JPH0399263A - アミノ酸とアミノ糖の同時分離法 - Google Patents
アミノ酸とアミノ糖の同時分離法Info
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- JPH0399263A JPH0399263A JP1235680A JP23568089A JPH0399263A JP H0399263 A JPH0399263 A JP H0399263A JP 1235680 A JP1235680 A JP 1235680A JP 23568089 A JP23568089 A JP 23568089A JP H0399263 A JPH0399263 A JP H0399263A
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Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、高架橋度の陽イオン交換樹脂を用いる液体ク
ロマトグラフィーにおけるアミノ酸とアミノ糖の一斉分
離法に関する。
ロマトグラフィーにおけるアミノ酸とアミノ糖の一斉分
離法に関する。
アミノ酸の分析は、従来液体クロマトグラフィーを利用
するのが一般的となっており、これを用いた専用のアミ
ノ酸分析計が使われている。
するのが一般的となっており、これを用いた専用のアミ
ノ酸分析計が使われている。
一方、液体クロマトグラフィーも、技術の進歩に伴い、
分析時間の高速化が進み、初期の２４時間から、現在の
０．５ 時間へと進歩してきた。分離の要素としては、
溶離液と陽イオン交換樹脂の組み合せが用いられ、この
基本は変っていない。
分析時間の高速化が進み、初期の２４時間から、現在の
０．５ 時間へと進歩してきた。分離の要素としては、
溶離液と陽イオン交換樹脂の組み合せが用いられ、この
基本は変っていない。
したがって、技術の進歩で変化しうるものは陽イオン交
換樹脂のみとなる。即ち、樹脂の粒径を小さくして表面
積を確保しながら陽イオン交換樹脂を充填した分離カラ
ムをより小さなものとし、溶離液の流れである線速度の
向上が図られてきた。
換樹脂のみとなる。即ち、樹脂の粒径を小さくして表面
積を確保しながら陽イオン交換樹脂を充填した分離カラ
ムをより小さなものとし、溶離液の流れである線速度の
向上が図られてきた。
その結果樹脂の歪も大きくなるため、樹脂の架橋度を高
くして、耐圧性の高い樹脂を使わざるを得なくなってき
た。その間にも、破砕形から球形へ。
くして、耐圧性の高い樹脂を使わざるを得なくなってき
た。その間にも、破砕形から球形へ。
さらに球形でも、その粒径の均一性向上等での分離向上
、迅速化が達成されている。
、迅速化が達成されている。
架橋度は、初期の頃は８％のものが使われ、それが高速
化により１０％のものになったが、この時点までは、特
に問題は生じなかった。現在はより高速になったため、
１２％架橋あるいはそれ以上のものを使用する必要性を
生じている。それにつれて、アミノ酸のみの分離におい
ては、大きな支障がないが、アミノ糖を同時に分離しよ
うとする場合は、全く分離出来ないため、架橋度１０％
以下の樹脂を充填した分離カラムに交換する。この場合
、耐圧性も低いため、溶離液の流速を下げてより長い時
間をかけて分析する手法をとっていた。
化により１０％のものになったが、この時点までは、特
に問題は生じなかった。現在はより高速になったため、
１２％架橋あるいはそれ以上のものを使用する必要性を
生じている。それにつれて、アミノ酸のみの分離におい
ては、大きな支障がないが、アミノ糖を同時に分離しよ
うとする場合は、全く分離出来ないため、架橋度１０％
以下の樹脂を充填した分離カラムに交換する。この場合
、耐圧性も低いため、溶離液の流速を下げてより長い時
間をかけて分析する手法をとっていた。
上記従来技術では、アミノ糖を含むアミノ酸分析につい
て、次のような欠点をもっている。
て、次のような欠点をもっている。
第１にアミノ酸のみの時と、アミノ酸を含む場合と二種
のカラムを用意して、目的に応じて交換する繁雑さがあ
る。第２にアミノ糖の分析時は、イオン交換樹脂の架橋
度が低いため、高速化に不適である。
のカラムを用意して、目的に応じて交換する繁雑さがあ
