JPH02501030A - “天然”のメチルアントラニレートの調製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ″　炊”の　ル　ントーニレー　の量。リ　゛光里Ω宜量 本発明は、天然に存在するメチルＮ−メチルアントラニレートからメチルアント ラニレートの調製のための微生物学的方法に向けられる。

最近、ますます“完全に天然の”風味が相当の消費者の好みになって来た。この 要求を満たすためには、天然の芳香化学物質を得るための新規方法を開発する必 要が存在する。

コンコードブドウ（ビチスラ１ン監（左（■１堕１ａｂｒｕｓｃａ）　）の風味 は、食品産業に広く使用されて来た生成物のタイプを代表する。メチルアントラ ニレートはこの果実の典型的な芳香への主な貢献物であることが知られていて、 そしてそれは多くの他の風味システムにおいて価値ある成分である。メチルアン トラニレートは自然界に広く分布されているけれども、その単離は、ひじょうに 低レベルでの存在のために一般的に経済的テナイ。従って、天然のメチルアント ラ−１−Ｌ／−）ヲ得るための他の方法が必要とされる。

メチルアントラニレートは天然源から容易に得られないけれども、メチルＮ−メ チルアントラニレート（この後、ジメチルアントラニレートとして言及する）は 、ベチチグレインチル化方法によりメチルアントラニレートを生成することが所 望されるであろう。

微生物関与のＮ−説メチル化反応が、クリＬ歪」７１丈１゜（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ ｎａｓ）（Ｔａｙｌｏｒ、　Ｂ−Ｆ、＋　Ａ　Ｉ　Ｅｎｖｉｒｏｎ、Ｍｉｃｒｏ ｂｉｏｌ。

４６　：　１２８６．１９８３）、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅ　ｔｏ＋＋＋ 　ｃｅｓ）（Ｙａ＋ｎａｎｏ。

ｆＬｅ、＊　Ａｎｎ、Ｒｅ　、Ｔａｋｅｄａ　Ｒｅｓ、Ｌａｂ、　２１　：　８ ８，１９６３、またＢｅ１ｌｅｔ及びｖａｎ　Ｔｈｕｏｎｇのアメリカ特許第３ ．５２０．７７８号、１９７０）　、ヱ、火」ｊＬぺ！ノ一二（Ａｒｔｈｒｏｂ ａｃｔｅｒ）（Ｋａｃｚｋｏｗｓｋｉ、　Ｊ−＋　Ａｃｔａ　Ｓｏｃ。

Ｂｏｔａｎ、Ｐｏ１ｏｎ、、　２Ｂ　＝　６１１．１９５９）、’）＝７ｆｆｆ ／−ハ虹乞因史ヱ（Ｃｕｎｎｉｎ　ｈａｍｅｌ圏す士ｍ国）　（Ｍｉ　ｔｓｃｈ ｅｒ星（！ｌ’　＋’ｌ　Ｅｘ　ｅｒｉｅｎ　ｔｉａ。

２４　：　１３３．１９６Ｂ）、クラ」ヨ［乙ム（す工山徂■）（Ｖｏｉｇｈ及 びＢｏｒｎｓｃｈｅｉｎ、　Ｐｈａｒｍａｚｉｅ、　２２　：　２５ＥＬ　１９ ６７）及びｙｘ−ｔ７ｔ４”−ス（Ａｓｃｅｒ　１ｌｌｕｓ）（Ｆｕｎｄｅｒｂ ｕｒｋ星＆、、　Ｐｒｏｃ、５ｏｕｔｈｅｒｎ　Ｗｅｅｄ　Ｃｏｎｆ、。

２０　：　３Ｂ９．１９６７）の種において報告されている。種々のタイプのＮ −説アルキル化反応が、乾燥−腐敗菌、たとえばファネ旦左工±属（Ｐｈａｎｅ ｒｏｃｈａｅｔｅ）（Ｋｕｗａｈａｒａ星＆、、　Ｊ、Ｆｅｒｍｅｎｔ。

