JPH0349909B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質及びそれらの誘導体に
関し、さらに詳しくは、下記式 式中、R¹は水素原子又は水酸基を表わし、R²
及びR³は併合してイソプロピリデン基（＝Ｃ
（CH₃）₂）を表わし、R⁴は置換又は未置換のベン
ジル基を表わす）で示される抗生物質の新規誘導
体に関する。 下記式 で示される７−オキソ−１−アジビシクロ〔３，
２，０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格
を有する抗生物質は、一般に高い抗菌力とβ−ラ
クタマーゼ阻害活性を有しており、従来から、発
酵法、半合成法、全合成法により各種の７−オキ
ソ−１−アジビシクロ〔３，２，０〕ヘプト−２
−エン−２−カルボン酸誘導体が製造されてい
る。〔例えば、チエナマイシン（ジヤーナル・オ
ブ・アンテイビオテイクス、32巻（1979年）、１
〜12頁）、エピチエナマイシン類（第17回インタ
ーサイエンス・コンフアランス・オン・アンテイ
ミクロビアル・エイゼンツ・アンド・ケモテラピ
ー、要旨第80および第81号（1977年））、Ｎ−アセ
チルチエナマイシン（西ドイツ特許2652681号
（1977年））、オニバニン酸類（ジヤーナル・オ
ブ・アンテイビオテイクス、32巻（1979年）、287
〜304頁）、PS−５（ジヤーナル・オブ・アンテイ
ビオテイクス、32巻（1979年）、262〜286頁）、
PS−６（公開特許公報昭54−59295号）、PS−７
（公開特許公報昭54−92983号）など〕。 本発明により提供される前記式（）の化合物
は、７−オキソ−１−アジビシクロ〔３，２，
０〕ヘプト−２−エン−２−カルボン酸骨格の３
位にパンテテイニル基を有し且つ６位にエチル基
又は１−ヒドロキシエチル基を有している点に構
造的特徴を有する従来の文献に未載の新規な抗生
物質OA−6129のパントイル基の水酸基がイソプ
ロピリデン化されたことを特徴とする新規な環状
ケタール誘導体である。以下この抗生物質を「抗
生物質OA−6129」と総称し、より具体的には、
上記式（）のR¹，R²，R³及びR⁴が水素原子を
表わす抗生物質を「抗生物質OA−6129A」と、
R¹が水酸基を表わし、R²，R³及びR⁴が水素原子
を表わす抗生物質のうち、５，６−シス立体配置
を有するものを「抗生物質OA−6129B₁」と、同
じく、５，６−トランス立体配置を有するものを
「抗生物質OA−6129B₂」と略称する。 式 （式中、R¹は水素原子又は水酸基を表わす）
で示される抗生物質OA−6129は、従来提案され
ている同じ基本骨格をもつ抗生物質に比較して安
定である点でユニークであり、しかも、該化合物
及びその塩は、上記の公知文献に記載されている
と同様に、強い抗菌力及びβ−ラクタマーゼ阻害
活性を有すると共に、β−ラクタマーゼ生産菌に
対するペニシリン系、セフアロスポリン系等の抗
菌生物質の抗菌力を相乗的に増強する能力をも併
せ有しており、抗菌剤として有用である。 また、式 （式中、R¹は前記の意味を表わし、R⁴¹は、置
換もしくは未置換のベンジル基を表わす）で示さ
れる誘導体は、式（−ａ）の抗生物質に比し、
各種の有機溶媒に対する溶解性が改善されている
ことから各種の有機合成反応に供し易くなるこ
と、R¹が水酸基を表わす化合物については特に、
パントイル基の水酸基のみが選択的に保護され得
るという点から有用な誘導体開発のための中間体
として有用である。それに対して水酸基の保護と
して通常行われているアシル化反応では、パント
イル基の水酸基のみならずヒドロキシエチル基の
水酸基までアシル化されるので、選択性な水酸基
の保護を行えない（参考例）。 本明細書において用いる置換ベンジル基におけ
るベンゼン環上の置換基としては、例えば、メチ
ル、エチル等の低級アルキル基；メトキシ、エト
キシ等の低級アルコキシ基、塩素、フツ素などの
ハロゲン原子、ニトロ基、等が挙げられる。かか
る置換ベンジル基としては例えばｐ−ニトロベン
ジル基、ｐ−ブロモベンジル基、ｐ−メチルベン
ジル基、２，４−ジニトロベンジル基、ｐ−メト
キシベンジル基等が包含される。前記式（）に
おいて、R⁴によつて表わされる「置換もしくは
未置換ベンジル基」としては中でもベンジル基及
びｐ−ニトロベンジル基が好適である。 本発明に従えば、前記式（）でR²，R³及び
R⁴が水素原子を表わす場合の前記式（−ａ）
の抗生物質OA−6129は、該抗生物質OA−6129
生産性微生物を栄養培地中で培養し、その培養物
から、β−ラクタマーゼ阻害活性を有する上記の
抗生物質OA−6129を採取することからなる方法
により製造することができる。 本発明で使用する抗生物質OA−6129生産菌
は、前述した理化学的性質及び生物学的性質を有
する抗生物質OA−6129を生産する能力を有する
ものである限り、どのような属に属する菌でも使
用でき、広範囲の微生物から選ぶことができる。 しかして、本発明の目的に適する菌株の検索は
次のようにして行なうことができ、これにより当
業者であれば、本発明で用いる抗生物質OA−
6129生産菌を容易に取得することができる。 すなわち、β−ラクタム感受性菌を検定菌とす
るビオアツセイ寒天平板と、これに種々のタイプ
のβ−ラクタマーゼを添加したビオアツセイ寒天
平板とを用いて、土壌分離菌の培養液を検定
し、前者の寒天平板に阻止円を与え、更に後者の
いくつかの寒天平板における阻止円が前者のそれ
より小さい培養液を与える土壌分離菌を検索す
る。次にその土壌分離菌の培養液中の活性成分を
活性炭に吸着させ、その溶出濃縮液をペーパーク
ロマトグラフイーまたは薄層クロマトグラフイー
で展開し、β−ラクタム感受性菌を検定菌とする
ビオオートグラフイーにより抗生物質OA−6129
が検出されれば、その菌は本発明の方法で用い得
る抗生物質OA−6129生産菌であるということが
できる。 この検索方法を具体例によりさらに説明すれば
次の通りである。 β−ラクタム感受性菌のビオアツセイ寒天平板
として、後述するコマモナス検定板を用い、これ
にパチルス・セレウス569の生産するβ−ラクタ
マーゼを添加したコマモナスCV検定板と、シト
ロバクター・フロインデイ−Ｅ−９の生産するβ
−ラクタマーゼを添加したコマモナスCM検定板
とを調製する。一方、土壌分離菌の培養液を８
mm直径のパルプデイスクにしませて、それぞれの
検定板に乗せ、35℃で20時間培養したのち、コマ
モナス検定板で阻止円を与え、且つコマモナス
CV検定板またはコマモナスCM検定板での阻止
円がコマモナス検定板での阻止円より小さい、培
養液を与えた土壌分離菌を選出する。 次にその土壌分離菌の培養液に該液の２％
（Ｗ／Ｖ）量に相当する特製白鷺活性炭（武田薬
品工業(株)製）を加え、15分間撹拌した後、遠心分
離により沈殿を集め、この沈殿を用いた培養液
と同容量の蒸留水で洗浄し、再び遠心分離して沈
殿を集める。この沈殿に前記で用いた培養液の
半容量に相当する量の50％（Ｖ／Ｖ）アセトン水
を加え、室温で30分間撹拌後、遠心分離して上澄
をえた。この上澄液をロータリー・エバポレータ
ーを用いて30〜35℃で濃縮して、上記で用いた培
養液に対して20倍の濃縮液をえた。この濃縮液
を東洋紙No.50（東洋紙(株)製）で80％アセトニ
トリル／トリス／EDTA〔アセトニトリル120ml、
PH7.5の1/10Ｍトリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタン−塩酸緩衝液30ml、PH7.5の1/10Ｍエチ
レンジアミン四酢酸ナトリウム塩水溶液１mlから
なる〕溶媒を用い下降法ペーパークロマトグラフ
イーを16時間行つた後、コマモナス・テリゲナＢ
−996を検定菌としてビオオートグラフイーを行
なう。そして、抗生物質OA−6129の一種の抗生
物質と同じ移動距離（Rf値のところ）に阻止帯
を示した土壌分離菌を抗生物質OA−6129生産菌
候補として選出する。 このようにして選出された候補菌については、
さらにペーパークロマトグラフイーや薄層クロマ
トグラフイーを行ない、抗生物質OA−6129の生
産性を確認する。 これにより、当業者は本発明
の目的に適合した抗生物質OA−6129生産菌を容
易に検索することができる。 上記の如くして検索された抗生物質OA−6129
生産菌の代表的なものには、ストレプトミセス属
に属する抗生物質OA−6129生産菌が包含され、
その好適な一例としては、福岡県福岡市の住吉神
社の近くで採取した土壌から分離した放線菌で、
本発明者らがOA−6129菌株の番号を付した菌株
が挙げられる。 このOA−6129菌株の菌学的性質は次の通りで
ある。 １） 形 態 顕微鏡下でよく分枝した基中菌糸より、直状〜
曲状（Straight〜flexuous）の気菌糸を伸長し、
輪生枝はみとめられない。成熟した胞子鎖は10個
