JPH03143435A - 免疫検定用の口腔免疫グロブリンの採集 - Google Patents
免疫検定用の口腔免疫グロブリンの採集Info
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
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- A61B10/0051—Devices for taking samples of body liquids for taking saliva or sputum samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
-
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
及」Jと艷旦
本発明は免疫学的試験の分野に関する。とくに、口腔か
ら抽出される免疫グロブリンの分析用システムを開示す
るものである。
ら抽出される免疫グロブリンの分析用システムを開示す
るものである。
口内の免疫系は、生体の全身的免疫系と相互に作用する
のみでなく、抗原−抗体反応のためのそれ自体の集中的
中枢を有する。口控内には、口外リンパ節および口内リ
ンパ集合体が存在する。口外リンパ節は、口腔粘膜、歯
肉および歯の排液に関与している。しかしながら、口内
リンパ組織の機能については、はとんどわかっていない
。
のみでなく、抗原−抗体反応のためのそれ自体の集中的
中枢を有する。口控内には、口外リンパ節および口内リ
ンパ集合体が存在する。口外リンパ節は、口腔粘膜、歯
肉および歯の排液に関与している。しかしながら、口内
リンパ組織の機能については、はとんどわかっていない
。
口外リンパ節には、口内、口蓋、頬、口唇、歯馴および
歯髄に表在的に配置されたリンパ毛細管の微細なネット
ワークを包含する。毛細管は、舌および他の構造の筋肉
内の深部ネットワークに発するもっと大きいリンパ管に
連結する。抗原は、この毛m管を通って直接口腔リンパ
系内に入るか、または度MJ胞によってくこに運搬され
る。このネッ1へワーク内に入ると、抗原は免役応答を
誘導できる。
歯髄に表在的に配置されたリンパ毛細管の微細なネット
ワークを包含する。毛細管は、舌および他の構造の筋肉
内の深部ネットワークに発するもっと大きいリンパ管に
連結する。抗原は、この毛m管を通って直接口腔リンパ
系内に入るか、または度MJ胞によってくこに運搬され
る。このネッ1へワーク内に入ると、抗原は免役応答を
誘導できる。
口内リンパ組織には一般に4種の異なる組織集合体が包
含される。ずなわら、(a)扁桃、(b)敗在性粘膜下
リンパ集合体、(c)唾液腺リンパ組織、および(dJ
FA−リンパ11′l織である。
含される。ずなわら、(a)扁桃、(b)敗在性粘膜下
リンパ集合体、(c)唾液腺リンパ組織、および(dJ
FA−リンパ11′l織である。
扁桃(口蓋扁桃および舌扁桃〉は主にB111胞および
Ti1lKiを産生じ、これら(よ一般にリンパ球およ
び形質細胞のキャップ内に含有される。抗原は通常、特
別な上皮領域を介して扁桃内に侵入し、ここで抗原はT
およびB細胞と接触して免疫ルb答を刺激できる。扁桃
内で導出的に形成される抗体型はIOGであり、以下、
[)A、IOM。
Ti1lKiを産生じ、これら(よ一般にリンパ球およ
び形質細胞のキャップ内に含有される。抗原は通常、特
別な上皮領域を介して扁桃内に侵入し、ここで抗原はT
およびB細胞と接触して免疫ルb答を刺激できる。扁桃
内で導出的に形成される抗体型はIOGであり、以下、
[)A、IOM。
raD、IgEの順rある。
敗在性粘股下リンパ系ll1J21については詳細な研
究が行われていない。これらの細胞群は組織学的に扁桃
組織と類似している。
究が行われていない。これらの細胞群は組織学的に扁桃
組織と類似している。
大唾液腺(耳F腺、顎舌腺および下舌腺〉および小@液
腺はいずれも、リンパ球と形質細胞な含有することが明
らかにされている。形質細胞の大部分はIOAを分泌し
、一部はIgGまたは10Mを分泌する。唾液腺内で合
成されたIgAは二組体構造を有する。この型の[QA
は分泌型I OA (S I GA)と呼ばれ、酢液中
の王たる免疫グロブリン成分である。
腺はいずれも、リンパ球と形質細胞な含有することが明
らかにされている。形質細胞の大部分はIOAを分泌し
、一部はIgGまたは10Mを分泌する。唾液腺内で合
成されたIgAは二組体構造を有する。この型の[QA
は分泌型I OA (S I GA)と呼ばれ、酢液中
の王たる免疫グロブリン成分である。
歯髄リンパ組織には、Tl1l胞、B細胞、いずれもが
見出される。歯髄組織が臨床的に正常な対象では、TR
I胞の方が多い。歯肉炎発症時のような感染期には、B
細胞の方が多くなることが明らかにされている。
見出される。歯髄組織が臨床的に正常な対象では、TR
I胞の方が多い。歯肉炎発症時のような感染期には、B
細胞の方が多くなることが明らかにされている。
歯髄リンパ組織には形質細胞も見出される。これらの細
胞群は一般に血管近くに存在し、IQGを侵出的に産生
する。量は少ないが、IOAおよびIQMもIJ造され
る。さらに・IT変なことにCよ、@藏組R領域の分泌
液からの免疫グロブリンは、血液中に認められる免役グ
ロブリンと直接関連づ−ることが明らかにされている(
Brandtzaegら:“Human 5aliv
a : C11nical Chemistry an
d旧crobiology ” 、 Jorma 、
0. 編、Tenovuo参照〉。
胞群は一般に血管近くに存在し、IQGを侵出的に産生
する。量は少ないが、IOAおよびIQMもIJ造され
る。さらに・IT変なことにCよ、@藏組R領域の分泌
液からの免疫グロブリンは、血液中に認められる免役グ
ロブリンと直接関連づ−ることが明らかにされている(
Brandtzaegら:“Human 5aliv
a : C11nical Chemistry an
