JPH0297393A

JPH0297393A - エイコサペンタエン酸を含むリン脂質組成物の海洋微生物による製造法

Info

Publication number: JPH0297393A
Application number: JP24742088A
Authority: JP
Inventors: Kazuyoshi Yazawa; 一良矢澤; Keiko Araki; 荒木　恵子; Chikako Ishikawa; 石川　千夏子; Sei Kondo; 近藤　聖
Original assignee: Sagami Chemical Research Institute; Tosoh Corp
Current assignee: Sagami Chemical Research Institute; Tosoh Corp
Priority date: 1988-10-03
Filing date: 1988-10-03
Publication date: 1990-04-09

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（イ）産業上の利用分野本発明は、海洋微生物からエイコサペンタエン酸（以下
、ＥＰＡという）を含有するリン脂質組成物を製造する
方法に関するものである。該リン脂質は食品、化粧品、
医薬品、農業、水産、化成品などの分野において有用で
ある。

（ｒｌ）従来の技術リン脂質は、高等動植物をはじめ各種生物中に含まれ、
主として細胞膜の構成物として生体中で重要な働きをし
ている。このうち現在、工業的規模で生産されているリ
ン脂質は、大豆リン脂質と卵黄リン脂質である。これら
は天然界面活性剤であり、この乳化作用、分散作用、湿
潤作用などを利用して食品、化粧品、医薬品などの分野
で使用されている。しかしながら、かかる大豆および卵
黄リン脂質をはじめとする高等動植物を起源とするリン
脂質は、その構成脂肪酸が炭素数１６〜１８の脂肪酸を
主成分とするものであり、炭素数２０であるＥＰＡを含
むリン脂質が工業的に単離された例は見当たらない。又
、海産クロレラ等がらＥＰＡ含有リン脂質を分画する方
法も提案されている。しかしながら、クロレラからのリ
ン脂質の分画方法はその増殖速度が微生物や細菌に比べ
て極めて遅く、到底工業的に採用し得るものではない。

（ハ）発明が解決しようとする問題点本発明の目的は、ＥＰＡを含有する脂質組成物を工業的
に効率良く、短時間で、容易に得ることのできる製造方
法を提供することにある。

（ニ）問題点を解決するための手段本発明者らは、上記の目的に合った製造法を見出すため
に鋭意研究の結果、海洋微生物の脂質について、次のよ
うな知見を得た。即ち、■海洋微生物の総脂質含有量は
乾物換算で６〜１２％と高く、そのうち７０〜９０％が
リン脂質であること、■総脂質の脂肪酸組成を見てもＥ
ＰＡが２５〜４０％と高いこと、■総脂質を溶剤分別と
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、リン脂質
、遊離脂肪酸、キノン、その他の成分に分画すると、リ
ン脂質中の総脂肪酸に占めるＥＰＡの割合が３０％以上
になることである。さらに本海洋微生物の増殖速度は、
通常の微生物や、クロレラ等藻類に比べて著しく早く、
多量の菌体を極めて短時間のうちに得ることができる。

本発明は、以上の知見に基づいて完成されたもので、海
洋微生物の総脂質を溶剤分別およびカラムクロマトグラ
フィーを組み合わせて分画することを特徴とするＥＰＡ
を含有するリン脂質組成物の製造法である。

本発明で使用できる海洋微生物は、ＥＰＡ含量さえ高い
ものであれば特に属、種あるいは株などを限定するもの
ではないが、通常は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ）属、アルテロモナス（八１　ｔｅｒｏｍｏｎ
ａｓ）属又はシーワネラ（Ｓｈｅｗａｎｅｌ　Ｉａ）属
などに分類される海洋微生物を用いる。これらの微生物
については本発明者らがＥＰＡ生産用微生物として先に
提案したヨーロッパ特許出願番号８７３１１３７２．４
号にその性質等について詳細に記載されている。上記の
シュードモナスに属する微生物の例として、シュードモ
ナス・ビュートＳＣ１？Ｃ−２１８１、ＳＣＲＣ−−２
２０１、ＳＣＲＣ−−２２７１、ＳＣＲＣ−−２３４１
ＳＣＲＣ−２４５１、ＳＣＲＣ−−２６４２、ＳＣＲＣ
−−２７９２、ＳＣＲＣ−−２８７８、ＳＣＲＣ−３０
１１、ＳＣＲＣ−−３０２２を挙げることができる。