以上の楕円〜円筒形をした胞子から成り、胞子の
うは認められない。胞子の大きさは0.6〜1.0×0.7
〜2.5ミクロン位で、胞子の表面は平滑である。
鞭毛胞子はみとめられない。 ２） 各種培地における生育状態 培養は特記しないかぎり28゜〜30℃で行つた。
また色調の記載は主としてエツチ・デイ・トレス
ナーとイー・ジエー・バカス（H.D.Tresner
and E.J.Backus）著、ジヤーナル・オブ・アプ
ライド・ミクロビオロジイー（Journal of
Applied Microbiology）11巻、４号、（1963年）
335〜338頁の方法に従い、〔 〕内に示す符号
〔CHMコード（code）〕はコンテイナー・コーポ
レーシヨン・オブ・アメリカのカラー・ハーモニ
ー・マニユアル（Container Corporation of
AmericaのColor Harmony Manual）を用い
た。 (1) シユークロース・硝酸塩寒天培地： 黄灰〔2dc〕〜明るい灰黄茶〔3ge〕の中等
度生育上に、黄灰〔2dc〕〜灰黄ピンク〔5dc〕
の気菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられな
い。 (2) グルコース・アスパラギン寒天培地： うす黄〔2db〕〜明るいオリーブ茶〔2ge〕
の良好な生育上に、明るい灰〔ｄ〕の気菌糸を
着生する。尚この気菌糸はおくれて灰黄ピンク
〔5dc〕となる。溶解性色素はみとめられない。 (3) グリセリン・アスパラギン寒天培地（ISP培
地−５）： 穏やかな黄ピンク〔4gc〕〜明るい茶〔4ie〕
の良好な生育上に、明るい灰〔ｄ〕〜明るい灰
赤茶〔5fe〕の気菌糸を着生する。溶解性色素
はみとめられない。 (4) スターチ無機塩寒天培地（ISP培地−４）： うす黄〔2db〕〜灰色〔2fe〕の良好な生育上
に明るい灰〔ｄ〕の気菌糸を着生する。溶解性
色素は生成しない。 (5) チロシン寒天培地（ISP培地−７）： 灰黄〔3ec〕〜明るい茶〔4ie〕の生育上に、
明るい灰〔ｄ〕〜明るい茶灰〔3fe〕の気菌糸
を着生する。培地は極く僅かに茶色を帯びる。 (6) 栄養寒天培地： うす黄〔2db〕または明るい黄〔2fb〕〜明
るいオリーブ茶〔2ge〕の良好な生育上に、明
るい灰赤茶〔5fe〕の気菌糸を着生する。溶解
性色素はみとめられない。 (7) イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ISP
培地−２）： 穏やかな黄ピンク〔4gc〕〜明るい茶〔4ie〕
の良好な生育上に、灰黄ピンク〔5dc〕或いは
やゝおくれて明るい灰〔ｄ〕の気菌糸を着生す
る。溶解性色素はみとめられない。 (8) オートミール寒天培地（ISP培地−３）： 灰黄〔3ec〕〜明るいオレンジ黄〔3ea〕、或
いは明るい灰黄茶〔3ge〕の良好な生育上に、
明るい茶灰〔3fe〕〜明るい灰赤茶〔5fe〕の気
菌糸を着生し、菌集落の周辺の培地は僅かに褐
色を呈す。 (9) リンゴ酸石灰寒天培地： 暗色〜黄灰〔2dc〕の中等度の生育上に、明
るい灰〔ｄ〕〜明るい灰赤茶〔5fe〕の気菌糸
を着生し、溶解性色素はみとめられない。生育
菌集落の周辺にカルシウム塩の溶解帯が見られ
る。 (10) グルコース・ペプトン・ゲラチン培地（20℃
培養） うす黄〔2db〕〜茶色の良好な生育上に白色
〔ｂ〕〜灰黄ピンク〔5cb〕の気菌糸を着生す
る。培養長期（約３週間以上）にわたると褐色
の溶解性色素を生成した。 ３） 生理的性質 (1) 生育温度範囲 イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ISP
培地−２）を用いて10゜，20゜，25゜，30゜，34゜，
37゜，40゜，45゜，50℃の各温度で実験の結果、37
℃では殆んど発育出来ない。40℃以上では全く
発育しない。その他の各温度では生育がみとめ
られた。最適生育温度範囲は20〜30℃と思われ
る。 (2) ゲラチンの液化：液化する。 (3) スターチの加水分解：分解する。 (4) 脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：凝固はしない
が、ペプトン化する。 (5) メラニン様色素の生成： ペプトン・イースト・鉄寒天培地（ISP培地
−６）及びトリプトン・イーストエキス・ブロ
ス培地（ISP培地−11）ではメラニン様色素の
生成は認められなかつた。チロシン寒天培地で
極く僅かに茶色を呈するも、メラニンの生成は
痕跡程度である。 (4) 各種炭素源の同化性（プリドハム・ゴトリブ
寒天培地使用） (1) Ｌ−アラビノース ＋ (2) Ｄ−キシロース ＋ (3) Ｄ−グルコース ＋ (4) Ｄ−フラクトース ＋ (5) シユークロース 凝わしい (6) イノシトール − (7) Ｌ−ラムノース ＋ (8) ラフイノース − (9) Ｄ−マンニツト ＋ ＋は同化する， −は同化しない。 以上の菌学的性質よりOA−6129菌株は
Streptomyces属に属する菌株であつて、気菌糸
の形状はセクシヨンRF（Section
Rectiflexibiles）と考えられ、胞子表面平滑であ
つた。気菌糸の色調は大多数の培地、即ちオート
ミール寒天、グリセリン・アスパラギン寒天、ス
ターチ・無機塩寒天等の培地では明るい灰色
〔ｄ〕で、灰色系（Gray series）の菌株である。
しかしシユークローズ・硝酸塩寒天、イーストエ
キス・麦芽エキス寒天、及びグルコース・アスパ
ラギン寒天培地では培養時期に依つては灰黄ピン
ク〔5dc〕の赤色系（Red series）を呈する事が
ある。また、基中菌糸の色は培養初期はいづれの
培地でもうす黄〜灰黄で、培養を続けると黄茶〜
灰黄茶或いは茶色の色調を示す様になる。メラニ
ン色素はペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地
中及びトリプトン・イーストエキス・ブロス中に
みとめられず、またその他の水溶性色素も多くの
培地で生成しなかつた。しかしチロシン寒天培
地、グルコース・ペプトン・ゲラチン培地及びオ
ートミール寒天培地中に僅かに茶色の色素をみと
めた。 本発明者等は本菌をストレプトミセス・エスピ
ーOA−6129（Streptomyces sp.OA−6129）とし
て、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所
に微工研条寄第11号（FERM（BP−11）として
国際寄託している。 本発明の抗生物質OA−6129は、抗生物質OA
−6129生産菌、例えば、上記ストレプトミセス
sp.OA−6129の胞子または菌糸を栄養源含有培地
に接種して、好気的に増殖させることによつて生
産される。 その栄養源としては、放線菌の栄養源として通
常使用されるもの、例えば炭水化物、窒素源、無
機塩などの同化できる栄養源を使用できる。例え
ば、ぶどう糖、グリセリン、麦芽糖、蔗糖、糖
蜜、デキストリン、殿粉などの炭水化物や、大豆
油、落花生油、ラードなどの油脂、脂肪類の如き
炭素源；ペプトン、肉エキス、大豆粉、綿実粉、
乾燥酵母、コーンスチープリカー、酵母エキス、
脱脂乳、カゼイン、硝酸ナトリウム、硝酸アンモ
ニウム、硫酸アンモニウムなどの窒素源；燐酸二
カリウム、食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシ
ウムなどの無機塩が使用でき、必要により微量金
属例えばコバルト、マンガンなどを添加すること
ができる。栄養源としては、その他、抗生物質
OA−6129生産菌を利用して抗生物質OA−6129
を生産するものであれば、いずれの栄養源でも使
用でき、公知の放線菌の培養材料はいずれも使用
できる。また、加熱殺菌時及び培養中における発
泡を抑えるため、シリコン、植物油などの消泡剤
を添加することもできる。 上記の如き栄養源の配合割合は特に制約される
ものではなく、広範囲に亘つて変えることがで
き、使用する抗生物質OA−6129生産菌にとつて
最適の栄養源の組成及び配合割合は、当業者であ
れば簡単な小規模実験により容易に決定すること
ができる。 また栄養培地は培養に先立ち殺菌することがで
き、この殺菌の前又は後で、培地のPHを４〜９の
範囲、特にPH６〜８の範囲に調節するのが有利で
ある。 かかる栄養培地での抗生物質OA−6129生産菌
の培養は原則的には、一般の放線菌による抗生物
質の製造において通常使用されている方法に準じ
て行なうことができる。通常好気的条件下に培養
するのが好適であり、通常撹拌しながら及び／又
は通気しながら行なうことができる。また、、培
養方法としては静置培養、振盪培養、通気撹拌を
ともなう液内培養のいずれも使用可能であるが、
液内培養が有利である。 使用しうる培養温度は抗生物質OA−6129生産
菌の発育が実質的に阻害されず抗生物質OA−
6129を生産し得る範囲であれば特に制限されるも
