JPH02223514A - ポリアミン酸化物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生体外および生体内の両者において、生きて
いる細胞において免疫抑制応答を引き出すための、ポリ
アミン酸化物、ことにアミノアルデヒド、例えば、Ｎ、
Ｎ’−ビス−（３−プロピオンアルデヒド）−１，４−
ジアミノブタン（スペルミンビスアルデヒド）の使用に
関する。本発明は、また、生きている有機体において免
疫抑制応答を誘発するための、これらの化合物の治療学
的適用に関する。

ポリアミン、例えば、スペルミン、スペルミジンおよび
グ１ヘレシンは、哺乳動物の細胞において広く分布して
いるが、それらの相対的濃度が異なることが分かってい
る。ポリアミン酸化物は寄生生物の成長を阻害し［Ｄ、
Ｍ、Ｌ、ＭＯＲＧＡＮおよびＪ、Ｒ，ＣＨＲＩＳＴＥＮ
ＳＥＮＳＡｄｖ。

Ｐｏｌｙａｍｉｎｅ　　Ｒｅｓ、、４．１６９−１７４
　（Ｉ９８３）；Ｉ）、Ｍ、Ｌ、ＭＯＲＧＡＮ。

Ｕ、ＢＡＣＨＡＲＡＣＨｌＹ、Ｇ、ＡＳＳＡＲＡＦ、Ｅ
、ＨＡＲＡＲＩおよびＪ、ＧＯＬＥＮＳＥＲ，Ｂｉｏｃ
ｈｍ、Ｊ、、２３６．９７−１０］（Ｉ９８６）］、フ
ァージおよびバクテリアの選択した菌株の感染性を抑制
し［Ｕ、ＢＡＣＨＲＡＣＨ，Ｓ、ＤＯＮおよびＨ，ＷＩ
　ＥＮＥＲ，ジャナル・オブ・ゼネラル・ピロロジー（
Ｊ、Ｇｅｎ、　　Ｖｉ　　ｒｏ　　１．　　）　　、　
　１３　　（Ｐｔ、　　　３）　　、　　４１５２２　
（Ｉ９７１）；に、ＮＩＳＨＩＭＵＲＡ。

Ｔ、ＫＯＭＡＮＯおよびＨ，ＹＡＭＡＤＡ１バイオヒミ
カ・エト・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｉｍ、
Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ）、２４７（Ｉ）、ｌ　５３
−６　（Ｉ９７１）；　、ｒ、ａ、ＨＩ　Ｒ３ＣＨおよ
びＲ，Ｊ、ＤＵＢＯ３，ジャーナル・オブ・イクスペリ
メンタル・メディシン（Ｊ。

Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、）　、９５．９１９（Ｉ９５２）；ｃ
、ｗ、ＴＡＢＯＲおよびＳ、Ｍ、ＲＯ５ＥＮＴＨＡＬ、
　　Ｊ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、　１１６．１３９（Ｉ
９５６）］そしてウィルスのいくつかの菌株を不活性化
する［Ｕ、ＢＡＣＨＲＡＣＨおよびＥ、ＲＯ５’ＥＮＫ
ＯＶ　Ｉ　ＴＣＨ，Ａｐ　ｐ　ｌ　。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、２３　（２）、２３２　５（Ｉ
９７２）；Ｕ、ＢＡＣＨＲＡＣＩ（およびＳ。

ＤＯＮ、ジャーナル・オブ・ゼネラル・ピロロジー　（
Ｊ、Ｇｅｎ、Ｖｉ　ｒｏ　１．）、１１（Ｐｔ。

■）、ｌ−９（Ｉ９７１）；Ｕ、ＢＡＣＨＲＡＣ１］、
Ｃ，Ｗ、ＴＡＢＯＲおよびＨ，ＴＡＢＯＲ。

バイオヒミカ・エト・バイオフィジヵ・アクタ（Ｂｉｏ
ｃｈｉｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ）、７８．７６８
　（Ｉ９６３）、Ｕ、ＢＡＣＨＲＡＣＨおよびＪ、ＬＥ
ＩＢＯＶＩＣＩ、Ｉｓｒ、Ｊ。

Ｍｅｄ、Ｓｃｉ、、Ｌ　　５４１　（Ｉ９６５）；Ｊ。

５ＨＩＮＤＬＥＲｓ　ＥｘｐｅＩｅｎ　　ｉａ＋　２１
＋６９７　（Ｉ９６５）　　：Ｅ、ＫＡＴＺ、Ｔ、ＧＯ
ＬＤＢＬＵＭ、Ｕ、ＢＡＣＨＲＡＣＨおよびＮ、ＧＯＬ
ＤＢＬＵＭ、Ｉ　ｓ　ｒ、Ｊ、Ｍｅｄ、Ｓｃ　ｉ、、３
．５７５（２９６７）］。しかしながら、文献は阻害作
用がＰＡＯによるスペルミンの酸化の間に解放される、
アミノアルデヒドまたは他の毒性副生物、例えば、過酸
化水素およびアンモニアのためあるかどうかを明らかに
していない。

それゆえ、酸化されたスペルミンを使用して実施した研
究の印象的なリストにかかわらず、特定の免疫抑制また
は阻害活性を仲介する実際の分子構造は未知である。Ｐ
ＡＯによるスペルミンの酸化は、アンモニアおよび過酸
化水素に加えて６つの主要な酸化生成物を明らかにした
［Ｒ，Ｓ、ＬΔＢＩＢおよびＴ、Ｂ、ＴＯＭＡＩ、ＪＲ
，、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジ（Ｅ
ｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏ＋、）、１１，２６６−２６９
　（Ｉ９８１）］。生成物の各々の阻害作用は、分析さ
れてきていないが、二酸化スペルミンまたはスペルミン
ジアルデヒド［Ｎ、Ｎ’−ビス−（３−プロピオンアル
デヒド）−１，４−ジアミノブタン］は活性を実証する
であろうと信じられた。イスラエル（Ｉｓｒａｅｌ）ら
、ｓｕ、ｐ７〜 ｒａ、は、この分子を他の類似体と一緒に合成し、そし
て両者の化合物は生体外で阻害活性を示すことを発見し
た。しかしながら、これらの研究は、彼らが合成したジ
アルデヒドを使用する意味ある生体内の効能を発見する
ことができなかった。さらに、これらの分子は非常に毒
性であり、スペルミンジアルデヒド［Ｎ、Ｎ’−ビス−
（３−プロピオンアルデヒド）−１，４−ジアミノブタ
ン」は、腹腔内に投与したとき、４０ｍｇ／ｋｇのＬＤ
　＋ｏｏの厳しい急性毒性を示した。

