JPH0411824A - カンゾウ属植物の増殖方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、我が国において甘味料ならびに生薬原料とし
て大量に利用、消費されているカンゾウ属植物の特定の
部位を組織培養することによって大量の苗条を増殖させ
るカンゾウ属植物の増殖方法に関する。

従来の技術と課題 カンゾウ属植物はマメ科に属し、中国、欧州等の乾燥地
帯においてのみ自生する多年生植物である。その根およ
び根茎を乾燥させたものは甘草と称し、漢方では古くか
ら鎮けい、緩和、鎮痛、鎮咳・去痰薬として汎用されて
おり、その主成分としてはトリテルペノイド系サポニン
であるグリチルリチン（Ｃ４２Ｈ１１２０，。）の存在
が知られている。

このグリチルリチンには抗アレルギー作用や副腎皮質ホ
ルモン様作用、さらに最近では抗エイズ作用などが認め
られており、医薬品として有用なものであることが知ら
れている。また、グリチルリチンは蔗糖の約１５０倍と
いう独特の甘味を有しており、醤油や菓子などの矯味原
料としても大量に消費されている。このように甘草は生
薬原料ならびにグリチルリチンの製造原料として多くの
需要があるにもかかわらず、我が国ではもっばら中国や
イラン、アフガニスタンよりの輸入に頼っているのが現
状である。

近年、安定したグリチルリチンの生産を目的に、急速に
発達した植物組織培養技術を用いてカンゾウ属植物の不
定根培養（特開平１−２９１７２５）や毛状根培養（日
本薬学会第１０９回年会講演要旨集ＩＩＩ−ｐ＋　８７
）が試みられているが、我が国では今もってカンゾウ属
植物体の栽培による甘草、ひいてはグリチルリチンの実
用的生産は行われていない。

一方、このような実用的栽培生産を行う上では種苗を安
定的に大量供給することが必要となってくるが、カンゾ
ウ属植物は我が国ではほとんど結実しないため、その増
殖は株分けもしくは根茎からの萌芽を利用する、いわゆ
る根伏せと称する方法がとられている。しかし、この方
法では繁殖期が限られるうえに、株そのものの充実に数
年を要し、増殖効率も決して高くはない。そこで、カン
ゾウ属植物の生産栽培を実用化するには、従来の増殖方
法に代わる効率の良い安定した大量増殖技術が必要とな
るが、適当なものは見当たらない。

課題を解決するための手段 本発明者らは、カンゾウ属植物の効率の良い安定した大
量増殖方法を見出すべく鋭意研究をした結果、組織培養
的手法を用いるカンゾウ属植物の苗条を大量に増殖させ
る新規な技術を見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、オーキシン物質を０．００１〜１
００Ｍ９／（ｌ含有してなることを特徴とするカンゾウ
属植物の組織培養用培地およびカンゾウ属植物の茎頂ま
たは腋芽を１個以上含む組織片を該培地上で培養して該
組織片を苗条に育成させ、さらに、これらの茎頂や腋芽
を含む組織片を再び同様に培養することによって増殖を
繰り返すことを特徴とするカンゾウ属植物の増殖方法を
提供するものである。

このような組織培養技術を利用する無菌的挿し木とも考
えられる増殖方法は、例えば、柴田バリオ硝子株式会社
発行の「植物組織培養の世界Ｊ（１９８８年）に記載さ
れているように、アスパラガスやジャガイモなどの野菜
類、キクやカーネーションなどの花き類、およびブドウ
などの果樹類のような一般園芸作物の増殖への利用は見
られるものの、カンゾウのような、従来、挿し木増殖の
困難な薬用植物への利用は見られない。

本発明の対象となる植物はカンゾウ属に含まれるもので
あれば、特に限定するものではなく、例えば、グリチル
リチンの生産用には、スペインカンゾウ（Ｇ　１ｙｃｙ
ｒｒｈｉｚａ　　ｇｌａｂｒａ　　Ｌ　、）、ウラルカ
ンゾウ（Ｇ、　ｕｒａｌｅｎｓｉｓ　　Ｆｉｓｃｈ、）
、シナカンゾウ（Ｇ、　ｅｃｈｉｎａｔａ　　Ｌ、）、
イヌカンゾウ（Ｇ　、ｐａｌ　１ｉｄｉｆｌｏｒａ　　
Ｍａｘｉａ＋、）等が挙げられる。

かくして、本発明培地のカンゾウ属植物の組織培養用培
地に用いるオーキシン物質は植物ホルモンとして知られ
る物質で、例えば、インドール酢酸（ＩＡＡ）、インド
ール酪酸（ＩＢＡ）、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、２．
４−ジクロロフェノキシ酢酸、（２，４−Ｄ）２，３．
６−）ジクロロ安息香酸（２，３，６−Ｔ）などが挙げ
られ、特に、ＩＡＡ。