d旧crobiology ” 、 Jorma 、
0. 編、Tenovuo参照〉。
血液および唾液の免疫グロブリンの間の関連により、ま
た唾液に独特なSIgへの存在により、疾病のスクリー
ニング手段としての試験の価値を付与するため、唾液に
ついでの抗原−抗体試験が実施されてきた。
た唾液に独特なSIgへの存在により、疾病のスクリー
ニング手段としての試験の価値を付与するため、唾液に
ついでの抗原−抗体試験が実施されてきた。
呻液腺からの唾液の採集は、分泌量が少ないこと、唾液
腺の多様な躍制学的分布、および唾液の粘度が比較的高
いことから、面倒である。大部分の採集方法は、毛10
管の使用、ミクロピペットへの吸引、パラフィンの明暗
またはポリスチレンシリンジへの吸引によるものである
。しかしながら、これらの方法では、唾液の粘度が泡を
含まない部分の回収を困難にするため、限界がある。サ
ンプル中の泡をなくすか少なくともその吊を減らプため
の他の収集方法も示唆されている。このような方法とし
ては、たとえば、口内の@液を、スポンジまたは浸透上
膜への可撓性積め物に直接吸収させる方法がある。吸収
後、吸収性初斜から遠心分離により、または吸収性材料
を圧縮して、唾液を分離することができる。吸収は一般
に、綿、ナイロンまたはポリエステルを吸収性材料とし
て使用するが、これらの材料は非特異的に蛋白質を結合
できるので、免疫グロブリンの回収率は低く、望ましく
ない。
腺の多様な躍制学的分布、および唾液の粘度が比較的高
いことから、面倒である。大部分の採集方法は、毛10
管の使用、ミクロピペットへの吸引、パラフィンの明暗
またはポリスチレンシリンジへの吸引によるものである
。しかしながら、これらの方法では、唾液の粘度が泡を
含まない部分の回収を困難にするため、限界がある。サ
ンプル中の泡をなくすか少なくともその吊を減らプため
の他の収集方法も示唆されている。このような方法とし
ては、たとえば、口内の@液を、スポンジまたは浸透上
膜への可撓性積め物に直接吸収させる方法がある。吸収
後、吸収性初斜から遠心分離により、または吸収性材料
を圧縮して、唾液を分離することができる。吸収は一般
に、綿、ナイロンまたはポリエステルを吸収性材料とし
て使用するが、これらの材料は非特異的に蛋白質を結合
できるので、免疫グロブリンの回収率は低く、望ましく
ない。
唾液サンプルの試験は、これまで広く開発されてぎたわ
けではない。収集の問題に加えて、既知の方法で収集し
たナンブルは通常、血中に認められる免疫グロブリンの
約0.01〜0.1%を含んでいるにすぎない。唾液中
の低い免疫グロブリン含量のため疾病について患者をス
クリーニングするには、さらに正確な抗原−抗体検定法
の使用が必要になる。Pcrryら(“Rationa
l Programmefor 5creenina
Travellers for Antibiod+e
s t。
けではない。収集の問題に加えて、既知の方法で収集し
たナンブルは通常、血中に認められる免疫グロブリンの
約0.01〜0.1%を含んでいるにすぎない。唾液中
の低い免疫グロブリン含量のため疾病について患者をス
クリーニングするには、さらに正確な抗原−抗体検定法
の使用が必要になる。Pcrryら(“Rationa
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Travellers for Antibiod+e
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11cpatis A Virus” 、 丁
he Lancet、 June25 、 1
988)らは、このような方法について論じ、正確さが
劣る方法で起こる誤った指示を回避するには正確な[J
G−捕捉ラジオイムノアッセイ(GACRIA)試験が
好ましいことを明らかにしている。もちろん、正確な試
験操作はど、通常、試験結果を得るのに時間と費用がか
かる。
he Lancet、 June25 、 1
988)らは、このような方法について論じ、正確さが
劣る方法で起こる誤った指示を回避するには正確な[J
G−捕捉ラジオイムノアッセイ(GACRIA)試験が
好ましいことを明らかにしている。もちろん、正確な試
験操作はど、通常、試験結果を得るのに時間と費用がか
かる。
図面の簡単な記述
第1a図はパッドおよびパッドホルダーの側面図である
。
。
第1b図はパッドおよびパッドホルダーの上面図である
。
。
第2図はパッド取り外し装置の上面図である。
第3図は、パッド保存用容器の!lでましい態様の詳細
を示す図である。
を示す図である。
第4図は、パッドを容器内に入れて保存する方法を示し
たフローチャートである。
たフローチャートである。
発明の簡単な要約
唾液の抗原−抗体分析に固有の問題を除去または著しく
低減するため、本発明は、イムノアッセイへの使用にき
わめて望ましい様式で口腔から免疫グロブリンを採集す
る方法を提供する。このh法は、高張液の使用によって
達成できる。第一の態様においては、本発明は、まず口
腔を水性溶液好ましくは高張液でリンスし、リンス後の
溶液を集め、採集溶液の免疫グロブリン含航を分析する
ものである。第二の態様においては、本発明の方法は、
予め高張液で処理した口腔免疫グロブリン採集パッドを
口腔内に入れて、免疫グロブリン試験に十分な量の口腔
免疫グロブリンを吸収させる方法に関する。リンスまた
はパッドの使用により、19」持される以上の、疾病の
スクリーニング手段としての基本的抗原−抗体試験法に
使用できる免疫グロブリンが得られる。
低減するため、本発明は、イムノアッセイへの使用にき
わめて望ましい様式で口腔から免疫グロブリンを採集す
る方法を提供する。このh法は、高張液の使用によって
達成できる。第一の態様においては、本発明は、まず口
腔を水性溶液好ましくは高張液でリンスし、リンス後の
溶液を集め、採集溶液の免疫グロブリン含航を分析する
ものである。第二の態様においては、本発明の方法は、
