JPH04252128A - 免疫化された宿主における変性された異種移植器官系 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】技術分野 本発明の分野は異種移植組織を含んで成る免疫化された
哺乳類及び非レトロウィルス病原性物質とのそれらの使
用である。

【０００２】背景 ヒトの処置のための医学の分野は、大部分、関与する組
織が動物組織である動物モデルに依存して来た。これら
のモデルは、ヒト及び他の哺乳類宿主を含む広い宿主範
囲を有する病原性物質、ヒトに病気を引き起こすことが
できる病原性物質に類似する、動物モデルに病気を引き
起こすことができる病原性物質又はヒトにおける病気に
病因学的に及び症候学的に類似する動物における病気を
引き起こすことができる病原性物質及び同様のものを時
々包含する。これらの技法に関して多くの欠点が存在す
る。病原体に関与する細胞及び組織はヒト組織でなく、
そしてそれらはヒト組織の応答とそれらの応答において
広範囲の種類の態様で異なるので、動物細胞がヒトにお
いて予測され得る適切な予測体を提供するかどうかに関
して常に不確定である。また、多くの遺伝的な病気に関
して、動物における同じ病変がヒトにおいて有意に異な
った効果を有するかも知れない。

【０００３】骨髄、たとえば支質内皮細胞、リンパ球及
び骨髄細胞及び同様のもの内で、ヒト細胞が種々の刺激
にいかに応答するか、異なったタイプの細胞がいかに相
互作用するかを理解することにも興味が存在する。

【０００４】動物モデルにおいて生存ヒト組織を有する
ことは多くの利点を提供する。細胞及び組織の増殖にお
ける種々の段階で組織に対する種々の薬物の効果を研究
することができる。さらに、組織に対する細胞及び分泌
された物質の相互作用、及び種々の組織と細胞の代謝の
フィードバック及び調節との間の伝達を研究することが
できる。重要なことには、天然及び合成の種々の物質を
宿主に導入し、組織に対するその物質の効果、その代謝
；増殖及び分化を測定することができる。さらに、試薬
、たとえば病原体及び薬物の組合せを使用し、組織に対
する病原体の効果及び病原体及び組織に対する薬物の効
果を決定することができる。

【０００５】従って、長時間生存したまま存続し、種々
の物質に応答性であり、そして組織における変化、病気
の病因学及び予防及び治療のために病原体及び組織に対
する薬物の効果の研究を可能にする技法の使用を可能に
するヒト組織を含んで成る哺乳類モデルを開発し、そし
て供給することに実質的な興味が存在する。従って、生
理学的及び病理生理学的条件及びそのような条件を変え
ることができる物質の研究を可能にする動物モデルの必
要性が存在する。

【０００６】関連文献 免疫不全宿主、特にＣＩＤ又はＳＣＩＤ宿主に関する文
献は、ＭｃＧｕｉｒｅなど．，Ｃｌｉｎ．　Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈ．　（１９７５
）　３：　５５５〜５６６　；　Ｐｅｒｒｙｍａｎ及び
Ｔｏｒｂｅｃｋ，Ｊ．　Ａｍ．　Ｖｅｔ．　Ｍｅｄ．　
Ａｓｓｏｃ．　（１９８０）　１７６：１２５０〜１２
５１；Ｓｈｕｌｔｚ及びＳｉｄｍａｎ，　Ｇｅｎｅｔｉ
ｃａｌｌｙｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　Ｍｕｒｉｎｅ　Ｍｏ
ｄｅｌｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，
　Ｔｈｅ　Ｊａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，　
Ｂａｒ　Ｈａｒｂｏｒ，　ＭＥ　；　Ｂｏｓｍａ　など
．，Ｎａｔｕｒｅ　（１９８３）　３０１　：　５２７
〜５３０　；　Ｃｕｓｔｅｒなど．，Ａｍｅｒ．　Ｊ．
　Ｐａｔｈ．　（１９８５）　１２０　：　４６４〜４
７７　；　Ｄｏｒｓｈｋｉｎｄ　など．，Ｊ．　ｏｆ　
Ｉｍｍｕｎｏｌ．　（１９８５）　１３４　：３７９８
〜３８０１　；　Ｋｅｒｇｈｔｌｅｙなど．，Ｌａｎｃ
ｅｔ，　１１月１日，１９７５，　８５０〜８５３　；
　Ｔｏｕｒａｉｎｅ，　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　
Ｒｅｖ．　（１９８３）　７１　：　１０３〜１２１　
；　及びＦｕｌｏｐ及びＰｈｉｌｌｙｅｓ，　Ｊ．　ｏ
ｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　（１９８６）　１３６　：
４４３８〜４４４３．　を包含する。

【０００７】生存宿主内で増殖する異種移植細胞に関す
る文献は、Ｋｒｕｅｇｅｒ　など．，Ｐｒｏｃ．　Ｎａ
ｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ　（１９８３）
　８０：１６５０〜１６５４　；　Ｋｒｕｅｇｅｒ及び
Ｓｈｅｌｂｙ，　Ｊ．　Ｉｎｖ．　Ｄｅｒｍａｔｏｌ．
（１９８１）　７６　：　５０６〜５１０　；　Ｗａｒ
ｅなど．，Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　Ｍｅｔｈ．（１９
８５）　８５　：３５３〜３６１　；　Ｆｏｒｄなど．
，Ｎａｔｕｒｅ　（１９５６）　１７７　：　４５２〜
４５４　；　Ｐｏｖｌｓｅｎ，など．，Ｎａｔｕｒｅ　
（１９７４）　２４８　：　２４７〜２４９　；　Ｍａ
ｎｎｈａｒｄ　ｆなど．，Ｔｈｙｍｕｓ　（１９８２）
　４　：　２０９〜２２０　；　Ｓｃｈｕｌｔｅ−Ｗｉ
ｓｓｅｒｍａｎ　など．，Ｓｃａｎｄ．　Ｊ．　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．　（１９７８）　８　：　３８７〜３９６　
を包含する。特に、ＭｃＣｕｎｅなど．，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ　（１９８８）　２４１：１６３２〜１６３９及びそ
れらの中のコメント；Ｙａｍｃｏｐｏｕｌｏｓ　及びＡ
ｌｔ，前記　（１９８８）　２４１　：１５８１〜１５
８３を注目すべきであり、そしてこれらは引用により本
明細書に組込まれる。また、ＥＰＡ０３２２２４０も参
照のこと。

【０００８】発明の要約 細胞及び／又は組織応答が、物質及び／又は予防及び治
療条件の効能を決定し、そして種々の物質及び条件への
細胞及び組織の応答を研究するために評価され得る条件
下でそれらの細胞及び／又は組織応答を開始するための
方法、非ヒト哺乳類及び器官が供給される。非ヒト哺乳
類は、器官又はそれが由来する組織（この組織は血管化
され、そして適切な場合、リンパ管に連結される）とし
て少なくとも一部機能することができる生存する異種移
植器官又は組織を有し、そして免疫化されていることに
よって特徴づけられる。

【０００９】特定の態様の記載 方法、組成物及び生物が提供され、ここで前記生物は、
固体組織が生存し、機能し、そして種々の刺激に応答す
ることができる非ヒト生存宿主において固体異種移植組
織、通常ヒト組織を有することにより特徴づけられ、そ
して前記応答の分析及び種々の生理学的工程の研究を可
能にする。

【００１０】固体移植物は、長期間、普通２週間以上、
より普通には４週間以上機能し、そして特定の移植物、
移植物の部位及び組織に依存し、ここで前記組織は種々
の細胞、たとえば造血、基質、肺、繊維芽、上皮、内皮
、神経、幹細胞又は特定の固体器官、たとえば骨髄、膵
臓、虫垂、扁桃、腸、肺、ＧＡＬＴ（腸関連のリンパ組
織）、ＭＡＬＴ（粘膜関連のリンパ組織）、舌、粘膜組
織、副腎、胸腺、肝臓、中枢神経系組織、脊髄、甲状腺
、下垂体、視床下部、骨、たとえば破骨細胞及び骨芽細
胞、筋肉、たとえば筋芽細胞、筋細胞、神経組織及び同
様のものに関連する他の細胞を包含する。

【００１１】造血に関連する器官及び細胞の中には、幹
細胞（種々のヒト造血系のための前駆体細胞、たとえば
リンパ様、骨髄性単球及び赤血球細胞）及び処理器官、
たとえば胸腺、骨髄、膵臓、リンパ節、扁桃、虫垂及び
皮膚を提供する細胞が存在する。造血システムに関連す
る対象の細胞は、幹細胞、基質細胞、単球、マクロファ
ージ、Ｂ−細胞、Ｔ−細胞、神経向性細胞、赤血球、好
酸球、巨核球、血小板、歯細胞、天然のキラー細胞、細
胞毒性Ｔ−リンパ球（ＣＴＬ）、腫瘍−浸潤リンパ球（
ＴＩＬ）、ヘルパー細胞（ＣＤ４）、サプレッサー細胞
（ＣＤ８）、リンパ球活性化キラー細胞（ＬＡＫ）、抗
体依存性細胞毒性細胞（ＡＤＣＣ）及び同様のものを包
含する。

