JPH0314539A - ウアバイン様化合物およびそれを含む医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 ジゴキシン、ジギトキシンまたはウアバインのようなジ
ギタリス系化合物は、ありふれたパープル●フｔツクス
グローブ（ｐｕｒｐｌｅ　ｆｏｘｇｌｏｖｅ＞であるジ
ギタリス●プルプレア（ｄｌｇｌｔａｌｌｓ　ｐｕｒｐ
ｕｒｅａ）の乾燥した葉やある種の植物の種子や葉から
抽出される。このような抽出物は、２００年以上もの間
慢性の心臓疾患の治療に用いられてきた。一般的には、
強心配糖体とも呼ばれることがあるジギタリス系化合物
は強力な強心剤であり、筋収縮力を高めたり、ある種の
条件下では心拍数を低下させる。

ジギタリス化合物は、この化合物がＮａ，Ｋ−ＡＴＰア
ーゼ（Ｈ．Ｃ．３．６．１．３）の活性を阻害すること
ができる分子機構によって、その薬理作用を允現する。

Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰアーゼは膜透過性酵素であり、ＡＴＰ
を加水分解し、この酵素はこの加水分解によって放出さ
れる自由エネルギーを用いてＮａ　　を細胞外に、Ｋ＋
を細胞中に輸送する。

ジギタリスはこの酵素に特異的に結合して、その活性を
阻害する（Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰアーゼとジギタリスのこの
酵素への作用についての考察については、グリン、アイ
・エム（Ｇｌｙｎｎ．　Ｉ．Ｍ．）ら著、Ｊ．　Ａｎｎ
．　Ｒｅｖ．　Ｐｈｙｓｌｏｌ．．　３７．　１３　−
　５５　＜１９７５）およびリンデンマイヤー、ジーａ
エイ（１，ｌｎｄｅｎ＋ｍｅｙｅｒ．Ｇ．＾．〉著、Ｐ
ｈａｒ＋ｇａｃｏｌ．　Ｔｈｅｒ．，　２．　８４３　
−　８６１（１９７６）を参照されたい）。構造的にジ
ギタリス系化合物に関連している化合物は、数年前まで
はヒキガエルの毒腺および数種の両生類の皮膚に存在す
ることが示されているだけであった。また、動物やヒト
に内因性のジギタリス様化合物（以後ＤＬＣと表わす）
が存在するのではないかとも本気で考えられていた。こ
のような内因性のジギタリス様化合物は、Ｎａ，Ｋ−Ａ
ＴＰアーゼ上のジギタリスレセプターの天然配位子およ
びこの血漿膜酵素の活性の調節剤であると考えられてい
た。

実際、近年、啼乳類の脳（ハウバート・ジー・ティー、
ジュニア（Ｉｌａｕｐｃｒｔ　Ｇ．Ｔ．，　Ｊｒ．）ら
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　Ｕ．
Ｓ．＾．，７［１，　４６５ｇ　−　４１３６１（１９
７９）　，フィッシュマン、エム●シー（Ｐｌｓｌｖａ
ｎ．　　Ｍ．Ｃ．）　　、　Ｐｒｏｃ．　　Ｎａｔｌ．
　　Ａｃａｄ．　　Ｓｅｔ．ｔｌ．ｓ．Ａ．，７６．　
４８８１　−　４８６３　（１９７９）　；リヒトシュ
タイン、ディ−（Ｌｌｃｈｔｓｔｅｌｎ．　Ｄ．）ら、
Ｂｌｏｃｈｅｍ．Ｂｌｏｐｈｙｓ．　　Ｒｅｓ．　　Ｃ
ｏｓｓｕｎ．．　　９１，　　１５１８　　−１５２３
（１９８０））　、心臓（ドウ・ポバー、エイ（Ｄｅ　
Ｐｏｖｅｒ．＾．）ら、Ｂｌｏｃｈｅｍ．　Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌ．，３１．　２８７　−　２７１＜１９８２）
）　、副腎（タムラ、エム（Ｔａｍｕｒａ．　Ｍ．）ら
、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．　２７．　４２４４　−
　４２５３　（１９８８））　、血漿（ハディー、エフ
・ジェイ（Ｄａｄｄｙ．　Ｐ．Ｊ．）ら、！，Ｉｒｅ　
Ｓｃｌ．．１９，　９３５　−　９４８　（１９７Ｂ）
　；　ハムリン、ジェイ・エム（Ｉｌａｍｌｙｎ，　Ｊ
．Ｍ．）ら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｌｏｎ．　１０．１−
７１−１７７　（１９８７）　）および尿〈ゴトー、エ
イ（Ｇｏｔｏ．＾．〉ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｌｏｐ
ｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｓｓｕｎ．．１５４．　８５
７　−　８５３　（１９８８）　　；クロワ、ジエイ・
エフ（Ｃｌｏｉｘ．　Ｊ．Ｐ．）　ら、Ｃａｎ．　Ｊ．
　Ｐｈｙｓｉｏｌ．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６５．　１
５２２−１５２７　（１９８７））からの抽出物中にウ
アバイン様活性を示す「ジギタリス様」　（または「ウ
アバイン様」）化合物が存在することの証拠が蓄積され
てきた。増加する証拠によって、これらの化合物の水準
は動物の細胞外容積膨脹において増加することが示され
ており、それらの容積および塩ホメオスタシスにおける
役割を示唆している（ハーバー、イー（Ｈａｂｅｒ．　
Ｅ．）ら、Ｉｌｙｐｅｒｔｅｎｓｌｏｎ，９，　３１５
　−　３２４　（１９８７）を参照されたい）。

