JPH0286778A - ヒトα↓２−プラスミンインヒビタ−蛋白をコードする遺伝子 - Google Patents

ヒトα↓２−プラスミンインヒビタ−蛋白をコードする遺伝子

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JPH0286778A
JPH0286778A JP63234930A JP23493088A JPH0286778A JP H0286778 A JPH0286778 A JP H0286778A JP 63234930 A JP63234930 A JP 63234930A JP 23493088 A JP23493088 A JP 23493088A JP H0286778 A JPH0286778 A JP H0286778A
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plasmin inhibitor
human
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gene
amino acid
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JP63234930A
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Yoshihiko Washimi
芳彦 鷲見
Yataro Ichikawa
市川　弥太郎
Nobuo Aoki
青木　延雄
Masami Muramatsu
村松　正実
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Teijin Ltd
Original Assignee
Teijin Ltd
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ａ、産業上の利用分野 本発明はヒトα２−プラスミンインヒビター（α２　　
ｐｌａｓｍｉｎ　　１ｎｈｉｂｉｔｏｒ　　：　α２−
ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｎ　＞を構成するアミノ酸配列及
びそれをコードする遺伝子断片に関するものである。
ｂ、従来技術 ヒトのα２−プラスミンインヒビターは、青水と緒井に
よって最初に単離・精製され、線維製溶解酵素のプラス
ミン（ｐｌａｓｍｉｎ　）のエステラーゼ活性を瞬間的
に阻害する強力なプラスミンインヒビタ−であり、１１
．７％の糖鎖を含む分子量的６７．０００の１本鎖の糖
蛋白質であることが知られている［Ｍ、　Ｍｏｒｏｉ　
　＆　　Ｎ、　Ａｏｋｉ　　：ＴｈｅＪ　ｏｕｒｎａｌ
　　ｏｆ　　Ｂ　１ｏｌｏｏｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ、　　２５１゜５９５６−５９６５　（１９７６
）参照］。
本発明者は、すでに特願昭６１−２２５００８　（昭和
６１年９月２５日出願）、特願昭６１−３０１７５３　
（昭和６１年１２月１９日出願）および特願昭６２−１
５４４９５　（昭和６２年６月２３日出願）において、
ヒトα２−プラスミンインヒビターのアミノ酸配列およ
び遺伝子断片を出願した通り、ヒト肝細胞のｃＤ　Ｎ　
Ａライブラリーより、ヒトα２−プラスミンインヒビタ
ーの相補ＤＮＡ　＜以下ｃＤ　Ｎ　Ａと言う）を単離し
