JPH029399A - イエルシニア・エンテロコリチカの検出 - Google Patents
イエルシニア・エンテロコリチカの検出Info
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明はイエルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｃｒｓｌ
ｎｌａ ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｅａ）属に属する細
菌の検出に関し、特に核酸プローブおよびその組成物を
イエルシニア・エンテロコリチカの特異的検出のための
それらの使用法と共に提供する。
ｎｌａ ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｅａ）属に属する細
菌の検出に関し、特に核酸プローブおよびその組成物を
イエルシニア・エンテロコリチカの特異的検出のための
それらの使用法と共に提供する。
［従来の技術］
本明細書中に使用する“イエルシニア・エンテロコリチ
カ（Ｙｃ＋５ｉｎｌａ ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ
）−という言葉はバーシーズ・マニュアル・オブφシス
ティマチイック争バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｃｙ ’
ｓＭａｎｕａｌ ｏｆ ５ｙｓｔｃａ＋ａｔｉｃ Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ） Ｃクリーブ（Ｎ、 Ｒ，Ｋ
ｒｉｃｇ）編、 １９８４．４９８−５０６．ウィリ
アムス・アンド・ウイルキンス（Ｗｉｌｌｉａａ＋ｓ
＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ））によってそれなりに分類された
細菌を指す。イエルシニアー、１ンテロコリチカ（Ｙ、
ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ）の検出はいろいろな
医療組織および公衆衛生組織にとって重要である。イエ
ルシニア・エンテロコリチカ感染症は風邪のような症状
から胃腸結腸炎に及ぶさまざまな症状の原因となる。調
理中あるいは未調理の肉は、たびたび、これら生物体か
らのヒト・食物−伝播性感染症の原因となるが、ルーチ
ンスクリーニング（ｒｏｕｔｉｎｅ ｓｅｒｏａｎｌｎ
ｇ＞は時間の浪費であり且つ困難である。
カ（Ｙｃ＋５ｉｎｌａ ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ
）−という言葉はバーシーズ・マニュアル・オブφシス
ティマチイック争バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｃｙ ’
ｓＭａｎｕａｌ ｏｆ ５ｙｓｔｃａ＋ａｔｉｃ Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ） Ｃクリーブ（Ｎ、 Ｒ，Ｋ
ｒｉｃｇ）編、 １９８４．４９８−５０６．ウィリ
アムス・アンド・ウイルキンス（Ｗｉｌｌｉａａ＋ｓ
＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ））によってそれなりに分類された
細菌を指す。イエルシニアー、１ンテロコリチカ（Ｙ、
ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ）の検出はいろいろな
医療組織および公衆衛生組織にとって重要である。イエ
ルシニア・エンテロコリチカ感染症は風邪のような症状
から胃腸結腸炎に及ぶさまざまな症状の原因となる。調
理中あるいは未調理の肉は、たびたび、これら生物体か
らのヒト・食物−伝播性感染症の原因となるが、ルーチ
ンスクリーニング（ｒｏｕｔｉｎｅ ｓｅｒｏａｎｌｎ
ｇ＞は時間の浪費であり且つ困難である。
それ故、本発明の目的は、イエルシニア・エンテロコリ
チカを迅速に検出できる新規のアッセイシステムを提供
することにあり、かつこのアッセイシステムは環境、食
物および医療試料に通常利用できる。
チカを迅速に検出できる新規のアッセイシステムを提供
することにあり、かつこのアッセイシステムは環境、食
物および医療試料に通常利用できる。
実験室用の標準方法およびＦ、Ｄ、Ａ、（ＦＤＡ／ＢＡ
Ｍバクテリオロジカル・アナリティカル・マニュアル（
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｌｃａｌ Ａｎａｌｙｔｌｅａ
ｌ Ｍａｎｕａｌ）。
Ｍバクテリオロジカル・アナリティカル・マニュアル（
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｌｃａｌ Ａｎａｌｙｔｌｅａ
ｌ Ｍａｎｕａｌ）。
第１１章、第６版、 １９８４年、 １９８７年９月増
補、アソシエイション・オブφオフィシャル・アナリテ
イカル・ケミスト（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏ
ｆ’ｆ１ｃｉａｌＡｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓ
ｔ） ）推薦の方法に基づいて、外界あるいは日常的な
検体（例えばミルク）中のイエルシニア・エンテロコリ
チカの存在は、これら生物体の増殖に好適な条件下、適
切に調製した試料を微生物用培地で培養することにより
検出するのが常であっった。そうした後、得られたコロ
ニーの形態学的および生化学的特徴をその代表として調
べるが、その操作は通常、試料取得後４８時間で始めら
れ、不都合が生じた場合には完了するまで１こ１２〜１
７日間かかる。
補、アソシエイション・オブφオフィシャル・アナリテ
イカル・ケミスト（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏ
ｆ’ｆ１ｃｉａｌＡｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓ
ｔ） ）推薦の方法に基づいて、外界あるいは日常的な
検体（例えばミルク）中のイエルシニア・エンテロコリ
チカの存在は、これら生物体の増殖に好適な条件下、適
切に調製した試料を微生物用培地で培養することにより
検出するのが常であっった。そうした後、得られたコロ
ニーの形態学的および生化学的特徴をその代表として調
べるが、その操作は通常、試料取得後４８時間で始めら
れ、不都合が生じた場合には完了するまで１こ１２〜１
７日間かかる。
さらに、本発明の他の目的は、慣用的培養技術に関連し
た不都合を避けること、およびイエルシニア・エンテロ
コリチカを検出するために核酸プローブを使用すること
にある。
た不都合を避けること、およびイエルシニア・エンテロ
コリチカを検出するために核酸プローブを使用すること
にある。
さらに、本発明の他の目的は、正常なアッセイ条件下で
プローブに近づきやすくした標的領域とハイブリッド形
成することができるプローブを提供することにある。
プローブに近づきやすくした標的領域とハイブリッド形
成することができるプローブを提供することにある。
コーホ（Ｋｏｈｎｅ）らは、１９６８．バイオフィジカ
ル・ジャーナル（Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎ
ａｌ）、 ８ ：１１０４−１１１８の中で、ｒＲＮＡ
配列に対するプローブを調製するための１つの方法につ
いて議論しているが、それらはイエルシニア・エンテロ
コリチカに特異的なプローブを作成するために必要な教
えを提供してはいない。
ル・ジャーナル（Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎ
ａｌ）、 ８ ：１１０４−１１１８の中で、ｒＲＮＡ
配列に対するプローブを調製するための１つの方法につ
いて議論しているが、それらはイエルシニア・エンテロ
コリチカに特異的なプローブを作成するために必要な教
えを提供してはいない。
バセ＜ Ｐａｃｅ）およびカムブベル（Ｃａｍｐｂｃｌ
ｌ） 。
ｌ） 。
１９７１、 ジャーナル・オブ・バクテリオロジー（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｃｒｌｏｌｏｇｙ）は、
異なった細菌種から得たリポソームリボ核酸の相同性お
よびその相同性のレベルを定量するためのハイブリッド
形成法について議論している。同様にソギン（Ｓｏｇｉ
ｎ）およびウオエセ（Ｗｏｅｓｅ）、 １９７２． ジ
ャーナル・オブ拳モレギュラー・エボリューション（Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆ’ Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕ
ｔｉｏｎ） 、 ｌ ： １７３−１８４は、系統間の
関連性を評価するためにいろいろなリポソームＲＮＡ分
子の一次構造上の特徴を利用する理論的および実用的態
様について議論している。
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｃｒｌｏｌｏｇｙ）は、
異なった細菌種から得たリポソームリボ核酸の相同性お
よびその相同性のレベルを定量するためのハイブリッド
形成法について議論している。同様にソギン（Ｓｏｇｉ
ｎ）およびウオエセ（Ｗｏｅｓｅ）、 １９７２． ジ
ャーナル・オブ拳モレギュラー・エボリューション（Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆ’ Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｅｖｏｌｕ
ｔｉｏｎ） 、 ｌ ： １７３−１８４は、系統間の
関連性を評価するためにいろいろなリポソームＲＮＡ分
子の一次構造上の特徴を利用する理論的および実用的態
様について議論している。
フォックス（Ｆａｘ）、ベクマン（Ｐａｅｈｍａｎ）お
よびウオエセ（Ｗｏｃｓｃ） 、 １９７７、インター
ナショナル・ジャーナル・オブ・システマテイツク・バ
タテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ）は、原核生物の系統に関する研究方法とし
ての１６８リポソームＲＮＡの比較日録について議論し
ている。しかしながら、これらの参考文献もイエルシニ
ア・エンテロコリチカに関してはコーホ（Ｋｏｈｎｅ）
の教えの欠陥を救援することはできない。
よびウオエセ（Ｗｏｃｓｃ） 、 １９７７、インター
ナショナル・ジャーナル・オブ・システマテイツク・バ
タテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ）は、原核生物の系統に関する研究方法とし
ての１６８リポソームＲＮＡの比較日録について議論し
ている。しかしながら、これらの参考文献もイエルシニ
ア・エンテロコリチカに関してはコーホ（Ｋｏｈｎｅ）
の教えの欠陥を救援することはできない。
リポソームは遺伝情報を細胞内蛋白質、即ち生命を構成
・触媒する主要成分に翻訳する唯一の既知手段として働
くため、リポソームはすべての生物体にとって非常に重
要なものである。この重要性はすべての細胞がリポソー
ムをもつという結果に明確に現われている。
・触媒する主要成分に翻訳する唯一の既知手段として働
くため、リポソームはすべての生物体にとって非常に重
要なものである。この重要性はすべての細胞がリポソー
ムをもつという結果に明確に現われている。
リポソームは３種類の別個のＲＮＡ分子からなり、これ
らは少なくとも大腸菌では５Ｓ、１６Ｓ。
らは少なくとも大腸菌では５Ｓ、１６Ｓ。
および２３Ｓ ｒＲＮＡと呼ばれている。これらの名
称は歴史的で沈降速度から決定したＲＮＡ分子の大きさ
と関連している。しかしながら、実際−ヒ、それらは生
物体間で大きさが変化する。それにもか＼わらず、５Ｓ
、１６Ｓおよび２３８ ｒＲＮＡは任邑の細菌内の相
同ＲＮＡ分子の総称名として一役的に使われており、こ
の慣習をこの明細書中でも続行させる。
称は歴史的で沈降速度から決定したＲＮＡ分子の大きさ
と関連している。しかしながら、実際−ヒ、それらは生
物体間で大きさが変化する。それにもか＼わらず、５Ｓ
、１６Ｓおよび２３８ ｒＲＮＡは任邑の細菌内の相
同ＲＮＡ分子の総称名として一役的に使われており、こ
の慣習をこの明細書中でも続行させる。
ハイブリッド形成とは、先決の反応条件下で、部分的あ
るいは完全に相補的な２つの一本鎖核酸が互いにアンチ
パラレル（ａｎｔｆｐａｒａｌ １ｅｔ）型になり特異
的かつ安定な水素結合で二本鎖核酸を形成することを許
す作用として伝統的に理解されている。個々のハイブリ
ッド形成条件の厳重さは、プローブ／標的二重らせんの
塩基組成によって規定されるのと同様に、２つの核酸間
の誤対合の程度とその配列によっても規定される。また
、この厳正さは、ハイブリッド形成用溶液中に存在する
イオン種の濃度およびそのタイプ、使用した変性剤のタ
イプおよびその濃度、ならびに／またはハイブリッド形
成時の温度によっても支配される。−般的に、ハイブリ
ッド形成条件がより厳重になる場合に安定なハイブリッ
ドを形成しようとするならば、より長いプローブが好適
である。当然の結果として、ハイブリッド形成を起こす
条件（例えば、実行するアッセイのタイプに基づく）の
厳重さは、使用する好適なプローブに大きく左右される
であろう。そのような関連性は当業者によく理解されて
おり、当業者によって簡単に処理されうるであろう。プ
ローブの長さに依存する一般的事柄として、当業者はこ
＼でいう厳重な条件とは約０．９Ｍの塩溶液巾約３５〜
６５℃を意味していることを理解している。
るいは完全に相補的な２つの一本鎖核酸が互いにアンチ
パラレル（ａｎｔｆｐａｒａｌ １ｅｔ）型になり特異
的かつ安定な水素結合で二本鎖核酸を形成することを許
す作用として伝統的に理解されている。個々のハイブリ
ッド形成条件の厳重さは、プローブ／標的二重らせんの
塩基組成によって規定されるのと同様に、２つの核酸間
の誤対合の程度とその配列によっても規定される。また
、この厳正さは、ハイブリッド形成用溶液中に存在する
イオン種の濃度およびそのタイプ、使用した変性剤のタ
イプおよびその濃度、ならびに／またはハイブリッド形
成時の温度によっても支配される。−般的に、ハイブリ
ッド形成条件がより厳重になる場合に安定なハイブリッ
ドを形成しようとするならば、より長いプローブが好適
である。当然の結果として、ハイブリッド形成を起こす
条件（例えば、実行するアッセイのタイプに基づく）の
厳重さは、使用する好適なプローブに大きく左右される
であろう。そのような関連性は当業者によく理解されて
おり、当業者によって簡単に処理されうるであろう。プ
ローブの長さに依存する一般的事柄として、当業者はこ
＼でいう厳重な条件とは約０．９Ｍの塩溶液巾約３５〜
６５℃を意味していることを理解している。
ここで使用するプローブとは、ヌクレオチド配列を設計
したりあるいは生物より選択したりすることによって、
先決の限定厳重条件下で標的核酸配列と特異的（即ち、
優先的）にハイブリッド形成できる特異的なヌクレオチ
ド配列を念汀する、合成あるいは生物によって作製した
核酸（ＤＮＡあるいはＲＮＡ）を指す。
したりあるいは生物より選択したりすることによって、
先決の限定厳重条件下で標的核酸配列と特異的（即ち、
優先的）にハイブリッド形成できる特異的なヌクレオチ
ド配列を念汀する、合成あるいは生物によって作製した
核酸（ＤＮＡあるいはＲＮＡ）を指す。
標的核酸配列とは、個々のプローブが優先的にハイブリ
ッド形成できる核酸配列である。
ッド形成できる核酸配列である。
それらを最初に使用する場合に必要なさらなる他のＵ効
な規定を以下の本文中に示す。ここに列挙した参考文献
は参照として完全に合体させる。
な規定を以下の本文中に示す。ここに列挙した参考文献
は参照として完全に合体させる。
［発明の概要コ
本発明のさまざまな原理および態様に従って、本発明は
特定のハイブリッド形成条件下で、イエルシニア・エン
テロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｌａｃｎｔｅｒｏｃｏｌｉ
ｔｉｃａ）のリポソームＲＮＡ （ｒＲＮＡ）分子を検
出できるが、同条件下で試験試料中に存在するであろう
別の関連細菌のｒＲＮＡを検出できない核酸プローブあ
るいはプローブのセットを提供する。
特定のハイブリッド形成条件下で、イエルシニア・エン
テロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｌａｃｎｔｅｒｏｃｏｌｉ
ｔｉｃａ）のリポソームＲＮＡ （ｒＲＮＡ）分子を検
出できるが、同条件下で試験試料中に存在するであろう
別の関連細菌のｒＲＮＡを検出できない核酸プローブあ
るいはプローブのセットを提供する。
また、本発明はこれらプローブを利用するためのアッセ
イシステム、即ち前述したプローブの望ましい行動を強
化しうるアッセイシステムの全体構成の特徴を示してい
る。本発明のアッセイシステムはイエルシニア・エンテ
ロコリチカを検出するために最近開発された本発明以外
の有用な手段と比べて、次のような高い実行能力を示す
点で白−利である： ａ）悪疫の増大；即ち、最近開発されたｈ゛用な方法よ
り高頻度でｌラーえられた試料中のイエルシニア・エン
テロコリチカを検出する能力；ｂ）高価でない試薬の使
用によるアッセイ費用の価値ある削減の可能性および仕
事ｎの削減Ｃ）生化学上密接に関連した種、イエルシニ
ア・インテルメジア（Ｙｅｒｓｉｎｌａ ｉｎｔｅｒｍ
ｅｄｉａ）が共在する場合でさえイエルシニア・エンテ
ロコリチカを同定する正確さ； ｄ）試験をそれ以上増殖させる必要のない培養細胞で行
なうことからくる結果の早さ。従って、本発明の好適な
試験は、結果が得られるまでに２〜４日かかるだけであ
るという点で有利である。
イシステム、即ち前述したプローブの望ましい行動を強
化しうるアッセイシステムの全体構成の特徴を示してい
る。本発明のアッセイシステムはイエルシニア・エンテ
ロコリチカを検出するために最近開発された本発明以外
の有用な手段と比べて、次のような高い実行能力を示す
点で白−利である： ａ）悪疫の増大；即ち、最近開発されたｈ゛用な方法よ
り高頻度でｌラーえられた試料中のイエルシニア・エン
テロコリチカを検出する能力；ｂ）高価でない試薬の使
用によるアッセイ費用の価値ある削減の可能性および仕
事ｎの削減Ｃ）生化学上密接に関連した種、イエルシニ
ア・インテルメジア（Ｙｅｒｓｉｎｌａ ｉｎｔｅｒｍ
ｅｄｉａ）が共在する場合でさえイエルシニア・エンテ
ロコリチカを同定する正確さ； ｄ）試験をそれ以上増殖させる必要のない培養細胞で行
なうことからくる結果の早さ。従って、本発明の好適な
試験は、結果が得られるまでに２〜４日かかるだけであ
るという点で有利である。
ｒＲＮＡに対する本発明のプローブから直接得られた他
の利益として、検出したｒＲＮＡが細胞集団の重要成分
を構成するという事実が明らかになった。細胞内のリポ
ソーム含有量は変化するが活発に増殖中のイエルシニア
細胞では、細胞あたり ５．ＯＸ ＩＯＥ ＋ ４以上
のリポソーム、故に（リポソーム中に１：１：１の電比
で存在する）ｒＲＮＡをそれぞれ５．ＯＸ ＬＯＥ ＋
４コピー含む。
の利益として、検出したｒＲＮＡが細胞集団の重要成分
を構成するという事実が明らかになった。細胞内のリポ
ソーム含有量は変化するが活発に増殖中のイエルシニア
細胞では、細胞あたり ５．ＯＸ ＩＯＥ ＋ ４以上
のリポソーム、故に（リポソーム中に１：１：１の電比
で存在する）ｒＲＮＡをそれぞれ５．ＯＸ ＬＯＥ ＋
４コピー含む。
これに対して遺伝子あるいはそれより得たＲＮＡ転写物
のようなｒＲＮＡ以外の細胞内標的分子としての可能性
を秘めた他の分子はｒＲＮＡよりもずっと低量しか存在
しないためあまり理想的ではない。
のようなｒＲＮＡ以外の細胞内標的分子としての可能性
を秘めた他の分子はｒＲＮＡよりもずっと低量しか存在
しないためあまり理想的ではない。
この他の予期しなかった長所は、ｒＲＮＡ （およびそ
れをコードしている遺伝子）が同時代の生物体間で側方
転位を受けにくいということが明らかになったことであ
る。このようにｒＲＮＡの一次構造は、よ（ありそうな
ことだが、例えば同時代の生物体間で側方転位を受けや
すいプラスミド運搬遺伝子あるいはその生成物のような
遺伝子に特異的な標的というよりむしろその生物体に特
異的な分子標的を提供する。
れをコードしている遺伝子）が同時代の生物体間で側方
転位を受けにくいということが明らかになったことであ
る。このようにｒＲＮＡの一次構造は、よ（ありそうな
ことだが、例えば同時代の生物体間で側方転位を受けや
すいプラスミド運搬遺伝子あるいはその生成物のような
遺伝子に特異的な標的というよりむしろその生物体に特
異的な分子標的を提供する。
さらに、本発明はイエルシニア・エンテロコリチカの二
つの異なるクラスを識別できるイエルシニア・エンテロ
