JPH0424556A - Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット - Google Patents
Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキットInfo
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- JPH0424556A JPH0424556A JP12815090A JP12815090A JPH0424556A JP H0424556 A JPH0424556 A JP H0424556A JP 12815090 A JP12815090 A JP 12815090A JP 12815090 A JP12815090 A JP 12815090A JP H0424556 A JPH0424556 A JP H0424556A
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野］
本発明はヒトＩＬ−６の化学的測定方法及びそのための
キットに関するものである。
キットに関するものである。
インターロイキン−６（ＢＳＦ ２ ／以下ＩＬ−６と
略す）は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の増
殖分化に関与しているタンパク質である。さらにＩ Ｌ
−６の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である
可能性が報告されている（厚木、７４． ｐｌ、 １９
８９年参照）。
略す）は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の増
殖分化に関与しているタンパク質である。さらにＩ Ｌ
−６の異常産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である
可能性が報告されている（厚木、７４． ｐｌ、 １９
８９年参照）。
生体内で多様な生理活性を強く発揮するＩＬ−６の生理
的濃度を知ることは、各種疾患の新しい診断マーカーと
して期待されている。Ｉ Ｌ−６の生物活性測定法とし
ては、１１００ｆ／ｄのＩ Ｌ−６が測定可能な高感度
のものが報告されている（Ｔ。
的濃度を知ることは、各種疾患の新しい診断マーカーと
して期待されている。Ｉ Ｌ−６の生物活性測定法とし
ては、１１００ｆ／ｄのＩ Ｌ−６が測定可能な高感度
のものが報告されている（Ｔ。
Ｍａｔｓｕｄａ ら、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｎｕｎｏｌ、
、 ＩＬ ｐ９５Ｌ １９８８年参照）、シかしながら
この方法は、多数の検体を迅速、かつ簡単に測定するこ
とができないという欠点を有する。一方、これまで報告
されたＩＬ−６の免疫化学的測定法では、組換え体（リ
コンビナント）ＩＬ−６を各種動物に免疫して得た抗体
を用いている。従って、血液中のＩ Ｌ−６がα２−マ
クログロブリンと結合して存在しているという報告（ｉ
Ｊａｔｓｕｄａら、Ｊ、Ｉ鵬ａ＋ｎｕｎｏ１．、１４２
． ｐ１４Ｂ）にあるようにリコンビナントＩ Ｌ−６
と異なる形状で存在すると予想される生体試料中のＩＬ
−６の濃度を高い精度で測定できない危険性がある。
、 ＩＬ ｐ９５Ｌ １９８８年参照）、シかしながら
この方法は、多数の検体を迅速、かつ簡単に測定するこ
とができないという欠点を有する。一方、これまで報告
されたＩＬ−６の免疫化学的測定法では、組換え体（リ
コンビナント）ＩＬ−６を各種動物に免疫して得た抗体
を用いている。従って、血液中のＩ Ｌ−６がα２−マ
クログロブリンと結合して存在しているという報告（ｉ
Ｊａｔｓｕｄａら、Ｊ、Ｉ鵬ａ＋ｎｕｎｏ１．、１４２
． ｐ１４Ｂ）にあるようにリコンビナントＩ Ｌ−６