本発明は、生きている細胞に、実質的に純粋な形態で、
免疫抑制応答を誘発するために効果量の、一般式Ｉ： ＯＣＨＡ　Ｌ　Ｋ　’　　Ｎ　Ｒ２ＣＨ２Ａ　Ｌ　Ｋ　
２ＣＨ２−ＮＲ２−Ｚ　　　　　　　（Ｉ）式中、 ＡＬＫ’は独立にアルキレンであり、 Ｒ２は独立に水素または−ＣＨ２Ｒ３であり、Ｒ３は独
立にアルキルであり、 ＡＬＫ２はアルキレンであり、そして ＺはＨまたはＡ　Ｌ　Ｋ　’　−ＣＨＯである、の化合
物またはその酸付加塩を投与することからなる、生きて
いる細胞において免疫抑制応答を誘発する方法を提供す
る。

この免疫抑制応答は、Ｔ細胞の集団、とくにヘルパーＴ
細胞および細胞障害性Ｔ細胞の下位集団の増殖の抑制に
ついて選択的である。

また、生きている有機体に、実質的に純粋な形態で、免
疫抑制応答を誘発するために効果量の、上の式を有する
化合物を投与することからなる、生きている有機体にお
いて免疫抑制応答を誘発する方法が提供される。

前述の方法は、種々の免疫学的に関係のある病気の状態
、例えば、移植組織対宿主の拒絶反応、遅延した過敏性
などの治療学的抑制においてとくに適当である。

本発明において、一般式： ％式％ 式中、 ＡＬＫ’は独立にアルキレンであり、 Ｒ２は独立に水素または−ＣＨ２Ｒ３であり、Ｒ３は独
立にアルキルであり、 ＡＬＫ２はアルキレンであり、モして ＺはＨまたはＡ　Ｌ　Ｋ　’　−ＣＨＯである、の化合
物、とくに合成法により得られるもの、またはその酸付
加塩は、生きている細胞に適用したとき、生きている細
胞において免疫抑制応答を誘発するとき有用であること
が発見された。ＡＬＫｌ、ＡＬＫ”およびＲ３の各々が
直鎖状もしくは分枝鎖状の約１〜約８個の炭素原子、好
ましくは約１〜約６個の炭素原子、より好ましくは約１
〜４個の炭素原子、最も好ましくは約１〜約２個の炭素
原子を有するアルキレンである、一般式Ｉの化合物はと
くに有用である。より好ましい実施態様において、Ｒ２
は水素である。とくに好ましい実施態様において、Ｚは
ＡＬＫ’−ＣＨＯであり、Ｒ２は水素であり、そしてＡ
ＬＫ’およびＡＬＫ２の各々は独立に約１〜約６個の炭
素原子、好ましくは約１〜約４個の炭素原子、最も好ま
しくは約１〜約２個の炭素原子を有するアルキレンであ
る。

ここで使用するために最も好ましい化合物はスペルミン
ジアルデヒドであると述べることができる。

ここに記載する化合物は、また、生きている有機体にお
ける免疫抑制応答の治療学的誘発において有用である。

とくに、本発明に従って使用する化合物の１つ、合成ス
ペルミンジアルデヒド、は、増大した効能および実質的
に減少した毒性［４００ｍｇ／ｋｇまで致死的でない、
文献に報告されたもこととは反対である（Ｌ　Ｄ　＋ｏ
ｏ　　４０　ｍ　ｇ／ｋｇ、ｌ５ｒａｅｌ　（Ｉ９７３
）ｓｕｐｒａ）］を実証した。したがって、これらの分
子、とくにスペルミンジアルデヒドを生体外の適用なら
びに生体内の適用の両者において免疫抑制応答を誘発す
るために使用することについて、下に詳述する。

ここで使用するとき、用語「免疫抑制応答」は、ヘモボ
イエチン幹細胞、とくにリンパ様系統から由来する細胞
の型の増殖における抑制を言及する。

ここで記載する化合物の使用は、Ｔ細胞の集団、とくに
Ｔ細胞障害性、Ｔヘルパーの下位集団の選】１ 択的抑制においてとくに適当である。免疫抑制は、また
、抗原非特異的であると記載することができ、これはミ
トゲン誘発Ｔ細胞増殖の９９％の抑制により例示される
。ある場合において、この分野と反対に、この選択的抑
制は不可逆的であることが示された。

ここで記載する使用のための化合物は、便利な方法で得
ることができる。化合物は好ましくは「実質的に純粋な
形態」で使用し、この「実質的に純粋な形態」は、その
化合物の形成の間に存在することかあり、かつ化合物の
効能を妨害するか、あるいは毒性を増加するであろう、
酵素または他の因子を実質的に含まないことを意味する
。それゆえ、好ましい形態において、化合物は、核磁気
共鳴吸収、質量スペクトル分析およびＨＰ　Ｌ　Ｃによ
り測定して、好ましくは９５％、より好ましくは９９％
、最も好ましくは１００％の純度である。

不活性物質は微量で存在することができる。

化合物は、生成物が普通の手段、例えば、クロマトグラ
フィーなどにより酵素から精製されるかぎり、天然に存
在するポリアミンの酵素的酸化により、この分野におい
て知られている技術に従って得ることができる。酵素的
酸化プロセスにおける使用に適当な酵素は、天然のポリ
アミンの急速な酸化的脱アミンを生ずるために有効なも
のである。このような酵素の例は、反飼動物の血清、例
えば、ウシ血清、ヒツジ血清、胎児仔ウシ血清などから
得られるアミンオキシダーゼである。また、マウス羊水
、ヒト妊娠血清などを使用することができる。