コリチカｒＲＮＡ標的配列に対するプローブを提供する
。２種類のプローブの好適な混合物は、そのようなイエ
ルシニア・エンテロコリチカのすべてに存在する標的領
域とハイブリッド形成できる。好都合なことに、このよ
うな同一のｒＲＮＡ標的配列は、本発明に好適なアッセ
イ条件下では本発明のプローブはイエルシニア・エンテ
ロコリチカのｒＲＮＡとハイブリッド形成しかつイエル
シニア・エンテロコリチカ以外のｒＲＮＡとはハイブリ
ッド形成しないという点で、はとんどの−ｆエルシニア
・エンテロコリチカ以外のｒＲＮＡとは十分に異なって
いる。これらのプローブはそのそれぞれが包括的であり
かつ排他的であるという特徴を明白に示している。この
プローブがイエルシニア・エンテロコリチカに関する本
発明の並みはずれた包括的・υ１他的特徴を生み出すと
いうことは、予測外の意外な発見であった。
つの異なるクラスを識別できるイエルシニア・エンテロ
コリチカｒＲＮＡ標的配列に対するプローブを提供する
。２種類のプローブの好適な混合物は、そのようなイエ
ルシニア・エンテロコリチカのすべてに存在する標的領
域とハイブリッド形成できる。好都合なことに、このよ
うな同一のｒＲＮＡ標的配列は、本発明に好適なアッセ
イ条件下では本発明のプローブはイエルシニア・エンテ
ロコリチカのｒＲＮＡとハイブリッド形成しかつイエル
シニア・エンテロコリチカ以外のｒＲＮＡとはハイブリ
ッド形成しないという点で、はとんどの−ｆエルシニア
・エンテロコリチカ以外のｒＲＮＡとは十分に異なって
いる。これらのプローブはそのそれぞれが包括的であり
かつ排他的であるという特徴を明白に示している。この
プローブがイエルシニア・エンテロコリチカに関する本
発明の並みはずれた包括的・υ１他的特徴を生み出すと
いうことは、予測外の意外な発見であった。
本発明の特に好適な実施態様は、試験しようとする試料
内に存在する細菌が、試料中の任意のイエルシニア・エ
ンテロコリチカの迅速かつ豊富な増殖を促進しかつ多数
の密接に関連するイエルシニア・エンテロコリチカ以外
の細菌の増殖をおさえるような条件下で、限定時間内に
好適に増殖できることを含む、イエルシニア・エンテロ
コリチカを検出するためのアッセイ法を提供する。本発
明の好適なプローブを使用するハイブリッド形成分析は
、このような増殖期間を置いた後の試料を用いて行なう
と好都合である。
内に存在する細菌が、試料中の任意のイエルシニア・エ
ンテロコリチカの迅速かつ豊富な増殖を促進しかつ多数
の密接に関連するイエルシニア・エンテロコリチカ以外
の細菌の増殖をおさえるような条件下で、限定時間内に
好適に増殖できることを含む、イエルシニア・エンテロ
コリチカを検出するためのアッセイ法を提供する。本発
明の好適なプローブを使用するハイブリッド形成分析は
、このような増殖期間を置いた後の試料を用いて行なう
と好都合である。
他の好適な実施態様は、イエルシニア・エンテロコリチ
カと密接に関連した種であるイエルシニア・インテルメ
ジアを、厄介でかつ時間のか＼る従来の生化学試験慣用
法によらず識別することのできるプローブよりなる。
カと密接に関連した種であるイエルシニア・インテルメ
ジアを、厄介でかつ時間のか＼る従来の生化学試験慣用
法によらず識別することのできるプローブよりなる。
本発明の原理および態様は以下に示す表を参照すること
によって、よりよく理解されるであろう。 第１ 表 本発明の好適なヌクレオチド配列とイエルシ
ニア・エンテロコリチカ１６ｓ ｒＲＮＡの４５５〜
４７７（この位置番号は大腸菌のものを用いた）の“コ
ア″領域（“ｃｏｒｅ” ｒｃｇｌｏｎ）のヌクレオチ
ド標的配列を、大腸菌（Ｅｓｅｈｃｒｉｅｈｉａ ｃｏ
ｌｌ）（Ｅ、 ｃｏｌｔ）、プロテウス・ブルガリス（
Ｐｒｏｔｃｕｓｖｕｌｇａｒｉｓ） （Ｐｒ、 ｖｕ
ｌｇａ、） 、イエルシニア・エンテロコリチカＡＴＣ
Ｃ９６１０株（Ｙ、 ａｎｔ ９６１０）およびイエル
シニア・エンテロコリチカＲＦ ９５４（Ｙ、 ａｎｔ
９５４）の標的配列に関連する部分の１６ＳｒＲＮＡ
の配列と共に示す。ＲＮＡ配列は５′側から３′方向へ
書き、プローブ配列はＤＮＡで３′側から５′方向に書
いた。プローブ中の小文字のＣは修飾されうるシトシン
残基を示し、修飾基（レポーターグループ）は使用する
アッセイの種類によって結合する場合もあるし結合しな
い場合もある。 ８８０系統のプローブ（８８０，１０６２）をその基礎
となる″コア″領域と共に、それらの°親”配列、Ｙ、
ａｎｔ ９６１０の下に示す。９２６系統のプローブ
（９２６，１１１１，１１１２，１１１３，１０６３）
および９２６の″コア″配列（ｃｏｒｅ ５ｅｑｕｅ
ｎｃｅ）を、“親゛配列（’ｐａｒｅｎｔ″５ｅｑｕｅ
ｎｃｅ） 、Ｙ、 ａｎｔ ９５４の下に示す。プロー
ブ９２７およびその基礎となる“コア”領域をその“親
配列”Ｙ、 １ｎｔｃ ８Ｌ４の下に示す。 プローブ１０７Ｉは８８０ 、９２６ 、９２７のいず
れかと一緒に使用するために設計された検出用プローブ
である。 第２表 イエルシニア株の代表的な試料に対する好適プ
ローブの包括的行動を例示する。 第３表 イエルシニア株以外の代表的な試料に対する好
適プローブの排他的行動を例示する。 第４ 表 実施例１の好適な液体ハイブリッド形成試験
の全体構成と関連した包括的データを提供する。 第５表 実施例１の好適な液体ハイブリッド形成試験の
全体構成と関連した排他的データを提供する。 第６表 本発明の好適な全体構成の巾で、好適プローブ
を使用することによって食品試料中に含まれるイエルン
ニア・エンテロコリチ力を検出したデータを提供する。 ［発明の詳細な説明およびその最良の態様］本発明のプ
ローブを開発するにあたっての第一段階は、イエルシニ
ア・エンテロコリチカに特異的な核酸プローブに対する
標的部位として役立つ可能性のある１６Ｓおよび／また
は２３Ｓ ｒＲＮＡの領域を同定することからなる。 実際問題として、イエルシニア舎エンテロコリチカ以外
のどの微生物が任意の試料中に存在する可能性があるか
を演鐸的に予測することはむずかしい。そのようなイエ
ルシニア拳エンテロコリチ力以外の潜在細菌は数が多い
ので、与えられた任意のプローブ配列が排他的であるこ
との証明は予測できないばがりでなく非常に困難かつ面
倒である。研究および開発の第一段階において、最終的
にプローブを用いて選択することからなる試験試料のす
べての中にどの程度のイエルシニア・エンテロコリチカ
以外の細菌が存在するのかを知らなければならないとい
うその必要性を未然に除去するために、より厳密な規準
を採用した。このためには、イエルシニア種間の、およ
びイエルシニアと他の細胞群との間の系統発生論的関係
に関する知識が当然必要とされる。特に、代表的ではあ
るがイエルシニア・エンテロコリチカとは進化−Ｌ近い
親戚関係にある細菌のｒＲＮＡ （のイエルシニア・エ
ンテロコリチカのｒＲＮＡ）内の相同領域とは］−分に
異なるイエルシニア・エンテロコリチカｒＲＮＡ内の特
定標的領域を同定することができるならば、それに次い
でそれらの配列に対応するプローブを用いてハイブリッ
ド形成アッセイを行なうことによってイエルシニア・エ
ンテロコリチカとその関連細菌との間の違いを識別する
ことができると判断することによって排他性の規準が満
たされるという機能上積極的役割をはたしているがいま
だ立証されていない仮定を採用した。次いで、系統発生
論的観点から、より遠い関係にある生物体のｒＲＮＡ配
列は、その生物体の正確な種属を知る必要はないが、前
述のイエルシニア・エンテロコリチカと進化−ヒ近い関
係にある生物体のｒＲＮＡ配列よりも特定領域の配列が
異なるはずであると推論した。しかしながら、そのよう
な領域が存在するのか否か、もし存在したとしてもｒＲ
ＮＡ内にそのような領域が位置しているかどうかを予測
することはできない。 核酸ハイブリッド形成用プローブの有効標的部位として
働きうるイエルシニア・エンテロコリチカのｒＲＮＡ領
域を同定するための第一段階として、イエルシニア・エ
ンテロコリチカ、イエルシニア・インテルメジア、イエ
ルシニア・クリステンセニイ（Ｙｅｒｓｌｎｔａ ｋｒ
ｉｓｔｅｎｓｅｎｉｌ）、イエルシニア・ブセウドーツ
ベルクロシス（Ｙｅｒｓｌｎｉａｐｓｅｕｄｏ −ｔｕ
ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）等のｉｅｓおよび２３ＳｒＲＮ
Ａのほぼ全部のヌクレオチド配列を決定した。これらは
イエルシニア属を進化上幅広く代表するものとして独断
的に選択した。ｒＲＮＡのさまざまな部分のヌクレオチ
ド配列は、ｒ ＲＮＡを特定する遺伝子のクローニング
〔マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら、 １９８２．モ
レキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌ
ｏｎｌｎｇ） ニア・ラボラトリ−・マニュアル（Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）、 コールド
◆スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−（Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ ）Ｉａｒｂａｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）
、ニューヨーク、５４５頁〕およびシーフェンシング〔
マキサム（Ｍａｘａｍ）およびギルバート（Ｇｉｌｂｅ
ｒｔ）、 １９７７、プロシーディング・オブ・ザ拳ナ
ショナル・アカデミイー・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ
ｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌ Ａｃａ
ｄｅｍｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅ）、米国、７４：５６
０−５６４； サンガー（Ｓａｎｇｅｒ） ら、
１９７７、 プロシーディング・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミイー・オブ・サイエンス、米国、 ７４
： ５４０３−５４６７） 、および／または、逆転写
酵素を使ったｒＲＮＡ自身の直接シーフェンシング〔レ
ーン（１，ａｎｃ）ら、 １９８５．プロシーディング
・オブ・ザ・ナショナル・アカデミイー・オブ・サイエ
ンス、米国、 ８２ ： ６９５５−６９５９）のいず
れかの実験室用標準法で決定した。 同定したヌクレオチド配列を互いに比較し、さらにこれ
ら以外のデータとして人手できるｒＲＮＡのヌクレオチ
ド配列、特にこれらと密接な関係にあるモルガネラ（Ｍ
ｏｒｇａｎｅｌｌａ） 、プロテウス（ＰｒＯｌＯｕＳ
）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｏｌｌａ） 、エシェリ
キア（Ｅｓｅｈｃｒｌｃｈｉａ）、およびパスツレラ（
Ｐａｓｔｕｒｃｌｌａ）といった細菌のｒＲＮＡヌクレ
オチド配列、と比較した。これらの細菌種に対して有効
で排他的な特徴を示す可能性を秘めた領域として、第１
表に示すような好適な配列の領域を同定した。 それぞれの核酸プローブに対するさらなる実験的試験が
、上述の望ましい特徴が本当に得られているかどうかを
厳密に証明するために行なわれた：上述の望ましい特徴
とは、即ち、■）エルシニア・エンテロコリチカ以外の
非常に近い関係にある生物体のすべてに対する十分な排
他性、２）エルシニア・エンテロコリチ力株に対する何
月な包括性パターン、３）実際に使用するさまざまなア
ッセイ条件下での標的領域の近づきやすさ、である。テ
ストプローブの排他的および包括的特徴を明らかにする
ために適切と思われる生物体の数は非常に多い〔排他的
特徴に対してはおよそ２２種類の腸管に存在する細菌の
属、６９種類の種および２９種類の明記されていない“
バイオグループ（ｂ４ｏ−ｇｒｏｕｐ）’からなる、フ
ｙ ７−（Ｆａｒｍｅｒ）ら、１９８５；包括的特徴
に対してはイニルシュアの８種類の種およびバイオグル
ープ〕ために、反復戦略を採用して可能性のあるプロー
ブを試験し改良を加えた。プローブは標準的なホスホア
ミダイト法〔カルテルス（Ｃａｒｕｔｂｏｒｓ、 Ｍ、
旧）ら、 １９８３゜ジーン・アプリケーション・アン
ド・アナリシス（ＧＣｎｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｔｓ）、ババス（Ｐａｐａｓ、
Ｔ、 Ｓ、） 、ローゼンベルグ（Ｒｏｓｃｎｂｃｒｇ
。 Ｍ、）、カリクジアン（Ｃｈａｒｌｋｊｌａｎ、 Ｊ、
Ｇ、）編、。 エルセビエル（Ｅｌｓｏｖｌａｒ）出版社、ニューヨー
ク。 第３巻、 １−２６頁〕でアプライド・バイオシステム
（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｌｏｓｙｓｔｅｍ）装置を用いて
慣用的に合成した。 熟知された方法に従って、“ドツトプロット（Ｄｏｔ
ｂｌｏｔ）“分析法をこれら第一世代プローブの包括的
および排他的性質の予備試験のために用いた。よく知ら
れているように、−膜内にドツトプロット分析は核酸あ
るいは核酸集団をニトロセルロース、ナイロン、あるい
は商品として得やすくこの目的に対して特異的な他の誘
導化膜のようなフィルター上に固定化する操作を含む。 ＤＮＡあるいはＲＮＡのどちらでもそのようなフィルタ
ー上に簡単に固定化でき、さらに任意のいろいろな核酸
ハイブリッド形成条件（即ち、厳重条件（Ｓｔｒｉｎｇ
ｅｎｔ ｃｏｎｄｌｔｌｏｎｓ））下で、重要なヌクレ
オチド配列あるいはプローブとのハイブリッド形成を実
際に凋べたり、試験したりできる６厳重条件下で、標的
のヌクレオチド配列とより高い相補的をＨするヌクレオ
チド配列をもつプローブは、低い相補性しかもたないプ
ローブよりもより高いレベルでハイブリッドを形成する
であろう。 ここで用いるオリゴヌクレオチドプローブ（即ち、長さ
および平均塩基組成が３０〜３６のヌクレオチド）の場
合には、ｒＲＮＡ標的とのハイブリッド形成を６０’Ｃ
で１４〜１６時間（０，９ＭＮａＣ１，０，１２Ｍ）リ
ス（Ｔｒｌｓ） −塩酸ｐ＋（７，８。 ６ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１Ｍ ＫＰｏ 、０．１
％ＳＤＳ、 ０．１％ビロリン酸、 ０．００２％
フィコール。 ０．０２％ＢＳＡ、および０．００２％ポリビニルピロ
リジンを含むハイブリッド形成溶液中で）行ない、次い
でハイブリッド形成終了後非結合のプローブを除去する
ための洗滌を６０’Ｃで１５分間（０，０３ＭＮ ａ
Ｃ（１、０，００４Ｍ ｈリス−塩酸ｐＨ７，８，０，
２ｍＭ ＥＤＴＡおよＵ Ｏ，１９６ＳＤＳを含む溶
液で）３回くり返して行なうことが、表中や実施例中に
例示したレベルの特異性および感受性を確保するための
十分な厳重条件であろう。また、このような技術は、（
未精製の）粗細胞溶解液中に存在するＤＮＡあるいはＲ
ＮＡを、核酸の精製なし７に固定化できるという点で白
゛効である〔これをサイトドツト（ｅｙｔｏｄｏｔｓ）
と呼ぶ、例えばマニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｔ、）
、フリッシュ（Ｉ’ｒ１ｔｓｃｈ。 Ｅ、 Ｆ、）、およびサムブローク（ＳａＩＩ＋ｂｒｏ
ｏｋ、 Ｊ、） 。 １９８２、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒＣｌｏｎｌｎｇ）、ア・ラボラトリ−・マニュア
ル（ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）） ｏこ
の後者の研究方法は、任意の個々の生物体の核酸内に存
在するであろう個々のヌクレオチド配列を選択するため
必要な仕事量を太き（減少させ、さらに多数の生物体の
大量スクリーニングを可能にするという点で好都合であ
る。それ故、この方法は多数の生物体に対して核酸ハイ
ブリッド形成用プローブとしての可能性を秘めたプロー
ブを排他的かつ包括的にスクリーニングするのに適した
方法である。 イニルシュア以外の細菌で、潜在的にイニルシュア・エ
ンテロコリチカを含む試料内に存在する可能性のある細
菌の型を１１１示するリストを第３表に示す。また、こ
れらはイニルシュアと非常に近い関係にある多くの属を
表わしていることに注目されたい。上述のように、その
ような幅広い細菌の表現形に対して良好な排他的特徴を
示すプローブは、それより遠い関係にある腸内の微生物
のより幅広いリストに対しても同様にふるまうと予測す
ることは道理にかなっている。 また、これ以外のいくつかの考慮すべき事柄が最適なプ
ローブ配列のデザインの特徴に影響を及ぼす。第一の考
慮すべき事柄はプローブ自身に対するプローブの結合構
造（即ち、分子内相互作用）である。１６Ｓおよび２Ｓ
Ｓ ｒＲＮＡ内の有効な標的領域として可能性のある
領域は、実際上自己相補性の可能性を示す領域によく位
置していることが発見された。その結果、このような領
域に対す。 るプローブもまた自己相補性を示す。プローブと標的配
列との間の相互作用の可能性は標的あるいはプローブの
それ自身との分子内アニーリングを支配するパラメータ
ーと同じ型のパラメーターによって支配されているため
、特に溶液条件下でのハイブリッド形成では、プローブ
の自己相補性はハイブリッド形成のためにプローブ自身
がその標的配列に近づくことを難かしくする可能性があ
る。 このように、プローブの設計上の重要な態様の１つはそ
のような自己相補性を最少にすることである。このこと
は、イエルシニア書エンテロコリチ力に特異的な配列を
最大限利用することとプローブとして満足できる配列と
の間の妥協を余儀なくしている。 プローブ設計上の第二の考慮すべき事柄は包括性の基準
に関することである。好適なプローブとは、適切な排他
的行動をとるが、要求されるすべてのイエルシニア・エ
ンテロコリチカのｒＲＮＡとハイブリッド形成できるプ
ローブである。イエルシニア・エンテロコリチカ種はそ
れ自身重要な表現型の多様性および遺伝子型（以下に示
すようにｒＲＮＡを含む）の多様性を示す細菌からなる
ので、そのような“理想的“プローブの設計は非常に複
雑なものとなる。実際問題として、単一の１万能」なイ
エルシニア・エンテロコリチカのプローブを捜すよりも
、それぞれが有用レベルの包括性と共に適切な排他性を
示すようなイエルシニア・エンテロコリチカに特異的な
プローブをセットで見つける方がより好適である。好適
なプローブのセットが、全体として、大多数あるいはす
べてのイエルシニア・エンテロコリチカを検出し、イエ
ルシニア・エンテロコリチカ以外の細菌を検出しないの
が理想的である。そのようなセットでは、例えば、一方
のプローブが１つあるいは少数の重要なイエルシニア・
エンテロフリチ力株を除くすべての株を検出し、もう一
方のプローブが第一プローブによって見落された少数の
イエルシニア・エンテロコリチカ株のみとハイブリッド
形成するであろう。このように、次に示すプローブが包
括的特性に対する独自の基準をその特徴としているのに
対して、上述の特異的プローブセット″（”ｓｅｔ”）
の概念はプローブ個々の重要性の決定およびアッセイキ
ット（ａｓｓａｙ ｋｉｔ）の構築にあると考えると好
都合であることを認識すべきである。 プローブの設計および分析の最終段階は、理想的には、
実在する（例えば、食物／医療／環境）試料を試験する
こと、およびそれに次いで最終的なプローブセントとし
ての好適なプローブを選択することからなり、そうする
こきによって望ましい特性が現実の分析条件下で最大限
に発揮される。 〔プローブ〕 前述のプローブ選択のための戦略は試料中に存在するイ
エルシニア・エンテロコリチカ細菌を同定するためにｆ
Ｔ効なプローブを数多くもたらした。 表の簡単な説明の中で概説したように、第１表はプロー
ブの配列を代表的なイエルシニア中エンテロコリチカ株
のｒＲＮＡのその標的部位と共に示した。また、プロー
ブの望ましい識別行動の基礎となるイエルシニアψエン
テロコリチカｒ ＲＮ Ａの標的部位とイエルシニア◆
エンテロコリチカ以外の代表的細菌のｒＲＮＡとの［コ
ア（ｃｏｒｐ’） Ｊ領域のヌクレオチド配列の相違点
も示した。 ３つのシリーズのプローブが開発された。３つのプロー
ブとは、それぞれのシリーズのために開発され、後に第
一プローブと名付けられ、かつイエルシニア・エンテロ
コリチカに特異的な″８８０″シリーズおよび“９２６
″シリーズ、ならびにイエルシニア・インテルメジアに
特異的な“９２７°シリーズである。それぞれのシリー
ズの構成物は、長さ、塩基配列、および１８Ｓ ｒＲ
ＮＡ標的配列内のイエルシニア・エンテロコリチカに特
異的なヌクレオチドの位置“配列“ （”ｇｅｏｍｅｔ
ｒｙ″）の幾分かが異なっている。与えられた規定ハイ
ブリッド形成条件下で、それぞれのシリーズ（８８０お
よび９２６）からの１つのプローブは最適な包括的およ
び排他的行動をとるであろう。両方のシリーズからのプ
