JPH02306970A

JPH02306970A - ベンゾフラニルプロペノイックアシッド誘導体

Info

Publication number: JPH02306970A
Application number: JP1127488A
Authority: JP
Inventors: Munehito Matsuda; 宗人松田; Michihide Kanita; 蟹田　理英; Yuji Saito; 雄二齋藤; Eizaburo Yumioka; 弓岡　栄三郎
Original assignee: Kanebo Ltd
Current assignee: Kanebo Ltd
Priority date: 1989-05-19
Filing date: 1989-05-19
Publication date: 1990-12-20

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】「産業上の利用分野」本発明は、飛昇より、４量Ｍされた新規なベンゾフラニ
ルプロペノイックアシッド誘導体に関する。

さらに詳しくは、下式（１）で表わされる新規ベンゾフラニルプロペノイックアシッ
ド誘導体に関する。本発明の化合物は抗炎症剤としての
用途が期待される。

「従来の技術」飛昇（Ｓｃｈｉｚｏｎｅｐｅｔａ　ｔｅｎｕｉｆｏｌｉ
ａ　ＢＲＩＱ、）はシソ科に属する植物であり、例えば
十昧敗＠湯等の漢方薬に配合される生薬の一つである。

飛昇の酢酸エチル抽出物を水蒸気蒸留して得られる精油
が抗炎症作用を有することは既に知られており、その有
効成分の１つとして１−ブレボンが報告されている（山
原條二等、薬学雑誌、１００巻、７１３頁、１９８０年
参照）。また、強い抗炎症活性を有する、カフェー酸の
３量体あるいは４量体構造の下記ベンゾフラニルプロペ
ノイックアシッド誘導体（下配化合物Ｘおよび下記化合
物Ｙ）が本発明者等によって既に単離され報告されてい
る（昭和６３年４月６日、日本薬学会第１０８年会にて
発表）。

化合物Ｘ化合物Ｙ「発明が解決しようとする課題ノ本発明者等は、上記化合物Ｘおよび化合物Ｙよりもさら
に強い抗炎症作用を有する化合物を飛昇より！＃離すべ
く種々検討した９本発明の目的は、より強い抗炎症作用
を有する新規化合物を提供することにある。

「課題を解決するための手段」種々検討の結果、本発明者等は飛昇から前記化合物Ｙの
メチルエステル、すなわち下式（ｆ）（Ｉ）で示される新規ベンゾフラニルプロペノイックアシッド
話導体の単離に成功し、この化合物が前記化合物Ｘおよ
び化合物Ｙよりも強い抗炎症作用を有することを見いだ
し本発明を完成した。

以下、本発明化合物（Ｉ）の単離精製法について説明す
る。

まず飛昇をアセトン−水の混合溶媒に冷浸して抽出する
。アセトン−水の混合比は通常７：３（Ｖ／Ｖ）であり
、１回の抽出に飛昇１ｋｇ当り３〜４Ｉの量を用い、３
〜４回玲浸抽出をくり返して抽出液を得る。

次に、抽出液中のアセトンを減圧下に留去して水溶液を
得、これをクロロホルムで４〜６回洗浄する。

次に、上記で得られる水層を酢酸エチルで５〜６回くり
返し抽出して酢酸エチル抽出液を得る６次に、上記抽出
液を減圧下に濃縮し抽出エキスを得、これを、以下の通
り３〜４回カラムクロマトグラフィーで分１１Ｊｔ特製
する。

まず、多孔性ポリマー、例えばダイヤイオンＨＰ−２０
［三菱化成（株）製］を充填したカラムクロマトグラフ
ィーに上記抽出エキスを供し、本発明化合物（Ｉ）を含
む両分を得る。溶出溶媒には、水−メタノールの混合溶
媒を用い、順次メタノール濃度を上昇させながら本発明
化合物（Ｉ）を含む画分を溶出させる０本発明化合物（
１）は、主として水−メタノールの約１　：　ｌ　（Ｖ
／Ｖ）混合溶媒で溶出され、前記化合物Ｘおよび前記化
合物Ｙが溶出した後に溶出される。

次に、本発明化合物（Ｉ）を含む上記の画分を集め、デ
キストラン重合体、例えばセファデックス＠（ファルマ
シア）を充填したカラムクロマトグラフィーに供し、夾
雑物を除去する。セファデックス［相］には通常、セフ
ァデックスＯＬ）Ｉ−２０（ファルマシア製）を用いる
。溶出溶媒としては水−メタノールの約ｌ：ｌ〜：ｌ＋
７（ｖ／ｖ）の混合溶媒を使用し、メタノール濃度を上
昇させながら溶出操作を行ない、本発明化合物（Ｉ）よ
りも先に溶出される夾雑物を除去する。本発明化合物を
含む両分は水−メタノールの約３　ニア　（ｖ／ｖ）の
混合溶媒で溶出される。