【００１２】広範囲の種類の組織が使用され、そして対
象の宿主において増殖することができる。さらに、それ
らの組織は、病気の誘発を受けやすく又はそれらの疾病
形に利用できる。そのような組織に関連する種々の病理
学的条件を有する対象の組織の列挙を下記に提供する。

【００１３】 　　　　組　　織　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　病　　理　　学　　的　　条　　件　　
結合組織　　　　　　　　　　リウマチ性熱、全身性エ
リテ・マトーデス、リウマチ様関節　　　　　　　　　
　　　　　　　　　炎、痛風脳（神経）組織　　　　麻
痺、アルズハイマー病、多発性硬化症、Ｌｏｕ　Ｇｅｈ
ｒｉｇ病、糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　原
病、脳炎滑膜組織　　　　　　　　　　リウマチ様関節
炎呼吸組織　　　　　　　　　　気腫、水腫、　Ｇｏｏ
ｄｐａｓｔｕｒｅ症候群、サーコイドーシス肝臓　　　
　　　　　　　　　　　硬変、ウィルソン病、　Ｐｏｍ
ｐｅ病、　Ｆｏｒｋｅ病、肝炎、一次胆汁　　　　　　
　　　　　　　　　　　　性肝硬変、α１　−抗トリプ
シン病、血色症、糖原病腎臓　　　　　　　　　　　　
　　糸球体腎炎、腎盂腎炎、狼瘡腎炎、アシドーシス、
ケトアシ　　　　　　　　　　　　　　　　　　ドーシ
ス、腎疾患、シスチン尿症甲状腺　　　　　　　　　　
　　甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、　Ｇｒａｖ
ｅ症、甲状腺腫　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ症腸　　　　　　　　　　　　　
　　　ペプシン潰瘍、胃又は十二指腸、憩室症、炎症性
腸疾患皮膚　　　　　　　　　　　　　　潰瘍、壊疸、
乾癬、エリテマトーデス症候群、天疱瘡、類天　　　　
　　　　　　　　　　　　　　疱瘡リンパ節　　　　　
　　　　　リンパ節疾患、リンパ腫血管　　　　　　　
　　　　　　　脈管炎、　Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症、巨
細胞脈管炎、結節性多発性動　　　　　　　　　　　　
　　　　　　脈炎膵臓　　　　　　　　　　　　　　糖
尿病、膵臓炎胸　　　　　　　　　　　　　　　　一次
又は二次癌腫松果腺　　　　　　　　　　　　概日リズ
ム前立腺　　　　　　　　　　　　栄養過度、ＣＡ精巣
　　　　　　　　　　　　　　性機能低下症卵巣　　　
　　　　　　　　　　　Ｔｕｒｎｅｒ症候群、　Ｓｔｅ
ｉｎ−Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ症候群、ノウ腫網内　　　　
　　　　　　　　　　　Ｇａｕｃｈｅｒ病、　Ｌｅｔｔ
ｅｒｅｒ−Ｓｉｗｅ病胃　　　　　　　　　　　　　　
　　ペプシン潰瘍、悪性貧血症、潰瘍性大腸炎唾液腺　
　　　　　　　　　　　Ｓｊｏｅｇｒｅｎ病筋肉　　　
　　　　　　　　　　　重症筋無力症、多発性筋炎、筋
ジストロフィー甲状腺旁　　　　　　　　　　一次上皮
小体低下症副腎　　　　　　　　　　　　　　アジソン
病、　Ｃｕｓｈｉｎｇ病、Ｃｏｎｎ病

【００１４】他の
状況においては、種々の感染物質の病因及び／又は病気
の誘発又は進行に対する種々の薬物又は処置の効果を研
究することが興味の対象である。興味ある感染物質及び
これらの種々の感染物質の研究に適用できる組織の列挙
が下記に示される。これらの列挙は、１つの組織が特定
の物質に関連して他の組織よりも好ましいであろうこと
を示すものである。さらに、そのような感染された組織
の利用可能性、宿主における組織の生存性のレベル及び
同様のもののために、列挙されない組織が使用される情
況が存在する。

【００１５】 　　　　感染物質　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　ヒ　　ト　　組　　織　　
グラム陰性細菌　　　　　　　　　　　　　　　　肺、
腎臓、心筋層、毛細管（内皮）肺炎球菌　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　肺（肺胞壁）、気管ブ
ドウ球菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　外
皮、長骨、内皮、心筋層、肝臓、脾臓、脳連鎖球菌　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　咽頭、粘膜
組織、扁桃、皮膚、腔髄膜炎菌　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　咽頭、粘膜組織淋菌　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　尿道、外
陰腸グラム陰性バチラス　　　　　　　　　　肺Ｅ．コ
リ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　尿道
、虫垂、粘膜組織クリブシエラ−エンテ ロバクター−セラチア　　　　　　　　　　肺、咽頭、
尿道プロテウス　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　皮膚、骨、尿道プスードモナス　　　　　　　　　
　　　　　　　皮膚、尿道、肺サルモネラ　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　腸、脾臓シゲラ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　腸ヘモフィ
リス　　　　　　　　　　　　　　　　　　粘膜組織、
咽頭、扁桃エルジニア　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　リンパ節リステリア　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　皮膚、肝臓、脾臓、副腎コリネバク
テリウム　　　　　　　　　　　　膜、粘膜組織、扁桃
、咽頭ビブリオ（コレラ）　　　　　　　　　　　　粘
膜組織、腸クロストリジウム　　　　　　　　　　　　
　　皮膚（ラタナス） クロストリジウム　　　　　　　　　　　　　　膜、粘
膜組織（ボツリズム） マイコバクテリウム　　　　　　　　　　　　肺、リン
パ節（ツベルクロシス） マイコバクテリウム　　　　　　　　　　　　皮膚、神
経、呼吸粘膜（レプロシイ） トレポネマ（シフィリス）　　　　　　粘膜組織ヒスト
プラズマ　　　　　　　　　　　　　　　　皮膚、肺カ
ンジダ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
粘膜組織マイコプラズマ　　　　　　　　　　　　　　
　　気管支、咽頭、気管、粘膜組織クラミジア　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　結膜、角膜ウィルス 　　腸ウィルス：　　　　　　　　　　　　　　　　筋
肉、内臓、腎臓、粘膜組織　　　　Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ
，Ｅｃｈｏ，Ｒｅｏ　　呼吸ウィルス：　　　　　　　
　　　　　　　粘膜組織、気管支、咽頭　　　　Ｒｈｉ
ｎｏ，　ａｄｏｎｏ，　　　　　ＲＳＶ，パラインフル
エンザ，　　　　コロナ 　　インフルエンザウィルス　　　　　　呼吸組織、粘
膜組織　　ピコルナ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　咽頭、腸　　（ポリオマイエリティス） 　　ラブボウィルス（ラビエス）　　筋肉、神経組織、
脳　　スローウィルス　　　　　　　　　　　　　　脳
　　ミアスレス（ルベオラ）　　　　　　結膜、粘膜　
　ルベラ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　咽頭、粘膜組織　　スモールポックス　　　　　　　
　　　　　咽頭、粘膜組織　　ヘルペス： 　　　　ゾスター　　　　　　　　　　　　　　　　　
　咽頭、粘膜組織　　　　シンプレックスＩ及びＩＩ　
　　　呼吸組織、結膜、唇、神経節、脳　　ＥＢＶ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　リンパ節、
胸腺、脾臓　　マンプス　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　リンパ節、粘膜組織、髄膜　　（パラマイ
クソウィルス） 　　サイトメガロウィルス　　　　　　　　リンパ節、
胸腺、骨髄、上皮組織