予め高張液で処理した口腔免疫グロブリン採集パッドを
口腔内に入れて、免疫グロブリン試験に十分な量の口腔
免疫グロブリンを吸収させる方法に関する。リンスまた
はパッドの使用により、19」持される以上の、疾病の
スクリーニング手段としての基本的抗原−抗体試験法に
使用できる免疫グロブリンが得られる。
本発明のれ偏波に(よまた、@液免疫グロブリン含量の
さらに至適な収出を与えるために、添加物を倉荷させる
こともできる。このような添加物に番よ、正しいpHを
維持するための化合物、口腔免疫グロブリンを防護する
だめの化合物、または生物の生育を閉止するための化合
物がある。このような化合物の組合ビにより、試験用サ
ンプルの調製のための操作を最小限にできる唾液サンプ
ル採取方法が提供される。
さらに至適な収出を与えるために、添加物を倉荷させる
こともできる。このような添加物に番よ、正しいpHを
維持するための化合物、口腔免疫グロブリンを防護する
だめの化合物、または生物の生育を閉止するための化合
物がある。このような化合物の組合ビにより、試験用サ
ンプルの調製のための操作を最小限にできる唾液サンプ
ル採取方法が提供される。
亀乱△韮盈皇旦A
本発明は、免疫学的試験のための口腔免疫グロブリンの
採集に関する。高濃度の免疫グロブリンを含有するサン
プルを採集するために、リンスまたは処理パッドが使用
される。口腔からの高レベルの免疫グロブリンは、1−
あたり総fo50μg以上の濃度と考えられる。このサ
ンプルは、患者の疾病をスクリーニングする手段として
利用できる基本的な免疫学的試験法に付すことができる
。
採集に関する。高濃度の免疫グロブリンを含有するサン
プルを採集するために、リンスまたは処理パッドが使用
される。口腔からの高レベルの免疫グロブリンは、1−
あたり総fo50μg以上の濃度と考えられる。このサ
ンプルは、患者の疾病をスクリーニングする手段として
利用できる基本的な免疫学的試験法に付すことができる
。
本発明のリンスとしてまたはパッド中に使用される溶液
は高張液であることが好ましい。水のような非高張液も
使用できるが、このような液を使用した場合は、分泌唾
液の免疫グロブリン産生濃度は急速に低下することが明
らかにされた。しかしながら、高張液を使用づ”ると、
その起源は完全には理解されていないが、口腔内の他の
起源から一定した免疫グ1」プリンの産生を生じる。高
張液の使用により、蒸留水を使ったときより8〜16倍
もの免疫グロブリンの増加を達成することができる。
は高張液であることが好ましい。水のような非高張液も
使用できるが、このような液を使用した場合は、分泌唾
液の免疫グロブリン産生濃度は急速に低下することが明
らかにされた。しかしながら、高張液を使用づ”ると、
その起源は完全には理解されていないが、口腔内の他の
起源から一定した免疫グ1」プリンの産生を生じる。高
張液の使用により、蒸留水を使ったときより8〜16倍
もの免疫グロブリンの増加を達成することができる。
高張液は、血液中に認められる以上のイオン強度を有す
る塩溶液である。−殻内に、本発明の高偏成の製造に使
用される塩は、約1.5〜約5重量%、好ましくは3.
5重量%のmを加える。
る塩溶液である。−殻内に、本発明の高偏成の製造に使
用される塩は、約1.5〜約5重量%、好ましくは3.
5重量%のmを加える。
高張液の製造に使用できる塩には、アルカリ金属化合物
ならびにアルカリ土類金属化合物が包含される。好まし
い塩はたとえば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸
マグネシウムおよび塩化カルシウムがある。塩化ナトリ
ウムが最も毒性が低く、最も安価で、最も口に合うこと
が明らかである。
ならびにアルカリ土類金属化合物が包含される。好まし
い塩はたとえば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸
マグネシウムおよび塩化カルシウムがある。塩化ナトリ
ウムが最も毒性が低く、最も安価で、最も口に合うこと
が明らかである。
本発明の高張液には、唾液分泌を刺激する化合物または
成分を包含させることもできる。呻液分泌を刺激できる
化合物は、酸味を示すことが明らかである。これらの化
合物には弱有機酸が含まれる。弱有機酸で好ましいもの
としては、たとえばクエン酸、アスコルビン酸および酢
酸を挙げることができる。クエン酸およびアスコルどン
酸を約0.05〜0.5型缶%のia[で使用すること
が好ましい。酢酸の場合の好ましい範囲は約0.5〜3
.0重量%である。
成分を包含させることもできる。呻液分泌を刺激できる
化合物は、酸味を示すことが明らかである。これらの化
合物には弱有機酸が含まれる。弱有機酸で好ましいもの
としては、たとえばクエン酸、アスコルビン酸および酢
酸を挙げることができる。クエン酸およびアスコルどン
酸を約0.05〜0.5型缶%のia[で使用すること
が好ましい。酢酸の場合の好ましい範囲は約0.5〜3
.0重量%である。
採集サンプル中での免疫グロブリンの分解を最小限に抑
えるためには、本発明の高張液に保存剤を添加すること
ができる。このような保存剤は、抗体分子の分解の原因
となる蛋白分解酵素活性の阻害作用がある。保存剤とし
て考慮できる化合物には、抗菌剤、抗かび剤、D菌剤、
静かび剤および酵素明害剤が包含される。好ましい態様
においては、抗かび剤として安息香酸、ソルビン酸また
はそれらの塩が使用される。静菌剤としては、高張液を
低pHに雑持できる化合物および高濃度での塩が考慮さ
れる。このような塩には、ヂメロサール(またはメルチ
オレート)、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀およ
びナトリウムアジドが包含される。他の好ましい防腐剤
としては、医薬J3よびマウスウォッシュに通常用いら
れる保存剤が包含される。たとえば、エチルアルコール
およびグルコン酸クロルヘキシジンである。他の群の好