のではなく、使用する生産菌株に応じて変えるこ
とができるが、一般に20〜40℃、好ましくは25〜
35℃の範囲内の温度が好適である。 また、培養を好適に行なうため、必要に応じ
て、培養中に培養物のPHを４〜９、特に６〜８の
範囲に調節することができる。 大規模な大量培養の場合、適宜種母培養を行な
い、これを栄養培地に接種し、液体培養するのが
有利である。 培養は通常抗生物質OA−6129が充分に蓄積す
るまで継続することができる。その培養時間は、
培地の組成や培養温度、使用生産株等により異な
るが、通常30〜90時間の範囲である。 なお、使用する培養条件は、使用する生産菌株
の特性に応じて、当業者であれば簡単な実験によ
り、最適条件を容易に決定することができる。 培養中の抗生物質OA−6129の蓄積量は、各抗
生物質OA−6129A、同OA−6129B₁及び同OA−
6129B₂について後述するビオアツセイ法及びビ
オオートグラフイーにより定量することができ、
それにより最適蓄積量を容易に知ることができ
る。 かくして、培養物中に蓄積された各抗生物質
OA−6129は水溶性であり、主として菌体外に存
在するので、有利には、培養後、過、遠心分
離、抽出などのそれ自体公知の分離法によつて菌
体を除去し、その液、上澄液、抽出液などより
回収される。 回収はそれ自体公知の種々の方法で行なうこと
ができ、特にカルボン酸型抗生物質の回収のため
に屡々利用される方法が有利に適用される。例え
ば、低PHにおける酢酸エチル、ｎ−ブタノール等
での溶媒抽出及びその溶媒量から高PH水層への転
溶；活性炭、アンバーライトXAD（ローム・アン
ド・ハース社製）、ダイヤイオンHP−20（三菱化
成社製）等による吸着と、メタノール水、アセト
ン水等による溶出；ダウエツクス１×２（ダウケ
ミカル社製）、QAE−セフアデツクスＡ−25（フ
アルマシヤ社製）、DEAE−セルローズワツトマ
ンDE−32（ワツトマン社製）、DEAE−セフアデ
ツクスＡ−25（フアルマシヤ社製）等のイオン交
換樹脂による吸着及び溶出；セフアデツクスＧ−
10（フアルマシヤ社製）バイオ・ケルＰ−２（バイ
オ・ラツド社製）、等によるケル過；セルロー
ズ、アビセルSF（アメリカン・ビスコース社製）
等のカラムクロマトグラフイー；アセトン等の溶
剤添加による強制沈殿法；凍結乾燥法、等をそれ
ぞれ単独で或いは適宜組合せて、さらに場合によ
つては反復して使用される。 回収精製工程中の抗生物質OA−6129の挙動は
後記するビオアツセイ法およびビオオートグラフ
イーにより定量測定することができる。 かくして、前記した特性を有する抗生物質OA
−6129が得られる。 上記発酵法により製造される抗生物質OA−
6129すなわち式（）のR¹，R²及びR³が水素原
子を表わす場合の前記式（−ａ）の化合物は、
一般に５−及び６−位の炭素原子に結合する水素
原子が互にトランス立体配置を有している。ま
た、R¹が水酸基を表わす場合の式（）の化合
物は、一般に５−及び６−位の炭素原子に結合す
る水素原子が互にトランス若しくはシス立体配置
を有している。なお、３−位の炭素原子に結合し
ているパンテテイニル基は１個の不斉炭素原子を
有しており、Ｄ−形及びＬ−形のいずれか、又は
ラセミ形で存在し得る。 本抗生物質OA−6129A，B₁及びB₂は、一般に
遊離形のものよりも塩の形の方がより安定である
から、後述する医薬用途に使用したり、さらに誘
導体に転換する場合の中間体として使用したり、
或いは前記した精製工程に付する場合等において
は、塩の形で処理することが好適である。 抗生物質OA−6129A，B₁及びB₂のその塩形へ
の転化はそれ自知の方法に従い、該抗生物質を無
機又は有機の塩基で処理することにより行なうこ
とができる。この造塩反応に使用し得る無機又は
有機の塩基としては、例えば、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム水酸化リチウムの如きアルカ
リ金属の水酸化物；水酸化カルシウム、水酸化マ
グネシウムの如きアルカリ土類金属の水酸化物；
モノエチルアミン、ジメチルアミン、トリメチル
アミン、モノエタノールアミン、ジエタノールア
ミン、ベンザチン、プロカインの如き第一級、第
二級又は第三級の有機アミン等が挙げられる。 上記の如くして得られた抗生物質OA−6129A，
B₁及びB₂は（置換もしくは未置換ベンジル）エ
ステルに変えることもできる。そのエステル化は
それ自体公知の方法に従つて行なうことができ
る。 例えば、抗生物質OA−6129A，B₁若しくはB₂
又はその塩を置換もしくは未置換のベンジルハラ
イド（例えばベンジルクロライド、ベンジルブロ
マイド、ｐ−ニトロベンジルクロライド、ｐ−ニ
トロベンジルブロマイド、ｐ−メトキシベンジル
ブロマイド、２，４−ジニトロベンジルクロライ
ド、Ｐ−ブロモベンジルブロマイドなど）と反応
せしめることによりエステルに変えることができ
る。本エステル化反応は、一般に不活性液体媒体
中で行なうのが好ましく、使用し得る不活性液体
媒体としては、例えば、クロロホルム、塩化メチ
レンなどのハロゲン化炭化水素類；ジメチルホル
ムアミド、ヘキサメチルホスホルアミドなどのア
ミド類；ジメチルスルホキシド；テトラヒドロフ
ラン、ジオキサンなどのエーテル類；酢酸エチ
ル、酢酸ｎ−ブチル、などのエステル類；アセト
ン、メチルエチルケトンなどのケトン類などが挙
げられ、これら液体媒体はそれぞれ単独で使用し
てもよく、或いは必要に応じて２種以上混合して
用いることもできる。 反応温度は臨界的ではなく、使用するハライド
の種類、液体媒体の種類等に応じて広範に変える
ことができ、抗生物質OA−6129A，B₁及びB₂が
著るしく分解しない温度範囲内で任意に選ぶこと
ができるが、一般に60℃以下の温度、好ましくは
０〜40℃の範囲、さらに好ましくは５℃〜室温の
範囲が有利である。 また、上記反応に際しては、必要に応じて、ト
リメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、
ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの反応促進
剤を添加してもよい。 かかる条件下に反応は大体１〜24時間以内、通
常３〜12時間で終らせることができる。 なお、上記ハライドと反応せしめられる抗生物
質OA−6129A，B₁又はB₂は必ずしも単離された
ものを使用する必要はなく、前記抗生物質OA−
6129生産菌の培養物又はその培養物から菌体を分
離した後の培養液を使用することができ、或いは
前述した単離精製法に従つて少なくとも部分的に
精製した粗製の抗生物質OA−6129A，B₁又はB₂
を使用することもできる。かかる部分精製物とし
ては、例えば該培養液の活性炭吸着溶出濃縮物；
培養液のダイヤイオンHP−20（三菱化成工業(株)
製）吸着溶出濃縮物；該濃縮物をQAE−セフア
デツクス（フアルマシア社製）に吸着させグラジ
エント食塩濃度の燐酸緩衝液で溶出し、活性炭で
脱塩した濃縮物；低温でのPH3.5におけるブタノ
ール抽出濃縮物などが挙げられる。 かくして得られる抗生物質OA−6129A，B₁又
はB₂のエステルは、抗生物質の分野におけるそ
れ自体公知の種々の方法により、反応混合物から
分離することができ、或いは精製することができ
る。例えば、反応終了後、先ず副生物などの水溶
性不純分を除去するため、反応液を水性媒体中に
あける。その際PHをほぼ中性に保つため該水性媒
体としては中性緩衝液を使用するのが望ましい。
次いで、この混合液を例えば、酢酸エチル、ベン
ゼン、クロロホルムなどの水と実質的に混和しな
い非極性有機溶媒で処理して抗生物質OA−
6129A，B₁又はB₂のエステルを該有機溶媒層に
抽出する。この抽出に際し、例えば食塩、硫酸ア
ンモニウムなどの如き塩類を加え、塩析効果によ
り抽出効率を高めるようにすることができる。 該溶媒層は、脱水芒硝などで乾燥した後、それ
自体公知の方法に従い、例えばバイオ・ビーズＳ
−X3（バイオラツド社製）、セフアデツクスLH−
20（フアルマシア社製）などによるケル過；シ
リカゲル、アルミナ、フロリジル（フロリジン社
製）などを担体とする吸着クロマトグラフイーな
どを適宜組合せ且つ必要に応じて反復使用して、
エステルを単離することができる。 以上の如くして得られた抗生物質OA−6129A，
B₁又はB₂の置換もしくは未置換ベンジルエステ
ルは、３−位の炭素原子に結合しているパントイ
ル基のα−及びγ−位の水酸基を同時にエーテル
化した環状ケタール又は環状アセタール誘導体に
変えることができる。そのケタール又はアセター
ル化は、それ自体公知の方法によつて行なうこと
ができる。 例えば、抗生物質OA−6129A，B₁又はB₂のエ
ステルをケトン又はアルデヒド誘導体と反応せし
めることにより、それらの環状ケタール又は環状
アセタール誘導体に変えることができる。この反