次に、本発明化合物を含む上記の画分を多孔トボリマー
、例えばトヨバール＠　ＨＷ−４０（東ソー製）を充填
したカラムクロマトグラフィーに供し、粗製の本発明化
合物（ｉ）を得る。このカラムクロマトグラフィーの溶
出溶媒には水−メタノールの約１　：　１　（Ｖ／Ｖ）
の混合溶媒を用いる。

最後に、高速液体クロマトグラフィーおよび／または再
結晶により精製する。高速液体クロマトグラフィーのカ
ラムにはオクタデシル化シリカゲルを充填したカラム、
例えばＹ　Ｍ　Ｃ−Ｐａｃｋ　Ｄ−００５−５［２ｃ…
ｘ２５ｃｍ、ヤマムラケミカルラボラトリー（株）製］
を用い、溶出液には１％ギ酸水溶液とアセトニトリルの
２　：　１　（ｖ／ｖ）の混合溶媒を用いるのが好まし
い。

「発明の効果」抗炎症作用の強さは、酸化還元酵素の１種である３α−
ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼＥＣ，１，１，
１，５０（以下３α−１１ｓ［ｌと略記する）を阻害す
る活性により判定出来る［　Ｔ　、　Ｍ、　Ｐｅｎｎｉ
ｎｇ等、　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎ）（ｏｆ　　ｔｈｅ　　
Ｎａｔｉｏｎａｌ　　Ａｃａｄｅｍｙ　　ｏｆＳｃｉｅ
ｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ　
ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ　、　８０巻、４５０４頁、１９
８３年、および大兄等、日本生薬学会第３４回年令（大
阪）講演要旨集１６頁、昭和６２年参照］ので、これら
の方法に従りて、本発明化合物（Ｉ）の上記酵素阻害活
性を測定したところ、本発明化合物（１）は、前記化合
物Ｘ、化合物Ｙ、カフェー酸、そしてカフェー酸の２量
体構造を有し既に抗炎症作用が報告されているロズマリ
ン酸［Ｌ、　Ｇｒａｃｚａ等、Ａｒｃｈｉｖ　ｄｅｒ　
Ｐｈａｒｉａｚｉｅ（Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、　ｇａｒｍａ
ｎｅｙ）、　３１８巻、１０９０頁、１ｇ８５年参照］
のいずれよりも強い活性を示した。また代表的な抗炎症
鎮痛剤であるアスピリンよりもはるかに強い活性を示し
た（後記試験側参照）。従って本発明化合物（Ｉ）は、
より活性の強い抗炎症剤として期待し得るものである。

以下、試験例を挙げて本発明化合物（Ｉ）の抗炎症作用
を説明する。

試験例日本生薬学会第３４回年令（大阪）、講演要旨集１６頁
、昭和６２年、に記載された方法に従って、以下の通り
試験した。

１、検体・本発明化合物（Ｎ・化合物Ｘ（比較化合物）・化合物Ｙ（比較化合物）・ロズマリン酸く比較化合物）・カフェー酸（比較化合物）・アスピリン（比較化合物）２、試験方法１）酵素（３α−Ｈ２Ｏ）液の調製ＳＤ系雌雄性ラット肝臓を摘出し、３倍重量のホモジネ
ート溶液（１００ｍＭ　リン酸カリウム緩衝液、２５０
ｍ＆ｌショ糖、１ｍＭジチオスレイトール及び１ｍＭエ
チレンジアミン四酢酸ナトリウムよりなる）を加えてホ
モジナイズ後、１００ＯＯＧ、　４℃の条件下で３０分
間遠心し、上清を得た。この上清をさらに、１００００
０Ｇ　、　４℃の条件下で６０分間遠心し、その上清（
サイドシル画分）を取り、酵素液（３α−Ｈ５ＤＱｆｆ
ｌ）を得た。これを、ｐＨ６、ｏの１００ｍＭ　リン酸
カリウム緩ｍ？ＴＮ、Ｃ以下、　ＰＢＳ　という）で２
．５倍に希釈して検定用酵素液を得た。