【００１６】研究され得るウィル
スの種類の中には、ピコルナウィルス（ｐｉｃｏｒｎａ
ｖｉｒｕｓ）、エンテロウィルス（ｅｎｔｅｒｏｖｉｒ
ｕｓ）　、ライノウィルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、
肝炎ウィルス、カリシウィルス（ｃａｌｉｃｉｖｉｒｕ
ｓ）　、Ｎｏｒｗａｌｋ群、トガウィルス（ｔｏｇａｖ
ｉｒｕｓ）、フラビウィルス（ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）
、アルファウィルス（ａｌｐｈａｖｉｒｕｓ）、風疹ウ
ィルス（ｒｕｂｅｌｌａｖｉｒｕｓ）、コロナウィルス
（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）　、ラブドウィルス（ｒｈ
ａｂｄｏｖｉｒｕｓ）　、フィロウィルス（ｆｉｌｏｖ
ｉｒｕｓ）　、パラミクソウィルス（ｐａｒａｍｙｘｏ
ｖｉｒｕｓ）　、パラインフルエンザウィルス、おたふ
くかぜウィルス、ハシカウィルス、呼吸シンシチウムウ
ィルス、オルトミクソウィルス（ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖ
ｉｒｕｓ）、バンヤウィルス（ｂｕｎｙａｖｉｒｕｓ）
、アレナウィルス（ａｒｅｎａｖｉｒｕｓ）、レオウィ
ルス（ｒｅｏｖｉｒｕｓ）、ロータウィルス（ｒｏｔａ
ｖｉｒｕｓ）　、レンチウィルス（ｌｅｎｔｉｖｉｒｕ
ｓ）、オルビウィルス（ｏｒｂｉｖｉｒｕｓ）、レトロ
ウィルス、Ｔ−細胞白血病ウィルス、パポバウィルス（
ｐａｐｏｖａｖｉｒｕｓ）　、ポリオマウィルス（ｐｏ
ｌｙｏｍａｖｉｒｕｓ）、乳頭腫ウィルス、アデノウィ
ルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、パルボウィルス（ｐａ
ｒｖｏｖｉｒｕｓ）、ヘルペスウィルス（ｈｅｒｐｅｓ
ｖｉｒｕｓ）　、ヘルペス単純ウィルス、エプステイン
−バーウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ　ｖｉｒｕ
ｓ）、サイトメガロウィルス（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖ
ｉｒｕｓ）　、水痘−帯状ヘルペスウィルス（Ｖａｒｉ
ｃｅｌｌａ−Ｚｏｓｔｅｒ　ｖｉｒｕｓ）、ポックスウ
ィルス（ｐｏｘｖｉｒｕｓ）、ヘパドナウィルス（ｈｅ
ｐａｄｎａｖｉｒｕｓ）、肝炎ウィルスＡ，Ｂ及びＣ、
及び特にヒト向性を有するような追加のウィルス又は菌
株が存在する。レトロウィルスは含まれない。

【００１７】さらに、病理学的条件に関与するヒト組織
の正常な組織への模倣を可能にする処理にゆだねられた
正常な組織の使用が選択され得る。この態様において、
組織における病理学的条件の研究を可能にする種々のモ
デルが提供される。従って、低酸素症、病巣、潰瘍形成
、細胞介在変性を提供する細胞、たとえばＴ−細胞、好
中球、キラー細胞、等、遺伝的能力を提供し又は阻害す
るために遺伝的に変性されたウィルスによる感染による
遺伝子疾患、毒素の投与、ストレス及び同様のものを誘
発することができる。下記列挙は、使用され得る種々の
組織を示し、ここで病理学的条件は種々の手段により誘
発され得る。

【００１８】 　　組　　織　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　病　　理　　学　　的　　条　　件　　心臓　　
　　　　　　　　　　　　　　梗塞形成、高血圧、狭窄
症、虚血症血管系　　　　　　　　　　　　　　血管壁
の異常性、アテローム性硬化症、血栓塞栓症リンパ系　
　　　　　　　　　　　ホミング（炎症）、再灌流損傷
膵臓　　　　　　　　　　　　　　　　糖尿病滑液　　
　　　　　　　　　　　　　　関節炎肺　　　　　　　
　　　　　　　　　　　ぜん息、鉱物ダスト、ＡＲＤＳ
腎臓　　　　　　　　　　　　　　　　糸球体腎炎腸　
　　　　　　　　　　　　　　　　　ホミング（炎症）
、潰瘍、栄養吸収肝臓　　　　　　　　　　　　　　　
　ビリルビン転換、硬変、肝炎（急性毒性暴露）　　　
　　　　　　　骨髄　　　　　　　　　　　　　　　　
貧血脳及びＣＮＳ　　　　　　　　多発性硬化症、アル
ズハイマー病、重症筋無力症筋肉　　　　　　　　　　
　　　　　　筋ジストロフィー骨　　　　　　　　　　
　　　　　　　　オステオポロ−シス関節　　　　　　
　　　　　　　　　　腱炎、滑液包炎、関節炎、強直性
脊椎炎

【００１９】多くの場合、病原体に対するある物
質の効能を同時に研究しながら、免疫システムに対する
その物質の効果を研究したい場合、１タイプ以上の組織
を有することが所望される。従って、リンパ様組織に関
連しない移植物又は移植片の他に、細胞又は体液の応答
を提供するためにリンパ様組織を導入することもまた所
望される。造血性幹細胞は、胚の卵黄包、胎児の肝臓、
胸腺、脾臓又はリンパ節組織、胎児又は成熟した骨髄組
織、膵臓組織、虫垂組織、扁桃組織、及び同様のものと
共に宿主中に導入され得る。他の幹細胞系も使用され得
る。造血システムの他に、中枢又は末梢神経系の幹細胞
、たとえば胎児の中枢神経系の神経又はマトリックス細
胞、脊髄ニューロン及び脊髄、内分泌系の器官、たとえ
ばランゲルハンズ島のβ−細胞及び他の細胞、副腎、甲
状腺及び視床下部−下垂体軸の組合せも包含することが
できる。幹細胞は、それらのうちの個々が分化し、そし
て機能するようになるように誘発される適切な器官と協
力して導入されるであろう。

【００２０】多くの場合、末梢血液におけるヒト細胞の
割合を高めることが所望され、これは全体の循環血液細
胞の少なくとも０．１％、好ましくは少なくとも約１％
、より好ましくは少なくとも約５％の割合のヒト細胞を
付与する。宿主の骨（全体又は一部）が、内在性造血細
胞を少なくとも一部、切除するであろうレベルで照射さ
れ又は細胞毒性薬物により処理され得る。個々のタイプ
の宿主に関して、特定のレベルの処理は、残留する造血
細胞のレベル及び生存宿主の釣り合いのとれた数につい
てスクリーニングすることによって選択され得る。Ｘ−
線照射の代わりに、種々の細胞毒性薬物、たとえば免疫
毒素が使用され得る。骨としての又は分散される場合の
骨髄は通常、胎児の骨髄であり、そしてチャンク、スラ
イス、フラグメント又は同様のものとに使用され、そし
てその骨の大きさは宿主の大きさに依存する。マウスの
ためには、骨は一般的に約２ｃｍ以下、より好ましくは
約１ｃｍ以下であり、これは約４０〜１２００ｍｍ３　
の合計体積を付与する。骨の導入部位は、腹腔内、皮下
、哺乳類の脂肪パッド又は同様の部位である。

【００２１】所望する免疫無能を有する免疫化された哺
乳類宿主が存在し、又は創造され得る。有意な要因は、
その免疫化された宿主が、天然で又は導入された器官と
共に異種移植組織又は細胞に対する免疫応答を開始する
ことが不能であることである。従って、宿主は免疫化さ
れるが、しかしその宿主は、コンピテントＢ−細胞、特
に血漿細胞、及び／又はＴ−細胞、特にＣＤ４＋　及び
／又はＣＤ８＋　Ｔ−細胞を生成できないことにより明
らかなように、移植の後、免疫応答を開始することがで
きないことは有意ではない。現在、入手できる宿主は、
ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄとして知られる、厳密な組合された
免疫欠損性を有する宿主を包含する。

【００２２】レトロウィルス以外の病原体に関しては、
感染され得る組織が、宿主、通常マウスの適切な部位中
に移植され、そして結合が適切な場合、たとえば血管化
又はリンパ管との結合、又は他の器官又は血管を宿主中
に形成することを可能にされ得る。

【００２３】組織及び適切な場合、循環細胞が確立され
た後すぐに、組織は、組織の性質、物質、その物質が使
用される目的、便利さ及び同様のものに依存して、研究
又は生成物の産生のためにその物質にゆだねられる。そ
の物質は、血管内、腹腔内に注射により、局所的に組織
に直接、鼻腔内にエアゾール又は同様の手段により導入
され得る。

【００２４】特定の物質及び研究に依存して、種々のバ
イオアッセイが使用され得る。たとえばウィルス血症に
おける複製に興味がある場合、組織部位で、末梢血液に
おいて又は興味ある他の部位で、ウィルス又はそのウィ
ルスに関連する核酸により生成される種々のタンパク質
を検出することができる。特定のＤＮＡ、ウィルス粒子
、特定のタンパク質又は同様のものを同定するための種
々のアッセイが存在し、ここでこれらのアッセイは、文
献に集約的に例示されており、そしてここで詳細に説明
する必要はない。