その構造からヒトα２−プラスミンインヒビターのアミ
ノ酸配列を決定した。
方、ヒトα２−プラスミンインヒビターの−部あるいは
全部をコードするゲノム遺伝子（断片）は取られていな
い。このゲノム遺伝子もしくはその断片が得られれば、
ヒトα２−プラスミンインヒビターの一部、あるいは全
部を遺伝子操作手法により生産することも可能となる。
また、このゲノム遺伝子もしくはその断片を利用して、
ヒトα２−プラスミンインヒビターの発現、ヒトα２プ
ラスミンインヒビタ−欠損症の診断や治療も可能となる
と思われる。
０９本発明の構成 本発明者は、ヒトα２−プラスミンインヒビター遺伝子
について研究をおこなった結果、ヒトα２−プラスミン
インヒビターのプロペプチドに相当する３９個のアミノ
酸配列及びヒトα２−プラスミンインヒビターを構成す
る４５２個のアミノ酸配列をコードする、ヒトゲノム遺
伝子を単離し、本発明に到達した。
すなわち、本発明は１：添付第２図における工’ｙソン
■、　Ｉ［［、ｒＶ、　Ｖ、　Ｖｌ、　Ｖｌ、　Ｖｌ、
　■オヨヒＸよりなり、それぞれのエクソンはイントロ
ンを介して結合しているヒトα２−プラスミンインヒビ
ター蛋白をコードする遺伝子および２：前記エクソン■
の上流に更に第２図のエクソンエがイントロンを介して
結合している前記第１項記載の遺伝子である。
また本発明は、３：前記エクソン■の上流に更に第２図
（１）の−２３〜−９０３までの塩基配列が付加されて
いる前記第２項記載の遺伝子である。
また本発明は、４；前記第３項記載の遺伝子を適当なベ
クターに組み込んで動物細胞で発現させることによるヒ
トα２−プラスミンインヒビターの製造方法である。
ここで適当なベクターとしては、ρＡＶ２゜１）ＳＶ２
．　　　ｐＳＶ１ＧＴ５．　　　ｐｓＶＩＧＴ７゜［Ｉ
ＢＢ４．　　ｐＨＧ、　　１）ＦＲ４００，Ｉ）ＣＤＶ
１又ハｐＫｃＲなどが使用できる。
また動物細胞としては、ＣＨＯＩ胞、ＢＨＫ細胞、２９
３細胞、ＣＯ３細胞、　Ｃｈａｎｇ　　Ｌ　１ｖｅｒ細
胞又はＣＩｏｎｅ９細胞などが使用できる。
かかる本発明は、第２図におけるエクソン■〜Ｘにいた
る９個のエクソンと各々のエクソン間を形成する８個の
イントロンより構成されるゲノム遺伝子または、該エク
ソン■の上流にさらにエクソンエをイントロンを介して
結合しているゲノム遺伝子である。
本発明におけるエクソン■の一部、エクソン■及びエク
ソンＩＶの一部は３９個のアミノ酸のプロペプチドをコ
ードする。エクソンＩＶの残る部分、エクソンＶ、エク
ソンＶｌ　、エクソンＶ［、エクソン■。
エクソンＩＸおよびＸの１部は、ヒトα２−プラスミン
インヒビターをコードする。ヒトα２−プラスミンイン
ヒビターのゲノム遺伝子の、６種類の制限酵素に関する
制限酵素地図は、添付第１図（２）に示される。またこ
のゲノム遺伝子は添付第１図（３）に示した３種のλフ
ァージのクローンとして得た。
ヒトα２−プラスミンインヒビターのゲノム遺伝子のＤ
ＮＡ塩基配列及びアミノ酸配列は添付第２図に示される
。添付第２図において各エクソンは塩基配列のアンダー
ラインの部分である。エクソン■はアミノ酸配列を］−
ドしていない。エクソン■は非翻訳領Ｖ１．４塩基（Ｇ
ＡＡＣ）と、プロペプチドの一部２１アミノ酸をコード
する６３塩基の計６７塩基から成る。エクソン■は、プ
ロペプチドの一部１３アミノ酸をコードする３９塩基か
ら成る。
エクソン■はプロペプチドの一部５アミノ酸をコードす
る１５塩基と、α２−プラスミンインヒビターのＮ末端
