JPH0398568A - 細胞培養容器 - Google Patents
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- JPH0398568A JPH0398568A JP23301289A JP23301289A JPH0398568A JP H0398568 A JPH0398568 A JP H0398568A JP 23301289 A JP23301289 A JP 23301289A JP 23301289 A JP23301289 A JP 23301289A JP H0398568 A JPH0398568 A JP H0398568A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/10—Petri dish
-
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- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
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-
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔概 要〕
細胞培養容器に関し、
異なる２種類以上の細胞を隣接並置培養可能にすること
を目的とし、 細胞培養容器を２以上の部位に分割し、各部位を異なる
コート剤で表面処理し又は処理せずに、異なる細胞が選
択的に並置できるように構或する。
を目的とし、 細胞培養容器を２以上の部位に分割し、各部位を異なる
コート剤で表面処理し又は処理せずに、異なる細胞が選
択的に並置できるように構或する。
本発明は細胞培養容器に関する。神経細胞の研究はコン
ピュータへの応用を目的としても行なわ〔従来の技術〕 生体の一部を生体外に取り出して無菌容器内に入れて長
期間生存させる組織培養の技術は、医学・生物学の研究
分野では、従来行われてきた動物実験に替わる実験手法
として定着してきている。組織培養を行う場合、対象と
なる細胞は通常培養容器に密着することが、細胞の増殖
、分化のプロセスにおいて必須であることが知られてお
り、ガラス製、プラスチック製の数々の培養容器が作ら
れている。
ピュータへの応用を目的としても行なわ〔従来の技術〕 生体の一部を生体外に取り出して無菌容器内に入れて長
期間生存させる組織培養の技術は、医学・生物学の研究
分野では、従来行われてきた動物実験に替わる実験手法
として定着してきている。組織培養を行う場合、対象と
なる細胞は通常培養容器に密着することが、細胞の増殖
、分化のプロセスにおいて必須であることが知られてお
り、ガラス製、プラスチック製の数々の培養容器が作ら
れている。
細胞培養を行う場合、培養器具表面をコートすることに
より細胞の培養器具への密着性を向上させることがおこ
なわれている。よく用いられるコーティング剤としては
、ポリーＬ−リジン、コラーゲン、ＥＣＭ （細胞外マ
トリックス〉などがある。また、ポリエチレン容器表面
にアミノ基およびアミド基を組み込み、プラスの電荷を
シャーレ表面に与えることにより細胞接着能を改善した
容器も販売されている（例えばベクトン・ディッキンソ
ン社製、ブライマリアなど）。
より細胞の培養器具への密着性を向上させることがおこ
なわれている。よく用いられるコーティング剤としては
、ポリーＬ−リジン、コラーゲン、ＥＣＭ （細胞外マ
トリックス〉などがある。また、ポリエチレン容器表面
にアミノ基およびアミド基を組み込み、プラスの電荷を
シャーレ表面に与えることにより細胞接着能を改善した
容器も販売されている（例えばベクトン・ディッキンソ
ン社製、ブライマリアなど）。
従来の細胞培養用容器は単一種の細胞を無秩序に培養す
ることしかできない欠点があった。それは、培養器具表
面のコート処理が一様に行われているためである。それ
ゆえ高度な秩序が機能発現に重要であるような、多種類
の神経細胞を培養する場合や、神経細胞が特定の標的細
胞を神経支配するプロセスを研究するには、偶然の細胞
配列や神経線維の展開による偶発的なシナプス（神経細
胞間の連絡構造）形或を期待することしかできないのが
現状であった。そのようなことから、異種細胞を培養シ
ャーレ表面に任意に配列させ、また神経細胞に関しては
、神経線維を任意の方向に展開させる必要が生じる。し
かしながら、任意に異種神経細胞を培養シャーレ表面に
配列させる方法は現在存在しない。
ることしかできない欠点があった。それは、培養器具表
面のコート処理が一様に行われているためである。それ
ゆえ高度な秩序が機能発現に重要であるような、多種類