ジギタリス系化合物はＮａ，Ｋ−ＡＴＰアーゼを阻害す
るので、この酵素が含まれている多数の系に影響を与え
る。したがって、これらの薬剤は、陽イオン親和性（ｐ
ｏｓｉｔｌｖｃ　ｌｏｎｏｔｒｏｐｉｃ）作用やある条
件下で心拍数に影響を与えることが知られている強力な
強心剤である。更に、強心配糖体は賢臓でのＮａ＋イオ
ンの排泄に影響し、ナトリウム排泄増加を起こし、更に
高濃度では中枢神経系に種々の影響を与える（ホフマン
、ビー・エフ（Ｉｌｏｆ’ｎａｎｎ．　Ｂ．Ｐ．）ら著
、治療薬の薬理学的基礎（Ｐｈａｒｖａｃｏｌｏｇ！ｃ
ａｔ　Ｂａｓｉｓ　ｏｒ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｌｃｓ）
　　（グッドマン（Ｇｏｏｄｍａｎ）とギルマン（Ｇｌ
　ｌｌｌａｎ）監修）、マクミラン出版株式会社（Ｍａ
ｃ帰１１１ａｎ　ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．．　Ｉｎ
ｃ．）、ニューヨーク（１９８０年）を参照されたい）
。

数種類の物質が不飽和脂肪酸（ケリー、アール●エイ（
Ｋｅｌｌｙ，Ｒ．Ａ．）　ら、Ｊ．　Ｂｌｏｔ．　Ｃｈ
ｅｔ，　２６０．１１３９６　−　１１４０５　（１９
８５））およびリゾリン脂質（ハムリン、ジェイ●エム
（Ｈａｓｌｙｎ，　Ｊ．Ｍ．）ら、Ｈｙｐｅｒ−ｔｃｎ
ｓｉｏｎ，１０，　！−７１−１７７　（１９８７））
を含むＤＬＣとして提案されてきた。しかしながら、こ
れらの化合物は特異性および親和性が限定されているの
で、Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰアーゼのレセプターの天然配位子
ではないと思われる。Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰアーゼの特異的
な内因性阻害剤は、最近になってウシの副腎から精製さ
れた（タムラ、エム（Ｔａｓｕｒａ．　Ｍ．）ら、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．　２７．　４２４４　−　４２
５３　（１９８ｇ））。

この阻害剤は、分子量が３３６の少量の水に可溶性の有
機化合物として記載されている。しかしながら、この化
合物の構造は未だ決定されていない。

本発明者らは、ヒキガエルの皮膚と血漿に前記の基準に
合うブフォジエノリド誘導体が存在することを、近年に
なり報告したが（リヒトシュタイン、デ｛　−（ＬＩｃ
ｈＬｓＬｅｌｎ．　Ｄ．）ら、Ｌｉｆｅ　Ｓｃｌ．，３
８．　１２８１−　１２７０　（１９８６）　）、ヒキ
ガエルでのその生理的役割或いは補乳類におけるその存
在については未だ検討されていない。これまでに報告さ
れた未同定の内因性化合物は総て、Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰア
ーゼのウアバイン結合部位と相互作用を行い、その活性
を阻害するという共通の特徴を有しており、しかもジギ
タリスと同様に、心筋の収縮力を増加させる（シモニ、
ワイ（Ｓｈｌｍｏｎ１，　Ｙ．）ら、Ｎａｔｕｒｃ，３
０７，　３８９　−　３７１　（１９８４）　）。ＤＬ
Ｃは低分子（（１．０００ｄ　）であり、水およびメタ
ノールに可溶性であるがクロロホルムまたはへキサンに
は不溶性であることは、一般には確認されている。

