JPH03500540A - 放射性よう素化ピリミジンヌクレオシドないしヌクレオチドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 放射性よう素化ピリミジンヌクレオ シドないしヌクレオチドの　告　゛ 本発明は放射性よう素化ピリミジンヌクレオシドないしヌクレオチドの製造方法 に関し、更に特定するに、所望化合物を、例えば簡単な）ＩＰＬＣ法によって容 易に精製しうる形状で製造するための不均一相反応に関する。

５−ヨード−２゛−デオキシウリジンの如き放射性よう素化ピリミジンヌクレオ シドは、ほかにもある用途のうち腫瘍移植ないしＤＮＡ構造の研究において増殖 細胞のＤＮＡを標識するのに多年にわたり用いられてきた。

斯かる化合物を製造するための放射性よう素化方法に、水溶性ピリミジンヌクレ オシドを水性溶液状でよう化ナトリウムおよび硝酸（Ｋｅｏｕｇｈ等、Ｊ、Ｌａ ｂｅｌｌｅｄ　Ｃｏｍｐｄ。

Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ、　、　Ｖｏｌ、　１４、ｐ、１１３−９０　（１９７８ ））と反応させ或はよう化ナトリウムおよびクロラミン−Ｔ　（Ｂａｋｋｅｒ等 、Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ａｐｐｌ、　Ｒａｄｉａｔ、　ｌ５ｏｔ、、Ｖｏｌ、３２． 　ｐ、１７６−１７８（１９８１））と反応させることによるピリミジン環の水 素求電子性置換が含まれている。これらの方法における放射化学収率は高く、ま た残留よう化ナトリウムからの申し分ない生成物分離が通常、クロマトグラフィ ーによって達成されうるけれども、合成に用いられる２　０．０００倍以上の過 剰の出発物質故に未反応ピリミジンヌクレオシドの完全な除去は非常に困難であ り、しかも複雑且つ長い手順を必要とする。

然るに、水不溶性ハロ水銀−ビリミジンヌクレオシドないしヌクレオチドを、溶 解した放射性よう化物イオンおよび酸化剤を含有する水性媒体と接触させ、但し ヌクレオシドないしヌクレオチドのモル量をよう化物のモル量より超過するもの とし、それによって水溶性放射性よう素化ピリミジンヌクレオシドないしヌクレ オチドヲ溶液状で形成し、そして該溶液から残留水不溶性ハロ水銀ピリミジンヌ クレオシドないしヌクレオチドを分離することを包含する、放射性よう素化ピリ ミジンヌクレオシドないしヌクレオチド製造のための使いやすい方法が発見され た０分離は慣用３濾過法によりて容易に実施することができる。この方法はキャ リヤー無添加合成に適し、而して分離工程の後は、きわめて高純度の生成物を得 るのに慣用ＨＰＬＣ法による最小限の精製プロセスを要求するだけである。

本発明の方法は、５−クロロ水銀シチジン、５−クロロ水銀−２°−デオキシシ チジン、５−クロロ水銀ウソジン、５−クロロ水銀−２°−デオキシウリジンの 如き任意の水不溶性ハロ水銀−ビリミジンヌクレオシド或は、５−クロロ水銀シ チジン−５゛−モノ−、ジー若しくはトリホスフェート、５−クロロ水銀−２゛ −デオキシシチジン−５°−モノ−、ジー若しくはトリホスフェート、５−クロ ロ水銀ウリジン−５°−モノ−、ジー若しくはトリホスフェート、５−クロロ水 銀−２°−デオキシウリジン−５゛−モノ−、ジー若しくはトリホスフェートの 如き水不溶性ハロ水銀−ビリミジンヌクレオチドに適応することができ、更に相 当する５−フルオロ水銀化合物等も赤用いることができる。水不溶性ヌクレオシ ドないしヌクレオチドは、例えばＢｅｒｇｓｔｒｏｍ等がＪ、Ｃａｒｂｏｈｙｒ 、　。

Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ、Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、　Ｖｏｌ、４、ｐ、　２５ ７−２６９　（Ｉ９７７）に報告している如き周知の方法で製造することができ る。

放射性よう化物イオンは、任意の水不溶性塩形状、例えば＋ｍｓｌ、ｌ１ｌｉ、 １ｓＩｉのナトリウム塩の如きアルカリ金属塩好ましくはキャリヤー不合形状で 用いることができる。