の１６アミノ酸をコードする４８塩基の計６３塩基から
成るエクソンＶはα２−プラスミンインヒビターの６７
１／３アミノ酸をコードする２０２塩基から成る。エク
ソン■はα２−プラスミンインヒビターの４８アミノ酸
をコードする　１４４塩基から成る。エクソン■は、α
２−プラスミンインヒビターの６８アミノ酸をコードす
る２０４塩基から成る。エクソン■はＣ２−プラスミン
インヒビターの４７２／３アミノ酸をコードする１４３
塩基から成る。エクソン■はＣ２−プラスミンインヒビ
ターの６８１／３アミノ酸をコードする２０５塩基から
成る。エクソンＸはＣ２−プラスミンインヒビターのＣ
末端の１３６２／３アミノ酸をコードする４１０塩基と
、３′非翻訳領域７５９塩基の、計１１６９塩基から成
る。各々のエクソンのＤＮＡ塩基配列の下にアンダーラ
インをひいて示した。。
以下実施例を掲げてヒト肝細胞よりメツセンジｖ−ＲＮ
Ａ（以下”ｍＲＮＡ”と記す）の単離。
ｃＤ　Ｎ　Ａライブラリーの作製、ヒトα２−プラスミ
ンインヒビターのスクリーニング、ヒトα２プラスミン
インヒビタ−ｃＤ　Ｎ　Ａのリクローニング、ヒトα２
−プラスミンインヒごターゲノム遺伝子のクローニング
、ヒトα２−プラスミンインヒビターゲノム遺伝子の制
限エンドスフレアーゼ（以下゛制限酵素″と記す）切断
地図の作製、及びヒトα２−プラスミンインヒビターゲ
ノム遺伝子の塩基配列の決定について詳細に説明する。
なお、本明細書及び図面において、アミノ酸。
ポリペプチドはＩｔＪＰＡＣ−ＩＵＢ生化学委員会（Ｃ
ＢＮ）で採用された方法により略記するものとし、たと
えば下記の略号を用いる。
ＡｌａＬ−アラニン ＡｒｏＬ−アルギニン ＡｓｎＬ−アスパラギン Ａｓｐ　　Ｌ−アスパラギン酸 Ｃｙｓ　　Ｌ−システィン Ｇｌｎ　　Ｌ−グルタミン ＧＩｕ、Ｌ−グルタミン酸 Ｇｌｙ　　グリシン ＨｉｓＬ−ヒスチジン １１ｅＬ−イソロイシン １ｅｕｌ−ロイシン しｙｓ　　Ｌ−リジン Ｍｅｔ　　Ｌ−メチオニン ＰｈｅＬ−フェニルアラニン ＰｒｏＬ−プロリン ３ｅｒ　　ｌ−セリン ７−ｈｒｌ−−スレオニン Ｔｒρ　Ｌ−トリプトファン Ｔｙｒ　　Ｌ−チロシン Ｖａｌ　　Ｌ−バリン また、ＤＮＡの配列はそれを構成する各デオキシリボヌ
クレオチドに含まれる塩基の種類で略記するものとし、
たとえば下記の略号を用いる。
Ａ　アデニン（デオキシアデニル酸を示す。）Ｃシトシ
ン（デオキシシチジル酸を示す。）Ｇ　グアニン（デオ
キシグアニル酸を示す。）■　チミン　（デオキシチミ
ジル酸を示す。）実施例１　ヒト肝細胞よりＩＩＩＲＮ
　Ａの単離ヒト肝細胞よりｍＲＮ　Ａの単離は、グアニ
ジンチオシアネート法［Ｊ、　Ｍ、　Ｃｈｉｒｇｗｉｎ
　　ｅｔ　　ａｌ。
：　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　、　１８．５２９４
−５２９９　（１９７９）参照］に従った。ヒト肝細胞
２　Ｘ　１０ｇ個に５ｄのＧＴＣ溶液（６Ｍグアニジン
イソチオシアネート、５ｍＭクエン酸ナトリウム、　　
０．１Ｍ２−メルカプトエタノール、０．５％Ｎ−ラウ
０イルザルコシン酸ナトリウム）を加え、ホモゲナイズ
した。３．８ｄの５．７Ｍ　　Ｃ５ｃＬ　　Ｏ，ＩＭ　
　ＥＤＴＡ水溶液の上に重層し、これをＲＰＳ−４０Ｔ
ローター（ＨＩＴＡＣＨＩ）を用いて、３５．ＯＯＯｒ
ｐｍで１５時間、２５°Ｃで超遠心した。超遠心機注意
深く溶液を取り除いた後、エタノール約１１Ｉｄ／、で