内因性のジギタリス様化合物を利用することができ且つ
治療薬としてこれらの化合物を服用することができれば
、前記の病理学的条件の治療に有効であろう。

発明の具体的な説明 内因性のジギタリス様化合物の研究において、幾つかの
これらの化合物をウシの血漿から均一に精製し、その構
造を同定した。

本発明は、それ故、一般式 （式中、Ｒエは直鎖状または分岐したＣ１〜６アルキル
基であり、ｎは２〜１ｌの整数である）を有する化合物
および薬学上受容可能なその塩に関する。

？ましい化合物は、Ｒ　がＣ　　　アルキル基１　　３
〜６ である式（１〉の化合物である。

最も好ましい式（１〉の化合物は、Ｒ■がプロビルであ
り、ｎが９である化合物、すなわち１１．　１３−ジヒ
ドロキシ−１４−オクタデカエン酸および薬学上受容可
能なその塩である。

式〈１〉の化合物の単離と特性決定は、以下の実施例に
記載する。これらの化合物のジギタリス様活性も、実施
例に記載されている。

もう一つの態様では、本発明は一般式 Ｒ （式中、Ｒはアルキレンカルボキシ、アルキレン力ルポ
ニルオキシアルキル、カルボニルオキシアルキル基また
はアルキレンオキシアルキレンー力ルポニルオキシアル
キル基である）を有する化合物に関する。

？（１１）の好ましい化合物は、Ｒが基−ＣＨ　　（Ｃ
Ｈ２）　１２ＣＯＯＨ１２ −ＣＨ　　−ＯＣＯ　（ＣＨ２）　１■ＣＨ３、２ 一〇〇〇（ＣＨ２）１２ＣＨ３、または０ １１ 一〇Ｈ　　−０−　（ＣＨ２）　１２−ＣＯＣ２Ｈ５２ である化合物である。

式（１１）の化合物の単離および特徴決定については、
以下の実施例に記載されている。これらの化合物のジギ
タリス様活性も、実施例に記載されている。

本発明は、活性成分として式〈１）の化合物または薬学
上受容可能なその塩と、所望ならば薬学上受容可能な添
加剤をも好適な担体または希釈剤中に含んで成る心不全
または腎不全の治療または予防のための製剤にも関する
。

好ましい製剤は、活性成分として１１．　１３−ジヒド
ロキシーＩ４−オクタデカエン酸または薬学上受容可能
なその塩を含んでいる。

もう一つの態様では、本発明は、活性成分として式（１
１）の化合物を含み、所望ならば薬学上受容可能な添加
剤をも好適な担体または希釈剤中に含んで成る心不全ま
たは腎不全の治療または予防のための製剤に関する。活
性成分として式（１１〉の少なくとも２種類の化合物の
適当な混合物を含んで成る製剤も本発明に含まれる。好
ましい製剤は、活性成分として、式（１１）の化合物で
あってＲが基ＣＨ２（ＣＨ２）　１２ＣＯＯＨ， ＣＨ　　−ＯＣＯ　（ＣＨ２）　１、Ｃｌ３、２ −　ｏ　ｃ　ｏ　＜ｃ　Ｈ　２）　１２ｃ　ａ　３、ま
たは０ １１ −ＣＩ｛２−０−　（ＣＨ２）　ｌ２ＣＯＣ２Ｈ５であ
る化合物を含んで成る。

また、活性成分として式（！）の化合物と少なくとも１
種類の式（Ｉ１〉の化合物と所望ならば薬学上受容６１
能な添加剤をも適当な担体または希釈剤中に含んで成る
製剤も、本発明の範囲内にある。

本発明の製剤は心不全や不整脈のような機能不全の治療
や、病理学的条件下でのナトリウム排泄増加の誘発に用
いることができる。

本発明は、心機能不全や腎機能不全の治療を必要とする
患者に、心不全、不整脈等または腎機能不全を予防した
りまたはそのような／′ｉ．在する病理学的条件を改善
するのに有効な量の本発明の製剤を投与することによる
心機能不全および腎機能不全の予防または治療法も提供
する。

本発明による製剤は、通常の無毒の薬学上受容ｈＪ能な
担体と、希釈剤とアジュバントとビヒクルを所望ならば
含んでいる投与Ｑｔ位配合物で経口または非経口的に投
与することができる。本明細書に用いられる非経口とい
う用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内および鞘内注
射および暢液法を包含する。

投与Ｉｌｌ位製剤は、本発明の化合物の一日所要量また
はこの所望な投与量の何分の一かを含んでいてもよい。

特定の患者に対する具体的な治療上有効な投与水準は、
用いられる特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的な
健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路、排泄速度
等の各種の要因によって変わる。