用いられる酸化剤はクロラミン−Ｔ又は硝酸の場合のように水溶性であってもよ （、或はヨードゲン（１，３゜４．６−テトラクロロ−３ＣＬ６α−ジフエニル グリコールウリル）の場合のように水不溶性であってもよい。

ハロ水銀−ビリミジンヌクレオシドないしヌクレオチドと酸化剤はいずれも、よ う化物イオンに関しモル過剰で用いねばならない、水不溶性酸化剤が好ましい、 なぜなら、反応完了後過剰のハロ水銀−ビリミジンヌクレオシドないしヌクレオ チドを除去するのと同じ濾過工程で該剤の過剰分が水性媒体から除かれ、斯くし て存在する少量の水溶性副生物を除去するのに用いられる後続の高性能リキッド クロマトグラフィー分離が一層簡素化されるからである。これら試薬の過剰量は 臨界的でないが、よう化物イオンに関し各々少なくとも１８００モル過剰を用い ることは通常好都合でありまた望ましい。より大過剰は、経済上ないしは都合上 制限を課されるに過ぎない。

水性反応媒体中のよう化物濃度は臨界的でなく、それは０．１　ｍ　Ｃｉ　／　 ｍ　Ａ　〜１００　ｍ　Ｃｉ　／　ｍ　Ａ　ｙ好ましくは０．１　ｍ　Ｃｉ　／ 　ｍ　１〜１０　ｍ　Ｃｉ　／　ｍ　Ａ範囲でありうる。

反応は１００℃までの温度で実施しうるが、最適結果は１〜３時間２０〜３０℃ で達成される。所望なら、より長い時間或はより短い時間を、異なる温度および （又は）よう化物濃度で用いることができる。

反応混合物を濾過して過剰のハロ水銀ピリミジンヌクレオシドないしヌクレオチ ドと（水不溶性酸化剤の使用時には）過剰の酸化剤を除去した後、反応混合物は 、好ましくは溶離剤としてメチルアルコール／蒸留水（２０／８０）を用いる逆 相カラム上で高性能リキッドクロマトグラフィーに付される。溶出液は紫外線吸 収により、またγ線検出によって分析することができる。

下記特定例は、本発明範囲の限定として機能することな（本発明の本質をより詳 しく例示するために意図さ５−クロロ　−２゛−デオキシウリジンの　゛告２° −デオキシウリジン（０，５０ｇ、　２．２０ミリモル）を水２ｒｎＪ２に溶か し、溶液を５０℃に加熱した。この溶液に水３ｍｇ中の酢酸水ｆＩＩ（０，７４ ｇ、２．３２ミリモル）を加えた・混合物を５０℃にし、更に水１　ｍ　１２を 加えた・反応を５０℃で２．５時間進行させて濃厚な白色懸濁物を得た。加熱浴 を取除き、混合物を約４０℃に冷却した。水１ｍβ中の塩化ナトリウム（０，３ ２ｇ。

５．４５ミリモル）を反応混合物に加え、それを１時間撹拌した。！！濁物を濾 過し、白色沈殿を０．１　Ｍ　Ｎ　ａ　ＣＡｏ、　５　ｍ　Ａ、水０．５　ｍ　 Ａ、９５％エタノール０．５　ｍ　４２およびジエチルエーテル０．５　ｍ℃で 連続的に洗浄した。沈殿を約６０℃で２４時間真空乾燥して５−クロロ水根−２ ′−デオキシウリジン０．５９ｇ（５７，７％）を得た１ｍｐ２１０〜２１１℃ （分解）（文献のｍｐ２１０．５〜２１１℃（Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ、　１９７７ ））　；　’ＨＮＭＲ（ＩＭＮａＣＮ／Ｄ、Ｏ）２．３５ｐｐｍ　（２Ｈ，ｍ％ 　Ｃ２°Ｈ，）、３．８５ｐｐｍ　（２Ｈ，ｍ、Ｃ５°ＨＸ）、４．０１ｐｐｍ （ＩＨ，ｍ、Ｃ３’Ｈ）、４．４６ｐｐｍ　（ＩＨ％ｍ。