ローブはまれなる排他性と共に、適切に選択したハイブ
リッド形成条件下でイエルシニア・エンテロコリチカと
ハイブリッド形成する能力をもつ。本発明の８８０ある
いは９２６シリーズのどちらかのプローブはイエルシニ
ア・エンテロコノチカの特定サブセットに対して十分な
包括性を示すが、理想的プローブ組成物とは、いままで
にイエルシニア・エンテロコリチカとして知られている
株のすべてを検出するためにそれぞれのプローブから１
つずつ計２個のプローブからなる混合物を指す。プロー
ブは選択した個々のアッセイの全体構成およびそれに関
連した厳重性の特性に従って選択するのが理想的である
。 第２表に代表的なイエルシニア株からのｒＲＮＡ標的に
対するプローブのハイブリッド形成行動を示す。プロー
ブ８８０シリーズはイエルシニア・エンテロコリチカＡ
Ｔ ＣＣ９ＢＬＯ株の１６３ｒＲＮＡ配列に基づいて
いるが、第２表かられかるようにＡＴＣＣ９ＢＬＯ株に
加えて他の多数のイエルシニア◆エンテロコリチカ株と
も強固なハイブリッドを形成する。９２６シリーズのプ
ローブはイエルシニア・エンテロコリチカＲＦ ９５４
株（家の中より同定されたが、ヒトから同定されたＥ６
４１と同一である、〔ジーマン（Ｓｃｈｉｅｍａｎｎ、
Ｄ、 Ａ、）、モンタナ州立大学、ボーズマン（Ｂｏ
ｚｅｍａｎｎ） 。 モンタナ５９７１７））のＬ８Ｓ ｒＲＮＡ配列を基
本とした。第２表に示すように、９２Ｇプローブは８８
０プローブがハイブリッド形成する株とは全く別個のイ
エルシニア・エンテロコリチカのサブセットと強固なハ
イブリッドを形成する。９２６ブローブより検出された
イエルシニア・クリステンセニイ（Ｙｃｒｓｌｎｉａ
ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎｉｉ）の２株を除いて、プローブ
のどちらかによって検出されたイエルシニア種は他には
なかった。これらの少数の逸脱は医療的見地からは重要
ではない。また両プローブがイエルシニア・エンテロコ
リチカと生化学的には識別するのが難かしいイエルシニ
ア・インテルメジアとの間を識別することに注目された
い。 イエルシニア・インテルメジアは第１表に示す９２７ブ
ローブによってイエルシニア・エンテロコリチカとは明
確に識別できる。 第３表にイエルシニア以外の細菌の“サイトプロット″
（“ｃｙｔｏ ｂｌｏｔｓ”）に対するプローブのハ
イブリッド形成行動を示す。この実験では、プローブを
検出あるいは定母するために３２Ｐで放射（ｉｕ ６識
した。それぞれのプローブシリーズのより短いプローブ
型との交差ハイブリッド形成はこの実験に用いたハイブ
リッド形成条件下ではほとんどあるいは全く認められな
かった。このような条件とは６０℃で１４〜１６時間前
述のハイブリッド形成用溶液中でハイブリッド形成する
ことを指す。 ９２６ブローブシリーズの中で最も長くあまり好適でな
いプローブ型のみがここに示したイエルシニア以外の細
菌との限界反応を示し始めたので、この長さをこのよう
な厳重なハイブリッド形成条件下で使用するための任意
のプローブの長さの上限に規定した。より好適な中間の
長さのプローブ型はｌ＞えられたハイブリッド形成条件
下で望ましい反応パターンを示した。しかしながら、よ
り厳重なアッセイ系を用いる場合には、それらの交差反
応のレベルが下がるのに対してその感受性（ハイブリッ
ド形成能）は高いままであるので、より長いプローブ型
の使用がより望ましくなることはたやす（理解されるで
あろう。 実施例１−一般例： ホモポリマーによる捕獲、二重プローブ、液体ハイブリ
ッド形成系 イエルシニアおよび／またはイエルシニア以外の細菌の
培養を適切な培地で行ない、次いで核酸を多数の適切な
溶解剤のうちの任意のもの（例えば、ＮａＯＨ、グアニ
ジン塩、洗剤、酵素処理、あるいはこれらのうちのある
組合わせ）によって遊離させる。ハイブリッド形成は２
つの異なるプローブあるいはプローブのセットを用いて
行なわれ、両方がそうである必要性はないがこれらのう
ちの少なくとも１つは検出しようとする生物体に特異的
でなければならない。本発明の実施例では、イエルシニ
アφエンテロコリチ力に特異的な″捕獲”プローブ、８
８０あるいは９２６は酵素的にその３′末端に２０〜２
００のデオキシアデノシン（ｄＡ）残基の尾を付けられ
ており、その報告プローブ１０７１は、捕獲した標的分
子の検出用として使用される放射性リン（Ｐ−３２）あ
るいは他の小さなリガンド（例えばフルオレセインある
いはビオチン）で化学的あるいは酵素的のどちらかで標
識されている。 一般的には培養／増殖に次いで、試験試料中に存在する
細菌を小数の試験管に移す。細菌を溶解し、捕獲用プロ
ーブおよび検出用プローブを加え、すでに述べたような
適切な溶液中、適切な温度でハイブリッド形成を進行さ
せる。次いで標的−プローブ複合体を含む溶液を長さ１
５〜３０００のデオキシデミジンホモポリマーのヌクレ
オチドを結合した表面に、ｄＡおよびｄＴ間にハイブリ
ッド形成が起こるような条件下で接触させる。本発明の
実施例では、ｄＴは標的／プローブ溶液内に沈んだプラ
スチックの“計深棒（ｄｉｐｓｔｉｃｋ） ’に結合し
ている。もしイエルシニア・エンテロコリチカのリポソ
ームＲＮＡが試験試料中に存在するならば、ｄＡ尾のつ
いたイエルシニア・エンテロコリ千カー特異的捕獲用プ
ローブは存在する標的のｒＲＮＡ配列とハイブリッド形
成し、さらには計深棒をも捕えるであろう。ハイブリッ
ド形成しなかった核酸および細胞砕片を洗い流し、ｄＡ
ｄＴ二重らせんで表面にくっついた捕獲されたＤＮＡ
−ＲＮＡ複合物を遊離させた。正しい標的核酸が存在す
る場合のみ、報告用プローブもまた、相互作用の鎖−捕
獲用表面−ｄＴ：ｄＡ−捕獲用プローブ：標的：報告用
プローブで計深棒に結合する。次いで、リガンドで誘導
化（例えばフルオレセイン化）した報告用プローブ結合
物を、リガンド結合剤−酵素複合体（例えば、抗フルオ
レセイン（ａｎｔｌ−ｆ’１ｕｒｏｓｃｅｆｎ） ：ア
ルカリホスファターゼ、ストレプトアビジン（ｓｔｒｃ
ｐｔａｖｌｄｌｎ） ：西洋わさびのペルオキシダーゼ
等）の添加によって検出する。次いで、検出用複合体が
特異的に結合できる条件下でインキュベーション（１ｎ
ｃｕｂａｔ ｔｏｎ）し、非結合酵素を洗って除去し、
色原体基質（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ５ｕｂｓｔｒａ
ｔｅ）を加えて次いで発色させ（代表的には２０〜３０
分間）、さらに任意の発色終了溶液を加えて、発色を比
色定量で測定する。 この測定値の読み（代表的には０．２〜２．０のＯ，Ｄ
。 単位の範囲）を陰性の対照標準のレベルと比べ、閾値あ
るいはカットオフ値を設定して、実験レベルで″意味の
ある“定量を行なった。第４表および第５表に、いろい
ろなイエルシニア（第４表）およびイエルシニア以外（
第５表）の細菌の純水培養物を用いた、そのような実験
の１つの結果を示した。 実施例１−具体例 毎日のあるいは肉製品の試料に対して、試料中のイエル
シニア・エンテロコリチカを最初に増殖させるために、
２５ｇの食物試料を２２５ｃａｌのイエルシニア増殖用
培地（Ｐ Ｓ Ｂ Ｂ、ペプトン−ソルビトール−胆汁
−培地：蒸留水１Ω中リン酸ナトリウム（二塩基） ８
．２３ｇ、リン酸ナトリウム（−塩基）１２ｇ、胆汁塩
＃３を１．５ｇ、ソルビト−ル５ｇ、ペプトン１０ｇ〕
に加えた。混合物を個々の試料の種類にふされしい方法
として混合機あるいはｓｔｏｍａｃｈｅｒを用いて均一
化し、次いで容器中で２０〜２８時間、最も好適には２
４時間、２０〜３５℃の間で、最も好適には３５℃で・
インキュベーションした。 環境試験では、綿棒あるいはこれ以外の環境試料を２５
ｍ１（あるいは必要があればより人容蛍）のＰＳＢＢを
含有するフラスコあるいは容器内に入れ、２０〜２８時
間、最も好適には２４時間、２０〜３５℃の間で、最も
好適には３５℃でインキュベーションした。 次いですべての種類の試料に対する二度目の増殖を行な
った。最初の増殖培養液をインキュベーターから取り出
し、より混合した。最初の増殖培養液から１ｍ１（ある
いはｌｏｍｌ）を１０ｍ１ （あるいは１００ｍ１）の
ＰＳＢＢを入れた試験管あるいは容器に移し、２４±４
時間、２０〜３５°Ｃ１最も好適には３５℃でインキュ
ベーションした。 ０．４５ｍ１の培養細胞を０．０５ｍ１の溶解用溶液（
１，２５Ｎ−ＮａＯＨ）に加え、室温（１５〜３０°Ｃ
）で５分間インキュベーションすることによって処理し
た。 細胞溶解液に０．１ｎ＋Ｉの中和用緩衝液（ＫＰＯ４：
Ｎ ａ Ｐ Ｏ４＝ １ ： １．４ Ｍ ）を加えて
中和した。 それぞれの試料から遊離した核酸に０．０５ｍ１の特異
的捕獲用および検出用プローブのセット（１゜４〜２．
８ ｍｇ／ｍｌの好適な捕獲用プローブのセット８８０
／９２Ｇ 、 ８８０／９２Ｇシリーズのプローブとは
異なる組合せでも使用できる；および２〜４ｍｇ／ｍｌ
の検出用プローブ１０７１）を加えて、遊離した核酸を
検出した。捕獲用計深棒のセットを細菌溶解液および特
異的なプローブのセットを入れた試験管内に入れた。中
身を６５℃水浴中で６０分間インキュベーションし、特
異的な捕獲用および報告用ブ０−ブと標的核酸とのハイ
ブリッド形成、ならびにこれらの特異的ＤＮＡ／ｒＲＮ
Ａハイブリッドの計深棒への捕獲を可能にした。 ハイブリッド形成後、計深棒はその活性部分をおおうた
めに十分量の洗滌溶液（５０ｍＭ）リスｐＨ７，５、１
５０ｍＭ ＮａＣｇ、２ｍＭ ＥＤＴＡ。 および０．１％ツイーン（Ｔｗｅｅｎ） ２０）を入れ
た洗滌用容器の中に：１′深棒を浸すことによって洗滌
した。さらにこの操作を新しい洗滌溶液中でくり返した
。 洗滌した＝１深棒を洗滌用容器から取り出し、吸い取り
紙で吸い取って（ｂｌｏｔ）乾燥させ、０．７５ｍ１の
抗体−酵素接合体（洗滌溶液で希釈した抗フルオレセイ
ン（ａｎＮ −ｆｌｕｏｒｃｓｃｃｆｎ）−西洋わさび
ペルオキシダーゼ）を入れた試験管のセットの中に入れ
、室温で２０分間インキュベーションした。 抗原−抗体反応を起こさせた後、計深棒を試験管から取
り出し、上述の２つのパラグラフに述べたのと同じ方法
で洗滌し、吸い取り紙で吸い取って乾燥させた。計深棒
を基質−色原体混合物を入れた標識用試験管のセットの
中に入れ、さらに室温で２０〜３０分間インキュベーシ
ョンした。次いで計深棒を取り出し、発色段階を０．２
５ｍ１の４Ｎ塩酸を加えることによって終了させた。試
料の光学濃度を比色定理した。 通常、（イエルシニア・エンテロコリチカ以外の細菌よ
り選択した細菌から調製した）３種類の陰性対照標準の
平均値を得、３種類の陰性対照標準の平均αＤ、Ｘ２，
５に等しい値をカットオフ値として選んだ。高い０．
Ｄ、値の試料チューブをイエルシニア・エンテロコリチ
カ陽性と考え、低いＯ，Ｄ。 値のそれにはイエルシニア・エンテロコリチカが存在し
ないと考えた。結果を第６表に示す。 本発明の説明はｒＲＮＡの検出に関して触れたものだが
、ここに記載したプローブおよびここに記載したそれら
に対するプローブの相補性はまたｒＲＮＡをコードした
遺伝子（ＤＮＡ）を検出するためにもＧ効であり、従っ
てそのようなプローブはここに記載したプローブと等価
であると考えられ、本発明の精神および範囲ならびに特
許請求の範囲内に倉まれることは容易に理解されるであ
ろう。 第２表 イエルシニアー包括性ドツトプロットデータ属・種 Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｊｃａ （ｃ）Ｙ、
ｅｎＬａｒｏｅｏｌｌＬｌｃａＹ、 ｃｎｔｃｒｏ
ｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ＩｔｊｅａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｅｏｌｆｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ＩＬＩｃａＹ、 ｅｎＬｅ
ｒｏｃｏｌｉＬｊｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｉｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｃｒｏｃｏｌｉＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｅｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ［ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｅ
ｒｏｃｏｌｌＬｉｅａ Ｙ、 （！ｎｔｏｒｏｃｏｌｌｔｌｅａＹ、 ｃｎＬ
ｃｒｏｃｏｌ １ｔｉｃａＹ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏｌ
ｌＬＩｃａＹ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １ｔ！ｃａＹ、
０ｎＬＱｒＯＣｏＩＩＬＩｃ、ａＹ、 ｅｎｔｅｒｏ
ｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ＩｔｌｃａＹ、 ｅｎ
ＬｅｒｏｃｏｌｌＬＩｃａＹ、 ｅｎｔｃｒｏｃｏｌｌ
ｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬＩｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｊｃａ 株 ７Ｉ５ ＡＨＵ５４ ＭＯ９８ ＥＭＯ９８ ＭＯ９９ Ｍ１０４ 開１０５ ＭＩＯＧ Ｍ１０７ ｔ；Ｍｉｉｇ ＧＧＩ 起源 ８８０ （１） ＋１４＋ （１）＋＋← （１） ＋＋＋＋ （１）＋＋＋＋ （１） 十＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （４） ＋＋＋＋ （３） ４＋１−＋ （２）＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２） ＋−１−＋＋ （２） ＋＋）＋ （２）＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２）←→ （２）＋＋→ （２） ＋＋＋＋ （２）＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２）←→ （２）＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２） −→→ ２Ｇ 第２表 イエルシニアー包括性ドツトプロットデータ（続き）属
・種 Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌＪｔｌｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｅｏ＋ ＩｔｌｅａＹ、ｃｎＬｃｒ
ｏｃｏｌ Ｉ ＬｌｅａＹ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔ
ｌｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ＩＬＩｃａＹ、 ｃｎＬ
ｃｒｏｃｏｌｉＬｉｃａＹ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １
ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬＩｃａ ＵＮＫＮＯνＮ（未知細菌） Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌＨＩｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｉｃｒｏｅｏｌＨＩｃａ ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏＩＩＬＩｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒαカｒｒｔｆｃａ ＵＮＫＮＯ’１ｌＮ（未知細菌） Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｊｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｃｏｌ ＩＬＩｃａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏＩｉＬｉｅａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｃｏｌｊｔｌｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、ｃｎＬｃｒｏｃｏｌ ｌ ｔｉｃａ株 １シロ７５ Ｉシ８４９ ２Ｍ１１７ ＥＭ１２７ Ｈ１３０ ［：Ｇ４１ Ｆ、７８１ ＥＭ１２８ Ｂ１７ ］Ｂ８３１ 開０９５ ＭＯ９７ Ｍ１００ ＭＩＯＩ Ｍ１０２ ＭＩ０３ ２Ｂ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ 第 り 表 イエルシニアー包括性ドツトプロットデータ（ｖｃき）
λ） 表 イエルシニアー包括性ドツトプロットデータ（ｖｃき）
Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ５ｎＬｐｒｏｅｏｌｉＬＩｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｃ
ｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｌｆ、１ｃａｙ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌ １ｔｊｃａＹ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｉ
ＬｉｃａＹ、 ｅｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａｙ、ｋｒｌｓｔ
ｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｃｎｓｃｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｌｓｔｅｎｓｅｎｊｌ Ｙ、 ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎｌＩ Ｙ、 ｋｒｌｓＬｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｃｎｓｃｎｉｉ Ｙ、ｋｒｊｓｔｃｎｓｃｎｌｌ Ｙ、 ｋｒＪｓｔｅｒ＋５ｅｎｌｌ Ｙ、 ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎｉｌ Ｙ、 Ｉ’ｒｅｄｅｒｌｋｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｒｒｅｄｅｒｉｋｓｅｎｌｌ Ｙ、 ａｌｄｏｖａａ Ｙ、 ｒｕｃ、ｋｅｒｌ Ｙ、 ｒｕｃｋｃｒ＋ Ｙ、 Ｉｎｔｃｒｍｃｃｌｌａ Ｙ、ｉｎｔｅｒｍｅｄｌａ Ｅ６８３１？ ＥＩＩ［１２０ ＴＡ削６１ １？ｌ’９５３ Ｆ９５４ Ｅ８１２ ５２３Ｇ ｌＩｎ２７ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ Ｙ、 ｊｎｔａｒｍｃｃｌｉａ Ｙ、 ｉｎｔｃｒｍｃｄｉａ Ｙ、ｉｎｔｃｒｍｃｄｉａ Ｙ、 １ｎｔｃｒｍｅｄｌａ Ｙ、 ｐｓｅｕｄｏＬｕｂｅｒｃｕｌｏｓｌｓＹ、 ｐ
ｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｌｓＹｃｒｓｌｎｉａ
ｓｐ。 ２！１９０９ 奸←−陽性対照標準レベルのハイブリッド形成←→−強
いハイブリッド形成 ←−弱いが容易に検出可能 十−辛うじて検出可能 ｍ−ゼロ （注） ：起源の欄の数字はそれぞれ次の意味を表わす。 （１）ＡＴＣＣ （２）Ｄ人シーンマン（モンタナ州立大学、ボズマン。 モンタナ州５９７１７） （Ｄ、 Ａ、 Ｓｃｈｌｅｎｍａｎｎ （Ｍｏｎｔａｎ
ａ ５ｔａｔｅ Ｕｎｌｖ、 、 Ｂｏｚｅｍａｎ）４
ｏｎｔａｎａ ５９７１７）） （３ン ＣＤＣ （４） ＧＴＳ、所内の食物試料又は臨床試料がら単離
（５）キャサリン・Ｗ・ダネリー（バーモント大学農学
部。 バーリントン、バーリントン０５４０５）〔Ｃａｔｈｅ
ｒｌｎｅ Ｗ、 Ｄａｎｎｅｌｌｙ （ＩＪｎｌｖ、
Ｖｃｒｒａｏｎｔ、 Ｃｏ１１． ｏｆＡｇｒｉｃｕｌ
ｔｕｒｅ、 Ｂｕｒｌｌｎｇｔｏｎ ＶＴ ０５４０５
） ）第３ 表 イエルシニア 排他性ドツトプロットデータ 第 表 イエルシニアー排他性ドツトプロットデータ（続き）７