アルテロモナスに属する微生物の例として、アルテロモ
ナス・ビュートリファシェンス（Δ１　ｔｅｒ。

ｍｏｎａｓ　　ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣＲＣ−
２８７Ｌ　及びアルテロモナス・ピユートリファシェン
ス・サブスピーシズ・サガミファシエンス（Ａｌｔｅｒ
ｏｍｏｎａｓｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ　　５ｕｂｓｐｅ
ｃｉｅｓ　　ｓａｇａｍｉｆａｃｉｅｎｓ）ＳＣＲＣ−
１１６２，アルテロモナス・ピユートリファシェンス（
Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ　　　ｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ
　　ＳＣＲＣ−２８７１等を挙げることができる。

アルテロモナスに属する微生物のアルテロモナス０ルー
メンサス（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ　　ｌｕｍｅｎｓａ
ｓ）　と同定・命名したＳＣ１？Ｃ−６４４４、および
アルテロモナス・キシロ−サス（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａ
ｓ　　７と同定・命名したＳＣＲＣ−２５１７を挙げる
ことができる。

シーワネラに属する微生物の例として、シーワネラ・ピ
ユートリファシェンス（Ｓｈｅｗａｎｅｌ　ｌａ烈復至
ハ劇且匣）　ＳＣＲＣ−２８７４を挙げることができる
。

本発明の実施に当たっては、海洋微生物を常法により例
えば培地で培養して細胞を得、これを遠心分離法などで
集め、洗浄、乾燥して海洋微生物粉末を得る。この際の
培地としては次の第１表に示す組成の培地を調整した。

第１表肉エキス　　　　　　　１％ペプトン　　　　　　　１％ＮａＣ１０，５％水道水　　　　　　　ｐＨ７，０この海洋微生物粉末から、有機溶剤を用いて脂質抽出を
行い、脱溶剤後、アセトン分画を行い、アセトンに不溶
な物質を集めれば、リン脂質の粗分画物が得られる。有
機溶剤としては、リン脂質を溶解する通常の溶剤を単独
又は混合して用いればよく、例えば、クロロホルム−メ
タノール系、ｎ−ヘキサン−エタノール−水系、クロロ
ホルムヘキサン系、クロロホルム−エーテル系、クロロ
ホルム−エタノール系などが挙げられる。

また、分別に用いられる溶剤は、通常、脂質の分別に用
いられる有機溶剤を用いることができる。

例エバ、アセトン、酢酸、クロロホルム、エーテルなど
が挙げられる。また、溶剤にＭｇＣ１ｚ＋カルシウムな
どを添加し、その共存下、分別を行ってもよく、必要に
応じて加熱、冷却等を行っても良い。

さらに、得られたすべての両分をカラムクロマトグラフ
ィーで再分画し、リン脂質の両分を集めると高純度のリ
ン脂質組成物が高収率で得られる。

カラムクロマトグラフィーとしては、例えば、疎水性ク
ロマトグラフィー、シリカ系クロマトグラフィー、トヨ
パール（商品名　東ソー（株）製）等のポリマーゲル、
シリカゲルにオクタデシル基を結合させたものなどを用
いることができる。

このようにして得られるリン脂質は、ＴＬＣ（薄層クロ
マトグラフィー）でその組成を分析し、さらに常法によ
りケン化分解、メチルエステル化してＧＬＣ（ガスクロ
マトグラフィー）で分析して構成脂肪酸組成を求めるこ
とができる。

上述の方法により得られるリン脂質組成物は、ホスファ
チジルエタノールアミン、リゾホスファチジルエタノー
ルアミン、ホスファチジルグリセロールなどであり、ま
たその構成脂肪酸はＥＰＡ、オレイン酸、パルミトレイ
ン酸、パルチミン酸、ミリスチン酸などであった。

実施例１海洋微生物（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　　ｕｔｒｅｆ
ａｃｉｅｎｓ　ＳＣＲＣ２８７８ｉ神奈川県相模湾から
分離された株）を肉エキス１％、ペプトン１％、ＮａＣ
１０，５％を含有しｐＨ７に調整した培地中で培養し、
細胞を遠心分離して集め、洗浄、乾燥して海洋微生物粉
末を得た。海洋微生物の乾燥粉末１００ｇをクロロホル
ム：メタノール−２＝１混合溶剤で抽出し、８ｇの抽出
脂質を得た。この脱溶剤後の総脂質にアセトン４００　
ｍ　ｌを加え、冷却しながら攪拌を行い、糖脂質、キノ
ンを分別をし濾過によりアセトン不溶分を回収した。得
られたアセトン不溶分をクロロホルムに溶解し、次にこ
の溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、
クロロホルム、クロロホルム：メタノール＝２　：　１
、クロロホルム：メタノール＝１：１およびメタノール
で順次展開した。得られた各フラクションをＴＬＣでチ
エツクし、目的とするリン脂質のフラクションをいくつ
か見出し、それらを回収し、脱溶剤したところ約７ｇの
リン脂質組成物が得られた。得られたリン脂質の組成は
ＴＬＣ分析の結果、ホスファチジルグリセロールおよび
ホスファチジルエタノールアミンが主成分であり、また
構成脂肪酸はＥＰＡ、オレイン酸、パルミチン酸、パル
ミトレイン酸などであった。

