JPH03282260A - タンパク物質の変性度の免疫化学検定用試薬と免疫化学検定法 - Google Patents
タンパク物質の変性度の免疫化学検定用試薬と免疫化学検定法Info
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- JPH03282260A JPH03282260A JP2272061A JP27206190A JPH03282260A JP H03282260 A JPH03282260 A JP H03282260A JP 2272061 A JP2272061 A JP 2272061A JP 27206190 A JP27206190 A JP 27206190A JP H03282260 A JPH03282260 A JP H03282260A
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は、平成１年特許願第１２６５４３号（フラン
ス特許願第８８０６７０７号の優先権主張）のタンパク
物質の変性度の免疫化学検定用試薬及び免疫化学検定法
の改良に関する。
ス特許願第８８０６７０７号の優先権主張）のタンパク
物質の変性度の免疫化学検定用試薬及び免疫化学検定法
の改良に関する。
上記特許願の目的は、熱的、物理的、化学的らしくは酵
素による変性処理を受ける食品中に含有されているよう
なタンパク物質の変性度を検定することができる免疫化
学試薬を提供することである。上記特許願によれば、食
料品中に存在する成分（主としてタンパク質と多糖の成
分）を同定し定量し、および特に食料品が受けた保存処
理が技術上および衛生上の観点から充分であるか否かを
検査するｆコめに食料品が何度に加熱されｆこかを決定
するために、抗体が使われている。前記特許願には、被
検食料品中に存在する試験タンパク質が例えばオボアル
ブミンの場合、熱処理前に被検製品中に最初に存在する
未変性オボアルブミンの存在と、熱で変性されたオポア
ルブミンの存在とをＥＬ Ｉ ＳＡ法で識別し、製品が
何度に加熱されｒコか（特に５０℃、６５℃、８５℃、
ｔｏｏ’ｃ、１３０℃）を決定するために、例えばオポ
アルブミンのような試験タンパク質に対するポリクロー
ナル抗体もしくはモノクローナル抗体を用いることか提
案されている。
素による変性処理を受ける食品中に含有されているよう
なタンパク物質の変性度を検定することができる免疫化
学試薬を提供することである。上記特許願によれば、食
料品中に存在する成分（主としてタンパク質と多糖の成
分）を同定し定量し、および特に食料品が受けた保存処
理が技術上および衛生上の観点から充分であるか否かを
検査するｆコめに食料品が何度に加熱されｆこかを決定
するために、抗体が使われている。前記特許願には、被
検食料品中に存在する試験タンパク質が例えばオボアル
ブミンの場合、熱処理前に被検製品中に最初に存在する
未変性オボアルブミンの存在と、熱で変性されたオポア
ルブミンの存在とをＥＬ Ｉ ＳＡ法で識別し、製品が
何度に加熱されｒコか（特に５０℃、６５℃、８５℃、
ｔｏｏ’ｃ、１３０℃）を決定するために、例えばオポ
アルブミンのような試験タンパク質に対するポリクロー
ナル抗体もしくはモノクローナル抗体を用いることか提
案されている。
本願発明の目的は、試験タンパク質か何度に加熱された
かを決定することかできろのみならず、試験タ、ンバク
質が特定の温度に加熱された時間の長さも決定すること
ができる抗体からなる免疫化学試薬を提供することであ
る。さらに、この発明の目的は、保存されるべき食料品
が受ける加熱温度で変性されうる試験タンパク質に対す
る抗体であって、その加熱温度を少なくとも５℃、時に
はピＣに達する場合もある精度で測定することかできる
抗体を提供することである。
かを決定することかできろのみならず、試験タ、ンバク
質が特定の温度に加熱された時間の長さも決定すること
ができる抗体からなる免疫化学試薬を提供することであ
る。さらに、この発明の目的は、保存されるべき食料品