Ｃ４°Ｈ）、６．３３ｐｐｍ　（ＩＨ％　ｔ％　Ｃ１°Ｈ）、７．７２　ｐｐｍ 　（ｌ　Ｈ，ｓ、Ｃ６Ｈ）。

九−ユ ５−フルオロ　−２゛−デオキシウリジンの　゛２°−デオキシウリジン（０， ５０ｇ、２．２０ミリモル）を上記例１に記載の如く酢酸水ｆｆ１（０，７４ｇ 。

２．３２ミリモル）と反応させた０反応混合物を約４０℃に冷却した後、水１ｍ β中のふり化ナトリウム（０，２３ｇ、５．４５ミリモル）を加えた。懸濁物を １時間撹拌し、濾過した。沈殿を０．１　Ｍふっ化ナトリウム１ｍＡ、水１ｍ！ ２．９５％エタノール０．５ｍβおよびジエチルエーテル０．５　ｍ　Ａで連続 的に洗浄した。約６０’Ｃで真空乾燥したところ、５−フルオロ水銀−２゛−デ オキシウリジン０．４８ｇ（４９，１％）を得た＊ｍｐ２５０〜２５７℃（分解 ）；　’　ＨＮＭＲ（Ｉ　ＭＮａＣＮ／Ｄａ　Ｏ）２、３８　ｐ　ｐ　ｍ　（２ Ｈ、ｔ　、　Ｃ２°Ｈ，）、３．８４　ｐｐｍ（２Ｈ，ｍ、Ｃ５’Ｈａ）、４． ＯＯｐｐｍ　（ＩＨ，ｍ。

Ｃ３’Ｈ＊）、４．４７ｐｐｍ　（Ｉ　Ｈ，ｍ、Ｃ４°Ｈ）、６．３５ｐｐｍ　 （ＩＨ％　ｔ、Ｃ１°Ｈ）、７．５１ｐｐｍ（ＩＨ，ｓ％０６Ｈ）。

九−１ ５−ヨード−２゛−デオキシウリジン　ＩＵｄＲの　゛ヨードゲン（１０ｍｇ、 ２３．１Ｈモル）と新たに調製した５−クロロ水銀−２°−デオキシウリジン（ １０ｍｇ、２１．６μモル）を水０．４ｍβに懸濁させた。この混合物によう化 ナトリウム（３ｍｇ、２０ｇモル）の水（０，４ｍρ）溶液を加えた。混合物を 室温で２４時間反応させながら、激しく撹拌した。　０．２２　ｍ　Ｍｉｌｌｅ ｘフィルターにより混合物を濾過したところ、透明な溶液０、７８　ｍ　Ａを得 た。これをＨＰＬＣによりクロマトグラフィーした結果、滞留時間（ＲＴ）７． １分でＩ　Ｕ　ｄ　Ｒ２，９ｍｇ（４１％）を得た（真正試料と同じ）　、　Ｈ ＰＬＣは他の２成分の存在（Ｒｙ＝２．２分、３．３１％；Ｒｙ＝１６．９分、 ９．９５％）を示した（第１図）、最初のピークは純粋なＮａＩ溶液を注入した ときにも観察された。また、最後のピークは、ヨードゲン恐らくはＩＣＩの存在 でＮａＩから発生したよう素の成る酸化形として同定された。後者のピークはキ ャリヤー無添加放射性よう素化では観察されなかった。保留時間および試薬比を 変えて合成を数回反復した。斯かる一つの実験からの粗製炉液（ＨＰＣＬ前）を 水銀に関して分析し、Ｏ−２ｇ　／　ｍ　ｘと測定ヨードゲンの滞留時間は次の 如く確定された：メタノール中のヨードゲン飽和溶液を調製し、クロマトグラフ ィーした（１５分のインクラティックＨｚＯ／ＣＨ−ＯＨ１８０／２０容量比、 次いで１０分で１００％メタノールへの直線勾配）、ヨードゲン飽和溶液によう 化ナトリウムを加え、混合物を３時間反応させた後、Ｎ　ａ　Ｓ　ｗ　Ｏｓで急 冷した。炉液を、ヨードゲンに関して記述した如くクロマトグラフィーした。副 生物のＲア＝３．２分。