Ｔｅｃｈｎｏｌ、、　６２　：　２３７．１９８４）、困斐爽立入、ガノデルマ 、　７．ｌｌ−ミトピシス（７，Ｇａｎｏｄｅｒｍａ、Ｆｏ＋＊１ｔｏｓｉｓ） （Ｒｅａｄｅ及びＭｃＱｕｅｅｎ、　Ｃａｎ、Ｊ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　２９　 ：　４５７＋　１９８３）、ｉ　ＩＪス！（Ｐｏｔ　５ｔｉｃｔｕｓ）（Ｓｈｉ ｎ＋ａｚｏｎｏ及びＮｏｒｄ＋　Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏ−址■ 、、　８７　：　１４０．１９６０）、止ｊ」仙り入及びフォメス（Ｔｒａｍｅ ｔｅｓ及びＦｏｍｅｓ）　（Ｓｍｏｌ　１ｋｏｖａ及びＴｉｃｈｙ、　肛１郊圏 、５　：　２１Ｌ　１９７６）によるリグニンの分解において報告されている。

しかしながら、これらの報告にもかかわらず、ジメチルアントラニレートの微生 物学的脱メチル化は、１つの理由のために報告されていない。なぜならば、出発 材料及びその生成物の両者は、はとんどの微生物に対して高い毒性を示すからで ある。さらに、基質の立体化学が困難性を引き起こす。なぜならば、微生物によ る脱メチル化は、酵素によるものであり、そして従ってひじょうに選択的である からである。結果として、報告されている微生物学的反応は、置換性アミンの脱 メチル化のための一般的な方法として適用され得ない。

従って、メチルアントラニレートの適度な収量を得るであろう微生物関与の脱メ チル化方法を開発することが本発明の目的である。もう１つの目的は、出発材料 及びその生成物の毒性にもかかわらず効果的である微生物学的方法の開発である 。

発」Ｉと【在 これらの及び他の目的は、基質ジメチルアントラニレートの°メチルアントラニ レートへの微生物学的転換のための方法に向けられる発明により達成される。こ の方法に従えば、ジメチルアントラニレートは、菌類微生物と共にそれを培養す ることによって転換される。その微生物は栄養ブイヨン中で培養され、そして適 切なインキュベーション期間の後、基質がその培養培地に添加される。使用され る基質の量は、ブイヨン、培養物及び基質の合計重量に対して、約１０重量％ま で、好ましくは約２．０重量％まで、より好ましくは約０．５重量％までである 。基質類似体、たとえば２．５−ジメチルアニリン又はＮ、Ｎ−ジメチルアニリ ンが、その方法の収量を高めるために、基質の添加の前、培養培地の添加され得 る。

タンパク質合成インヒビターもまた使用され得る。本発明に使用するための好ま しい微生物は、セルロース又はリグニンを分解することができる木材腐敗菌又は 菌類である。

光凱■罷紙星記載 本発明によれば、メチルアントラニレート及びより詳しぐは“天然”のメチルア ントラニレートがジメチルアントラニレートの微生物学的転換により生成され得 る方法が発見された。この転換において使用される“天然”のジメチルアントラ ニレートは、好ましくは、天然源から、たとえばペチチグレインヱｌ叉ユｌ（之 上文ス上±±王ｙ二久）の葉の油から標準の技法、たとえば抽出又は蒸留により 得られる。ジメチルアントラニレート及びメチルアントラニレートは、はとんど の微生物に対して一般的に毒性であるけれども、ある種類の菌類が、培養培地の 合計重量に対して約１０重量％までのこれらの化合物の有用な濃度に耐性である 。これに関するひじょうに所望される濃度は、約２重量％までのこれらの化合物 である。菌類はまた、置換性アミンの一般的なＮ−説メチル化を行なうことがで きる。これらの目的のために適切であり、そして所望する量のメチルアントラニ レートを生成する微生物は、下記のものを包含するが、但しこれだけには限定さ れない：種々の菌株のストレプトミセス（Ｓｔｒｅ　ｔｏｗ　ｃｅｓ）（たとえ ば、旦、ロセクロモエ　ス（Ｓ、　ｒｏｓｅｃｈｒｏｍｏｏｅｎｕｓ）、Σ・１ 水プ立皇：／（Ｓ、ｐ肛因り態用）、盈、立炎ｌグ王孟Ｃｋ　ｂ凹狙ム１狙）、 、Ｓ、ｆｉ（Ｌ　訂お胆ｕ）　、Ｓ、上盈ｊシク’７７％（Ｓ、　ｄｌａｔｅｎ ｓｉｓ））　、７７％＜／Ｌ’玉ラノうＡｓ　ｅｒ　１ｌｌｕｓ）（たとえば、 人、オルイザ（Ａ、肛Ｕ並）、人、ニガー（Ｌ（たとえば、入、乏玉又叉（Ｘ、 鮭■田圏＞　、Ｘ、ヒポオキシロン（ム捜男囚佳並）、Ｘ、ヱ久込ユヱ（χ−野 μ且■柱））、Ｌ立九り虹乙１ｌ（Ｃｕｎｎｉｎ　ｈａｍｅｌｌａ　ｅｃｈｉｎ ｕｌａｔａ）　（いくつかの菌株）、及びｌｊ！±プメーＡ火Ａ孟盃（すｊ力１ ■匹朋匹並）（い（つかの菌株）。ひじょうに所望されるメチルアントラニレー トの収量は、実質的にすべての属の木材腐敗菌、より好ましくは上ｊＪ安り人（ Ｔｒａｍｅｔｅｓ）　、；Ｈ’）　’：Ａ　９５とＬ入（独−５ｔｉｃｔｕｓ） 及び土Ｊ二±旦ノ、（庖ｍ仄■）の属の種類及び最っとも好ましくは止うヱ賢丸 入ンク３（卜久（Ｔｒａｍｅｔｅｓ亘ヨ囮ユ垣）ＡＴＣＣ２６７４７及びメ」」 （乞Ｘ　’／　Ｘ　（ｂｂ凄ｍ■５ｏｓ）　ＡＴＣ１００８９により得られる。