が受ける加熱温度で変性されうる試験タンパク質に対す
る抗体であって、その加熱温度を少なくとも５℃、時に
はピＣに達する場合もある精度で測定することかできる
抗体を提供することである。
また、この発明の目的は、被検食料品が受ける熱処理の
期間を同定しかつその熱処理温度を少なくとも５℃の精
度で同定する試験法、特にＥＬＩＳＡ法を含むサンドイ
ツチ法を提供することである。
期間を同定しかつその熱処理温度を少なくとも５℃の精
度で同定する試験法、特にＥＬＩＳＡ法を含むサンドイ
ツチ法を提供することである。
この発明の主題は、被検食料品に含有されている試験タ
ンパク物質の同定と定量、および前記被検食料品が受け
た熱処理の温度と期間を認識するのに用いる免疫化学試
薬であって、前記食料品に含有され、所定の処理温度で
特定の期間行われた熱処理で変性された試験タンパク質
に対する少なくとも１つのモノクロ−六ル抗体からなる
ことを特徴とする試薬である。
ンパク物質の同定と定量、および前記被検食料品が受け
た熱処理の温度と期間を認識するのに用いる免疫化学試
薬であって、前記食料品に含有され、所定の処理温度で
特定の期間行われた熱処理で変性された試験タンパク質
に対する少なくとも１つのモノクロ−六ル抗体からなる
ことを特徴とする試薬である。
この発明の免疫化学試薬の有利な態様によれば、この試
薬は、未変性状態の前記試験タンパク質に対する１つの
抗体と、所定の処理温度と特定の時間の長さで行った熱
処理で変性された前記試験タンパク質に対する少なくと
も１つの他の抗体とからなる一組のモノクローナル抗体
で構成されている。
薬は、未変性状態の前記試験タンパク質に対する１つの
抗体と、所定の処理温度と特定の時間の長さで行った熱
処理で変性された前記試験タンパク質に対する少なくと
も１つの他の抗体とからなる一組のモノクローナル抗体
で構成されている。
この発明の主題はさらに、ＥＬＩＳＡ法によって未変性
タンパク質と、少なくとも１つの熱で変性された状態の
前記タンパク質とに対する抗体を用いて、被検食料品中
に存在する試験タンパク質を同定および定量するための
キットであって：各種の状態の前記試験タンパク質に対
する一組のモノクローナル抗体、すなわち未変性状態の
前記試験タンパク質と、異ζろ温度（但し適切な場合は
互いに近い温度）で行われる熱処理で産生される変性状
態の前記試験タンパク質と、異なる長さの時間で行われ
る前記熱処理で生成される変性状態のｌ１７ｊｃ！タン
パク質のそれぞれに対す免疫化学試薬の１組からなり、
いずれのモノクローナル抗体も、対応する抗原、すなわ
ちそれに対する抗体に対応する状態の前記試験タンパク
質を免疫捕獲することができることを特徴とし：さらに
、対応する特異的モノクローナル抗体に結合された抗原
を同定できるようにするポリクローナル抗体を有するこ
とを特徴とするキットである。
タンパク質と、少なくとも１つの熱で変性された状態の
前記タンパク質とに対する抗体を用いて、被検食料品中
に存在する試験タンパク質を同定および定量するための
キットであって：各種の状態の前記試験タンパク質に対
する一組のモノクローナル抗体、すなわち未変性状態の
前記試験タンパク質と、異ζろ温度（但し適切な場合は
互いに近い温度）で行われる熱処理で産生される変性状
態の前記試験タンパク質と、異なる長さの時間で行われ
る前記熱処理で生成される変性状態のｌ１７ｊｃ！タン
パク質のそれぞれに対す免疫化学試薬の１組からなり、
いずれのモノクローナル抗体も、対応する抗原、すなわ
ちそれに対する抗体に対応する状態の前記試験タンパク
質を免疫捕獲することができることを特徴とし：さらに
、対応する特異的モノクローナル抗体に結合された抗原
を同定できるようにするポリクローナル抗体を有するこ
とを特徴とするキットである。
この発明は、以下の説明によって、上記構成以外の構成
か明らかになるであろう。
か明らかになるであろう。
ま１ここの発明は、缶詰め食品中に存在する試験タンパ
ク物質かうける熱処理の温度と期間を認識する試験の実
施例に関する以下の別の説明から一層よく理解されるで