【００２５】典型的な感染物質として、特にレトロウィ
ルス以外のウィルスはヘルペスウィルス、サイトメガロ
ウィルスである。ヘルペスウィルスはＤＮＡウィルスで
あるが、それらはまた、レトロウィルス以外の多くのＲ
ＮＡウィルスの典型である。ＣＭＶは、約２４０ｋｂｐ
　のゲノムを有する複雑なウィルスであり、そして宿主
特異性であり、そしてある組織選択性も有する。ＳＣＩ
Ｄ／ｈｕマウスにおいて、ウィルスは、ヒト胎児の胸腺
及び肝臓の連結部、腸、骨及び皮膚を感染することが見
出された。その感染は、長期間、安定しており、そして
ウィルス血症はＣＭＶに対して毒性である物質、たとえ
ばガンシクロバー（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）に対して
応答する。次の例は、例示的であって、本発明を限定す
るものではない。

【００２６】

【実施例】実　　験 方　　法 １．マウス． ＣＢ−１７ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウスを、Ｊａｃｋｓｏ
ｎ　Ｌａｂｏｒａｔｕｒｙ，　Ｂａｒ　Ｈａｒｂｏｒ，
ＭＥのＤｒ．　Ｌｅｏｎａｒｄ　Ｄ．　Ｓｈｕｌｔｚ　
から得た。マウスは、通常の動物保持施設内の標準の隔
離カゴに収容される。これらの条件下で、それらは、他
の近親交配された免疫コンピラント株の寿命よりも相当
に短い寿命期間を有する（たとえば１〜２年対３〜４年
）。 死の原因は通常、偶然の感染に関係する〔しばしば、プ
ネウモシスチス　　カリニイ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉ
ｓ　ｃａｒｉｎｉｉ）による〕。マウスに予防抗生物質
（トリメトプリム／スルファメトキサゾール）を投与す
ることによりそのような感染を妨げる方法が、ＡＩＤＳ
又はＡＲＣを有する患者の予防のために開発された手段
を用いて、使用される（上記を参照のこと）。すべての
他の観点（たとえば寝わら、食物、毎日の光のサイクル
、等）において、マウスは、通常の動物保持施設により
取扱われる。

【００２７】２．ヒト胎児組織の採取及び調整．患者に
ついて知られている情報は、胎児のおおよその（又は知
られている場合、実際）の懐胎年齢及び流産のための理
由を含み；後者の場合、羊水分析及び／又は超音波写真
により発見されたいづれかの遺伝的又は形態学的異常（
たとえば染色体欠損、ヒドロップス、無脳症、等）の詳
細が知られている。初期実験においては、明らかに正常
である胎児からの組織が使用され；後での実験において
は、特別に構成された情況が創造され、ここで遺伝的異
常を有する胎児からの組織が試験された。

【００２８】組織が、選択的又は医学的に指摘された流
産（７〜２２週目の妊娠期間）の後、胎児部分として手
術室から直接得られる。厳密な殺菌状態に保持しないで
、これらの部分を、切開室にすぐに置く。所望する組織
を同定し、切り取り、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭ
Ｉ１６４０培地中に置き、そして他の実験室に直接運ぶ
。“全体の器官”の移植（すなわち基質要素及びそれら
における造血要素の両者を含む組織）が行なわれるこれ
らの情況においては、適切な器官が約１ｍｍ×４ｍｍの
断片に切断される。（この大きさの組織片は、移植のた
めに使用される１９−ゲージのトロカールに容易に適合
する。）分散された細胞が注入されるこれらの情況にお
いては、適切な器官が懸濁液中、生存細胞を得るために
分離される。胎児の肝臓の場合、その懸濁細胞がフィコ
ール−ハイパーク密度グラジエント遠心分離により造血
前駆体のために富化され；次に所望する細胞を含む界面
層を３回洗浄し、計数し、そして約１０８　個の細胞／
ｍＬにする。造血前駆体細胞のサブ分別のために、フィ
コール−ハイパークグラジエントで単離された胎児の肝
臓細胞を、適切な細胞表面マーカーに対するモノクロー
ナル抗体により染色し、そして磁気ビーズによる陰性選
択及び螢光活性化細胞ソーター（ＦＡＣＳ）上での陽性
選択を包含する技法により単離する。

【００２９】ドナーの胎児組織の遺伝的起原を示すため
に、ＨＬＡ組織型検出を、共通するＨＬＡ対立遺伝子を
認識するモノクローナル抗体（下記を参照のこと）を用
いて、胎児胸腺細胞に対して行なう。この態様において
は、移植の前、組織型検出された“フィンガープリント
”が得られ、これによって導入される幹細胞のすべての
続く子孫が特異的にＳＣＩＤ−ｈｕマウスに続いて起こ
る。

【００３０】組織は通常、できるだけ新鮮な状態で導入
される。従って、組織の採取、調製、組織型検出及び移
植はすべて同じ日に行なわれる。しかしながら、凍結さ
れた組織は、胎児の肝臓細胞及び胎児の胸腺組織の場合
、十分に作用すると思われる。従って、個々の検体から
の残る組織のアリコートを、その日の最後で１０％ＤＭ
ＳＯ／５０％ＦＣＳ中で標準の方法を用いて凍結し、そ
して次に液体窒素貯蔵フリーザーに分類貯蔵する。

【００３１】３．ＳＣＩＤマウス中へのヒト組織の移植
． マウスは、生後４〜８週目で、予備処理なしに又は（ａ
）抗−アシアログリコプロテインＧＭＩ又は（ｂ）分別
された照射（週当たり１７５ラド、４週間）のいづれか
による前処理の後、一般的に使用された。後者の２種の
前処理は、ＳＣＩＤにおける内因性の天然のキラー細胞
活性の除去が異種移植組織との良好な構成を可能にする
可能性を試験するように企画された。

【００３２】組織は、多くのルート：静脈内、腎臓被膜
の下、脾臓内、腹腔内又は皮下に導入された。後者の３
種の場合、マウスはまず、ハロタンにより麻酔をかけら
れる。１ｃｍの切開を行ない、腎臓又は脾臓のいづれか
を暴露し、そして１９ゲージのトロカールを用いて、い
づれかの器官の被膜の下にヒト組織を導入する。その後
、その切開を手術用縫合糸により縫合する。静脈内注入
のためには、３０ゲージの針を用いて、眼窩後方の静脈
叢中に懸濁細胞を導入する。これらのルートのうち、左
の腎臓被膜中への組織の移植はいくつかの明確な利点を
付与する：第１に、それは容易に到達され得；第２に、
腎臓は、移植された組織の増殖を観察し、そして組織学
的分析のためにそれからバイオプシイ検体を除去するた
めにくり返して暴露され得る。

【００３３】４．ＳＣＩＤ−ｈｕマウスの分析．Ａ．免
疫表現型決定． ヒトリンパ球の種々の細胞表面マーカーに対する多くの
モノクローナル抗体を、ＳＣＩＤ−ｈｕマウス内に見出
される細胞の分析のために調製した。これらは、成人の
末梢血液Ｔ−細胞（ＯＫＴ４，ＯＫＴ８，ＯＫＴ３，Ｏ
ＫＴ１１）のマーカー、ヒト末梢血液Ｂ−細胞のマーカ
ー（ＣＤ１９，ＣＤ２０，抗−ＩｇＭ，抗−ＩｇＧ，抗
−Ｌ鎖）及びヒトＨＬＡ複合体のマーカー（クラスＩ抗
原の多形性及び単形性決定基の両者を含む）を包含する
。これらのネズミ抗体は、螢光化された（ＦＩＴＣ）抗
−マウス抗体と二次的に反応せしめられる一次抗体とし
て又はアビジン−ＦＩＴＣと二次的に反応せしめられる
ビオチル化された抗体として、免疫螢光アッセイに使用
されて来た。多くの場合、フィコビリタンパク質により
直接螢光化され又は結合される抗体が使用されて来た。 移植の後、マウスから尾の静脈の切開又は眼窩後方の放
血により毎週採血し；完全な血液約１００μＬを得る（
通常、１〜２×１０５　個の細胞を含む）。核化された
細胞を、デキストランスルフェートによる赤血球細胞の
沈殿化により又は低張ショックによる赤血球細胞の溶解
により富化し、洗浄し、血小板フリーにし、そして次に
、９６−ウェルのマイクロタイタープレート内でモノク
ローナル抗体により染色する。アッセイが完結した後、
陽性細胞のための視覚的観察（すなわち、明確な表面螢
光を有する）を、免疫螢光顕微鏡下で行なう。ヒト細胞
が周囲において完全なクレートのない（ｕｎｃｌｅａｔ
ｅｄ）細胞１％以上を表わす場合、それらはこの方法に
より容易に検出され得、そしてまた、複数パラメーター
ＦＡＣＳにより統計学的有意性でもって定量化され得る
。従って、サンプルが直接的な観察により陽性である場
合、それらはＦＡＣＳにより分析される。この分析にお
いて、細胞はまず初めに、１％ホルマリンにより固定さ
れ、そして次に１μｇ／ｍＬのプロピジウムヨージド（
ＰＩ）（クレートのない細胞により摂取される）と共に
１０分間インキュベートされる。続くＦＡＣＳ分析にお
いては、細胞は初めに、ＰＩのために門を開かれ（すな
わち、それらは非クレート化される）、そして次に、Ｆ
ＩＴＣによる染色のために評価される。この態様におい
て、完全なクレートのない細胞の関数としてのＦＩＴＣ
−陽性細胞の百分率が容易に得られる。