２（ｄｒｋ、 ｐｎｋ） ４７−２４（ｌａｃｅ） ４’Ｊ−２４（ｆａｃ−） ＾π１１３３１３ ＡＴＣＣ２９９０３ Ａ１ｔ’Ｃ１１７０（＋ ＡＴＣＣ２９９２９ ＡＴＣＣ２９’１２８ ＾πｒＺ９９３（Ｉ ｌ１ｇＡ ｌ０３Ｂ ２ｌ−６４ ４（ｉｏ−０１ １シ、ｃｏｌｌ Ｅ、ｃｏｌｌ ＩＥ、ｅｏｌｌ Ｓｈ、 ｄｙｓｃｎｔｃｒｌａｃ Ｓｈ、 ｒｌｃｘｎｅｒｌ Ｓｈ、赫）ｃｌｌｌ Ｓｔ、、 ｂｏ）’ｄｌｌ Ｃ１３ Ｓｈ、 ｂｏｙｄｉｌ Ｃｌ０ Ｓｈ、 ５ｏｎｎｅｔ Ｃ，ｒｒｃｕｎｄｌｌ Ｃ，ｒｒｃｔ＋ｎｄｉｌ Ｃ，ｒｒｃｕｎｄｌｌ Ｃ，ｒｒｃｕｎｉｌｌ Ｕ、 ｒｒｅｕｎｄｌｌ ＾Ｔｃｃ２５４０［ｔ ＡＴＣＣ２５４０５ Ｓ１２１［３ 円 ＾π：Ｃ２９９１７ ＡＴＣＣ２９９１５ Ｃ，ｕａｌｏｎａＬＩｃｕｓ Ｃ，ｕａｉｏｎａｔｌｃｕｓ Ｃ，ｕａｌｏｎａＬｌｃｕｓ Ｅ、 ａｇｇｌｏｍａｒａｎｓ Ｐ：、 ａｇｇｌｏｉｃｒａｎｓ Ｅ、 覗１ａｓｅｒａｎＳ （２）Ｅ、ａｇｇｌｏｓｅｒａｎｓ ＾ＴＣＣｇ０９０ Ｆａｎｎｉｎｇ １ 「ａｎｎｉ口ｇ２ Ｆａｎｎｌｍ ３ Ｆａｎｎｉｎｇ ４ Ｆａｎｎｉｎｇ ｓ ｆｒｅｕｎｄｌｌ ｒｒｃｕｎｄｌｌ ｒ ｒｅｕｎｄ Ｉ １ ｒｒｃｕｎｄｌｌ ｒ ｒｅｕｎｄ Ｉ Ｉ ｒ ｒｅｕｎｄ ｌ １ ｄｌｖｃｒｓｕｓ ｄｌｖｅｒｓｕｓ ＡＴＣＣ１３Ｑ４１１ （２） ε、 ａｃｒｏｇｃｎｃｓ 第３表 イエルシニア 排他性ドツトプロットデータ（続き） ＡＴＬ”ｌ？３３０７２ １０８（ｗｈｅａｔ） Ａ刊：’Ｃ２９５４４ νｈｅａｔ ＾πｎ３３０２８ ＡＴＣＣ３５３＋７ ６９（Ｉ ｔ、ｐｎｋ） ７２（ＩＩａｕｖｅ） １０１（ｄｒｋ、ｐｎｋ） ＡＴＣＣ１３８１１３ 人π℃２９９３９ Ｉ２１Ｃ １？ｒ’５０１Ｂ ＾ＴＣＣＩ３１１１２ ＾、ＴＣ’Ｃ３３５３１ ＡＴＣＣ３３２５７ Ａπ’ＣＩ ＋２９［１ １３４（ｂｌａｃｋ） １１７（Ｉａｅ−） ＾且：Ｃ２５９３３ ＡＴＣＣ２９９０６ ＾ＴＣＣ７００２ １１８Ｂ ＲＩ’９Ｇ９ １３２（ｌａｃ−） ！Ｅ、ａｓｎ１ｇｃｎｕｓ Ｅ、 ５ａｋａｚａｋｌｌ ＩＥ、 ５ａｋａｙ、ａｋｌｌ Ｅ、 ｓｐ、ｃＤｃ１９ Ｅ、 ｇｃｒｇｏｖｌａａ Ｅ、Ｌａｙｌｏｒａｅ Ｋ、ｐｎｃｙ＋ｏ口Ｉａｃ Ｋ、ｐｎｅｕｍｏｎｉａｓ Ｋ、 ｐｎｃｕｓｏｎｌａ。 Ｋ、ｐｎｃｕｍｏｎｌａｃ Ｋ、 ｐｎｅｕｍｎｌａｅ Ｋ、 ＋ｏｘｙｔｏｃａ Ｋ、 ”ｏｘｙＬｏｃａ” Ｋ、 ｏｘｙＬｏｅａ に、ｐｌａｎｔｌｃｏｌａ に、 Ｌｅｒｒ＋ｇｅｒ＋ａ Ｋ、 ｏｚａｅｎａ。 Ｐ、 ｍ１ｒａｂｌｌｌｓ Ｐ、 ｇｌｒａｂｌｌｌｓ Ｐ、 ５ｌｒａｂｌｌｌｓ Ｐ、 −１ｒａｂｉｌｌｓ Ｐ、 ｇｌｒａｂｌｌｌｓ Ｐ、 ｖｕｌｇａｒｌｓ Ｐ、ｖｕｌｇａｒｌｓ Ｉｌ、 ａｌｖｅｌ １１、 ａｌｖａｌ ＋／− 第３表 イエルシニア 排他性ドツトプロットデータ（ｖｃき）１？Ｐ９５４ にド９５５ Ｆ９７２ １１３（ｍａｕｖｅ） １０１ｔ（ｌａｃ−） ＋０９７７ Ｇ９１１１ ４７−２４（Ｉａｃ−） １３４（Ｉａｅ−） ＾ＴＣＣ８０７１ ＡＴＣＣ９ｇ８８ ＾１１）Ｃ２７７９０ ＡＴｔｃ３３（ｉ７３ ＾πＤ２９９４４ ＡＴＣＣ２９９１４ ＾’ＩＩＸ：ｇ３７ ＾πｎ１９４１１１ Ｐ７８１ Ｆｌ１９０ ＋０３２４３ Ｆ９０５ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬＩｅａ １８２５Ｐａｓ
、 ５ｕｔｏｃｌｄａ Ｓｅｒ、ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ Ｓｅｒ、 ｃｘｌｏｒｌ ｒｅｒａ シｒ、 ｓｐ。 Ｐｓ、 ｓｐ。 Ｓｈ、 ｂｏｙｄｌｌ （：ＩＯ Ｅ、 ｃｏｌｌ ｓｐ。 Ｅ、 ｃｏｉｌ ｓｐ。 Ｍ、 ｍｏｒｇａｎｌｌ Ｍ、 ｍａｒｇｎｉｉ Ａ、 ｐｕｔｒｏｒａｅｌｅｎｓ Ｐｒｏｖ、ａｌｃａｌｌｒａｃｌｃ＋＋５Ｐｒｏｖ、
ａｌｃａｌｌｆａｃｉｅｎｓＰｒｏｖ、 ｒｕｓｔｌｇ
ｌａｎｌｌ Ｐｒａｙ、 ｒｕｓｔｌｇｌａｎｌｌ Ｐｒｃｙｖ、 ｓＬｕａｒＬＩＩ Ａｃｒｏｍｏｎａｓ Ｉａ １１３７ Ｈａｅｓｏｐｈｌｌｕｓ ＩｎｆｌｕｅｎｚａｓＳ、
１ｕｅｌａｎｌａ Ｓ、 ｂｒｏｏｋｒｌｃｌｄ Ｓ、 ｓｐ、 （ＣＤＣ２２６９［Ｖ］）Ｓ、ｓｐ、（
（Ｅ１９２５［Ｖゴ） Ｓ、 ｓｐ、（ＣＤＣ２２２９［ＶＩ］）Ｓ、 ａｒｌ
ｚｎｎａｅ Ｙ、 Ｉｎｔｃｒ＊ｃｄｌａ ＋／− 第４ 表 イエルシニアパネル （プローブ８８０．プローブ９２６混合）個々のプロー
ブ （ドツトプロット） Ｙ、 ＱｎｔＯｒ（ＸＯｌｌｔＩＣａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｉＬＩｃａ Ｙ、 ０ｎｔ（！ｒｏｅｏＩＩｔｋａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｉＬｉｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌｉｔｌｅａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｉＬＩｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｉｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｃｒｏｃｏｌｉｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌｉＬｌｃａ ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｅｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｅ
ｒｏｅｏｌｉＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｌｃａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｅｏｌｉｔｌｃａ ｙ、 ｃ’ｎｔＯｒｏｃｏｌＬｔｌｃａ（ｃ） ＥＩ３Ｇ３ ＡＭＵ５４ ＭＯ９６ Ｉ胴０９８ ＭＯ９９ ＥＭ１０４ Ｍ１０５ １’：ＭＩ０８ ＭＩＯ７ Ｍ１１８ Ｅ７０１ ＢＢ Ｉ ２．２ ２．２１ ２．１６ ２．１２ １．８ １．８５ ２．０８ １．８６ １．５３ １．５７ １．０９ １．５２ １．５１ １．１４ １．９４ ０．５３ １．４７ １゜９４ ２．０３ ２．１３ ２．１２ ２．１９ ２．１２ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋十 個々のプローブ （ドツトプロット） 表 イエルシニアパネル （プローブ８８０．プローブ９２６混合）（続き） 個々のプローブ （ドツトプロット） Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌＬＩｃａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｅｏｌ １ｔ１ｃａＹ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔ
ｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌ １ＬｉｃａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｃｒｏｃｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｅｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ ＵＮＫＮＯＶＮ（未知細菌） Ｙ、 ＣｎｔＱｒＣＸｊ）ＨｔＩＣａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬＩｃａＹ、 ｅｎｔｃ
ｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ Ｙ、 ａｎＬｅｒｏｃｏｌｌｔｌｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌむ１ｅａｙ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｅＯ！ＩＬｉｅａ ＵＮＫＮＯＷＮ（未知細菌） Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｅｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｅ
ｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ ビ８２９ Ｅｇ３９ ＭＩ１７ ＥＭ１２７ Ｅ用３０ ７ＧＩ Ｍ１２１１ ２．０２ ２．０ １．８８ １．８７ Ｉ、７７ ２．０４ １．９６ １．８６ ２．２２ １．６ ０．６３ ０゜５４ １．０１ ０．８３ ０．７２ ０．８ １．２８ １．１３ １．１ ０．９１ １．４３ １．６３ ＋÷す＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ 十＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ Ｙ、 （！ｌ１ｔｅｒＯｅＯＩＩｔｌｅａＹ、 ｅｎ
Ｌｅｒｏｃｏｌｌｉ、Ｉｃａｙ、 ｅｎｔｃｒｏｃｏｌ
ｌｔｉｅａ Ｙ、 ｃｎＬｃｒｏｃｏｌｉＬＩｃａ ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏ目ｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｆｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｅｏｌｉｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｊｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｉＬＩｃａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｅｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｅｒｏｃｏｌｉＬＩｃａ ’ｆ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌｌｔｌｃａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌ ＩｔｆｃａＹ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬ
ｉｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｃｘｚｌ １ｔｉｅａＹ、 ｋｒｌｓ
ｔｃｎｓｃｎｊｌ ＥＸ（１９５ 開０９７ Ｐ、Ｍｌｏｏ ＥＭＩＯＩ Ｍｉ０２ ＰＭ＋０３ Ｅ８６３１？ Ｐ、ｌｌｌ３２１） ｌｌｌ９ １００７ＴＡ １ １？Ｐ９５３ Ｆ９５４ に７４０ に７４１ ２．０３ １．０２ １．５ １．３５ １．７５ ０．８８ ０．９５ １．２５ ２．０ １．０５ １．５１ １．４Ｂ １．５１ １．９Ｇ ２．０７ １．９５ １．８８ Ｊ、７８ Ｉ、９３ ２．０２ ２．１６ １．９８ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋→十 ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ４＋＋＋ ÷ｔ＋◆ 第４表 イエルシニアパネル （プローブ８８０．プローブ９２８混合）（続き） 個々のプローブ （ドツトプロット） 第４表 イエルシニアパネル （プローブ８８０．プローブ９２６混合）（続き） 個々のプローブ （ドツトプロット） Ｙ、 ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎ［Ｉ Ｙ、 ｋｒｉｓＬｅｎｓｅｎｉｌ Ｙ、 ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎｌＩ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｅｎｓｃｎｊｌ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｃｎｓｃｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓＬｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒ＋５ｔｅｎｓｅｎｌ＋ ’ｌ’、 Ｉ゛ｒｃｄｃｒｊｋｓｃｎｉｌ〜’「ｒｔｖ
ｌｅｒｉｋｓｅ＋山 Ｙ、 ａｌｄｏｖ；ｔｃ Ｙ、 ｎｒｃｋＱＭ Ｙ、 ｒｕｅｋｅｒｉ ｙ、 ｊｎｔｃｒｍｅｄｉａ Ｙ、 ｉｎｔｃｒｍｅ＋ｌ１ａ Ｙ、 １ｎｔｅｒ＋＋＋ｅｄｊａ Ｙ、 ｉｎｔｃｒｍｃ＋ｆｌａ Ｙ、 ｉｎＬｅｒｍｃｙｌｉａ Ｙ、 Ｉｎｔｃｒａ＋ｃｄ！ａ Ｙ、 ｊｎｔｃｒｍｃｄｉａ Ｙ、 ｐｈｉ ｂｍｉｒａｇｉａ Ｙ、 ｐｓｃｕｄｏｔｕｂｃｒｃｕｌｏｓｌｓ３Ｇ３８ Ｅ７０９ Ｅｇｌｆ３ ３Ｇ４１ ９９０ｇ １ｌＢ２７ ＥＩＩＩ３１３ ［８２２ Ｅ８２５ ０．０２ ０．０３ ０．０４ ０．０３ ０．０６ ０．０８ ０．０９ ０．０３ ０゜０５ ０、口４ ０．０４ ０．０４ ０．０２ ０．０３ ０．０２ ０．０９ ０．０２ ０．０２ ０．０４ ０．０５ ０．０２ 十←十−陽性χ・１照標準レベルのハイブリッド形成Ｈ
→−強いハイブリッド形成 ←−弱いが容易に検出可能 十−辛うじて検出「１工能 一一ゼ ロ （注）：起源の欄の数字はそれぞれ次の意味を表わす。 モンタナ州５９７１７） ［Ｄ、 Ａ、 ５ｃｈｊｃｒｕｉａｎｎ （Ｍｏ
ｎｔａｎａ ５ｔａｔｅ Ｕｎｌｖ、、 Ｂｏｚ
ｃｍａｎＭｏｎｔａｎａ ５９７１７）） ＣＷｏｒｃｅｓｔｅｒ Ｍｅｍｏｒｌａ！ １ｌｏｓ
ｐｉ Ｌａｌ 、 νｏｒｅｅｓＬｅｒ、 Ｍ＾ノ
第５表 排他性パネル （プローブ９２８ 、８８０） 第５表 排他性パネル （プローブ９２６゜ ８８０） （続き） 属・種 Ａｃａｌｌｇｃｎｃｓ ｄｃｎｌｔｒ１１’１ｃａｎｓ
＾ｃｉｎｅＬｏｂａｃＬｅｒ ｃａｌｃｏａｃｅＬｉｕ
ｓ＾ｅｉｎｅｔｏｂａｅＬｆ３ｒ ｃａ＋ｅｏａｅｅｔ
ｔｕｓ八ｃｉｎｃｂａｃｔｃｒへ １ｏｖｂｂｉｃＡｅ
ｒｏａｉｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉ ｌｉａ＾ｅｒｏ
Ｉｌｏｎａｓ ５ｏｒｂｌａ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｃｒｃｕｓ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｌｃａｎｓ Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ ＣＩ Ｌｒ０１）ａｅＬｅｒ ｄｌｖｅｒｓｕｓＣｌｔ
ｒｏｂａｅｔｅｒ ｒｒｅｕｎｄ １ｃｔｔｒｏｂａｃ
ｔｃｒ ｆｒｃｕｎｄ’１ＣＩＬｒｏｂａｅＬｅｒ ｒ
ｒｅｕｎｄｌｉＣＩｔｒＯｂａＣｔｃｒ ｒｒｃｕｎｄ
ｉＣｔｒｏｂａｃｔｃｒ ｒｒｃｕｎｄｉｉＣｉＬｒｏ
ｂａｃＬｅｒ Ｉ’ｒｅｕｎｄｉｌＣｔｒｏｂａｃｔｃ
ｒ ｆｒｃｕｎｄｌＩＣｉＬｒｏｂａｃＬｃｒＩ’ｒｅ
ｕｎｄｉｌＣ１ｔｒｏｂａｅｔｅｒ ｆ’ｒｅｕｎｄｉ
ｉＣｔｒｏｂａｃｔｃｒ ｒｒｃｕｎｄ １ＣＩＬｒｏ
ｂａｃｔｅｒ ｒｒｅｕｎｄｌｌｌＥｎｔｅｒｏｂａｅ
ｔｅｒ ａｕｏｇｃｎｃｓＥｎＬｃｒｏｂａｃＬｃｒ
ｇｇｌｏａＯｒａｎｓＥｎＬｅｒｏｂａｃＬｅｒ ａ
ｇｇｌｃｘｉｅｒａｎｓＨｎｔｃｒｏｂａｃｔｃｒ ｃ
ｌｏａｃａｃＥｎＬｅｒｏｂａｃＬｅｒ ｃｌｏａｃ
ａｅＡＴＣＣその他の特定 起源 寄託番号 番号・符号０．Ｄ。 （２） ２７０Ｇ２ ０．０３（１
） （ｓａｙ）１５ ０．０４（２）
１９ＧＯＧ
Ｏ，口２（２） ９９５７
０．０３（２） ７９１１ｉ５
０．０３（１） ＩＧ ８３７
０．０３（２） １４５７９ ０．
０３（２） １８８０４ ０．０１
（２） ２００１ ０．０２（２
） １３０４８ ０．０３（５）
３１０４−６１ ０．０３（５）
１６３ｔ）−０ｆ Ｏ，０Ｌ（５）
２９９０−５８ ０．０４（５）
３０［Ｉ２−［Ｉ２ ０．０５（５）
１８３７−７１ ０．０２（５）
０４４０−５９ ０．０５（３）
５１３５ ０．０３（３）
３１１８＾ ０．０３（５） ２
９７０−５５ ０．０４（５） ８９
２−［ｉｌ ０．０３（５） ３
１５８−６３ ０．０２（２） １３０４８
０．０５（１） ＰＢ
０．０３（３） Ｓ＋２１Ｂ０．
０３（３） ５Ｉ３４ ０．０３（
３） ５Ｉ２１＾ ０．Ｏ２属
・ 種 ＩＥ＋＋ＬｅｒｏｌＪａｃＬｅｒ ｃｌｏａｃａｅＣｎ
ｔｃｒｏｂａｅｔｃｒ ｃｌｏａｃａｅＥｎｔｃｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｃＥｎｔｅｒｏｂａｃＬｅ
ｒ ｃｌｏａｃａｅＥｎｔｃｒｏｂａｃｔｃｒ ｃｌｏ
ａｃａｃＥｎ【ｃｒｏｂａｃｔｃｒ ｃｌｏａｃａｅｃ
ｎｔｃｒｏｂａｅｔｅｒ ｅｌｏａｃａｅＥｎｔｃｒｏ
ｂａｃｔｃｒ ｃ＋ｏａｃａｃＥｎＬｅｒｏｂａｃＬｅ
ｒ ｅｌｏａｃａｅＥｎｔｃｒｏｂａｅｔｃｒ ５ａ
ｋａｚａｋｌｌＥｎＬｃｒｏｂａｃＬｃｒ ５ａｋａｚ
ａｋｉｊＥｎＬｅｒｏｂａｃＬｅｒ ５ａｋａｚａｋ
ｉ ＩＥｎｔｃｒｏｂａｃｔｃｒ ｔａｙｌｏｒａｃＥ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ Ｉ Ｅｓｃｈｅｒｌｃｔｒｔａ ｃａｌｌ Ｅｓｃｈｃｒ ｃｈ［ａ ｃｏｌ Ｉ Ｒｓｃｌ＋ｅｒｌｃｈｌａ ｃａｌ ＩＥｓｃｈｃｒ
ｃｈｌａ ｃｏｌＩ Ｅｓｃｈｃｒ ｃｈｌａ ｃｏｌＩ Ｅｓｃｈｅｒｌｃｔ＋Ｉａ ｃｏｌ ＩＥｓｃｈｃｒ
ｃｈｌａ ｃｏｌｔ Ｅｓｃｈｅｒｌｃｈｉａ ｃｏｌ ＋ Ｅｓｅｈｅｒｉｅｈｌａ ｃａｌ Ｉ Ｅｓｃｈｃｒ ｃｈｉａ ｃｏｌ Ｉ Ｐ、５ｃｈｅｒｉｃｂｉａ ｅｏｌ ＩＩＥｓｃｈｃｒ
Ｉｃｈｉａ ｃｏｔ １ＡＴＣＣその他の特定 寄託番号 番号・符号 ０ｙ ＩＧ ３００ｇ ５ｌ ０３１１ １Ｂ １２４（ＩＩ ｐｉｎｋ） １１［ｉ １Ｑ８（ｖｂｃａＬ） Ｐ−ＣＩ （ｓｏｙ） トＣ１１は＋ｅ−Ｉ Ｓ−Ｃｈ僚ぐ１ １’１ｏｕｒｌ １ｏｕｒ２ ＩＧ ８９８ ＭＣ ＩＧ ３０１２ ５−ｃｈｅｅｓｅ−２ 加１１１０２１０２ Ｏ４１＋ １０２９１１ ＩＧｌｌ １０２０７５ ０Ｄ。 ０．０２ ０．０２ ０．０４ ０．０４ ０．０１ Ｏ１０３ ０，０２ ０，０７ ０，０５ ０，０２ ０，０４ ０，０３ ０，０３ ０，０４ ０，０５ ０，０２ ０，０２ ０，０３ ０，０４ ０，０２ ０，０２ ０，０３ ０，０４ ０，０４ ０，０５ 第５表 排他性パネル 属 ・ 種 Ｐ、ｓｅｔ＋ｅｒｉｃｈｉａｅｏｌｉ ＥｓｃｈｃｒｌｃｈａｃｏｌＩ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ Ｅｓｅｈｅｒｊｅｈｉａ ｃｏｔｉ Ｅｓｃｈｃｒ’ｃｈｉａｃｏｌ Ｆ、５ｃｂｅｒｉｃｌ＋Ｉａｃｏｌ Ｅｓｅｈｃｒｃｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｃｈｌａｃ。 Ｅｓｅｈｅｒｉｃｈｉａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｌｃｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｉｃｌｕａｃ。 １：５ｅｈｅｒｌｅｈｉａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｊｃｈｉａ ｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃ。 ＩＥｓｃｈｃｒｉｅｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｉｃｈｊａｃ。 Ｆ、ｓｃｌ＋ｅｒｌｃｈｌａｃ。 ＩＥｓｃｈｃｒｃｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｌｃｈｉａｃ。 Ｅｓｅｈｅｒｉｅｈｉａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｌｃｈｉａｃ。 Ｅｓｃｂｅｒｌｃｂｌａｃ。 ＩＥｓｅｈｅｒＣｈａｃ。 Ｅｓｃｈａｒｃｈｉａｃ。 Ｆ、５ｅｈｅｒｉｃｈｉａｃ。 １Ｅｓｃｈｃｒｌｃｈｉａｃ。 （プローブ９２０ 、８８０） （続き）ＡＴＣＣその
他の特定 寄託番号 番号・符号 殖Ｉ＋ ！０２７６２ 圓ＩＩ １０２００５ にＩＩ １０３１３３ ）ＩＧｌｌ １０２５６５ ＭＣ１１１０３５８４ ＭＣＩＩ １０１５４４ ＭＣ１１１０２８１！Ｇ ＭＧＨ１０３５８０ Ｖｃｌ＋ １０３６０７ ＩＧｌｌ １０２７０５ １１ｃＨ１０２３１１１８ ）ＩＧｌｌ １０２５２０ ｏ−＋ｕ （ｓｏｙ） ）ＩＣ１１１０２１０２ ｌ４９＋ １０２９７９ ＭＣｌ １０３２８０ 九Ｉ＋ １０４１１０ ４ｌ１４１０３Ｇ９１ ）ＩＣ１１１０３２５３ ＭＣ１１１０２１０２ ７Ｏ６＋ １０１０２７ Ｉ８；ＩＩ １０２４５８ 几Ｉ＋ １０２５２５ ＩｃＩＩ １口３１２９ 関１１１０２９０１ 罵Ｉ＋ １０２３７９ ０、Ｄ。 ０．０６ ０．０６ ０．０４ ０．０Ｇ ０．０７ ０．０６ ０．０４ ０．０９ ０．０Ｂ ０．０７ ０．０６ ０．０６ ０．０３ ０．２２ ０．０５ ０．０７ ０．０８ ０．０４ ０．０７ ０．０５ ０．０５ ０．０５ 第 ５ 表 排他性パネル 属 ・ 種 ＥｓｅｈｅｒｉｃｈｌａｃｏｌＩ Ｅｓｃｈｃｒｉｃｈａｃｏｌｌ Ｆ、ｓｃｌ＋ｅｒｉｃｔ＋ＩａｃａｌｉＩＥｓｅｈｃｒ