ましい抗微生物剤には、局所用殺菌剤としてまたはマウ
スウォッシュ中に使用できる界面活性剤がある。たとえ
ば塩化ベンザルコニウムである。これらの保存剤は約0
.01〜約0.2重量%の範囲で使用するのが好ましい
。
えるためには、本発明の高張液に保存剤を添加すること
ができる。このような保存剤は、抗体分子の分解の原因
となる蛋白分解酵素活性の阻害作用がある。保存剤とし
て考慮できる化合物には、抗菌剤、抗かび剤、D菌剤、
静かび剤および酵素明害剤が包含される。好ましい態様
においては、抗かび剤として安息香酸、ソルビン酸また
はそれらの塩が使用される。静菌剤としては、高張液を
低pHに雑持できる化合物および高濃度での塩が考慮さ
れる。このような塩には、ヂメロサール(またはメルチ
オレート)、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀およ
びナトリウムアジドが包含される。他の好ましい防腐剤
としては、医薬J3よびマウスウォッシュに通常用いら
れる保存剤が包含される。たとえば、エチルアルコール
およびグルコン酸クロルヘキシジンである。他の群の好
ましい抗微生物剤には、局所用殺菌剤としてまたはマウ
スウォッシュ中に使用できる界面活性剤がある。たとえ
ば塩化ベンザルコニウムである。これらの保存剤は約0
.01〜約0.2重量%の範囲で使用するのが好ましい
。
本発明によるサンプルの採集には2つのアプローチがあ
る。第一の態様においては、i&張偏成口腔内に入れで
、激しくリンスさせる。リンスの容量は好ましくは約4
〜5m!である。容量が多すぎると抗体が希釈されてし
まい、容量が少なすぎると激しくリンスすることが難し
い。−殻内に、溶液でのリンスを長くするほどサンプル
中の免疫グロブリン含量は多くなる。疲れのような実際
上の限界により、2分以上リンスを行うことは困難であ
る。リンス時間は少なくとも1分間、好ましくは2分で
ある。リンスの完了後、サンプルを採集し、試験用に準
備する。
る。第一の態様においては、i&張偏成口腔内に入れで
、激しくリンスさせる。リンスの容量は好ましくは約4
〜5m!である。容量が多すぎると抗体が希釈されてし
まい、容量が少なすぎると激しくリンスすることが難し
い。−殻内に、溶液でのリンスを長くするほどサンプル
中の免疫グロブリン含量は多くなる。疲れのような実際
上の限界により、2分以上リンスを行うことは困難であ
る。リンス時間は少なくとも1分間、好ましくは2分で
ある。リンスの完了後、サンプルを採集し、試験用に準
備する。
好ましい口内リンス溶液の組成は次の通りである。
塩化ナトリウム
クエン酸
安息香酸ナトリウム
ソルビン酸カリウム
蒸留水
濃 型炉%
3.0%
0.2%
0.05〜0.1%
0.05 〜0.1%
0.1N水酸化ナトリウムを加えて
pHを約6.5に上昇させる
このサンプルは、さらに処理することなく、または低乾
白質結合フィルターを通過させて試験に付すことができ
る。5.0ミクロンのノイルターが好ましい。サンプル
が澄明な場合には、さらに処理することなくそのまま、
各種の免疫学的検定が実施できる。サンプルが澄明でな
い場合には、付加工程たとえば遠心分離(最低400x
o、10分間〉または濾過を行うことができる。好まし
い免疫学的検定には、M索連結イムノアブソーペントア
ッセイ(ELISA)およびウェスタンプロットアッセ
イが包含される。これらの方法は、ヒト免疫不全症ウィ
ルス(口IV)、A型肝炎ウィルス、サイトメガロウィ
ルス、風疹ウィルス、ヘルペスウィルスおよびカリシウ
ィルスに特異的な抗体の存在を決定するのにとくに有用
である。
白質結合フィルターを通過させて試験に付すことができ
る。5.0ミクロンのノイルターが好ましい。サンプル
が澄明な場合には、さらに処理することなくそのまま、
各種の免疫学的検定が実施できる。サンプルが澄明でな
い場合には、付加工程たとえば遠心分離(最低400x
o、10分間〉または濾過を行うことができる。好まし
い免疫学的検定には、M索連結イムノアブソーペントア
ッセイ(ELISA)およびウェスタンプロットアッセ
イが包含される。これらの方法は、ヒト免疫不全症ウィ
ルス(口IV)、A型肝炎ウィルス、サイトメガロウィ
ルス、風疹ウィルス、ヘルペスウィルスおよびカリシウ
ィルスに特異的な抗体の存在を決定するのにとくに有用
である。
本発明の第二の態様では、高張液の地を含有するパッド
を、口腔からの唾液および粘膜分泌液の吸収に使用する
。パッドは、口腔内に入れた場合有効な吸収材料から作
成される。プラスチックやまたセルロースのような炭水
化物材料も吸収材料として使用できるが、厚い吸収性細
組が好ましい。
を、口腔からの唾液および粘膜分泌液の吸収に使用する
。パッドは、口腔内に入れた場合有効な吸収材料から作
成される。プラスチックやまたセルロースのような炭水
化物材料も吸収材料として使用できるが、厚い吸収性細
組が好ましい。
厚い吸収性細組の例には、5chleicher an
dSchuell 、 Keene 、 New Ha
mpshire 製の製品#300がある。
dSchuell 、 Keene 、 New Ha
mpshire 製の製品#300がある。
本発明の高張液は、高張液中にパッドを浸漬して溶液の
塩をパッド中およびパッド上に吸収ざu1バッドを溶液
から取り出し、ついでパッドを乾燥させることによって
、パッドに適用される。通常、パッドを高張液中に浸漬
し、杓1dの溶液を吸収さヒる。過剰の液体を駁り落と
し、パッドを強υ1空気対流乾燥オーブン中、50℃で
2時間乾燥する。乾燥後、本発明の高張液の塩からなる
特殊処理パッドが形成される。パッドの製造に際しては
、保存剤として、塩化ベンザルコニウム、塩化アセチル
ピリジニウムまたはグルコン酸クロルヘキシジンのよう
な塩を使用するのが好ましい。
塩をパッド中およびパッド上に吸収ざu1バッドを溶液
から取り出し、ついでパッドを乾燥させることによって
、パッドに適用される。通常、パッドを高張液中に浸漬