応は、一般に反応試薬を溶媒として使用し行うの
が好ましく、使用し得る反応試薬としては、例え
ば、アセトン、２，２−ジメトキシプロパン、ホ
ルムアルデヒド、２，２−ジメトキシエタン、ア
セトアルデヒド、ベンズアルデヒド、プロピオン
アルデヒド、アセトフエノン、ジフエニルケト
ン、シクロヘキサノン、ジベンジルケトン、１，
１ジフエニルアセトンなどが挙げられ、これらの
反応試薬はそれぞれ単独で使用してもよく、或い
は必要に応じて２種以上を混合して用いることも
できる。 また、必要により反応試薬に対する抗生物質
OA−6129A，B₁又はB₂のエステルの溶解性を考
慮して、不活性溶媒を混合させることもできる。 反応温度は臨界的ではなく、使用する液体媒体
の種類等に応じて広範に変えることができ、抗生
物質OA−6129のエステルが著るしく分解しない
温度範囲内で任意に選ぶことができるが、一般に
60℃以下の温度、好ましくは−40〜40℃の範囲、
さらに好ましくは０℃〜室温の範囲が有利であ
る。 また、上記反応に際しては、必要に応じて、無
水ｐ−トルエンスルホン酸、ボロントルフロライ
ドエーテラート、塩化亜鉛などの反応促進剤を添
加する。 かかる条件下に反応は大体30分〜12時間以内、
通常２〜５時間で終らせることができる。 かくして得られる該エステルの環状ケタール又
は環状アセタール誘導体は、それ自体公知の分
離、精製方法に準じて反応混合物から単離するこ
とができる。例えば、反応終了後、先ず過剰の反
応促進剤等を不活化するためにアミン類で処理し
た後、処理液を例えば、酢酸エチル、ベンゼン、
クロロホルムなどの水と実質的に混和しない非極
性有機溶媒中にあける。該混合液から副生物など
の水溶性不純分を除去するため、、水性媒体で洗
浄する。 その際、水性媒体としては中性緩衝液を使用す
るのが望ましい。次いで、該有機溶媒層を濃縮乾
固した後、それ自体公知の方法に従い、例えば、
シリカゲル、バイオビース（バイオラド社製）、
セフアデツクスLH−20（フアルマシア社製）な
どを担体とするクロマトグラフイーなどを適宜組
合せ且つ必要に応じて反復使用して、所望の環状
ケタール又は環状アセタール誘導体を単離するこ
とができる。 抗生物質OA−6129A，B₁若しくはB₂又はその
塩は、広範囲の抗菌活性を有し、各種微生物、例
えばスタフイロコツカス属、サルシナ属、バチル
ス属等に属するグラム陽性菌に対し非常に強い抗
菌力を示し、更に例えばアルカリゲネス属、コマ
モナス属等に属するグラム陰性菌に対しても非常
に強い抗菌力を示す。 また、抗生物質OA−6129A，B₁及びB₂は、例
えばエシエリヒア属、クレブシエラ属、プロテウ
ス属等に属するグラム陰性菌に対してもかなり強
い抗菌力を示す。 特に、抗生物質OA−6129A，B₁及びB₂は、β
−ラクタム環を有する抗生物質に対して耐性を有
する、例えばシトロバクター属、プロテウス属、
エンテロバクター属、クレブシエラ属、セラチア
属等に属するグラム陰性細菌に対してかなり強い
抗菌力を示す点で特徴的である。 抗生物質OA−6129A，B₁及びB₂の抗菌スペク
トルは以下に述べる各種病原性被験菌に対する最
小発育阻止濃度の測定により立証される。 【表】 【表】 ＊ β−ラクタム耐性株
＊＊ 培地HI寒天(デイフコ社製)；菌濃度10^６細胞／
ml；寒天希釈法による
上記の抗菌活性は次の如くに測定したものであ
る。すなわち、化学療法学会標準法（Japan
Society of Chemotherapy：The revised
method of determination of MIC value
Chemotherapy22，1126−1128，1974）にもとづ
く寒天培地希釈法で実施した。 抗生物質はＭ／50PBS PH7.3で希釈し、２倍
の希釈列と調製し、この溶液１mlと寒天培地
（Heart Infusion Agar Difco社製）９mlを９cm
径のシヤーレ内で混和し平板とした。 接種菌はStock cultureより一白金耳をトリプ
トソイブイヨン培地（栄研化学社製）に接種し、
37℃で18時間静置培養を行なつて得られた菌液を
生理食塩水で約10⁶細胞１mlに希釈し、ミクロプ
ランターを用いて平板に接種した。平板は37℃で
18時間培養を行ない、完全に菌の生育を阻止した
抗生物質の最低濃度をもつてMICとした。 以上のように抗生物質OA−6129は、広範な抗
菌スペクトルを有する有用な抗生物質であるが、
脂溶性有機溶媒に対する溶解性が低いため、さら
に有用な誘導体を合成するための中間体としては
利用しにくいものであつた。本発明で提供される
抗生物質OA−6129A，B₁及びB₂のエステルのイ
ソプロピリデン誘導体は、３−位の炭素原子に結
合しているパンテテイニル基の水酸基が保護され
たことにより脂溶性有機溶媒への溶解性が高めら
れているため、さらに有用誘導体への反応中間体
として有用である。 次に実施例により本発明をさらに説明する。な
お、以下の実施例において用いる抗菌活性物質の
定性及び定量分析は下記の方法で行なつた。 (1) ビオアツセイ法 一夜、ニユートリエント・アガー上で培養した
コマモナス・テリゲナ（Comamonas terrigena）
Ｂ−996の菌体を、ニユートリエント・ブロス中
に懸濁させ、その菌体に由来する610nm吸光度
が、0.04を示す種母液をつくる。極東粉末ブイヨ
ン（極東製薬工業(株)製）0.8％及びバクト・アガ
ー（デイフコ社製）１％よりなるとけた寒天培地
に種母液１％を接種し、これを７mlずつ９cm径の
ペトリ皿に分注し同化させて、コマモナス検定板
とする。 (2) ビオオートグラフイー 上記ビオアツセイ法において、９cm径ペトリ皿
を用いる代りにタテ32cm×ヨコ24cmの皿を用い、
被験菌を接種した寒天培地100mlを分注し固化さ
せて大型検定板をつくる。 被検液の展開後のペーパークロマト紙を上記
で作つた大型検定板の寒天表面に張り、15分後取
り除き、大型検定板を35℃、20時間培養し、阻止
帯の位置よりペーパークロマトグラムのRf値を
算出し（定性）、且つ阻止帯の大きさから半定量
することができる。薄層クロマト板を用いる場合
は、薄紙を介して、成分面がふれるように寒天表
面に張り、15分後取り除き、上記と同様操作によ
り定性及び半定量分析を行なう。 実施例 １ 抗生物質OA−6129A，B₁及びB₂の発酵法によ
る製造 (A) 500ml容エルレンマイヤーフラスコに100mlの
下記組成の種母培地（Ｓ−１）を入れ、常法に
より、120℃で15分間殺菌した。一方、ストレ
プトミセス・エスピーOA−6129
（Streptomyces sp.OA−6129）菌株の胞子を
充分着生させ、この一白金耳を上記種母培地に
接種し、28℃で48時間ロータリーシエーカー
（200rpm、振幅７cm）で振とう培養した。この
種母培養液200mlを、下記組成の種母培地（SE
−４）15を入れた30容ジヤー・フアーメン
ターに接種し、28℃、400rpmで撹拌及び7.5
／min通気の条件下に90時間通気撹拌培養を
行つた。消泡剤としてシリコンKM−75〔信越
化学(株)製〕を0.07％使用した。 (B) 上記(A)で得られた24時間培養後の種母培養液
２を下記組成の生産培地（GM−１）100
を入れた200容醗酵タンクに接種し、28℃
200rpmで撹拌及び50／min通気の条件下に
90時間通気撹拌培養を行つた。消泡剤としてシ
リコンKM−75〔前出〕を0.07％使用した。 経時的に培養液をサンプリングし、遠心分離し
た上澄液についての抗菌力の測定を行つた。 各時間における測定結果は、下表に示す通りで
あつた。 培養時間（時間） 抗菌力価（μｇ／ml） 48 2.6 72 11.5 90 24.0 種母培地（Ｓ−１）の組成： ミート 1.5％（Ｗ／Ｖ） 酵母エキストラクト 0.5 〃 ポテトスターチ 2.0 〃 CaCO₃ 0.2 〃 PH（殺菌前） 7.0 〃 種母培地（SE−４）の組成： 牛肉エキストラクト 0.3％（Ｗ／Ｖ） トリプトン 0.5 〃 グルコース 0.1 〃 溶性でんぷん 2.4 〃 酵母エキストラクト 0.5 〃 CaCO₃ 0.4 〃 ミート 0.5 〃 PH（殺菌前） 7.5 生産培地（GM−１）の組成： グリセリン 8.0％（Ｗ／Ｖ） 魚 粉 1.0 〃 ミート 3.0 〃 CaCO₃ 0.3 〃 K₂HPO₄ 0.2 〃 MgSO₄ 0.2 〃 NaOHでPHを7.2に調整 別にPH5.5の0.01Mリン酸緩衝液中に溶解し、
且つオートクレーブで１Kg／cm²Ｇ、５分間殺菌
したビタミンB₁₂を0.0005％（Ｗ／Ｖ）添加。 (C) 上記(B)で得られた90時間培養後の醗酵液100
に５％（Ｗ／Ｖ）量のトプコパーライトNo.34
〔東興パーライト(株)製〕を添加し、バスケツト
型遠心分離機で菌体を分離し、90の培養液
を得た。 これをダイヤイオンHP−20〔三菱化成(株)製〕
充填カラム（10×100cm）に吸着させ、蒸留水