３回リンスし、１．４蔵の水に溶解後エタノール沈澱さ
せた。この沈澱を０．５Ｍ　　Ｎａ　ＣＩ、　１０　ｍ
Ｍ　　Ｔｒｉｓ　−ＨＣｊ　（ｐＨ７，５）　、　１　
　ｍＭ　　ＥＤＴＡ、　　０．０５％ＳＤＳの組成の洗
浄液０．５ｍに溶解し、０．５ｍｉ！のＱＩｉＱＯ（ｄ
Ｔ）セルロースカラムを通した。このカラムを上記洗浄
液で洗った後、１０　ｍＭ　　Ｔｒｉｓ　−ＨＣｆ（ｐ
Ｈ７，５）　、　１　　ｍＭ　　ＥＤＴＡ、　　０．０
５％ＳＯ８の組成の溶出液で溶出し、約３１μ９のｐｏ
ｌｙＡ・＋１１ＲＮ　Ａを得た。
実施例２　　ｃＤＮＡライブラリーの作製ヒト肝細胞由
来ｐｏｌｙＡ　”　　ｍＲＮ　ＡよりｃＤ　Ｎ　Ａの合
成は、ＧｕｂｌｅｒとＨｏＮｍａｎの方法［Ｕ。
Ｇｕｂｌｅｒ　　　＆　　　Ｂ、Ｊ、Ｈｏｆｆｍａｎ；
　　Ｇｅｎｅ、２５゜２６３−２６９　（１９８３）参
照］に従い、アマージャム製ｃＤ　Ｎ　Ａ合成キットを
用いておこなった。
５μ９のｐｏｌｙＡ”　　ｍＲＮＡ　（Ｇ、：５０ユニ
ツトノヒト胎盤由来ＲＮ　ａｓｅ阻害酵素（ＨＰＲＩ　
）の存在下５μ９の０ｌｉＯＯ（ｄＴ）　１２−１８を
加え１００ユニツトの逆転写酵素を４２℃で１．５時間
働かせて約３０％の収率で１重鎖ｃＤ　Ｎ　Ａを合成し
た。この反応液に４ユニツトの大腸菌リボヌクレアーゼ
Ｈと１１５ユニツトの大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩを加
え１２℃で１時間、２２℃で１時間反応させた後７０℃
で１０分間放置して酵素を失活させた。その後１０ユニ
ツトのＴ４ＤＮへポリメラーゼを加え３７℃で１０分間
反応させて、約９５％の収率で２本ｍｃＤＮＡを得た。
この２重鎖ＣＤＮＡを２０ユニツトのＥＣ０Ｒ１メチラ
ーゼを３７℃で１時間反応させた。これに１６ユニツト
のＥｃｏＲＩ（宝酒造製）を結合させた。これに１６ユ
ニツトのＥｃｏＲＩ（宝酒造製）を加え３７℃で２時間
反応させた後、Ｓ　ｅｐｈａｒｏｓｅ　　Ｃし一４Ｂカ
ラムを通し、純化し約０．８μ３のＣＤＮＡを得た。次
にこのＣＤＮＡ０．４μ３とλｇｔｉ。
アーム１．０μｇ（ベクタークローニングシステムズ製
）との連結をおこない、ヒト肝細胞由来のｃＤ　Ｎ　Ａ
が挿入されたハイブリッドＤＮＡを得た。
得られたハイブリッドＤＮＡについてｉｎ　　Ｖｉｔｒ
Ｏパッケージング［Ａ、　Ｂｅｃｋｅｒ　　＆　　Ｍ、
　Ｇｏｌｄ　：ｐｒｏｃ、Ｎａ口、　Ａｃａｄ　、Ｓｃ
ｉ、　　ＵＳＡ、　７２゜５８１　（１９７５）参照］
をおこない、ヒト肝細胞由来ｃＤ　Ｎ　Ａライブラリー
を得た。
前記実施例２で得られたヒト肝細胞由来ｃＤＮＡライブ
ラリーを大腸菌Ｃ６００ｈｊＱ−株に感染させ、プラー
クを形成させた。ヒトα２−プラスミンインヒビター遺
伝子を含むクローンは、［”　Ｐ　］で標識した合成り
ＮＡ　　Ｐ−１及びＰ−２をプローブとし用いＢ　ｅｎ
ｔｏｎと［）ａＶｉｓのプラークハイブリダイゼーショ
ン法［Ｗ、　Ｄ、　Ｂｅｎｔｏｎ　　＆　　Ｒ。
Ｗ、　Ｄａｖｉｓ：　５ｃｉｅｎｃｅ、　　１９６．　
１８０−　（１９７７）参照１に従って選別した。プロ
ーブとして用いた合成りＮＡはＣｏ１１ｅｎらによって
報告されていたヒトα２−プラスミンインヒビターの部
分アミノ酸配列［Ｄ、　Ｃｏ１１ｅｎ　ｅｔ　　ａｌ、
：　Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓａｎｄ　ｌ−１ａｅｍｏｓ１
−１ａｅ、　４８．　３１１−３１４（１９８２）参照
