JPH04270225A - 悪液質の治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、マクロファージコロニ
ー刺激因子（以下Ｍ−ＣＳＦと略する。）を投与するこ
とによって、患者、特にヒトの悪液質（ｃａｃｈｅｘｉ
ａ）を治療する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】悪液質、即ち哺乳類を苦しめる潜在的な
致命的な症候群（ｓｙｎｄｒｏｍｅ）は、しばしば感染
、炎症及び癌の治療を複雑にする。それは、体の脂肪（
ｆａｔ　、ａｄｉｐｏｓｅ）及び筋肉（蛋白質）の消耗
によって引き起こされる大いなる体重の減少によって、
特徴付けられる。トレイシーら（Ｔｒａｃｅｙ　ｅｔ　
ａｌ）（Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６７巻、１２
１１〜１２２７頁（１９８８年３月））、ローソンら（
Ｌａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ）（Ａｎｎ．　Ｒｅｖ．　Ｎ
ｕｔｒ．，　　２：２７７〜３０１頁（１９８２年））
。悪液質において、食欲不振（Ａｎｏｒｅｘｉａ）、貧
血（ａｎｅｍｉａ）及び衰弱（ｗｅａｋｎｅｓｓ）もま
た起こる場合がある。トレイシーら、前述の文献参照。 悪液質は更に、グルコースレベルの低下（低血糖症）及
びトリグリセリドレベルの上昇（高トリグリセリド血症
）によって、特徴付けられる。

【０００３】悪液質は、年齢、癌及び寄生虫並びにバク
テリア、カビ、ウィルス、原生動物等の微生物による感
染の様な種々の原因に起因する場合がある。急性及び慢
性感染又は疾患がしばしば悪液質を引き起こす。事実、
大部分の慢性、致命的、非腫瘍性の疾患は、悪液質で終
わる（例えば、慢性播種性感染、又は心臓、肺、肝臓、
腎臓又は小腸の長期の機能不全）。ローソンら（Ｌａｗ
ｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ）（Ａｎｎ．　Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ．
，　　２：２７７〜３０１頁（１９８２年））。更にそ
の症候群は、十分なカロリーの摂取によって緩和されな
い。事実、体重の減少は、十分な食事を消費しても、悪
液質においては続く場合がある。シルバら（Ｓｉｌｖａ
　ｅｔ　ａｌ　）（Ｊ．　Ｇｅｎａｒａｌ　Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ，１３４巻、１６２９〜１６３３頁（１
９８８年））。

【０００４】研究者らは微生物感染及び、トリパノソー
マ症やリーシュマニア症等の寄生虫感染によって誘発さ
れる悪液質を研究してきた。シェリイら（Ｓｈｅｒｒｙ
　ｅｔ　ａｌ）（Ｊ．　Ｃｅｌｌ．　Ｂｉｏｌｏｇｙ，
　１０７巻、１２６９〜１２７７頁（１９８８年１０月
））。微生物感染により誘発される悪液質の研究によっ
て、本症候群は微生物の直接的作用又は微生物によって
産生される毒素に起因する場合があることが、示された
。例えば、マウスにおいて、エンドトキシン、即ちグラ
ム陰性のバクテリア由来のリポポリサッカライドを注射
すると、体重の減少が毒性の発現として観察される。ボ
ーゲルら（Ｖｏｇｅｌ　ｅｔ　ａｌ　）（インフェクシ
ョン　　アンド　　イムニティ（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　
ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ）５６巻、１０号、２６５０
〜２６５７頁（１９８８年１０月））。

【０００５】確かに微生物によって産生される毒素は、
悪液質の研究のためのモデルを創製するために用いられ
てきた。この点に関し、悪液質が、ノカルジアアステロ
イデス（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ　）
から単離された、トレハロースジミコレート（ｔｒｅｈ
ａｌｏｓｅ　ｄｉｍｙｃｏｌａｔｅ、ＴＤＭ）のマウス
への腹腔内注射によって誘発された。シルバら（Ｊ．　
Ｇｅｎａｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１３４巻
、１６２９〜１６３３頁（１９８８年））。研究者は、
コードファクター（ｃｏｒｄ　ｆａｃｔｏｒ）（ＣＦ）
としても知られている、ミコバクテリア由来の毒性のあ
る糖脂質であるＴＤＭが、悪液質を誘発する機構を研究
した。シルバら（インフェクションアンド　　イムニテ
ィ（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ）
５６巻、１２号、３０６７〜３０７１号（１９８８年１
２月））。その研究室では、ＣＦの投与により著しい体
重の減少が観察された。その動物は、ひどく衰弱し、高
トリグリセリド血症、低血糖症及び血漿中での腫瘍壊死
因子の高レベルを示した。デキサメサゾンは、部分的に
ＣＦの悪液質−誘発作用を抑制することが発見された。

【０００６】最近の研究は、悪液質に関する生理学に集
中している。例えば、観察される循環トリグリセリドの
増加は、リポプロテインリパーゼ（ＬＰＬ）の全身的抑
制に起因するとされた。トレイシーら（Ｊ．　Ｅｘｐ．
　Ｍｅｄ．，　１６７巻、１２１１〜１２２７頁（１９
８８年３月））。しかしながら、結腸の移植可能なアデ
ノカルチノーマ（ＭＡＣ１６）は、悪液質の症状を、随
伴する高トリグリセリド血症と共に生じさせることが報
告されている。マホニイら（Ｍａｈｏｎｙ　ｅｔ　ａｌ
）（Ｂｒ．　Ｊ．　Ｃａｎｃｅｒ，５７、３８５〜３８
９頁（１９８８年））。