本発明に用いられる「薬学上受容可能な担体」という用
語は、本発明の活性成分と反応しない、不活性な、無毒
固体または液体充填剤、希釈剤またはカプセル化剤を意
味する。これらの担体は、当業者に知られている。湿潤
剤、乳化材および潤滑剤、或いは着色剤、離型剤、コー
ティング剤、甘味料および矯味料、および防腐剤も、本
発明の製剤に存在することができる。担体材料と組み合
わせて単一投与形態を生或する活性或分の量は、治療さ
れる患者および投与の特定の様式によって変化する。

実施例 材料および一般的方法 材料＝　［３Ｈ］一ウアバインは、ニュー・イングラン
ド”　二＋Ｌ−クレア−（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎ
ｕｃｌｅａｒ＞から購入した。有機溶媒は高速液体クロ
マトグラフィ　（Ｈ　Ｐ　Ｌ　Ｃ）グレードであった。

他の化合物は分析グレードのものであった。

ウシの血漿からのＤＬＣの抽出：凍結乾燥したウシの血
漿１５０　｝Ｃｇであって、血漿約２０００リットルに
相当するものを用いた。この血漿から１０倍容のメタノ
ールによりＤＬＣを抽出した。濾過の後、メタノール溶
液を濃縮し、ヘキサンで洗浄した。

メタノール層を分離し、蒸発乾固し、生成する材料を低
圧Ｃ−８カラムに付し、増加する濃度のアセトニトリル
で展開した。後記するＤＬＣ活性についての数種類の独
立なパイオアッセイによって測定したＤＬＣ活性のほと
んどを含む６７％アセトニトリル画分を、後記の実施例
１に記載する高速液体クロマトグラフィ　（ＨＰＬＣ）
を用いて更に精製した。

ジギタリス様活性の分析：精製の過程で得られるそれぞ
れの両分のジギタリス様活性を、下記のバイオアッセイ
の少なくとも２種類を用いて定量した。

（ａ）　　　［　３Ｈ　］一ウアバイン結合の阻害：［
３Ｈ］一ウアバインのラットの脳神経細胞画分との結合
は、既述の通常の濾過法によって行った（リヒトシュタ
イン、ディ−（Ｌｌｃｈｔｓｔｃｌｎ．　Ｄ．）ら、Ｌ
ｉｆｅ　ＳｃＩ．．３８．　１２６１　−１２７０　（
１９８ｆｔ）　）　．簡単に説明すれば、反応混合物（
　５００μｌ＆終容８Ｉ）は下記の成分１終濃度）を含
んでいた：　５０　ｓＭトＩＪス−ＨＣＩ緩衝液（ｐＨ
　７．４）　、０．５　ｓＭＥＤＴＡ，　　８０　　ｍ
Ｍ　　ＮａＣ　　Ｌ　　４　　ｍＭＭｇｓｏ４、２ｓＭ
ＡＴＰ（｝リス、バナジウム不含〉および３２ｍＭ　　
［３Ｈ］−’ｙ７ｉ＜イン（１９．５　ＣＩ／ミ！７モ
ル）。

反応は、粗製の神経細胞画分２００μｌを添加すること
によって開始し、最終たんぱく質濃度は反応当たり２０
０μｇとなった。３７℃で１時間インキユベーションし
た後、冷たい５０ｍＭ｝リスーＭＣＩ（ｐＨ　７．４）
　３　ｍｌを加えて反応を停止し、ワットマンＧＦ／Ｂ
フィルターで濾過した。フィルターを同じトリス緩衝液
３ｍｌ容積で２回洗浄し、乾燥し、パッｆｙ　−　Ｆ　
（Ｐａｃｋａｒｄ）製液体シンチレーション・カウンタ
ーでカウント高率が約５０％で放射能を測定した。特異
的な結合１よ、未標識ウアバインの不在下で観察された
結合からｌｏｏμＭの未標識ウアバインの存在下で観察
される結合を差し引くことによって算出した。特異的結
合は、制御された条件下では総結合の９３％であった。

（ｂ）　　Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰアーゼ活性の阻害：ラット
の脳ミクロソーム画分のＮａ，Ｋ−ＡＴＰアーゼ活性は
、既述の方法で測定した（リヒトシュタイン、デ｛　−
（Ｌｌｃｈｔｓｔｃｌｎ．　Ｄ．）ら、Ｌｉ　ｒｅＳｃ
ｌ．．　３８．　１２８１　−　１２７０　（１９８Ｂ
））　．酵素活性は、（最終濃度）　３４　ｍＭ　トリ
スーＭＣＩ緩衝液（ｐＨ７．４）　、１００　ｍＭＮａ
ｃ　１，　２０　ｍＭ　ＫＣ　ｌ，　４　ｓＭＭｇＣｌ
２および４＋ｍＭＡＴＰ（｝リス、バナジウム不含）を
含む溶液（最終容積、５００μｌ）中で３７℃でミクロ
ソーム（反応当たり２００μｇたんぱく質）をインキユ
ベーションした後、無機リン酸塩の比色定量によって測
定した。１０分間予備インキユベーションした後、ＡＴ
Ｐを加えて反応を開始した。反応は５％トリクロロ酢酸
１００μｌを加えて停止し、沈澱を遠心分離によって除
去した。