汚染物質による干渉を回避するために、化合物は有機合
成技術、例えば、下に記載するものを使用して、新たに
合成することが好ましい。とくに好ましい実施態様にお
いて、ここで使用する化合物はアミノジアルデヒドであ
る。ジアルデヒド化合物は酸の存在下にジアルデヒドの
転化により合成される。好ましいジアルデヒドは、式：
式中、 Ｒ１は独立にアルキルまたはベンジルであり、ＡＬＫ’
は独立にアルキレンであり、 Ｒ２は独立に水素または−ＣＨ２Ｒ３であり、Ｒ３は独
立にアルキルであり、そして ＡＬＫ２はアルキレンである、 により表される。好ましい反応は、次の反応の概要によ
り例示することができる： 反応の概要（Ｉ） （ｎ） （Ｉ［＋） ↓ Ｈ２Ｎ−い、Ｋ・１０Ｒ′ ＼ＯＲ’ （Ｖ） ／（■） （ＶＴ） 反応の概要（ＩＩ） ／（■） ↓ ＯＨＣＡＬＫ’　　ＮＲ２ＣＨ２ＡＬＫ”　　ＣＩ（２
ＮＲ２ＡＬＫ’　　ＣＨＯ（Ｉ） 上の反応の概要は、貯蔵することができ、そして一般式
（Ｉ）の化合物を発生ずるために使用することができる
、式（Ｘ）の化合物の好ましい合成の要約を記載する。

アセクールの形態の式（Ｉ　Ｉ）のクロロアルデヒドを
、式（ＩＩ■）のカリウムフタルイミドと、等モル量で
高温において反応させて、式（ＩＶ）のフタルイミドを
生成する。式（Ｉ　Ｉ）の化合物の例は、３−クロロア
セトアルデヒドジエチルアセクールおよび３−クロロプ
ロピオンアルデヒドジエチルアセクールである。次いで
、アミンをヒドラジンとの反応より高温において解放し
、式（Ｖ）の第一アミンを生成する。次いで、第一アミ
ン（Ｖ）は反応の概要ＩＩに示すように得ることができ
るか、あるいは変性して第二アミンを生成することがで
きる。第二アミンについて、式（Ｖ）の第一アミンを無
水物、例えば、ギ酸−酢酸無水物または酢酸無水物と、
約０°Ｃ〜室温であることができる温度において反応さ
せて、式（ＶＴ）のアミドを生成する。次いで、アミド
を水素化リチウムアルミニウムでテトラヒトｃ７７ラン
中で還流において還元して、式（Ｖｌｌ）の第二アミン
を生成する。式（Ｉ　Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ｖ■
）および（Ｖｌｌ）において、Ｒ１、ＡＬＫｌおよびＲ
３は、」二の式（Ｘ）において定義した通りである。

式（Ｖ）または（ＶＩＩ）のアセタールを調製する！こ
めに、対応するジエチル化合物を溶媒中に溶解し、そし
て少量の酸、例えば、トリクロロ酢酸の存在下にベンジ
ルアルコールと反応させ、次いで蒸留によりエタノール
副生物を追い出すことができる。異なるアルキル部分の
ために、ジエチル化合物をアルコール、例えば、メタノ
ール中にジメチルアセクールについて溶解し、そしてベ
ンジルの場合におけるように反応させることができる。

環化を回避するためｌこ、式ＪＴの化合物を、酸の存在
のために、この処理に付すことが好ましいことがある。

反応の概要ＩＩにおいて、それぞれ、化合物（Ｖ）また
は（Ｖｌｌ）と表示する、第一または第二アミンを式（
ｖｒｒｒ）の二酸クロライドと反応させる。二酸クロラ
イドの例は、スクシニルクロライドおよびグルタリルク
ロライドである。

この反応は約−７０〜−２０°Ｃの低温において温和な
塩基、例えば、トリエチルアミンの存在下に反応させて
、式（ＩＸ）のジアミドを生成する。

次いで、ジアミド（ｒｘ）を還元剤、例えば、水素化リ
チウムアルミニウムでテトラヒドロフラン中で還流にお
いて還元して、式（Ｘ）のジアミンジアセタールを生成
する。ジアミンジアセタール（Ｘ）を延長した期間の間
貯蔵し、そして患者の投与の部位に前述の条件のために
与えることができる。水素化リチウムアルミニウムで還
元した後、最終の生成物は好ましくはジアミン（Ｘ）と
酸との結晶塩の形態をつくることによって精製する。

次いで、遊離アミンを塩から再合成することができる。

しかしながら、貯蔵は塩の形態で容易である。過剰量の
酸はアセタール部分を破壊するので、酸との塩の生成は
実施しなくてはならないことに注意すべきである。

一般式（Ｉ）のジアルデヒドの解放のため、ジアセター
ル（Ｘ）を酸、例えば、塩酸と反応させて、遊離ジアル
デヒドを生成する。水酸化ナトリウムを使用して、必要
に応して、塩の形態から（Ｘ）を生成することができる
。

式（ＩＸ）、こうして（Ｘ）および（Ｉ）、ここでＡＬ
Ｋ’部分は同一でない、の化合物について、単一モルの
アミン（Ｖ）または（ＶＩＩ）を式（ＶＩＩＩ）の二酸
クロライドに対応する無水物、例えば、無水コハク酸と
反応させる。次いで、こうして生成した混合カルボン酸
−アミドを１モルの式（Ｖ）または（ＶＩＩ）の異なる
アミンと、ペプチドカップリング試薬、例えば、２−エ
トキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−シアヒドロ
キノリン。ＥＥＤＱとして知られている、または１．３
−ジシクロへキシルカーポジイミド、ＤＣＣとして知ら
れている、を使用して反応させて、２つのＡＬＫ’部分
が同一でない、式（ＩＸ）のアミドを生成する。

当業者は理解するように、ここにおける使用に適当なポ
リアミン酸化物の濃度は、実質的な毒性を示さないで、
所望の免疫抑制応答を誘発するために有効な濃度である
。有効濃度は、免疫抑制すべき特定の細胞およびこれら
の細胞を得ようとする有機体に従って、広く変化するこ
とができる。

ここにおいて使用する濃度の例は、スペルミンジアルデ
ヒドのために好ましい濃度から推定することができる。

これらの濃度は、一般に、約０．０１〜約０．２ミリモ
ル、より好ましくは約０．０３〜約０．１ミリモル、最
も好ましくは約０．０３〜約０．０６ミリモルの範囲で
ある。