【０００７】「カケクチン（ｃａｃｈｅｃｔｉｎ　）」
としても知られている腫瘍壊死因子（以下ＴＮＦと略す
る。）（ボートラーら、（Ｂｅｕｔｌｅｒｅｔ　ａｌ　
）（アドヴァンスイス　　インイムノロジー（Ａｄｖａ
ｎｃｅｓｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）４２巻、２１３
〜２３１頁）（１９８８年））が、悪液質における中心
的役割を示す場合があることもまた、示唆されている。 トレイシーら（Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６７巻
、１２１１〜１２２７頁（１９８８年３月））、ミッシ
ーら（Ｍｉｃｈｉｅ　ｅｔ　ａｌ）（サージェリー（Ｓ
ｕｒｇｅｒｙ　）、１０４巻、２号、２８０〜２８６頁
（１９８８年８月））は、ＴＮＦは敗血症（ｓｅｐｓｉ
ｓ）及び内毒素血症と関連した多くの代謝応答を起こす
一次刺激を示す場合があると報告している。

【０００８】しかしながら、ＴＮＦの役割は明らかでは
ない。癌患者における悪液質は、ＴＮＦの存在と関連づ
けられていたが、この因子は悪液質性の癌患者の血清中
に、一様には検出されなかった。シェリイら（Ｓｈｅｒ
ｒｙ　ｅｔ　ａｌ）（Ｔｈｅ　ＦＡＳＥＢ　Ｊ．，　３
巻、１９５６〜１９６２頁（１９８９年６月））。一つ
の研究において、悪液質誘発（ＭＡＣ１６）及び非悪液
質誘発（ＭＡＣ１３）のアデノカルチノーマの双方を用
いて、研究者らは、ＴＮＦによる体重の減少は、癌悪液
質と関連した複雑な代謝変化とは異なる食欲不振作用か
ら起こると、結論づけている。マホニイら（Ｍａｈｏｎ
ｙ　ｅｔ　ａｌ）（Ｂｒ．　Ｊ．　Ｃａｎｃｅｒ，　　
５７、３８５〜３８９頁（１９８８年））。同様に、ウ
ィルス関連悪液質の研究において、持続的にリンパ球性
脈絡髄膜炎ウィルス（ＬＣＭＶ）を感染させたマウスを
用いて、その研究室は観察される２０％以上の悪液質様
体重減少は、測定されうるＴＮＦの増加とは関連がない
らしいと結論づけている。ラースィーら（Ｌａｔｈｅｙ
　ｅｔ　ａｌ）（Ａｍ．　Ｊ．　Ｐａｔｈｏｌ．，１３
２巻、３号、５８６〜５９２頁（１９８８年９月））。

【０００９】悪液質の重大な体重減少及び脂肪なし体重
（ｌｅａｎ　ｂｏｄｙｍａｓｓ）の衰弱性消耗は、しば
しば悪性又は慢性感染で苦しんでいる患者の治療を複雑
にする。確かに、悪液質は癌の死亡率に寄与する。癌患
者の３０％もの多くの患者が、癌の負担よりもむしろ悪
液質で死亡するというデータがある。トレイシーら、前
述の文献参照。ある医学テキストには、次の様に記載さ
れている。

【００１０】「死に至らしめる悪性の最も一般的な態様
は、悪液質、即ち進行性の衰弱、体重減少及び衰弱の進
展である。通常、存在する悪性疾患の量と悪液質のひど
さとの間には密接な相関がある…。この衰弱した状態に
おいて、癌患者は特に、しばしば死を早める、肺炎の様
な末期感染にかかりやすくなる。ブァン　　エイス（ｖ
ａｎＥｙｓ　）（Ａｎｎ．　Ｒｅｖ．　Ｎｕｔｒ．，　
　５、４３５〜４６１頁（１９８５年））（ロビンスの
テキストブック　　オブ　　パソロジー（Ｒｏｂｂｉｎ
ｓ　′Ｔｅｘｔｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　
）の第２版に基づく）。」悪液質のひどさは、腫瘍の大
きさや寄生虫の負荷に無関係の場合があり、わずか０．
０１から５．０％の体重の腫瘍負担（ｔｕｍｏｒ　ｂｕ
ｒｄｅｎ）を有する患者においても、根深い消耗が観察
された。もし、逆転されない場合、悪液質に関係する生
理学的変化は、免疫不全、器官不全及び多発性代謝性異
常に至る。トレイシーら（Ｔｒａｃｅｙ　ｅｔ　ａｌ）
（Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．，　１６７巻、１２１１〜
１２２７頁（１９８８年３月））。テオロギデス（Ｔｈ
ｅｏｌｏｇｉｄｅｓ　）、キャンサー（Ｃａｎｃｅｒ）
、Ｍａｙ　Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、４３巻、２００４−
２０１２頁（１９７９）。

【００１１】悪液質による生理学的変化は、手術後の合
併症の頻度を増大させると共に、化学療法及び放射線療
法に対する患者の耐性を減少させる。放射線障害と共に
化学療法剤によって誘発される悪心、嘔吐及び食欲不振
は、非常に重大なものとなり得る。加えて、化学療法は
、栄養失調の主な因子である。治療はしばしば癌そのも
のと同じ様に衰弱させるものであると理解されている。 栄養失調の患者は、多くの腫瘍学的治療のための安全治
療マージン（ｓａｆｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｍａ
ｒｇｉｎ　）が非常に狭い。ブァン　　エイス（ｖａｎ
Ｅｙｓ　）、前述書参照。

【００１２】更にメジアン生存率（ｍｅｄｉａｎ　ｓｕ
ｒｖｉｖａｌ　）は、審査された腫瘍のほとんどの型に
ついて体重を失った患者において、非常に短いものであ
ることが見出されている。ローソンら（Ｌａｗｓｏｎ　
ｅｔ　ａｌ）（Ａｎｎ．　Ｒｅｖ．　Ｎｕｔｒ．，　　
２：２７７〜３０１頁（１９８２年））。