］と対応するＤＮＡ配列をＮＤＡシンセサイザーくアプ
ライド・バイオシステムズ製）を用いて合成した。
（Ｐ−１）　　Ｍｅｔ　　Ｇｌｕ　　ＧＩＵ　　ＡＳＤ
　　Ｔｙｒ　　Ｐｒ。
３’　　ＴＡＣＣＴＴ　　ＣＴＴ　　ＣＴＧ　　ＡＴＧ
　　ＧＧ　　　５’ＣＡＡ （Ｐ−２）　　Ｖａｌ　　Ｇｌｕ　　Ｍｅｔ　　Ｍｅｔ
　　Ｇｌｎ　　Ａｌａ３’　　ＣＡＧ　　ＴＣＴ Ｃ ＴＡＣＴＡＣＧＴＴ　　ＣＧ ５′ 実施例４　ヒトα２−プラスミンインヒビター大腸菌用
プラスミド１）ＵＯ３２μりを実施例４に準じて制限酵
素ＥＣ０Ｒｒで消化したものに対してアルカリ性ホスフ
ァターゼ（Ｅ、　ｃｏｌｔ　　Ｃ７５）（宝酒造製）を
１．０ユニット加えて５８℃で２時間反応させた。反応
終了後、反応液中のアルカリ性゛フォスファターゼを失
活・除去するためにフェノール抽出を３回繰返した。こ
のようにして得られた　ｐＵ　Ｃ８のＥｃｏＲＩ／アル
カリ性フォスファターゼ処理液に、実施例４で得たヒト
α２−プラスミンインヒビターＥＣＯＲＩ消化ＣＤ　Ｎ
　Ａ断片を加え、２ユニツトのＴ４−ＤＮＡリガーゼを
１２℃で１６時間反応させて連結させた。
大腸菌ＬＥ３９２株の形質転換は、通常のＣａＣｊ　２
法［Ｍ、　Ｖ、　Ｎｏｒｇａｒｄ　ｅｔ　ａｔ、　：　
Ｇｅｎｅ　。
ユ、　　２９７（１７８）参照］に従い調製し、前記ρ
ＵＣ８にヒトα２−プラスミンインヒビターＥｃｏＲＩ
消化ｃＤ　Ｎ　Ａ断片を連結させたハイブリットＤＮＡ
を形質転換した。形質転換した大腸菌ＬＥ３９２を５０
μ９／ｌｄの濃度のアンピシリンを含んだし一プロスプ
レートに接種した。このプレートを３７℃で１晩培養し
て形質転換株を生育させた。得られたコロニーより公知
の方法を用いてＤＮＡを調製し、アガロースゲル電気泳
動により目的のハイブリッドＤＮＡを確認し、この１つ
をｐＰＩ４１及びｐＰＩ３９と命名した。
ヒト胎盤より抽出したＤＮＡを制限酵素Ａ　ＩＬＩＩ及
びｌ−１ａｅｌで消化した後、ＥｃｏＲＩリンカ−を介
してシャロン４　Ａ　（Ｃｈａｒｏｎ　４　Ａ　）バク
テリオファージベクターアームに組み込みライブラリー
とした。このライブラリー１．２Ｘ　１０６プラークを
、α２−プラスミンインヒビターのＮ末より３１番目か
ら　１３０番目のアミノ酸配列及び１７９番目から４２
９番目のアミノ酸配列に対応するｃＤ　Ｎ　Ａ断片をプ
ローグとしてＢ　ｅｎｔｏｎ　−Ｄ　ａＶｉｓの方法（
３ｅｎｔｏｎ　、　Ｗ、　Ｄ　　＆　　Ｑａｖｉｓ、　
Ｒ，Ｗ。
Ｓ　ｃｉｅｎｃｅ　　１９６．　１８０−１８２．　　
（１９７７）参照）によってスクリーニングした。また
、３′上流側のクローンのスクリーニングには、１５塩
基から成る合成りＮＡ　（５’　ＡＣＴＣＣＣＣＴＧＣ
ＣＡＧＣＣ３′）をプローグとして用いた。ｃＤ　Ｎ　
Ａをプローグとして用いたときには、ｃＤ　Ｎ　Ａ断片
はニックトランスレーションによって４２ｐでラベルし
た。また合成りＡＮのラベルはＴ４ポリヌクレオチドキ
ナーゼ（Ｔ　４　　Ｐ　ｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｋ
ｉｎａｓｅ　）により５′側をｙ２Ｐでラベルした。
スクリーニングの結果、α２−プラスミンインヒビター
ゲノム遺伝子全域をコードする３個のクローン、λＰ１
１．λＰ１２．及びλＰＩ６を得た。各々のクローンの
ゲノム遺伝子への対応は添付第１図（１）〜（３）に示
した。
実施例５で得られたヒトα２−プラスミンインヒビター
