JPH03113357A - 電気泳動用緩衝液及びキャピラリー電気泳動法 - Google Patents
電気泳動用緩衝液及びキャピラリー電気泳動法Info
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- JPH03113357A JPH03113357A JP1252807A JP25280789A JPH03113357A JP H03113357 A JPH03113357 A JP H03113357A JP 1252807 A JP1252807 A JP 1252807A JP 25280789 A JP25280789 A JP 25280789A JP H03113357 A JPH03113357 A JP H03113357A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野]
本発明は核酸などの分離分析法に関わり、特に、このよ
うな物質の性質が接近した成分の分離に好適なキャピラ
リー電気泳動法に関する。
うな物質の性質が接近した成分の分離に好適なキャピラ
リー電気泳動法に関する。
[従来の技術]
従来、核酸などの分離分析にはアガロース電気泳動法や
ポリアクリルアミドゲル電気泳動法等が広く用いられて
きた。 しかし、これらの方法ではゲルは基本的には使
い捨てであり、 ゲルの1lII製に手間がかかるため
特にシステムを自動化させる上で不利である。
ポリアクリルアミドゲル電気泳動法等が広く用いられて
きた。 しかし、これらの方法ではゲルは基本的には使
い捨てであり、 ゲルの1lII製に手間がかかるため
特にシステムを自動化させる上で不利である。
また近年、キャピラリー電気泳動を核酸あるいはタンパ
ク質などの分離分析に応用しようとする試みがなされて
きた。特に核酸への応用については B、 L、 K&
rgerら、 あるいは R,G、Brownleeら
のグループによって報告がなされている。
ク質などの分離分析に応用しようとする試みがなされて
きた。特に核酸への応用については B、 L、 K&
rgerら、 あるいは R,G、Brownleeら
のグループによって報告がなされている。
キャピラリー電気泳動のうち無担体で行うものとして、
jlargerらはキャピラリーとしてフユーズドシリ
力を用い泳動用Mvt麺、として7M尿素と0、1%ド
デシル硫酸ナトリウムを含有するトリス−はう酸yim
液を用いてDNA!!+lI限酵素断片の混合物を分離
している(Joarnal of Chromatog
raphy。
jlargerらはキャピラリーとしてフユーズドシリ
力を用い泳動用Mvt麺、として7M尿素と0、1%ド
デシル硫酸ナトリウムを含有するトリス−はう酸yim
液を用いてDNA!!+lI限酵素断片の混合物を分離
している(Joarnal of Chromatog
raphy。
458(198g)323−333>、 Brovn
leeらはキャピラリーとしてフユーズドシリ力を用い
泳動用M衝液として4M尿素と20i+Mセチルトリメ
チルアンモニウムブロマイドを含有するN&■* PO
j−Nh* Ba Oマバッファーを用いてDNA制限
酵素断片の混合物を分離している(Journal o
f Chromatography、 458(198
Jl)303−312)、 Lかし、両者ともDNA
の分離の機構がはっきりしておらず、前者においては由
来不明のピークが現れることがあり、また、サンプルの
前処理およびインジェクトの微妙な条件のずれによって
分離の再現が困難になるという欠点がある。
leeらはキャピラリーとしてフユーズドシリ力を用い
泳動用M衝液として4M尿素と20i+Mセチルトリメ
チルアンモニウムブロマイドを含有するN&■* PO
j−Nh* Ba Oマバッファーを用いてDNA制限
酵素断片の混合物を分離している(Journal o
f Chromatography、 458(198
Jl)303−312)、 Lかし、両者ともDNA
の分離の機構がはっきりしておらず、前者においては由
来不明のピークが現れることがあり、また、サンプルの
前処理およびインジェクトの微妙な条件のずれによって
分離の再現が困難になるという欠点がある。
後者においては十分な分離が得られていない。
ゲルを担体としてキャピラリーに充填して行うキャピラ
リー電気泳動としては Brownleeらが3X7.
5ICのポリアクリルアミドゲルを充填したキャピラリ
ーを用いてDNA制限酵素断片の混合物を分離している
(Journal of Chromatograph
y。
リー電気泳動としては Brownleeらが3X7.