Ｎａ，Ｋには依存しないＡＴＰアーゼ活性は、反応混合
物からＮａ　　およびＫ　を省くことにより、または完
全な分析混合物にｌ　ｓＭのウアバインを加えることに
よって測定した。

（ｃ）　　Ｎ　Ｉ　Ｅ　１　１　５細胞への８６Ｒｂの
取り込みの阻害： 神経芽腫ＮＩＥ１１５細胞は、ＭＥＭ　（改良イーグル
培地）で生育させた。培地をビベットで上下させること
によって、細胞をその生育フラスコから取り出し、ソル
バル（Ｓｏｒｖａｌ）　Ｒ　Ｃ　−　５遠心分離機で１
００　ｘ　ｇでＩＯ分間遠心分離した。ペレットをＭＥ
Ｍに再懸濁させた。８６Ｒｂの取り込みは、８６Ｒｂ｝
レーサー（１μＣｉ）を含むＭＥＭにＮＩＥ１１５細胞
を添加することによって開始した。１分後に水冷２２５
　ｓＭＭ　ｇ　Ｃ　Ｉ　２溶液１．５ｍｌを添加するこ
とにより取り込みを停止した後、エツペンドルフ遠心分
離機で１分間遠心分離した。エッペンドルフ菅を切断し
て、ペレットを取り出してシンチレーションバイアルに
移し、これにエマルジファイア一〇シンチレータ−（Ｅ
ｓｕｌｓｌｒｌｅｒＳｃｌｎＬＩＩＩａＬｏｒ）　　２
　９　９　７Ｍ　（パブカード（Ｐａｃｋａｒｄ）製）
６ｍｌを加えて、放射能を測定した。

高速液体クロマトグラフィ：　半調製用パルティジル（
Ｐａｒｔｌｓｏｌ）Ｏ　Ｄ　Ｓ　−　３カラム（１．０
　ｘ　５Ｑｃｍ，粒度１０　ｕ　ｍ　ｓワットマン（Ｉ
ｆｈａｔｓａｎ）　）および分析用リクロスフェア（Ｌ
ｌｃｈｒｏｓｐｈｃｒ）　Ｒ　Ｐ　−　１　８カラム（
０．４　ｘ　２５ｃｍ，粒度５μｍ，メルク（Ｍｃｒｃ
ｋ）　）上でＬＫＢ２１５２｝ＩＰＬＣコントローラー
に接続したＬＫＢ２１５０ＨＰＬＣボンブを用いて、逆
相ＨＰＬＣを行った。分析用力ラムについては１ｍｌ／
分および半調製用力ラムについては３ｍｌ／分の流速で
、アセトニトリルの線形グラディエントでカラムを展開
した。カラムからの化合物の溶出は、クナウア（Ｋｎａ
ｕｅｒ）可変波長モニターを用いて各種の波長で、また
はエルマ社（ＥＲＭ＾Ｉｎｃ．）製装置を用いる屈折率
モニターによって観察した。

ＮＭＲスペクトルは、内部標準としてのテトラメチルシ
ランとメタノールーｄ４を用いて、ＷＨ３００ブルーカ
ー（Ｂｒｕｋｅｒ）スペクトル分析計で得た。紫外スペ
クトルは、メタノール中でバリアン●テクトロン（Ｖａ
ｒｌａｎ　Ｔｅｃｔｒｏｎ）　６　３　５型分光光度計
で得た。低分解能質量スペクトルは、ＬＫＢ２０９１質
量スペクトル分析計で７０ｃＶで電子衝撃イオン化法に
よって記録した。試料は、直接導入法によって挿入して
、５０＠／分の速度で３００℃まで外部から加熱した。

高分解能測定は、解像度がｔｏ，ｏｏｏのバリアン（Ｖ
ａｒ１ａｎ）　Ｃ　Ｈ　５　　Ｄ　Ｆ質量スペクトル分
析計で行った。

とＫ＋はパーキンーエル７　−　（Ｐｃｒｋｌｎ−ＩＥ
Ｉｓｅｒ）原子吸光分光分析計を用いて原子吸光によっ
て定量した。たんぱく質の濃度は、ローリーの比色法に
よって定量した。