あろう。まｆここれらの実施例は以下の図面で説明する
。
ク物質かうける熱処理の温度と期間を認識する試験の実
施例に関する以下の別の説明から一層よく理解されるで
あろう。まｆここれらの実施例は以下の図面で説明する
。
第１〜５図は、試験タンパク物質に対す免疫化学試薬を
用いて、各種の時間長で特定の温度にて処理した各種の
量の試験タンパク物質を認識するのを示すグラフである
。
用いて、各種の時間長で特定の温度にて処理した各種の
量の試験タンパク物質を認識するのを示すグラフである
。
しかし、これらの実施例、図面および対応する説明は、
この発明の主題を例示するだけであり、この発明を限定
するものではない。
この発明の主題を例示するだけであり、この発明を限定
するものではない。
実施例１ 試験タンパク物質が加熱された温度の認識
缶詰め食品に添加剤として含有させることが多い試験タ
ンパク質に対するいくつかのモノクローナル抗体をコー
ラ−とミルスタイン（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄＭｉｌｓｔ
ｅｉｎ）の方法で作製した。すなわち、未変性オボアル
ブミンをと、７５℃で３０分間行っｒ二熱処理で変性さ
れたオボアルブミンを、それぞれ、適切に選択したマウ
スに注射し、次に殺し、得られｒこマウスの膵臓細胞を
マウスのプラズマ細胞腫の細胞と融合さ仕た。
ンパク質に対するいくつかのモノクローナル抗体をコー
ラ−とミルスタイン（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄＭｉｌｓｔ
ｅｉｎ）の方法で作製した。すなわち、未変性オボアル
ブミンをと、７５℃で３０分間行っｒ二熱処理で変性さ
れたオボアルブミンを、それぞれ、適切に選択したマウ
スに注射し、次に殺し、得られｒこマウスの膵臓細胞を
マウスのプラズマ細胞腫の細胞と融合さ仕た。
未変性オボアルブミンに対する抗体と、熱処理で変性さ
れたオボアルブミンに対する抗体をそれぞれ分泌するハ
イブリドーマを選択した後、複数のモノクローナル抗体
を単離し、これをＥＬＩＳＡサンドイッチ試験に用いて
、オボアルブミンか受けた加熱温度を決定した。
れたオボアルブミンに対する抗体をそれぞれ分泌するハ
イブリドーマを選択した後、複数のモノクローナル抗体
を単離し、これをＥＬＩＳＡサンドイッチ試験に用いて
、オボアルブミンか受けた加熱温度を決定した。
この発明に用いられる試験タンパク質はオボアルブミン
であるが、この発明は、この試験タンパク質が貯蔵食品
中に添加されているか、または天然に存在しているかに
かかわらず、缶詰めに利用される温度範囲内の熱処理で
変性しうるいずれのタンパク質にも適用できることは明
らかである。
であるが、この発明は、この試験タンパク質が貯蔵食品
中に添加されているか、または天然に存在しているかに
かかわらず、缶詰めに利用される温度範囲内の熱処理で
変性しうるいずれのタンパク質にも適用できることは明
らかである。
この発明にしたがって、下記のモノクローナル抗体を単
離し、熱処理温度の測定試験に用いた。
離し、熱処理温度の測定試験に用いた。
抗体の表示番号 抗体名 性質
３ ＭＢ４Ｄ８ １ｇＧ。
４ ＱＡ６Ｂ５ １ｇＧ
６に八４ Ｂ４ ［ｇＧ。
７ ＡＤ６Ｃ４１ｇＧ。
ｓ ＢＣ４Ｆ２ １ｇＭ
９ １Ｂ４Ｅ５ １ｇＧ。
これらのモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ
ＢＣ４Ｆ２ １Ｂ４ Ｅ５およびＫＡ４ Ｂ４は、パス
ツール アンスティチュに所属するＮａｔｉｏｎａｌ
Ｃｏ１ｔｅｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉ
ｓｍ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ （ＣＮ ＣＭ ）に、１９８
９年１０月１０日付けで、１−９０７、ｒ−９０８およ
び１−９０９の寄託番号で寄託されている。
ＢＣ４Ｆ２ １Ｂ４ Ｅ５およびＫＡ４ Ｂ４は、パス
