JPH0385171A - 肝炎治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野〕 本発明は肝炎治療剤に関する。さらに詳しくは、特定の
表面ｐｉ（を有する固体物質からなる肝炎治療剤に関す
る。

［従来の技術］ 肝炎のうち、とくに劇症肝炎は急速に悪化する全身的な
代謝異常である。したがってその治療の目的は、いかに
して代謝異常を改善するかということにつきる。とくに
重篤な症状は、毒性物質の蓄積による肝性昏睡の進行と
肝細胞の再生能の抑制であり、予後を左右する因子とな
ってきている。

もし血液中の毒性物質を除去することができ、−定期間
昏睡の進行を食い止めることが出来るならば、その間に
肝の再生を待ち、治療を期待することが出来るであろう
。劇症肝炎の治療はすべてこの方針に基づくものであり
、今まで多くの試みがなされて来た。

血液透析は慢性腎不全症の治療として久しい。

しかし通常の透析膜を用いる方法では肝性昏睡に効果が
ないことが知られていた（堺隆弘、医学のあゆみ、１１
８．６０８．１９８１）。

また、交換輸血によって治療し、よい成績を得たとの報
告がなされ（Ｒ，Ｌ、　Ｂｅｒｇｅｒ、　ｅｔ　ａ１、
　；　Ｎ。

Ｅｎｇ１、　Ｊ、　Ｗｅｄ、　２７４，４９７−４９９
．１９６６；　　Ｃ，Ｔｒｅｙｅｔ　ａ１、　：　Ｎ、
　Ｅｎｇ１、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　２７４．４７３−４８
１゜１９６Ｂ）　、それまで保存的に行なわれていた劇
症肝炎の治療に対してより積極的な方法が施行されるよ
うになった（Ｃ，Ｔｒｅｙ、　ｅｔ　ａ１、；　Ｃａｎ
、　Ｍｅｄ。

Ａｓ５ｏｃ、　Ｊ、　１０６．５２８．１９７２）。

しかし、これらの方法は患者の血漿中？こ毒性物質を唯
単純に濾過あるいは吸着などによって除去する方法であ
って、効果の点でまだ充分であるどはいい難い。

一方、肝性昏睡の治療に活性炭が用いられていたことは
知られている（例えば、特開昭５３−５７１９１号）。

このような吸着剤を使用する方法は簡便であり、有用な
血液浄化方法であることが期待される。

［発明が解決しようとする課題］ しかしながら、最近の臨床報告では肝性昏睡の治療に活
性炭を用いると広汎性血管向凝固現象（Ｄｉｓｓｅｓｉ
ｎａｔｅｄ　Ｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒ　Ｃｏａｇｕ
ｌａｔｉｏｎ。

ＤＩＣ）が認められることが指摘されている（日経メデ
ィカル、１８・（４）、１０−１３．１９８９）。治療
中にこのような現象が起ることは決して望ましいことで
はない。従って、本発明の目的はこのような問題を生じ
ない肝炎の治療に適した治療剤を提供することにある。

［発明が解決しようとする手段］ 本発明者らは本発明に先立ち、劇症肝炎の患者血漿を限
外が過、無坦体電気泳動、ゲルが過などで分画して、ラ
ットの初代培養肝細胞におけるＤＮＡ合成能におよぼす
影響を観察したところ、アルブミン分画にＤＮＡ合成抑
制作用のあることが明らかになった。そこでこの分画を
クロロホルム／メタノール混合溶媒で抽出処理し、その
抽出物について先と同様に培養細胞におけるＤＮＡ合成
能を観察してほぼ同様の作用のあることを認めた。

これらの観察結果から、劇症肝炎の患者における肝再生
阻害作用の主体はアルブミン結合物質であると推定した
。

これらの知見に基づき、本発明者らは患者血清のアルブ
ミン分画のクロロホルム／メタノール抽出物を高速液体
クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）にて分取し、それぞの分
散された成分の培養細胞のＤＮＡ合成能へおよぼす影響
を観察すると同時に、質量分析法（Ｆａｓｔ　Ｉｏｎ　
Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ　ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｉｅ
ｔｒｙ　；　Ｆａｂ−ＭＳ）　、赤外吸収スペクトル法
（ｒＲ）によって肝再生阻害物質の化学構造の推定を行
った。

その結果、ＨＰＬＣの主なピークの分子量は、３００〜
９００の領域であり、肝再生阻害物質はビリルビンと類
似構造のビロール核を有する多成分系の混合物であると
考えられた。このことは、従来メルカプタン、オクタノ
エートなど低分子量物質が肝毒物質、肝再生阻害物質で
あろうとされていたことと大きな違いを示すものであり
、従来の除去剤とは探索すべき方向づけが異なることを
示唆するものである。

本発明者らは上記問題点のない治療剤を得るため鋭意検
討を重ね、本発明に至った。すなわち本発明は、表面の
ｐＨが３．０〜６．５または７．５〜９．０を示す固体
物質からなる肝炎治療剤である。