【００１３】悪液質症候群が患者によっては死を引き起
こし、また他の患者においてもその死に寄与しているで
あろうところの正確な機構は、完全には解明されていな
い。ローソンら（Ｌａｗｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ）（Ａｎｎ
．　Ｒｅｖ．　Ｎｕｔｒ．，　　２：２７７〜３０１頁
（１９８２年））。この様に、ガン及び感染疾患のよう
な病因に起因する悪液質を治療する効果的な方法の探索
が続けられている。

【００１４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、悪液質の治
療剤を提供することを目的とするものである。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明は、悪液質治療に
、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）を有
効量患者に投与する段階を含む悪液質の治療方法を提供
する。

【００１６】また、本発明は、Ｍ−ＣＳＦを含有するこ
とを特徴とする悪液質の治療剤を提供する。

【００１７】本発明は、感染、癌、年齢その他によって
誘発されるすべての形態の悪液質を治療することを目的
としている。

【００１８】本発明の他の目的及び態様は、以下の記載
の中で、一部分明らかにされるだろう。上述の一般的な
記載及び以下の詳細な記載は、例示的でかつ説明的に過
ぎず、本発明を限定するものではない。

【００１９】本発明は、感染、癌、年齢その他によって
おこる悪液質を治療する方法及び治療剤に関する。

【００２０】本発明の方法は、また、悪液質症候群に関
連する全ての症状を治療するために、使用することがで
きる。このように、本発明の方法は、身体の脂肪及び筋
肉の衰弱、高トリグリセリド血症、低血糖症及び食欲不
振による体重減少を軽減し又は完全に除去する為に使用
することができる。加えて、本発明は、生体器官の組織
の損失を防ぐのに使用できる。本発明の方法は、特に癌
又は慢性感染による悪液質を治療するのに有用である。

【００２１】本発明の方法は、例えば、単細胞又は多細
胞の寄生虫、バクテリア、真菌、原生動物又はウィルス
の様な微生物又はこれら微生物の組み合わせによって引
き起こされる、慢性その他の感染の結果として起こる悪
液質を、治療するために使用することができる。例えば
、本発明は以下の微生物の感染による悪液質の治療を目
的としている：グラム陰性又はグラム陽性のバクテリア
による感染、例えば、グラム陽性球菌による感染（肺炎
球菌、ブドウ球菌及び連鎖球菌感染）、グラム陰性球菌
による感染（髄膜炎菌感染）、腸のグラム陰性バチルス
による感染（大腸菌型バクテリア感染、腸チフス、サル
モネラ属感染、赤痢菌属感染、コレラ）、ミコバクテリ
ウム属、ヘモフィルス属のグループのバクテリアによる
感染（百日咳、インフルエンザバチルス感染）、結核感
染、真菌感染（カンジダ）、スピロヘータ及びリケッチ
ア感染、ウィルス（インフルエンザ、肝炎、センダイ、
ヘルペス）感染及び原生動物門による感染（マラリア、
リーシュマニア症）。

【００２２】本発明の方法は、癌に起因する悪液質の治
療にもまた有用である。ＴＮＦ又は非ＴＮＦ産生腫瘍に
起因する悪液質の治療は、本発明の範囲内のものである
。このように、例えば、カルチノーマ（ｃａｒｃｉｎｏ
ｍａｓ）又は白血病によって産生されるすべての形態の
悪液質は、本発明の方法によって治療できる。本発明に
よる方法は、衰弱や他の生理学的変化の様な悪液質の症
状を軽減又は完全に除去する。この治療は患者を、化学
療法又は放射線療法により耐容性があるようにし、患者
の総体的な予後及び生活の質を改善する。

【００２３】本明細書において、本発明の「Ｍ−ＣＳＦ
」という用語は、コロニー刺激因子の特殊な型に関する
。コロニー刺激因子は、造血細胞の産生を調節する糖蛋
白質である。少なくとも４種のコロニー刺激因子が、造
血の前駆体から顆粒細胞及び／又はマクロファージへの
増殖と分化をコントロールする。