ツール アンスティチュに所属するＮａｔｉｏｎａｌ
Ｃｏ１ｔｅｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉ
ｓｍ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ （ＣＮ ＣＭ ）に、１９８
９年１０月１０日付けで、１−９０７、ｒ−９０８およ
び１−９０９の寄託番号で寄託されている。
用いられた熱処理温度を測定する試験は、一方では、抗
原を免疫捕獲する上記のモノクローナル抗体を用い、他
方では、捕獲された抗原を同定するＮ Ａ Ｃｔラビッ
トポリクローナル抗体を用いる、ＥＬ Ｉ ＳＡサンド
イッチ試験法である。
原を免疫捕獲する上記のモノクローナル抗体を用い、他
方では、捕獲された抗原を同定するＮ Ａ Ｃｔラビッ
トポリクローナル抗体を用いる、ＥＬ Ｉ ＳＡサンド
イッチ試験法である。
同定される抗原を構成する試験タンパク質はｌＯ分間各
種の温度に加熱されたオボアルブミンであっｒ二。
種の温度に加熱されたオボアルブミンであっｒ二。
以下の第１表は、免疫捕獲を行う上記の４つのモノクロ
ーナル抗体を用いて得られた光学濃度（ＯＤ）を示す。
ーナル抗体を用いて得られた光学濃度（ＯＤ）を示す。
この表は、オボアルブミンか５０ｎｇ／ｍｌの濃度で媒
体中に存在している場合、一方では７０°Ｃと７５℃間
、他方では７５６Ｃと８０℃間に明確な差異かあること
を示している。
体中に存在している場合、一方では７０°Ｃと７５℃間
、他方では７５６Ｃと８０℃間に明確な差異かあること
を示している。
第１表
モノクローナル抗体を用いるＥＬＩＳＡサンドイッチ試
験法による１０分間熱処理しｒこ後の５０ｎｇ／ｍｌの
オホアルブミンの存在の認識未処理のもの の光学濃度 ７００ ０００ 下記、毘Ｉで処理した乙のの光学濃度 ５０℃ ６５°Ｃ７０°Ｃ７５°Ｃ８０℃ ８５℃１７
００ １６００ １５００ １４００ ２００ ０９
５０ ９５０ ８５０ ８５０ ２００ ００
０ ０ ３００ ６５０ ６５００ ０ ０
４００ ８００ ８００オボアルブミンの加熱期間の
役割をＥＬ Ｉ ＳＡサンドイッチ試験法を実施するこ
とによって試験したか、この試験法では、上記の５つの
モノクローナル抗体をそれぞれ用いて免疫捕獲を行った
。
験法による１０分間熱処理しｒこ後の５０ｎｇ／ｍｌの
オホアルブミンの存在の認識未処理のもの の光学濃度 ７００ ０００ 下記、毘Ｉで処理した乙のの光学濃度 ５０℃ ６５°Ｃ７０°Ｃ７５°Ｃ８０℃ ８５℃１７
００ １６００ １５００ １４００ ２００ ０９
５０ ９５０ ８５０ ８５０ ２００ ００
０ ０ ３００ ６５０ ６５００ ０ ０
４００ ８００ ８００オボアルブミンの加熱期間の
役割をＥＬ Ｉ ＳＡサンドイッチ試験法を実施するこ
とによって試験したか、この試験法では、上記の５つの
モノクローナル抗体をそれぞれ用いて免疫捕獲を行った
。
オボアルブミンの溶液（１０μｇ／ｍｌ）を異なる時間
７５℃に加熱し、異なる希釈度で試験した。
７５℃に加熱し、異なる希釈度で試験した。
第１〜４図は免疫捕獲に用いられたモノクローナル抗体
によって試験された抗原の量と、オボアルブミンが加熱
された時間の長さを示す。
によって試験された抗原の量と、オボアルブミンが加熱
された時間の長さを示す。
７５℃での同じ熱処理と同じ抗原濃度（３ｎｇ／ｍｌ）
の条件下で重要な差異が観察された。
の条件下で重要な差異が観察された。
ｌ）抗体４によって、ＯＤ（光学濃度）の８０％が３〜
３０分間に失われる。
３０分間に失われる。
２）抗体７によって、活性の６０％が３〜３０分間に失
われる。
われる。
３）抗体３によって、活性の４０％だけが３〜３０分間
に失われる。および ４）抗体９によって、活性の９０％が１〜９分間で失わ
れる。
に失われる。および ４）抗体９によって、活性の９０％が１〜９分間で失わ
れる。
抗原の濃度が低い程、試験法の感度が高いが活性が消滅
する時間は実質的に同じである。
する時間は実質的に同じである。
