JPH0418082A - アミノ酸のケイ光性誘導体製造法 - Google Patents
アミノ酸のケイ光性誘導体製造法Info
- Publication number
- JPH0418082A JPH0418082A JP12100590A JP12100590A JPH0418082A JP H0418082 A JPH0418082 A JP H0418082A JP 12100590 A JP12100590 A JP 12100590A JP 12100590 A JP12100590 A JP 12100590A JP H0418082 A JPH0418082 A JP H0418082A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- fluorescent
- production
- amino
- formula
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 28
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 7
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- -1 4-isothiocyanatoethylamino-7-nitrobenzofurazan Chemical compound 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 abstract description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 abstract description 2
- OOEJYXQPMNDIHJ-UHFFFAOYSA-N 4-(2-isothiocyanatoethyl)-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-5-amine Chemical compound S=C=NCCC1=C(N)C=C([N+]([O-])=O)C2=NON=C21 OOEJYXQPMNDIHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 238000004452 microanalysis Methods 0.000 abstract 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical class C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000004454 trace mineral analysis Methods 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- ZCVAGTPWBAZXAL-UHFFFAOYSA-N 4-nitro-2,1,3-benzoxadiazole Chemical group [O-][N+](=O)C1=CC=CC2=NON=C12 ZCVAGTPWBAZXAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VFTOHJFKIJLYKN-UHFFFAOYSA-N 7-nitro-9h-fluoren-2-ol Chemical group [O-][N+](=O)C1=CC=C2C3=CC=C(O)C=C3CC2=C1 VFTOHJFKIJLYKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- LJSOLTRJEQZSHV-UHFFFAOYSA-L potassium;sodium;hydron;hydroxide;phosphate Chemical compound [OH-].[Na+].[K+].OP(O)([O-])=O LJSOLTRJEQZSHV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、新規でを用なアミノ酸ケイ光性誘導体に関し
、全２０種類のアミノ酸の微量分析に適したアミノ酸の
ケイ光性誘導体製造法に関するものである。
、全２０種類のアミノ酸の微量分析に適したアミノ酸の
ケイ光性誘導体製造法に関するものである。
本発明は、適当な波長領域に吸収およびケイ光を有さな
い全２０種類の天然アミノ酸の微量分析を目的としたア
ミノ酸の新規なケイ光性誘導体とその製造法に関するも
のである。
い全２０種類の天然アミノ酸の微量分析を目的としたア
ミノ酸の新規なケイ光性誘導体とその製造法に関するも
のである。
従来より、４−クロロ−７−ニドロヘンゾフラザンによ
るアミノ酸のケイ光性誘導体製造法はアミノ酸分析によ
く用いられている。これは、アミノ酸を数Ｐｍｏｌｅ
レベルで検出できる方法として注目されていた。 （Ｙ
Ｊａｔａｎａｂｅ、 Ｋ、Ｉｍａｉ、 ＡｎａｌＢｉｏ
ｃｈｅｍ、１１６ ４７１ （１９８１））〔発明が解
決しようとする課題〕 しかし、上記の方法では、アミノ酸の一つであるトリプ
トファンの誘導体は非ケイ光性であり、全アミノ酸分析
には適さない。そのため、新たな誘導体製造法が必要と
されている。
るアミノ酸のケイ光性誘導体製造法はアミノ酸分析によ
く用いられている。これは、アミノ酸を数Ｐｍｏｌｅ