ｃｈ’ａｃｏｌｌ Ｅｓｃｈｃｒｉｃｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｌａｃ。 Ｈｓｃｈｃｒ Ｃｈ ａｃ。 ＩＥｓｃｈｅｒｉｃｌ＋ｉａ ｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｅｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｌｃｈｌａｃ。 Ｐ、５ｃｈｅｒｉｃｈｉａｃ。 １Ｅｓｅｈｅｒａｈａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｉｃｈｌａｃ。 Ｐｘｅｂｅｒｌｃｈｌａｃ。 ピ５ｃｈｃｒｌｃｈｌａ ｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｔ＋ｉａｃ。 Ｅｓｅｈｅｒｌｅｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒａｈａｃ。 Ｅｓｃｂｅｒｌｃｈｉａｃ。 １ＥｓｃｈｃｒｌｃｈｌａｃｏｌＩ ＫｌｃｂｓｌｃｌＩａｏｘｙｔｏｃａ ＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｏｘｙＬｏｃａ ＫｌｃｂｓｉｃｌＩａ ｐｎｃｕｓｏｎｉａｃＫｌｅｌ
＋５ｉｃｌｌａ ｐｎｅｕｎ＋ｏｎｉａｅＫｌｅｂｓｉ
ｅｌｌａ ｐｎｅｃｍｏｎｌａｅＫｌｃｂｓｊｃｌＩａ
ｐｎｃｕＩＩｌｏｎｌａｃ（プローブ９２８ 、８８
０） （続き）その他の特定 番号・符号 にＩＩ １０３Ｇ６６ 加Ｉ＋ １０３０８３ 黙１１１０３７６５ ＩＧｌｌ １０３０５４ 篤Ｉ＋ １０３３２７ 篤１１１０２６１３ 圏１１１０３８３４ ）ｃｌｌ １０３９６５ 圏Ｉ＋ １０２１２１ 罵Ｉ＋ １０１０２ ７Ｏ：ＩＩ １０４０１０ ４Ｏ０７１０２９９４ 罵１１１０３６０３ 圏Ｉ＋ １０２８２７ 圓Ｉ＋ １０２６８７ ）ｃｌｌ １０２０２４ Ｃｈ瀉ｅ−２ ＭＣＩＩ １０１０３Ｏ ０８＋１１０２＋０９ 圓Ｉ＋ １０３０１０ １１２（ｓｏｙ） １２ＩＣ Ｇ３０５８ １１７（ｓｏｙ） ＳＩ２２１コ ０、Ｄ。 ０．０３ ０．０３ ０．０３ ０．０３ ０．０５ ０．０４ ０．０３ ０．０４ ０．０３ ０．０３ ０．２ ０．０５ ０．０３ ０．０２ ０．０４ ０．０２ ０．０２ ０．０３ ０．０３ ０．０５ ０．０２ ０．０３ ０．０３ ０．０Ｉ Ｏ３８１ ０，０２ 第 表 排他性パネル （プローブ９２６゜ ８８０） （続き） 第 表 排他性パネル （プローブ９２６ 、８８０） （続き）ＡＴＣＣその
他の特定 ＡＴＣＣその他の特定 Ｌｌｓｔｃｒｉａ ｆｎｎｏｃｕａ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓＬｌ
ｓｔｃｒｌａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｃｎｃｓＬｌｓＬｅ
ｒｌａ ５ｅａｌ ｉｇｃｒｉＬｌｓｔｃｒＬａ ５ｅ
ｅｌ ＩｇｅｒｌＬｉｓｉｃｒｉａ ｗｃｌｓｈｉｍｃ
ｒｌｌ、ｌ５Ｌｅｒｉａ ｖｅｌｓｂｉｍｅｒｌＨｌｃ
ｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ。 ＴＯｒｇａｎｃｌ ｌａ ｍｏｒｇａｎｊ ＩＭｏｒ
ｇａｎｅｌ ｌａ ｎｏｒｇａｎｉ １Ｐａｓｔｃｕｒ
ｃｌ ＋ａ ｇａｌ ｌ１ｎａｒＬＩＩＰａｓｔｅｕｒ
ｅｌ ｌａ ５ｕｌｔｏｃｌｄａＰｒｏｔｅｕｓ ５ｉ
ｒａｂｌｌｌｓ Ｐｒｏｔｃｕｓ ｍｙｘｏｒａｃｌｃｎｓＰｒｏｌｅｕ
ｓ ｐｅｎｎｅｒｉ Ｐｒｏｔｃｕｓ ｖｕｌｇａｒｌｓ Ｐｒｏｔｃｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ Ｐｒｏｖａｄｅｎｃｉａ ５ＬｕａｒＬＩＩＰｒｏｖｌ
ｄｃｎｃｉａ ａｌｃａｌｌｒａｃｉｃｎｓＰｒｏｖｌ
ｄｅｎｃｉａ ａｌｃａｌｌｌ’ａｃｌｅｎｓＰｒｏｖ
ｌｄｅｎｅｌａ ｒｅＬｔｇｅｒｌｌＰｒｏｖｊｄｃｎ
ｃｌａ ｒｕｓｔｌｇｉａｎｌＩＰｓｅｕｄｏａｏｎａ
ｓ ａｃｉｄｏｖｒａｎｓＰｓｃｕｄｏＩｌｏｎａｓ
ａｃｒｇｌ ｎｏｓａＰｓｃＵｄｏ＋ｇｏｎａｓ ｐｉ
ｃｋｃｔｔｉｉｌＧ ３１７１ １Ｃ３２５７ １Ｇ ３１０８ ＩＧ ３３８１ １Ｇ ３３５２ １Ｇ ３２８９ １Ｇ ３２９８ ＩＧ ０３ Ｇ３０６３ ＋９４２７ １Ｇ ３０９８ ９Ｇ９２ ２９９＋４ １Ｇ ９２１１ ０．０２ ０．０Ｉ Ｏ２Ｏ３ ０，０２ ０，０２ ０，０３ ０，０２ ０，０２ ０，０４ ０，０２ ０，０４ ０，０２ ０、Ｏｌ ０．０１ ０゜０２ ０．０３ ０．０２ ０．０３ ０．０２ ＳａｌＩ！１ｏｎｃｌ ｌａ ａｒｌｚｏｎＪａｃＳａ
ｌｍｏｎｅｌ Ｉａ Ｌｙｐｂｉｉｕｒｌｕｎ＋５ａ
ｌＩＩｌｏｎｃｌ ｌａ ｖｃｓｌａｃ。 ３５６Ｂ Ｐ ８５１ ０．０２ ０．０２ ０．０１ （２）Ｄ人シーンマン（モンタナ州立大学、ボズマン。 モンタナ州５９７１７） ＣＤ、 Ａ、 ５ｃｈｌｅｎＩＩａｎｎ （Ｍｏｎｔａ
ｎａ ５ｔａｔｅ Ｕｎｉｖｌ、 ＢｏｚｅｍａｎＭｏ
ｎｔａｎａ ５９７１７）） （３）ｃｐｃ （４）ＧＴＳ、所内の食物試料又は臨床試料から単離（
５）キャサリン・Ｗ・ダネリー（バーモント大学農学部
。 バーリントン、バーリントン０５４０５）［Ｃａ１ｈｃ
ｒｌｎｃ Ｖ、 Ｄａｎｎｃｌｌｙ （Ｕｎｊｖ、 Ｖ
ｃｒｍｏｎｔ、 Ｃｏ１１． ｏｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕ
ｒｅ、 ＢｕｒｌｉｎｇＬｏｎ ＶＴ ０５４０５）
）（６）マサチューセッツ総合病院ボストン、マサチュ
ーセッツ州［ＭａｓｓａｃｈｕｓｃｔＬｓ Ｇｅｎｅｒ
ａｌ １ｌｏｓｐｌｔａ１． Ｂｏｓｔｏｎ、 ＨＡ］
（７）デイベル研究所、マジソン、ウィスコンシン州［
Ｄｃｌｂｃｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、 Ｍａｄｌ
ｓｏｎ、 Ｗｌ）第 表 非−アイソトープ標識でのイエルシニア・食物試験＃３
１．９６＋０１１ ６．４Ｅ◆０８ ６．４Ｅ＋０１１ １．１Ｅ◆０９ ４、ＩＥ◆０８ ５．３Ｅ＋０１１ ＋
によって、よりよく理解されるであろう。 第１ 表 本発明の好適なヌクレオチド配列とイエルシ
ニア・エンテロコリチカ１６ｓ ｒＲＮＡの４５５〜
４７７（この位置番号は大腸菌のものを用いた）の“コ
ア″領域（“ｃｏｒｅ” ｒｃｇｌｏｎ）のヌクレオチ
ド標的配列を、大腸菌（Ｅｓｅｈｃｒｉｅｈｉａ ｃｏ
ｌｌ）（Ｅ、 ｃｏｌｔ）、プロテウス・ブルガリス（
Ｐｒｏｔｃｕｓｖｕｌｇａｒｉｓ） （Ｐｒ、 ｖｕ
ｌｇａ、） 、イエルシニア・エンテロコリチカＡＴＣ
Ｃ９６１０株（Ｙ、 ａｎｔ ９６１０）およびイエル
シニア・エンテロコリチカＲＦ ９５４（Ｙ、 ａｎｔ
９５４）の標的配列に関連する部分の１６ＳｒＲＮＡ
の配列と共に示す。ＲＮＡ配列は５′側から３′方向へ
書き、プローブ配列はＤＮＡで３′側から５′方向に書
いた。プローブ中の小文字のＣは修飾されうるシトシン
残基を示し、修飾基（レポーターグループ）は使用する
アッセイの種類によって結合する場合もあるし結合しな
い場合もある。 ８８０系統のプローブ（８８０，１０６２）をその基礎
となる″コア″領域と共に、それらの°親”配列、Ｙ、
ａｎｔ ９６１０の下に示す。９２６系統のプローブ
（９２６，１１１１，１１１２，１１１３，１０６３）
および９２６の″コア″配列（ｃｏｒｅ ５ｅｑｕｅ
ｎｃｅ）を、“親゛配列（’ｐａｒｅｎｔ″５ｅｑｕｅ
ｎｃｅ） 、Ｙ、 ａｎｔ ９５４の下に示す。プロー
ブ９２７およびその基礎となる“コア”領域をその“親
配列”Ｙ、 １ｎｔｃ ８Ｌ４の下に示す。 プローブ１０７Ｉは８８０ 、９２６ 、９２７のいず
れかと一緒に使用するために設計された検出用プローブ
である。 第２表 イエルシニア株の代表的な試料に対する好適プ
ローブの包括的行動を例示する。 第３表 イエルシニア株以外の代表的な試料に対する好
適プローブの排他的行動を例示する。 第４ 表 実施例１の好適な液体ハイブリッド形成試験
の全体構成と関連した包括的データを提供する。 第５表 実施例１の好適な液体ハイブリッド形成試験の
全体構成と関連した排他的データを提供する。 第６表 本発明の好適な全体構成の巾で、好適プローブ
を使用することによって食品試料中に含まれるイエルン
ニア・エンテロコリチ力を検出したデータを提供する。 ［発明の詳細な説明およびその最良の態様］本発明のプ
ローブを開発するにあたっての第一段階は、イエルシニ
ア・エンテロコリチカに特異的な核酸プローブに対する
標的部位として役立つ可能性のある１６Ｓおよび／また
は２３Ｓ ｒＲＮＡの領域を同定することからなる。 実際問題として、イエルシニア舎エンテロコリチカ以外
のどの微生物が任意の試料中に存在する可能性があるか
を演鐸的に予測することはむずかしい。そのようなイエ
ルシニア拳エンテロコリチ力以外の潜在細菌は数が多い
ので、与えられた任意のプローブ配列が排他的であるこ
との証明は予測できないばがりでなく非常に困難かつ面
倒である。研究および開発の第一段階において、最終的
にプローブを用いて選択することからなる試験試料のす
べての中にどの程度のイエルシニア・エンテロコリチカ
以外の細菌が存在するのかを知らなければならないとい
うその必要性を未然に除去するために、より厳密な規準
を採用した。このためには、イエルシニア種間の、およ
びイエルシニアと他の細胞群との間の系統発生論的関係
に関する知識が当然必要とされる。特に、代表的ではあ
るがイエルシニア・エンテロコリチカとは進化−Ｌ近い
親戚関係にある細菌のｒＲＮＡ （のイエルシニア・エ
ンテロコリチカのｒＲＮＡ）内の相同領域とは］−分に
異なるイエルシニア・エンテロコリチカｒＲＮＡ内の特
定標的領域を同定することができるならば、それに次い
でそれらの配列に対応するプローブを用いてハイブリッ
ド形成アッセイを行なうことによってイエルシニア・エ
ンテロコリチカとその関連細菌との間の違いを識別する
ことができると判断することによって排他性の規準が満
たされるという機能上積極的役割をはたしているがいま
だ立証されていない仮定を採用した。次いで、系統発生
論的観点から、より遠い関係にある生物体のｒＲＮＡ配
列は、その生物体の正確な種属を知る必要はないが、前
述のイエルシニア・エンテロコリチカと進化−ヒ近い関
係にある生物体のｒＲＮＡ配列よりも特定領域の配列が
異なるはずであると推論した。しかしながら、そのよう
な領域が存在するのか否か、もし存在したとしてもｒＲ
ＮＡ内にそのような領域が位置しているかどうかを予測
することはできない。 核酸ハイブリッド形成用プローブの有効標的部位として
働きうるイエルシニア・エンテロコリチカのｒＲＮＡ領
域を同定するための第一段階として、イエルシニア・エ
ンテロコリチカ、イエルシニア・インテルメジア、イエ
ルシニア・クリステンセニイ（Ｙｅｒｓｌｎｔａ ｋｒ
ｉｓｔｅｎｓｅｎｉｌ）、イエルシニア・ブセウドーツ
ベルクロシス（Ｙｅｒｓｌｎｉａｐｓｅｕｄｏ −ｔｕ
ｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）等のｉｅｓおよび２３ＳｒＲＮ
Ａのほぼ全部のヌクレオチド配列を決定した。これらは
イエルシニア属を進化上幅広く代表するものとして独断
的に選択した。ｒＲＮＡのさまざまな部分のヌクレオチ
ド配列は、ｒ ＲＮＡを特定する遺伝子のクローニング
〔マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら、 １９８２．モ
レキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌ
ｏｎｌｎｇ） ニア・ラボラトリ−・マニュアル（Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）、 コールド
◆スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−（Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ ）Ｉａｒｂａｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）
、ニューヨーク、５４５頁〕およびシーフェンシング〔
マキサム（Ｍａｘａｍ）およびギルバート（Ｇｉｌｂｅ
ｒｔ）、 １９７７、プロシーディング・オブ・ザ拳ナ
ショナル・アカデミイー・オブ・サイエンス（Ｐｒｏｃ
ｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌ Ａｃａ
ｄｅｍｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅ）、米国、７４：５６
０−５６４； サンガー（Ｓａｎｇｅｒ） ら、
１９７７、 プロシーディング・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミイー・オブ・サイエンス、米国、 ７４
： ５４０３−５４６７） 、および／または、逆転写
酵素を使ったｒＲＮＡ自身の直接シーフェンシング〔レ
ーン（１，ａｎｃ）ら、 １９８５．プロシーディング
・オブ・ザ・ナショナル・アカデミイー・オブ・サイエ
ンス、米国、 ８２ ： ６９５５−６９５９）のいず
れかの実験室用標準法で決定した。 同定したヌクレオチド配列を互いに比較し、さらにこれ
ら以外のデータとして人手できるｒＲＮＡのヌクレオチ
ド配列、特にこれらと密接な関係にあるモルガネラ（Ｍ
ｏｒｇａｎｅｌｌａ） 、プロテウス（ＰｒＯｌＯｕＳ
）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｏｌｌａ） 、エシェリ
キア（Ｅｓｅｈｃｒｌｃｈｉａ）、およびパスツレラ（
Ｐａｓｔｕｒｃｌｌａ）といった細菌のｒＲＮＡヌクレ
オチド配列、と比較した。これらの細菌種に対して有効
で排他的な特徴を示す可能性を秘めた領域として、第１
表に示すような好適な配列の領域を同定した。 それぞれの核酸プローブに対するさらなる実験的試験が
、上述の望ましい特徴が本当に得られているかどうかを
厳密に証明するために行なわれた：上述の望ましい特徴
とは、即ち、■）エルシニア・エンテロコリチカ以外の
非常に近い関係にある生物体のすべてに対する十分な排
他性、２）エルシニア・エンテロコリチ力株に対する何
月な包括性パターン、３）実際に使用するさまざまなア
ッセイ条件下での標的領域の近づきやすさ、である。テ
ストプローブの排他的および包括的特徴を明らかにする
ために適切と思われる生物体の数は非常に多い〔排他的
特徴に対してはおよそ２２種類の腸管に存在する細菌の
属、６９種類の種および２９種類の明記されていない“
バイオグループ（ｂ４ｏ−ｇｒｏｕｐ）’からなる、フ
ｙ ７−（Ｆａｒｍｅｒ）ら、１９８５；包括的特徴
に対してはイニルシュアの８種類の種およびバイオグル
ープ〕ために、反復戦略を採用して可能性のあるプロー
ブを試験し改良を加えた。プローブは標準的なホスホア
ミダイト法〔カルテルス（Ｃａｒｕｔｂｏｒｓ、 Ｍ、
旧）ら、 １９８３゜ジーン・アプリケーション・アン
ド・アナリシス（ＧＣｎｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｔｓ）、ババス（Ｐａｐａｓ、
Ｔ、 Ｓ、） 、ローゼンベルグ（Ｒｏｓｃｎｂｃｒｇ
。 Ｍ、）、カリクジアン（Ｃｈａｒｌｋｊｌａｎ、 Ｊ、
Ｇ、）編、。 エルセビエル（Ｅｌｓｏｖｌａｒ）出版社、ニューヨー
ク。 第３巻、 １−２６頁〕でアプライド・バイオシステム
（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｌｏｓｙｓｔｅｍ）装置を用いて
慣用的に合成した。 熟知された方法に従って、“ドツトプロット（Ｄｏｔ
ｂｌｏｔ）“分析法をこれら第一世代プローブの包括的
および排他的性質の予備試験のために用いた。よく知ら
れているように、−膜内にドツトプロット分析は核酸あ
るいは核酸集団をニトロセルロース、ナイロン、あるい
は商品として得やすくこの目的に対して特異的な他の誘
導化膜のようなフィルター上に固定化する操作を含む。 ＤＮＡあるいはＲＮＡのどちらでもそのようなフィルタ
ー上に簡単に固定化でき、さらに任意のいろいろな核酸
ハイブリッド形成条件（即ち、厳重条件（Ｓｔｒｉｎｇ
ｅｎｔ ｃｏｎｄｌｔｌｏｎｓ））下で、重要なヌクレ
オチド配列あるいはプローブとのハイブリッド形成を実
際に凋べたり、試験したりできる６厳重条件下で、標的
のヌクレオチド配列とより高い相補的をＨするヌクレオ
チド配列をもつプローブは、低い相補性しかもたないプ
ローブよりもより高いレベルでハイブリッドを形成する
であろう。 ここで用いるオリゴヌクレオチドプローブ（即ち、長さ
および平均塩基組成が３０〜３６のヌクレオチド）の場
合には、ｒＲＮＡ標的とのハイブリッド形成を６０’Ｃ
で１４〜１６時間（０，９ＭＮａＣ１，０，１２Ｍ）リ
ス（Ｔｒｌｓ） −塩酸ｐ＋（７，８。 ６ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１Ｍ ＫＰｏ 、０．１
％ＳＤＳ、 ０．１％ビロリン酸、 ０．００２％
フィコール。 ０．０２％ＢＳＡ、および０．００２％ポリビニルピロ
リジンを含むハイブリッド形成溶液中で）行ない、次い
でハイブリッド形成終了後非結合のプローブを除去する
ための洗滌を６０’Ｃで１５分間（０，０３ＭＮ ａ
Ｃ（１、０，００４Ｍ ｈリス−塩酸ｐＨ７，８，０，
２ｍＭ ＥＤＴＡおよＵ Ｏ，１９６ＳＤＳを含む溶
液で）３回くり返して行なうことが、表中や実施例中に
例示したレベルの特異性および感受性を確保するための
十分な厳重条件であろう。また、このような技術は、（
未精製の）粗細胞溶解液中に存在するＤＮＡあるいはＲ
ＮＡを、核酸の精製なし７に固定化できるという点で白
゛効である〔これをサイトドツト（ｅｙｔｏｄｏｔｓ）
と呼ぶ、例えばマニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｔ、）
、フリッシュ（Ｉ’ｒ１ｔｓｃｈ。 Ｅ、 Ｆ、）、およびサムブローク（ＳａＩＩ＋ｂｒｏ
ｏｋ、 Ｊ、） 。 １９８２、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒＣｌｏｎｌｎｇ）、ア・ラボラトリ−・マニュア
ル（ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）） ｏこ
の後者の研究方法は、任意の個々の生物体の核酸内に存
在するであろう個々のヌクレオチド配列を選択するため
必要な仕事量を太き（減少させ、さらに多数の生物体の
大量スクリーニングを可能にするという点で好都合であ
る。それ故、この方法は多数の生物体に対して核酸ハイ
ブリッド形成用プローブとしての可能性を秘めたプロー
ブを排他的かつ包括的にスクリーニングするのに適した
方法である。 イニルシュア以外の細菌で、潜在的にイニルシュア・エ
ンテロコリチカを含む試料内に存在する可能性のある細
菌の型を１１１示するリストを第３表に示す。また、こ
れらはイニルシュアと非常に近い関係にある多くの属を
表わしていることに注目されたい。上述のように、その
ような幅広い細菌の表現形に対して良好な排他的特徴を
示すプローブは、それより遠い関係にある腸内の微生物
のより幅広いリストに対しても同様にふるまうと予測す
ることは道理にかなっている。 また、これ以外のいくつかの考慮すべき事柄が最適なプ
ローブ配列のデザインの特徴に影響を及ぼす。第一の考
慮すべき事柄はプローブ自身に対するプローブの結合構
造（即ち、分子内相互作用）である。１６Ｓおよび２Ｓ
Ｓ ｒＲＮＡ内の有効な標的領域として可能性のある
領域は、実際上自己相補性の可能性を示す領域によく位
置していることが発見された。その結果、このような領
域に対す。 るプローブもまた自己相補性を示す。プローブと標的配
列との間の相互作用の可能性は標的あるいはプローブの
それ自身との分子内アニーリングを支配するパラメータ
ーと同じ型のパラメーターによって支配されているため
、特に溶液条件下でのハイブリッド形成では、プローブ
の自己相補性はハイブリッド形成のためにプローブ自身
がその標的配列に近づくことを難かしくする可能性があ
る。 このように、プローブの設計上の重要な態様の１つはそ
のような自己相補性を最少にすることである。このこと
は、イエルシニア書エンテロコリチ力に特異的な配列を
最大限利用することとプローブとして満足できる配列と