ＩＢＡおよびＮＡＡが好ましい。これらの物質は単独で
も２種以上併用してもよく、一般に、０．００１−１０
０ｘ９／（ｌの範囲で培地へ添加され、ＩＡＡおよびＩ
ＢＡでは０．０１〜５ｉ９／ｆｆ。

ＮＡＡでは０．０１〜Ｉ　Ｍ９／（ｌを添加することが
特に好ましい。これらの添加により、前記カンゾウ属植
物の組織片から形成される苗条は旺盛な生育を行い、ま
た苗条からの発根も促進されるため、健全な種苗を育成
することができる。

本発明の培地は、基本的には無機要素、炭素源および前
記植物ホルモンと、寒天のような固化剤を含み、要すれ
ばこれにビタミン類、アミノ酸類を添加した固形平板培
地の形態で使用されるものであるが、本発明の培地には
、かかる培地調製用の配合成分のいくつかを混合した粉
末等も包含される。無機要素としては、例えば、窒素、
リン、カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウ
ム、鉄、イオウ、マンガン、銅、亜鉛、モリブデン、コ
バルト、ホウ素、ヨウ素、塩素等の元素が挙げられる。

炭素源としては、例えば、ショ糖や果糖などの糖類が挙
げられる。これらは、一般に、最高３重量％程度の量で
添加することが好ましい。

前記のごとく、該培地には、さらに、チアミン、ピリド
キシン、アスコルビン酸、イノシトール、ニコチン酸、
リボフラビンおよびパントテン酸カルシウムなどのビタ
ミン類、グルタミン、アラニン、グリツツ、フェニルア
ラニン、およびシスティンなどのアミノ酸を添加しても
よいが、カンゾウ属植物の増殖には必ずしも必要ではな
い。

本発明の培地の具体的なものとしては、従来より植物の
組織培養に汎用されているムラシゲ・スクーグ培地（Ｍ
Ｓ培地）、リンスマイヤー・スクーグ培地（ＬＳ培地）
およびガンボルグのＢ５培地等の培地をｌ／１０〜１倍
に希釈したもののいずれかに、炭素源と前記植物ホルモ
ンを添加、調製したものが挙げられる。

固化剤としては０．１〜２重量％の濃度で寒天やゲルラ
イト等が添加される。

本発明の培地は公知の組織培養用培地と同様に、滅菌、
固化させて使用に供される。

以下、本発明の増殖方法について説明する。

本発明の増殖方法においては、カンゾウ属植物の生長点
や生長点近傍組織の培養、カルスからの器官分化あるい
は無菌播種などによって得られた無菌化植物をその増殖
の起源とする。これら無菌化されたカンゾウ属植物の分
離された茎頂または腋芽を含む組織片が初代の培養に用
いられる。前記茎頂または腋芽を含む組織片はカンゾウ
属植物の茎より切断等の適宜手段によって採取すること
ができ、茎と葉の一部を残すように調製する。組織片の
培地への置床は、組織片における茎頂や腋芽の出芽方向
が培地よりも上方を向くようにして組織片の茎の部分を
培地に差し込んで行う。前記組織片の培養を行うことに
よりこれらに含まれる１つの茎頂および腋芽から１つの
苗条が得られる。

該苗条は複数の腋芽を形成しながら生育するため、１つ
の苗条からは１個の茎頂または１個の腋芽を含む組織片
を多数採取できる。これらを材料にして、再び前記と同
様の操作で培養を行うことにより、さらに複数の腋芽を
有する苗条が形成される。

これら一連の培養操作を繰り返すことにより、カンゾウ
属植物の苗条を短期間で級数的に増殖できる。

本発明の増殖方法によって得られるカンゾウ属植物の苗
条は培地より取り出した後、根についた培地を流水等で
除去し、バーミキュライトやロックウールなどの支持体
に根を痛めないようにして植え付け、適当な順化条件下
で一定期間生育させた後、土壌に移植して通常の栽培を
行うと健全な植物体として生育させることかできる。

実施例 つぎに、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する
が、本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例Ｉ スペインカンゾウ（Ｇ、　ｇｌａｂｒａ　Ｌ、）の腋芽
を含む組織片を７０％エタノールに３分間、５％次亜塩
素酸ナトリウム液に５分間浸漬後、滅菌水で洗浄して腋
芽の生長点を摘出し、ＩＡＡｏ、ＩＪ／１２、Ｚ　ｅａ
ｔ　ｉｎ　２　Ｈ／　Ｑ、ショ糖２％を添加したＭＳ寒
天培地で培養して無菌化植物を得た。このようにして得
られた無菌化植物から１個の腋芽または１個の茎頂を含
むような組織片を切り出し、第１表に示すｌ／４ＬＳ培
地にショ糖１％を添加してゲルライト０，４％で固化し
た培地およびこれにｒＡＡＯ，１＋ｙ、Ｑを添加した培
地で、前記組織片を２０℃、６４００１ＵＸ、１５時間
照明下で培養した。