と異なる形状で存在すると予想される生体試料中のＩＬ
−６の濃度を高い精度で測定できない危険性がある。
Ｂｌｏｏｄ。
従って本発明は、生物活性を有する限り、すなわちＩＬ
−６レセプターと結合する性質を有する限り、いかなる
形状のＩ Ｌ−６にも適用できるＩ Ｌ−６の化学的測
定法、及びその方法に使用するためのキットを提供しよ
うとするものである。
−６レセプターと結合する性質を有する限り、いかなる
形状のＩ Ｌ−６にも適用できるＩ Ｌ−６の化学的測
定法、及びその方法に使用するためのキットを提供しよ
うとするものである。
本発明者らは前記の課題を解決すべく種々検討した結果
、Ｉ Ｌ−６レセプターを用いることにより、リコンビ
ナントＩ Ｌ−６を動物に免疫して得た抗体を用いずに
、数百ｐｇ／−の濃度のヒトＩＬ６を測定することがで
きるという新しい知見を得、これに基いて本発明を完成
した。
、Ｉ Ｌ−６レセプターを用いることにより、リコンビ
ナントＩ Ｌ−６を動物に免疫して得た抗体を用いずに
、数百ｐｇ／−の濃度のヒトＩＬ６を測定することがで
きるという新しい知見を得、これに基いて本発明を完成
した。
従って本発明は、ヒトＩＬ−６レセプターを固定した固
体支持体を標識されたヒトＩ Ｌ−６及び分析検体と接
触せしめ、そして該ヒト■Ｌ−６レセプターを介して固
体支持体に結合した標識されたヒトＩＬ−６の量又は固
体支持体に結合しなかった標識されたＩＬ−６の量を測
定し、この測定値に基いて検体中のＩＬ−６の存否又は
量を決定することを特徴とする検体中のＩＬ−６の検出
又は測定方法を提供する。
体支持体を標識されたヒトＩ Ｌ−６及び分析検体と接
触せしめ、そして該ヒト■Ｌ−６レセプターを介して固
体支持体に結合した標識されたヒトＩＬ−６の量又は固
体支持体に結合しなかった標識されたＩＬ−６の量を測
定し、この測定値に基いて検体中のＩＬ−６の存否又は
量を決定することを特徴とする検体中のＩＬ−６の検出
又は測定方法を提供する。
本発明はさらに、ヒトＩ Ｌ−６レセプターを固定した
固体支持体を分析検体と接触せしめることにより該分析
検体中のヒトＩＬ−６を該Ｉ Ｌ−６レセプターを介し
て固体支持体に結合せしめ、そして固体支持体に結合し
たＩＬ−６を測定することを特徴とするヒトＩＬ−６の
検出又は測定方法を提供する。
固体支持体を分析検体と接触せしめることにより該分析
検体中のヒトＩＬ−６を該Ｉ Ｌ−６レセプターを介し
て固体支持体に結合せしめ、そして固体支持体に結合し
たＩＬ−６を測定することを特徴とするヒトＩＬ−６の
検出又は測定方法を提供する。
本発明はまた、前記第一の方法を実施するためのキット
であって、ヒトＩ Ｌ−６レセプターを固定した固体支
持体及び標識されたヒトＩＬ−６を含むことを特徴とす
るキットを提供する。
であって、ヒトＩ Ｌ−６レセプターを固定した固体支
持体及び標識されたヒトＩＬ−６を含むことを特徴とす
るキットを提供する。
本発明はさらに、前記第二の方法を実施するためのキッ
トであって、ヒトＩＬ−６レセプターを固定した固体支
持体及び抗ヒト Ｉ Ｌ−６抗体を含むことを特徴とす
るキットを提供する。
トであって、ヒトＩＬ−６レセプターを固定した固体支
持体及び抗ヒト Ｉ Ｌ−６抗体を含むことを特徴とす
るキットを提供する。
１、 ＩＬ−６の化学的測定法
ＩＬ−６の化学的測定法は、ヒト血清、尿、その他例え
ば関節液等中に含まれるＩＬ−６の生理的濃度、ヒト細
胞を培養したときの培養上清中のＩＬ−６１度を正確か
つ迅速に測定することを目的としている。
ば関節液等中に含まれるＩＬ−６の生理的濃度、ヒト細
胞を培養したときの培養上清中のＩＬ−６１度を正確か
つ迅速に測定することを目的としている。
本発明の測定方法には、固体支持体に固定されたＩＬ−
６レセプターと、Ｉ Ｌ−６との特異的結合反応を用い
る種々の方法が含まれる。その第一の態様においては、