本発明の方法の態様によれば、培養物懸濁液は、選択された微生物による適切な 栄養ブイヨンの接種により調製される。

適切な栄養ブイヨンは、炭素源、窒素源、微量鉱物及びいづれか必要な増殖因子 、たとえばビタミンを含むブイヨンである。適切な炭素源は、好ましくはラクト ース、セロビオース、マンニトール、ソルビトール、エタノール、グリセロール 、より好ましくは単糖類、たとえばマンドース、フルクトース、ラムノース、キ シロース及び最っとも好ましくはグルコース又は麦芽抽出物である。適切な窒素 源として、窒素含有有機物質、好ましくはペプトン、肉抽出物、トウモロコシ含 浸汁及び最っとも好ましくは酵母抽出物を挙げることができる。

無機窒素含有化合物、たとえばニトレート、ニドリット及びアンモニウム塩もま た適切である。これらの栄養物は、培地へのビタミン（特に、Ｂグループのビタ ミン）及び／又は微量鉱物（たとえばＦｅ、　Ｃｕ＋　ｌ’ｌｏ、　Ｍｎ、　Ｐ 、　Ｃａ及び同様のもの）の添加により補足され得るが、しかしながらその方法 は、少量の酵母抽出物が添加される場合、補足されていない培地で行なわれ得る 。

本発明の態様の接種は、適切な栄養ブイヨンに選択された微生物培養物を添加し 、そして基質（すなわちジメチルアントラニレート）の添加の前、１〜１４日間 、適切な温度及びｐＨで前記生物体をインキュベートすることによって行なわれ る。このインキュベーション期間の長さは、使用される生物体により異なるが、 しかしその培養物の増殖は、炭素源の消出、ｐＨの変化を測定することによって 又は視覚による観察（すなわち、培養ブイヨン中の濁りの出現又は菌糸体の出現 ）によりモニターさ、れ得る。

微生物及び基質の培養は、静置培養として行なわれ得るが、しかししばしばそれ よりも高い収量が、微生物が好気性条件下で液内培養（すなわち、振盪フラスコ 培養又は発酵器培養）中で増殖される場合に得られる。適切なｐＨ範囲は約３． ０〜約８．０、及び好ましくは約５．０〜約８．０及び特に約６．０〜約７゜０ である。そのｐＨは、無機又は存機酸又は塩基の添加により調節され得る。イン キュベーション温度は、好ましくは約１８°Ｃ〜約３３°Ｃであり、より好まし くは約２０°Ｃ〜約３０°Ｃであり、そして特に約り２℃〜約２６゛Ｃである。

発酵は、培養物ブイヨンから単離された微生物の細胞を用いて又は通常の酵素抽 出技法により細胞から単離された酵素により行なわれ得る。単離された酵素を用 いる場合、その反応は便利には、水溶液（たとえば生理的食塩水、緩衝溶液、新 鮮な栄養培地、等）中で行なわれ、又は単離された細胞又は酵素抽出物が固体支 持体上に固定され、そして所望する生成物が生存生物体の不在下で製造され得る 。形質転換はまた、微生物の変異体によりも行なわれ得る。これらの変異体は、 当業界に良く知られた方法（たとえばＵＶ照射、突然変異誘発物質への暴露、等 ）により容易に行なわれ得る。