し、杓1dの溶液を吸収さヒる。過剰の液体を駁り落と
し、パッドを強υ1空気対流乾燥オーブン中、50℃で
2時間乾燥する。乾燥後、本発明の高張液の塩からなる
特殊処理パッドが形成される。パッドの製造に際しては
、保存剤として、塩化ベンザルコニウム、塩化アセチル
ピリジニウムまたはグルコン酸クロルヘキシジンのよう
な塩を使用するのが好ましい。
パッドの製造に使用した大部分の原料は蛋白質を非特異
的に結合することができる。したがって、一部の免疫グ
ロブリンがパッドに望ましくない結合をするので、遮断
剤を用いて蛋白質がパッドに結合するのを防止すること
が望ましい。内液サンプルの採集の場合には、血液がそ
れ自身の遮断剤(71′なわちヒト血清アルブミン)を
含んでいるので、非特異的結合は通常、問題にならない
。
的に結合することができる。したがって、一部の免疫グ
ロブリンがパッドに望ましくない結合をするので、遮断
剤を用いて蛋白質がパッドに結合するのを防止すること
が望ましい。内液サンプルの採集の場合には、血液がそ
れ自身の遮断剤(71′なわちヒト血清アルブミン)を
含んでいるので、非特異的結合は通常、問題にならない
。
口内サンプルの採集に際して非特異的結合を減少させる
ためには、パッド中に導入させる高張液に遮断剤を加え
ることができる。M所剤は一般には、固体表面への他の
蛋白質の非特異的結合を防止するために使用する可溶性
蛋白質である。遮断剤として添加できる化合物には、ア
ルブミンおよびゼラチンが包含されるが、任意の水溶性
、非毒性蛋白質が、抗体分子に悪影響を与えない限り使
用できる。ウシゼラチンの使用が好ましい。一般に、遮
断剤は、本発明の高張液に約0.01〜0.2重量%の
濃度で添加される。B偏波の内容物はついで、上述のよ
うにしてパッド中に導入される。
ためには、パッド中に導入させる高張液に遮断剤を加え
ることができる。M所剤は一般には、固体表面への他の
蛋白質の非特異的結合を防止するために使用する可溶性
蛋白質である。遮断剤として添加できる化合物には、ア
ルブミンおよびゼラチンが包含されるが、任意の水溶性
、非毒性蛋白質が、抗体分子に悪影響を与えない限り使
用できる。ウシゼラチンの使用が好ましい。一般に、遮
断剤は、本発明の高張液に約0.01〜0.2重量%の
濃度で添加される。B偏波の内容物はついで、上述のよ
うにしてパッド中に導入される。
パッドの製造に使用される好ましい溶液の組成は次の通
りである。
りである。
成分
塩化ナトリウム
安息香酸ナトリウム
ソルビン酸カリウム
ウシゼラチン
蒸留水
0.1N水酸化ナトリウムを加えて
DHを約6.5に上昇さ仕る
口腔から免疫グロブリンを採取するためには、パッドを
ホルダーとともに日中に入れる。パッドおよびホルダー
は第1a図および第1b図に示す。
ホルダーとともに日中に入れる。パッドおよびホルダー
は第1a図および第1b図に示す。
パッドホルダー1u中空のプラスチック捧とすることが
でき、その一端には溝部を設ける。パッド3を溝部内に
挿入し、ホルダーを操作してパッドを口腔内、好ましく
は下部歯肉と頬の間に配置する。パッドを下部類と歯肉
の間に配dすると、歯醍リンパ組織に由来する分泌液な
らびに粘HQ下リンパ組織J5よび唾液腺リンパ組織か
らの分泌液の吸収を容易にする。パッドで歯肉と頬の間
を約1含吊 重損% 3.0% 0.1% 0.1% Q j% 0秒間はど前後にこすり、ついでその位置に約2分間保
持さじてサンプルを集めるのが好ましい。
でき、その一端には溝部を設ける。パッド3を溝部内に
挿入し、ホルダーを操作してパッドを口腔内、好ましく
は下部歯肉と頬の間に配置する。パッドを下部類と歯肉
の間に配dすると、歯醍リンパ組織に由来する分泌液な
らびに粘HQ下リンパ組織J5よび唾液腺リンパ組織か
らの分泌液の吸収を容易にする。パッドで歯肉と頬の間
を約1含吊 重損% 3.0% 0.1% 0.1% Q j% 0秒間はど前後にこすり、ついでその位置に約2分間保
持さじてサンプルを集めるのが好ましい。
サンプルが採集されたならば、パッドは、免疫学的試験
が実施できるまで、容器内に保存する。
が実施できるまで、容器内に保存する。
好ましい容器を第3図に示す。容器4は、容器の外側部
分として遠沈管5を有し、また容器の内側部分としては
遠沈管内にはめ込まれた内部管6を有する。パッドは内
部管内に置かれ、その内容部は管のキャップ7によって
確保される。
分として遠沈管5を有し、また容器の内側部分としては
遠沈管内にはめ込まれた内部管6を有する。パッドは内
部管内に置かれ、その内容部は管のキャップ7によって
確保される。
パッドを内部管中に配置させるためには、パッド取り外
し装置を使用する。この装置は第2図および第4図に示
されている。パッド取り外し装置8は、パッドホルダー
1を挿入できる開口部10を有するディスク9とするこ
とが好ましい。
し装置を使用する。この装置は第2図および第4図に示
されている。パッド取り外し装置8は、パッドホルダー
1を挿入できる開口部10を有するディスク9とするこ
とが好ましい。
パッドは内部管中に挿入され、第4図に例示された方式
で、免疫学的試験に先立って保存の準備が行われる。管
のキャップ7を容器4から外し、パッド3とホルダーを
内部管6中に挿入する。パッド取り外し装置8をホルダ
ーの上方に置く。次に、パッドホルダーをパッド取り外
し装置の開口部に貫通させ、ホルダーをその開口部を通
して引き抜くと、パッドが取り外される。パッドが内部
管中に置かれたならば、保存液11を添加する。
で、免疫学的試験に先立って保存の準備が行われる。管
のキャップ7を容器4から外し、パッド3とホルダーを
内部管6中に挿入する。パッド取り外し装置8をホルダ
ーの上方に置く。次に、パッドホルダーをパッド取り外
し装置の開口部に貫通させ、ホルダーをその開口部を通
して引き抜くと、パッドが取り外される。パッドが内部
管中に置かれたならば、保存液11を添加する。
この保存液は、抗体分子の分解の原因となる酵素活性を