得られた結果を７５℃での熱処理と８０℃の熱処理の場
合について比較すると著しく異なっている。すなわち第
５図は、７５℃についてはエピトープ（抗原決定基）の
発現が、オボアルブミン濃度が５０ｎｇ／ｍｌもしくは
１０ｎｇ／＋ｎｌであってもほとんど変性されていない
ことを示し、一方８０℃ではエピトープの７０〜９０％
が１分間で消滅する。
合について比較すると著しく異なっている。すなわち第
５図は、７５℃についてはエピトープ（抗原決定基）の
発現が、オボアルブミン濃度が５０ｎｇ／ｍｌもしくは
１０ｎｇ／＋ｎｌであってもほとんど変性されていない
ことを示し、一方８０℃ではエピトープの７０〜９０％
が１分間で消滅する。
特異的なモノクローナル抗体が免疫捕獲に使用される場
合、特異的なラビットらしくはマウスのポリクローナル
抗体は、捕獲される抗原が前記実施例のようにオボアル
ブミンであるかもしくは缶詰に用いられる処理温度で変
性されうる他の試験タンパク質であるか、またこの試験
タンパク質が貯蔵食料品に添加されるタンパク質である
がもしくは試験タンパク質が通常貯蔵食料品中に存在し
ているかにかかわらず、捕獲抗原を検出するのに使用で
きることは、上記実施例から明らかである。
合、特異的なラビットらしくはマウスのポリクローナル
抗体は、捕獲される抗原が前記実施例のようにオボアル
ブミンであるかもしくは缶詰に用いられる処理温度で変
性されうる他の試験タンパク質であるか、またこの試験
タンパク質が貯蔵食料品に添加されるタンパク質である
がもしくは試験タンパク質が通常貯蔵食料品中に存在し
ているかにかかわらず、捕獲抗原を検出するのに使用で
きることは、上記実施例から明らかである。
これらの実施例は、この発明によって以下のことか可能
になることを示している。
になることを示している。
■）抗原が加熱された温度を５℃の精度、時には１℃の
精度で検出てきる。および ２）熱処理が行われた時間の長さを同定できる。
精度で検出てきる。および ２）熱処理が行われた時間の長さを同定できる。
上記のことから明らかなように、この発明は、詳細に記
載したこの発明の実施！３＠と方法に限定されるもので
はなく、この発明には、この発明の範囲から逸脱するこ
となく、当業者が考えることができるすべての変形も含
まれる。
載したこの発明の実施！３＠と方法に限定されるもので
はなく、この発明には、この発明の範囲から逸脱するこ
となく、当業者が考えることができるすべての変形も含
まれる。
第１〜５図は、特定の温度で種々の長さの時間にて処理
された各種の量の試験タンパク物質を、この物質に対す
免疫化学試薬を用いて認識するのを示すグラフである。 ＦＩＧ、５ ＦＩＧ、４ 間開 ｍｉｎｌ
された各種の量の試験タンパク物質を、この物質に対す
免疫化学試薬を用いて認識するのを示すグラフである。 ＦＩＧ、５ ＦＩＧ、４ 間開 ｍｉｎｌ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、被検食料品に含有されている試験タンパク物質の同
定と定量、および前記被検食料品が受けた熱処理の温度
と期間を認識するのに用いる免疫化学試薬であって、前
記食料品に含有され、所定の処理温度で特定の期間行わ
れた熱処理で変性された特定の変性状態の試験タンパク
質に対する少なくとも１つのモノクローナル抗体からな
ることを特徴とする試薬。 ２、未変性状態の前記試験タンパク質に対する１つの抗
体と、所定の処理温度と特定の時間の長さで行った熱処
理で変性された異なる変性状態の前記試験タンパク質に
対する少なくとも１つの他の抗体とかならる一組のモノ
クローナル抗体で構成されていることを特徴とする請求
項１記載の免疫化学試薬。 ３、ＥＬＩＳＡ法によって、未変性タンパク質と、少な
くとも１つの熱で変性された状態の前記タンパク質とに
対する抗体を用いて、被検食料品中に存在する試験タン
パク質を同定および定量するためのキットであって；各
種の状態の前記試験タンパク質に対する一組のモノクロ
ーナル抗体、すなわち未変性状態の前記試験タンパク質