ここに記載する技術により誘発される免疫抑制応答、お
よび投与の効能は、また、この分野において普通の方法
により生体外で測定することができる。これは、免疫抑
制すべき細胞を種々の濃度の化合物とともにインキュベ
ーションし、そしてこれらの細胞の集団の次いで起こる
増殖を、ここに記載する化合物で処置しなかった対照試
料のそれと比較することによって達成することができる
。

ポリアミン酸化物は、細胞に適当な生理学的に適合性の
賦形剤、例えば、生理的塩類溶液、リン酸塩緩衝液、メ
チルセルロース溶液などとともに投与する。化合物また
は均質な分散液は、このような投与に好ましい。細胞を
化合物とともに適当な成長培地、例えば、最小必須培地
（Ｍ　Ｅ　Ｍ）、ＰＲＭＩ　　１６４０および他の適当
な組織培地中でインキュベーションして、細胞の生存能
力を維持する。このインキュベーションは、細胞の増殖
の対照値と比較して、一般に、少なくとも約２５％、好
ましくは少なくとも約５０％の細胞増殖の抑制を誘発す
るために十分な時間の間実施する。

インキュベーションは、一般に、約１０分〜約１時間、
好ましくは約ｌＯ分〜約３０分の時間の範囲である。

ポリアミン酸化物で処置する細胞の治療学的使用の代表
例は、患者中へのこれらの抽出物の移植前における、ス
ペルミンジアルデヒドによる骨髄の抽出物の生体外処置
である。スペルミンジアルデヒドによる処置は、骨髄細
胞それら自体に毒性作用を示さないで、７９２３球を不
活性化することができる。この現象は、骨髄移植を行う
患者への致死的であることが認められている、典型的な
移植組織対宿主の反応を軽減することが示された。

ヒト被検体におけるこのような骨髄の抽出物のために適
当な処置のパラメーターは、前述の細胞の生体外処置で
あることができる。

本発明において、化合物の直接の生体内投与は、また、
有機体における免疫抑制応答を誘発するために有効であ
りうることが発見された。例えば、化合物スペルミンジ
アルデヒドの生体内投与は、生きている有機体における
移植組織対宿主の反応を大きく減少することができるこ
とが発見された。

さらに、この化合物の投与は細胞障害性Ｔ細胞の発生を
抑制することが発見された。細胞障害性Ｔ細胞は器官の
移植片の拒絶の仲介においである役割を演じ、こうして
、これらの細胞の生体内抑制は延長した移植片生存に導
くと信じられる。それゆえ、これらの化合物の生体内投
与は到達が困難な治療学的利点を有することを理解すべ
きである。

皮膚移植片の延長は、器官の拒絶反応を抑制することに
おける化合物の効能を予測するために、免疫学者により
使用されてきている。例えば、抗Ｔｈｙ抗体（オルトク
ローン（Ｏｒｔｈｏｃｌ。

ｎｅ）ＯＫＴ３のマウス同等体）［Ｒ，Ｍ、Ｇ。

ｒｃｙｚｙｎｓｋｉ、Ｍ、ＢｏｕｌａｎｇｅｒおよびＣ
，Ｌａｕ、、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ）、１３８：３１９７−３２０２　（Ｉ９
８７）］、ＦＮ１８　［Ｆｒａｎｓ　　Ｊ、Ｍ、Ｎｏｏ
ｉｊおよびＭ　ａ　ｒ　ｇ　ｒ　ｅ　ｅ　ｔＪｏｕｎｋ
ｅｒ、ｒアカゲザルにおいて多形性ＣＤ３様細胞表面分
子について特異的なモノクローナル抗体の皮膚同種移植
片の生存への作用（Ｔｈｅ　　ｅｆｆｅｃｔ　　ｏｎ　
　５ｋｉｎ　　ａｌｓ。

ｇｒａｆｔ　５ｕｒｖｉｖａｌ　ｏｆ　ａ　ｍ。

ｎｏｃｌｏｎａｌ　　ａｎｔｉｂｏｄｙ　　５ｐｅｃｉ
ｆｉｃ　　ｆｏｒ　　ａ　　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＣ
Ｄ３−ｌｉｋｅ　　ｃｅｌｌ　　ｓｕｒｆａｃｅｍｏｌ
ｅｃｕｌｅ　　ｉｎ　　ｒｈｅｓｕｓ　　ｍ。

ｎｋｅｙｓ）Ｊ、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー（Ｅｕ　ｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕ　ｎ　ｏ　ｌ　、
）、１９８７．１７．１０８９−１０９３］、（オルト
クローン○ＫＴ３のマウス同等体）は、すべて、皮膚移
植片の拒絶反応の抑制において有効であり、そしてと１
・における充実性器官の抑制において有効であることが
判明した［Ｃｏ５１ｍ１、Ａ、Ｂ、、Ｂｕｒｔｏｎｘ　
　Ｒ，Ｔ、、　　Ｇｏｌｖｉｎｓ　　Ｒ，Ｂ。

Ｇｏｌｄａｔｅｉｎ、　　Ｇ、、　Ｄｅｌｍｏｎｉｃｏ
、Ｆ、　　Ｌ、、　Ｌａｕｇｕａｇｌ　　ｉａ、Ｍ、　
　Ｐ、Ｔ。

１ｋｏｆｆ−Ｒｕｂｉｎ、　　Ｎ、、　Ｒｕｂｉｎ、　
　Ｒ。

Ｈ，、Ｈｅｒｒｉｎ、Ｊ、Ｔ、およびＲｕ５ｓｅ１１Ｘ
Ｐ、Ｓ、　、移植（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）
　　１９８１．　３２：５３５］、ＣｓＡ。

器官の移植のための効能のある免疫抑制性分子は、また
、皮膚移植片の実験において有効である。

緒にすると、これらのデータが示唆するように、匹敵す
る投与量のＣｓＡより有効である、スペルミンジアルデ
ヒドは、移植後器官の拒絶反応の停止において、少なく
ともＣｓＡと同程度に活性である。