第１表 Ｎ　Ｈ−Ｎ　Ｏ３ Ｎ０３ ＫＨ２ＰＯ。

ＣａＣ１，４２Ｈ−Ｏ ＭｇＳ　Ｏ４・７Ｈ６Ｏ ＦｅＳ０４・　７Ｈ７Ｏ Ｎａ、・ＥＤＴＡ・　２Ｈ７Ｏ ＭｎＳ　Ｏ４・　４　ＨｔＯ ＺｎＳ　Ｏ４・　７　ＨｔＯ Ｎａ２Ｍｏｏ４　’　２　ＨｔＯ ＣｕＳ　Ｏ４・　５　ＨｔＯ ＣｏＣ１，’　６　Ｈ，Ｏ ３ＢＯ３ ｌ イノシトール チアミン−ＨＣｌ ４　ｌ　２５ ９２．５ ２．１５ ０．０６２５ ０．００６２５ ０．２０７５ ０．１ １０〜２０日目頃から根および芽が伸長し始め、約１カ
月目には複数の腋芽を有する植物体が育成された。培養
開始後３６日回しこれら植物体について調査したところ
、第２表に示すごとく、ｒＡＡ添加培地で培養したもの
では無添加培地のものと比較して、草丈が約２倍、腋芽
数と発根率が約３倍に高まった。

第２表 ｆＡＡ無添加　４．５　　　１．７　　２２．２　　　
４４．４ＩＡＡ添加　　　９．７　　　４，７　　５５
，６　　　７７．８また、これらを順化に供したところ
、ＩＡＡ添加培地で育成したものでは順化時の活着率も
高くなった。

１力月毎に、上記２種の各培地を用いて育成される植物
体から１個の茎頂または１個の腋芽を含む組織片を切り
出して培養を繰り返したところ、ＩＡＡ無添加培地では
３力月間で１０個体の供試材料から１９６個体が得られ
たのに対し、ＩＡＡ添加培地では７４０個体の植物体が
得られた。

実施例２ スペインカンゾウ（庄、ｇｌａｂ■　Ｌ、）の腋芽を含
む組織片を７０％エタノールに３分間、５％次亜塩素酸
ナトリウム液に５分間浸漬後、滅菌水て洗浄して腋芽の
生長点を摘出し、ＩＡ、Ａｏ、１ｕ／１２、Ｚ　ｅａｔ
　ｉｎ　２　Ｒ９／ρ、ショ糖２％の添加したＭＳ寒天
培地で培養して無菌化植物を得た。このようにして得ら
れた無菌化植物から１個の腋芽または１個の茎頂を含む
ように組織片を切り出し、ＩＡＡＯ，ｌπ９／（１、シ
ョ糖１％を添加した１／４ＭＳ寒天培地に置床して培養
したところ、１０日目頃から根および芽か伸長し始め、
３０日１には４．５個の腋芽を有する植物体に成長した
。３０日毎に同様の方法で１個の茎頂または１個の腋芽
を含む組織片を切り出し、前記１／４ＭＳ寒天培地で２
０°Ｃ，６５００１ＬＩＸの１５時間照明という条件下
で培養したところ、増殖開始３力月後には供試材料の１
０個から約８００個の植物体が得られた。

なお、培養中の生育は旺盛で、増殖過程で枯死したもの
はほとんど見られなかった。

発明の効果 本発明によればカンゾウ属植物の茎頂または腋芽を含む
組織片を利用して、カンゾウ属植物の種苗を非常に高い
生産効率で大量に増殖させることかできる。また、制御
された環境条件下のわずかな空間で増殖を行うことかで
き、年間を通じてカンゾウ属植物の種苗を安定的かつ集
約的に確保することができる。

特許出願人武田薬品工業株式会社 代理　人弁理士青　山　葆　ほかＩ名

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）オーキシン物質を０．００１〜１００ｍｇ／ｌ含
   有してなることを特徴とするカンゾウ属植物の組織培養
   用培地。
2. （２）カンゾウ属植物の茎頂または腋芽を１個以上含む
   組織片を、請求の範囲第（１）項の培地上で培養して該
   組織片を苗条に育成させ、さらに、これらの茎頂や腋芽
   を含む組織片を再び同様に培養することによって増殖を
   繰り返すことを特徴とするカンゾウ属植物の増殖方法。