阻害する作用を有し、また抗微生物剤として機能する。
阻害する作用を有し、また抗微生物剤として機能する。
保存剤として内部管中への使用が考慮される化合物には
、抗菌剤、抗かび剤、静菌剤、静かび剤および酵素阻害
剤が包含される。抗菌剤としては、グルコン酸クロルヘ
キシジンまたはチメロサールの使用が好ましい。
、抗菌剤、抗かび剤、静菌剤、静かび剤および酵素阻害
剤が包含される。抗菌剤としては、グルコン酸クロルヘ
キシジンまたはチメロサールの使用が好ましい。
内部管中に使用される保存液は、本発明の高張液中に導
入できる保存剤の1種または組合せを含有させることが
できる。一般に、保存剤は、微生物による汚染を制限し
、パッド中に吸収された免疫グロブリンに悪影響を与え
ない濃度、添加される。
入できる保存剤の1種または組合せを含有させることが
できる。一般に、保存剤は、微生物による汚染を制限し
、パッド中に吸収された免疫グロブリンに悪影響を与え
ない濃度、添加される。
内部管中に使用される保存液に(よまた、遠心分離時に
パッドからの抗体の除去を改善する界面活性剤を含有さ
せることもできる。Tween 20 (ポリオキシエ
チレンソルビタンモノオレエート)は、固体表面への抗
体の非特異的結合も防止できるので、好ましい界面活性
剤である。約0.01〜0.2%のグルコン酸クロルヘ
キシジンと0.2%〜0.7%のTween 20を組
合せて使用するのが好ましい。約0.1%のグルコン酸
りOルヘキシジンと0.5%のiween 20の組合
せがとくに好ましい。
パッドからの抗体の除去を改善する界面活性剤を含有さ
せることもできる。Tween 20 (ポリオキシエ
チレンソルビタンモノオレエート)は、固体表面への抗
体の非特異的結合も防止できるので、好ましい界面活性
剤である。約0.01〜0.2%のグルコン酸クロルヘ
キシジンと0.2%〜0.7%のTween 20を組
合せて使用するのが好ましい。約0.1%のグルコン酸
りOルヘキシジンと0.5%のiween 20の組合
せがとくに好ましい。
保存液を内部管に添加したのち、管のキャップを容器に
挿入し、内容物を密閉する。パッドはこの方式で数日間
、免疫学的試験を開始できるまで保存できる。
挿入し、内容物を密閉する。パッドはこの方式で数日間
、免疫学的試験を開始できるまで保存できる。
パッド採集システムを用いる口内サンプルの採集および
分析を単純化するために、キットを提供することもでき
る。キットには、処理パッドと、口内サンプルの採集お
よびその免疫学的分析用サンプルの調製のための器具を
包含できる。キットの好ましい態様においては、キット
は、処理パッド3およびパッドホルダー1;内tj5管
6、外部管5およびキャップ7を有する容器4;パッド
取り外し装置8;ならび保存剤11を包含する。
分析を単純化するために、キットを提供することもでき
る。キットには、処理パッドと、口内サンプルの採集お
よびその免疫学的分析用サンプルの調製のための器具を
包含できる。キットの好ましい態様においては、キット
は、処理パッド3およびパッドホルダー1;内tj5管
6、外部管5およびキャップ7を有する容器4;パッド
取り外し装置8;ならび保存剤11を包含する。
以下の実施例は、本発明の高張液および本発明の溶液を
導入さピたパッドの効果を示すものである。
導入さピたパッドの効果を示すものである。
例1
リンス時間の関数としての口腔免疫グロブリンの力価
本発明の好ましい口内リンス溶液を調製する(pllは
約6.0に調整する)。正常対象(すなわち口1v抗体
に対して内情陰性)13PAのサンプルについて総免疫
グロブリン含嘘を分析する。5例では10秒間、4例で
は30秒間、また4例では60秒間リンスを行う。免疫
グロブリンの測定にはドットプロットイムノアッヒイを
使用する。
約6.0に調整する)。正常対象(すなわち口1v抗体
に対して内情陰性)13PAのサンプルについて総免疫
グロブリン含嘘を分析する。5例では10秒間、4例で
は30秒間、また4例では60秒間リンスを行う。免疫
グロブリンの測定にはドットプロットイムノアッヒイを
使用する。
各リンスサンプルの希釈系列を作成し、1μlのドツト
をニトロセルローの試験ストリップ上に置く。イムノア
ッセイ後に内服で見えるドツトを生じた1ItIIi釈
が、非希釈リンス中の大凧の抗体濃度を示す。
をニトロセルローの試験ストリップ上に置く。イムノア
ッセイ後に内服で見えるドツトを生じた1ItIIi釈
が、非希釈リンス中の大凧の抗体濃度を示す。
結果は次の通りである。
サンプル
番−
リンス時間
(秒)
リンス中の抗体
力価(μg/−)
この試験は、リンス時間が長いほど総免疫グロブリン濃
度は増大することを示している。
度は増大することを示している。
汲ヱ
口IV抗体のウェスタンプロット試験
血清、前唾液およびリンスの比較
15例の対象からなる群(7例;(Ih清陽性、8VA
:血清陰性)について、本発明の好ましい口内リンス溶
液(pH6、○に調整)を用いて試験を行う。本発明の
口内リンス溶液を、ウェスタンプロット法を用いた血清
、全唾液およびリンスについての特異的抗体レベルの測
定によって比較する。
:血清陰性)について、本発明の好ましい口内リンス溶
液(pH6、○に調整)を用いて試験を行う。本発明の
口内リンス溶液を、ウェスタンプロット法を用いた血清
、全唾液およびリンスについての特異的抗体レベルの測
定によって比較する。
この方法は、AIDSウィルスの主成分(ずなわら、核
、エンベロープ、ポリメラーゼ)に対する抗体反応の相
対強度を示すものである。以下の結果が得られている。
、エンベロープ、ポリメラーゼ)に対する抗体反応の相
対強度を示すものである。以下の結果が得られている。
166 血液
唾液
ノンス
167 血液
唾液
リンス
(−〉
(−〉
患者
サンプル
血液
唾液
リンス
血液
唾液
リンス
血液
唾液
リンス
血液
唾液
リンス
血液
唾液
リンス
血液
唾液
リンス
血清状態
(−←)
〈+〉
〈+〉