２）酵素（３α−Ｈ２Ｏ）阻害活性の測定まず下記の■
〜■の操作を行ない、検体存在下で酵素反応によって起
こる３４０ｎｍの吸光度の減少値（Ｓ）を求めた。

■検体を、ＰＢＳ　２．０ｍｆｔに３７℃で溶解し、検
体溶液を調製する。

■検体溶液に、前記の検定用酵素液０．２ｍＡを加え、
　１０分間ブレインキュベートし、ニコチン酸アミドア
デニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＩ（）のＰＢＳ
溶（Ｔ！ｉ（ＮＡＤＰ）！　濃度９ｍＭ　）　０．２ｍ
Ａを加え、さらに１０分間インキュベートする。

■４−ニトロアセトフェノンのアセトニトリル溶（ｒ！
ｉ（濃度２５ｍＭ）　０．１ｍＡを加え、３０秒後と１
０分後に３４０ｎｍでの吸光度を測定し、吸光度の減少
値（Ｓｌ）を求める。

■上記■で４−ニトロアセトフェノンのアセトニトリル
溶液のかわりにアセトニトリル０．１ｍＡを加える他は
全く同様にして■〜■をくり返し、基質−（４−ニトロ
アセトフェノン）が存在しない時の吸光度の減少値（Ｓ
２）を求める。

■Ｓ１とＳ、の差を取り、検体存在下で酵素反応によっ
て起こる吸光度の減少値（Ｓ）を求める（すなわち５＝
ＳＩ　　３２）。

一方、検体を加えない時に酵素反応によって起こる吸光
度の減少値（Ｃ）を求める。すなわち、前記■で検体溶
液のかわりにＰＢＳ　２．ｈ℃を用いる他は前記と同様
にして、■〜■を行ないＳｌ　に対応する値ＣＩ、およ
びＳ２に対応する値Ｃ２を求め、検体を加えない時の吸
光度の減少値（Ｃ）を求めた。

次に、下式により、検体による酵素阻害率を算出した。

そして、検体の各種濃度における酵素阻害率を求め、プ
ロビット法により各検体の５０％酵素阻害濃度（以下、
ＩＣ，。と略記する）を算出した。

３、試験結果結果を第１表に示す。

第１表「実施例」以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。

なお、以下の分離精製過程で本発明化合物（Ｉ）を含有
する画分け、下記条件の高速液体クロマトグラフィーに
よって検出し、採取した。

カラム：　Ｙ　Ｍ　Ｃ−Ｐａｃｋ＾３１２［ＯＤＳ、６
ＬＩ１ｍ　Ｘ　１５ｃ＋ｍ。

ヤマムラケミカルラボラトリー（株）製］溶出液＝１％ギ酸−アセトニトリル５　：　２　（ｖ／
ｖ）混合溶媒流速：　１＋ｎＩｌ／分カラム温度：４０℃ 検出波長：　Ｕ　Ｖ　２８０ｒ＋ｍこの条件で、本発明化合物（１）の保持時間は約２０分
であり、化合物Ｘおよび化合物Ｙのそれはそねぞれ約７
．４分および約１３．３分である。

実施例１キシ−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）ベンゾフ
ラン−５−イル　−２−プロペノエート韓国産の乾燥飛
昇花穂ＩＱｋｇをアセトン−水７：３　（ｖ／ｖ）の混
合溶媒４０１で６時間、３ｉで６時間さらに３０Ｊ２で
６時間、計３回冷浸抽出し、これらの抽出液を合わせ、
減圧下に濃縮し、ＩＯ２の濃縮水溶液を得た。これを各
々１ｏｆｌのクロロホルムで５回洗浄後、各々１０１の
酢酸エチルで５回抽出し、酢酸エチル抽出液を得た。酢
酸エチルを減圧下に留去し、抽出エキス８０ｇを得た。

この抽出エキス８０ｇをカラムクロマトグラフィー［充
填剤：ダイヤイオンＨＰ−２０三菱化成（株）製、１．
３Ｊ２］に供し以下の第２表の通り、順次メタノール濃
度を上げた溶媒で溶出して、３５の画分に分画し第２表１　　　　　　　　　水　　　　　　　　　　２００２
　　　　　　　水−メタノール（５：１）　　　　　　
　６００３〜９　　　　　水−メタノール（３：２）　
　　　　　各々　５００１０〜２３　　　　水−メタノ
ール（１：１）　　　　　　各々５００２４〜３２　　
　　水−メタノール（３ニア）　　　　　　各々５００
３３〜３５　　　　　　メタノール　　　　　　　　　
　　各々　５００両分番号１４〜２３の両分を集め減圧
下に溶媒を留去し、本発明化合物（１）を含む残漬７．
１８ｇを得た。

これをセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製）
　２０８ｍｕを充填したカラムクロマトグラフィーに供
し、水−メタノールＩ：１（ｖ／ｖ）の混合溶媒、水−
メタノール３　ニア　（Ｖ／Ｖ）の混合溶媒およびメタ
ノールを使用し溶出させ、第３表に示す４つの第　　３
　　表１　　　　　　　水−メタノールｆｌ：１）　　　　　
　　８４０２　　　　　　　水−メタノール（１：１）
　　　　　　　７２０３　　　　　　　水−メタノール
（３ニア）　　　　　　　７８０４　　　　　　　メタ
ノール　　　　　　　　　　　　　＋０００第３画分の
溶媒を減圧下に留去し、残漬（２，２１８）をさらに多
孔性ポリマー、トヨバールＨＷ−４０（東ソー製）　８
７ｍ１を充填したカラムクロマトグラフィーで精製した
。溶出溶媒には水−メタノール１　：　ｌ　（ｖ／ｖ）
の混合溶媒を用いた。溶出溶媒１１５０ｍｌが溶出した
後の両分１６００ｍ１を集め、溶媒を減圧留去し、粗製
の本発明化合物（ｒ　）　１．２９ｇを得た。

最後に、これを分取用高速液体クロマトグラフィー［カ
ラム：　ＹＭＣ−Ｐａｃｋ　Ｄ−００５−５，２０ｍ＋
ｎ　ｘ　　２５ｃｍ。

ヤマムラケミカルラボラトリー（株）製、溶出液・１％
ギ酸−アセトニトリル２　：　１　（ｖ／ｖ）混合溶媒
、流速：　　１ｌｒａｘ１分、検出：　Ｕ　Ｖ　２８０
ｎａ＋］で精製し、溶媒を減圧留去し本発明化合物（１
）　８２ＩＩＩｇを得た。これを水より再結晶すると無
色結晶が得られる。以下に物性分析値を示す。

融点＝１９４〜１９６℃ ＵＶ（ＭｅＯＨ）ｎｍ（Ｉｏｇε）：　２０４（４，８
９）、　２２０ｓｈ（４，５９）。

２３０ｓｈ（４，５６）、　２９２（４，５３）、　３
ｔ７（４，５９）ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ−’：　３４４３
，１７０１，１６２１ｉ。

’　Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）　＋δｐｐｍ：　２
．８９−３．１３　（４Ｈ，ｍ）　。

：＋、７ｊ　（：ｌ）ｌ、ｓ）　、５．０６　（ｕ＋、
ｄｄ、＋−＋、４及び８．８Ｈｚ）。

５．４８　（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ−：１．４及び９．２Ｈ２
）　、６．２５　（ＩＨ，ｄ、Ｊ−１５，９Ｈｚ）　、
５．４７　（１）１．ｄ、Ｊ−８，３１（Ｚ）　、６．
５４　（ＩＨ，ｄ、７．９Ｈｚ）　、６．６１（ＩＨ，
ｂｒｓ）　、８．６４　（ＩＨ，ｄ、Ｊ−８，３ｔ＋ｚ
）　、６．５８（１）１．ｄ、Ｊ−７，９Ｈｚ）　、６
．７０　（ｌ）ｌ、ｂｒｓ）　、６．８９　（ｌｌ（、
ｄ、Ｊ−８，３Ｈｚ）　、７．１１（ＬＨ，ｂｒｓ）、
７．４１（ＩＨ，ｂｒｓ）　、７．４２（ＩＮ、ｄｉ−
８，３Ｈｚ）　、７．５２　（ＩＨ，ｂｒｓ）　、７．
５１　（ｌＨ，ｄ、！−１５，９Ｈｚ）　。

１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）　　δ　ｐｐｍ　二
　　３５．９．　　３６．７．　　５２．１゜７３．１
．７４．６．１０６．８．１１０．４．１１３．５．１
１５．２９゜１１５．３．１１５．５．１１８．２．１
１６．：Ｉ、　１１６．５，１１７．０゜１１９．２．
１１９．９．１２０．０．　＋２１．５，１２６．０．
　＋２８．４゜＋２８．５，１３１．１，１４２．６．
１４３．７，１４４．４，１４４．８゜１４４．９．＋
４５．１，１４８．５，１６１．８，１６２．６，１６
５．６゜１６９．８．　１７１．８゜ＳＩＭＳ　ｍ／ｚ（ｋ）：　　７８９（Ｍ＋Ｋ）”（１
）、　　７５３（Ｍ＋Ｎａ）”（８）。

７３１（Ｍ＋Ｈ）”（２）、　　５１９（１０）、　　
３２１（１００１゜［α］ざ’　　＋６１”　　（Ｃ−
０，５１，ピリジン）。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）下式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ）で表わされるベンゾフラニルプロペノイツクアシッド誘
導体。