の神経細胞を培養する場合や、神経細胞が特定の標的細
胞を神経支配するプロセスを研究するには、偶然の細胞
配列や神経線維の展開による偶発的なシナプス（神経細
胞間の連絡構造）形或を期待することしかできないのが
現状であった。そのようなことから、異種細胞を培養シ
ャーレ表面に任意に配列させ、また神経細胞に関しては
、神経線維を任意の方向に展開させる必要が生じる。し
かしながら、任意に異種神経細胞を培養シャーレ表面に
配列させる方法は現在存在しない。
本発明は、上記課題を解決するために、細胞培養容器を
２以上の部位に分割し、各部位に異なるコート剤で表面
処理するか表面処理を行なわず、異なる細胞を選択的に
隣接並置できることを特徴とする細胞培養容器を提供す
る。
２以上の部位に分割し、各部位に異なるコート剤で表面
処理するか表面処理を行なわず、異なる細胞を選択的に
隣接並置できることを特徴とする細胞培養容器を提供す
る。
細胞は、その周辺に存在する化学物質や細胞表面の性質
に影響され、例えば神経線維の伸展も、それらの環境に
影響されることが知られている。
に影響され、例えば神経線維の伸展も、それらの環境に
影響されることが知られている。
神経線維に関してはその先端に位置している戒長円錐が
、培養容器の表面の微細構造（広野ら、ブレインリサー
チ、４４６巻、１８９〜１９４ページ、１９８８年）や
培養器表面にコートしてある物貿（ルトノー、ディベロ
プメントバイオロジー、４４巻、９２〜１０１ページ、
１９７５年〉を認識して戒長じていることが知られてい
る。そこで、シャーレ表面を分割し、少なくとも片方の
シャーレ表面にコート剤を塗布することにより、選択的
に細胞をシャーレ表面に吸着させ、隣接・並置した環境
で細胞培養を可能とした。
、培養容器の表面の微細構造（広野ら、ブレインリサー
チ、４４６巻、１８９〜１９４ページ、１９８８年）や
培養器表面にコートしてある物貿（ルトノー、ディベロ
プメントバイオロジー、４４巻、９２〜１０１ページ、
１９７５年〉を認識して戒長じていることが知られてい
る。そこで、シャーレ表面を分割し、少なくとも片方の
シャーレ表面にコート剤を塗布することにより、選択的
に細胞をシャーレ表面に吸着させ、隣接・並置した環境
で細胞培養を可能とした。
コート剤としては、ポリーＬ−リジン、コラーゲン、Ｅ
ＣＭ （細胞外基質）などを用いる、コート剤で表面処
理しないプラスチック、ガラス表面も細胞を選択的に吸
着する点で各種コート剤処理表面と同等である。
ＣＭ （細胞外基質）などを用いる、コート剤で表面処
理しないプラスチック、ガラス表面も細胞を選択的に吸
着する点で各種コート剤処理表面と同等である。
図面によって本発明の一具体例を説明する。
第１図はブライマリア培養シャーレ（ベクトンディッキ
ンソン社製、直径５０叩）の中央に仕切り２を取り付け
て部位Ａ，Ｂとし、部位ＢをポリーＬ−リジンコート３
した細胞培養容器を示している。ポリーＬ−リジンコー
トはポリーＬ−リジン溶液（シグマ社、Ｐ８９２０）を
滅菌蒸留水で１０倍に希釈した後、５分間シャーレ部位
Ｂに満たし、希釈溶液を捨てて、クリーンベンチ中に一
晩放置することにより行った。
ンソン社製、直径５０叩）の中央に仕切り２を取り付け
て部位Ａ，Ｂとし、部位ＢをポリーＬ−リジンコート３
した細胞培養容器を示している。ポリーＬ−リジンコー
トはポリーＬ−リジン溶液（シグマ社、Ｐ８９２０）を
滅菌蒸留水で１０倍に希釈した後、５分間シャーレ部位
Ｂに満たし、希釈溶液を捨てて、クリーンベンチ中に一
晩放置することにより行った。
本実施例では、神経細胞として、受精後１４日目のニワ
トリ胚後根神経節細胞を用いた。ニワ｝ ＩＪ胚より無
菌的に後根神経節を摘出し、コラゲナーゼ（１■／一）
で３０分間処理すると、神経細胞を含む細胞集団が遊離
されてくる。遊離した細胞集団を培養液（１０％牛血清
＋１マイクログラム／１００ｒｄ神経戊長因子＋イーグ
ルの最小培地中）に再懸濁して上記のシャーレの部位Ａ
中に分注した後、恒温槽（３７℃、５％二酸化炭素＋９
５％酸素）中で１時間保温する。１時間の保温後、細胞
集団中の繊維芽細胞５はブライマリアシャーレへの親和
性が高い為にシャーレ表面に吸着するが、神経細胞は親
和性が低いために遊離状態で培養液中に存在する。
トリ胚後根神経節細胞を用いた。ニワ｝ ＩＪ胚より無
菌的に後根神経節を摘出し、コラゲナーゼ（１■／一）
で３０分間処理すると、神経細胞を含む細胞集団が遊離
されてくる。遊離した細胞集団を培養液（１０％牛血清
＋１マイクログラム／１００ｒｄ神経戊長因子＋イーグ
ルの最小培地中）に再懸濁して上記のシャーレの部位Ａ
中に分注した後、恒温槽（３７℃、５％二酸化炭素＋９