(→−)
相対反応強度1
(−〉
〈−〉
3+
2+
4ト
4+
+/−
4+
〈−〉
3+
2+
4+
2+
→−/−
2+
サンプル
血液
唾液
リンス
血液
唾液
リンス
内液
唾液
リンス
血液
唾液
リンス
血液
唾液
リンス
血液
唾液
リンス
内済状態
(←)
(+)
〈−)
〈+〉
相対反応強度9
4+
3+
3 +
3+
4 +
4+
〈−)
(−〉
(−〉
(−〉
〈−)
1 +
1 +
1 +
血液
唾液
(−〉
(−〉
リンス
1相対反応強度は次のように定義される(−)ウェスタ
ンプロットで可視バンドなしトン−2個以下のきわめて
弱いバンド 1千 2個以上の可視バンド、少なくとも1個は明瞭 は明瞭 例2のデータはAIDS@者の111v抗体の検出に際
し、リンス法による唾液の収集は、血液の場合と同等で
、全唾液の場合より有効であることを示している。AI
DSでない患者が偽陽性の結果を示すことはない。
ンプロットで可視バンドなしトン−2個以下のきわめて
弱いバンド 1千 2個以上の可視バンド、少なくとも1個は明瞭 は明瞭 例2のデータはAIDS@者の111v抗体の検出に際
し、リンス法による唾液の収集は、血液の場合と同等で
、全唾液の場合より有効であることを示している。AI
DSでない患者が偽陽性の結果を示すことはない。
鮫旦
口内の抗HI V抗体の安定性−水と口内リンス溶液の
比較 AIDS患老の口内由来抗体の安定性を、蒸留水による
リンスおよび好ましいリンス溶液(pHを約6.0に調
整)とで得られたサンプルをインキュベートしで比較す
る。両リンス液について抗体を37℃で保存したのちに
、ウェスタンプロットを実施する。以下の結果は、好ま
しいリンス溶液が、水リンスの場合より安定なサンプル
を与えることを示している。
比較 AIDS患老の口内由来抗体の安定性を、蒸留水による
リンスおよび好ましいリンス溶液(pHを約6.0に調
整)とで得られたサンプルをインキュベートしで比較す
る。両リンス液について抗体を37℃で保存したのちに
、ウェスタンプロットを実施する。以下の結果は、好ま
しいリンス溶液が、水リンスの場合より安定なサンプル
を与えることを示している。
4 2+ 5+14
+/−54− 4+ 9相対反応強度は次のように定義される〈−〉ウェスタ
ンプロットで可視バンドなし+/−2個以下のきわめて
弱いバンド は明瞭 3十 傘二f 3個以上の可視バント、 少なくとも2個 は明瞭 弱い 例4 目IV抗体に対するELISA試験デー試験デー9内清
ンスおよび口内パッド溶出液の比較本発明の好ましい口
内リンス溶液は同様に調製し、pl+を約6.0に調整
する。パッドは本発明の好ましいパッド調製溶液を用い
て作成する。12例の患者(12例血清陽性、3例血清
陰性)について、血清、リンス由来口腔免疫グロブリン
およびパッド由来口腔免疫グロブリン中の特異的抗体レ
ベルを比較する。l−11V抗体の検出には市販のEI
ISAテストを使用する。この試験法はAIDSウィル
スに対する抗体の相対力価を示す。
+/−54− 4+ 9相対反応強度は次のように定義される〈−〉ウェスタ
ンプロットで可視バンドなし+/−2個以下のきわめて
弱いバンド は明瞭 3十 傘二f 3個以上の可視バント、 少なくとも2個 は明瞭 弱い 例4 目IV抗体に対するELISA試験デー試験デー9内清
ンスおよび口内パッド溶出液の比較本発明の好ましい口
内リンス溶液は同様に調製し、pl+を約6.0に調整
する。パッドは本発明の好ましいパッド調製溶液を用い
て作成する。12例の患者(12例血清陽性、3例血清
陰性)について、血清、リンス由来口腔免疫グロブリン
およびパッド由来口腔免疫グロブリン中の特異的抗体レ
ベルを比較する。l−11V抗体の検出には市販のEI
ISAテストを使用する。この試験法はAIDSウィル
スに対する抗体の相対力価を示す。
結果は、
大部の例で、
パッドがリンスよりも高い
抗体濃度を生じることを示している。
サンプル
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血 状
ELISへの結果
(0,0、値)
(数が大きい
ほど い
(+)
(ト)
(−〉
(+)
(−〉
〉 2.0
〉 2.0
〉 2.0
〉 2. O
1、735
〉2. O
0、077
0、050
0、051
〉 2.0
1、 423
〉 2. O
O,088
0,051
0、060
0,751
0、061
0,052
サンプル
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血清状態
(+)
(ト)
(+)
(+〉
(+)
ELISAの結果
(0,0,値)
(数が大きい
ほど強い)
〉2.0
1、 537
〉2. O
O,062
0、045
0,046
〉 2.0
〉2.0
1、 981
〉2.0
1、 742
〉 2.0
〉 2.0
1、 431
〉 2.0
〉 2.0
1、 368
〉 2.0
ELISAの結果
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
血液
リンス
パッド
(+〉
(+〉
(+)
(+)
〉2.0
1、 492
1、 825
〉2. O
O,294
0、740
〉2.0
〉2.0
〉 2.0
〉2.0
〉2.0
〉2.0
61!!性血液試験結果は0.226を越える場合であ
る。
る。
**陽性リンス試験結果は0.241を越える場合であ
る。
る。
10陽性パツド試験結果は、0.351を越える場合で
ある。
ある。
このサンプルは血清で偽陽性、リンスおよびパッドで芯
の陰性反応を示す。血清での偽陽性反応は陰性ウェスタ
ンプロットおよびさらにELIS八試験へ行って確認さ
れている。
の陰性反応を示す。血清での偽陽性反応は陰性ウェスタ
ンプロットおよびさらにELIS八試験へ行って確認さ
れている。
例5
0内免疫グロブリンの安定性の比較−保存剤の存在下ま
たは非存在下、37℃で保存したパッドについて パッドは本発明の好ましいパッド調製溶液を用いて作成