【００２４】マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−Ｃ
ＳＦ。ＣＳＦ−１としても知られている。）は、選択的
に単核食細胞系列細胞（ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｐｈ
ａｇｏｃｙｔｅ　ｌｉｎｅａｇｅ　ｃｅｌｌｓ　）の生
存、増殖及び分化を刺激する。これまでの研究によって
、Ｍ−ＣＳＦがまた抗菌活性（ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　
ａｃｔｉｖｉｔｙ　）及びリンホカイン−誘導の殺腫瘍
性活性の様な成熟単核細胞（ｍｏｎｏｃｙｔｅ）のエフ
ェクター（ｅｆｆｅｃｔｏｒ）機能を刺激することが明
らかになった。スタンリー　　イー．アール．及びグル
バート　　エル．ティー．（Ｓｔａｎｌｅｙ　Ｅ．Ｒ．
　ａｎｄ　Ｇｕｌｂｅｒｔ　Ｌ．Ｔ．　）（コロニー刺
激因子「ＣＳＦ−１」の精製、アッセイ、特性及びター
ゲット細胞結合の方法（Ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ
　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，　Ａｓｓａｙ，　Ｃｈａ
ｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔａｒｇｅｔ　
Ｃｅｌｌ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　ｏｆ　Ｃｏｌｏｎｙ−Ｓｔ
ｉｍｕｌａｔｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ　［ＣＳＦ−１　］
））（Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　Ｍｅｔｈｏｄｓ
　４２：２５３−２８４　頁（１９８１年））；カルバ
ッシイ　　エー．ら（Ｋａｒｂａｓｓｉ，　Ａ．，　ｅ
ｔａｌ．，　）（マクロファージコロニー刺激因子で処
理されたネズミ（ｍｕｒｉｎｅ）マクロファージによる
カンジダアルビカンスの促進された死滅：増加されたマ
ンノースレセプターの発現の証拠（Ｅｎｈａｎｃｅｄ　
Ｋｉｌｌｉｎｇ　ｏｆ　Ｃａｎｄｉｄａ　Ａｌｂｉｃａ
ｎｓ　ｂｙ　Ｍｕｒｉｎｅ　Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　
Ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ　Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　Ｃｏ
ｌｏｎｙ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ：Ｅ
ｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒＡｕｇｍｅｎｔｅｄ　Ｅｘｐｒ
ｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｍａｎｎｏｓｅ　Ｒｅｃｅｐｔｏ
ｒｓ））（Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１３９：４１
７〜４２１頁（１９８７年））；メトカルフ　　ディ．
（Ｍｅｔｃａｌｆ，　Ｄ．　）（顆粒細胞マクロファー
ジコロニー刺激因子の分子生物学及び機能（Ｔｈｅ　Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｆｕｎｃ
ｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ　
Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　Ｃｏｌｏｎｙ−Ｓｔｉｍｕｌａ
ｔｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒｓ））（ブラッド（Ｂｌｏｏｄ
　）、６７：２５７頁（１９８６年））及びラルフ　　
ピー．及びナコインツ　　アイ．（Ｒａｌｐｈ　Ｐ．　
ａｎｄ　Ｎａｋｏｉｎｚ，　Ｉ．，　）（成長及び分化
因子ＣＳＦ−１によるマクロファージ殺腫瘍性活性の刺
激（Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｐｈａ
ｇｅ　Ｔｕｍｏｒｉｃｉｄａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｂ
ｙ　Ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔ
ｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒ　ＣＳＦ−１　）、セルラー　　
イムノロジー（Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ　）、１０５：２７０〜２７９頁（１９８７年））。

【００２５】本発明の方法は、完全な全Ｍ−ＣＳＦ（ｗ
ｈｏｌｅ　ｉｎｔａｃｔ　Ｍ−ＣＳＦ　）及び標準的な
生化学的又は組換え技術によって切形され（ｔｒｕｎｃ
ａｔｅｄ　）又は他の変化を受けたＭ−ＣＳＦを含む、
任意の及び全ての形態のＭ−ＣＳＦの使用を包含するも
のである。ヒトコロニー刺激因子類（Ｈｕｍａｎ　Ｃｏ
ｌｏｎｙ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒｓ）
）なる名称のタカハシ．エム（Ｔａｋａｈａｓｈｉ．Ｍ
　）らによる１９８９年２月１日出願の米国特許出願第
０７／３０４６９２号参照。該出願の内容は、参照する
ことによりここに引用加入される。尚該出願に対応する
ものとして、特開平２−２３９１号がある。悪液質の所
望の緩和及び全体的な除去を与えるものであれば、いか
なる形態のＭ−ＣＳＦであっても本発明で使用できる。 この様にＭ−ＣＳＦは、天然のＭ−ＣＳＦ、又は例えば
ヨーロッパ特許公開第２６１５９２号及び第３２８０１
６号、及び米国特許第４８６８１１９号に記載された組
換えＭ−ＣＳＦ及びその誘導体を指すものである。Ｍ−
ＣＳＦは、ヒト由来のもの又は他の哺乳類由来であって
もよいが、好ましくは、ヒト由来のものが良い。

【００２６】本発明の方法にしたがって患者に投与する
場合、Ｍ−ＣＳＦはそのままで、或いは有効な量のＭ−
ＣＳＦ及び１種又は２種以上の薬理学的に許容される無
毒性の担体、希釈剤又は補助剤を含有する薬理組成物と
して投与される。そのような組成物は、例えば、溶液、
懸濁液及び乳液製剤等の液体製剤の形態にある。またそ
の様な組成物は、固体製剤であっても又は使用するため
に適当な担体を添加することによって液体に再構成され
る固体製剤であっても良い。

【００２７】薬学的な担体としては、水及び落花生油、
ダイズ油、鉱油（ｍｉｎｅｒａｌ　ｏｉｌ　）、ゴマ油
の様な鉱油、動物油、植物油、合成油等の油のような無
菌の液体が例示できる。水は、本薬理組成物を静脈内投
与する時、特に好ましい担体である。食塩水及び水溶性
ブドウ糖（ｄｅｘｔｒｏｓｅ）及びグリセロール溶液も
また、液体担体、特に注射用溶液のために使用すること
ができる。適当な薬学的賦形剤としては、でんぷん、グ
ルコース、ラクトース、シュクロース、ゼラチン、麦芽
、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、炭酸マグネシウム、
ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、
モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウ
ム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリ
コール、水、エタノール等を挙げることができる。本発
明のこれら組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプ
セル、粉末、持続性放出形態等の形を取ることができる
。適当な薬学的担体としては、イー．ダブリュー．マー
ティン（Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ）による「レミングトン
の薬学科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ　′ｓ　Ｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）」中に記載されて
いる。Ｍ−ＣＳＦはリポソームとの集合体（ａｇｇｒｅ
ｇａｔｅ）、例えば、同時係属中の１９９０年４月６日
出願のギデオン　　ストラスマン（Ｇｉｄｅｏｎ　Ｓｔ
ｒａｓｓｍａｎｎ　）による米国特許出願第０７／５０
５５８４号に開示されているリポソーム結合Ｍ−ＣＳＦ
組成物として投与することができる。該出願は参照して
ここに引用加入する。尚、該出願に対応する日本出願は
、特開平３−３４９２０号である。

【００２８】Ｍ−ＣＳＦは、経口、静脈内、皮下、皮内
、又は筋内のように、当業者に知られている方法に従っ
て、適当な形態で投与することができる。皮下注射と同
様に腹腔内注射が、投与方法として好ましい。