固体支持体に固定されたＩＬ６レセプターに、標識され
たＩＬ−６と分析検体中のＩＬ−６とを競争的に結合せ
しめ、固体支持体にＩ Ｌ−６レセプターを介して結合
した標識化ＩＬ−６の量又は結合しないで反応溶液中に
残った標識化ＩＬ−６の量を測定し、この測定値に基い
て検体中のＩＬ−６の量（又は濃度）を決定する。第二
の態様によれば、固体支持体に固定されたＩＬ−６レセ
プターに分析検体中のＩ Ｌ−６を結合せしめ、この結
合したＩＬ−６の量を常法により測定する。
６レセプターと、Ｉ Ｌ−６との特異的結合反応を用い
る種々の方法が含まれる。その第一の態様においては、
固体支持体に固定されたＩＬ６レセプターに、標識され
たＩＬ−６と分析検体中のＩＬ−６とを競争的に結合せ
しめ、固体支持体にＩ Ｌ−６レセプターを介して結合
した標識化ＩＬ−６の量又は結合しないで反応溶液中に
残った標識化ＩＬ−６の量を測定し、この測定値に基い
て検体中のＩＬ−６の量（又は濃度）を決定する。第二
の態様によれば、固体支持体に固定されたＩＬ−６レセ
プターに分析検体中のＩ Ｌ−６を結合せしめ、この結
合したＩＬ−６の量を常法により測定する。
いずれの態様においても、まずＩ Ｌ−６レセプターを
固体支持体に固定する。この固体支持体としては、マイ
クロタイタープレート、各種のビーズ状の例えばポリス
チレン、ポリプロピレン等のプラスチック製、金属セラ
ミックス等の無機物質製等の免疫測定法において常用さ
れている支持体を用いることができる。ＩＬ−６レセプ
ターの固体支持体への固定に際しては、Ｉ Ｌ−６レセ
プターを直接固定してもよいし、Ｉ Ｌ−６レセプター
と結合する物質、例えばＩＬ−６レセプターに対する抗
体をまず固定し、それからＩ Ｌ−６レセプターを結合
させてもよい。ＩＬ−６レセプターやＩ Ｌ−６レセプ
ターに対する抗体の固定は常法に従って行うことができ
る。例えば、ＰＢＳ溶液にこれらの蛋白質を例えば２
Ａｒ／ｄの濃度で溶解し、プレートのウェルに１００１
１１ずつ加え、−晩装置しておけばよい。
固体支持体に固定する。この固体支持体としては、マイ
クロタイタープレート、各種のビーズ状の例えばポリス
チレン、ポリプロピレン等のプラスチック製、金属セラ
ミックス等の無機物質製等の免疫測定法において常用さ
れている支持体を用いることができる。ＩＬ−６レセプ
ターの固体支持体への固定に際しては、Ｉ Ｌ−６レセ
プターを直接固定してもよいし、Ｉ Ｌ−６レセプター
と結合する物質、例えばＩＬ−６レセプターに対する抗
体をまず固定し、それからＩ Ｌ−６レセプターを結合
させてもよい。ＩＬ−６レセプターやＩ Ｌ−６レセプ
ターに対する抗体の固定は常法に従って行うことができ
る。例えば、ＰＢＳ溶液にこれらの蛋白質を例えば２
Ａｒ／ｄの濃度で溶解し、プレートのウェルに１００１
１１ずつ加え、−晩装置しておけばよい。
次に、前記第一の態様によればこの固定されたＩ Ｌ−
６レセプターに、分析検体と標識されたＩ Ｌ−６とを
一定の割合で混合したものを接触せしめる。ＩＬ−６の
標識としては、 Ｉｔｓ ｌ 、 ３５３等が例示でき
る０分析検体中のＩ Ｌ−６と標識されたＩ Ｌ−６は
競争的にＩＬ−６レセプターに結合するので、ＩＬ−６
レセプターに結合した標識化ＩＬ−６の量又は結合しな
かった標識化ＩＬ−６の量を測定することにより、分析
検体中のＩＬ−６１度を測定するのが本発明の特徴であ
る。上記標識ＩＬ−６の測定方法としては、ｌ！ＳＩ標
識Ｉ Ｌ−６の場合は、一定時間のＩ Ｌ−６と！Ｌ６
レセプターの結合反応後に支持体を通常の溶液で洗浄し
、支持体の放射能をγカウンターで測定することが例示
できる。″′Ｓ標識ＩＬ−６の場合も同様に測定するこ
とができる。
６レセプターに、分析検体と標識されたＩ Ｌ−６とを
一定の割合で混合したものを接触せしめる。ＩＬ−６の
標識としては、 Ｉｔｓ ｌ 、 ３５３等が例示でき
る０分析検体中のＩ Ｌ−６と標識されたＩ Ｌ−６は