過敏性はアレルギー反応と関係がある［ＤｅＷｅ　ｃ　
ｋ、Ａ、１９８３、ＩｇＥの応答の調節、アレルギーに
おける新しい傾向（Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　
ＩｇＥ　　ｒｅｓｐｏｎｓｅ、ＮｅｗＴｒｅｎｄｓ　　
ｉｎ　　Ａｌ　ｌｅｒｇｙ）、Ｊ。

ＲｉｎｇおよびＧ、Ｂｕｒｇ（編）、５ｐｒｉｎｇｅ　
ｒ−Ｖｅ　ｒ　Ｉ　ａｇｓベルリン］および自己免疫（
アレルギー性脳を髄炎）　　［Ｗｅ　ｉ　ｇ　ｌ　ｅ、
　Ｗ。

０、＋９８０、甲状腺炎およびアレルギー性脳を髄炎の
実験モデルによる自己免疫性の分析（Ａｎａｌｙｓｉｓ
　　ｏｆ　　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙｔｈｒｏｕｇｈ
　　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｏｄｅｌｓ　　ｏｆ　
　ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓａｎｄ　　ａｌｌｅｒｇｉｃ
　　ｅｎｃｅｐｈａｌ。

ｍｙｅｌｉｔｉｓ）、Ａｄｖ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。

３０．１５９］。スペルミンジアルデヒドがＤＴＨを抑
制するという事実は、それがある種の形態の自己免疫に
おいて有用でありうることを示唆する。足の裏の１回の
注射は、膨脹および炎症を抑制し、それを慢性関節リウ
マチ（ＲＡ）の患者における炎症した関節の処置に、関
節中への直接の注射により使用することができることを
示唆する。

病気の急性発赤を経験するＲＡ患者のために、プレドニ
ゾンの関節への直接の注射は非常に普通の処置である。

スペルミンジアルデヒドは、ＲＡ患者における炎症した
関節の処置におけるプレドニゾンの補充または代替物で
あることができるであろう。

本発明の方法に従って治療学的に投与される化合物は、
前述のように調製することができ、そして、また、好ま
しくはジアセタールから合成されたジアルデヒドである
。ポリアミン酸化物またはその製剤学的に許容されうる
塩を含有する配合物は、また、この方法において使用す
ることができ、成分、例えば、普通の製剤学的に許容さ
れうる担体、例えば、生理的塩類溶液または無菌の水、
あるいは配合物の溶解または保存を促進する成分を含有
する。

所望の免疫抑制を達成するために本発明の方法により化
合物を投与する好ましい生体内モードは、非経口的であ
り、より好ましくは静脈内または皮下、最も好ましくは
皮下である。しかしながら、投与の特定のモードは、効
果量の化合物が血液の流れ中に入るかぎり、重要である
と信じられない。

ある種の実施態様において、本発明・において、静脈内
または皮下に投与するスペルミンシアルデフ ヒトの約５〜ｌｏｍｇ／ｋｇは、実施例において詳述す
るように、移植組織対宿主の反応の抑制に有効であるこ
とがわかった。しかしながら、所望の免疫抑制応答を達
成するための、化合物の他の適当な投与量および投与の
頻度を決定することは、当業者の技量の範囲内であると
信じられる。約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ　　ｉ．ｐ．の皮
下投与は、静脈内投与と良好な相関関係をもつ。皮下投
与のために、当業者は投与量を増加することが必要であ
ることを認識するであろう。したがって、唯一の実施の
制限は、最適な効能により支配され、それゆえ、すべて
のこのような場合において、投与の頻度および投与のモ
ードはこの方法の範囲内に包含されることを意図する。

本発明の方法の効能は、移植組織対宿主の反応の臨床的
発現（ヒトまたは１種または２種以上の動物の種におい
て）、例えば、ねこ背、下痢、脱毛、劣った生理学的状
態、るいそう、および最も激烈な場合において、死の観
察により決定することができる。毒性の徴候、例えば、
白血球減少症、貧血、再構成の欠如などは、投与量の減
少を示すであろう。

効能の間接の測定は、投与量レベルの確立および監視に
おいて使用であることがある。例えば、これは、末梢Ｔ
細胞を使用して、混合リンパ球反応のアッセイにより、
細胞障害性Ｔ細胞の集団をアッセイすることによって決
定することができる。

文献において、アルデヒドデヒドロゲナーゼ（Ａ　Ｌ　
Ｄ　Ｈ）の阻害剤は、多能性へモボイエチン幹細胞およ
び骨髄性先祖細胞へのシクロホス７アミドの細胞障害性
急性を増強することが反復された［Ｈｉ　ｌ　ｔｏｎ，
Ｊ．（Ｉ９８４）癌の研究（Ｃｅｌｌ　　Ｒｅｓ．）、
４４、５１５６−５１６０；　Ｋ　ｏ　ｈ　ｎ　％　Ｆ
　、　Ｒ　、およびＳｌａｄｅｋ，Ｎ。

Ｅ−　　（Ｉ９８５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌ．３４、３４６５−３４７１　；Ｋｏｈｎ。

Ｆ．Ｒ．、Ｌａｎｄｋａｍｅｒｓ　Ｇ．Ｌ．　、Ｍａｎ
ｔｈｅｙｓ　ｃ．Ｌ．　、Ｒａｍｓａｙ，Ｎ．Ｋ。

ＣおよびＳｌａｄｅｋ，Ｎ．Ｅ．（Ｉ９８７）癌の研究
（Ｃｅｌｌ　　Ｒｅｓ．）、４７、３１８０３１８５；
５ａｈｏｖｉｃ、　　Ｅ、　　Ａ、、　Ｃｏ１ｖｉｎ、
Ｍ、Ｈｉ　Ｉ　ｔｏｎ、Ｊ、およびＯｇａｗａ、Ｍ、（
Ｉ９８８）癌の研究（Ｃｅｌｌ　　Ｒｅｓ、）、　４８
、１２２３−１２２６１　　。ＡＬＤＨが同様な変調を
発揮してＳＤＡについて異なる細胞の型に示差的な感受
性を与えるかどうかを、とくにＴリンパ球および／また
は腫瘍細胞で汚染された骨髄細胞の浄化において、決定
するために研究がなされた。研究によると、ＳＤＡの抗
折形成および免疫抑制活性は、少なくとも部分的に、標
的細胞中に存在する細胞内ＡＬＤＨにより変調されうろ
ことが示される。Ａ　Ｌ　Ｄ　Ｈの関与は次の観測で明
らかであった：　１）ＮＡＤ連結細胞質ＡＬＤＨはＳＤ
Ａを多分無毒の生成物（スペルミン酸）に酸化できるで
あろう：２）異なるレベルのＡＬＤＨを有する、ネズミ
白血病細胞Ｌ　ｌ　２１０／ｃＰＡおよびＬ　ｌ　２１
０１０はＳＤＡに対する感受性において異なる、および
３）ＡＬＤＨ阻害剤、ＤＥＡＢは、Ｌ　ｌ　２１０／Ｃ
ＰＡ細胞への、およびヘモボイエチン先祖細胞の特定の
コロニーへの、ＳＤＡの抗腫瘍および致死的急性を増強
した。