【００２９】特に本発明の方法に従って、悪液質の発病
又は悪液質を発生させる因子への暴露の前又は後に、Ｍ
−ＣＳＦを投与することが好ましい。

【００３０】当業者であれば、本発明の目的を達成する
ために有効なＭ−ＣＳＦの投与量を決定することができ
る。選択される投与量は、悪液質に関連する症状を緩和
または完全に除去するものである。治療のための適当な
投与量の決定は、当業者によって通例的になされ、過度
の実験なく当業者によって通例的になされる一連の作業
の範囲内にある。任意の形態で投与されるＭ−ＣＳＦの
量は、特に制限されるものではないが、患者の年齢、性
別、病気の程度などに従って、適宜決定することができ
、Ｍ−ＣＳＦは、例えば蛋白質量としてのＭ−ＣＳＦの
量基準で、約０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ／日の投与量
で、投与することができる。この投与量は、毎日単回で
または複数に分けて投与することもできる。

【００３１】「患者」という用語は、本明細書では、ヒ
ト及び他の哺乳類、例えば犬、猫、モルモット、マウス
、ラットの様な実験動物を含む哺乳類を意味する最も広
い意味で使用されている。

【００３２】本発明は、更に以下の実施例によって例示
されるが、それらは単に本発明を例証するものであって
、本発明を限定するものではない。

【００３３】

【実施例】Ａ．マクロファージコロニー刺激因子の製造
以下にＭ−ＣＳＦの製造方法を示す。Ｍ−ＣＳＦは、大
腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ．）中で発現したヒトの切形された
Ｍ−ＣＳＦの復元（ｒｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）及び精
製によって得られる。

【００３４】（１）構築及び発現 切形された形態（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ　ｆｏｒｍ）のヒ
トＭ−ＣＳＦの発現を、２種のシストロン（ｃｉｓｔｒ
ｏｎｉｃ　）発現システムを用いて行った。５５４アミ
ノ酸のＭ−ＣＳＦ前駆体のＮ末端の１８５アミノ酸残基
をコードする、ｐｃＤｈＭＣＳＦ１１−１８５と名付け
られたＣＯＳ発現プラスミドをＳｃａＩ及びＢａｍＨＩ
制限酵素で消化した。得られたフラグメント（約４５０
ｂｐ）を、内部ＳＤ配列、第１のシストロンのための終
止コドン及び第２のシストロンのための開始コドンを保
持する合成リンカーに結合させる。結合したフラグメン
トを、ｐｒｅｐＩＬ−２Ｄ８のＸｂａＩ及びＢａｍＨＩ
部位間に挿入した。Ｍ−ＣＳＦの１５１アミノ酸配列を
コードする得られたプラスミド、ｐｔｒｐＩＬ−２Ｘ　
　Ｍ−ＣＳＦ１０１を、塩化カルシウム法によって大腸
菌内に導入して形質転換した。このような組換え技術は
、同時係属中のタカハシ　　エム（Ｔａｋａｈａｓｈｉ
，　Ｍ．　）らの１９８９年２月１日出願の、米国特許
出願第０７／３０４６９２号（発明の名称、ヒトコロニ
ー刺激因子類（Ｈｕｍａｎ　Ｃｏｌｏｎｙ−Ｓｔｉｍｕ
ｌａｔｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒｓ））に記載されている。

【００３５】（２）復元 形質転換された大腸菌細胞を、アンピシリンを含む補充
されたＭ９培地中で振盪した。該細胞をハーベストし、
ペレットとした後、トリトンＸ−１００で洗浄した。最
終のペレットは、切形されたＭ−ＣＳＦを含有する封入
体（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎｂｏｄｙ）を含んでいた。該ペ
レットを、７．０Ｍ塩酸グアニジン及び２５ｍＭ　　２
−メルカプトエタノール中で室温で４時間撹拌すること
により可溶化させた。その可溶化したペレットを、グル
タチオン溶液（５０ｍＭ　　トリス塩酸、ｐＨ８．５中
に、０．５ｍＭの還元された及び０．１ｍＭの酸化され
たグルタチオン及び２．０Ｍ尿素含有）２０００ｍｌに
激しく撹拌しながら滴下した。この溶液を４℃で４８時
間維持した。

【００３６】１０ｍｌの復元溶液（ｒｅｎａｔｕｒｅｄ
　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を、アミコンのメンブランで５０
０μｌに濃縮し、溶液を、事前に０．３Ｍ塩化ナトリウ
ム含有４０ｍＭリン酸ナトリウム，ｐＨ６．８にて平衡
化したショーデックスＷＳ−８０３（Ｓｈｏｄｅｘ　Ｗ
Ｓ−８０３　）カラムに、アプライし、流速０．７ｍｌ
／分でゲル濾過ＨＰＬＣを行った。画分を集め、Ｍ−Ｃ
ＳＦ活性をアッセイした。

【００３７】（３）精製 復元溶液を遠心分離し、上清を、事前に５０ｍＭ　　ト
リス塩酸、ｐＨ８．５にて平衡化したファルマシア（Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ　）−ＬＫＢ社のＱＡＥ−ＺｅＴＡ　
　Ｐｒｅｐカートリッジ１００にアプライし、０．５Ｍ
　　塩化ナトリウム含有５０ｍＭトリス塩酸、ｐＨ８．
５にて溶出した。

【００３８】硫酸アンモニウム沈殿の後、上清を、事前
に飽和硫酸アンモニウム溶液を含む４０ｍＭ　　リン酸
ナトリウム、ｐＨ７．４にて平衡化したＴＳＫ−ｇｅｌ
　　フェニル−５ＰＷ（Ｐｈｅｎｙｌ−５ＰＷ）ＨＰＬ
Ｃ　　カラム（トーソー、２１．５ｘ１５００ｍｍ）に
アプライした。活性フラグメントは、６−３％硫酸アン
モニウムで得られ、濃縮後４０ｍＭ　　リン酸ナトリウ
ム、ｐＨ７．４に対して交換（ｅｘｃｈａｎｇｅ）した
。