競争的にＩＬ−６レセプターに結合するので、ＩＬ−６
レセプターに結合した標識化ＩＬ−６の量又は結合しな
かった標識化ＩＬ−６の量を測定することにより、分析
検体中のＩＬ−６１度を測定するのが本発明の特徴であ
る。上記標識ＩＬ−６の測定方法としては、ｌ！ＳＩ標
識Ｉ Ｌ−６の場合は、一定時間のＩ Ｌ−６と！Ｌ６
レセプターの結合反応後に支持体を通常の溶液で洗浄し
、支持体の放射能をγカウンターで測定することが例示
できる。″′Ｓ標識ＩＬ−６の場合も同様に測定するこ
とができる。
第二の態様においては、Ｉ Ｌ−６レセプターを固定し
た固体支持体を分析検体と共にインキュベートし、検体
中に存在するｆ Ｌ−６を固体支持体上のＩＬ−６レセ
プターに結合させる。次に固体支持体に結合したＩＬ−
６の量を常法に従って測定する。この測定は種々の方法
により行うことができる。例えばＩＬ−６に対するウサ
ギ由来抗体を、固体支持体に結合したＩＬ−６に結合せ
しめ、次に、ウサギイムノグロブリンに対するヒツジ由
来抗体であって標識されているものを、固体支持体に結
合したウサギ由来抗体ＩＬ−６抗体と結合せしめる。ヒ
ツジ由来抗体を標識する物質としては、例えばアルカリ
ホスファターゼ、西洋ワサビパーオキシダーゼ、β−Ｄ
−ガラクトシダーゼ等の酵素、ビチオン等を用いること
ができ、これらの標識の検出のためには標識の種類に応
じて既知の検出方法を用いることができる。これらの標
識物質をその検出方法としては、例えば免疫測定法にお
いて知られている任意の手段を用いることができる。
た固体支持体を分析検体と共にインキュベートし、検体
中に存在するｆ Ｌ−６を固体支持体上のＩＬ−６レセ
プターに結合させる。次に固体支持体に結合したＩＬ−
６の量を常法に従って測定する。この測定は種々の方法
により行うことができる。例えばＩＬ−６に対するウサ
ギ由来抗体を、固体支持体に結合したＩＬ−６に結合せ
しめ、次に、ウサギイムノグロブリンに対するヒツジ由
来抗体であって標識されているものを、固体支持体に結
合したウサギ由来抗体ＩＬ−６抗体と結合せしめる。ヒ
ツジ由来抗体を標識する物質としては、例えばアルカリ
ホスファターゼ、西洋ワサビパーオキシダーゼ、β−Ｄ
−ガラクトシダーゼ等の酵素、ビチオン等を用いること
ができ、これらの標識の検出のためには標識の種類に応
じて既知の検出方法を用いることができる。これらの標
識物質をその検出方法としては、例えば免疫測定法にお
いて知られている任意の手段を用いることができる。
２、ＩＬ−６レセプター
Ｉ Ｌ−６レセプターは、生体内でＩ Ｌ−６と特異的
に結合し、ＩＬ−６のシグナル伝達に関与する細胞膜上
のタンパク質である。本発明に適当なＩＬ−６レセプタ
ーは、ヒト由来の細胞等がら生化学的方法で精製しても
よいし、遺伝子工学的に製作することもできる。該タン
パク質は、ＩＬ６との結合に寄与するアミノ酸配列部分
以外のアミノ酸配列部分が置換、欠損、挿入により変化
を受けたものであってもよい。このようなＩＬ−６レセ
プターとして、細胞膜から離脱した可溶性ＩＬ−６レセ
プター、すなわちＩ Ｌ、−６レセプタ一細胞外部分が
例示できる。なお、Ｉ Ｌ−６レセプターについては特
願平１−９７７４号明細書にそのアミノ酸−次構造、Ｄ
ＮＡ等が詳細に開示されており、さらにその具体的な製
造方法ついても特願平！ −２７１８６２号明細書に詳
細に開示されている。
に結合し、ＩＬ−６のシグナル伝達に関与する細胞膜上
のタンパク質である。本発明に適当なＩＬ−６レセプタ
ーは、ヒト由来の細胞等がら生化学的方法で精製しても
よいし、遺伝子工学的に製作することもできる。該タン
パク質は、ＩＬ６との結合に寄与するアミノ酸配列部分
以外のアミノ酸配列部分が置換、欠損、挿入により変化
を受けたものであってもよい。このようなＩＬ−６レセ
プターとして、細胞膜から離脱した可溶性ＩＬ−６レセ
プター、すなわちＩ Ｌ、−６レセプタ一細胞外部分が