の間の妥協を余儀なくしている。 プローブ設計上の第二の考慮すべき事柄は包括性の基準
に関することである。好適なプローブとは、適切な排他
的行動をとるが、要求されるすべてのイエルシニア・エ
ンテロコリチカのｒＲＮＡとハイブリッド形成できるプ
ローブである。イエルシニア・エンテロコリチカ種はそ
れ自身重要な表現型の多様性および遺伝子型（以下に示
すようにｒＲＮＡを含む）の多様性を示す細菌からなる
ので、そのような“理想的“プローブの設計は非常に複
雑なものとなる。実際問題として、単一の１万能」なイ
エルシニア・エンテロコリチカのプローブを捜すよりも
、それぞれが有用レベルの包括性と共に適切な排他性を
示すようなイエルシニア・エンテロコリチカに特異的な
プローブをセットで見つける方がより好適である。好適
なプローブのセットが、全体として、大多数あるいはす
べてのイエルシニア・エンテロコリチカを検出し、イエ
ルシニア・エンテロコリチカ以外の細菌を検出しないの
が理想的である。そのようなセットでは、例えば、一方
のプローブが１つあるいは少数の重要なイエルシニア・
エンテロフリチ力株を除くすべての株を検出し、もう一
方のプローブが第一プローブによって見落された少数の
イエルシニア・エンテロコリチカ株のみとハイブリッド
形成するであろう。このように、次に示すプローブが包
括的特性に対する独自の基準をその特徴としているのに
対して、上述の特異的プローブセット″（”ｓｅｔ”）
の概念はプローブ個々の重要性の決定およびアッセイキ
ット（ａｓｓａｙ ｋｉｔ）の構築にあると考えると好
都合であることを認識すべきである。 プローブの設計および分析の最終段階は、理想的には、
実在する（例えば、食物／医療／環境）試料を試験する
こと、およびそれに次いで最終的なプローブセントとし
ての好適なプローブを選択することからなり、そうする
こきによって望ましい特性が現実の分析条件下で最大限
に発揮される。 〔プローブ〕 前述のプローブ選択のための戦略は試料中に存在するイ
エルシニア・エンテロコリチカ細菌を同定するためにｆ
Ｔ効なプローブを数多くもたらした。 表の簡単な説明の中で概説したように、第１表はプロー
ブの配列を代表的なイエルシニア中エンテロコリチカ株
のｒＲＮＡのその標的部位と共に示した。また、プロー
ブの望ましい識別行動の基礎となるイエルシニアψエン
テロコリチカｒ ＲＮ Ａの標的部位とイエルシニア◆
エンテロコリチカ以外の代表的細菌のｒＲＮＡとの［コ
ア（ｃｏｒｐ’） Ｊ領域のヌクレオチド配列の相違点
も示した。 ３つのシリーズのプローブが開発された。３つのプロー
ブとは、それぞれのシリーズのために開発され、後に第
一プローブと名付けられ、かつイエルシニア・エンテロ
コリチカに特異的な″８８０″シリーズおよび“９２６
″シリーズ、ならびにイエルシニア・インテルメジアに
特異的な“９２７°シリーズである。それぞれのシリー
ズの構成物は、長さ、塩基配列、および１８Ｓ ｒＲ
ＮＡ標的配列内のイエルシニア・エンテロコリチカに特
異的なヌクレオチドの位置“配列“ （”ｇｅｏｍｅｔ
ｒｙ″）の幾分かが異なっている。与えられた規定ハイ
ブリッド形成条件下で、それぞれのシリーズ（８８０お
よび９２６）からの１つのプローブは最適な包括的およ
び排他的行動をとるであろう。両方のシリーズからのプ
ローブはまれなる排他性と共に、適切に選択したハイブ
リッド形成条件下でイエルシニア・エンテロコリチカと
ハイブリッド形成する能力をもつ。本発明の８８０ある
いは９２６シリーズのどちらかのプローブはイエルシニ
ア・エンテロコノチカの特定サブセットに対して十分な
包括性を示すが、理想的プローブ組成物とは、いままで
にイエルシニア・エンテロコリチカとして知られている
株のすべてを検出するためにそれぞれのプローブから１
つずつ計２個のプローブからなる混合物を指す。プロー
ブは選択した個々のアッセイの全体構成およびそれに関
連した厳重性の特性に従って選択するのが理想的である
。 第２表に代表的なイエルシニア株からのｒＲＮＡ標的に
対するプローブのハイブリッド形成行動を示す。プロー
ブ８８０シリーズはイエルシニア・エンテロコリチカＡ
Ｔ ＣＣ９ＢＬＯ株の１６３ｒＲＮＡ配列に基づいて
いるが、第２表かられかるようにＡＴＣＣ９ＢＬＯ株に
加えて他の多数のイエルシニア◆エンテロコリチカ株と
も強固なハイブリッドを形成する。９２６シリーズのプ
ローブはイエルシニア・エンテロコリチカＲＦ ９５４
株（家の中より同定されたが、ヒトから同定されたＥ６
４１と同一である、〔ジーマン（Ｓｃｈｉｅｍａｎｎ、
Ｄ、 Ａ、）、モンタナ州立大学、ボーズマン（Ｂｏ
ｚｅｍａｎｎ） 。 モンタナ５９７１７））のＬ８Ｓ ｒＲＮＡ配列を基
本とした。第２表に示すように、９２Ｇプローブは８８
０プローブがハイブリッド形成する株とは全く別個のイ
エルシニア・エンテロコリチカのサブセットと強固なハ
イブリッドを形成する。９２６ブローブより検出された
イエルシニア・クリステンセニイ（Ｙｃｒｓｌｎｉａ
ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎｉｉ）の２株を除いて、プローブ
のどちらかによって検出されたイエルシニア種は他には
なかった。これらの少数の逸脱は医療的見地からは重要
ではない。また両プローブがイエルシニア・エンテロコ
リチカと生化学的には識別するのが難かしいイエルシニ
ア・インテルメジアとの間を識別することに注目された
い。 イエルシニア・インテルメジアは第１表に示す９２７ブ
ローブによってイエルシニア・エンテロコリチカとは明
確に識別できる。 第３表にイエルシニア以外の細菌の“サイトプロット″
（“ｃｙｔｏ ｂｌｏｔｓ”）に対するプローブのハ
イブリッド形成行動を示す。この実験では、プローブを
検出あるいは定母するために３２Ｐで放射（ｉｕ ６識
した。それぞれのプローブシリーズのより短いプローブ
型との交差ハイブリッド形成はこの実験に用いたハイブ
リッド形成条件下ではほとんどあるいは全く認められな
かった。このような条件とは６０℃で１４〜１６時間前
述のハイブリッド形成用溶液中でハイブリッド形成する
ことを指す。 ９２６ブローブシリーズの中で最も長くあまり好適でな
いプローブ型のみがここに示したイエルシニア以外の細
菌との限界反応を示し始めたので、この長さをこのよう
な厳重なハイブリッド形成条件下で使用するための任意
のプローブの長さの上限に規定した。より好適な中間の
長さのプローブ型はｌ＞えられたハイブリッド形成条件
下で望ましい反応パターンを示した。しかしながら、よ
り厳重なアッセイ系を用いる場合には、それらの交差反
応のレベルが下がるのに対してその感受性（ハイブリッ
ド形成能）は高いままであるので、より長いプローブ型
の使用がより望ましくなることはたやす（理解されるで
あろう。 実施例１−一般例： ホモポリマーによる捕獲、二重プローブ、液体ハイブリ
ッド形成系 イエルシニアおよび／またはイエルシニア以外の細菌の
培養を適切な培地で行ない、次いで核酸を多数の適切な
溶解剤のうちの任意のもの（例えば、ＮａＯＨ、グアニ
ジン塩、洗剤、酵素処理、あるいはこれらのうちのある
組合わせ）によって遊離させる。ハイブリッド形成は２
つの異なるプローブあるいはプローブのセットを用いて
行なわれ、両方がそうである必要性はないがこれらのう
ちの少なくとも１つは検出しようとする生物体に特異的
でなければならない。本発明の実施例では、イエルシニ
アφエンテロコリチ力に特異的な″捕獲”プローブ、８
８０あるいは９２６は酵素的にその３′末端に２０〜２
００のデオキシアデノシン（ｄＡ）残基の尾を付けられ
ており、その報告プローブ１０７１は、捕獲した標的分
子の検出用として使用される放射性リン（Ｐ−３２）あ
るいは他の小さなリガンド（例えばフルオレセインある
いはビオチン）で化学的あるいは酵素的のどちらかで標
識されている。 一般的には培養／増殖に次いで、試験試料中に存在する
細菌を小数の試験管に移す。細菌を溶解し、捕獲用プロ
ーブおよび検出用プローブを加え、すでに述べたような
適切な溶液中、適切な温度でハイブリッド形成を進行さ
せる。次いで標的−プローブ複合体を含む溶液を長さ１
５〜３０００のデオキシデミジンホモポリマーのヌクレ
オチドを結合した表面に、ｄＡおよびｄＴ間にハイブリ
ッド形成が起こるような条件下で接触させる。本発明の
実施例では、ｄＴは標的／プローブ溶液内に沈んだプラ
スチックの“計深棒（ｄｉｐｓｔｉｃｋ） ’に結合し
ている。もしイエルシニア・エンテロコリチカのリポソ
ームＲＮＡが試験試料中に存在するならば、ｄＡ尾のつ
いたイエルシニア・エンテロコリ千カー特異的捕獲用プ
ローブは存在する標的のｒＲＮＡ配列とハイブリッド形
成し、さらには計深棒をも捕えるであろう。ハイブリッ
ド形成しなかった核酸および細胞砕片を洗い流し、ｄＡ
ｄＴ二重らせんで表面にくっついた捕獲されたＤＮＡ
−ＲＮＡ複合物を遊離させた。正しい標的核酸が存在す
る場合のみ、報告用プローブもまた、相互作用の鎖−捕
獲用表面−ｄＴ：ｄＡ−捕獲用プローブ：標的：報告用
プローブで計深棒に結合する。次いで、リガンドで誘導
化（例えばフルオレセイン化）した報告用プローブ結合
物を、リガンド結合剤−酵素複合体（例えば、抗フルオ
レセイン（ａｎｔｌ−ｆ’１ｕｒｏｓｃｅｆｎ） ：ア
ルカリホスファターゼ、ストレプトアビジン（ｓｔｒｃ
ｐｔａｖｌｄｌｎ） ：西洋わさびのペルオキシダーゼ
等）の添加によって検出する。次いで、検出用複合体が
特異的に結合できる条件下でインキュベーション（１ｎ
ｃｕｂａｔ ｔｏｎ）し、非結合酵素を洗って除去し、
色原体基質（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ５ｕｂｓｔｒａ
ｔｅ）を加えて次いで発色させ（代表的には２０〜３０
分間）、さらに任意の発色終了溶液を加えて、発色を比
色定量で測定する。 この測定値の読み（代表的には０．２〜２．０のＯ，Ｄ
。 単位の範囲）を陰性の対照標準のレベルと比べ、閾値あ
るいはカットオフ値を設定して、実験レベルで″意味の
ある“定量を行なった。第４表および第５表に、いろい
ろなイエルシニア（第４表）およびイエルシニア以外（
第５表）の細菌の純水培養物を用いた、そのような実験
の１つの結果を示した。 実施例１−具体例 毎日のあるいは肉製品の試料に対して、試料中のイエル
シニア・エンテロコリチカを最初に増殖させるために、
２５ｇの食物試料を２２５ｃａｌのイエルシニア増殖用
培地（Ｐ Ｓ Ｂ Ｂ、ペプトン−ソルビトール−胆汁
−培地：蒸留水１Ω中リン酸ナトリウム（二塩基） ８
．２３ｇ、リン酸ナトリウム（−塩基）１２ｇ、胆汁塩
＃３を１．５ｇ、ソルビト−ル５ｇ、ペプトン１０ｇ〕
に加えた。混合物を個々の試料の種類にふされしい方法
として混合機あるいはｓｔｏｍａｃｈｅｒを用いて均一
化し、次いで容器中で２０〜２８時間、最も好適には２
４時間、２０〜３５℃の間で、最も好適には３５℃で・
インキュベーションした。 環境試験では、綿棒あるいはこれ以外の環境試料を２５
ｍ１（あるいは必要があればより人容蛍）のＰＳＢＢを
含有するフラスコあるいは容器内に入れ、２０〜２８時
間、最も好適には２４時間、２０〜３５℃の間で、最も
好適には３５℃でインキュベーションした。 次いですべての種類の試料に対する二度目の増殖を行な
った。最初の増殖培養液をインキュベーターから取り出
し、より混合した。最初の増殖培養液から１ｍ１（ある
いはｌｏｍｌ）を１０ｍ１ （あるいは１００ｍ１）の
ＰＳＢＢを入れた試験管あるいは容器に移し、２４±４
時間、２０〜３５°Ｃ１最も好適には３５℃でインキュ
ベーションした。 ０．４５ｍ１の培養細胞を０．０５ｍ１の溶解用溶液（
１，２５Ｎ−ＮａＯＨ）に加え、室温（１５〜３０°Ｃ
）で５分間インキュベーションすることによって処理し
た。 細胞溶解液に０．１ｎ＋Ｉの中和用緩衝液（ＫＰＯ４：
Ｎ ａ Ｐ Ｏ４＝ １ ： １．４ Ｍ ）を加えて
中和した。 それぞれの試料から遊離した核酸に０．０５ｍ１の特異
的捕獲用および検出用プローブのセット（１゜４〜２．
８ ｍｇ／ｍｌの好適な捕獲用プローブのセット８８０
／９２Ｇ 、 ８８０／９２Ｇシリーズのプローブとは
異なる組合せでも使用できる；および２〜４ｍｇ／ｍｌ
の検出用プローブ１０７１）を加えて、遊離した核酸を
検出した。捕獲用計深棒のセットを細菌溶解液および特
異的なプローブのセットを入れた試験管内に入れた。中
身を６５℃水浴中で６０分間インキュベーションし、特
異的な捕獲用および報告用ブ０−ブと標的核酸とのハイ
ブリッド形成、ならびにこれらの特異的ＤＮＡ／ｒＲＮ
Ａハイブリッドの計深棒への捕獲を可能にした。 ハイブリッド形成後、計深棒はその活性部分をおおうた
めに十分量の洗滌溶液（５０ｍＭ）リスｐＨ７，５、１
５０ｍＭ ＮａＣｇ、２ｍＭ ＥＤＴＡ。 および０．１％ツイーン（Ｔｗｅｅｎ） ２０）を入れ
た洗滌用容器の中に：１′深棒を浸すことによって洗滌
した。さらにこの操作を新しい洗滌溶液中でくり返した
。 洗滌した＝１深棒を洗滌用容器から取り出し、吸い取り
紙で吸い取って（ｂｌｏｔ）乾燥させ、０．７５ｍ１の
抗体−酵素接合体（洗滌溶液で希釈した抗フルオレセイ
ン（ａｎＮ −ｆｌｕｏｒｃｓｃｃｆｎ）−西洋わさび
ペルオキシダーゼ）を入れた試験管のセットの中に入れ
、室温で２０分間インキュベーションした。 抗原−抗体反応を起こさせた後、計深棒を試験管から取
り出し、上述の２つのパラグラフに述べたのと同じ方法
で洗滌し、吸い取り紙で吸い取って乾燥させた。計深棒
を基質−色原体混合物を入れた標識用試験管のセットの
中に入れ、さらに室温で２０〜３０分間インキュベーシ
ョンした。次いで計深棒を取り出し、発色段階を０．２
５ｍ１の４Ｎ塩酸を加えることによって終了させた。試
料の光学濃度を比色定理した。 通常、（イエルシニア・エンテロコリチカ以外の細菌よ
り選択した細菌から調製した）３種類の陰性対照標準の
平均値を得、３種類の陰性対照標準の平均αＤ、Ｘ２，
５に等しい値をカットオフ値として選んだ。高い０．
Ｄ、値の試料チューブをイエルシニア・エンテロコリチ
カ陽性と考え、低いＯ，Ｄ。 値のそれにはイエルシニア・エンテロコリチカが存在し
ないと考えた。結果を第６表に示す。 本発明の説明はｒＲＮＡの検出に関して触れたものだが
、ここに記載したプローブおよびここに記載したそれら
に対するプローブの相補性はまたｒＲＮＡをコードした
遺伝子（ＤＮＡ）を検出するためにもＧ効であり、従っ
てそのようなプローブはここに記載したプローブと等価
であると考えられ、本発明の精神および範囲ならびに特
許請求の範囲内に倉まれることは容易に理解されるであ
ろう。 第２表 イエルシニアー包括性ドツトプロットデータ属・種 Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｊｃａ （ｃ）Ｙ、
ｅｎＬａｒｏｅｏｌｌＬｌｃａＹ、 ｃｎｔｃｒｏ
ｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ＩｔｊｅａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｅｏｌｆｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ＩＬＩｃａＹ、 ｅｎＬｅ
ｒｏｃｏｌｉＬｊｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｉｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｃｒｏｃｏｌｉＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｅｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ［ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｅ
ｒｏｃｏｌｌＬｉｅａ Ｙ、 （！ｎｔｏｒｏｃｏｌｌｔｌｅａＹ、 ｃｎＬ
ｃｒｏｃｏｌ １ｔｉｃａＹ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏｌ
ｌＬＩｃａＹ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １ｔ！ｃａＹ、
０ｎＬＱｒＯＣｏＩＩＬＩｃ、ａＹ、 ｅｎｔｅｒｏ
ｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ＩｔｌｃａＹ、 ｅｎ
ＬｅｒｏｃｏｌｌＬＩｃａＹ、 ｅｎｔｃｒｏｃｏｌｌ
ｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬＩｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｊｃａ 株 ７Ｉ５ ＡＨＵ５４ ＭＯ９８ ＥＭＯ９８ ＭＯ９９ Ｍ１０４ 開１０５ ＭＩＯＧ Ｍ１０７ ｔ；Ｍｉｉｇ ＧＧＩ 起源 ８８０ （１） ＋１４＋ （１）＋＋← （１） ＋＋＋＋ （１）＋＋＋＋ （１） 十＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （４） ＋＋＋＋ （３） ４＋１−＋ （２）＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２） ＋−１−＋＋ （２） ＋＋）＋ （２）＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２）←→ （２）＋＋→ （２） ＋＋＋＋ （２）＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２）←→ （２）＋＋＋＋ （２） ＋＋＋＋ （２） −→→ ２Ｇ 第２表 イエルシニアー包括性ドツトプロットデータ（続き）属
・種 Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌＪｔｌｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｅｏ＋ ＩｔｌｅａＹ、ｃｎＬｃｒ
ｏｃｏｌ Ｉ ＬｌｅａＹ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔ
ｌｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ ＩＬＩｃａＹ、 ｃｎＬ
ｃｒｏｃｏｌｉＬｉｃａＹ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １
ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬＩｃａ ＵＮＫＮＯνＮ（未知細菌） Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌＨＩｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｉｃｒｏｅｏｌＨＩｃａ ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏＩＩＬＩｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒαカｒｒｔｆｃａ ＵＮＫＮＯ’１ｌＮ（未知細菌） Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｊｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｃｏｌ ＩＬＩｃａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏＩｉＬｉｅａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｃｏｌｊｔｌｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、ｃｎＬｃｒｏｃｏｌ ｌ ｔｉｃａ株 １シロ７５ Ｉシ８４９ ２Ｍ１１７ ＥＭ１２７ Ｈ１３０ ［：Ｇ４１ Ｆ、７８１ ＥＭ１２８ Ｂ１７ ］Ｂ８３１ 開０９５ ＭＯ９７ Ｍ１００ ＭＩＯＩ Ｍ１０２ ＭＩ０３ ２Ｂ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ 第 り 表 イエルシニアー包括性ドツトプロットデータ（ｖｃき）
λ） 表 イエルシニアー包括性ドツトプロットデータ（ｖｃき）
Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ５ｎＬｐｒｏｅｏｌｉＬＩｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｃ
ｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｌｆ、１ｃａｙ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌ １ｔｊｃａＹ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｉ
ＬｉｃａＹ、 ｅｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａｙ、ｋｒｌｓｔ
ｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｃｎｓｃｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｌｓｔｅｎｓｅｎｊｌ Ｙ、 ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎｌＩ Ｙ、 ｋｒｌｓＬｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｃｎｓｃｎｉｉ Ｙ、ｋｒｊｓｔｃｎｓｃｎｌｌ Ｙ、 ｋｒＪｓｔｅｒ＋５ｅｎｌｌ Ｙ、 ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎｉｌ Ｙ、 Ｉ’ｒｅｄｅｒｌｋｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｒｒｅｄｅｒｉｋｓｅｎｌｌ Ｙ、 ａｌｄｏｖａａ Ｙ、 ｒｕｃ、ｋｅｒｌ Ｙ、 ｒｕｃｋｃｒ＋ Ｙ、 Ｉｎｔｃｒｍｃｃｌｌａ Ｙ、ｉｎｔｅｒｍｅｄｌａ Ｅ６８３１？ ＥＩＩ［１２０ ＴＡ削６１ １？ｌ’９５３ Ｆ９５４ Ｅ８１２ ５２３Ｇ ｌＩｎ２７ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ Ｙ、 ｊｎｔａｒｍｃｃｌｉａ Ｙ、 ｉｎｔｃｒｍｃｄｉａ Ｙ、ｉｎｔｃｒｍｃｄｉａ Ｙ、 １ｎｔｃｒｍｅｄｌａ Ｙ、 ｐｓｅｕｄｏＬｕｂｅｒｃｕｌｏｓｌｓＹ、 ｐ
ｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｌｓＹｃｒｓｌｎｉａ
ｓｐ。 ２！１９０９ 奸←−陽性対照標準レベルのハイブリッド形成←→−強
いハイブリッド形成 ←−弱いが容易に検出可能 十−辛うじて検出可能 ｍ−ゼロ （注） ：起源の欄の数字はそれぞれ次の意味を表わす。 （１）ＡＴＣＣ （２）Ｄ人シーンマン（モンタナ州立大学、ボズマン。 モンタナ州５９７１７） （Ｄ、 Ａ、 Ｓｃｈｌｅｎｍａｎｎ （Ｍｏｎｔａｎ
ａ ５ｔａｔｅ Ｕｎｌｖ、 、 Ｂｏｚｅｍａｎ）４
ｏｎｔａｎａ ５９７１７）） （３ン ＣＤＣ （４） ＧＴＳ、所内の食物試料又は臨床試料がら単離
（５）キャサリン・Ｗ・ダネリー（バーモント大学農学
部。 バーリントン、バーリントン０５４０５）〔Ｃａｔｈｅ
ｒｌｎｅ Ｗ、 Ｄａｎｎｅｌｌｙ （ＩＪｎｌｖ、
Ｖｃｒｒａｏｎｔ、 Ｃｏ１１． ｏｆＡｇｒｉｃｕｌ
ｔｕｒｅ、 Ｂｕｒｌｌｎｇｔｏｎ ＶＴ ０５４０５
） ）第３ 表 イエルシニア 排他性ドツトプロットデータ 第 表 イエルシニアー排他性ドツトプロットデータ（続き）７
２（ｄｒｋ、 ｐｎｋ） ４７−２４（ｌａｃｅ） ４’Ｊ−２４（ｆａｃ−） ＾π１１３３１３ ＡＴＣＣ２９９０３ Ａ１ｔ’Ｃ１１７０（＋ ＡＴＣＣ２９９２９ ＡＴＣＣ２９’１２８ ＾πｒＺ９９３（Ｉ ｌ１ｇＡ ｌ０３Ｂ ２ｌ−６４ ４（ｉｏ−０１ １シ、ｃｏｌｌ Ｅ、ｃｏｌｌ ＩＥ、ｅｏｌｌ Ｓｈ、 ｄｙｓｃｎｔｃｒｌａｃ Ｓｈ、 ｒｌｃｘｎｅｒｌ Ｓｈ、赫）ｃｌｌｌ Ｓｔ、、 ｂｏ）’ｄｌｌ Ｃ１３ Ｓｈ、 ｂｏｙｄｉｌ Ｃｌ０ Ｓｈ、 ５ｏｎｎｅｔ Ｃ，ｒｒｃｕｎｄｌｌ Ｃ，ｒｒｃｔ＋ｎｄｉｌ Ｃ，ｒｒｃｕｎｄｌｌ Ｃ，ｒｒｃｕｎｉｌｌ Ｕ、 ｒｒｅｕｎｄｌｌ ＾Ｔｃｃ２５４０［ｔ ＡＴＣＣ２５４０５ Ｓ１２１［３ 円 ＾π：Ｃ２９９１７ ＡＴＣＣ２９９１５ Ｃ，ｕａｌｏｎａＬＩｃｕｓ Ｃ，ｕａｉｏｎａｔｌｃｕｓ Ｃ，ｕａｌｏｎａＬｌｃｕｓ Ｅ、 ａｇｇｌｏｍａｒａｎｓ Ｐ：、 ａｇｇｌｏｉｃｒａｎｓ Ｅ、 覗１ａｓｅｒａｎＳ （２）Ｅ、ａｇｇｌｏｓｅｒａｎｓ ＾ＴＣＣｇ０９０ Ｆａｎｎｉｎｇ １ 「ａｎｎｉ口ｇ２ Ｆａｎｎｌｍ ３ Ｆａｎｎｉｎｇ ４ Ｆａｎｎｉｎｇ ｓ ｆｒｅｕｎｄｌｌ ｒｒｃｕｎｄｌｌ ｒ ｒｅｕｎｄ Ｉ １ ｒｒｃｕｎｄｌｌ ｒ ｒｅｕｎｄ Ｉ Ｉ ｒ ｒｅｕｎｄ ｌ １ ｄｌｖｃｒｓｕｓ ｄｌｖｅｒｓｕｓ ＡＴＣＣ１３Ｑ４１１ （２） ε、 ａｃｒｏｇｃｎｃｓ 第３表 イエルシニア 排他性ドツトプロットデータ（続き） ＡＴＬ”ｌ？３３０７２ １０８（ｗｈｅａｔ） Ａ刊：’Ｃ２９５４４ νｈｅａｔ ＾πｎ３３０２８ ＡＴＣＣ３５３＋７ ６９（Ｉ ｔ、ｐｎｋ） ７２（ＩＩａｕｖｅ） １０１（ｄｒｋ、ｐｎｋ） ＡＴＣＣ１３８１１３ 人π℃２９９３９ Ｉ２１Ｃ １？ｒ’５０１Ｂ ＾ＴＣＣＩ３１１１２ ＾、ＴＣ’Ｃ３３５３１ ＡＴＣＣ３３２５７ Ａπ’ＣＩ ＋２９［１ １３４（ｂｌａｃｋ） １１７（Ｉａｅ−） ＾且：Ｃ２５９３３ ＡＴＣＣ２９９０６ ＾ＴＣＣ７００２ １１８Ｂ ＲＩ’９Ｇ９ １３２（ｌａｃ−） ！Ｅ、ａｓｎ１ｇｃｎｕｓ Ｅ、 ５ａｋａｚａｋｌｌ ＩＥ、 ５ａｋａｙ、ａｋｌｌ Ｅ、 ｓｐ、ｃＤｃ１９ Ｅ、 ｇｃｒｇｏｖｌａａ Ｅ、Ｌａｙｌｏｒａｅ Ｋ、ｐｎｃｙ＋ｏ口Ｉａｃ Ｋ、ｐｎｅｕｍｏｎｉａｓ Ｋ、 ｐｎｃｕｓｏｎｌａ。 Ｋ、ｐｎｃｕｍｏｎｌａｃ Ｋ、 ｐｎｅｕｍｎｌａｅ Ｋ、 ＋ｏｘｙｔｏｃａ Ｋ、 ”ｏｘｙＬｏｃａ” Ｋ、 ｏｘｙＬｏｅａ に、ｐｌａｎｔｌｃｏｌａ に、 Ｌｅｒｒ＋ｇｅｒ＋ａ Ｋ、 ｏｚａｅｎａ。 Ｐ、 ｍ１ｒａｂｌｌｌｓ Ｐ、 ｇｌｒａｂｌｌｌｓ Ｐ、 ５ｌｒａｂｌｌｌｓ Ｐ、 −１ｒａｂｉｌｌｓ Ｐ、 ｇｌｒａｂｌｌｌｓ Ｐ、 ｖｕｌｇａｒｌｓ Ｐ、ｖｕｌｇａｒｌｓ Ｉｌ、 ａｌｖｅｌ １１、 ａｌｖａｌ ＋／− 第３表 イエルシニア 排他性ドツトプロットデータ（ｖｃき）１？Ｐ９５４ にド９５５ Ｆ９７２ １１３（ｍａｕｖｅ） １０１ｔ（ｌａｃ−） ＋０９７７ Ｇ９１１１ ４７−２４（Ｉａｃ−） １３４（Ｉａｅ−） ＾ＴＣＣ８０７１ ＡＴＣＣ９ｇ８８ ＾１１）Ｃ２７７９０ ＡＴｔｃ３３（ｉ７３ ＾πＤ２９９４４ ＡＴＣＣ２９９１４ ＾’ＩＩＸ：ｇ３７ ＾πｎ１９４１１１ Ｐ７８１ Ｆｌ１９０ ＋０３２４３ Ｆ９０５ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬＩｅａ １８２５Ｐａｓ
、 ５ｕｔｏｃｌｄａ Ｓｅｒ、ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ Ｓｅｒ、 ｃｘｌｏｒｌ ｒｅｒａ シｒ、 ｓｐ。 Ｐｓ、 ｓｐ。 Ｓｈ、 ｂｏｙｄｌｌ （：ＩＯ Ｅ、 ｃｏｌｌ ｓｐ。 Ｅ、 ｃｏｉｌ ｓｐ。 Ｍ、 ｍｏｒｇａｎｌｌ Ｍ、 ｍａｒｇｎｉｉ Ａ、 ｐｕｔｒｏｒａｅｌｅｎｓ Ｐｒｏｖ、ａｌｃａｌｌｒａｃｌｃ＋＋５Ｐｒｏｖ、
ａｌｃａｌｌｆａｃｉｅｎｓＰｒｏｖ、 ｒｕｓｔｌｇ
ｌａｎｌｌ Ｐｒａｙ、 ｒｕｓｔｌｇｌａｎｌｌ Ｐｒｃｙｖ、 ｓＬｕａｒＬＩＩ Ａｃｒｏｍｏｎａｓ Ｉａ １１３７ Ｈａｅｓｏｐｈｌｌｕｓ ＩｎｆｌｕｅｎｚａｓＳ、
１ｕｅｌａｎｌａ Ｓ、 ｂｒｏｏｋｒｌｃｌｄ Ｓ、 ｓｐ、 （ＣＤＣ２２６９［Ｖ］）Ｓ、ｓｐ、（
（Ｅ１９２５［Ｖゴ） Ｓ、 ｓｐ、（ＣＤＣ２２２９［ＶＩ］）Ｓ、 ａｒｌ
ｚｎｎａｅ Ｙ、 Ｉｎｔｃｒ＊ｃｄｌａ ＋／− 第４ 表 イエルシニアパネル （プローブ８８０．プローブ９２６混合）個々のプロー
ブ （ドツトプロット） Ｙ、 ＱｎｔＯｒ（ＸＯｌｌｔＩＣａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｉＬＩｃａ Ｙ、 ０ｎｔ（！ｒｏｅｏＩＩｔｋａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｉＬｉｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌｉｔｌｅａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｉＬＩｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｉｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｃｒｏｃｏｌｉｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌｉＬｌｃａ ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｅｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｅ
ｒｏｅｏｌｉＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｌｃａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｅｏｌｉｔｌｃａ ｙ、 ｃ’ｎｔＯｒｏｃｏｌＬｔｌｃａ（ｃ） ＥＩ３Ｇ３ ＡＭＵ５４ ＭＯ９６ Ｉ胴０９８ ＭＯ９９ ＥＭ１０４ Ｍ１０５ １’：ＭＩ０８ ＭＩＯ７ Ｍ１１８ Ｅ７０１ ＢＢ Ｉ ２．２ ２．２１ ２．１６ ２．１２ １．８ １．８５ ２．０８ １．８６ １．５３ １．５７ １．０９ １．５２ １．５１ １．１４ １．９４ ０．５３ １．４７ １゜９４ ２．０３ ２．１３ ２．１２ ２．１９ ２．１２ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋十 個々のプローブ （ドツトプロット） 表 イエルシニアパネル （プローブ８８０．プローブ９２６混合）（続き） 個々のプローブ （ドツトプロット） Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌＬＩｃａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｅｏｌ １ｔ１ｃａＹ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔ
ｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌ １ＬｉｃａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｃｒｏｃｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｅｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ ＵＮＫＮＯＶＮ（未知細菌） Ｙ、 ＣｎｔＱｒＣＸｊ）ＨｔＩＣａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬＩｃａＹ、 ｅｎｔｃ
ｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ Ｙ、 ａｎＬｅｒｏｃｏｌｌｔｌｅａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌむ１ｅａｙ、 ｅｎｔｅ
ｒｏｅＯ！ＩＬｉｅａ ＵＮＫＮＯＷＮ（未知細菌） Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｅｏｌ １ｔｌｃａＹ、 ｅｎＬｅ
ｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｃｏｌｌｔｌｃａ ビ８２９ Ｅｇ３９ ＭＩ１７ ＥＭ１２７ Ｅ用３０ ７ＧＩ Ｍ１２１１ ２．０２ ２．０ １．８８ １．８７ Ｉ、７７ ２．０４ １．９６ １．８６ ２．２２ １．６ ０．６３ ０゜５４ １．０１ ０．８３ ０．７２ ０．８ １．２８ １．１３ １．１ ０．９１ １．４３ １．６３ ＋÷す＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ 十＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ Ｙ、 （！ｌ１ｔｅｒＯｅＯＩＩｔｌｅａＹ、 ｅｎ
Ｌｅｒｏｃｏｌｌｉ、Ｉｃａｙ、 ｅｎｔｃｒｏｃｏｌ
ｌｔｉｅａ Ｙ、 ｃｎＬｃｒｏｃｏｌｉＬＩｃａ ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｃｏ目ｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｆｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｅｒｏｅｏｌｉｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｊｔｌｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｉＬＩｃａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｅｏｌｌｔｌｃａ Ｙ、 ｃｎＬｅｒｏｃｏｌｉＬＩｃａ ’ｆ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌｌｔｌｃａＹ、 ｃｎｔｃ
ｒｏｃｏｌ ＩｔｆｃａＹ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬ
ｉｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｏｅｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌｔｉｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｅｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｃｎｔｃｒｏｃｏｌｌＬＩｃａ Ｙ、 ｅｎＬｅｒｏｃｏｌｌＬｉｃａ Ｙ、 ｅｎｔｅｒｃｘｚｌ １ｔｉｅａＹ、 ｋｒｌｓ
ｔｃｎｓｃｎｊｌ ＥＸ（１９５ 開０９７ Ｐ、Ｍｌｏｏ ＥＭＩＯＩ Ｍｉ０２ ＰＭ＋０３ Ｅ８６３１？ Ｐ、ｌｌｌ３２１） ｌｌｌ９ １００７ＴＡ １ １？Ｐ９５３ Ｆ９５４ に７４０ に７４１ ２．０３ １．０２ １．５ １．３５ １．７５ ０．８８ ０．９５ １．２５ ２．０ １．０５ １．５１ １．４Ｂ １．５１ １．９Ｇ ２．０７ １．９５ １．８８ Ｊ、７８ Ｉ、９３ ２．０２ ２．１６ １．９８ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋→十 ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ４＋＋＋ ÷ｔ＋◆ 第４表 イエルシニアパネル （プローブ８８０．プローブ９２８混合）（続き） 個々のプローブ （ドツトプロット） 第４表 イエルシニアパネル （プローブ８８０．プローブ９２６混合）（続き） 個々のプローブ （ドツトプロット） Ｙ、 ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎ［Ｉ Ｙ、 ｋｒｉｓＬｅｎｓｅｎｉｌ Ｙ、 ｋｒｌｓｔｃｎｓｃｎｌＩ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｅｎｓｃｎｊｌ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓｔｃｎｓｃｎｉｉ Ｙ、 ｋｒｉｓＬｅｎｓｅｎｉｉ Ｙ、 ｋｒ＋５ｔｅｎｓｅｎｌ＋ ’ｌ’、 Ｉ゛ｒｃｄｃｒｊｋｓｃｎｉｌ〜’「ｒｔｖ
ｌｅｒｉｋｓｅ＋山 Ｙ、 ａｌｄｏｖ；ｔｃ Ｙ、 ｎｒｃｋＱＭ Ｙ、 ｒｕｅｋｅｒｉ ｙ、 ｊｎｔｃｒｍｅｄｉａ Ｙ、 ｉｎｔｃｒｍｅ＋ｌ１ａ Ｙ、 １ｎｔｅｒ＋＋＋ｅｄｊａ Ｙ、 ｉｎｔｃｒｍｃ＋ｆｌａ Ｙ、 ｉｎＬｅｒｍｃｙｌｉａ Ｙ、 Ｉｎｔｃｒａ＋ｃｄ！ａ Ｙ、 ｊｎｔｃｒｍｃｄｉａ Ｙ、 ｐｈｉ ｂｍｉｒａｇｉａ Ｙ、 ｐｓｃｕｄｏｔｕｂｃｒｃｕｌｏｓｌｓ３Ｇ３８ Ｅ７０９ Ｅｇｌｆ３ ３Ｇ４１ ９９０ｇ １ｌＢ２７ ＥＩＩＩ３１３ ［８２２ Ｅ８２５ ０．０２ ０．０３ ０．０４ ０．０３ ０．０６ ０．０８ ０．０９ ０．０３ ０゜０５ ０、口４ ０．０４ ０．０４ ０．０２ ０．０３ ０．０２ ０．０９ ０．０２ ０．０２ ０．０４ ０．０５ ０．０２ 十←十−陽性χ・１照標準レベルのハイブリッド形成Ｈ
→−強いハイブリッド形成 ←−弱いが容易に検出可能 十−辛うじて検出「１工能 一一ゼ ロ （注）：起源の欄の数字はそれぞれ次の意味を表わす。 モンタナ州５９７１７） ［Ｄ、 Ａ、 ５ｃｈｊｃｒｕｉａｎｎ （Ｍｏ
ｎｔａｎａ ５ｔａｔｅ Ｕｎｌｖ、、 Ｂｏｚ
ｃｍａｎＭｏｎｔａｎａ ５９７１７）） ＣＷｏｒｃｅｓｔｅｒ Ｍｅｍｏｒｌａ！ １ｌｏｓ
ｐｉ Ｌａｌ 、 νｏｒｅｅｓＬｅｒ、 Ｍ＾ノ
第５表 排他性パネル （プローブ９２８ 、８８０） 第５表 排他性パネル （プローブ９２６゜ ８８０） （続き） 属・種 Ａｃａｌｌｇｃｎｃｓ ｄｃｎｌｔｒ１１’１ｃａｎｓ
＾ｃｉｎｅＬｏｂａｃＬｅｒ ｃａｌｃｏａｃｅＬｉｕ
ｓ＾ｅｉｎｅｔｏｂａｅＬｆ３ｒ ｃａ＋ｅｏａｅｅｔ
ｔｕｓ八ｃｉｎｃｂａｃｔｃｒへ １ｏｖｂｂｉｃＡｅ
ｒｏａｉｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉ ｌｉａ＾ｅｒｏ
Ｉｌｏｎａｓ ５ｏｒｂｌａ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｃｒｃｕｓ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｌｃａｎｓ Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ ＣＩ Ｌｒ０１）ａｅＬｅｒ ｄｌｖｅｒｓｕｓＣｌｔ
ｒｏｂａｅｔｅｒ ｒｒｅｕｎｄ １ｃｔｔｒｏｂａｃ
ｔｃｒ ｆｒｃｕｎｄ’１ＣＩＬｒｏｂａｅＬｅｒ ｒ
ｒｅｕｎｄｌｉＣＩｔｒＯｂａＣｔｃｒ ｒｒｃｕｎｄ
ｉＣｔｒｏｂａｃｔｃｒ ｒｒｃｕｎｄｉｉＣｉＬｒｏ
ｂａｃＬｅｒ Ｉ’ｒｅｕｎｄｉｌＣｔｒｏｂａｃｔｃ
ｒ ｆｒｃｕｎｄｌＩＣｉＬｒｏｂａｃＬｃｒＩ’ｒｅ
ｕｎｄｉｌＣ１ｔｒｏｂａｅｔｅｒ ｆ’ｒｅｕｎｄｉ
ｉＣｔｒｏｂａｃｔｃｒ ｒｒｃｕｎｄ １ＣＩＬｒｏ
ｂａｃｔｅｒ ｒｒｅｕｎｄｌｌｌＥｎｔｅｒｏｂａｅ
ｔｅｒ ａｕｏｇｃｎｃｓＥｎＬｃｒｏｂａｃＬｃｒ
ｇｇｌｏａＯｒａｎｓＥｎＬｅｒｏｂａｃＬｅｒ ａ
ｇｇｌｃｘｉｅｒａｎｓＨｎｔｃｒｏｂａｃｔｃｒ ｃ
ｌｏａｃａｃＥｎＬｅｒｏｂａｃＬｅｒ ｃｌｏａｃ
ａｅＡＴＣＣその他の特定 起源 寄託番号 番号・符号０．Ｄ。 （２） ２７０Ｇ２ ０．０３（１
） （ｓａｙ）１５ ０．０４（２）
１９ＧＯＧ
Ｏ，口２（２） ９９５７
０．０３（２） ７９１１ｉ５
０．０３（１） ＩＧ ８３７
０．０３（２） １４５７９ ０．
０３（２） １８８０４ ０．０１
（２） ２００１ ０．０２（２
） １３０４８ ０．０３（５）
３１０４−６１ ０．０３（５）
１６３ｔ）−０ｆ Ｏ，０Ｌ（５）
２９９０−５８ ０．０４（５）
３０［Ｉ２−［Ｉ２ ０．０５（５）
１８３７−７１ ０．０２（５）
０４４０−５９ ０．０５（３）
５１３５ ０．０３（３）
３１１８＾ ０．０３（５） ２
９７０−５５ ０．０４（５） ８９
２−［ｉｌ ０．０３（５） ３
１５８−６３ ０．０２（２） １３０４８
０．０５（１） ＰＢ
０．０３（３） Ｓ＋２１Ｂ０．
０３（３） ５Ｉ３４ ０．０３（
３） ５Ｉ２１＾ ０．Ｏ２属
・ 種 ＩＥ＋＋ＬｅｒｏｌＪａｃＬｅｒ ｃｌｏａｃａｅＣｎ
ｔｃｒｏｂａｅｔｃｒ ｃｌｏａｃａｅＥｎｔｃｒｏｂ
ａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｃＥｎｔｅｒｏｂａｃＬｅ
ｒ ｃｌｏａｃａｅＥｎｔｃｒｏｂａｃｔｃｒ ｃｌｏ
ａｃａｃＥｎ【ｃｒｏｂａｃｔｃｒ ｃｌｏａｃａｅｃ
ｎｔｃｒｏｂａｅｔｅｒ ｅｌｏａｃａｅＥｎｔｃｒｏ
ｂａｃｔｃｒ ｃ＋ｏａｃａｃＥｎＬｅｒｏｂａｃＬｅ
ｒ ｅｌｏａｃａｅＥｎｔｃｒｏｂａｅｔｃｒ ５ａ
ｋａｚａｋｌｌＥｎＬｃｒｏｂａｃＬｃｒ ５ａｋａｚ
ａｋｉｊＥｎＬｅｒｏｂａｃＬｅｒ ５ａｋａｚａｋ
ｉ ＩＥｎｔｃｒｏｂａｃｔｃｒ ｔａｙｌｏｒａｃＥ
ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ Ｉ Ｅｓｃｈｅｒｌｃｔｒｔａ ｃａｌｌ Ｅｓｃｈｃｒ ｃｈ［ａ ｃｏｌ Ｉ Ｒｓｃｌ＋ｅｒｌｃｈｌａ ｃａｌ ＩＥｓｃｈｃｒ
ｃｈｌａ ｃｏｌＩ Ｅｓｃｈｃｒ ｃｈｌａ ｃｏｌＩ Ｅｓｃｈｅｒｌｃｔ＋Ｉａ ｃｏｌ ＩＥｓｃｈｃｒ
ｃｈｌａ ｃｏｌｔ Ｅｓｃｈｅｒｌｃｈｉａ ｃｏｌ ＋ Ｅｓｅｈｅｒｉｅｈｌａ ｃａｌ Ｉ Ｅｓｃｈｃｒ ｃｈｉａ ｃｏｌ Ｉ Ｐ、５ｃｈｅｒｉｃｂｉａ ｅｏｌ ＩＩＥｓｃｈｃｒ