る。第２にアミノ糖の分析時は、イオン交換樹脂の架橋
度が低いため、高速化に不適である。
本発明の目的は、上記の欠点を排除し、高速化に適した
、高架橋度陽イオン交換樹脂を用いてアミノ酸およびア
ミノ糖を単一の分離カラムで分離し得るクロマトグラフ
ィー分離法を提供することにある。
、高架橋度陽イオン交換樹脂を用いてアミノ酸およびア
ミノ糖を単一の分離カラムで分離し得るクロマトグラフ
ィー分離法を提供することにある。
一般にアミノ酸は酸性、中性、塩基性グループの３グル
ープに順次分離され、それぞれのグループ毎に溶離液が
変えられていく。アミノ糖はこのうち、中性アミノ酸グ
ループ内で溶出する。低架橋度樹脂では中性グループの
終りに溶出するが高架橋度樹脂では前段に溶出するため
分離できない。
ープに順次分離され、それぞれのグループ毎に溶離液が
変えられていく。アミノ糖はこのうち、中性アミノ酸グ
ループ内で溶出する。低架橋度樹脂では中性グループの
終りに溶出するが高架橋度樹脂では前段に溶出するため
分離できない。
また、分離のためには、カラムの温度、溶離液の組成が
大きなポイントになるが、この場合は、それが確立され
ていなかった。
大きなポイントになるが、この場合は、それが確立され
ていなかった。
本発明では、酸性アミノ酸を溶出させる第１溶離液の濃
度が、次の中性アミノ酸には影響せず、アミノ糖に対し
ては溶出を大きく遅らせる効果をもつことを見い出した
ことに基づいてなされた。
度が、次の中性アミノ酸には影響せず、アミノ糖に対し
ては溶出を大きく遅らせる効果をもつことを見い出した
ことに基づいてなされた。
従来、第一溶離液のナトリウムイオン濃度はＩＮ以上と
していたが、これを０．０８ Ｎ以下にすることで、第
２溶離液で溶出する中性アミノ酸とアミノ糖の分離を可
能にした。
していたが、これを０．０８ Ｎ以下にすることで、第
２溶離液で溶出する中性アミノ酸とアミノ糖の分離を可
能にした。
アミノ酸やアミノ糖は、それらを有する一ＮＨ２が、酸
性溶液中では−Ｎ Ｈｓ＋とじて存在するために、スル
ホン酸形の陽イオン交換樹脂中でイオン交換し、分離さ
れる。
性溶液中では−Ｎ Ｈｓ＋とじて存在するために、スル
ホン酸形の陽イオン交換樹脂中でイオン交換し、分離さ
れる。
それゆえナトリウムイオン濃度が高いとき、ｐ Ｈが高
いときは、アミノ酸類は、溶出が早くなる。
いときは、アミノ酸類は、溶出が早くなる。
一方アミノ糖は、イオン交換力ばかりでなく、ゲル濾過
的（ＧＰＣ）な分離要素をもっており、それ故に架橋度
が高くなると、樹脂のもつ孔の径が小さくなり、溶出が
早くなる傾向にあると考えられる。そこで第１溶離液の
Ｎａ＋ 濃度を低くして酸性アミノ酸を溶出しながら、
アミノ糖はイオン交換的に遅らせる。次に第２溶離液で
中性アミノ酸は、イオン交換的に反溶出させ、アミノ糖
は、ある程度ＧＰＣ的要素をもっていることからアミノ
酸のように溶出が早くならないことを利用した。
的（ＧＰＣ）な分離要素をもっており、それ故に架橋度
が高くなると、樹脂のもつ孔の径が小さくなり、溶出が
早くなる傾向にあると考えられる。そこで第１溶離液の
Ｎａ＋ 濃度を低くして酸性アミノ酸を溶出しながら、
アミノ糖はイオン交換的に遅らせる。次に第２溶離液で
中性アミノ酸は、イオン交換的に反溶出させ、アミノ糖
は、ある程度ＧＰＣ的要素をもっていることからアミノ
酸のように溶出が早くならないことを利用した。
以下本発明の実施例を第１図および第２図により説明す
る。
る。
第１図は、本発明を実施するための液体クロマトグラフ
の流路系を示す概略図である。溶離液１〜３は分離に用
いる液であり、再生液４は分離カラム１１に残存する成
分を分析後洗浄しカラム１１を再生するためのものであ
る。これら４種の液は、バルブ６で自動的に切換えられ
、ポンプ７により０．１９ｍｎ／ｗｉｎの流量でカラム
系へ送液される。アンモニアトラップカラム９は、前述
の溶離液中のアンモニアを、アミノ酸分析の間１−ラッ
プしているためのものである。次に、オートサンプラ１
０によりサンプルをサンプル容器から吸入し、分離カラ
ム１１へ送る。
の流路系を示す概略図である。溶離液１〜３は分離に用
いる液であり、再生液４は分離カラム１１に残存する成
分を分析後洗浄しカラム１１を再生するためのものであ