例示できる。なお、Ｉ Ｌ−６レセプターについては特
願平１−９７７４号明細書にそのアミノ酸−次構造、Ｄ
ＮＡ等が詳細に開示されており、さらにその具体的な製
造方法ついても特願平！ −２７１８６２号明細書に詳
細に開示されている。
３、 測定キット
本発明の第一の態様の方法を実施するためのキットは適
当な方法でＩＬ−６が固定された固体支持体及び標識さ
れたＩＬ−６を含む。このキットはさらに検体稀釈用緩
衝液等を含むことができる。
当な方法でＩＬ−６が固定された固体支持体及び標識さ
れたＩＬ−６を含む。このキットはさらに検体稀釈用緩
衝液等を含むことができる。
また、第二の態様の方法を実施するためのキットは適当
な方法でＩＬ−６が固定された固体支持体及びウサギ、
ラット等の動物由来の抗Ｉ Ｌ−６抗体を含む。このキ
ットはさらに、該動物抗体に対する第二の抗体であって
標識されたものを含むことができる。しかしながらこの
第二抗体はユニバーサルな標識抗体として別途入手する
ことが容易であるから、キットに含める必要はない。こ
のキットにさらに、検体の稀釈用等の緩衝液、標識を検
出するための試薬等を含むことができる。
な方法でＩＬ−６が固定された固体支持体及びウサギ、
ラット等の動物由来の抗Ｉ Ｌ−６抗体を含む。このキ
ットはさらに、該動物抗体に対する第二の抗体であって
標識されたものを含むことができる。しかしながらこの
第二抗体はユニバーサルな標識抗体として別途入手する
ことが容易であるから、キットに含める必要はない。こ
のキットにさらに、検体の稀釈用等の緩衝液、標識を検
出するための試薬等を含むことができる。
以下本発明をさらに詳細に説明するために実施例を示す
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
が、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
抗マウスイムノグロブリン抗体の結合した、ＴＢＳ緩衝
液に懸濁されたＳＰＡビーズ（アマ−ジャム）５００■
に、マウス由来抗ヒトＩＬ−６レセプター・モノクロー
ナル抗体であるＭＴｌＢ（Ｙ、旧ｒａ ｔａら、Ｊ、Ｉ
ｓｍｕｎｏｌ、、 １４３． ｐ２９００．１９８９年
参照）を２゜ｎ加え、２℃で一晩回転させた。翌日、Ｐ
ＢＳで洗浄して未結合のＭＴｌＢを除去した後、ビーズ
を１゜ｄのＰＢＳに懸濁した。次に、２０ＪＰｇの可溶
性ＩＬ−６レセプター（平成１年特願第２７１８６５号
参照）を加え、２°Ｃで４時間放置した。続いて、アッ
セイ用の緩衝液（ＰＢＳｌｏ、１％ＢＳＡ）でビーズを
洗い、未結合の可溶性Ｉ Ｌ−６レセプターを除去した
後、１０戚の同緩衝液に懸濁した。５０１Ｉ！の”’１
４Ｌ−６（３００００ｃｐｍ）、５０ＩＪ１の濃度既知
のＩＬ−６？Ｖ液、１００１１！の上記の処理をしたビ
ーズ、１００＃のアッセイ用緩衝液を混合し、そして”
５Ｉ−ＩＬ−６結合によりＳＰＡビーズより生じた光を
β−シンチレーションカウンターで測定した。
液に懸濁されたＳＰＡビーズ（アマ−ジャム）５００■
に、マウス由来抗ヒトＩＬ−６レセプター・モノクロー
ナル抗体であるＭＴｌＢ（Ｙ、旧ｒａ ｔａら、Ｊ、Ｉ
ｓｍｕｎｏｌ、、 １４３． ｐ２９００．１９８９年
参照）を２゜ｎ加え、２℃で一晩回転させた。翌日、Ｐ
ＢＳで洗浄して未結合のＭＴｌＢを除去した後、ビーズ
を１゜ｄのＰＢＳに懸濁した。次に、２０ＪＰｇの可溶
性ＩＬ−６レセプター（平成１年特願第２７１８６５号
参照）を加え、２°Ｃで４時間放置した。続いて、アッ
セイ用の緩衝液（ＰＢＳｌｏ、１％ＢＳＡ）でビーズを
洗い、未結合の可溶性Ｉ Ｌ−６レセプターを除去した
後、１０戚の同緩衝液に懸濁した。５０１Ｉ！の”’１
４Ｌ−６（３００００ｃｐｍ）、５０ＩＪ１の濃度既知
のＩＬ−６？Ｖ液、１００１１！の上記の処理をしたビ
ーズ、１００＃のアッセイ用緩衝液を混合し、そして”