実施例１ ウシの血漿からのＤＬＣの精製 血漿ＤＬＣを精製するために、前記の方法で１５０贈の
凍結乾燥したウシ血漿からメタノール抽出物を製造した
。活性メタノール画分を低圧Ｃ一！８カラムに加えて、
アセトニトリルで段階的に展開した。大半の生物活性（
データーは示していない）を含む６７％アセトニトリル
画分を、調製用、半調製用および分析用ＨＰＬＣ系を用
いて更に分画した。

活性画分の一部を、８０％アセトニトリルで平衡にした
Ｃ−８の逆柑の調製用力ラムに注入して、線形の０〜８
０％アセトニトリルグラディエントで６０分を要して溶
出した。このクロマトグラフィで得られる紫外部吸収と
生物活性パターンの一例を、第１図に示す。

このクロマトグラフィから得られる、保持時間が２５〜
５０分の活性画分を集めて、濃縮し、半調製用力ラム（
パーティジル（Ｐａｒｔｌｓｌｌ）Ｏ　Ｄ　Ｓ　−　３
カラム、１０　ｘ　５０　ａｍ．粒度１０μｍ）に付し
て、同じ条件で溶出した。この半調製用力ラムからの活
性は、３個の活性ピーク（第２図）に分割され、これら
のピークを１（保持時間、０−１０分）、！！（保持時
間、２８〜３８分）および１！１（保持時間４７〜５７
分）と命名した。ピーク！１は最強の紫外部吸収を伴っ
て溶出されたが、ピークＩＩ＋は２５４ｎｓに吸収を持
たなかった（第２図）。３個のピークの間の活性の分布
は、穴なる製造物では量的には変動したが、その保持時
間は極めて再現性が高かった。３個のピークの物質を更
に分析用逆相クロマトグラフィを用いてクロマトグラフ
ィを行ったが、ビーク１１およびＩＩ＋の分離について
更に説明する。

分析用逆相カラム（リクロスフェア（Ｌｌｃｈｒｏ−ｓ
ｐｈｅｒ）　Ｒ　Ｐ　−　ｉｓ、０．４　ｘ　２５ｃｍ
，粒度５μｍ）上で５０％アセトニトリルの一定の系を
用いて溶出し、２５４ｎ一および屈折率検出計で観察し
たビーク■の分離を、第３図に示す。Ｄ　Ｌ　Ｃ　−　
Ｉ＋は４分の保持時間で溶出し、屈折率で観察したピー
クと重なり合っていた。このピークによって表わされる
化合物を、質量スペクトルおよびＮＭＲ分析に付した（
下記を参照されたい）．， 第４図は、分析用の逆相カラム（リクロスフェア（Ｌｌ
ｅｈｒｏｓｐｈｃｒ）　Ｒ　Ｐ−１８、０．４　Ｋ　２
５ｃｍ，粒度５μｍ）に注入し、７５％アセトニトリル
の一定の系を用いて溶出したピークＩＩ＋の溶出分布を
示している。ＤＬＣ活性は１０分の保持時間で溶出した
が、２５４または２ｇ０　ｎｍのいずれでも有意な紫外
部吸収は見られなかった。しかしながら、屈折率モニタ
ーでは、生物活性に完全に重なり合う強いピークが見ら
れた（第４図、下段）。この物質を質量スペクトル分析
に付した。

実施例２ 構造の同定 （１）　　ピーク１１で表わされるＤＬＣ化合物をＥｌ
質量スペクトル分析計によって分析して、構造を同定し
た。この化合物の質量スペクトルを第５図に示す。この
スペクトルでは、ベースビークが９９原子中位（ａ．ｕ
．）　　（２００％）に、水分子（１８原子中位）の脱
離による小さなピークが２９６１大きなピークが２７１
１　　（３５％）に見られた。このスペクトルでは、１
７１と１５３にもピークが検出された。