このような肝再生阻害物質をよく除去できる治療剤は表
面のｐ）１が３．０〜６．５または７．５〜９．０を示
す固体物質である。ｐＨ値が３．０よりも低い固体物質
は血清中のタン白を変性する傾向があり好ましくない。

かかる治療剤として用いられる固体物質は上記のような
表面ｐＨを有する陽イオン交換樹脂、シリカ−アルミナ
、アルミナ、ヒドロキシアパタイト、シリカ−アルミナ
を担持したヒドロキシアパタイト、陰イオン交換樹脂等
の固体物質または上記表面ｐＨを満足する範囲でのこれ
らの混合物を例示することができる。

本発明において治療剤として用いられる固体物質は表面
のｐＨが３．０〜６．５または７．５〜９．０を示すも
のであればいずれのものでもよいが、体液中で溶解する
ものは除かれる。固体物質は多孔性のもの、非多孔性の
ものいずれでもよい。

本発明において血液等は表面ｐＨ３，０〜６，５を示す
固体物質と表面＋）１１７．５〜９．０を示す固体物質
を交互に通過させてもよい。

肝再生阻害物質は固体物質の表面に吸着されればよいの
で、固体物質の内部がどのような構造になっていてもよ
く、材質が表面と異なっていてもよい。本発明において
治療剤として用いられる固体物質の形状はとくに限定さ
れないが、通常は直径０．１＋＋−〜５■の範囲内にあ
る粒状体が用いられる。

さらに、固体物質は直接血球と接触して用いられること
もあるので、血球を損傷しないよう球形であることが好
ましい。

上記のごとき固体物質を用いて製造された治療剤で患者
の体液（血液、血漿等）を処理すると、肝再生阻害物質
が固体物質に吸着され、体液中から除去される。このよ
うな処理によって肝再生阻害物質が有効に体液中から除
去できることは驚くべきことであり、予想外であった。

本発明の治療剤が肝再生阻害物質を除去するのに著効を
示す理由を完全に明らかにすることはできないが、該肝
再生阻害物質が弱酸性物質と弱塩基性物質を示す物質で
あり、従って本発明の弱酸性または弱塩基性の固体物質
からなる肝炎治療剤が該阻害物質をうまく吸着するので
あろうことが一つの根拠として考えられる。

本発明において、上記の固体物質からなる治療剤はカラ
ムに充填されて使用されるが、該カラムには血液回路と
容易に接続し得る形状の入口部と出口部が設けられ、固
体物質の層と出入口部との間に、体液等は通過するが、
固体物質は通過しないポリエステル製等のフィルターを
備えているものが好ましい。カラムとしては、ガラス、
ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート：ポ
リスチレン、ポリメチルメタクリレート製等のものが使
用できるが、かかる固体物質を充填したカラムは通常滅
菌（オートクレーブ滅菌、γ線滅菌等）して使用される
ので、オートクレーブ滅菌可能なポリプロピレンやポリ
カーボネート等が好ましい。

前述のカラムを用いて患者の体液からの肝再生阻害物質
の除去は体外循環方式によって行なうことができる。体
外循環方式としては次の２方式があげられる。

（１）　　患者の血管から採取された血液をそのまま固
体物質が充填されたカラムに導入し、血液を浄化した後
、浄化された血液を患者の血管に返す方式。

（２）患者の血管から採取された血液をまず分離膜等を
用いて血球と血漿に分離し、分離された血漿を固体物質
が充填されたカラムに導入し、血漿を浄化した後、浄化
された血漿を上記の血球に混合して患者の血管に返す方
式。

上記２方式のなかで、血球成分の損失（血小板の粘着、
赤血球の溶血等）を少なくして操作できる点から後者の
（２）の方式が実用的である。

かかる処理によって患者の体液から肝再生阻害物質を除
去することができるので、患者の症状の増悪化傾向を防
ぎ、患者を延命されることができる。なお、かかる体液
処理によって体液中の有用成分をも除去されてしまうこ
ともありうるので、その場合には患者に有用成分を補給
するのが望ましい。

本発明の治療剤によって肝再生阻害物質が除去されたか
否かの確認は、次の方法によった。

劇症肝炎の患者血清を弱酸性または弱塩基性の吸着活性
点を有する固体物質で処理した後、この血清をクロロホ
ルム／メタノール混合溶媒で抽出処理した。クロロホル
ム／メタノール混合溶媒を蒸発除去し、残渣をエタノー
ルに再溶解して、ラット培養肝細胞に添加した後、３Ｈ
−チミジンを添加して、その取り込み量でもって細胞の
ＤＮＡ合成能への影響を判定した。すなわち、本発明の
治療剤で血清を処理することによって、未処理の場合と
比較して細胞のＤＮＡ合成能が改善されることが認めら
れれば、劇症肝炎の患者血清中の肝再生阻害作用を有す
る物質が該治療剤によって除去されたことを示している
ことになる。