する。パッドを蒸留水溶液中および保存溶液中に保存し
た場合の、パッドの免疫グロブリンの安定性をLI I
V陽性患者の試験で比較する。
たは非存在下、37℃で保存したパッドについて パッドは本発明の好ましいパッド調製溶液を用いて作成
する。パッドを蒸留水溶液中および保存溶液中に保存し
た場合の、パッドの免疫グロブリンの安定性をLI I
V陽性患者の試験で比較する。
患者の口内の各側の下#i部と歯肉の間に2種のパッド
を入れて試験する。=一方のパッドはゼラチン遮断剤で
処理する。他方のパッドは本発明の好ましいパッド調y
l溶液で処理する。愚老の口からパッドを取り出したの
ら、ピラチン処理パッドに採集された物質は0.3%T
ween 20溶液0.5dで溶出する。好ましいパッ
ド調製溶液で処理したパッドに採集された物質は0.2
%グルコン酸クロルヘキシジンと0,3%Tween
20を含む溶液0.5dで溶出する。各パッドからの抽
出液を5つのサンプルに分割する。各パッドからの1つ
のサンプルは直ちに凍結して、1゛O」時サンプルとラ
ベルする。他のサンプルは37℃で保存し、1゜3.7
および14日後にE L I S Aで試験する。
を入れて試験する。=一方のパッドはゼラチン遮断剤で
処理する。他方のパッドは本発明の好ましいパッド調y
l溶液で処理する。愚老の口からパッドを取り出したの
ら、ピラチン処理パッドに採集された物質は0.3%T
ween 20溶液0.5dで溶出する。好ましいパッ
ド調製溶液で処理したパッドに採集された物質は0.2
%グルコン酸クロルヘキシジンと0,3%Tween
20を含む溶液0.5dで溶出する。各パッドからの抽
出液を5つのサンプルに分割する。各パッドからの1つ
のサンプルは直ちに凍結して、1゛O」時サンプルとラ
ベルする。他のサンプルは37℃で保存し、1゜3.7
および14日後にE L I S Aで試験する。
ついでrOJ時サンプルを解凍し、ELISAで試験す
る。以下に示す結果は、保存溶液を使用した場合、口内
免疫グロブリンの保存性が改善されることを示している
。
る。以下に示す結果は、保存溶液を使用した場合、口内
免疫グロブリンの保存性が改善されることを示している
。
37℃での 保存液添加 保存液非添加サンプル
(0,0,) サンプル(0,D○ 1.91
1.70 1 1.87 1.61 3 1.71 1.17 7 1.70 1.02 14 1.52 0.674゜ 以上、本発明の多くの態様を開示したが、これらの態様
は本発明を限定するものではないことを理解すべきであ
る。たとえば、本発明の高張液には多くの成分を導入す
る真とができる。開示された成分は、口内サンプル中の
免疫グロブリン濃度を上昇さけることができる特定の例
である。もちろん、すべての可能な成分を網羅して挙げ
ること不可能であり、本発明の意図する範囲内において
代替物を期待することができる。
(0,0,) サンプル(0,D○ 1.91
1.70 1 1.87 1.61 3 1.71 1.17 7 1.70 1.02 14 1.52 0.674゜ 以上、本発明の多くの態様を開示したが、これらの態様
は本発明を限定するものではないことを理解すべきであ
る。たとえば、本発明の高張液には多くの成分を導入す
る真とができる。開示された成分は、口内サンプル中の
免疫グロブリン濃度を上昇さけることができる特定の例
である。もちろん、すべての可能な成分を網羅して挙げ
ること不可能であり、本発明の意図する範囲内において
代替物を期待することができる。
図面の簡単な説明
第1a図および第1b図は、本発明のパッドおよびパッ
ドホルダーそれぞれの側面図および上面図である。
ドホルダーそれぞれの側面図および上面図である。
第2図はパッド取り外し装置の上面図である。
第3図はパッド保存用容器の好ましい態様の詳細を示す
図である。
図である。
第4図はパッドを容器に入れて保存する方法をボしたフ
ローチ1!−トである。
ローチ1!−トである。
Claims (14)
- (1)免疫学的試験用の免疫グロブリンを採集する方法
において、(a)パッドを、高濃度の免疫グロブリンの
回収に有効な濃度の高張液中に浸漬し、(b)パッドを
乾燥し、(c)口腔内の免疫グロブリンを採取するため
に乾燥パッドを口腔内に挿入し、(d)口腔からパッド
を取り出し、ついで(e)採集された免疫グロブリンを
免疫学的試験による分析のためにパッドから溶出させる
各工程からなる方法 - (2)高張液はアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属
塩を含有する請求項(1)記載の方法 - (3)高張液は遮断剤を含有する請求項(1)記載の方
法 - (4)遮断剤はアルブミンまたはゼラチンである請求項
(3)記載の方法 - (5)高張液は保存剤を含有する請求項(1)記載の方
法 - (6)パッドは口腔から取り出した場合、容器中に保存
する請求項(1)記載の方法 - (7)容器には保存液を含有する請求項(6)記載の方
法 - (8)保存液はグルコン酸クロルヘキシジンを含有する
請求項(1)記載の方法 - (9)高張液は唾液腺刺激剤を含有する請求項(1)記
載の方法 - (10)吸着材料および高張液の塩からなり、高張液の
塩は高濃度の免疫グロブリンの回収に有効な濃度含有さ
せる口腔免疫グロブリン採集パッド - (11)さらに遮断剤を含む請求項(10)記載の口腔
免疫グロブリン採集パッド - (12)高張液はアルカリ金属塩またはアルカリ土類金
属塩を含有する請求項(11)記載の口腔免疫グロブリ
ン採集パッド - (13)パッドは炭水化物材料から作られる請求項(1
0)記載の口腔免疫グロブリン採集パッド - (14)高張液で処理したパッド、パッドホルダー、パ
ッド保存用容器、パッド取り外し装置および保存防腐液
からなる免疫学的試験キット
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