５で洗浄後、30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水で溶
出した。 １区分を１とし、その溶出液を分画した。
バイオアツセイ活性画分８から画分15まで合計
８の溶出液を集め、これをダイヤイオン
PA306S〔三菱化成(株)製〕充填カラム（８×60
cm）に吸着させ、蒸留水１で洗浄後、3.0％
食塩水で溶出した。500mlずつ溶出液を分画し、
バイオアツセイ活性画分７から画分16までの合
計５の溶出液を集めた。この溶出液には、抗
生物質OA−6129A，B₁及びB₂が含まれてい
た。該溶出液6.0に300ｇの食塩を加え、ダイ
ヤイオンHP−20充填カラム（６×150cm）に
吸着させ、蒸留水500mlで洗浄後、濃度が０％
から40％まで直線的に増加するアセトン水合計
4.0で溶出した。 １区分を17mlとして、その溶出液を分画し
た。バイオアツセイ活性画分20から画分130ま
での約1.8の溶出液には主に抗生物質OA−
6129B₁，B₂と、若干の抗生物質OA−6129Aが
含まれた。バイオアツセイ活性画分131から画
分170までの約700mlの溶出液には抗生物質OA
−6129Aが含まれた。 上記の２区分をそれぞれ凍結乾燥し、茶褐色の
粉末を得た。 〔抗生物質OA−6129Aの精製〕 抗生物質OA−6129Aを主に含む溶出液を凍結
乾燥することによつて得られた茶褐色粉末を少量
の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−２（バイオラ
ツド社製）充填カラム（８×100cm）に導き、蒸
留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分
1.0を集めた。この活性画分を予め、0.01Mリ
ン酸緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフア
デツクスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム
（４×40cm）に吸着させ、上記緩衝液200mlで洗浄
後、濃度が０％から４％まで直線的に増加する食
塩水（合計3.0）で溶出を行つた。溶出液を15
mlずつ分画し、バイオアツセイを行い、画分51か
ら画分70まで、合計300mlの活性画分を得た。 この画分を凍結乾燥し、黄褐色の粉末を得た。 この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｇの食塩
を加え、ダイヤイオンHP−20AG〔三菱化成(株)
製〕充填カラム（２×50cm）に吸着させ、５％食
塩水50mlで洗浄後、蒸留水100mlで洗浄した。濃
度が０％から30％まで直線的に増加するアセトン
水（合計1.0）で溶出し、１画分を10mlとし、
その溶出液を分画した。バイオアツセイにより、
活性画分35から画分45までの合計110mlを集め、
これを凍結乾燥すると黄褐色の粉末52mgが得られ
た。 抗生物質OA−6129Aの粗粉末52mgを、少量の
蒸留水に溶解し、セフアデツクスＧ−10（フアル
マシア社製）充填カラム（２×80cm）に導き、蒸
留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分30
mlを集めた。この活性画分を予め、0.01Mリン酸
緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフアデツ
クスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム（２
×30cm）に吸着させ、上記緩衝液50mlで洗浄後、
濃度が０％から５％まで直線的に増加する食塩水
（合計800ml）で溶出を行い、溶出液を５mlずつ分
画した。バイオアツセイにより、活性画分36から
画分40までの合計25mlを集めた。 この画分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオン
HP−20AG〔三菱化成(株)製〕充填カラム（２×40
cm）に吸着させ、蒸留水50mlで洗浄後、濃度０％
から30％まで直線的に増加するアセトン水（合計
800ml）で溶出し、１画分を５mlとし、その溶出
液を分画した。 バイオアツセイにより活性画分105から画分117
の合計65mlを集めた。 これを凍結乾燥することにより淡黄色粉末21mg
を得た。 得られた凍結乾燥標品は次の特性を有した。 (1) 形 状：淡黄色粉末 (2) 比旋光度：〔α〕²⁴ _D：11.6゜（ｃ＝1.0，0.01Mリ
ン酸緩衝液、PH8.4） 但し、紫外部吸収においてλmax300nmのε
を5600とした時の値である。 (3) 分子式 理論分子式 C₂₀H₃₀N₃O₇SNa（M.W.＝479） (4) 紫外部吸収スペクトラム λ0.01Mリン酸緩衝液nm（ε）（PH8.4） max：300
（5600） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ーク ν^KBr _naxcm^-1： 1760（β−ラクタム） 1660（アミド） 1600（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D₂O）（内
部基準：DSS） δ（ppm） 0.89（3H，ｓ，【式】） 0.92（3H，ｓ，【式】） 1.00（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz，CH₂−ＣH₃ ） 1.60〜2.00（2H，ｍ，ＣH₂ −CH₃） 2.48（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH₂−ＣH₂ −
CO） 2.80〜3.65（11H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH₂ −ＣH₂ −Ｎ，Ｎ−ＣH₂ −CH₂−CO，
Ｃ−ＣH₂ −OH） 3.95（2H，ｍ，Ｃ−５Ｈ，【式】） (7) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙 No.50 展開溶媒 アセトニトリル：水（８：２） 検出方法Comamonas terrigena B996による
バイオオートグラフイー Rf値 0.53 (8) 呈色反応 ニンヒドリンに対する反応：陰性 エールリツヒ試薬に対する反応：陽性 (9) 元素分析、融点 吸湿性のため測定不能 〔抗生物質OA−6129B₁及びB₂精製〕 抗生物質OA−6129B₁及びB₂を主に含む溶出液
を、凍結乾燥することによつて得られた茶褐色の
粉末を、少量の蒸留水に溶解し、バイオゲルＰ−
２（バイオラツド社製）充填カラム（８×100cm）
に導き、蒸留水で展開し、バイオアツセイにより
活性画分1.0を集めた。この活性画分を予め、
0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE
−セフアデツクスＡ−25（フアルマシア社製）充
填カラム（４×40cm）に吸着させ、上記緩衝液
200mlで洗浄後、濃度が０％から４％まで直線的
に増加する食塩水（合計3.0）で溶出を行つた。
溶出液を15mlずつ分画し、バイオアツセイを行
い、画分51から画分70まで、合計300mlの活性画
分を得た。 この画分を凍結乾燥し、黄褐色の粉末を得た。 この粉末を少量の蒸留水に溶解し、５ｇの食塩
を加え、ダイヤイオンHP−20AG〔三菱化成(株)
製〕充填カラム（２×50cm）に吸着させ、５％食
塩水50mlで洗浄後、蒸留水100mlで洗浄した。濃
度が０％から30％まで直線的に増加するアセトン
水（合計1.0）で溶出し、１画分を10mlとし、
その溶出液を分画した。バイオアツセイにより活
性画分15から画分24までの合計100mlと、活性画
分26から画分35までの合計100mlの２区分を得た。
前者活性区分には抗生物質OA−6129B₁が後者活
性区分には抗生物質OA−6129B₂が含まれでた。
両区分をそれぞれ凍結乾燥することによりOA−
6129B₁の黄褐色粉末が840mg、抗生物質OA−
6129B₂の黄褐色粉末が470mg得られた。 〔抗生物質OA−6129B₁の精製〕 抗生物質OA−6129B₁の粗粉末840mgを、少量
の蒸留水に溶解し、セフアデツクスＧ−10（フア
ルマシア社製）充填カラム（２×80cm）に導き、
蒸留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分
35mlを集めた。この活性画分を予め、0.01Mリン
酸緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフアデ
ツクスＡ−25（（フアルマシア社製）充填カラム
（２×30cm）に吸着させ、上記緩衝液50mlで洗浄