【００３４】Ｂ．組織学． 移植後種々の時間で、組織をバイオプシイ（たとえば左
の腎臓被膜の下で増殖する組織の）により又はオートプ
シイにより採取し、そして薄い断片のためにＯ．Ｃ．Ｔ
上で凍結する。その後、断片を上記モノクローナル抗体
により染色し、そして２番目のアルカリホスファターゼ
によりラベルされた二次抗体によりカウンター染色する
。次にマーカーのために陽性の細胞の存在を、ジアミノ
ベンジジンのアルカリホスファターゼ反応生成物により
検出し、そして光学顕微鏡下で可視化する。

【００３５】Ｃ．ＤＮＡ分析． 尾の静脈の放血又はバイオプシイ又はオートプシイの後
、器官系の再懸濁により採取された細胞を、完全な細胞
ＤＮＡの抽出のために標準方法により処理する。ＳＣＩ
Ｄ−ｈｕマウスに由来する完全な細胞ＤＮＡを、種々の
プローブ及びアッセイシステムを用いて分析し、そして
通常のヒト対照から又は未処理のＳＣＩＤマウスから得
られたＤＮＡと比較した。プローブは次のものを包含す
る：１）Ａｌｕ反復体（ＢＬＵＲ８）、ヒトゲノムに見
出されるが、しかしこれらの実験に使用される条件下で
クロスハイブリダイズするネズミの配列に十分に相同で
ないＤＮＡの反復配列、２）ヒトＴ−細胞受容体（Ｂ鎖
）プローブ、３）ヒトＩｇ不変部プローブ、４）ヒトＭ
ＨＣクラスＩ及びクラスＩＩプローブ。ドットブロット
及びサザンブロット（標準条件下で作動する）に使用す
るためには、これらのプローブはまず初めに、ヘキサマ
ー−ラベリング技法により３２Ｐによりラベルされる。 Ｔ−及び／又はＢ−細胞受容体遺伝子における再配列が
、既知の制限地図及び標準の条件を用いて、完全な細胞
ＤＮＡの制限エンドヌクレアーゼ消化により調べられる
。 ポリマラーゼ鎖反応に関しては、熱安定性Ｔａｇ１ポリ
マラーゼを用いて、多くのオリゴヌクレオチドが構成さ
れ、そして／又は得られ、これは、Ａｌｕ反復体のコピ
ー及びクラスＩ及びクラスＩＩ単形性配列のコピーを生
成するヌクレオチドを包含する。

【００３６】Ｄ．核型の分析． 核型の分析のためには、尾の放血により採取された細胞
を、ヒト細胞の増殖を誘発するために植物凝集素を有す
る培養物中に導入した。４８時間で、中期分裂停止がコ
ルヒチンの添加により誘発され、そして染色体が光学顕
微鏡による分析のために調製される。

【００３７】結　　果 １．ヒト胎児胸腺はＳＣＩＤマウスに増殖する．ヒト胎
児胸腺の増殖は、ヒト胎児胸腺により移植されたほとん
ど（７８０％）のＳＣＩＤマウスに観察された（約１８
ヵ月間にわたって種々の時間での連続的な実験において
３００匹以上のマウスを含む）。組織増殖が観察されな
い場合、移植技法に関する問題が原因であるように思わ
れる。全体の構築は、胸腺検体を移植するために初めに
行なわれた横の切開を再び開き、そして腎臓を暴露する
ことによって観察される。移植後４〜８週までに、大き
さの著しい増加がほとんど一定不変に明らかである（２
倍〜２０〜３０倍の範囲での増加）。いくつかの場合、
１匹のマウスに移植されたヒト胎児胸腺のフラグメント
が除去され、そして第２の前もって処理されていないマ
ウスに移された。同様にこれらの場合、胸腺組織の劇的
な増殖が観察された。その胸腺は、色及びコンシステン
シーの両者において正常なヒト胎児胸腺のものと類似す
る。十分に明療な血管系が低倍率の顕微鏡で観察され得
る。バイオプシイ検体が組織断片のために調製され、そ
してヒト又はネズミ細胞上に存在する抗原に対するモノ
クローナル抗体により染色される場合、移植された胸腺
の細胞含有物は、ほとんどヒトのものであり（下記参照
のこと）、そして組織の顕微鏡的解剖が一般的に保持さ
れたことが見出された。従って、十分に明療な髄質及び
皮質部分が存在し、それはそれぞれ抗体ＭＤ１及びＣＤ
Ｒ２による上皮成分の特徴的な染色を有する。ヒトクラ
スＩＩ決定基に対して陽性の樹状突起様細胞が髄質及び
それよりも少ない程度で皮質に見出される。 ヒトＴ−細胞マーカー、ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８及びＣ
Ｄ２を染色する胸腺細胞がまた存在する。二重レーザー
ＦＡＣＳにより分析される場合、ＣＤ４及びＣＤ８のた
めに二重陽性、ＣＤ４又はＣＤ８のために単重陽性又は
両マーカーのために二重陰性である細胞の百分率は正常
な年相応の胎児胸腺に見出される細胞の百分率に類似す
る。上記発見は、９〜２２週目の妊娠のヒト胎児からの
胸腺組織を受けたマウスにより生じた。

【００３８】ＳＣＩＤ−ｈｕ胸腺移植物と正常なヒト胎
児胸腺との間の日時を定めるために示される唯一の差異
は、前者において（但し、後者ではない）、皮質におけ
る及びネズミクラスＩＩ決定基を発現する髄質（皮質よ
りも低い程度）における樹状突起様細胞の存在である。 これらの細胞は、ネズミ、すなわち血管化されたＳＣＩ
Ｄ−ｈｕ胸腺移植物中に移動する骨髄前駆体におそらく
由来する。

【００３９】多くの重要な結論が上記観察から引き出さ
れ得る。第１に、ヒト胎児胸腺組織はＳＣＩＤマウスに
より拒絶されない。実際、それは十分に血管化され、そ
して増殖する。第２に、全体的な形態学及び顕微鏡的分
析によれば、移植されたヒト胸腺組織は、その正常なヒ
ト対応部分への密接な類似点を有する。従って、器官は
、空間的に正しい再生のための本質的な性質を維持する
ように思われる。

【００４０】また、胸腺細胞の数及び相対的なサブセッ
ト分布は正常であると思われる。最後に、ネズミクラス
ＩＩ決定基を担持するネズミ樹状突起細胞は、ＳＣＩＤ
−ｈｕ胸腺に見出される。これらの細胞は、ネズミＭＨ
Ｃ抗原に対して耐性である（及びたぶんそれに対してＭ
ＨＣ−制限される）増殖性ヒト胸腺細胞を“教授する”
ことに関与され得る。それによって、移植片−対−宿主
の病気が回避され得る。

【００４１】２．表現型的に成熟したヒトＴ−細胞が、
ＳＣＩＤ−ｈｕマウスの末梢循環に見出される．この現
象は、３００以上の組の実験に観察された。ヒトＴ−細
胞マーカーに対するモノクローナル抗体を用いてのＦＡ
ＣＳ分析によれば、それは、ヒト胎児胸腺により前もっ
て（又は同時に）移植されたＳＣＩＤマウス中へのヒト
胎児肝臓細胞の静脈内導入の後、４〜１２週存在する時
間依存性である。

【００４２】特に、マウスの組はヒト胎児胸腺移植物を
受けた。これらの組をグループにサブ分割した：いくら
かは同時に１０７　個の胎児肝臓細胞（ＦＬＣ）を静脈
内に受け、いくらかは１０７　個の胎児肝臓細胞を２週
間後、胸腺内に受け、いくらかは胎児肝臓細胞をまった
く受けなかった。３週間で、それぞれの末梢血液を、ヒ
トＴ−細胞マーカーＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８，ＣＤ２の
ために染色する細胞の存在について試験し；すべては陰
性であった。しかしながら、４〜１２週までに、そのよ
うな細胞はＦＡＣＳ上に見えた（全体の単核化された細
胞集団の０．２〜４０％を構成する）。この時間、ＳＣ
ＩＤ−ｈｕ末梢循環におけるＣＤ８＋　ヒトＴ−細胞に
対するＣＤ４　＋　の比は３〜４の間であり（平均３．
５，ｎ＝８５，Ｓ．Ｄ．＝０．８６）、十分に通常な範
囲内であった。ＦＬＣ移植後１２〜１５週の間で再び試
験される場合、これらのマーカーを担持する細胞はもは
や存在しなかった。この一般的なパターンは、ＦＬＣ細
胞が初めに投与されるルートに関係なかった。