5ICのポリアクリルアミドゲルを充填したキャピラリ
ーを用いてDNA制限酵素断片の混合物を分離している
(Journal of Chromatograph
y。
458(1988)303−312)、 Khrge
rらは同様にd(A)−s−asのオリゴヌクレオチド
の混合物を分離している(Pro、Natl、Acad
、Sci、USA、 85(1988)9660−96
63)。
rらは同様にd(A)−s−asのオリゴヌクレオチド
の混合物を分離している(Pro、Natl、Acad
、Sci、USA、 85(1988)9660−96
63)。
しかし、ポリアクリルアミドゲルを用いるキャピラリー
電気泳動においてはキャピラリー内径が小さいためキャ
ピラリー内に再現性よくポリアクリルアミドゲルを形成
させることができず混合物の分離の再現性も悪い、ゲル
を担体として用いるもう一つの方法としてアガロースゲ
ルを用いる方法があるが(Brownleeら、Jou
rnal of Chromato−graphy、
458(1988)303−312>、 アガロース
ゲルは物理的に弱く電気泳動中に流れ出てしまう、 ま
た、電気泳動中に発熱による温度上昇によってゲルが融
解しキャピラリーから流れ出てしまう、 これらのこと
からアガロースゲルを充填したキャピラリーを用いて電
気泳動を行うと再現性よく混合物の分離を行うことがで
きない。
電気泳動においてはキャピラリー内径が小さいためキャ
ピラリー内に再現性よくポリアクリルアミドゲルを形成
させることができず混合物の分離の再現性も悪い、ゲル
を担体として用いるもう一つの方法としてアガロースゲ
ルを用いる方法があるが(Brownleeら、Jou
rnal of Chromato−graphy、
458(1988)303−312>、 アガロース
ゲルは物理的に弱く電気泳動中に流れ出てしまう、 ま
た、電気泳動中に発熱による温度上昇によってゲルが融
解しキャピラリーから流れ出てしまう、 これらのこと
からアガロースゲルを充填したキャピラリーを用いて電
気泳動を行うと再現性よく混合物の分離を行うことがで
きない。
〔発明が解決しよう−とする問題点]
核酸等の分離分析を行おうとする場合にアガロース電気
泳動及びポリアク、リルアミドゲル電気泳動ではゲル調
製の手間と自動化の困難さが問題となっており、核酸等
をキャピラリー電気泳動で分層分析しようとする際には
ゲルを担体として用いない場合であってもまた。ゲルを
担体として用いた場合であっても再現性よく十分な分離
が行えないということが問題となっている。
泳動及びポリアク、リルアミドゲル電気泳動ではゲル調
製の手間と自動化の困難さが問題となっており、核酸等
をキャピラリー電気泳動で分層分析しようとする際には
ゲルを担体として用いない場合であってもまた。ゲルを
担体として用いた場合であっても再現性よく十分な分離
が行えないということが問題となっている。
C発明の目的コ
本発明の目的はキャピラリー電気泳動に有用な改良され
たアガロース系ポリマーを含有する電気泳動用MR液を
提供することである。
たアガロース系ポリマーを含有する電気泳動用MR液を
提供することである。
本発明の他の目的はアガロース電気泳動及び、ポリアク
リルアミドゲル電気泳動及び、無担体あるいはゲルを担
体として用いるキャピラリー電気泳動にかわってゲル化
していないアガロースを含有する電気泳動用[i液を用
いてキャピラリー電気泳動を行うことによってゲルの調
製を行わす連続して、再現性よく、特にDNAの分離分
析を行うことである。
リルアミドゲル電気泳動及び、無担体あるいはゲルを担
体として用いるキャピラリー電気泳動にかわってゲル化
していないアガロースを含有する電気泳動用[i液を用
いてキャピラリー電気泳動を行うことによってゲルの調
製を行わす連続して、再現性よく、特にDNAの分離分
析を行うことである。
c問題点を解決するための手段および作用]上記の問題
点を解決するな、め鋭意検討を行った結果、本発明に至
った。すなわち1本発明はキャピラリー電気泳動を用い
てDNA等の分離分析を行う際にキャピラリー内にアガ
ロース系あるいはポリアクリルアミド系のゲルを充填せ
ず、電気泳動用緩衝液にゲル化していないアガロース系
ポリマーを添加することを特徴とするキャピラリー電気
泳動法である。
点を解決するな、め鋭意検討を行った結果、本発明に至
った。すなわち1本発明はキャピラリー電気泳動を用い
てDNA等の分離分析を行う際にキャピラリー内にアガ
ロース系あるいはポリアクリルアミド系のゲルを充填せ
ず、電気泳動用緩衝液にゲル化していないアガロース系
ポリマーを添加することを特徴とするキャピラリー電気
泳動法である。
キャピラリー電気泳動のための試料としては持に限定さ
れることはないが、核酸、あるいはタンパク質等の高分
子を含む溶液が最も分離分析に適している。