ＳＤＡは、肝臓および腫瘍の両者の細胞における細胞質
ＡＬＤＨのための高い親和性の基質として使用すること
ができるであろう。既知の阻害剤、シスルフィラム、Ｄ
ＥＡＢおよびアクロレイン阻害ＡＬＤＨおよび基質とし
てＳＤＡは、他のアルデヒドを使用するＡＬＤＨについ
ての前の報告と一致する。アクロレインにより効力のあ
る阻害は、ＳＤＡ処置に関連する毒性においてとくに重
要であることがある。溶液中のＳＤＡ分子の化学力学お
よびシクロホスファミドの代謝との比較に基づいて、Ｓ
ＤＡは、好適な塩基性触媒条件下に、β排除のプロセス
によりアクロレインを生成しうると推定することができ
る。ＳＤＡの代謝により生成したアクロレインがＡＬＤ
Ｈを阻害した場合、アクロレインの形成の増加および無
関係の毒性作用の機会の増加が存在したであろう。

ＡＬＤＨ活性の増加した発現は、２つの実験のネズミ白
血病細胞系におけるシクロホスファミドに対する抗腫瘍
薬物の機構であることが示された（上の参考文献参照）
。Ａ　Ｌ　Ｄ　Ｈの活性は、野生型の感受性Ｌ１２１０
１０細胞に比較して、Ｌ１２１０／ＣＰＡにおいて２０
０倍高かった。これらの細胞をＳＤＡで処置したとき、
増殖のアッセイは、Ｌ　ｌ　２１０１０細胞がＬ１２１
０／ＣＰＡ細胞より２倍だけ感受性であることを示した
。しかしながら、それはＳＤＡ活性へのＡ　Ｌ　Ｄ　Ｈ
の衝撃を必ずしも害さない。なぜなら、ある研究におい
て、本発明者はＤＥＡＢの予備処置が両者の細胞の型に
ついて等しい感受性を生じたからである。

可溶性ＡＬＤＨの異なるイソチームは種々の骨髄誘導細
胞系中に存在することが報告されてきており、そしてＳ
ＤＡはシクロホスファミド誘導体と同様に効率的にＬ　
ｌ　２１０／ＣＰＡ中に存在するイソチームと相互作用
することができない［Ｒｕ５ｓｏ、Ｊ、Ｅ、およびＨｉ
ｌｔｏｎ、Ｊ、（Ｉ９８８）癌の研究（Ｃｅｌｌ　　Ｒ
ｅｓ、）、４Ｂ、２９６３−２９６８］。

［３Ｈ］チミジンの組み込みにに基づく、イ、ズミ骨髄
細胞の増殖は、ＳＤＡのより低い濃度において比較的低
い細胞障害性を示した：しかしながら、ＤＥＡＢの予備
処置はＳＤＡ作用のの劇的な増強を引き起こした。ＳＤ
Ａ活性へのＡＬＤＨの影響はより低い濃度（〈２０μモ
ル）においてのみ関係があることを指摘することができ
る。ＳＤＡのより高い濃度において、薬物の非特異的毒
性は、細胞内ＡＬＤＨレベルに無関係に、主要比率を占
めると思われる。増殖とＳＤＡ投与に関するヘモポイエ
チン先祖コロニーの出現との間のに、良好な相関関係が
観察された。シクロホス７アミドについての従来の報告
との一致において、ＢＦＵ−ＥおよびＣＦＵ−ＧＭはＡ
ＬＤ阻害剤剤の存在下にＳＤＡに対してより感受性であ
ることがわかった。理論により拘束されたくないが、牌
Ｔ細胞は同様な阻害剤の存在下にＳＤＡに示差的応答を
示さないので、早期に観測されたＴ細胞へのＳＤＡの選
択的浄化作用は異なる細胞のをにおける異なるＡＤＨレ
ベルの帰属することができると認められる。

骨髄毒性および腫瘍細胞または免疫応答のＴ　ＩＪンパ
球の抵抗は、骨髄移植における２つの制限因子である。

特異的免疫学的プローブおよび阻害剤を使用する異なる
ＡＬＤＨイソチーム（ヘモポイエチン細胞および汚染性
細胞において）は、最適な条件の発生を促進してＳＤＡ
に対して非経済的種を選択的に感作し、これにより多分
安全の治療学的限界を増大するであろう。

次の実施例によって、本発明をさらに説明するが、これ
らの実施例は本発明を限定しない。

犬凰攬 すべての材料はアルドリッヒ（Ａｌｄｒｉｃｈ）から得
た。すべての反応は窒素雰囲気下に実施し、そして溶媒
はＨＰＬＣ等級（メタノール、塩化メチレン、ＮＭＰ、
酢酸エチル）または無水「ゴールドラベル」等級（ＴＨ
Ｆ）である。

Ｌ　Ｎ−（３，３−ジェトキシプロピル）フタルイミド
（化合物１）の調製 Ｎ−メチルピロリドン（２００ｍ（２）中の３クロロプ
ロピオンアルデヒドジエチルアセクール（Ｉ６，７ｇ、
０．１０モル）およびカリウムフタルイミド（Ｉ８，５
ｇ、０．１０モル）の混合物を、１２５℃において窒素
下に一夜撹拌した。生ずる溶液を冷却し、水（４００ｍ
Ｑ）中に注ぎ、そして生ずる混合物をエーテル（２Ｘ２
００ｍ１２）で抽出した。エーテル抽出液を水（２Ｘ１
００ｍＩ２）で洗浄し、乾燥しくＭｇ５０４）、濾過し
、そして蒸発すると、オレンジ魚油が残った。シリカゲ
ル（２００ｇ）のクロマトグラフィーにかけ、９５：５
の塩化メチレン−エーテルで抽出すると、純粋な化合物
がオレンジ魚油（Ｉ６，５ｇ、６０％）として得られた
。