ゲノム遺伝子を含むファージＤＮＡをＥＣ０ＲＩで消化
し、挿入されたいたヒトα２−プラスミンインヒビター
ゲノム遺伝子を切り出し、０．９〜１．５％アガロース
ゲル電気泳動によって単離した。このヒトα２−プラス
ミンインヒビター遺伝子断片０．１〜０．５μ９を制限
酵素消化用バッファ−１０μ塁に溶解し、各種制限酵素
２ユニツトを添加して３７℃で１時間消化した。
なお、二種類の制限酵素による消化をおこなう場合には
、まず低温濃度で作用する制限酵素で処理し、次に所定
濃度まで塩濃度を上げてから、より高塩濃度で作用する
制限酵素で処理した。制限酵素による消化後、１μ旦の
０．２５％ブロモフェノールブルー、　５０％グリセロ
ール水溶液を加え１μｇ／ｄのエチジウムブロマイドを
含む０．８％〜１．２％アガロースでゲル電気泳動をお
こなった。
この電気泳動の際、ＤＮＡ断片の分子量マーカーとして
λファージのＤＮＡをｌ−１ｉｎｄＩ［［で消化したも
のを用いた。電気泳動後、このゲルに対して紫外線を照
射して消化パターンを観察した。各種制限酵素単独によ
る消化、及び二種の制限酵素の組み合わせによる消化で
の消化パターンを解析した。
かくして得られたヒトα２−プラスミンインヒビターゲ
ノム遺伝子の制限酵素地図を添付第１図（２）に小した
。
ヒトα２−プラスミンインヒビターゲノム遺伝子の塩基
配列はＳａｎｇｅｒのジデオキシシーケンス法［Ｆ、　
５ａｎａｅｒｅｔ　ａｌ、　：Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔｌ
。
Δｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　ＬＪＳＡ７４．５４６３−５
４６７（１９７７、）参照］により決定した。
たとえばヒトα２−プラスミンインヒビターゲノム遺伝
子のＥＣ０ＲＩ消化断片を公知の方法に従ってＭ　１３
ｍ　　ｐ１８又はＭ　１３ｍ　　ｐ１９ベクターのＥｃ
ｏＲＩサイトに挿入し、大腸菌ＪＭ１０５株に形質転換
させる。形質転換させたＪＭ１０５株によって生産され
る一重項ハイブリットＤＮＡを公知の方法に従って調製
した。この−重鎖ＤＮＡを用いて、Ｍ１３シーケンスキ
ット（アマージャム製）を用いてシーケンス反応をおこ
ない、７Ｍ尿素を含む６％ポリアクリルアミドゲル電気
泳動で分離した。ゲルを乾燥後−８０℃で一部オートラ
ジオグラフィーをおこなった後、分離パターンの解析を
おこない、ヒトα２−プラスミンインヒビターゲノム遺
伝子の塩基配列決定のための資料とした。
かくして添付第２図に示されたヒトα２−プラスミンイ
ンヒビターをコードするゲノム遺伝子の塩基配列が決定
された。
【図面の簡単な説明】
添付第１図（１）は、本発明によるヒトα２−プラスミ
ンインヒビターゲノム遺伝子のイントロン−エクソンを
示したものであり、１０個のエクソンは四角で示した。 エクソン■、エクソン■の一部及びエクソンＸの一部は
アミノ酸をコードしていない非翻訳領域である。エクソ
ンＸ中の非翻訳領域 （Ｕ　ｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ　ｒｅｇｉｏｎｓ　　（
Ｕ　Ｔ　）　）は斜線で示した。 添付第１図（２）は本発明によるヒトα２−プラスミン
インヒビターゲノム遺伝子の制限酵素地図である。各記
号は次の制限酵素を示す。Ｂ；ＢａｍＨｌ、Ｅ：Ｅｃｏ
ＲＩ、）−１：Ｈｉｎｄ　Ｉ［［、Ｄ：ＤｒａＩ。 Ｘ：ＸｂａＩ 添付第１図（３）は、本発明によるヒトα２−プラスミ
