791A patent/JP3207447B2/en not_active Expired - Fee Related
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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US20200115263A1 (en) * | 2017-07-06 | 2020-04-16 | Hohai University | Nanometer photocatalyst-microbe composite multilayer light transmission combination carrier |
US10889517B2 (en) * | 2017-07-06 | 2021-01-12 | Hohai University | Nanometer photocatalyst-microbe composite multilayer light transmission combination carrier |
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