２．３．３−ジェトキシプロピルアミン（化合物２）の
調製 メタノール（３００ｍａ）中のＮ−（３，３−ジェトキ
シプロピル）フタルイミド（Ｉ）（Ｉ６゜５ｇ、５９．
５ミリモル）およびヒドラジン（３゜８ｇ、１２０ミリ
モル）の溶液を、還流において４時間撹拌した（混合物
がかなり増粘したとき、機械的撹拌が必要であった）。

この混合物を連続的に撹拌しながら冷却し、濾過し、そ
して沈澱をメタノールで洗浄した。濾液を蒸発して半固
体の固まりが得られ、これを塩化メチレン（Ｉ５０ｍ１
２）中に取り、そして再び濾過した。濾液を濃縮し、そ
して残留物を真空蒸留して、化合物２を無色の液体（６
，５ｇ、７０％）として得た。（反復した沸点は約６０
°Ｃ／４ｍｍＨｇ１約７０℃／２０ｍ　ｍ　Ｈｇである
）。

３、Ｎ、Ｎ’−ビス（３，３−ジェトキシプロピル）ス
クシンイミド（化合物３）の調製塩化メチレン（５０ｍ
１２）中でスクシニルクロライド（３，２５ｇ、２１．
０ミリモル）の溶液を、激しく撹拌しながら、塩化メチ
レン（２００ｍ（Ｉ）中の化合物２　（６，１４ｇ、　
４１．７ミリモル）およびトリエチルアミン（６，３ｍ
Ｏ，４５ミリモル）の冷（−５０°Ｃ）溶液に嫡々添加
した。この混合物を室温に加温し、そして窒素下に一夜
撹拌した。溶媒を蒸発させ、そして残留物をエーテル（
２００ｍｆ１）中に取った。生ずる懸濁液を濾過し、そ
して濾液を蒸発させた。残留物をシリカゲル（Ｉ５０ｇ
）のクロマトグラフィーにかけ、６：１酢酸エチル−イ
ソプロパツールで溶離し、そして生成物をヘキサンから
再結晶化すると、３が無色の固体、融点８９−９０°Ｏ
（４，２ｇ、５３％）として得られた。この物質は、室
温において貯蔵したとき、２か月にわたって分解した。

４、Ｎ、Ｎ’−ビス（３，３−ジェトキシプロピル）ブ
タン−１，４−ジアミンシナイトレート（化合物４）の
調製 テトラヒドロフラン（２００ｍｆｆ）中の化合物３　（
４，０ｇ、１０．６ミリモル）および水素化リチウムア
ルミニウム（０，８４ｇ、２２ミリモル）の混合物を窒
素下に４０時間還流し、次いで冷却した。水（Ｉ，０ｍ
１２）、１５％の水性水酸化ナトリウム（Ｉ，０ｍ１２
）およびさらに水（３ｍ４）を激しく撹拌しながら嫡々
添加した。この混合物を３０分間撹拌し、次いで濾過し
た。濾液を蒸発すると、ピンク色の油が残った。これを
エタノール（２０ｍ１２）中に取り、５０ｍ（ｌのエー
テルで希釈し、そして濃硝酸（Ｉ，３ｍｆｆ）を激しく
撹拌しなから滴々添加した。沈澱が急速に形成し、これ
を濾過により集め、そしてエーテルで洗浄した。

真空乾燥すると、化合物４が白色固体、融点１４５−１
４６°Ｃ１（２，５ｇ、５０％）として得られｔこ。

スペルミンビス−アセクールをＩＮ　　ＨＣｌ中に１０
０ミリモル（４７，５ｍｇ／ｒｒｌ）の濃度で溶解する
。この溶液を３７°Ｃの水浴中で１時間インキュベーシ
ョンする。インキュベーション期間の終わりに、ｌＯＯ
ミリモルの溶液を２０ミリモルに精製した水で希釈する
。２０ミリモルの溶液をＩＯＮ　　ＮａＯＨでｐＨ５，
０−６，５に調節する。このｐＨを調節した２０ミリモ
ルの溶液はすべての試験材料の原溶液である。

対照物質の調製 対照賦形剤の原溶液は、０．２モルのＨＣＩ溶液をＩＯ
Ｎ　　ＮａＯＨで滴定し、そしてｐＨを５゜０〜６．５
に調節することによって得る。対照の使用溶液を得るた
めに、次いで原溶液をそれに応じて試験溶液で希釈する
。

バイオアッセイに使用する材料 次の材料を実施例において使用した。精製したフィトヘ
マグルチニン（ＰＨＡ−Ｐ）はウェルカム（Ｗｅ　ｌ　
ｌ　ｃ　ｏｍｅ）から入手した。アメリカヤマゴボウの
ミトゲン（ＰＷＭ）はギブコ（Ｇｉｂｃｏ）から入手し
た。粉砕したチミジンおよびクロム（５１Ｃｒ）は、ニ
ュー・イングランド・ニュークリアー（Ｎｅｗ　　Ｅｎ
ｇｌａｎｄ　　Ｎｕｃｌｅａｒ）から入手した。Ｃｏｎ
Ａはシグマ（Ｓ　ｉ　ｇｍａ）から入手した。Ｃ５７／
Ｂ６、Ｃ３ＨおよびＢａ１ｂ／Ｃマウスは、ジャクソン
・ラボラトリ−（Ｊａｃｋｓｏｎ　　Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ）から入手した。ヒト細胞系のための成長培地は、
δ−最小必須培地（δ−ＭＥＭ）［ギブコ（Ｇｉｂｃｏ
）］から成り、ペニシリン［ギブコ（Ｇ　ｉ　ｂ　ｃ　
ｏ）　５０ｍｇ／ｍ１２）　、ストレプトマイ＝４０ シン［ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）、１００ｍｇ／ｍ＋１）、
Ｌ−グルタミン［ギブコ（Ｇｉ　ｂｃｏ）　、２．０ミ
リモル］および２〜ｌＯ％の胎児仔ウシ血清［Ｆｅ２．
ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）］　を補充した。