レベルで検出できる方法として注目されていた。 （Ｙ
Ｊａｔａｎａｂｅ、 Ｋ、Ｉｍａｉ、 ＡｎａｌＢｉｏ
ｃｈｅｍ、１１６ ４７１ （１９８１））〔発明が解
決しようとする課題〕 しかし、上記の方法では、アミノ酸の一つであるトリプ
トファンの誘導体は非ケイ光性であり、全アミノ酸分析
には適さない。そのため、新たな誘導体製造法が必要と
されている。
上記課題を解決するために、ケイ光母核であるニトロベ
ンゾフラザン環とアミノ酸の間の立体的距離を長くする
ように、エチル基を導入した。
ンゾフラザン環とアミノ酸の間の立体的距離を長くする
ように、エチル基を導入した。
上記のようにアミノ酸と発ケイ光母核の間の距離を長く
することによって、アミノ酸側鎖のケイ光性への影響を
低減することが可能となり、トリプトファン誘導体をも
ケイ光性にすることができる。
することによって、アミノ酸側鎖のケイ光性への影響を
低減することが可能となり、トリプトファン誘導体をも
ケイ光性にすることができる。
以下、実施例に基づいて本発明の詳細な説明する。
（１） アミノ酸のケイ光誘導体化操作。
０．０５Ｍ、リン酸二水素ナトリウム−水酸化カリウム
（ｐＨ１２，３） ２００ａ７に２．５ｍＭアミノ酸水
溶液１０ｐｌ（２５ｎｍｏｌｅ）を加えて試料溶液とす
る。この溶液にテトラヒドロフラン（Ｔ）ＩＰ） １５
０μ！を加え混和する。
（ｐＨ１２，３） ２００ａ７に２．５ｍＭアミノ酸水
溶液１０ｐｌ（２５ｎｍｏｌｅ）を加えて試料溶液とす
る。この溶液にテトラヒドロフラン（Ｔ）ＩＰ） １５
０μ！を加え混和する。
ついで１０１１１Ｍ４−イソチオシアナトエチルアミノ
−７−ニトロベンゾフラザンのＴＨＦ溶液５０ｐ／（５
００ｎｍｏｌｅ）を加える。室温に３０〜６０分間放置
し反応を終結させる。その後、５％酢酸を２００μｌ加
えて溶液のｐＨを弱酸性とする。
−７−ニトロベンゾフラザンのＴＨＦ溶液５０ｐ／（５
００ｎｍｏｌｅ）を加える。室温に３０〜６０分間放置
し反応を終結させる。その後、５％酢酸を２００μｌ加
えて溶液のｐＨを弱酸性とする。
上記操作法において、アミノ酸に対して誘導体化化合物
である４〜イソチオノアナトエチルアミノ−７−ニトロ
ベンゾフラザンは２０モル倍過剰に加えられており、ア
ミノ酸の７ミノ基とのカップリング反応は速やかに完結
する。
である４〜イソチオノアナトエチルアミノ−７−ニトロ
ベンゾフラザンは２０モル倍過剰に加えられており、ア
ミノ酸の７ミノ基とのカップリング反応は速やかに完結
する。
（ｉｉｌ ７−ニドロヘンゾフラザニルー４−アミノ
エチルチオカルバミルアミノ酸の検出。
エチルチオカルバミルアミノ酸の検出。
上記操作をアラニンについて行って得た反応生成物を高
速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）にかけ、ケイ光光度
法により検出した。その結果を図１に示す。図より明ら
かなように、室温下３０分間の条件でアラニンと４−イ
ソチオシアナトエチルアミノ−７−ニトロベンゾフラザ
ンのカンプリング反応は完結し、７−ニドロペンゾフラ
ザニルー４−アミノチルチオカルバミルアラニン（ピー
ク（ａ））として検出される。
速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）にかけ、ケイ光光度
法により検出した。その結果を図１に示す。図より明ら
かなように、室温下３０分間の条件でアラニンと４−イ
ソチオシアナトエチルアミノ−７−ニトロベンゾフラザ
ンのカンプリング反応は完結し、７−ニドロペンゾフラ
ザニルー４−アミノチルチオカルバミルアラニン（ピー
ク（ａ））として検出される。
また、残存するカップリング化合物（ピーク（Ｃ））と
その水との反応生成物（ピーク（ｂ））に相当する二つ
のピークが合わせて検出される。第３図（ａ）。
その水との反応生成物（ピーク（ｂ））に相当する二つ
のピークが合わせて検出される。第３図（ａ）。
（ｂ）、 （ｃ＋に示す物質が、それぞれピーク（ａｌ
、 Ｃｂｌ、 ｆｃｌに対応する。
、 Ｃｂｌ、 ｆｃｌに対応する。
ＨＰＬＣの溶離条件： カラム・・・・・・資生堂Ｃａ
ｐｃｅｌｌＰａｋ Ｃ＋ ｅ （４，６ｍｍ Ｘ ２５
０ｍｍ） 、溶媒−０，０１−リン６１１１衝液（ｐ）
１６．５） ： ＴＨＦ＝９９．４ ： ０．６（Ｖ／
Ｖ）。
ｐｃｅｌｌＰａｋ Ｃ＋ ｅ （４，６ｍｍ Ｘ ２５
０ｍｍ） 、溶媒−０，０１−リン６１１１衝液（ｐ）
１６．５） ： ＴＨＦ＝９９．４ ： ０．６（Ｖ／
Ｖ）。
流速・・・０．８ｍ／＋ｎｉｎ、カラム温度・・・５０
℃、検出波長・・・励起波長４７２ｎｍ、ケイ光波長５
３０ｎｍ本条件における７−ニドロヘンゾフラザニルー
４−アミノエチルチオカルバミルアラニンの検出限界は
、２００ｆｍｏｌｅ程度であり、アラニンの４−クロロ
−７−ニトロベンゾフラザン修飾体である４−７ラニル
ー７−ニトロペンゾフラザンの同条件下での検出限界と
ほぼ等しい。
℃、検出波長・・・励起波長４７２ｎｍ、ケイ光波長５
３０ｎｍ本条件における７−ニドロヘンゾフラザニルー
４−アミノエチルチオカルバミルアラニンの検出限界は
、２００ｆｍｏｌｅ程度であり、アラニンの４−クロロ
−７−ニトロベンゾフラザン修飾体である４−７ラニル
ー７−ニトロペンゾフラザンの同条件下での検出限界と
ほぼ等しい。
さらに、７−ニドロヘンゾフラザニルー４−アミンエチ
ルチオカルバミルトリプトファンの）ＩＰＬＣ分離のチ