２７８のピークの高分解能測定を、ＣＨ５−ＤＦ装置を
用いて分解能ＩＱ．００Ｑで行った。精確な質量は２７
Ｌ２２２　ａ．ｕ．であり、組成Ｃ１８Ｈ３００２　　
（計算質ｊｌ２７８．２２４　）に対応した。この化合
物をジアゾメタンエーテル溶液を用いてメチルエステル
化したところ、ビーク２７８および２９６が１４　ａ．
ｕ．シフトしたことからヒドロキシ酸のメチルエステル
が構造中にあることが判った。このエステル化法では９
９と１５３のピークはシフトしなかったが、１７１のピ
ークは１８５　ａ．ｕ．にシフトした。これらのデータ
一をまとめると、この物質はリノレン酸（９．１２．１
５−オクタデカトリエン酸、分子ｊｉ２７ｇ、第６図（
ａ））の前駆体に似たヒドロキシオクタデカジエン酸構
造を有することが示唆された。９９のピークによって表
わされるフラグメントはヒドロキシル基へのアルファ開
裂によって形戊されることから、ヒドロキシル基がＣｌ
３に結合していることを示している。１７１および１５
３　ａ．ｕ．にビークが存花することおよびメチルエス
テル化によって１７１のピークだけが１８５にシフトす
ることは、二重結合が０１１とＣｌ２の間に配置されて
おり、１３一ヒドロキシーリノレン酸（第６図）の場合
とは異なることを示唆している。更に、ビニル結合が電
子衝撃下では容易にはＩ’４Ｒしないことから、１７１
のフラグメントは第６図に示されるように（Ｃ１ｌに配
置された第二級ヒドロキシル基に対してアルファの）火
種開裂によって形或されると考えるのが合理的である。

加えて、９９のピークの存在度が高いことは、Ｃ１４位
置に二重結合があることによって良好に説明され、これ
によって安定化した共役二重粘合を形或することができ
る（第６図）。

したがって、フラグメント化のパターンによれば、ピー
ク１１に存在するＤＬＣの構造は、１１．１３−ジヒド
ロキシ−１４−オクタデカエン酸（ＤＬＣ−Ｉ＋）であ
ることが示唆される。

ヒドロキシ酸化合物であるＤＬＣ−Ｉ＋は、水１または
２分子を失って、生物活性の大部分を喪失し易く（下記
を参照されたい）、これによってマススペクトル測定に
おいて９９、１５３および１７１のピークを同時に消失
する。生戊する化合物は共役ヒドロキシ化合物であり、
ｌ／Ｚ　２９Ｂのピーク（第５図）によって表わされる
１ｌ−ヒドロキシー１２．１４−オクタデカジエン酸（
第６図（ｅ）、図示せず）である。この化合物は、異性
体１３−ヒドロキシーＬＱ．ｌ４−オクタデカジエン酸
または１３−ヒドロキシ−１１．１４−オクタデカジエ
ン酸の一つであると思われる。これらの異性体は脱水す
ることができ、坐或する化合物は超共役オクタデカー１
１．１３．１５−　｝リエン酸（第６図（ｆ）であり、
２５４　ｎｓに吸収を示す。この化合物は、元のＤＬＣ
＝１１と重なり合っており、紫外部吸収ピークを示す（
第３図）。

ＤＬＣ−Ｉ＋について行ったＩＨ　　ＮＭＲは、ビニル
性水素、メトキシメチレンおよびメチルプロトンを示し
ており、提案した構造を支持している。

（２〉　　ピーク１１１によって表わされるＤＬＣ化合
物を、前記のようにＥ！質量スペクトル分析に付した。

この質量スペクトルパターンは、４５．　８７．８９，
　１３３．　２２７　ａ．ｕ．に大きなピークを示し、
２７３．３１５および３８０　ａ．ｕ．に小さなピーク
を示した（第７図）。ビーク１３３と２２７を高分解能
測定すると、精確な質量はそれぞれ１３３．０８８およ
び２２７．２０１となる。これらの質量は、それぞれＣ
８　Ｈ１３０３およびＣ１４Ｈ２７０２という組成に相
当する。この化合物をＤ２０で処理しても、生成するス
ペクトルに変化はないことから、分子中にＯＨ基もＮＨ
基もないことを示している。１３３と２２７の和に相当
する３６０　ａ．ｕ．に小さなピークが存在することか
ら、このピークはＤＬＣの分子イオンであることが示唆
された（第８図）。質量スペクトルデーターを更に分析
すると、数種類の仮の構造が導かれ、これは質量スペク
トル分析計におけるフラグメント化によって前記のピー
クによって表わされるフラグメントを生じることができ
る（第８図）。

ＤＬＣ−ＩＩ＋に対して考えられる構造を、第９図に示
す。これらの構造は総てヒドロキシ脂肪酸のメチルエー
テル誘導体である。示唆された化合物をＨ機合成し、そ
れらの分光学的挙動と生物活性をこれらの結果と比較す
ることによって、精確な構造を確かめることができる。

実施例３ ＤＬＣ−Ｉ＋およびＤＬＣ−ＩＩ＋の活性発明の背景の
項に記載したように、ジギタリス系化合物はＮａ，Ｋ−
ＡＴＰアーゼ活性を阻害する。第１０図に示されるよう
に，ＤＬＣ−＋ＩとＤＬＣ−ＩＩ＋は両方とも、投与量
に応じて［３Ｈ］一ウアバイン結合を阻害する。Ｎａ，
Ｋ−ＡＴＰアーゼ活性の阻害は、表−１に任意単位で表
わしてまとめられている。