ンインヒビターゲノム遺伝子をコードするファージクロ
ーン中の遺伝子断片を示す。第１図の（１）〜（３）は
、各々上下対応している。 添付第２図は、本発明によるヒトα２−プラスミンイン
ヒビターゲノム遺伝子のＤＮＡ塩基配列及びアミノ酸配
列を示す。各エクソン部分にはアンダーラインをほどこ
し、その下に対応するアミノ酸を記した。エクソンＸ中
流のＴ　Ａ　Ｔ　Ａ　ｂｏｘに相当すると思われるシー
ケンス及び ｔｒａｎｓｃｒ＋ｐｔ＋ｏｎａｌ　　５ｔａｒｔ　　５
ｉｔｅ及び５′側最上流のＢａｍＨＩ　　５ｉｔｅを線
でかこんだ。また、３′下流側のポリアゾニレ−ジョン
認識部位（ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｔｏｎ　　ｒｅｃ
ｏｇｎｉｔｉｏｎ　　５ｉｔｅ）を線でかこんだ。 手 続 ネ１１ 正 書 昭和６３年１２月ｆ日 明細書第７頁下から３行の「制限エンドスフレアーゼ」
を「制限エンドスフレアーゼ」と訂正する。 （２）同第１２頁下から７行の［大腸菌Ｃ６０Ｑ　ｈｆ
Ｆ株Ｊを「大腸菌Ｃ６００１１ｆ７＋−株」と訂正する
。 以　　上 ヒトα２ プラスミンインヒビタ−蛋白をコードする遺（ｄ神正を
する者 事件との関係　特許出願人 大板府大阪市東区南本町１丁目１１番地（３００）帝人
株式会社 頽者　岡　本　佐四部 代　理　人　　　　東京都千代田区内幸町２丁目１番１
号（飯野ビル）

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、添付第２図におけるエクソンII、III、IV、Ｖ、VI
    、VII、VIII、IXおよびＸよりなり、それぞれのエクソ
    ンはイントロンを介して結合しているヒトα＿２−プラ
    スミンインヒビター蛋白をコードする遺伝子。 ２、前記エクソンIIの上流に更に第２図のエクソン I
    がイントロンを介して結合している請求項１記載の遺伝
    子。 ３、前記エクソン I の上流に更に第２図（１）の−２
    ３〜−９０３までの塩基配列が付加されている請求項２
    記載の遺伝子。 ４、請求項３の遺伝子を適当なベクターに組み込んで動
    物細胞で発現させることによるヒトα＿２−プラスミン
    インヒビターの製造方法。
JP63234930A 1988-09-21 1988-09-21 ヒトα↓２−プラスミンインヒビタ−蛋白をコードする遺伝子 Pending JPH0286778A (ja)

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JP (1) JPH0286778A (ja)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62296123A (ja) * 1986-06-17 1987-12-23 Toshiba Corp アクテイブマトリツクス型液晶表示装置
JPS6379596A (ja) * 1986-09-25 1988-04-09 Teijin Ltd ヒトα↓２−プラスミンインヒビタ−のアミノ酸配列及び遺伝子断片
JPS63157984A (ja) * 1986-12-19 1988-06-30 Teijin Ltd ヒトα↓２−プラスミンインヒビタ−のアミノ酸配列及び遺伝子断片

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