と、異なる温度（但し適切な場合は互いに近い温度）で
行われる熱処理で産生される変性状態の前記試験タンパ
ク質と、異なる長さの時間で行われる前記熱処理で生成
される変性状態の前記タンパク質とのそれぞれに対する
１組のモノクローナル抗体からなり、いずれのモノクロ
ーナル抗体も、対応する抗原、すなわちそれに対する抗
体に対応する状態の前記試験タンパク質を免疫捕獲する
ことができることを特徴とし；さらに、対応する特異的
モノクローナル抗体に結合された抗原を同定できるよう
にするポリクローナル抗体を有することを特徴とするキ
ット。 ４、パスツールアンスティチュに属するＣＮＣＭ（Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒ
ｏｏｒｇａｎｉｓｍＣｕｌｔｕｒｅｓ）に、１９８９年
１０月１０日付で寄託番号Ｉ−９０７．Ｉ−９０８およ
びＩ−９０９で寄託されたハイブリドーマであって；請
求項１もしくは２に記載の免疫化学試薬を構成する、試
験タンパク質に対するモノクローナル抗体を、分泌する
ハイブリドーマ。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8913181A FR2652903A2 (fr) | 1988-05-19 | 1989-10-10 | Reactifs et procede de dosage immunochimique du degre de denaturation de substances proteiques. |
| FR8913181 | 1989-10-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03282260A true JPH03282260A (ja) | 1991-12-12 |
Family
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2272061A Pending JPH03282260A (ja) | 1989-10-10 | 1990-10-08 | タンパク物質の変性度の免疫化学検定用試薬と免疫化学検定法 |
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|---|---|
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| CA (1) | CA2027118A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA907852B (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004510144A (ja) * | 2000-09-18 | 2004-04-02 | メディミューン，インコーポレイテッド | ワクチンの免疫原性を測定する試験管内検定 |
| JP2006197925A (ja) * | 2004-12-24 | 2006-08-03 | Research Institute Of Biomolecule Metrology Co Ltd | 抗変性蛋白質抗体精製キット、抗変性蛋白質抗体の精製方法、蛋白質の検出方法、及び生体分子の検出方法 |
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- 1990-10-09 CA CA002027118A patent/CA2027118A1/fr not_active Abandoned
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Also Published As
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|---|---|
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