５−　Ｅ””Ｉ）ヨー　Ｆ　−２゛−デ、ｔ　キシ’７１Ｊ　シン（［”、’Ｉ ］ＩＵｃｉＲの　告 新たに調製した５−クロロ水銀−２゛−デオキシウリジン（４ｍｇ、８．６μモ ル）とヨードゲン（４ｍｇ、９．３μモル）との乾燥混合物に水０．３　ｍ　Ｉ ｌ中の［”’Ｉ］よう化ナトリウム１．４ｍＣ１を加えた。混合物を密閉した２ −ｍ１１反応バイアル中室温で２時間撹拌した。懸濁物を反応容器から５ｍρシ リンジ内に取出し、０．２２μｍＭｉｌｌｅｘフィルターで濾過した０反応バイ アルとフィルターを水０．２　ｍβで４回洗浄した。−緒にしたろ液をＨＰＬＣ に注入し、各画分の放射能含量を測定した＊　ＲＴ＝７．１分のピークからの画 分は真正試料のそれに相当し、放射化学収率５７，１％（０，８ｍ　Ｃｉ　）で ５−　［”’Ｉｌヨードー２゛−デオキシウリジンをもたらした。２戸液中の粗 製１”Ｉ］　Ｉ　Ｕ　ｄ　Ｒの放射化学純度は９９．１％であり、放射能残分０ ．９％（Ｒアゴ２．２分）は［ｌｆｆ１ｌＩ］よう化ナトリウムによりて説明さ れる。

下記表１に、上記例の条件を変えることによって得られた（””Ｉ］　Ｉ　Ｌｌ 　ｄ　Ｒの収率および純度を要約する。

表　１ 種々の反応条件で得られた［１０工］ ＩＵｄＲの　・および　の 反応時間　純度　収率 ”　ｈｒ　ＣＩＨＵｄＲ：　ヨーｒグン８　％　％水　１　３：３　７７．０　 ２２．４ 水　３　１０：２．５　９７．’８　３６．７水　１　１０：１０　８４．０　 ４４．０水　２’ｌＯ：１０　９９．１　±０．４　５４．８　±　１．６ａ　 ｍｇ／ｍＡ：ｍｇ／ｍＡ Ｃ４回の実験 伝−一二 ５−　［”’１１ヨードー２゛−デオキシウリジン（［”’ＩＩ■　ＴＪｄＲの 　゛告 ５−フルオロー２°−デオキシウリジンの放射性よう素化を、該化合物８．６μ モルを例４の５−クロロ水銀−２゛−デオキシウリジンに変えて用いることによ り実施した。　ｆＰ液液中約１００％の放射能を回収した　（ＩＭ寥１１１Ｕｄ Ｒの収率は約５０％であり、放射能残部はよう化ナトリウム画分で回収された。

５−［目”１１ヨード−２°−デオキシウリジン（［目１工］ＩＬＩｄＲの　告 ５−クロロ水銀−２゛−デオキシウリジン（４ｍ　ｇ　ｓ８．６モル）とヨード ゲン（４ｍｇ、９．３モル）との乾燥混合物に水０．３ｍβ中の［１１’１７］ よう化ナトリウム２．１ｍＣ１を加えた。よう化ナトリウム溶液のｐＨを、０． １Ｍ酢酸を用いて約７に調整した。混合物を密閉した２−ｍβ反応バイアル中室 温で３時間撹拌した。懸濁物を反゛応容器から５ｍρシリンジ内に取出し、０． ２２　ｍ　ＭｉｌｌｅＸフィルターで濾過した０反応バイアルとフィルターを水 ０、２　ｍ　Ａで４回洗浄した。−緒にしたろ液をＨＰＬＣに注入し、その画分 を収集し、線量検定器でカウントした。真正試料（Ｒｔ＝７．１分）に相当する 放射性画分は放射化学収率５７．１％（１，３７ｍＣ１）で５−　［１ｆｌＪ］ ヨード−２−デオキシウリジンをもたらした。ろ液中の粗製ｒＩ■工１１　ＬＪ 　ｄ　Ｒの放射化学純度は９８％であった。放射能の１．２％（Ｒｔ＝２．２分 ）は［＋ｘｓＩｌよう化ナトリウムで説明され、残分０．８％はＲｙ　＝　４． １分の未同定種に関連していた。