る。これら４種の液は、バルブ６で自動的に切換えられ
、ポンプ７により０．１９ｍｎ／ｗｉｎの流量でカラム
系へ送液される。アンモニアトラップカラム９は、前述
の溶離液中のアンモニアを、アミノ酸分析の間１−ラッ
プしているためのものである。次に、オートサンプラ１
０によりサンプルをサンプル容器から吸入し、分離カラ
ム１１へ送る。
カラム９および１１のカラムサイズはそれぞれ４．６ｍ
ｍ１．ＤＸ６０ｎｍおよび４．６ｎｎ１．ＤＸ８０ｍで
、分離カラム１１には、架橋度１２％、粒径５μｍの強
酸性陽イオン交換樹脂を充填た。カラム１１からの溶出
液は、ニンヒドリン反応液５をポンプ８により０．２０
ｍＱ／耐ｎの流量で送液したものとミキサ１２で混合し
１反応チューブ１３を流通する間に１３０℃に加熱され
、その後、検出器１４で、波長５７０ｎｍおよび４４０
ｎｍの可視光の吸収として検出されデータ処理器１５で
記録計算される。反応チューブ１３にはｏ、２５ｍｍ
Ｉ 、 Ｄ Ｘ ７ ｍ の弗素樹脂製チューブを用い
た。
ｍ１．ＤＸ６０ｎｍおよび４．６ｎｎ１．ＤＸ８０ｍで
、分離カラム１１には、架橋度１２％、粒径５μｍの強
酸性陽イオン交換樹脂を充填た。カラム１１からの溶出
液は、ニンヒドリン反応液５をポンプ８により０．２０
ｍＱ／耐ｎの流量で送液したものとミキサ１２で混合し
１反応チューブ１３を流通する間に１３０℃に加熱され
、その後、検出器１４で、波長５７０ｎｍおよび４４０
ｎｍの可視光の吸収として検出されデータ処理器１５で
記録計算される。反応チューブ１３にはｏ、２５ｍｍ
Ｉ 、 Ｄ Ｘ ７ ｍ の弗素樹脂製チューブを用い
た。
また、溶離液１〜３および再生液は、表１に示す組成の
ものを使用した。分離カラム１１の温度は５７℃の一定
とし、溶離液の切換は溶離液１が０〜１５分の間、溶離
液２は１５〜４８分、溶離液３は４８〜８０分、再生液
４は、８０〜９５分、そして、９５〜１４０分の間は再
度溶離液１を送液する行程を１分析サイクルとした。
ものを使用した。分離カラム１１の温度は５７℃の一定
とし、溶離液の切換は溶離液１が０〜１５分の間、溶離
液２は１５〜４８分、溶離液３は４８〜８０分、再生液
４は、８０〜９５分、そして、９５〜１４０分の間は再
度溶離液１を送液する行程を１分析サイクルとした。
第２図は、上記条件下で得られたクロマトグラムの例を
示しており、サンプルは標準品混合物書２ｍｍｏｎ（プ
ロリンのみ４ｎｍｏＱ）を含み、検出は５７０ｎｍの波
長を用いた結果である。
示しており、サンプルは標準品混合物書２ｍｍｏｎ（プ
ロリンのみ４ｎｍｏＱ）を含み、検出は５７０ｎｍの波
長を用いた結果である。
第２図から理解されるように、高架橋度の陽イオン交換
樹脂を用いても、アミノ糖であるＧＱｃＮ Ｈ２および
ＧａＱＮＨ２を中性アミノ酸から分離溶出することがで
き、アミノ酸とアミノ糖との高速分析ができる。単一の
分離カラムに充填する陽イオン交換樹脂の分析時の耐圧
性は２００ｋｇｆ／ｄであり、５μｍの粒径の樹脂で比
較すると、従来の低架橋度のイオン交換樹脂を用いた場
合に比べて耐圧性が２倍以上になる。また、本発明を適
用すれば単一の分離カラムでアミノ酸とアミノ糖を分離
できるので、分析操作に伴って分離カラムを交換する繁
雑さがなくなる。
樹脂を用いても、アミノ糖であるＧＱｃＮ Ｈ２および
ＧａＱＮＨ２を中性アミノ酸から分離溶出することがで
き、アミノ酸とアミノ糖との高速分析ができる。単一の
分離カラムに充填する陽イオン交換樹脂の分析時の耐圧
性は２００ｋｇｆ／ｄであり、５μｍの粒径の樹脂で比
較すると、従来の低架橋度のイオン交換樹脂を用いた場
合に比べて耐圧性が２倍以上になる。また、本発明を適
用すれば単一の分離カラムでアミノ酸とアミノ糖を分離
できるので、分析操作に伴って分離カラムを交換する繁
雑さがなくなる。
本発明によれば、単一の分離カラムでアミノ酸とアミノ
糖を分離できるので、分離操作を簡略化でき操作時間を
短縮できる。
糖を分離できるので、分離操作を簡略化でき操作時間を
短縮できる。
第１図は、本発明を実施するための液体クロマトグラフ
の流路系を示す概略図、第２図は１本発明を適用して１
２％架橋度の樹脂を用いたときの分離状態を示すクロマ
トグラムである。 １〜３・・・分離用溶離液、１０・・・オートサンプラ
、１１・・・分離カラム、１３・・・反応コイル、１４