ャートを第２図に示す。図より明らかなようにトリプト
ファン誘導体（ピーク（ｄ））が検出限界約５００ｆｍ
ｏｌｅレヘルで検出される。第３図＋ｄｌにピーク［ｄ
＋に対応する物質を示す。Ｉ（ＰＬＣ分析条件は、上記
記載条件のうち、溶離溶媒のみを０．０１Ｍ リン酸緩
衝液（ｐＨ６，５） ： Ｔｔ（Ｆ＝７５ ： ２５（
ｖ／ｖ）に変更したものを用いている。
ルチオカルバミルトリプトファンの）ＩＰＬＣ分離のチ
ャートを第２図に示す。図より明らかなようにトリプト
ファン誘導体（ピーク（ｄ））が検出限界約５００ｆｍ
ｏｌｅレヘルで検出される。第３図＋ｄｌにピーク［ｄ
＋に対応する物質を示す。Ｉ（ＰＬＣ分析条件は、上記
記載条件のうち、溶離溶媒のみを０．０１Ｍ リン酸緩
衝液（ｐＨ６，５） ： Ｔｔ（Ｆ＝７５ ： ２５（
ｖ／ｖ）に変更したものを用いている。
一方、４−ドリフトファニル−７−ニトロベンゾフラザ
ンは同条件下にて全く検出されない。
ンは同条件下にて全く検出されない。
本発明の主眼は、トリプトファンを含む全２０種類の天
然アミノ酸のケイ光誘導体の製造法の確立にあり、実施
例に示したように、７−ニトロへ７ゾフラザニル化法の
欠点を改善できた。そして、その検出限界は、約５００
ｆｍｏｌｅであり、アミノ酸の微量分析に適したアミノ
酸ケイ光誘導体であることも確認された。
然アミノ酸のケイ光誘導体の製造法の確立にあり、実施
例に示したように、７−ニトロへ７ゾフラザニル化法の
欠点を改善できた。そして、その検出限界は、約５００
ｆｍｏｌｅであり、アミノ酸の微量分析に適したアミノ
酸ケイ光誘導体であることも確認された。
したがって、本発明によるアミノ酸誘導体の製造法は分
析化学的価値が大である。
析化学的価値が大である。
第１図は７−ニドロペンゾフラザニルー４−アミノエチ
ルチオカルバミルアラニンのケイ光・ＨＰＬＣチャート
、第２図は７−ニドロヘンゾフ・ラグニル−４−フミノ
ユチルチオカルハミルトリプトフアンのケイ光・ＨＰＬ
Ｃのチャート、第３図は、第１図、第２図に示す各ピー
クに対応する物質の化学式を示す図である。 以上 出願人 セイコー電子工業株式会社 代理人 弁理士 林 敬 之 助 第１図 第２図 第３図
ルチオカルバミルアラニンのケイ光・ＨＰＬＣチャート
、第２図は７−ニドロヘンゾフ・ラグニル−４−フミノ
ユチルチオカルハミルトリプトフアンのケイ光・ＨＰＬ
Ｃのチャート、第３図は、第１図、第２図に示す各ピー
クに対応する物質の化学式を示す図である。 以上 出願人 セイコー電子工業株式会社 代理人 弁理士 林 敬 之 助 第１図 第２図 第３図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 アミノ酸（ａ）のアミノ基と４−イソチオシアナトエチ
ルアミノ−７−ニトロベンゾフラザン（ｂ）のカップリ
ング反応による下記一般式に示すアミノ酸ケイ光誘導体
（ｃ）の製造法。 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは各種アミノ酸側鎖である）
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12100590A JPH0418082A (ja) | 1990-05-10 | 1990-05-10 | アミノ酸のケイ光性誘導体製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12100590A JPH0418082A (ja) | 1990-05-10 | 1990-05-10 | アミノ酸のケイ光性誘導体製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0418082A true JPH0418082A (ja) | 1992-01-22 |
Family
ID=14800431
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12100590A Pending JPH0418082A (ja) | 1990-05-10 | 1990-05-10 | アミノ酸のケイ光性誘導体製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0418082A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2006059704A1 (ja) * | 2004-12-02 | 2008-06-05 | 株式会社ブリヂストン | 芯金レスゴムクロ−ラ |
-
1990
- 1990-05-10 JP JP12100590A patent/JPH0418082A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2006059704A1 (ja) * | 2004-12-02 | 2008-06-05 | 株式会社ブリヂストン | 芯金レスゴムクロ−ラ |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Schroeder et al. | [37] Monitoring specific protein-binding reactions with chemiluminescence | |