【００３９】濃縮された試料を、事前に４０ｍＭ　　リ
ン酸ナトリウム、ｐＨ７．４にて平衡化したＴＳＫ−ｇ
ｅｌ　　ＤＥＡＥ　　５ＰＷ　　カラム（トーソー、２
１．５ｘ１５０ｍｍ）にアプライし、流速３ｍｌ／分に
て、ＮａＣｌのグラジエントで溶出した。

【００４０】Ｂ．実験手法 下記の手法を、以下の実験１〜４において使用した。

【００４１】（ｉ）マウス：Ｃ５７ＢＬ／６の平均体重
１８−２０ｇｍの、病原体フリーの雌マウスを用いた。

【００４２】（ｉｉ）エンドトキシン誘発悪液質シグマ
社製（Ｃａｔ．＃Ｌ−２８８０）リポポリサッカライド
（ＬＰＳ）、大腸菌セロタイプ０５５：Ｂ５を使用した
。ＬＰＳ　　１０μｇをリン酸緩衝生理食塩水（以下Ｐ
ＢＳと略する）（ｐＨ７．４）にて希釈し、腹腔内（以
下ＩＰと略する）に注射した。（ボーゲルら（Ｖｏｇｅ
ｌ　ｅｔ　ａｌ　）（インフェクション　　アンドイム
ニティ（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔ
ｙ）５６巻、１０号、２６５０〜２６５７頁（１９８８
年１０月））参照）。

【００４３】（ｉｉｉ）トレハロース　　６，６−ジベ
ヘネート（ＴＤＢ）−誘発悪液質 ＴＤＢ（シグマ　　Ｃａｔ　　＃Ｔ−２２６８）は、ミ
コバクテリア−由来トレハロース　　ジミコレート（コ
ードファクター−完全フロインドアジュバントの活性コ
ンポーネント）の合成アナログである（レッツィンジャ
ーら（Ｒｅｔｚｉｎｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，　）ジャー
ナル　　オブ　　バイオロジカル　　ケミストリー（Ｊ
．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　）２５６巻、８２０８
〜８２１６頁（１９８１年８月１０日）参照）。 ＴＤＢをクロロホルム：メタノール（９：１）に溶解し
、窒素気流下で乾燥させ、軽油中で可溶化させた。その
後、混合物を、回転（ｖｏｒｔｅｘ）し、バスソニケー
ター（ラバラトリーサプライズ　　カンパニー、ヒック
スビル、ニューヨーク、３００ワット（Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ　Ｓｕｐｐｌｉｅｓ　Ｃｏ．，Ｈｉｃｋｓｖｉｌ
ｌｅ，　Ｎ．Ｙ．，　３００ｗａｔｔｓ　））中で１０
分間超音波処理を行った。超音波処理直後に、０．１ｍ
ｌの鉱油中に入れた１５μｇのＴＤＢをＩＰ注射した（
シルバら（Ｓｉｌｖａ　ｅｔ　ａｌ　）（Ｊ．　Ｇｅｎ
ａｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１３４巻、１６
２９〜１６３３頁（１９８８年））。マウスの体重を、
最初及び注射から２４時間の間をおいて測定した。

【００４４】（ｉｖ）グルコース測定 血液をレトロバイタル　　プレクサス（ｒｅｔｒｏｂｉ
ｔａｌ　ｐｌｅｘｕｓ　）から抜き、血清を遠心分離に
よって得た。１０μｌの血清をグルコースレベルを調べ
るために、エクタケム（Ｅｋｔａｃｈｅｍ）　　ＤＴ−
６０自動分析機（イーストマンコダック（Ｅａｓｔｍａ
ｎ　Ｋｏｄａｋ　））にて分析した。

【００４５】実験１．ＴＤＢ−誘発悪液質に対するＭ−
ＣＳＦの効果 Ｉ．プロトコール

【００４６】

【表１】

【００４７】−１日に、Ｃ５７ＢＬ／６雌マウスに０．
１ｍｌのＰＢＳ（グループ１及び２）又はＭ−ＣＳＦ（
５０μｇ）を腹腔内に（グループ３）注射した。０日に
、グループ１には０．１ｍｌの鉱油（ｍｉｎｅｒａｌ　
ｏｉｌ　）（Ｍ．Ｏ．ＩＰ）を与え、グループ２及び３
には、１５μｇのトレハロース　　ジベヘネート（ＴＤ
Ｂ）を含有するＭ．Ｏ．を与えた。４時間後にグループ
１及び２にはＰＢＳをＩＰ注射し、他方、グループ３に
は５０μｇのＭ−ＣＳＦを与えた。２日にグルコースレ
ベルを測定した。

【００４８】この様に、グループ１は、コントロール群
であって、これには不活性物質（ＰＢＳ及び鉱油）が投
与され、注射単独の効果を評価するものである。グルー
プ２は、悪液質−誘発剤ＴＤＢを投与された群であり、
ＴＤＢ−誘発悪液質の作用を評価するものである。グル
ープ３は、悪液質−誘発剤ＴＤＢ及び本発明によるＭ−
ＣＳＦで処置された群であり、ＴＤＢ−誘発悪液質の効
果を緩和する点について、Ｍ−ＣＳＦの有効性を評価す
るものである。