後、濃度が０％から５％まで直線的に増加する食
塩水（合計800ml）で溶出を行い、溶出液を５ml
ずつ分画した。300nmに紫外部極大吸収を有する
画分39から画分43までの合計25mlを集めた。 この画分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオン
HP−20AG〔三菱化成(株)製〕充填カラム（２×40
cm）に吸着させ、蒸留水にて展開を行い、溶出液
を５mlずつ分画した。 上記と同様に300nmの紫外部極大吸収を調べる
ことにより画分51から画分70の合計100を集めた。
これを凍結乾燥することにより、淡黄色粉末21mg
を得た。 この淡黄色粉末21mgを少量の蒸留水に溶解し、
活性炭素〔和光純薬工業(株)製〕充填カラム（1.5
×７cm）に吸着させ、蒸留水20mlで洗浄後、濃度
が０％から50％まで直線的に増加するイソプロピ
ルアルコール水（合計200ml）で溶出を行い、溶
出液を２mlずつ分画した。 300nmに紫外部極大吸収を有する画分18から画
分32までの合計30mlを集め、これを凍結乾燥する
と、淡黄色粉末８mgが得られた。 得られた凍結乾燥標品は次の特性を示した。 (1) 形 状：淡黄色粉末 (2) 比旋光度：〔α〕²⁴ _D：24.2゜（ｃ＝0.5，H₂O中） (3) 分子式 C₂₀H₃₀N₃O₈SNa（M.W.＝495） (4) 紫外部吸収スペクトル λ^H2O _nax nm（ε）＝300（6400） (5) 赤外部吸収スペクトル ν^KBr _naxcm^-1： 1750（β−ラクタム） 1650（アミド） 1590（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D₂O、内部
基準DSS） δ：0.86（3H，ｓ，【式】） 0.89（3H，ｓ，【式】） 1.33（3H，ｄ，Ｊ＝6.0Hz，
【式】） 2.47（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH₂−Ｃ
H₂−CO） 2.75〜3.70（11H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−6H，
Ｓ−ＣH₂ −ＣH₂ −NH，NH−ＣH₂ −
CH₂−CO，【式】） 3.93（1H，ｓ，【式】） 3.95〜4.40（2H，ｍ，Ｃ−5H，
【式】） (7) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙 No.50 展開溶媒アセトニトリル：0.1Mトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン／塩酸
緩衝液（PH7.5）／0.1Mエチレンジ
アミン（PH7.5）＝120：30：１ 検出方法Comamonas terigena B996によるバ
イオオートグラフイー Rf値 0.17 (8) 高圧紙電気泳動 PH8.6のベロナール緩衝液、東洋紙、No.51を
用い1500V、30分泳動した。 Rm値0.67（Rm値はPS−５ナトリウム塩の移
動度を1.0としたものである） (9) 高速液体クロマトグラフイー 充てん剤；マイクロボンダパツクC18 カラム；7.8mm（内径）×30cm （日本ウオーターズリミテツド） 移動相；３％アセトニトリルを含む0.01モルリ
ン酸二アンモニウム緩衝液（PH7.5） 流 量；1.5ml／min 検出方法；紫外部301nm 上記の条件下で保持時間13.9分である。 〔抗生物質OA−6129B₂の精製〕 抗生物質OA−6129B₂の粗粉末470mgを少量の
蒸留水に溶解し、セフアデツクスＧ−10（フアル
マシア社製）充填カラム（２×80cm）に導き、蒸
留水で展開し、バイオアツセイにより活性画分30
mlを集めた。この活性画分を予め、0.01Mリン酸
緩衝液（PH8.4）で平衡化したQAE−セフアデツ
クスＡ−25（フアルマシア社製）充填カラム（２
×30cm）に吸着させ、上記緩衝液50mlで洗浄後、
濃度が０％から５％まで直線的に増加する食塩水
（合計800ml）で溶出を行い、溶出液を５mlずつ分
画した。300nmに紫外部極大吸収を有する画分35
から画分41までの合計35mlを集めた。 この画分に４ｇの食塩を加え、ダイヤイオン
HP−20AG〔三菱化成(株)製〕充填カラム（２×40
cm）に吸着させ、蒸留水50mlで洗浄後、濃度が０
％から20％まで直線的に増加するアセトン水（合
計800ml）で溶出し、１画分を５mlとし、その溶
出液を分画した。 上記と同様、300nmの紫外部極大吸収を調べる
ことにより画分112から画分125の合計70mlを集め
た。 これを凍結乾燥することにより、淡黄色粉末23
mgを得た。 得られた凍結乾燥標品は次の特性を示した。 (1) 形 状：淡黄色粉末 (2) 比旋光度：〔α〕²⁴ _D：14.7゜（ｃ＝1.0，0.01Mリ
ン酸緩衝液、PH8.4） (3) 分子式 C₂₀H₃₀N₃O₈SNa（M.W.＝495） (4) 紫外部吸収スペクトラム λ0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4） maxnm（ε）＝300
（5400） (5) 赤外部吸収スペクトラム（KBr）の主要ピ
ーク ν^KBr _naxcm^-1： 1760（β−ラクタム） 1660（アミド） 1600（カルボキシレート） (6) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：D₂O、内部
基準DSS） δ：0.87（3H，ｓ，【式】） 0.92（3H，ｓ，【式】） 1.28（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，
【式】） 2.45（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH₂−Ｃ
H₂−CO） 2.75〜3.60（11H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−6H，
Ｓ−ＣH₂ −ＣH₂ −NH，NH−ＣH₂ −
CH₂−CO，【式】） 3.94（1H，ｓ，【式】） 3.95〜4.35（2H，ｍ，Ｃ−5H，
【式】） (7) ペーパークロマトグラフイー 東洋紙 No.50 展開溶媒アセトニトリル／0.1Mトリス（ヒド
ロキシメチル）アミノメタン−塩酸
緩衝液（PH7.5）／0.1Mエチレンジ
アミン水溶液（PH7.5）＝120／30／
１ 検出方法Comamonas terigena B996によるバ
イオオートグラフイー Rf値 0.17 (8) 高圧紙電気泳動 PH8.6のベロナール緩衝液、東洋紙No.51を用
い1500V、30分泳動した。 Rm値0.67（Rm値はPS−５ナトリウム塩の移
動度を1.0としたものである） (9) 高速液体クロマトグラフイー 充てん剤；マイクロボンダパツクC18 カラム；7.8mm（内径）×30cm（日本ウオーター
ズリミテツド） 移動相；３％アセトニトリルを含む0.01モルリ
ン酸二アンモニウム緩衝液（PH7.5） 流 量；1.5ml／min 検出方法；紫外部301nm 上記の条件下で、保持時間22.5分である。 実施例 ２ 抗生物質OA−6129Aのベンジルエステルの製
法 抗生物質OA−6129Aナトリウム塩44.6mgをジ
メチルホルムアミド8.0mlに溶解し、氷冷下、ト
リエチルアミン0.25mlを加え、撹拌しながらベン
ジルブロマイド0.18mlを加えた。同温度で30分反
応させた後、室温で３時間反応させた。 反応液を100mlの酢酸エチルに注ぎ、食塩飽和
の0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）20mlで洗浄後、
水層を更にメチレンクロライド100mlで再抽出し
た。抽出液を合わせ、硫酸ナトリウム（無水）で
脱水後、減圧留去した。残渣を少量のベンゼンに
溶解し、バイオビーズSX−３カラムに吸着させ、
ベンゼンで溶出し、ベンゼン／アセトン（１／
１）の混合溶媒展開のシリカゲルTLCにて、Rf
値0.39にUV吸収を示す区分を集め、減圧乾固し
た。 この残渣を少量のメチレンクロライドに溶解
し、ベンゼン／アセトン（２／１）にて充填した
シリカゲル12ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／
アセトン（２／１），（１／１）及び（（１／３）
混合溶媒並びにアセトンで順次展開し、アセトン
で溶出する区分を集めて、減圧乾固すると、標題
化合物が21.4mg得られた。 この抗生物質OA−6129Aのベンジルエステル
は次の物理化学特性を示した。 (1) 比旋光度：〔α〕²⁴ _D：31.5゜（ｃ＝1.0，CH₂Cl₂