| Lebel | A high-sampling-rate automated continuous-flow fluorometric technique for the analysis of nanogram levels of histamine in biological samples | |
| Takahashi et al. | Isolation & characterization of malformin | |
| Kawauchi et al. | Reaction of Fluorescein-Isothiocynate with Proteins and Amino Acids: II. Preparation of Fluorescein-Thiohydantoin Amino Acids and Their Thin-layer Chromatography | |
| Lim et al. | High-performance liquid chromatography of naturally occurring 8-, 7-, 6-, 5-and 4-carboxylic porphyrin isomers | |
| Spurlin et al. | A ChemiluminesClent precolumn labelling reagent for high-performance liquid chromatography of amino acids | |
| JPH0418082A (ja) | アミノ酸のケイ光性誘導体製造法 | |
| CN110484243B (zh) | 一种反应型樟脑基汞离子荧光探针及其制备方法和应用 | |
| You et al. | Determination of amines using 2-(11H-benzo [a] carbazol-11-yl) ethyl chloroformate (BCEC-Cl) as labeling reagent by HPLC with fluorescence detection and identification with APCI/MS | |
| Staffeldt et al. | Determination of S-carboxymethyl-l-cysteine and some of its metabolites in urine and serum by high-performance liquid chromatography using fluorescent pre-column labelling | |
| CN113912673B (zh) | 一种芝麻来源的低苦味ace抑制肽及其制备方法和应用 | |
| Duchateau et al. | Enantioseparation of amino compounds by derivatization with o-phthalaldehyde and d-3-mercapto-2-methylpropionic acid | |
| CN110845320A (zh) | 一种联萘醛手性荧光探针及其制备方法和应用 | |
| US4865994A (en) | Detection method for amino acid derivatives | |
| EP0882767A4 (en) | DISAZO CONNECTIONS AND THEIR PRODUCTION PROCESS | |
| CN114835698A (zh) | 一种用于检测半胱氨酸的(二苯氨基)苯基黄酮类荧光探针及其制备方法 | |
| Robert et al. | Studies on aldehyde‐protein interactions. I. Reaction of amino acids with lower aldehydes | |
| You et al. | Application of 10‐ethyl‐acridine‐3‐sulfonyl chloride for HPLC determination of aliphatic amines in environmental water using fluorescence and APCI‐MS | |
| Toome et al. | A simple method for determining the absolute configuration of α-amino acids | |
| JPH0418083A (ja) | アミノ酸のケイ光性誘導体製造法 | |
| JPH04164075A (ja) | ケイ光性ベンゾフラザン誘導体とその製造方法 | |
| AU602508B2 (en) | Substituted 2,3-naphthalenedicarboxaldehydes | |
| Miller et al. | Reactions of 3, 6-bis (aminoxymethyl)-2, 5-piperazinedione with acid and alkali. Kinetic study | |
| CN107108465B (zh) | 快速标记的n-聚糖的液相色谱校准方法 | |
| Akasaka et al. | Fluorometric determination of sulfite with N-(9-acridinyl)-maleimide for high performance liquid chromatography |