【００４９】実験１．ＴＤＢ−誘発悪液質に対するＭ−
ＣＳＦの効果 ＩＩＡ．結果：体重損失

【００５０】

【表２】

【００５１】＊　　１日及び０日でのグループ２の平均
体重間の統計学的な差は、スチューデント　　Ｔ　　テ
ストによってｐ＝０．０２である。

【００５２】＋　　同グループにおいて、前日の平均体
重と統計学的に差がない。

【００５３】カッコ内の数値は、１日及び０日間の平均
体重の変化を示す。

【００５４】上述のデータは、１つのグループの動物（
グループ２）へのＴＤＢの投与によって、平均体重にお
いて統計的に有意な減少が誘発されたことを示しており
、コントロール群（グループ１）ではその様な減少は観
察されなかった。また、このデータは、ＴＤＢ処理動物
（グループ３）へ本発明に従いＭ−ＣＳＦを投与するこ
とにより、ＴＤＢ誘発体重減少が緩和されたことを示し
ている。

【００５５】ＩＩＢ．結果：グルコースレベル

【００５
６】

【表３】

【００５７】＊　　グループ１対グループ２又はグルー
プ２対グループ３の統計学的な差は、ｐ＝０．０２。グ
ループ１対グループ３間では差がない。

【００５８】上述のデータは、ＴＤＢ処理動物（グルー
プ２）では低血糖症が誘発されたが、ＴＤＢ処理動物に
本発明のＭ−ＣＳＦを投与（グループ３）した結果、コ
ントロール群（グループ１）とは、有意差がないグルコ
ースレベルになったことを示している。

【００５９】この実験により、本発明のＭ−ＣＳＦの投
与は、ＴＤＢによって誘発される悪液質に起因する体重
減少及び低血糖症を軽減することが証明される。

【００６０】実験２．ＴＤＢ−誘発悪液質に対するＭ−
ＣＳＦの効果 Ｉ．プロトコール

【００６１】

【表４】

【００６２】−１日に１グループにつき８匹のＣ５７Ｂ
Ｌ／６雌マウスに、ＰＢＳ（０．１ｍｌ）を腹腔内に（
グループ１及び２）、又はｒｈ　　Ｍ−ＣＳＦ（１０μ
ｇ）を腹腔内に（ＩＰ）（グループ３）又は皮下に（Ｓ
Ｃ）（グループ４）、注射した。０日に、マウスに鉱油
（Ｍ．Ｏ．０．１ｍｌ）（グループ１）又は１５μｇの
トレハロース　　ジベヘネート（ＴＤＢ）を含有するＭ
．Ｏ．（グループ２、３及び４）を注射し、続いて４時
間後にＰＢＳ（グループ１及び２）又はＭ−ＣＳＦ（グ
ループ３及び４）を注射した。１日及び２日にＭ−ＣＳ
Ｆ（１０μｇ）（グループ３及び４）又はＰＢＳ（グル
ープ１及び２）を一日２回午前９時と午後５時に注射し
た。体重は毎日午前９時に測定した。３日にマウスを犠
牲にした。

【００６３】このように、グループ１は、コントロール
群であり、不活性物質（ＰＢＳ及び鉱油）が投与され、
注射単独の効果を評価するものである。グループ２は、
悪液質−誘発剤ＴＤＢを投与された群であり、ＴＤＢ−
誘発悪液質の作用を評価するものである。グループ３及
び４は、悪液質−誘発剤ＴＤＢ及び本発明の方法による
Ｍ−ＣＳＦで処置された群であり、ＴＤＢ−誘発悪液質
の作用を緩和する点について、Ｍ−ＣＳＦの有効性を評
価するものである。グループ３及び４は、Ｍ−ＣＳＦを
それぞれ腹腔内及び皮下注射によって投与された群であ
り、これらの投与方法の相対的な有効性を評価するもの
である。

【００６４】実験２．ＴＤＢ−誘発悪液質に対するＭ−
ＣＳＦの効果 ＩＩ．結果

【００６５】

【表５】

【００６６】２日でのグループ２の平均体重は０日での
平均体重と比べ統計学的に差が認められた（スチューデ
ント　　Ｔ　　テストによってｐ＝０．０１）。

【００６７】２日でのグループ３又は４の平均体重と、
０日での各平均体重とは統計学的に差が認められなかっ
た。

【００６８】体重の変化（％）は次式によって計算され
た。

【００６９】 　　［平均体重（Ｘ日）−平均体重（０日）］×１００
／平均体重（０日）上述のデータは、（各動物の体重を
使用することにより計算した）平均体重の減少が、ＴＤ
Ｂ処理動物（グループ２）で誘発されたことを示す。上
述のデータは、また、本発明のＭ−ＣＳＦの投与は、腹
腔内（グループ３）及び皮下（グループ４）によっても
、共にＴＤＢにより誘発された体重減少を軽減すること
を示す。

【００７０】この実験により、本発明のＭ−ＣＳＦの投
与は、ＴＤＢによって誘発される悪液質に起因する体重
減少を軽減することが証明される。

【００７１】実験３．ＬＰＳ−誘発悪液質に対するＭ−
ＣＳＦの効果 Ｉ．プロトコール

【００７２】

【表６】

【００７３】１グループにつき８匹のＣ５７ＢＬ／６雌
マウスに、（ａ）−１日にＰＢＳ（グループ１及び２）
、又はＭ−ＣＳＦ（グループ３及び４）を、（ｂ）０日
に、ＬＰＳ（グループ２、３及び４）又はＰＢＳ（グル
ープ１）を、及び（ｃ）０日に（ｂ）の注射から４時間
後に、ＰＢＳ（グループ１及び２）又はＭ−ＣＳＦ（グ
ループ３及び４）を、注射した。ＬＰＳ注射から２４時
間後に、マウスの体重を測定し、殺した。