他の水不溶性ハロ水銀ピリミジンヌクレオシドないしヌクレオチドを用いたとき も同様の結果を得ることができる。

同日提出する明細書中広の通り補正致します。

１、特許請求の範囲の欄を下記の如く補正します。

「１．水不溶性ハロ水銀ピリミジンヌクレオシドないしヌクレオチドを、溶解し た放射性よう化物イオンおよびヨードゲンを含有する水性媒体と接触させ、但し 肛２ヌクレオシドないしヌクレオチドおよび′″′ｉＵ′ｉＵヨードゲンをよう 化物のモル量より超過するものとし、それによって水溶性放射性よう素化ピリミ ジンヌクレオシドないしヌクレオチドを溶液状で形成し、そして 該溶液から、ハロ水銀ピリミジンヌクレオシドないしヌクレオチドを含む残留水 不溶性物質を分離することを包含する、放射性よう素化ピリミジンヌクレオシド ないしヌクレオチドの製造方法。

２、不溶性ヌクレオシドないしヌクレオチドが５−りロワ水銀ピリミジンヌクレ オシドないしヌクレオチドである、特許請求の範囲第１項記載の方法・ ３、不溶性ヌクレオシドが５−クロロ水銀−２゛−デオキシウリジンである、特 許請求の範囲第２項記載の方法。

４、不溶性ヌクレオシドないしヌクレオチドがフルオロ水銀ピリミジンヌクレオ シドないしヌクレオチドである、特許請求の範囲第１項記載の方法ユ」 ２、　第２頁第４行において「酸化剤」とある後に「ヨードゲンｊを加入し、ま た次行（第４行）において「ないしヌクレオチド」とある後に「およびヨードゲ ン」を加入します。

３、第３頁第１３行〜１６行において「クロラミン・・・であってもよい。」と あるのを「水不溶性のヨードゲンである。Ｊと補正します。

４、　同下から７行目〜８行目において「水不溶性酸化剤が好ましい。なぜなら 、」とあるのを「酸化剤として水不溶性のヨードゲンが用いられるのは、」と補 正します。

国際調査報告

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．水不溶性ハロ水銀ビリミジンヌクレオシドないしヌクレオチドを、溶解した 放射性よう化物イオンおよび酸化剤を含有する水性媒体と接触させ、但し該ヌク レオシドないしヌクレオチドのモル量をよう化物のモル量より超過するものとし 、それによって水溶性放射性よう素化ビリミジンヌクレオシドないしヌクレオチ ドを溶液状で形成し、そして 該溶液から、ハロ水銀ビリミジンヌクレオシドないしヌクレオチドを含む残留水 不溶性物質を分離することを包含する、放射性よう素化ビリミジンヌクレオシド ないしヌクレオチドの製造方法。
2. ２．不溶性ヌクレオシドないしヌクレオチドが５−クロロ水銀ビリミジンヌクレ オシドないしヌクレオチドである、特許請求の範囲第１項記載の方法。
3. ３．不溶性ヌクレオシドが５−クロロ水銀−２′−デオキシウリジンである、特 許請求の範囲第２項記載の方法。
4. ４．不溶性ヌクレオシドないしヌクレオチドがフルオロ木銀ビリミジンヌクレオ シドないしヌクレオチドである、特許請求の範囲第１項記載の方法。
5. ５．不溶性ヌクレオシドが５−フルオロ水銀−２′−デオキシウリジンである、 特許請求の範囲第４項記載の方法。
6. ６．酸化剤が水不溶性である、特許請求の範囲第１項記載の方法。
7. ７．酸化剤がヨードゲンである、特許請求の範囲第１項記載の方法。
8. ８．酸化剤が水不溶性である、特許請求の範囲第２項記載の方法。
9. ９．酸化剤がヨードゲンである、特許請求の範囲第２項記載の方法。
10. １０．酸化剤が水不溶性である、特許請求の範囲第３項記載の方法。
11. １１．酸化剤がヨードゲンである、特許請求の範囲第３項記載の方法。
12. １２．酸化剤が水不溶性である、特許請求の範囲第４項記載の方法。
13. １３．酸化剤がヨードゲンである、特許請求の範囲第４項記載の方法。
14. １４．酸化剤が水不溶性である、特許請求の範囲第５項記載の方法。
15. １５．酸化剤がヨードゲンである、特許請求の範囲第５項記載の方法。