表−１ 合を阻害するので、これらはジギタリス様化合物と考え
られる。したがって、本発明の内因性化合物は、前記の
ように既知の強心配糖体に起因する生物活性もＨすると
思われる。

ＤＬＣ−１１（式（１）ノ化合物）オヨびＤＬＣ−１１
１（式（Ｉ１）の化合物）は両方とも、Ｎａ，Ｋ一ＡＴ
Ｐアーゼ活性および［３Ｈ］一ウアバイン結４，図面の
ｒｒ！１＃Ａな説明 第１図は、ウシの血漿のメタノール抽出物の６７％アセ
トニトリル画分のクロマトグラフィを示し（丈施例１を
参照）、 第２図は、第１図に記載したクロマトグラフィによって
得られる画分のクロマトグラフィを示し、第３図は、分
析用逆相カラム上での第２図のピークＩＩの分離を示し
、 第４図は分析用逆相カラム上での第２図のビーク１１１
の分離を示し、 第５図は、ＤＬＣ−ＩＩ＋の質量スペクトルを示し、 第６図は、ＤＬＣ−Ｉ＋および可能なフラグメントおよ
びアイソマーを示し、　　　　　　′ｉ７図は、ＤＬＣ
−ＩＩ＋の質量スペクトルを示し、 区画の浄書（内容に変更なし） 第８図は、 ＤＬＣ−０１ のフラグメントを示し、 第９図は、 ＤＬＣ−ＩＩ＋ すなわち式（ｌ　１）の化合 物であり、 第１０図は、 ＤＬＣ−１． Ｄ　Ｌ　Ｃ−Ｉ＋および Ｄ　Ｌ　Ｃ−ＩＩ＋ の生物活性を示している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ＿１は直鎖状または分岐したＣ＿１＿〜＿６
   アルキル基であり、ｎは２〜１１の整数である）を有す
   る化合物および薬学上受容可能なその塩。 ２、Ｒ＿１が直鎖状または分岐鎖状Ｃ＿３＿〜＿６アル
   キルである、請求項１に記載の化合物。 ３、Ｒ＿１がプロピルである、請求項２に記載の化合物
   。 ４、ｎが９である、請求項１〜３のいずれか一項に記載
   の化合物。 ５、１１，１３−ジヒドロキシ−１４−オクタデカエン
   酸および薬学上受容可能なその塩。 ６、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、Ｒはアルキレンカルボキシ、アルキレンカルボ
   ニルオキシアルキル、カルボニルオキシアルキルまたは
   アルキレンオキシアルキレン−カルボニルオキシアルキ
   ル基である）を有する化合物。 ７、Ｒが基 −ＣＨ＿２−（−ＣＨ＿２−）＿１＿２−ＣＯＯＨであ
   る請求項６に記載の化合物および薬学上受容可能なその
   塩。 ８、Ｒが基 −ＣＨ＿２−ＯＣＯ（ＣＨ＿２）＿１＿１ＣＨ＿３であ
   る請求項６に記載の化合物。 ９、Ｒが基−ＯＣＯ（ＣＨ＿２）＿１＿２ＣＨ＿３であ
   る請求項６に記載の化合物。 １０、Ｒが基 ▲数式、化学式、表等があります▼ である、請求項６に記載の化合物。 １１、薬学上受容可能な担体中に、活性成分として請求
   項１〜５のいずれか一項に記載の化合物または薬学上受
   容可能なその塩を含んで成る医薬組成物。 １２、薬学上受容可能な担体中に、活性成分として請求
   項６〜１０のいずれか一項に記載の化合物の少なくとも
   １つまたは薬学上受容可能なその塩を含んで成る医薬組
   成物。 １３、薬学上受容可能な担体中に、活性成分として、請
   求項１〜５のいずれか一項に記載の少なくとも１種類の
   化合物または薬学上受容可能なその塩と請求項６〜１０
   のいずれか一項に記載の少なくとも１種類の化合物との
   混合物を含んで成る医薬組成物。 １４、経口投与もしくは非経口投与に好適な請求項１１
   〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。 １５、単位投与形態の請求項１４に記載の医薬組成物。 １５、心不全または腎不全の治療または予防用に使用す
   る請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。 １７、心機能不全または腎機能不全の治療を必要とする
   患者の心機能不全または腎機能不全を治療または予防す
   る方法であって、病理学的または生理学的条件にて存在
   する心機能不全または腎機能不全を予防または改善する
   のに有効な量の請求項１１〜１５のいずれか１項に記載
   の組成物または請求項１６に記載の化合物を患者に投与
   することから成る方法。