れることはないが、核酸、あるいはタンパク質等の高分
子を含む溶液が最も分離分析に適している。
本発明では、電気泳動用M新液に添加されるアガロース
系ポリマーとしてゲル化温度が低いいわゆる低融点アガ
ロースが好ましいが使用時にゲル化しないアガロース系
ポリマーであればいがなるものであっても使用すること
ができる。
系ポリマーとしてゲル化温度が低いいわゆる低融点アガ
ロースが好ましいが使用時にゲル化しないアガロース系
ポリマーであればいがなるものであっても使用すること
ができる。
琥た、電気泳動用緩衝液には5DS(ドデシル[酸ナト
リウム)等の界面活性剤を0.01〜0.5%添加する
ことが好ましいが添加しなくてもよい。
リウム)等の界面活性剤を0.01〜0.5%添加する
ことが好ましいが添加しなくてもよい。
また、を気泳動用M街液は例えば0.1Mのトリス(ヒ
ドロキシメチル)アミノメタン及びほう酸をM衝刑とし
て含有するもの等が用いられるが分離分析対象となる試
料に応じて種々の緩衝剤を用いることができる。
ドロキシメチル)アミノメタン及びほう酸をM衝刑とし
て含有するもの等が用いられるが分離分析対象となる試
料に応じて種々の緩衝剤を用いることができる。
また、キャピラリーの材質はフユーズドシリ力が好まし
いがこれに限定されない。
いがこれに限定されない。
キャピラリーの内径は10〜200μmが好ましいがこ
れに限定されない、 キャピラリーの長さは50mm以
上が好ましいがこれに限定されない。
れに限定されない、 キャピラリーの長さは50mm以
上が好ましいがこれに限定されない。
また、電源としては最大出力電圧30kV程度のものが
好ましいがこれより小さいものであってもよく、これよ
り大きなものであってらよい、 また、電流は直流が好
Jしいがパルス状に発生するしのでもよくまた、これら
に限定されない。
好ましいがこれより小さいものであってもよく、これよ
り大きなものであってらよい、 また、電流は直流が好
Jしいがパルス状に発生するしのでもよくまた、これら
に限定されない。
また、検出器としては例えばUV検出器あるいは蛍光検
出器が好嘘しいが電気化学検出器等であってもよくまた
。 これらに限定されない。
出器が好嘘しいが電気化学検出器等であってもよくまた
。 これらに限定されない。
また、記録計は保持時間、 ピーク高、 ピーク面積計
算等のデータ処理機能1持つものが好ましいがこれに限
定されない。
算等のデータ処理機能1持つものが好ましいがこれに限
定されない。
上記のアガロース系ポリマーを含有する電気泳動用緩衝
液を満たしたキャピラリー内に端部から試料を導入し、
キャピラリーの両端をアガロース系ポリマーを含有する
電気泳動用M新液を入れたそれぞれ別の電極槽に浸す、
この二つの電極槽にそれぞれpt電極を浸し両極に電圧
を印加する。
液を満たしたキャピラリー内に端部から試料を導入し、
キャピラリーの両端をアガロース系ポリマーを含有する
電気泳動用M新液を入れたそれぞれ別の電極槽に浸す、
この二つの電極槽にそれぞれpt電極を浸し両極に電圧
を印加する。
キャピラリー両端に電圧を印加することによってキャピ
ラリー内部のアガロース系ポリマーを含む電気泳動用I
fR液に流れが生じ、溶出された試料の成分を上記の検
出器によって検出する。検出器からの電気的な信号は記
録計に伝達されそこで処理される。
ラリー内部のアガロース系ポリマーを含む電気泳動用I
fR液に流れが生じ、溶出された試料の成分を上記の検
出器によって検出する。検出器からの電気的な信号は記
録計に伝達されそこで処理される。
[実施例]
以下の実施例により本発明のさらに詳細な説明を行うが
、本発明はこれらの実m例によって同等限定されるもの
ではない。
、本発明はこれらの実m例によって同等限定されるもの
ではない。
1、 1E気泳動用M衝液の調製
801の蒸留水に0.5gの低融点アガロースを加え、
よく攬はんした後加熱し溶解させ放冷f&、 これに
1.21gのトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン
、93履gのエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム及び
20ffigのドデシルWXMナトリウムを溶解させた
。 これにさらにほう酸を加え、 pHを8.1に!
I!l整し、蒸留水を加えて正確に100鳳1にした。
よく攬はんした後加熱し溶解させ放冷f&、 これに
1.21gのトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン
、93履gのエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム及び
20ffigのドデシルWXMナトリウムを溶解させた
。 これにさらにほう酸を加え、 pHを8.1に!