５Ｉ−ＩＬ−６結合によりＳＰＡビーズより生じた光を
β−シンチレーションカウンターで測定した。
第１図は、検体中のｆ Ｌ−６１度の増加に伴い、結合
した”’Ｉ−ＩＬ−６が減少すること、すなわち、本方
法により検体中のＩ Ｌ−６濃度が測定できることを示
す。
した”’Ｉ−ＩＬ−６が減少すること、すなわち、本方
法により検体中のＩ Ｌ−６濃度が測定できることを示
す。
ｌｌｔｇ／−の上記？’１ＴＩ８抗体を含むＰＢＳを９
６穴のマイクロタイタープレートに１ウエルあたり １
００４加え、１晩４°Ｃで放置した。洗浄後、１ｏｏＪ
ｌｌの１％ＢＳＡを加え、２時間室温で放置した。ＰＢ
Ｓｌｏ、０５％Ｔｗｅｅｎ ２０により洗浄後、ＩＬ−
６レセプターを分泌しているＣＨＯ細胞の培養上清を加
え、２時間室温で放置した。 ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔ
ｗｅｅｎ２０により洗浄後、５０ｍの”’Ｉ−ＩＬ−６
（３００００ｃｐｍ）、及び５０Ｊの濃度既知のＩＬ−
６溶液を混合したものを各ウェルに加え、２時間室温で
放置した。
６穴のマイクロタイタープレートに１ウエルあたり １
００４加え、１晩４°Ｃで放置した。洗浄後、１ｏｏＪ
ｌｌの１％ＢＳＡを加え、２時間室温で放置した。ＰＢ
Ｓｌｏ、０５％Ｔｗｅｅｎ ２０により洗浄後、ＩＬ−
６レセプターを分泌しているＣＨＯ細胞の培養上清を加
え、２時間室温で放置した。 ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔ
ｗｅｅｎ２０により洗浄後、５０ｍの”’Ｉ−ＩＬ−６
（３００００ｃｐｍ）、及び５０Ｊの濃度既知のＩＬ−
６溶液を混合したものを各ウェルに加え、２時間室温で
放置した。
ＰＢＳ／ ０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０により洗浄後、
各ウェルの放射能をＴ〜カウンターで測定した。
各ウェルの放射能をＴ〜カウンターで測定した。
第２図は、検体中のＩＬ−６濃度の増加に伴い、プレー
トの残存放射能が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のＩ Ｌ−６濃度が測定できることを示す。
トの残存放射能が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のＩ Ｌ−６濃度が測定できることを示す。
２Ｎ／ｄの上記ＭＴ１Ｂ抗体を含むＰＢＳを９６穴のマ
イクロタイタープレートに１ウエルあたり１００Ｉ加え
、１晩４°Ｃで放置した。ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔｗｅｅ
ｎ２０により洗浄後、１００Ｊ１１の１％ＢＳＡを加え
、２時間室温で放置した。 ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔｗ
ｅｅｎ ２０ ニより洗浄後、ＩＬ−６レセプターを分
泌しているＣＨＯ細胞の培養上清を加え、２時間室温で
放置した。ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔｗｅｅｎ ２０により
洗浄後、濃度既知のＩＬ−６溶液を加え、２時間室温で
放置した。洗浄後、５賄／−のウサギ由来抗Ｉ Ｌ−６
ポリクロ一ナル抗体を１ウエルあたり １００！ｉｌ加
え、２時間室温で放置した。ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔｗｅ
ｅｎ ２０により洗浄後、１０００倍稀釈したアルカリ
フォスフォターゼ結合ヒツジ由来抗ウサギイムノグロブ
リン抗体（コスモバイオ）をｌウェルあたり１００ＩＪ
Ｉ加え、２時間室温で放置した。洗浄後、１■／＃ｌｊ
！のアルカリフォスフォターゼ基質（コスモバイオ）を
１ウエルあたり１００ｍ加え、３７℃で約３０分間放置