【００４３】この分析から、ヒトＴ細胞のマーカーを担
持する有意な数の細胞がＳＣＩＤ−ｈｕマウスの末梢血
液に現われるまで４週間かかるように思える。その時点
の前、それらは存在せず；１２週後、それらは消出する
。免疫表現型はたぶん、適切であることは当然の結果で
あり；すなわち使用された抗体は時間依存性の態様で単
に反応性であり、そしてネズミ細胞に無差別に結合しな
いように思える。末梢におけるヒトＴ−細胞の一時的な
変動が、胎児肝臓が与えられようと、いまいと時おり観
察され得る。これは、胎児胸腺内に存在する細胞が、移
植される時点で、胸腺を出て、そして末梢循環に入いる
ことができることを意味するように思える。

【００４４】ヒトマーカーを担持する末梢血液細胞がＳ
ＣＩＤ−ｈｕ動物に不在であることが決定された後、す
べてはもう１度、ＦＬＣにより再構成され；明白に、こ
れらの動物のすべては元のヒト胎児胸腺移植物を保持し
た。この再構成の第２回目においては、動物は再びグル
ープにサブ分割され：いくらかはＦＬＣ細胞の種々の量
を静脈内に受け（５×１０６　〜５×１０７　の範囲）
；他は完全な胎児肝臓のフラグメントを皮下及び脾臓内
に受けた。３週間後の末梢血液の分析は、ヒトマーカー
を担持する細胞の完全な不在を示した。他方、６週まで
に、動物は再び、ヒトマーカーＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８
及びＣＤ２を担持する有意な数の細胞の存在を示し（合
計の単核細胞のうち約４〜３０％）；明白にはこれらの
細胞の３〜１５％がＣＤ４マーカーを発現した。２匹の
マウスが１週間後（第７週目）、剖検にゆだねられる場
合、両者とも、ＯＫＴ４（Ｔヘルパー細胞系のマーカー
）又はＯＫＴ８（Ｔ細胞毒性／サプレッサー細胞系のマ
ーカー）により染色された末梢における細胞を示し；こ
れらの２種のそれぞれのサブ集団の比は２．３：１であ
り、これはヒト末梢血液自体に見出される正常な比の範
囲内であった。これらの細胞がネズミの脾臓、胸腺又は
リンパ節に実際に誘導されるかどうかを確かめるために
、ＦＡＣＳ分析をまた、これらの器官から得られた細胞
に対して行なった。これらの場合、ヒトＴ−細胞マーカ
ーを担持する細胞は観察されなかった。続く末梢血液の
ＦＡＣＳ分析においては、すべてではないが、１組のマ
ウスが、ヒトＴ−細胞の末梢集団を再び失うことが観察
された。

【００４５】ＳＣＩＤマウスが完全な胎児肝臓フラグメ
ント及び胎児胸腺により移植され、そして次に胎児肝臓
細胞の静脈内注入が与えられる場合、同じ観察が臨界的
な差異を伴って行なわれる。たった１２週続く代わりに
、末梢循環におけるヒトＴ−細胞は１８ヵ月まで続くこ
とが見出された（５０％の動物は５〜１１ヵ月間、Ｔ−
細胞を示す）。再び、ＣＤ４／ＣＤ８の比は、それらを
通して正常である。

【００４６】この第２回目の再構成は、多くの重要な結
論を促進する。第１に、ＦＬＣを静脈内に与えられたＳ
ＣＩＤ−ｈｕマウスの末梢血液におけるヒト細胞の一時
的な変動の現象が再現性である。第２に、ＦＬＣは静脈
内に与えられ、そしてそれらは続いて、成熟Ｔ−細胞の
マーカーを示すので、それらは移植されたヒト胎児胸腺
に及びそれを通して実際に誘導される傾向がある。第３
に、末梢に見出される成熟Ｔ−細胞はＣＤ４／ＣＤ８サ
ブ集団の“生理学的”バランスを表わす。第４に、これ
らの末梢ヒトＴ−細胞は存在するネズミ器官（脾臓、リ
ンパ節、胸腺）に実際誘導されない。従って、進行する
実験においては、ヒト同等物がＳＣＩＤ−ｈｕマウス中
に移植された。最後に、完全な胎児肝臓の導入は、末梢
におけるヒト細胞の長期の変動を生むことが見出された
。この観察は、胎児肝臓基質細胞の不在下で複製するこ
とができない、ＦＬＣ内の自己再生幹細胞集団の存在を
包含する。

【００４７】ヒト成熟Ｔ−細胞マーカーに対するモノク
ローナル抗体の明白な特異性にもかかわらず（末梢血液
において染色細胞の高い百分率を示すこれらのマウスに
おいてさえ、同時に分析された脾臓細胞集団は陰性であ
ることを注目すること）、染色は予測しにくい人工物に
よるものである形式的な可能性が相変わらず存在する。 この可能性を制御するために、末梢血液に見出される細
胞のＤＮＡ分析を、ヒト（但し、ネズミに対してではな
い）の反復ＤＮＡ配列（ＡＬＵ反復体：ＢＬＵＲ−８）
に対して特異的なプローブを用いて行なった。この分析
により、ＳＣＩＤ−ｈｕマウスに由来する末梢血液細胞
がヒトＴ細胞の特徴的な表現型マーカーを担持するのみ
ならず、またヒトＡＬＵプローブと強くハイブリダイズ
するＤＮＡを含むことが見出された。

【００４８】ＳＣＩＤマウスがヒト胎児胸腺及びリンパ
節により移植され、そして次に、ヒト胎児肝臓細胞の静
脈内注入を行なわれる場合、ヒトＩｇＧがまた、血清中
に検出され得る。ＩｇＧの量は、通常見出される量の５
〜１０％である。ＩｇＧを生成する血漿細胞は、移植さ
れたヒトリンパ節に局在され得る。ヒトＩｇＧ産生は、
ＳＣＩＤマウス中へのヒトリンパ節の導入を少なくとも
必要とする。

【００４９】特定の実験において、ＳＣＩＤマウスは、
おおいをかぶされた単独のカゴに保持され、そしてそれ
ぞれの週の３日間、飲料水によりＴＭＳ懸濁液を受けた
（懸濁液５ｍＬ当たりトリメトプリム４０ｍｇ及びスル
ファメトキサゾール２００ｍｇ；１日についてマウス当
たり飲料水４ｍＬ当たり懸濁液０．１２５ｍＬ）。飲料
水のボトルを毎日傾け、それと同時に薬物を投与し；対
照の飲料水とそれぞれの週の残る４日間交換した。９ｇ
重量のヒト胎児胸腺葉（０．５×０．５×２ｍｍの大き
さ）及びヒトリンパ節のセグメント（０．５×０．５×
２ｍｍの大きさ）を左の腎臓被膜の下に移植した。これ
らの器官は、ＨＬＡ−Ａ２＋　，ＨＬＡ−Ｂ７−　ドナ
ーから得られた。 同時に、マウスは、１０７　個の肝臓細胞を静脈内に受
け；対照的に、これらの細胞はＨＬＡ−Ａ２−　，ＨＬ
Ａ−Ｂ７＋　であった。

【００５０】胎児肝臓細胞を細かく切り刻むことによっ
て得、そして１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地
に懸濁された残る細胞を、フィコール−ハイパーク遠心
分離により単核画分に分離し；次に界面細胞を１０％Ｆ
ＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０により３度洗浄し、そして
静脈内投与のために１０８　個の細胞／ｍＬの濃度で再
懸濁した。

【００５１】組織の移植のために、マウスはまず、ハロ
タンにより麻酔をかけられた。１ｃｍの横の切開を行な
い、左の腎臓を暴露した。腹膜及び筋膜を連続的に縫合
し、そして金属クリップを傷口上に固定し、治癒を確保
した。懸濁された胎児肝臓細胞を、３０ゲージの針によ
り眼窩後方近くに静脈内注入した。