I!l整し、蒸留水を加えて正確に100鳳1にした。
2 φx174ファージDNAの制i酵素(FiInc
u )処理断片混合物のキャピラリー電気泳動第1図に
示したシステムを、用いてキャピラリー電気泳動を行っ
た。すなわち、蛍光検出器(1)はRF−540型(島
津製作所製、励起波長3001111、検出波長590
nsに設定)、高電圧電源(2)はF[ER−30PO
,16−9l型(検定プレシジョンデバイセズ製)、記
録計(3)はC−R4^型(島津製作月1、電極(4)
はPt1i (0,5mmφ−30■履)、を補槽(5
)は1.51のサンプリングチューブを用いた。
u )処理断片混合物のキャピラリー電気泳動第1図に
示したシステムを、用いてキャピラリー電気泳動を行っ
た。すなわち、蛍光検出器(1)はRF−540型(島
津製作所製、励起波長3001111、検出波長590
nsに設定)、高電圧電源(2)はF[ER−30PO
,16−9l型(検定プレシジョンデバイセズ製)、記
録計(3)はC−R4^型(島津製作月1、電極(4)
はPt1i (0,5mmφ−30■履)、を補槽(5
)は1.51のサンプリングチューブを用いた。
キャピラリー(6)は5cientific Glas
sEnglneerlng社のフ二一ズドシリ力キャピ
ラリーの内径75μ■のものを使用した。キャピラリー
の全長は450■であり土掻側がら300ss+の所が
ら2■の幅で彼覆を剥し、蛍光検出器に取り付けた。こ
のキャピラリー内には使用時に11己の低融点アガロー
スを含有する電気泳動用緩衝液を満たし1両端はそれぞ
れ低融点アガロースを含有する電気泳動用緩衝液を入れ
た+極@電li&槽及び−極部電極槽に浸しておいた、
このとき二つの電極槽内のIII液の液面の高さが同じ
になるように調整しておいた。
sEnglneerlng社のフ二一ズドシリ力キャピ
ラリーの内径75μ■のものを使用した。キャピラリー
の全長は450■であり土掻側がら300ss+の所が
ら2■の幅で彼覆を剥し、蛍光検出器に取り付けた。こ
のキャピラリー内には使用時に11己の低融点アガロー
スを含有する電気泳動用緩衝液を満たし1両端はそれぞ
れ低融点アガロースを含有する電気泳動用緩衝液を入れ
た+極@電li&槽及び−極部電極槽に浸しておいた、
このとき二つの電極槽内のIII液の液面の高さが同じ
になるように調整しておいた。
!lCf1であるφx174ファージDNAの制限酵素
(旧JICI+)処理断片混合物は、重版の6のにツボ
ンジーン社製マーカー5(φx174/旧nc■dig
est 79〜1057塩基対、 0.5.u g/−
1) )をそのまま使用した。試料のキャピラリーへの
導入はキャピラリーの十極側の端部を+側電極檜がら引
き上げ試flWI液中に10秒1:Tfiして行った。
(旧JICI+)処理断片混合物は、重版の6のにツボ
ンジーン社製マーカー5(φx174/旧nc■dig
est 79〜1057塩基対、 0.5.u g/−
1) )をそのまま使用した。試料のキャピラリーへの
導入はキャピラリーの十極側の端部を+側電極檜がら引
き上げ試flWI液中に10秒1:Tfiして行った。
このとき試料の液面の高さは電極槽内のI!衝新液液
面より50■−高くなるように調整して行った。
面より50■−高くなるように調整して行った。
試料をキャピラリー内に導入した後、キャピラリーの端
部を電極槽に戻しキャピラリーの両端に7.5kVの直
流電圧を印加した。電流値は12〜15μ人となり、キ
ャピラリー内には十掻鍔がち−wI側に向かってM新液
の流れが生じ、試料であるDNAの各制限酵素処理断片
は分離され、溶出されて蛍光検出器で検出された。
部を電極槽に戻しキャピラリーの両端に7.5kVの直
流電圧を印加した。電流値は12〜15μ人となり、キ
ャピラリー内には十掻鍔がち−wI側に向かってM新液
の流れが生じ、試料であるDNAの各制限酵素処理断片
は分離され、溶出されて蛍光検出器で検出された。
この結果を第2a図に示す、この結果がら本発明の方法
によってφx174ファージDNAの[1G11素処理
断片混合物が良好に分離され検出されていることがbか
る。
によってφx174ファージDNAの[1G11素処理
断片混合物が良好に分離され検出されていることがbか
る。
この後続けて同様な手順によってφχ174ファージD
NAの制限酵素(I(lncII、)処理断片混合物の
キャピラリー電気泳動を30分間隔で合計10回行った
。第2b図に10回目の結果を示す。
NAの制限酵素(I(lncII、)処理断片混合物の
キャピラリー電気泳動を30分間隔で合計10回行った
。第2b図に10回目の結果を示す。
この結果から、キャピラリーの劣化が起こらず。
再現性よ< DNAの制限酵素処理断片混合物が分離さ
れ検出されていることがわかる。
れ検出されていることがわかる。
以下余白
[発明の効果]
本発明の方法によれば、キャピラリー内にアガロース系
ポリマーを含有する電気泳動用緩衝液が絶えず供給され
るため再現性よく、シかも良好に分離分析を行うことが
できる。また本発明によれば、キャピラリ一端部から導
入された試料はすべてアガロース系ポリマーを含有する
・電気泳動用緩衝液によって洗い流されてしまうため洗
浄あるいはキャピラリー内のゲルの交換等の操作を行わ
ずに連続して分析することができる。
ポリマーを含有する電気泳動用緩衝液が絶えず供給され
るため再現性よく、シかも良好に分離分析を行うことが
できる。また本発明によれば、キャピラリ一端部から導
入された試料はすべてアガロース系ポリマーを含有する
・電気泳動用緩衝液によって洗い流されてしまうため洗
浄あるいはキャピラリー内のゲルの交換等の操作を行わ
ずに連続して分析することができる。
第1図は本発明方法を実施するための装置構成を示す図