一般的に、基質は、微生物が成熟した後、発酵ブイヨンに直接添加され得る。ジ メチルアントラニレート及びＴｗｅｅｎ−８０（モノ−オレエート）のエマルジ ョンは、ブイヨン中のジメチルアントラニレートの最終濃度が約１０％まで、好 ましくは約２％まで、及びより好ましくは約０．５％までであり、そしてＴｗｅ ｅｎ−８０の濃度が約１％までであるように調製され得る。

この反応混合物は、さらに１〜１４日間、好ましくは３〜１０日間及び特に４〜 ８日間（使用される生物に依存して）、又はメチルアントラニレートの追加の生 成が観察されないま５ゴ、インキュベートされる。

本発明のジオ法のために使用される通常の条件下で、少量のべ一ホルミルーメチ ルアントラニレートがまた生成される。

従って、これらの２種の生成物は、発酵が完結した後、ブイヨン中に混合物とし て典型的には存在する。Ｎ−ホルミル−メチルアントラニレート及びメチルアン トラニレート並びに反応されなかったジメチルアントラニレートの混合物は単離 され得、そしてそれらの３種の個々の成分は、従来の技法（たとえば溶媒抽出、 蒸留及びクロマトグラフィー分離技法）により分離される。Ｎ−ホルミル−メチ ルアントラニレートは塩基又は加熱触媒された脱カルボキシル化によりメチルア ントラニレートに容易に転換され、そして所望により、そのメチルアントラニレ ートの収量はこの反応を用いることによって高められ得る。すべての場合、出発 材料及び生成物の９５〜９８重景％が重量され（すなわち所望しない副生成物へ の出発材料の微生物による分解は存在しない）、そして〉９５％のＧＬＣ純度が 、単純な溶媒抽出の後、得られた。

次の例は、例示的であって、本発明の請求の範囲を限定するものではない。

■土 ｍ−５いてのトーメースペルシコラー（Ｔｒａｍｅｔｅｓｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ の それぞれ酵母−麦芽（ＹＭ）ブイヨン（Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ）１００ｄを含む５個のフラスコを、１２１°Ｃで２０分間オートクレーブにか け、冷却の後、それぞれのフラスコを、−トラノヨ尤スベルシコ４二１．ＡＴＣ Ｃ４２３９４の３日間のＹ　Ｍ　７’イヨン培養物５戚により接種した。それぞ れの培養物を、回転インキュベーター／振盪機上で３０°Ｃ及び２０Ｏｒｐｍで ３日間インキュベートした。Ｔｗｅｅｎ−８０及びジメチルアントラニレ−）（ Ｄ？’ｌＡ）のエマルジョンの種々のアリコートを、それぞれの培養物に添加し 、発酵ブイヨン中におイＴＯ，２、０，５、１，０、５，０及び１０．０％の最 終ジメチルアントラニレート濃度を得た。それぞれの培養物をさらにインキュベ ートし、そしてその結果は、メチルアントラニレート（ＭＡ）の％濃度として第 １表に示される。

第一」ニー表 ＹＭブイヨン”中において増殖されたトラメテスペルシコラー株４２３９４によ るＭＡ［ｔに対する初期ＤＭＡ濃度の効果＊　Ｎ−ホルミル−メチルアントラニ レートがまた上記に検出されるが、しかし定量化されなかった。後でのデータは 、Ｎ−ホルミル−メチルアントラニレートへの２％の転換率が１％の初期ＤＭＡ 濃度により得られたことを示した。

■↓ 五　自立　いてのトーメースの 例Ｉに記載されるものに類似する方法及び材料を用し）た。

但し、微生物を培養するためにＹＭブイヨンの代わ引乙ＮＨ４Ｎ０ｚ　（３ｇ／ 　ｆ！、）、　ＫｚＰＯ４（１，３ｇ／　ｊ２）、　Ｍｇ５ｏ４・７８２０（０ ，５ｇ／　１．　ＫＣＩ　（０，５ｇ／　ｆ！、）、　Ｆｅ５Ｏｎ　（０，０１ ｇ／　Ｒ）　、酵母抽出物（５ｇ／ｆ）及びグルコース（１５ｇ／ｌ）を含む鉱 物塩溶液を用い、そしてＭＡ濃度及びインキュベーション期間において前記第１ 表に示される結果に類似する結果が得ら也のトーメースの 例Ｉに記載される方法及び材料を用いた。