【００５２】移植後４週目の胸腺の凍結された一連の固
定断片を、正常な年齢相当の胎児胸腺と比較した。顕微
鏡分析は、適切であることが見出され、但し、存在する
樹状突起形態を有するネズミクラスＩＩ−陽性細胞が存
在した。特に胸腺細胞のすべてはＨＬＡ−Ａ２−　，Ｈ
ＬＡ−Ｂ７＋　であり；従って、それらは静脈から与え
られたＦＬＣ調製物以内の幹細胞に由来した。

【００５３】ＳＣＩＤ−ｈｕマウスからの末梢血液を分
析する場合、３．５のＣＤ４／ＣＤ８の比を有するヒト
Ｔ−細胞が４〜１２週間で見出された。これらの細胞は
抗原ＨＬＡ−Ｂ７を発現するが、しかしＨＬＡ−Ａ２は
発現せず；従って、それらは、ＨＬＡ−Ａ２＋　，ＨＬ
Ａ−Ｂ７−　胸腺により最初に処理された、元のＦＬＣ
源からの十分に分化された細胞であった。

【００５４】種々のＦＬＣサブ集団が成熟したヒトＴ−
細胞を引き起こすことをより良好に決定するために（た
とえば、このサブ集団は幹細胞活性を有した）、ＨＬＡ
−Ａ２−　，ＨＬＡ−Ｂ７＋　ドナーからのＦＬＣがＣ
Ｄ４＋　，ＣＤ８＋　，Ｍ１＋　，Ｍ３＋　，Ｉｇ＋　
，Ａ＋　／Ｂ＋細胞から消耗され（Ｔ、Ｂ、骨髄単球、
赤血球、及び顆粒球細胞を除去する）、“系統−マーカ
ーマイナス”（Ｌｉｎ−　）集団が生成される。この集
団は、ヒトＴｈｙ−１：Ｌｉｎ−　Ｔｈｙ−１−　及び
Ｌｉｎ−　Ｔｈｙ−１＋　に対する抗体を有する２種の
サブ集団にＦＡＣＳにより富化された。これらの集団は
、次にＨＬＡ−Ａ２＋　，ＨＬＡ−Ｂ７−　ヒト胸腺移
植物を有するＳＣＩＤマウス中に静脈内導入された。Ｌ
ｉｎ−　Ｔｈｙ−１＋　サブ集団は、ＨＬＡ−Ｂ７＋　
Ｔ−細胞を後で生ぜしめることが見出され；Ｌｉｎ−　
Ｔｈｙ−１−　集団は不活性であった。従って、Ｌｉｎ
−　Ｔｈｙ−１＋　集団は、ヒト造血幹細胞活性をたぶ
ん包含する。

【００５５】最後に、ＳＣＩＤ−ｈｕマウスからの血清
検体が分析される場合、それらは、１〜１０ｍｇ／ｍＬ
のレベルでヒトＩｇＧを含むことが見出された。ヒトリ
ンパ節バイオプシイは、免疫組織化学染色によりヒトＩ
ｇＧ含有血漿細胞の存在を示した。

【００５６】３．ＣＭＶによる感染． Ａ．腎臓被膜中に胸腺及び肝臓により移植されたＳＣＩ
Ｄ−ｈｕマウスを、ヒトＣＭＶの新鮮な臨床学的単離物
、すなわち株Ｔｏｌｅｄｏ（５×１０６　ＰＦＵで与え
られる）及びＤＫ（７×１０５　で与えられる）を有す
る移植片に接種し、ここでＴｏｌｅｄｏは病気の胎児か
らの単離され（サイトメガロ包含疾病）及びＤＫは成人
のＡＩＤＳ患者から単離された。これらの両者の株は移
植物において増殖し、そして接種後２，５，９及び１５
日で、２匹の動物を殺し、そして組織を除き、切りきざ
み、音波処理し、そしてヒト繊維芽細胞に対するプラー
クアッセイによりヒトＣＭＶの存在のために力価した。 両株のために、ピークを、Ｔｏｌｅｄｏのために９日目
で約２×１０５　ＰＦＵ／ｍＬで及びＤＫのために５日
目で約２×１０４　ＰＦＵ／ｍＬで観察し、そしてＴｏ
ｌｅｄｏの力価は１５日目で約１０５　に低下し、そし
てＤＫは１５日目までに約１０ＰＦＵ／ｍＬに低下した
。試験を、個々の決定のために３〜４匹の動物によりく
り返し、但し、１５日間、２匹の動物であった。

【００５７】

【表１】

【００５８】Ｂ．胎児皮膚を、実質的に記載されるよう
にしてＣＢ−１７ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウスの背面上に
移植した。移植の２４〜４０週後、皮膚移植されたマウ
スはヒトＣＭＶの新鮮な臨床学的単離物、すなわちＴｏ
ｌｅｄｏ株（５×１０６　ＰＦＵで与えられる）及びＤ
Ｋ株（７×１０５　で与えられる）により静脈内接種さ
れ、そしてその組織が、接種後、２，５，９及び１５日
でアッセイされた。皮膚において、両ウィルスは類似す
る質的な及び量的な特徴を持って増殖し、両者は約６×
１０３　ＰＦＵ／ｍＬで約５日でピークになり、そして
約１０ＰＦＵ／ｍＬ以下に低下した。特別な注意が、ヒ
ト皮膚移植片に付着するマウス組織の脂肪下層を除去す
ることに払われた。

【００５９】Ｃ．ＣＭＶ複製を維持することができるヒ
ト組織の不在下で、Ｔｏｌｅｄｏ（５×１０６　）及び
ＤＫ（７×１０５　）の静脈内注入は、接種後、２〜４
時間以内で末梢血液におけるＣＭＶの実質的な不在をも
たらした。

【００６０】Ｄ．約１０〜２０μＬのＣＭＶ　　Ｔｏｌ
ｅｄｏ継代９を骨に注入し、ここで骨は、続いて、前記
のようにして照射されなかったマウスに移植されていた
。 合計１６匹のマウスを、２，５，９及び１２〜１４日目
に殺された４匹のマウスにより感染せしめ、そして４匹
のマウスは負の対照として使用され、これらのマウスは
、２及び１２〜１４日目に殺された。骨の大きさはほぼ
平均であった。

【００６１】骨をマウスから手術により除き、細かく切
りきざみ、そして２．２ｍｌのＤＭＥ／５０％ＦＣＳに
置き、そして４〜５の設定で１０秒間音波処理した。３
回の音波処理のそれぞれの間、管は約１５秒間、氷上で
冷却された。その音波処理物を希釈し、そして個々の希
釈度で繊維芽細胞プレート上で二重に力価した。個々の
希釈溶液１ｍＬを３７℃で繊維芽細胞プレート上で１〜
２時間インキュベートした。その音波処理物を除き、そ
して２ｍＬのＤＭＥ／１０％ＦＣＳにより完全に交換し
た。２〜３日後、１ｍＬの培地を加えた。繊維芽細胞を
１週間培養し、そして次に、メタノールにより固定し、
続いて、Ｇｅｉｍｓａにより染色した。コロニー（ＰＦ
Ｕ）を数えた。

【００６２】切りきざまれた骨からの全体の分散された
細胞の約半分（約５×１０５　個の細胞）を、メチルセ
ルロースアッセイでアッセイし、そして他の半分を、残
る骨の残骸と共に音波処理のために使用した。

【００６３】次の表は、上記プラークアッセイを用いて
得られた結果を示す。

【００６４】

【表２】

【００６５】次の日、胸腺及び肝臓移植物をＣＭＶ感染
のために使用し、そしてガンシクローバー（ｇａｎｃｉ
ｃｌｏｖｉｒ）　を、飲料水に種々の濃度で供給した。 マウスを研究し、ここでマウスは薬物上に２週間維持さ
れ、感染後６時間で開始され、そしてＣＭＶのレベルが
２週間の最後で決定された。次の研究においては、マウ
スが２週間、薬物上に維持され、次に２週間、薬物を除
かれ、そしてウィルス血症が４週間の最後で測定された
。次の表は、その結果を示す。

【００６６】

【表３】

【００６７】

【表４】

【００６８】Ｅ．次の研究は、胎児組織として腸を用い
た（腸の移植、前記を参照のこと）。上記方法に従って
、腸に１０〜２０μＬのＣＭＶ　　Ｔｏｌｅｄｏ継代９
（約１〜２×１０６　）を注射し、そして感染の期間は
、２，５，９及び１２〜１４日であった。上記工程の後
、プラーク形成単位を、感染後２週間で測定した。次の
表はその結果を示す。