） (2) 紫外部吸収スペクトラム λ^CH2Cl2 _naxnm（ε）：318（7400） (3) 赤外部吸収スペクトラムの主要ピーク ν^CH2Cl2 _naxcm^-1： 1772（β−ラクタム） 1700（エステル） 1665（アミド） (4) 核磁気共鳴スペクトラム（内部基準：TMS） (イ) CD₂Cl₂を溶媒したとき δ（ppm）： 0.88（3H，ｓ，【式】），0.97（3H，ｓ， 【式】），1.03（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz， CH₂−ＣH₃ ），1.60〜2.10（3H，ｍ，ＣH₂ −CH₃，
OH），2.39（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH₂−Ｃ
H₂−CO），2.85〜3.67（12H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−
6H，Ｓ−ＣH₂ −ＣH₂ −Ｎ，Ｎ−ＣH₂ −CH₂−
CO，Ｃ−ＣH₂ −OH，OH又はNH），3.93（2H，
ｍ，Ｃ−5H，【式】），4.17（1H， br，NH又はOH），5.17（1H，ｄ，Ｊ＝13.0Hz，
ＣＨＨ−Ar），5.32（1H，ｄ，Ｊ＝130Hz，CHＨ
−Ar），6.73（1H，br，NH），7.35（5H，ｓ，Ar
Ｈ） (ロ) CD₂Cl₂＋D₂Oを溶媒としたとき δ：（ppm）： 0.88（3H，ｓ，【式】） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.02（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz，CH₂−ＣH₃ ） 1.55〜2.00（2H，ｍ，ＣH₂ −CH₃） 2.39（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH₂−ＣH₂ −
CO） 2.80〜3.67（11H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−6H，Ｓ−
ＣH₂ −ＣH₂ −Ｎ，Ｎ−ＣH₂ −CH₂−
CO，Ｃ−ＣH₂ −OH） 3.93（1H，dt，Ｊ＝3.0Hz，Ｊ＝90Hz，Ｃ−5H） 3.93（1H，ｓ，【式】） 5.13（1H，ｄ，Ｊ＝13.0Hz，ＣＨＨ−Ar） 5.28（1H，ｄ，Ｊ＝13.0Hz，CHＨ−Ar） 7.35（5H，ｓ，ArH） MS（ｍ／ｚ）： 418， 329， 本エステルの加水分解（6N塩酸、115℃、16時
間）生成物中には、システアミン、β−アラニン
が確認された。 以上の理化学的性質から抗生物質OA−6129A
の構造は であり、５，６−トランス立体配置を有すると考
えられる。 実施例 ３ 抗生物質OA−6129Aのｐ−ニトロベンジルエ
ステルの製法 抗生物質OA−6129A63.5mgをジメチルホルム
アミド9.0mlに溶解し、氷冷下トリエチルアミン
0.2mlを加え撹拌しながら、ｐ−ニトロベンジル
ブロマイド285mgを含むジメチルホルムアミド溶
液1.5mlを加え、同温度で30分反応させた後、室
温で３時間反応させた。 反応液を100mlの酢酸エチルに注ぎ食塩飽和の
0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4）20mlで洗浄後、水
層を更にメチレンクロライド100mlで再抽出した。
抽出液を合わせ、硫酸ナトリウム（無水）で脱水
後減圧留去した。 この残渣を少量のメチレンクロライドに溶解
し、ベンゼン／アセトン（１／１）にて充填した
シリカゲル12ｇのカラムに吸着させベンゼン／ア
セトン（１／１），（１／３）の混合溶媒並びにア
セトンで順次展開した。アセトン溶出区分でベン
セン／アセトン（１／１）の混合溶媒展開のシリ
カゲルTLCにて、Rf値0.33にUV吸収を示す区分
を集め減圧乾固すると標題化合物36.3mgが得られ
た。 この抗生物質OA−6129Aのｐ−ニトロベンジ
ルエステルは次のような諸物理化学特性を示した (1) 比旋光度 〔α〕²⁴ _D：37.5゜（ｃ＝1.0，CH₂Cl₂） (2) 紫外部吸収スペクトラム λ^CH2Cl2 _naxnm（ε）：319（8400），270（10500） (3) 赤外部吸収スペクトラム ν^CH2Cl2 _naxcm^-1： 1770（β−ラクタム） 1700（エステル） 1665（アミド） (4) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒：CD₂Cl₂；
内部基準：TMS） δ（ppm）： 0.87（3H，ｓ，【式】） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.04（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz，CH₂−ＣH₃ ） 1.5〜2.2（3H，ｍ，ＣH₂ −CH₃，OH） 2.40（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH₂−ＣH₂ −
CO） 2.8〜3.7（12H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−6H，Ｓ−Ｃ
H₂−ＣH₂ −Ｎ，Ｎ−ＣH₂ −CH₂−CO，Ｃ−Ｃ
H₂−OH，OH又はNH） 3.94（2H，ｍ，Ｃ−5H，【式】） 4.17（1H，br，NH又はOH） 5.19（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，ＣＨ・Ｈ−Ar） 5.45（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，CH・Ｈ−Ar） 6.74（1H，br，NH） 7.63（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） 8.18（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） 実施例４ 抗生物質OA−6129A・ｐ−ニトロベンジルエ
ステルのイソプロピリデン化法 抗生物質OA−6129A・ｐ−ニトロベンジルエ
ステル110mgをアセトン10mlに溶解し、２，２−
ジメトキシプロパン0.5ml及び無水硫酸ナトリウ
ム20mgを加え、室温下撹拌しながら無水ｐ−トル
エンスルホン酸40mgを加え、同温度で３時間反応
させた。 反応液に、トリエチルアミン0.1mlを滴下し、
５分間撹拌後、酢酸エチル50ml中に注ぎ、0.1M
リン酸緩衝液（PH＝8.4）20mlで洗浄後、さらに、
同緩衝液（PH＝6.8）20mlで洗浄した。 抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後、減圧留
去した。残渣を少量の塩化メチレンに溶解し、ベ
ンゼン／アセトン（５／１）にて充填したシリカ
ゲル５ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／アセト
ン（５／１），（３／１），（１／１），（２／１），
（１／５）の混合溶媒で順次展開した。 ベンゼン／アセトン（１／１）で溶出する区分
を集めて濃縮すると、ベンゼン／アセトン（１／
１）の混合溶媒展開のシリカゲルTLCにてRf値
0.56に、UV吸収を示す標題化合物が72.0mg得ら
れた。 この化合物の物理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕²⁴ _D 34.9゜（ｃ＝1.0，CHCl₃） (2) 紫外部吸収スペクトラム λ^CHCl3 _naxnm（ε）： 319（6200） 270（9800） (3) 核磁気共鳴スペクトラム（溶媒CDCl₃，内部
基準TMS） δ（ppm） 0.97（3H，ｓ，【式】） 1.03（3H，ｓ，【式】） 1.07（3H，ｔ，Ｊ＝7.5Hz−CH₂−ＣH₃ ） 1.40（3H，ｓ，【式】） 1.43（3H，ｓ，【式】） 1.7〜2.0（2H，ｍ，ＣH₂ −CH₃） 2.43（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，Ｎ−CH₂−ＣH₂ −
CO） 2.5〜3.8（11H，C₄−H₂ ，C₆−Ｈ，−Ｓ−ＣH₂
−CH₂−Ｎ，Ｎ−ＣH₂ −ＣH₂ −CO，Ｃ−Ｃ
H₂−Ｏ−） 3.97（1H，dt，Ｊ＝３Hz，９Hz，C₅−Ｈ） 4.03（1H，ｓ，【式】） 5.20（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，ＣＨ・Ｈ−Ar） 5.49（1H，ｄ，Ｊ＝14Hz，CH・Ｈ−Ar） 6.52（1H，br，ＮＨ） 6.93（1H，br，ＮＨ） 7.58（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） 8.15（2H，ｄ，Ｊ＝９Hz，ArH） (4) 赤外線吸収スペクトラム（溶媒CHCl₃） 波長（cm^-1） 1770（β−ラクタム） 1660（アミド） 実施例 ５ 抗生物質OA−6129B₂のｐ−ニトロベンジルエ