５％酸素）中で１時間保温する。１時間の保温後、細胞
集団中の繊維芽細胞５はブライマリアシャーレへの親和
性が高い為にシャーレ表面に吸着するが、神経細胞は親
和性が低いために遊離状態で培養液中に存在する。
そこで、部位Ａの培養液をボ！Ｊ−Ｌ−’Ｊジンでコー
トした部位Ｂに移し、さらに１２〜１８時間上記恒温槽
中でシャーレを保温する。この保温により部位Ｂに分注
した神経細胞は、親和性の高いポリ−Ｌ−リジン３上に
神経線維６を展開する。
トした部位Ｂに移し、さらに１２〜１８時間上記恒温槽
中でシャーレを保温する。この保温により部位Ｂに分注
した神経細胞は、親和性の高いポリ−Ｌ−リジン３上に
神経線維６を展開する。
以上の操作により繊維芽細胞５と神経細胞６をそれぞれ
部位ＡとＢに分けて培養することができる。１２〜１８
時間の保温を終了後、仕切り板２を取り除くことにより
、第２図に示す如く、異なる２種細胞５．６を隣接・並
置することができる。
部位ＡとＢに分けて培養することができる。１２〜１８
時間の保温を終了後、仕切り板２を取り除くことにより
、第２図に示す如く、異なる２種細胞５．６を隣接・並
置することができる。
本発明によれば、従来の組織培養技術では困難であった
、異なる２種類の細抱を細胞表面の培養容器への親和性
に基づいて分離し、隣接・並置培養ができる。
、異なる２種類の細抱を細胞表面の培養容器への親和性
に基づいて分離し、隣接・並置培養ができる。
第１図（ア〉（イ〉は本発明の実施例の細胞培養容器、
第２図は第１図の容器に並置培養した様子を示す図であ
る。 １・・・シャーレ、 ２・・・仕切り板、３・・
・コート、 ４・・・繊維芽細胞、５・・・
神経細胞。 細胞培ＩＩ容器 第１ 図
第２図は第１図の容器に並置培養した様子を示す図であ
る。 １・・・シャーレ、 ２・・・仕切り板、３・・
・コート、 ４・・・繊維芽細胞、５・・・
神経細胞。 細胞培ＩＩ容器 第１ 図
Claims (1)
- １、細胞培養容器を２以上の部位に分割し、各部位に異
なるコート剤で表面処理するか表面処理を行なわず、異
なる細胞を選択的に隣接並置できることを特徴とする細
胞培養容器。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23301289A JPH0398568A (ja) | 1989-09-11 | 1989-09-11 | 細胞培養容器 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23301289A JPH0398568A (ja) | 1989-09-11 | 1989-09-11 | 細胞培養容器 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0398568A true JPH0398568A (ja) | 1991-04-24 |
Family
ID=16948433
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23301289A Pending JPH0398568A (ja) | 1989-09-11 | 1989-09-11 | 細胞培養容器 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0398568A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002078723A (ja) * | 2000-09-08 | 2002-03-19 | Hoya Healthcare Corp | 角膜の再構築方法 |
| CN113474446A (zh) * | 2019-02-27 | 2021-10-01 | 东洋制罐集团控股株式会社 | 培养容器的制造方法及培养容器 |
-
1989
- 1989-09-11 JP JP23301289A patent/JPH0398568A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002078723A (ja) * | 2000-09-08 | 2002-03-19 | Hoya Healthcare Corp | 角膜の再構築方法 |
| JP4554051B2 (ja) * | 2000-09-08 | 2010-09-29 | Ｈｏｙａ株式会社 | 角膜の再構築方法 |
| CN113474446A (zh) * | 2019-02-27 | 2021-10-01 | 东洋制罐集团控股株式会社 | 培养容器的制造方法及培养容器 |
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