【００６９】

【表５】

【００７０】５．種々の組織及び器官の移植．Ａ．骨の
移植． ヒト胎児の長骨（１７〜２２ｇ重量）（約１ｃｍの長さ
、１〜２個の骨）を、２００〜３００ラドでの全身の照
射により予備条件づけされ又は処理されていないＣＢ−
１７ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウス中に皮下又は腹腔内移植
した。移植後、種々の時点で、骨を取り出し、そしてそ
れらから回収された細胞を、ヒト特異的抗体、ＭＥＭ−
４３又はマウス特異的抗体、Ｌｙ．５．１のいづれかに
より染色し、そしてＦＡＣＳ又はシトスピン（ｃｙｔｏ
ｓｐｉｎ）調製法により分析した。移植物の断片を、通
常の組織学のために調製した。

【００７１】ヒト造血は、移植後２〜３週で、組織学的
に又はシトスピン調製法により観察されなかった。ヒト
骨移植片から回収された大部分の細胞は、ＭＥＭ−４３
のために陽性であった。流れ血球計算法による散乱分析
は、リンパ様又は骨髄集団を示さず、これは大部分の細
胞が起原的に非造血性であることを示唆した。

【００７２】移植後４〜５週で、造血の徴候（すなわち
、幼芽細胞の存在、骨髄性単球細胞及び赤芽球の未熟形
の存在）が、分析されたほとんどの場合において、シト
スピン調製法で観察された。これらのサンプルにおける
ＭＥＭ−４３陽性細胞は、胎児骨髄サンプル中のそれに
類似する散乱プロフィールを示した。骨髄単球系の細胞
、Ｂ細胞系及び赤血球系が、それぞれＬｅｕＭ１（ＣＤ
１５），ＣＤ１０及びＣＤ１９並びに抗−ヒトグリコホ
リンＡによる免疫螢光染色により示された。照射（２０
０〜３００ラド）により予備条件づけされた動物は、末
梢血液中に有意な数の循環骨髄（ＣＤ３３）又はＢリン
パ様（ＣＤ１９，Ｉｇ＋　）細胞を示す（０．５〜３０
％）。

【００７３】Ｂ．皮膚の移植． （１）胎児（１６〜２２ｇ重量、腿、頭皮及び足底）、
（２）新生児の皮膚（包皮）及び（３）成人（体幹）か
らの皮膚を、ＳＣＩＤマウスの背面上で増殖せしめた。 移植のための皮膚の皮下組織をできるだけ多く除き、マ
ウスの皮膚に全体として置き、そして縫った。移植の後
（２〜３週）、移植された皮膚上でのかさぶた形成が観
察され、続いて、移植された皮膚を増殖せしめた。組織
学的試験は、正常なヒト皮膚、すなわち外皮、毛包及び
付属の腺における上皮細胞及び皮膚構造にひじょうに類
似する構造を示した。

【００７４】Ｃ．胎盤の移植． 絨毛膜絨毛を有する胎盤組織の小片（１６〜１８ｇ重量
）を、前記のようにして、ＳＣＩＤマウスの腎臓被膜下
に移植した。栄養膜細胞層を有する胎盤組織の増殖を、
移植後４週で観察した。

【００７５】Ｄ．腸の移植． 胎児からの虫垂を含む小腸（１６〜１８ｇ重量）を、腸
間膜を有する又は有さない横断片（２×２×３ｍｍ）に
切断し、そしてＳＣＩＤマウスの腎臓被膜下に移植した
。 これらの移植片は、内部にムチン液体を含むノウ胞性構
造であった。そのノウ胞は、正常な腸に観察される平滑
筋層に類似する筋肉層を伴う粘膜層を内部に有した。

【００７６】Ｅ．肺の移植． 胎児肺（１８〜２２ｇ重量）の小片（２×２×２ｍｍ）
を、ＳＣＩＤマウスにおいて、（１）腎臓被膜下に、（
２）４番目の哺乳類脂肪パッドに、又は（３）腹腔内に
移植した。すべての場合、移植された肺の急速な増殖が
観察され得る。肺胞構造、気管支及び細気管支（上皮細
胞、平滑筋及び軟骨を有する）を包含する胎児肺の構造
に類似する構造が、移植後４週目の移植片に観察された
。

【００７７】Ｆ．下垂体の移植． 胎児下垂体腺（１８〜２２ｇ重量）を小片に切断し、そ
してＳＣＩＤマウスの腎臓被膜下に移植した。移植の後
（５〜６週）、移植物の構造は、色素嫌性、好酸性及び
好塩基性細胞から成る細葉構造を有する下垂体腺の前葉
の構造にひじょうに類似した。

【００７８】Ｇ．膵臓の移植． 胎児膵臓組織（１８〜２２ｇ重量）を小片に切断し、そ
してＳＣＩＤマウスの腎臓被膜下に移植した。膵臓移植
片は、腎臓被膜下で十分に増殖した。移植片の組織学的
試験（移植後４〜６週）は、細葉腺、種々の大きさの管
路、及び十分に増殖したランゲルハンス島を包含する膵
臓組織のすべての細胞成分が正常な膵臓の成分に類似す
る構造のものであることを示した。多くの場合、慢性の
膵炎に類似する、細葉間のわずかな繊維性変化が観察さ
れるが、但し単核細胞の浸潤はその繊維性変化に伴わな
かった。

【００７９】異種移植組織が生存して且つ機能的に存続
することができる免疫化された宿主中への異種移植組織
の導入により、広範囲の種類の好都合な結果が得られる
ことが上記から明らかである。薬物、治療、病原体又は
同様のものを包含する、広範囲の種類の物質の免疫シス
テムに対する効能及び影響の試験をだれでも提供するこ
とができる。これらの物質は、病気に対する効能につい
て評価され得、ここで異種移植組織が宿主中に導入され
、そして病原体により感染され、続いて異種移植組織又
はその組織の外部における病原体の進行に対する物質の
効果が測定される。

【００８０】本明細書に言及されるすべての出版物及び
特許出願は、本発明が関与する当業者の熟練のレベルの
表示である。すべての出版物及び特許出願は、それぞれ
個々の出版物又は特許出願が引用により導入されること
を特別に且つ個々に示されているかのように、ある程度
、引用により本明細書に組込まれる。本発明は明確に理
解するためにいくらか詳細に記載されて来たが、特許請
求の範囲内で修飾及び変更を行なうことができる。

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　多くのレトロウィルス種以外の病原体
   （該病原体は種属性である）の刺激物への応答を決定す
   るための方法であって：少なくとも機能的なＴ細胞を欠
   き、そして前記種の血管化された非形質転換性固体器官
   組織を含んで成る霊長類以外の免疫化された宿主に、前
   記組織又は前記組織を感染する病原体を含んで成る細胞
   からの生理学的応答を誘発することができる刺激物を投
   与し（ここで前記刺激物は前記生理学的応答を生成する
   ための量で投与される）；それによって前記刺激物の効
   果を決定することを含んで成る方法。
2. 【請求項２】　　前記固体器官組織が造血組織である請
   求項１記載の方法。
3. 【請求項３】　　前記固体器官組織が上皮組織である請
   求項１記載の方法。
4. 【請求項４】　　前記固体器官組織が肺組織である請求
   項１記載の方法。
5. 【請求項５】　　前記宿主がネズミである請求項１記載
   の方法。
6. 【請求項６】　　前記ネズミ宿主がｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ
   である請求項５記載の方法。
7. 【請求項７】　　薬物へのヒトサイトメガロウィルスの
   応答を決定するための方法であって：ヒトサイトメガロ
   ウィルスにより感染された胸腺及び肝臓の組合せ、粘膜
   組織又は骨髄から成る群の少なくとも１種のヒト胎児組
   織を含んで成る免疫化された宿主に前記薬物を投与し、
   ここで前記組織が少なくとも機能的なＴ細胞を欠き、そ
   して血管化され、そして形質転換されていない前記組織
   を含んで成る霊長類以外の免疫化された宿主に存在し；
   そして前記サイトメガロウィルスの増殖に対する前記薬
   物の効果を決定することを含んで成る方法。
8. 【請求項８】　　前記組織が胎児胸腺及び肝臓の組合せ
   である請求項７記載の方法。
9. 【請求項９】　　前記組織が前記結腸である請求項７記
   載の方法。
10. 【請求項１０】　　ヒト組織に対する向性を有するレト
    ロウィルス科のメンバー以外の病原体によりヒト組織に
    おいて感染されたＳＣＩＤ／ｈｕマウス。
11. 【請求項１１】　　前記組織が胎児胸腺及び肝臓の組合
    せである請求項１０記載のＳＣＩＤ／ｈｕマウス。
12. 【請求項１２】　　前記組織が粘膜組織である請求項１
    ０記載のＳＣＩＤ／ｈｕマウス。
13. 【請求項１３】　　前記組織が骨髄である請求項１０記
    載のＳＣＩＤ／ｈｕマウス。
14. 【請求項１４】　　前記病原体がサイトメガロウィルス
    である請求項１０記載のＳＣＩＤ／ｈｕマウス。