【００７４】このように、グループ１は、コントロール
群であり、不活性物質が投与され、注射単独の効果を評
価するものである。グループ２は、悪液質−誘発剤ＬＰ
Ｓを投与された群であり、ＬＰＳ−誘発悪液質の作用を
評価するものである。グループ３及び４は、悪液質−誘
発剤ＬＰＳ及び本発明の方法によるＭ−ＣＳＦで処置さ
れた群であり、ＬＰＳ−誘発悪液質の作用を緩和する点
について、Ｍ−ＣＳＦの有効性を評価するものである。 グループ３及び４は、Ｍ−ＣＳＦをそれぞれ腹腔内（Ｉ
Ｐ）及び皮下（ＳＣ）注射によって投与され、これらの
投与方法の相対的な有効性を評価するものである。

【００７５】次の結果は、各動物群での１日と０日との
間での平均変化を示す。

【００７６】実験３．ＬＰＳ−誘発悪液質に対するＭ−
ＣＳＦの効果 ＩＩ．結果

【００７７】

【表７】

【００７８】＊　　グループ３及び２間の統計学的な差
は、ｐ＝０．０１２である（スチューデント　　Ｔ　　
テスト）。

【００７９】＋　　グループ４及び２間において、統計
学的に差がない。

【００８０】上述のデータは、テストされた動物の平均
体重の減少が、ＬＰＳによって誘発された（グループ２
）ことを示す。上述のデータは、また、ＬＰＳ処理動物
（グループ３）において、本発明のＭ−ＣＳＦの腹腔内
投与が、体重減少及び低血糖症を軽減することを示す。

【００８１】この実験により、本発明のＭ−ＣＳＦの腹
腔内投与は、ＬＰＳによって誘発される悪液質に起因す
る体重減少及び低血糖症を部分的に軽減することが証明
される。

【００８２】実験４：内臓器官に対するＭ−ＣＳＦの効
果 Ｉ．プロトコール 以下の表に示すように、１グループにつき６匹のＣ５７
ＢＬ／６雌マウスに、−１日に及びＬＰＳの注射（０日
に１０μｇ／マウス）から４時間後に、ＰＢＳ又はＭ−
ＣＳＦ１０μｇを注射した。全ての注射はＩＰで行った
。＋１日にマウスを殺し、重量を測定した。

【００８３】このように、グループ１は、悪液質−誘発
剤ＬＰＳを投与された群であり、ＬＰＳ−誘発悪液質の
作用を評価するものである。グループ２は、悪液質−誘
発剤ＬＰＳ及び本発明によるＭ−ＣＳＦで処置された群
であり、ＬＰＳ−誘発悪液質の作用を緩和する点につい
て、Ｍ−ＣＳＦの効果を評価するものである。

【００８４】実験４：内臓器官に対するＭ−ＣＳＦの効
果 ＩＩ．結果

【００８５】

【表８】

【００８６】

【表９】

【００８７】上述のデータは、ＬＰＳ処理動物に本発明
のＭ−ＣＳＦを投与すると（グループ２）、Ｍ−ＣＳＦ
を投与しなかったＬＰＳ処理動物に比べ、全体の体重減
少が軽減されたことを示す。上述のデータは、また、Ｍ
−ＣＳＦの投与は、ＬＰＳ処理動物（グループ２）の心
臓及び脾臓中の組織の減少を、Ｍ−ＣＳＦを投与しなか
ったＬＰＳ処理動物（グループ１）に比べ、軽減するこ
とを示す。

【００８８】この実験により、本発明のＭ−ＣＳＦの投
与は、オーバーオールの体重の減少を緩和するばかりで
なく、ＬＰＳ誘発悪液質に起因する心臓及び脾臓の組織
重量の減少を、軽減することが証明される。

【００８９】本発明の他の態様は、明細書の考察および
ここに記載の本発明の実施から、当業者に明らかであろ
う。明細書及び実施例は、単に例示として考えられるべ
きであって、本発明の本来の範囲及び精神は、特許請求
の範囲によって明確にされる。

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　有効な量のマクロファージコロニー刺
   激因子（Ｍ−ＣＳＦ）を含むことを特徴とする悪液質の
   治療剤。
2. 【請求項２】　　該悪液質が、１種又は２種以上の微生
   物による感染の結果であることを特徴とする請求項１に
   記載の治療剤。
3. 【請求項３】　　該悪液質が、バクテリアによる感染の
   結果であることを特徴とする請求項２に記載の治療剤。
4. 【請求項４】　　該悪液質が、グラム陽性バクテリアに
   よる感染の結果であることを特徴とする請求項３に記載
   の治療剤。
5. 【請求項５】　　該悪液質が、グラム陰性バクテリアに
   よる感染の結果であることを特徴とする請求項３に記載
   の治療剤。
6. 【請求項６】　　該悪液質が、ウィルスによる感染の結
   果であることを特徴とする請求項２に記載の治療剤。
7. 【請求項７】　　該悪液質が、原生動物による感染の結
   果であることを特徴とする請求項２に記載の治療剤。
8. 【請求項８】　　該悪液質が、真菌による感染の結果で
   あることを特徴とする請求項２に記載の治療剤。
9. 【請求項９】　　該悪液質が、寄生虫による感染の結果
   であることを特徴とする請求項１に記載の治療剤。
10. 【請求項１０】　　該悪液質が、１種又は複数の形態の
    癌の結果であることを特徴とする請求項１に記載の治療
    剤。
11. 【請求項１１】　　該Ｍ−ＣＳＦが、全部の、インタク
    トなＭ−ＣＳＦであることを特徴とする請求項１に記載
    の治療剤。
12. 【請求項１２】　　該Ｍ−ＣＳＦが、切形されたＭ−Ｃ
    ＳＦであることを特徴とする請求項１に記載の治療剤。
13. 【請求項１３】　　該Ｍ−ＣＳＦが、リポソームとの集
    合体の形態にあることを特徴とする請求項１に記載の治
    療剤。