ステルの製造 抗生物質OA−6129B₂ナトリウム塩190mgをジ
メチルホルムアミド6.0mlに溶解し、氷冷下トリ
エチルアミン0.2mlを加え、撹拌しながらｐ−ニ
トロベンジルブロマイド210mgを含むジメチルホ
ルムアミド溶液を加えた。同温で５分間反応させ
た後室温で３時間反応させた。反応液を100mlの
メチレンクロライドに注ぎ、食塩飽和の0.1Mリ
ン酸緩衝液（PH6.8）20mlで２回洗浄した。更に
水層はメチレンクロライド100mlで２回再抽出を
行つた。抽出液を合わせ、無水硫酸ナトリウムで
脱水後減圧留去した。 残渣を少量のメチレンクロライドに溶解し、ベ
ンゼン／アセトン（１／１）にて充填したシリカ
ゲル６ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／アセト
ン（１／１），（１／２），（１／３），（１／５）の
混合溶媒並びにアセトンで順次展開した。ベンゼ
ン／アセトン（１／５）からアセトンにて溶出
し、ベンゼン／アセトン（１／４）展開ののシリ
カゲルTLCにてRf値0.15にUV吸収を示す表題化
合物85mgが得られた。 この化合物の物理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕²⁴ _D 41.4゜（ｃ＝1.0，ジオキサン） (2) IRスペクトル ν^KBr _naxcm^-1： 1760（β−ラクタム） 1695（エステル） 1640（アミド） (3) UVスペクトル ν^CH ₂ ^Cl _2naxnm（ε）： 320（10500） 271（10500） (4) NMRスペクトル（Pyridine−d₅） 但しδ1−5ppmまでを記す。 δ（ppm） 1.30（6H，ｓ，ＣH₃ −Ｃ−ＣH₃ ） 1.55（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，ＣH₃ −CH） 2.70（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH₂−ＣH₂ −
CO） 2.90〜4.05（11H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH₂ −ＣH₂ −NH，NH−ＣH₂ −CH₂−
CO，【式】） 4.10〜4.50（2H，ｍ，Ｃ−5H，Ｃ−8H） 4.52（1H，ｓ，【式】） (5) Massスペクトル（FD） ｍ／ｚ：523
【式】 実施例 ６ 抗生物質OA−6129B₂・ｐ−ニトロベンジルエ
ステルのイソプロピリデン化法 抗生物質OA−6129B₂・ｐ−ニトロベンジルエ
ステル20mgをアセトン5.0ml、２，２−ジメトキ
シプロパン2.0ml、硫酸ナトリウム（無水）100mg
の混合溶媒に溶解させ、室温で撹拌しながら、ｐ
−トルエンスルホン酸0.5mgを加える。30分間反
応させた後、反応液にトリエチルアミン6μを
加え、５分間撹拌した。反応液を減圧留去し、残
渣に30mlのメチレンクロライドを加え、0.1Mリ
ン酸緩衝液（PH8.4）20mlで洗浄後、抽出層を硫
酸ナトリウム（無水）で脱水し、減圧留去した。
残渣を少量のメチレンクロライドに溶解し、ベン
ゼン／アセトン（２／１）で充填したシリカゲル
２ｇのカラムに吸着させた。ベンゼン／アセトン
（２／１），（１／１），（１／２）の混合溶媒で順
次展開し、ベンゼン／アセトン（１／１）から
（１／２）で溶出する区分を集めて、濃縮すると、
ベンゼン／アセトン（１／４）の混合溶媒展開の
シリカゲルTLCにて、Rf値（0.64）を示す標題
のイソプロピリデン化物6.6mg得られた。 この化合物の物理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕²⁴ _D 55.1゜（ｃ＝0.5，CH₂Cl₂） (2) IRスペクトル ν^CHCl3 _naxcm^-1： 1778（β−ラクタム） 1700（エステル） 1668（アミド） (3) UVスペクトル λ^CH2Cl2 _naxnm（ε）： 319（9700） 270（11900） (4) NMRスペクトル（CDCl₃） δ（ppm） 0.95（3H，ｓ，【式】） 1.02（3H，ｓ，【式】 1.37（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，ＣH₃ −CH） 1.40（3H，ｓ，【式】） 1.43（3H，ｓ，【式】） 2.41（2H，ｔ，Ｊ＝6.5Hz，NH−CH₂−ＣH₂ −
CO） 2.75〜3.80（11H，ｍ，Ｃ−4H₂，Ｃ−6H，Ｓ
−ＣH₂ −ＣH₂ −NH，NH−ＣH₂ −CH₂−
CO，Ｏ−CH₂−Ｃ） 4.02（1H，ｓ，【式】 4.00〜4.30（2H，ｍ，Ｃ−5H，Ｃ−8H） 5.16（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，ＣＨＨ−Ar） 5.44（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，CHＨ−Ar） 6.56（1H，br，NH） 6.92（1H，br，NH） 7.55（2H，ｄ，Ｊ＝8.0Hz，Ar・Ｈ） 8.12（2H，ｄ，Ｊ＝8.0Hz，Ar・Ｈ） (5) Massスペクトル（FD） ｍ／ｚ：5.63
【式】 562【式】 〔参考例〕 トリアセチル抗生物質OA−6129B₂・ｐ−ニト
ロベンジルエステルの製造 抗生物質OA−6129B₂・ｐ−ニトロベンジルエ
ステル12mgをピリジン0.5mlに溶解し、氷冷下撹
拌しながら無水酢酸0.15mlを加えた。同温度で５
分間反応させた後室温で３時間反応させた。反応
液に氷水を加え10分間撹拌後酢酸エチル20ml中に
注ぎ、0.1Mリン酸緩衝液（PH6.8）10mlで洗浄
後、同緩衝液（PH8.4）10mlで洗浄し、更にPH6.8
同緩衝液にて洗浄した。 抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水後減圧留去
した。残渣を少量のメチレンクロライドに溶解
し、ベンゼン／アセトン（５／１）にて充填した
シリカゲル２ｇのカラムに吸着させ、ベンゼン／
アセトン（５／１），（３／１），（１／１），（２／
１），（１／５）の混合溶媒で順次展開した。ベン
ゼン／アセトン（１／１）で溶出する区分を集め
て濃縮するるとベンゼン／アセトン（１／３）の
混合溶媒展開のシリカゲルTLCにてRf値0.59に
UV吸収を示す表題化合物が7.9mg得られた。 この化合物の理化学的性状を以下に示す。 (1) 比旋光度 〔α〕²⁴ _D 23.2゜（ｃ＝0.5，CHCl₃） (2) IRスペクトル ν^CHCl3 _naxcm^-1： 1780（βラクタム） 1735（エステル） 1672（アミド） (3) UVスペクトル λ^CHCl3 _naxnm（ε）： 320（12000） 270（12000） (4) NMRスペクトル（CDCl₃） δ（ppm） 1.05（3H，ｓ，【式】） 1.08（3H，ｓ，【式】） 1.43（3H，ｄ，Ｊ＝7.0Hz，ＣH₃ −CH） 2.03（3H，ｓ，CH₃CO） 2.10（3H，ｓ，CH₃CO） 2.13（3H，ｓ，CH₃CO） 2.38（2H，ｔ，Ｊ＝6.0Hz，NH−CH₂−ＣH₂ −
CO） 2.70〜3.70（9H，ｍ，Ｃ−４Hz，Ｃ−6H，Ｓ−
ＣH₂ −ＣH₂ −NH，NH−ＣH₂ −CH₂−CO） 3.82（1H，ｄ，Ｊ＝11.5Hz，ＣＨＨ−OAc） 4.02（1H，ｄ，Ｊ＝11.5Hz，CHＨ−OAc） 3.97〜4.27（1H，ｍ，Ｃ−5H） 4.80（1H，ｓ，ＣＨ−OAc） 5.10〜5.45（1H，ｍ，Ｃ−8H） 5.22（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，ＣＨＨ−Ar） 5.50（1H，ｄ，Ｊ＝14.5Hz，CHＨ−Ar） 6.29（1H，br，NH） 6.75（1H，br，NH） 7.63（2H，ｄ，Ｊ＝9.0Hz，Ar・Ｈ） 8.21（2H，ｄ，Ｊ＝9.0Hz，Ar・Ｈ） (5) Massスペクトル（FD） ｍ／ｚ：735（Ｍ＋１）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 （式中、R¹は水素原子又は水酸基を表わし、
   R²及びR³は併合してイソプロピリデン基（＝Ｃ
   （CH₃）₂）を表わし、R⁴は置換又は未置換のベン
   ジル基を表わす）で示される化合物。 ２ 該式（）のR¹が水酸基を表わす化合物が
   ５，６−トランス又は５，６−シス立体配置を有
   する特許請求の範囲第１項記載の化合物。