［実施例］ 以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。

１、初代培養肝細胞の調製法 ラットを麻酔下に腹部を開腔し、門脈にカニユーレを挿
入して肝臓下の下火静脈に前潅流用緩衝液が流出するよ
うに処置した。そのまま３０ｍ１２／ｓｉｎの流速でペ
リスタポンプを作動させ、３８℃に保温した前潅流用緩
衝液を？ｌ流し続けた。次に胸部部を開き心臓を露出さ
せ横隔膜下の下火静脈に縫合糸のループをかけた後、右
心房を切開して別のカニユーレを右心房から下大静に挿
入し結紮した。こうして潅流液は肝臓を循環して横隔膜
下の下火静脈を流れ、カニユーレを経由してビンに戻る
よう循環した。

この状態で４〜５分潅流を続け、スムーズに潅流するこ
とを確めてポンプを停止し、循環液を１００ｍＱのコラ
ゲナーゼ溶液に交換し、２０分間潅流した。

肝小葉が浮き上ったような外観を呈し、肝臓表面から酵
素液が滲出して来た時点で潅流を停止し、肝臓を摘出し
てシャーレに移した。肝臓を小片に破砕し遠心分離して
肝実質細胞を回収し、ウィリアムＥ培地上にて４８時間
培養して直径６ｃ＋ａのシャーレ当りの細胞数が２Ｘｌ
Ｏ’個になるように増殖させた。

２、固体物質の仕様 本発明に使用した固体物質の仕様の明細を第１表に示す
。

３、血清の固体物質による処理および培養肝細胞のＤＮ
Ａ合成能の測定 ｉ）第１表に示したそれぞれの固体物質１．５ｇに３ｍ
Ｑの生理食塩液を加えて、高圧蒸気滅菌した後、劇症肝
炎の患者血清８ｍ（ｉを加えて３７℃にて３０分間振盪
した。■コントロールには生理食塩液３−に患者血清を
８−１ｅコントロールには生理食塩液３ｍ（ｌに健常者
の血清８＠１２添加し、３７℃にて３０分間振盪した試
料を使用した。

１ｉ）ｉ）の試料の上清部を回収し、０．４５μ傷のフ
ィルターで濾過し、炉液１０ｍｆｆクロロホルム／メタ
ノール＝ｌ／Ｉ（容量比）混合溶媒２５ｍ１２で抽出操
作を行った後、有機溶媒層を回収して、０℃にて窒素気
流中で溶媒を蒸発除去した。

１ｉｉ）ｉｉ）の抽出残渣を２００μｅのエタノールに
溶解し、該溶解液を１枚のシャーレ当り４０μＱの割合
で培養肝細胞に接種した。炭酸ガス培養器中にて３７℃
、１０時間培養した。培養肝細胞へのエタノールの影響
を観察するために、１枚のシャーレ当り４０μＱのエタ
ノールを添加して試料溶液の場合と同様の処理を行った
。

ｉｖ　）　　培養完了時に培地を完全に交換し、培養肝
細胞のＤＮＡ合成能の評価用マーカーの３Ｈ−チミジン
を５μｃ／　ｄｉｓｈ　（’Ｈ−チミジンの溶液濃度２
５０μＣ／１１２）を添加して、再び３７℃にて１２時
間培養した。

Ｖ）培養肝細胞に取り込まれていない３Ｈ−チミジンを
培地ごと取り除き、充分培地で洗浄した後、シャーレの
底部に付着している細胞をシリコーン製のヘラで剥離回
収した。回収した細胞を超音波振盪にて微粉砕した。

ｖｉ　）　　微粉砕した細胞を３０％および５％トリク
ロル酢酸水溶液で再沈澱し、１０％水酸化ナトリウム水
溶液にて細胞タン白質を完全に溶解した。

ｖｉ）ｖｉ）の試料を液体シンチレーションカウンター
にて培養肝細胞に取り込まれた３Ｈ−チミジン量を測定
した。なお、単位細胞当りの３Ｈ−チミジン量を算出す
るために■）の試料中のタン白質濃度をローリ−法にて
測定した。

液体シンチレーションカウンターによる測定結果を第３
表に示す。第２表はコントロールの測定結果である。測
定は各々５回行ない、平均値をとった。

第３表の測定結果から明らかなように、患者の血清を吸
着剤で処理しない場合（実験番号３）には培養肝細胞の
”Ｉｆ−チミジンの取り込み量が最低値であり、健常者
のそれ（実験番号２）とはかなりの差が認められる。一
方、患者の血清を吸着剤で処理した場合（実施例１〜７
）には実験番号３および比較例１に比較して培養肝細胞
の３Ｈ−チミジンの取込み量は増加している。

以下余白 ［発明の効果］ 本発明の治療剤により、劇症肝炎の患者血清中の肝再生
阻害物質を効率的に除去することができる。かかる治療
剤は、肝炎とくに現在有効な治療法も確立されていない
劇症肝炎に対して著効が期待され、従って患者を危機的
状態から離脱させることが期待される。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、表面のｐＨが３．０〜６．５または７．５〜９．０
   を示す固体物質からなる肝炎治療剤。