Ｉｃｈｉａ ｃｏｔ １ＡＴＣＣその他の特定 寄託番号 番号・符号 ０ｙ ＩＧ ３００ｇ ５ｌ ０３１１ １Ｂ １２４（ＩＩ ｐｉｎｋ） １１［ｉ １Ｑ８（ｖｂｃａＬ） Ｐ−ＣＩ （ｓｏｙ） トＣ１１は＋ｅ−Ｉ Ｓ−Ｃｈ僚ぐ１ １’１ｏｕｒｌ １ｏｕｒ２ ＩＧ ８９８ ＭＣ ＩＧ ３０１２ ５−ｃｈｅｅｓｅ−２ 加１１１０２１０２ Ｏ４１＋ １０２９１１ ＩＧｌｌ １０２０７５ ０Ｄ。 ０．０２ ０．０２ ０．０４ ０．０４ ０．０１ Ｏ１０３ ０，０２ ０，０７ ０，０５ ０，０２ ０，０４ ０，０３ ０，０３ ０，０４ ０，０５ ０，０２ ０，０２ ０，０３ ０，０４ ０，０２ ０，０２ ０，０３ ０，０４ ０，０４ ０，０５ 第５表 排他性パネル 属 ・ 種 Ｐ、ｓｅｔ＋ｅｒｉｃｈｉａｅｏｌｉ ＥｓｃｈｃｒｌｃｈａｃｏｌＩ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ Ｅｓｅｈｅｒｊｅｈｉａ ｃｏｔｉ Ｅｓｃｈｃｒ’ｃｈｉａｃｏｌ Ｆ、５ｃｂｅｒｉｃｌ＋Ｉａｃｏｌ Ｅｓｅｈｃｒｃｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｃｈｌａｃ。 Ｅｓｅｈｅｒｉｃｈｉａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｌｃｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｉｃｌｕａｃ。 １：５ｅｈｅｒｌｅｈｉａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｊｃｈｉａ ｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃ。 ＩＥｓｃｈｃｒｉｅｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｉｃｈｊａｃ。 Ｆ、ｓｃｌ＋ｅｒｌｃｈｌａｃ。 ＩＥｓｃｈｃｒｃｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｌｃｈｉａｃ。 Ｅｓｅｈｅｒｉｅｈｉａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｌｃｈｉａｃ。 Ｅｓｃｂｅｒｌｃｂｌａｃ。 ＩＥｓｅｈｅｒＣｈａｃ。 Ｅｓｃｈａｒｃｈｉａｃ。 Ｆ、５ｅｈｅｒｉｃｈｉａｃ。 １Ｅｓｃｈｃｒｌｃｈｉａｃ。 （プローブ９２０ 、８８０） （続き）ＡＴＣＣその
他の特定 寄託番号 番号・符号 殖Ｉ＋ ！０２７６２ 圓ＩＩ １０２００５ にＩＩ １０３１３３ ）ＩＧｌｌ １０２５６５ ＭＣ１１１０３５８４ ＭＣＩＩ １０１５４４ ＭＣ１１１０２８１！Ｇ ＭＧＨ１０３５８０ Ｖｃｌ＋ １０３６０７ ＩＧｌｌ １０２７０５ １１ｃＨ１０２３１１１８ ）ＩＧｌｌ １０２５２０ ｏ−＋ｕ （ｓｏｙ） ）ＩＣ１１１０２１０２ ｌ４９＋ １０２９７９ ＭＣｌ １０３２８０ 九Ｉ＋ １０４１１０ ４ｌ１４１０３Ｇ９１ ）ＩＣ１１１０３２５３ ＭＣ１１１０２１０２ ７Ｏ６＋ １０１０２７ Ｉ８；ＩＩ １０２４５８ 几Ｉ＋ １０２５２５ ＩｃＩＩ １口３１２９ 関１１１０２９０１ 罵Ｉ＋ １０２３７９ ０、Ｄ。 ０．０６ ０．０６ ０．０４ ０．０Ｇ ０．０７ ０．０６ ０．０４ ０．０９ ０．０Ｂ ０．０７ ０．０６ ０．０６ ０．０３ ０．２２ ０．０５ ０．０７ ０．０８ ０．０４ ０．０７ ０．０５ ０．０５ ０．０５ 第 ５ 表 排他性パネル 属 ・ 種 ＥｓｅｈｅｒｉｃｈｌａｃｏｌＩ Ｅｓｃｈｃｒｉｃｈａｃｏｌｌ Ｆ、ｓｃｌ＋ｅｒｉｃｔ＋ＩａｃａｌｉＩＥｓｅｈｃｒ
ｃｈ’ａｃｏｌｌ Ｅｓｃｈｃｒｉｃｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｌａｃ。 Ｈｓｃｈｃｒ Ｃｈ ａｃ。 ＩＥｓｃｈｅｒｉｃｌ＋ｉａ ｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｅｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｌｃｈｌａｃ。 Ｐ、５ｃｈｅｒｉｃｈｉａｃ。 １Ｅｓｅｈｅｒａｈａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒｉｃｈｌａｃ。 Ｐｘｅｂｅｒｌｃｈｌａｃ。 ピ５ｃｈｃｒｌｃｈｌａ ｃ。 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｔ＋ｉａｃ。 Ｅｓｅｈｅｒｌｅｈｌａｃ。 Ｅｓｃｈｃｒａｈａｃ。 Ｅｓｃｂｅｒｌｃｈｉａｃ。 １ＥｓｃｈｃｒｌｃｈｌａｃｏｌＩ ＫｌｃｂｓｌｃｌＩａｏｘｙｔｏｃａ ＫｌｅｂｓｉｅｌｌａｏｘｙＬｏｃａ ＫｌｃｂｓｉｃｌＩａ ｐｎｃｕｓｏｎｉａｃＫｌｅｌ
＋５ｉｃｌｌａ ｐｎｅｕｎ＋ｏｎｉａｅＫｌｅｂｓｉ
ｅｌｌａ ｐｎｅｃｍｏｎｌａｅＫｌｃｂｓｊｃｌＩａ
ｐｎｃｕＩＩｌｏｎｌａｃ（プローブ９２８ 、８８
０） （続き）その他の特定 番号・符号 にＩＩ １０３Ｇ６６ 加Ｉ＋ １０３０８３ 黙１１１０３７６５ ＩＧｌｌ １０３０５４ 篤Ｉ＋ １０３３２７ 篤１１１０２６１３ 圏１１１０３８３４ ）ｃｌｌ １０３９６５ 圏Ｉ＋ １０２１２１ 罵Ｉ＋ １０１０２ ７Ｏ：ＩＩ １０４０１０ ４Ｏ０７１０２９９４ 罵１１１０３６０３ 圏Ｉ＋ １０２８２７ 圓Ｉ＋ １０２６８７ ）ｃｌｌ １０２０２４ Ｃｈ瀉ｅ−２ ＭＣＩＩ １０１０３Ｏ ０８＋１１０２＋０９ 圓Ｉ＋ １０３０１０ １１２（ｓｏｙ） １２ＩＣ Ｇ３０５８ １１７（ｓｏｙ） ＳＩ２２１コ ０、Ｄ。 ０．０３ ０．０３ ０．０３ ０．０３ ０．０５ ０．０４ ０．０３ ０．０４ ０．０３ ０．０３ ０．２ ０．０５ ０．０３ ０．０２ ０．０４ ０．０２ ０．０２ ０．０３ ０．０３ ０．０５ ０．０２ ０．０３ ０．０３ ０．０Ｉ Ｏ３８１ ０，０２ 第 表 排他性パネル （プローブ９２６゜ ８８０） （続き） 第 表 排他性パネル （プローブ９２６ 、８８０） （続き）ＡＴＣＣその
他の特定 ＡＴＣＣその他の特定 Ｌｌｓｔｃｒｉａ ｆｎｎｏｃｕａ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓＬｌ
ｓｔｃｒｌａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｃｎｃｓＬｌｓＬｅ
ｒｌａ ５ｅａｌ ｉｇｃｒｉＬｌｓｔｃｒＬａ ５ｅ
ｅｌ ＩｇｅｒｌＬｉｓｉｃｒｉａ ｗｃｌｓｈｉｍｃ
ｒｌｌ、ｌ５Ｌｅｒｉａ ｖｅｌｓｂｉｍｅｒｌＨｌｃ
ｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ。 ＴＯｒｇａｎｃｌ ｌａ ｍｏｒｇａｎｊ ＩＭｏｒ
ｇａｎｅｌ ｌａ ｎｏｒｇａｎｉ １Ｐａｓｔｃｕｒ
ｃｌ ＋ａ ｇａｌ ｌ１ｎａｒＬＩＩＰａｓｔｅｕｒ
ｅｌ ｌａ ５ｕｌｔｏｃｌｄａＰｒｏｔｅｕｓ ５ｉ
ｒａｂｌｌｌｓ Ｐｒｏｔｃｕｓ ｍｙｘｏｒａｃｌｃｎｓＰｒｏｌｅｕ
ｓ ｐｅｎｎｅｒｉ Ｐｒｏｔｃｕｓ ｖｕｌｇａｒｌｓ Ｐｒｏｔｃｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ Ｐｒｏｖａｄｅｎｃｉａ ５ＬｕａｒＬＩＩＰｒｏｖｌ
ｄｃｎｃｉａ ａｌｃａｌｌｒａｃｉｃｎｓＰｒｏｖｌ
ｄｅｎｃｉａ ａｌｃａｌｌｌ’ａｃｌｅｎｓＰｒｏｖ
ｌｄｅｎｅｌａ ｒｅＬｔｇｅｒｌｌＰｒｏｖｊｄｃｎ
ｃｌａ ｒｕｓｔｌｇｉａｎｌＩＰｓｅｕｄｏａｏｎａ
ｓ ａｃｉｄｏｖｒａｎｓＰｓｃｕｄｏＩｌｏｎａｓ
ａｃｒｇｌ ｎｏｓａＰｓｃＵｄｏ＋ｇｏｎａｓ ｐｉ
ｃｋｃｔｔｉｉｌＧ ３１７１ １Ｃ３２５７ １Ｇ ３１０８ ＩＧ ３３８１ １Ｇ ３３５２ １Ｇ ３２８９ １Ｇ ３２９８ ＩＧ ０３ Ｇ３０６３ ＋９４２７ １Ｇ ３０９８ ９Ｇ９２ ２９９＋４ １Ｇ ９２１１ ０．０２ ０．０Ｉ Ｏ２Ｏ３ ０，０２ ０，０２ ０，０３ ０，０２ ０，０２ ０，０４ ０，０２ ０，０４ ０，０２ ０、Ｏｌ ０．０１ ０゜０２ ０．０３ ０．０２ ０．０３ ０．０２ ＳａｌＩ！１ｏｎｃｌ ｌａ ａｒｌｚｏｎＪａｃＳａ
ｌｍｏｎｅｌ Ｉａ Ｌｙｐｂｉｉｕｒｌｕｎ＋５ａ
ｌＩＩｌｏｎｃｌ ｌａ ｖｃｓｌａｃ。 ３５６Ｂ Ｐ ８５１ ０．０２ ０．０２ ０．０１ （２）Ｄ人シーンマン（モンタナ州立大学、ボズマン。 モンタナ州５９７１７） ＣＤ、 Ａ、 ５ｃｈｌｅｎＩＩａｎｎ （Ｍｏｎｔａ
ｎａ ５ｔａｔｅ Ｕｎｉｖｌ、 ＢｏｚｅｍａｎＭｏ
ｎｔａｎａ ５９７１７）） （３）ｃｐｃ （４）ＧＴＳ、所内の食物試料又は臨床試料から単離（
５）キャサリン・Ｗ・ダネリー（バーモント大学農学部
。 バーリントン、バーリントン０５４０５）［Ｃａ１ｈｃ
ｒｌｎｃ Ｖ、 Ｄａｎｎｃｌｌｙ （Ｕｎｊｖ、 Ｖ
ｃｒｍｏｎｔ、 Ｃｏ１１． ｏｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕ
ｒｅ、 ＢｕｒｌｉｎｇＬｏｎ ＶＴ ０５４０５）
）（６）マサチューセッツ総合病院ボストン、マサチュ
ーセッツ州［ＭａｓｓａｃｈｕｓｃｔＬｓ Ｇｅｎｅｒ
ａｌ １ｌｏｓｐｌｔａ１． Ｂｏｓｔｏｎ、 ＨＡ］
（７）デイベル研究所、マジソン、ウィスコンシン州［
Ｄｃｌｂｃｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、 Ｍａｄｌ
ｓｏｎ、 Ｗｌ）第 表 非−アイソトープ標識でのイエルシニア・食物試験＃３
１．９６＋０１１ ６．４Ｅ◆０８ ６．４Ｅ＋０１１ １．１Ｅ◆０９ ４、ＩＥ◆０８ ５．３Ｅ＋０１１ ＋
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、先決の厳重条件下でイエルシニア・エンテロコリチ
カ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ
）のｒＲＮＡあるいはＤＮＡとハイブリッド形成する能
力をもち、かつイエルシニア・エンテロコリチカ以外の
ｒＲＮＡあるいはＤＮＡとはハイブリット形成する能力
をもたない核酸フラグメント。 ２、前記フラグメントが前記条件下でアエロモナス・ソ
ブリア（Ａｏｒｏｍｏｎａｓ ｓｏｂｒｉａ）、バチル
ス・セレウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ）、バ
チルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓ）、ブロコトリキス・テルモスファクタ（Ｂｒｏｃ
ｈｏｔｈｒｉｘｔｈｅｒｍｏｓｐｈａｃｔａ）、カンジ
ダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ Ａｌｂｉｃａｎｓ
）、シトロバクター・フレウンジイ（Ｃｉｔｒｏｂａｃ
ｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ）、コリネバクテリウム・キ
セロシス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｘｅｒｏｓ
ｉｓ）、コリネバクテリウム・ジプテリアエ（Ｃｏｒｙ
ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）、エ
シエリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
）、エシェリキア・ブルネリス（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ ｖｕｌｎｅｒｉｓ）、エンテロバクター・アッグロ
メランス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｇｇｌｏｍｅｒ
ａｎｓ）、エンテロバクター・クロアカエ（Ｅｎｔｅｒ
ｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ）、クレブシエラ・プ
ネウモニアエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎ
ｉａｅ）、クレブシエラ・オキシトカ（Ｋｌｅｂｓｉｅ
ｌｌａ ｏｘｙｔｏｃａ）、ラクトバチルス・カセイ（
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、リステリ
ア・モノシトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙ
ｔｏｇｅｎｅｓ）、プセウドモナス・アエルギノサ（Ｐ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、ロドコ
ッカス・エクイ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｅｑｕｉ）、
サルモネラ・アリゾナエ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａａｒｉ
ｚｏｎａｅ）、サルモネラ・コレラエースイス（Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ ｃｈｏｌｅｒａｅ−ｓｕｉｓ）、サル
モネラ・チフィ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）
、セルラチア・オドリフェラ（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｏｄ
ｏｒｉｆｅｒａ）、シゲラ・ボイジイ（Ｓｈｉｇｅｌｌ
ａ ｂｏｙｄｉｉ）、シゲラ・フレキスネリ（Ｓｈｉｇ
ｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、シゲラ・ソンネイ（Ｓ
ｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ）、スタフィロコッカス
・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒ
ｅｕｓ）、スタフイロコッカス・エピデルミジス（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、
スタフィロコッカス・ホミニス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ）、スタフィロコッカス・サ
プロヒリクス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｓａｐｒ
ｏｈｙｒｉｃｕｓ）、ストレプトコッカス・アクアラク
チカエ（Ｓｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ａｑａｌａｃｔｉ
ｃａｅ）、ストレプトコッカス・ボビス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ）、ストレプトコッカス・
ファエカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａ
ｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ファエシウム（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ストレプト
コッカス・ラクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌ
ａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカス・ムタンツ（ｓｔｒ
ｏｐｔｏｃｏｃｃｕｓｍｕｔａｎｔｓ）、ストレプトコ
ッカス・プネウモニアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ
ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ストレプトミセス・グロビ
スポルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｌｏｂｉｓｐ
ｏｒｕｓ）のｒＲＮＡあるいはＤＮＡとハイブリッド形
成する能力をもたない、請求項１記載の核酸フラグメン
ト。 ３、ａ）イエルシニア・エンテロコリチカの第１セット
のｒＲＮＡとハイブリッド形成する能力をもち、イエル
シニア・エンテロコリチカの第２セットのｒＲＮＡある
いはイエルシニア・エンテロコリチカ以外のｒＲＮＡと
はハイブリッド形成する能力をもたない第１核酸フラグ
メント、およびｂ）イエルシニア・エンテロコリチカの
該第２セットのｒＲＮＡとハイブリッド形成する能力を
もち、イエルシニア・エンテロコリチカ以外のｒＲＮＡ
とはハイブリッド形成する能力をもたない第２核酸フラ
グメント、 からなる核酸フラグメントのセット。 ４、上記二種のフラグメントが協力して少なくとも９５
％のイエルシニア・エンテロコリチカ種とハイブリッド
形成する能力をもつ、請求項３記載の核酸フラグメント
のセット。５、前記第１核酸フラグメントが９２６プロ
ーブの配列、その相補的配列、および厳重条件下で前記
フラグメントとハイブリッド形成する任意の配列、から
なる群より選択した配列からなり、且つ、前記第２核酸
フラグメントが８８０プローブの配列、その相補的配列
、および厳重条件下で前述の任意のフラグメントとハイ
ブリッド形成する任意の配列、からなる群より選択した
配列からなる、請求項３記載の核酸フラグメントのセッ
ト。 ６、ハイブリッド形成条件下で、プローブ８８０、プロ
ーブ１０６２、プローブ８８０を包含しかつプローブ８
８０より長いがプローブ１０６２よりは短い長さを有す
るオリゴマー、および任意の前記フラグメントと相補的
なすべてのプローブ、からなる群より選択したプローブ
とハイブリッド形成する能力をもつ、請求項１記載の核
酸フラグメント。 ７、ハイブリッド形成条件下で、プローブ９２６、プロ
ーブ１１１１、プローブ１１１２、プローブ１１１３、
プローブ１０６３、および任意の前記フラグメントに相
補的なすべてのプローブ、からなる群より選択したプロ
ーブとハイブリッドを形成する能力を持つ、請求項１記
載の核酸フラグメント。 ８、イエルシニア・エンテロコリチカの１６ＳｒＲＮＡ
の４５５〜４７７領域内の任意の１０コ以上の連続した
ヌクレオチド配列と少なくとも９５％以上相同である、
請求項１記載の核酸フラグメント。 ９、試料中のイエルシニア・エンテロコリチカの存在を
検出するための方法であって、 ａ）核酸フラグメントがイエルシニア・エンテロコリチ
カのｒＲＮＡとハイブリッド形成できる条件下で、もし
試料中にイエルシニア・エンテロコリチカが存在する場
合には核酸ハイブリッド複合体を形成するために、請求
項１記載の核酸フラグメントを当該試料と接触すること
、およびｂ）該試料中に前記イエルシニア・エンテロコ
リチカが存在する指標としての上記ハイブリッド複合体
を検出すること、 からなる試料中のイエルシニア・エンテロコリチカの存
在を検出する方法。 １０、前記核酸フラグメントがハイブリッド形成条件下
で、プローブ９２６、プローブ１１１１、プローブ１１
１２、プローブ１１１３、プローブ１０６３、および任
意の前記フラグメントと相補的なすべてのプローブ、か
らなる群より選択したプローブとハイブリッドを形成す
る能力をもつ、請求項９記載の方法。 １１、前記核酸フラグメントが、プローブ９２６、プロ
ーブ１１１１、プローブ１１１２、プローブ１１１３、
プローブ１０６３、および任意の前記フラグメントと相
補的なすべてのプローブからなる群より選択したプロー
ブと厳重条件下でハイブリッド形成する能力をもつ少な
くとも１つのフラグメント、ならびに、プローブ９２６
、プローブ１１１１、プローブ１１１２、プローブ１１
１３、プローブ１０６３、および任意の前記フラグメン
トと相補的なすべてのプローブからなる群より選択した
プローブと厳重条件下でハイブリッド形成する能力をも
つ少なくとも１つの別のフラグメント、の混合物からな
る、請求項９記載の方法。 １２、先決の厳重条件下で、イエルシニア・インテルメ
ジア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｉｎｔｅｒｍｏｄｉａ）のｒ
ＲＮＡあるいはＤＮＡとハイブリッド形成する能力をも
つが、イエルシニア・エンテロコリチカのｒＲＮＡある
いはＤＮＡとはハイブリッド形成する能力をもたない核
酸プローブのフラグメントであり、かつプローブ９２７
および前記フラグメントと相補的なすべてのプローブか
らなる群より選択した核酸プローブフラグメント。 １３、１つ以上の容器に一括した請求項１記載の核酸フ
ラグメントおよびイエルシニア・エンテロコリチカ検出
用の当該核酸フラグメントの使用説明書からなるイエル
シニア・エンテロコリチカ検出用アッセイキット。 １４、１つ以上の容器に一括した請求項３記載の核酸フ
ラグメントおよびイエルシニア・エンテロコリチカ検出
用の当該核酸フラグメントの使用説明書からなるイエル
シニア・エンテロコリチカ検出用アッセイキット。
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