・・・検寓２日 ｌ１１！ ” ２５ ￥：ｊ 届ｊｉｉ ： ９ ：２
２ ｗｅ ’Ｊ Ｆ ’９ 品２ ｅ−詩Ｚ’ｌ（ン）
Ｎノ
の流路系を示す概略図、第２図は１本発明を適用して１
２％架橋度の樹脂を用いたときの分離状態を示すクロマ
トグラムである。 １〜３・・・分離用溶離液、１０・・・オートサンプラ
、１１・・・分離カラム、１３・・・反応コイル、１４
・・・検寓２日 ｌ１１！ ” ２５ ￥：ｊ 届ｊｉｉ ： ９ ：２
２ ｗｅ ’Ｊ Ｆ ’９ 品２ ｅ−詩Ｚ’ｌ（ン）
Ｎノ
Claims (1)
- １、複数の溶離液と１２％を越える架橋度を有するスチ
レンジビニルベンゼン共重合体を充填剤としたスルホン
酸形陽イオン交換樹脂カラムを用いた液体クロマトグラ
フィーの分離法において、第一溶離液に、０．０８Ｎ以
下のクエン酸ナトリウムを含む緩衝液を用いて、酸性ア
ミノ酸グループを溶出させ、逐次緩衝液のクエン酸ナト
リウム濃度を高くしながら中性アミノ酸グループ、アミ
ノ酸および塩基性アミノ酸グループを順次分離溶出させ
ることを特徴とするアミノ酸とアミノ糖の同時分離法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1235680A JPH0399263A (ja) | 1989-09-13 | 1989-09-13 | アミノ酸とアミノ糖の同時分離法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1235680A JPH0399263A (ja) | 1989-09-13 | 1989-09-13 | アミノ酸とアミノ糖の同時分離法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0399263A true JPH0399263A (ja) | 1991-04-24 |
Family
ID=16989616
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1235680A Pending JPH0399263A (ja) | 1989-09-13 | 1989-09-13 | アミノ酸とアミノ糖の同時分離法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0399263A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007017327A (ja) * | 2005-07-08 | 2007-01-25 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析法および分析装置 |
| JP2010089001A (ja) * | 2008-10-07 | 2010-04-22 | Japan Organo Co Ltd | クロマト分離方法 |
| CN103143192A (zh) * | 2013-02-27 | 2013-06-12 | 中国环境科学研究院 | 一种程控化水溶性有机物组分分离装置和分离方法 |
-
1989
- 1989-09-13 JP JP1235680A patent/JPH0399263A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007017327A (ja) * | 2005-07-08 | 2007-01-25 | Hitachi High-Technologies Corp | アミノ酸分析法および分析装置 |
| JP4704824B2 (ja) * | 2005-07-08 | 2011-06-22 | 株式会社日立ハイテクノロジーズ | アミノ酸分析法および分析装置 |
| JP2010089001A (ja) * | 2008-10-07 | 2010-04-22 | Japan Organo Co Ltd | クロマト分離方法 |
| CN103143192A (zh) * | 2013-02-27 | 2013-06-12 | 中国环境科学研究院 | 一种程控化水溶性有机物组分分离装置和分离方法 |
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