但し、上立人文囚属の他のメンバー、たとえばＴ、ベルシコラー株＾ＴＣＣ３４ ５７Ｂ、　４２３９４．３２０８５．１１２３５．３２７４５．１２６７９゜３ ４５８４、３８０６８．３８０？０．４２４６２．４４６７７　、工、左上本丸 史ヱ（Ｔ、　ｃａｒｂｏｎａｒｉａ）２６７４６、工、２ヱグ豆ｌ（Ｔ、　（」 工国島）２６７４７、工、クベンシス（Ｔ、　ｃｕｂｅｎｓｉｓ）１４５９０、 工、ｘｔｔ入＝Ｚヱ叉入（Ｔ、　ｅｘｔｅｎｕａｔｕｓ）２６１７４、工、ギボ サ（Ｔ、　ｊ対瓜鋒）３４６７０又番よ工、占！Ｓ食区（Ｔ、　ｊ辻肛力垣’） 　３６２０６、又はヌ」つこＡ上」二（乙、及び久立竺立１入を用い、そして例 Ｉに記載されるような結果が得られた。

■ヱ ポリポラスＳ　Ｓの つ 例Ｉに記載される方法及び材料を用いた。但し、微生物とて±ユ生立λ上工ｓ　 ＡＴＣＣ１００８９を用い、そして例Ｉの結果と類似する結果が得られた。２％ のジメチルアントラニレート及び１％のＴｗｅｅｎ−８０を添加された、この生 物（二倍の強さのＹＭブイヨンにおいて増殖された）の７日間の培養物を用い、 そしてさらに７日間の連続した反応により、メチルアントラニレートへの１９． ７％の転換率及びＮ−ホルミル−メチルアントラニレートへの９．８％の転換率 が測定された。

孤Ｖ 正　れたポ１ボースｓ　ｓの 例Ｉに記載される方法及び材料を用いた。但し、２％のジメチルアントラニレー トの添加の前、ｆｌ±旦ス土１上１００８９のインキュベーション期間を１３日 間に延長し、続いて追加の１１日間のインキュベーションにより、出発材料の３ ４．８％がメチルアントラニレートに転換され（これは７ｇのメチルアントラニ レート／１２のブイヨンを示す）、そして１４．２％がＮ−ホルミル−メチルア ントラニレートに転換され（又は２．８ｇ／Ｉ！、）、そして残りは、ジメチル アントラニレートとして回収された。

肛 約０．５〜１．０％の使用レベルでアルコール飲料又は炭酸飲料に使用するため に適切な、プロピレングリコールキャリヤーにおける典型的な天然のコンコード ブドウ風味を、次の通りに調製した： −成一一一分一　−％− メチルアントラニレート　０．１０ 酢酸エチル　１．００ 酪酸エチル　０．３０ イソ吉草酸エチル　０．１５ プロピオン酸エチル　０．３０ 酢酸　１．５０ プロピレングリコール　２０．００ 脱イオン化水　３６．３４ コンコ一ドブドウジユース濃度６８　＠＝Ｂｒｉｘ　４０．００水及びジュース 濃縮物を除く成分が一緒に混合し、水及び濃縮物をブレンドし、そしてその混合 物を、透明な溶液が得られるまで撹拌した。圧力下での炭酸ガス飽和が、所望す るブドウ飲料を製造した。

汎■ 約０．５〜１．０％の使用レベルでチューインガムに使用するために適切な、植 物油キャリヤーにおける典型的な天然の風味（コンコードブドウタイプ）システ ムを、次の通りに調製−迩しｍ：たー　−％− 天然の酪酸エチル　２．０ 天然のプロピオン酸エチル　８．０ 氷酢酸　４．５ 天然のメチルアントラニレート５．０ 天然のジメチルアントラニレート　５．０天然の酢酸エチル　４．０ 植物油　７１．５ ｉｏｏ、。

風味は、糖及びガム基材と共に混合し、そしてチューインガムを得るために押し 出され又は型状化された。

■ 約０．５〜１．０％の使用レベルでアルコール飲料又は炭酸飲料に使用するため に適切な、穀物アルコールキャリヤーにおける典型的なコンコードブドウＷＯＮ Ｆ風味を、次の通りに調製したニ ー成−−−分一　−％− 天然のメチルアントラニレート　０．０５天然のジメチルアントラニレ−）　０ ．０５天然の酢酸エチル　１．００ 天然の酪酸エチル　０．３０ 天然のイソ吉草酸エチル　０．１５ 天然のプロピオン酸エチル　０．３０ オイルオレンジＦＣＣフロリダ　０．０１穀物からのビネガー１２０　４．００ 穀物アルコール　２０．００ 脱イオン水　３４．１４ コンコ一ドブドウジユース濃度６８°＝Ｂｒｉｘ　４０．００１００．００ アルコール、水及びジュース濃縮物を除く成分を混合し、そして残る成分をブレ ンドし、単一の濃度の液体を形成し、そして場合によってはその液体を所望する 飲料を形成するために炭酸ガス飽和した。