、第2図は本発明方法による分離分析の結果(データ)
を示す図である。 1・・・蛍光検出器、3・・・記録計、5・・・電極槽
、6・・・キャピラリー 第1図
、第2図は本発明方法による分離分析の結果(データ)
を示す図である。 1・・・蛍光検出器、3・・・記録計、5・・・電極槽
、6・・・キャピラリー 第1図
Claims (2)
- (1)ゲル化していないアガロース系ポリマーを含有す
ることを特徴とする電気泳動用緩衝液。 - (2)緩衝液として請求項第1項の緩衝液を用いること
を特徴とするキャピラリー電気泳動法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1252807A JPH0743351B2 (ja) | 1989-09-28 | 1989-09-28 | 電気泳動用緩衝液及びキャピラリー電気泳動法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1252807A JPH0743351B2 (ja) | 1989-09-28 | 1989-09-28 | 電気泳動用緩衝液及びキャピラリー電気泳動法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH03113357A true JPH03113357A (ja) | 1991-05-14 |
JPH0743351B2 JPH0743351B2 (ja) | 1995-05-15 |
Family
ID=17242494
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1252807A Expired - Fee Related JPH0743351B2 (ja) | 1989-09-28 | 1989-09-28 | 電気泳動用緩衝液及びキャピラリー電気泳動法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0743351B2 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5147517A (en) * | 1991-03-26 | 1992-09-15 | Shimadzu Corporation | Method of capillary electrophoresis |
EP0733900A2 (en) * | 1995-03-22 | 1996-09-25 | Analis S.A. | Capillary electrophoresis detection and/or analysis method and unit |
WO1997007395A1 (en) * | 1995-08-21 | 1997-02-27 | Trevigen, Inc. | Separation medium for capillary electrophoresis |
JP4793608B2 (ja) * | 2009-12-28 | 2011-10-12 | 有限会社アイツォー研究所 | テープ送出装置及びテープ貼付器 |
-
1989
- 1989-09-28 JP JP1252807A patent/JPH0743351B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5147517A (en) * | 1991-03-26 | 1992-09-15 | Shimadzu Corporation | Method of capillary electrophoresis |
EP0505590A1 (en) * | 1991-03-26 | 1992-09-30 | Shimadzu Corporation | Method of capillary electrophoresis and apparatus therefor |
EP0733900A2 (en) * | 1995-03-22 | 1996-09-25 | Analis S.A. | Capillary electrophoresis detection and/or analysis method and unit |
EP0733900A3 (en) * | 1995-03-22 | 1998-12-23 | Analis S.A. | Capillary electrophoresis detection and/or analysis method and unit |
WO1997007395A1 (en) * | 1995-08-21 | 1997-02-27 | Trevigen, Inc. | Separation medium for capillary electrophoresis |
JP4793608B2 (ja) * | 2009-12-28 | 2011-10-12 | 有限会社アイツォー研究所 | テープ送出装置及びテープ貼付器 |
US8579001B2 (en) | 2009-12-28 | 2013-11-12 | Eizo Sakamoto | Tape feeding device and tape applicator |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0743351B2 (ja) | 1995-05-15 |
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Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
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