した後、４０５ｒ＋ｎ＋の発色を測定した。
イクロタイタープレートに１ウエルあたり１００Ｉ加え
、１晩４°Ｃで放置した。ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔｗｅｅ
ｎ２０により洗浄後、１００Ｊ１１の１％ＢＳＡを加え
、２時間室温で放置した。 ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔｗ
ｅｅｎ ２０ ニより洗浄後、ＩＬ−６レセプターを分
泌しているＣＨＯ細胞の培養上清を加え、２時間室温で
放置した。ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔｗｅｅｎ ２０により
洗浄後、濃度既知のＩＬ−６溶液を加え、２時間室温で
放置した。洗浄後、５賄／−のウサギ由来抗Ｉ Ｌ−６
ポリクロ一ナル抗体を１ウエルあたり １００！ｉｌ加
え、２時間室温で放置した。ＰＢＳｌｏ、０５％Ｔｗｅ
ｅｎ ２０により洗浄後、１０００倍稀釈したアルカリ
フォスフォターゼ結合ヒツジ由来抗ウサギイムノグロブ
リン抗体（コスモバイオ）をｌウェルあたり１００ＩＪ
Ｉ加え、２時間室温で放置した。洗浄後、１■／＃ｌｊ
！のアルカリフォスフォターゼ基質（コスモバイオ）を
１ウエルあたり１００ｍ加え、３７℃で約３０分間放置
した後、４０５ｒ＋ｎ＋の発色を測定した。
第３図は、検体中のＩＬ−６濃度の増加に伴い、強く発
色すること、すなわち、本方法により検体中のＩＬ−６
ｆｉ度が測定できることを示す。
色すること、すなわち、本方法により検体中のＩＬ−６
ｆｉ度が測定できることを示す。
本発明で提供されるＩ Ｌ−６の化学的測定法は、生物
活性を有する限り、すなわちＩ Ｌ−６レセプターと結
合する性質を有する限り、いかなる形状のＩＬ−６をも
高感度で迅速に、しかも多検体を同時に測定することを
可能にした。この方法は、各疾患でのＩ Ｌ−６の生理
的濃度を調べたり、Ｉ Ｌ−６の疾患における役割を解
明したり、他の薬剤の効果を調べるのに有用である。さ
らにこの方法は、ＩＬ−６とＩＬ−６レセブターの結合
を阻害する物質を、高感度で迅速に探索することに用い
ることも可能であり、Ｉ Ｌ−６の阻害剤開発にも有用
である。
活性を有する限り、すなわちＩ Ｌ−６レセプターと結
合する性質を有する限り、いかなる形状のＩＬ−６をも
高感度で迅速に、しかも多検体を同時に測定することを
可能にした。この方法は、各疾患でのＩ Ｌ−６の生理
的濃度を調べたり、Ｉ Ｌ−６の疾患における役割を解
明したり、他の薬剤の効果を調べるのに有用である。さ
らにこの方法は、ＩＬ−６とＩＬ−６レセブターの結合
を阻害する物質を、高感度で迅速に探索することに用い
ることも可能であり、Ｉ Ｌ−６の阻害剤開発にも有用
である。
第１図は、ＩＬ−６を含まない検体を実施例１に示す方
法で測定したときにＳＰＡビーズに結合した”’Ｉ−Ｉ
Ｌ−６ｉ１を１００として、大腸菌由来リコンビナン１
−ＩＬ−６を各種濃度で含む検体を同方法で測定したと
きのＳＰＡビーズに結合した＋２５１−ＩＬ−６量を示
す。 第２図は、ＩＬ−６を含まない検体を実施例２に示す方
法で測定したときにプレートに残存した”５Ｉ−ＩＬ−
６量を１００として、大腸菌由来リコンビナン）ＩＬ−
６を各種濃度で含む検体を同方法で測定したときのプレ
ートに残存した”’Ｉ−ＩＬ−６１を示す。 第３図は、大腸菌由来リコンビナントＩ Ｌ−６を各種
濃度で含む検体を実施例３に示す方法で測定したときの
、プレートの発色を示す。
法で測定したときにＳＰＡビーズに結合した”’Ｉ−Ｉ
Ｌ−６ｉ１を１００として、大腸菌由来リコンビナン１
−ＩＬ−６を各種濃度で含む検体を同方法で測定したと
きのＳＰＡビーズに結合した＋２５１−ＩＬ−６量を示
す。 第２図は、ＩＬ−６を含まない検体を実施例２に示す方
法で測定したときにプレートに残存した”５Ｉ−ＩＬ−