国際調査報告 ＰｃＴ／ＬＩＳ８８１０２２６２ ａｎｔｈｒａｎｉｌａｔａ　ｄｉｍｅｔｈｙｌ？ｆｕｎｇｉ、１ｕｎｑｕｓ、ｆ ｕｎｇａｌ　ｏｒ　ｍｉｃｒｏｂｅｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ　ｏｒ　ｂａｃ ｅｅｒｔａｐｏｌｙｐｏｒｕｓ

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. １．メチルＮ−メチルアントラニレートのメチルアントラニレートヘの転換方法 であって、好気性栄養ブイヨン中において、菌類微生物の培養物及びブイヨン、 培養物及びメチルＮ−メチルアントラニレートの合計重量に対して約１０重量％ までのメチルＮ−メチルアントラニトレートをインキュベートし、それによって メチルアントラニレートを生成することを含んで成る方法。
2. ２．前記菌類微生物が、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、アス ペルギラス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、キシラ リア（Ｘｙｌａｒｉａ）、アルトロバクテル（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）、ク ニングガメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ）、クラビセプス（Ｃｌａｖｉｃ ｅｐｓ）、トラメテス（Ｔｒａｍｅｔｅｓ）、ポリスチクタス（Ｐｏｌｙｓｔｉ ｃｔｕｓ）又はポリポラス（Ｐｏｌｙｐｏｒｕｓ）を含んで成る請求の範囲第１ 項記載の方法。
3. ３．前記微生物が木材腐敗菌類又はセルロース又はリグニンを分解することがで きる菌類である請求の範囲第１項記載の方法。
4. ４．前記微生物がトラメテス、ポリスチクタス又はポリポラス属の微生物である 請求の範囲第１項記載の方法。
5. ５．前記微生物がトラメテス　シングラタ（Ｔｒａｍｅｔｅｓｃｉｎｇｕｌａｔ ａ）ＡＴＣＣ２６７４７又はポリポラスｓｐｓ（Ｐｏｌｙｐｏｒｕｓｓｐｓ）Ａ ＴＣＣ１００８９である請求の範囲第１項記載の方法。
6. ６．前記栄養ブイヨン及び培養物からメチルアントラニレートを分離することを さらに含んで成る請求の範囲第１項記載の方法。
7. ７．前記メチルアントラニレートを、メチルＮ−ホルミルアントラニレートとの 混合物中に生成する請求の範囲第１項記載の方法。
8. ８．栄養ブイヨン及び培養物から前記混合物を分離することをさらに含んで成る 請求の範囲第７項記載の方法。
9. ９．塩基触媒された又は熱脱カルボニル化反応により前記メチルＮ−ホルミルア ントラニトレートをメチルアントラニレートに転換することをさらに含んで成る 請求の範囲第８項記載の方法。
10. １０．ｐＨが約３〜約９の範囲であり、温度が約１８℃〜約３３℃の範囲であり 、そしてインキュベーション期間が１〜１４日間である請求の範囲第１項記載の 方法。
11. １１．前記ｐＨが約５〜約８であり、前記温度が約２０℃〜約３０℃であり、そ して前記インキュベーション期間が約３〜１０日間である請求の範囲第１０項記 載の方法。
12. １２．前記ｐＨが約６〜約７であり、前記温度が約２２℃〜約２６℃であり、そ して前記インキュベーション期間が約４〜約８日間である請求の範囲第１０項記 載の方法。
13. １３．前記インキュベーションを連続した発酵として行なう請求の範囲第１項記 載の方法。
14. １４．前記栄養ブイヨンが、有機窒素源、炭水化物源、鉱物源及びビタミン源を 含む請求の範囲第１項記載の方法。
15. １５．前記メチルＮ−メチルアントラニレートの濃度が、約２．０％よりも高く ない請求の範囲第１項記載の方法。
16. １６．前記メチルＮ−メチルアントラニレートの濃度が、約０．５％よりも高く ない請求の範囲第１項記載の方法。