実施例２海洋微生物Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　ｕｔｒｅｆａｃ
ｉｅｎｓ　ＳＣＲＣ２１８１；（東京湾から分離された
株）を培地中で培養して細胞を得、遠心集菌、洗浄、乾
燥して海洋微生物粉末を得た。該海洋微生物粉末１００
ｇをｎ−ヘキサン；エタノール；水＝２　：　ｏ、ｃ＋
：　０．１混合溶剤で抽出し、１２ｇの総脂質を得た。

該総脂質にアセトン５　Ｑ　Ｏｍ　１を加え、冷却下に
攪拌して、糖脂質、キノンを分別し、濾過してアセトン
不溶分を回収した。得られたアセトン不溶分をブタノー
ルに溶解し、展開溶媒としてブタノール、酢酸および水
を用い、実施例１と同様にシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーで分画した。各フラクションをＴＬＣでチエツ
クしながら、リン脂質含有画分を集め、リン脂質組成物
１０．５ｇを得た。

該リン脂質組成物はホスファチジルグリセロールおよび
ホスファチジルエタノールアミンを主成分とし、また構
成脂肪酸はＥＰＡ、オレイン酸、バルミチン酸、パルミ
トレイン酸、ミリスチン酸などであった。

（ｆｌ　　発明の効果本発明の効果は次のようである。

（１）溶剤分別およびカラムクロマトグラフィーを組み
合わせる方法により海洋微生物脂質からＥＰＡを含むリ
ン脂質を効率良（、短時間で且つ容易に単離、精製する
ことが可能となった。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）海洋微生物の総脂質を溶剤分別およびカラムクロ
マトグラフィーを組み合わせて分画することを特徴とす
るエイコサペンタエン酸を含むリン脂質組成物の製造法
。
（２）海洋微生物がシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ）属、アルテロモナス（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ
）属又はシーワネラ（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）属である
特許請求の範囲第（１）項記載の製造法。
（３）前記シュードモナス属微生物がシュードモナス・
ピュートリファシエンス（￥Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ￥
￥ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ￥）ＳＣＲＣ−２１８１、
ＳＣＲＣ−２２０１、ＳＣＲＣ−２２７１、ＳＣＲＣ−
２３４１、ＳＣＲＣ−２４５１、ＳＣＲＣ−２６４２、
ＳＣＲＣ−２７９２、ＳＣＲＣ−２８７８、ＳＣＲＣ−
３０１１又はＳＣＲＣ−３０２２である特許請求の範囲
第（２）項に記載の微生物。
（４）前記アルテロモナス属微生物がアルテロモナス、
ピュートリファシエンス（￥Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ￥
￥ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ￥）ＳＣＲＣ−２８７１、
アルテロモナス・ピュートリファシエンス・サブスピー
シズ・サガミファシエンス（￥Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ
￥￥ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ￥￥ｓｕｂｓｐｅｃｉｅ
ｓ￥￥ｓａｇａｍｉｆａｃｉｅｎｓ￥）ＳＣＲＣ−１１
６２、アルテロモナス・ルーメンサス（￥Ａｌｔｅｒｏ
ｍｏｎａｓ￥￥ｌｕｍｅｎｓａｓ￥）ＳＣＲＣ−６４４
４、又はアルテロモナス・キシローサス（￥Ａｌｔｅｒ
ｏｍｏｎａｓ￥￥ｘｙｌｏｓｕｓ￥）ＳＣＲＣ−２５１
７である特許請求の範囲第（２）項に記載の微生物。
（５）前記シーワネラ属微生物がシーワネラ・ピュート
リファシエンス（￥Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ￥￥ｐｕｔｒ
ｅｆａｃｉｅｎｓ￥）ＳＣＲＣ−２８７４である特許請
求の範囲第（２）項に記載の微生物。
（６）構成リン脂質がホスファチジルグリセロール、ホ
スファチジルエタノールアミンを主成分とするものであ
る特許請求の範囲第（１）項記載の製造法。