６量を１００として、大腸菌由来リコンビナン）ＩＬ−
６を各種濃度で含む検体を同方法で測定したときのプレ
ートに残存した”’Ｉ−ＩＬ−６１を示す。 第３図は、大腸菌由来リコンビナントＩ Ｌ−６を各種
濃度で含む検体を実施例３に示す方法で測定したときの
、プレートの発色を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヒトＩＬ−６レセプターを固定した固体支持体を標
識されたヒトＩＬ−６及び分析検体と接触せしめ、そし
て該ヒトＩＬ−６レセプターを介して固体支持体に結合
した標識されたヒトＩＬ−６の量又は固体支持体に結合
しなかった標識されたＩＬ−６の量を測定し、この測定
値に基いて検体中のＩＬ−６の存否又は量を決定するこ
とを特徴とする検体中のＩＬ−６の検出又は測定方法。 ２、ヒトＩＬ−６レセプターを固定した固体支持体を分
析検体と接触せしめることにより該分析検体中のヒトＩ
Ｌ−６を該ＩＬ−６レセプターを介して固体支持体に結
合せしめ、そして固体支持体に結合したＩＬ−６を測定
することを特徴とするヒトＩＬ−６の検出又は測定法。 ３、固体支持体に結合したＩＬ−６の測定を抗ＩＬ−６
抗体を用いて行うことを特徴とする請求項２に記載の方
法。 ４、請求項１に記載の方法を実施するためのキットであ
って、ヒトＩＬ−６レセプターを固定した固体支持体及
び標識されたヒトＩＬ−６を含むことを特徴とするキッ
ト。 ５、請求項２又は３に記載の方法を実施するためのキッ
トであって、ヒトＩＬ−６レセプターを固定した固体支
持体及び抗ヒトＩＬ−６抗体を含むことを特徴とするキ
ット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2128150A JP3045172B2 (ja) | 1990-05-19 | 1990-05-19 | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2128150A JP3045172B2 (ja) | 1990-05-19 | 1990-05-19 | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0424556A true JPH0424556A (ja) | 1992-01-28 |
| JP3045172B2 JP3045172B2 (ja) | 2000-05-29 |
Family
ID=14977625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2128150A Expired - Lifetime JP3045172B2 (ja) | 1990-05-19 | 1990-05-19 | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3045172B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1306963C (zh) * | 1994-10-21 | 2007-03-28 | 岸本忠三 | 用于治疗il－6产生所致疾病的药物组合物 |
-
1990
- 1990-05-19 JP JP2128150A patent/JP3045172B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1306963C (zh) * | 1994-10-21 | 2007-03-28 | 岸本忠三 | 用于治疗il－6产生所致疾病的药物组合物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3045172B2 (ja) | 2000-05-29 |
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