Ｔ細胞増殖のアッセイのための培地は同一であるが、Ｐ
ＲＭｌ　　１６４０［ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）］をＩ−Ｍ
ＥＭの代わりに使用した；１０％のＦｅ２は常時使用し
た。

Ｃ１マウス骨髄細胞および牌細胞の調製マウスを順転位
によ゛り殺し、そしてデットール（Ｄｅｔｔｏｌ）溶液
中の浸漬により殺菌した。

骨髄細胞は、適当な長い骨から、０．２５ゲージの針で
７ラツシングすることによって得た。次いで、細胞を使
用前にＰＲＭＩで３回洗浄した。

牌細胞は、肺臓を微細な針金メツシュに通過させて調製
した。細胞をＰＲＭｌ中に再懸濁し、そして使用前に３
回洗浄した。

Ｄｌ　ヒトＢおよび１９２７球の調製およびリンノ々球
の増殖 末梢血液リンパ球（Ｐ　Ｂ　Ｌ）は、正常の供与体の血
液から、標準のフィコ−ルーツ−イパーク（Ｆｉｃｏｌ
　］−Ｈｙｐａｑｕｅ）勾配技術を使用して得た。Ｔ細
胞および非Ｔ細胞は、標準のヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）
ロゼツト技術により分離した。

簡潔には、５Ｘ　Ｉ　Ｏ６／ｍｆｆ　ＰＢＬを１％のノ
イラミニダーゼ処置した５ＲＢＣとインキュベーション
し、そしてロゼツト細胞を非ロゼ・ノド細胞からフィコ
ール−ハイバーク勾配で分離した。ロゼ・ノド細胞をＴ
細胞を表示した。精製した８９７３球は、非ロゼツト細
胞から、パン（Ｐａｎ）Ｔモノクローナル抗体０ＫＴＩ
Ｉおよび補体を使用して残留Ｔ細胞を除去することによ
って得た。

Ｅ１ヒトリンパ球の増殖 Ｔ細胞の増殖ニアＸＩＯ’−１０’のヒトＴリンパ球を
、平らな底のマイクロタイタープレート（Ｆｌｏｗ）中
で０．１％のＰＨＡ−Ｐまたはｌ／６４　ＰＷＭの存在
下に４日間培養した。３Ｈチミジン（０，１ＭＣ１／ウ
ェル）を培養期間の最後の６時間に添加した。Ｔ細胞依
存性Ｂ細胞の増殖：４ＸＩＯ’のＴ細胞および１０５の
Ｂ細胞を一緒にｌ／６４希釈のＰＷＭの存在下に４日間
培養した。３Ｈ−チミジンを培養期間の最後の６時間に
添加した。Ｂ細胞の増殖は、Ｔ細胞を培養物に添加しな
いで、正確に同一方法で実施した。すべての場合におい
て、細胞を引き続いて濾紙上に多数のチャンネルの自動
化細胞収穫装置（Ｆｌｏｗ）で収穫し、そして蒸留水で
反復して洗浄した。細胞に関連する放射能を自動化カウ
ンターでシンチレーション係数により決定した。結果の
すべては、次の式に従って計算した応答％として表した
：応答％＝（界面活性剤処置した培養物のｃｐｍ／対照
培養物のｃｐｍ）ｘｌｏｏ Ｆ、マウスリンパ球増殖 マウス牌細胞を平らなマイクロタイタープレト中で１０
５／ウエルで２ｍ　ｇ　／　ｍ　ＱのＣｏｎＡの存在下
に３日間培養した。３Ｈ−チミジン（μＣｉ／ウェル）
を培養期間の最後の４〜６時間に添加した。細胞を前述
したように収穫した。

Ｇ１マウスモデルにおいて骨髄の移植 骨髄の移植において、正常供与体マウスからの骨髄細胞
を完全に組織不適合性の、致死的に照射した受容体に移
植した。すべての受容体マウスに第０日に９．５Ｇｙ　
（９５０ラド）の合計の体照射を与え、次いでマウスを
マイクロアイソレータ（ｍｉｃｒｏｉｓｏｌａｔｏｒ）
のかごに入れた。マウスにオー）・クレープ処理した謹
書類の実験室の食物を研究を通じて与え、そしてまた任
意に食べるようにさせた。受容体に、また、１．５ｍｇ
／ｋｇのゲンタマイシンを照射後２０日に皮下投与した
。照射の日に、牌細胞と３：１で混合した骨髄細胞を供
与体から除去し、そして１時間異なる濃度のスペルミン
ジアルデヒドとインキュベーションした。牌細胞を添加
して、引き統〈移植組織対宿主の病気（ＧＶＨＤ）を強
化した。インキュベーション後、細胞を３回洗浄し、次
いで照射した受容体中に静脈内注射した。Ｇ　Ｖ　ＨＤ
の徴候および生存のスコアをその後毎日付けた。

２５１１に２６６　（Ｉ９７０）の方法に従うう・ント
における移植組織対宿主の反応（膝窩リンパ節の研潰Ｑ
− ラットにおける移植組織対宿主の反応は、親の牌細胞の
Ｆｌ受容体中にべの再注射により誘発した、膝窩リンパ
節の拡大により測定した。（ＬｅｗｉｓＸＢＮ）Ｆｌラ
ットを１０の群に分割し、そして異なる投与量の試験化
合物（スペルミンジアルデヒド）または対照調製を毎日
ＩＶ注射した。

最初の注射後２日に、ラットに親のＬｅｗｉｓ系統から
の９ＸＩＯ’の牌細胞を与えた（　０．３　ｍ（Ｉの２
７Ｘ１０’細胞／ｍＱの調製物を、受容体の右後ろ足の
各々の膜表面の皮膚の下に注射した）。

試験化合物および対照物の注射はさらに６日間続けた。

第７日に、ラットをＣＯ２処置により殺した。左および
右の両者の膝窩リンパ節を取り出し、そして付着組織を
清浄除去した。拡大の程度は、左および右の両方のリン
パ節を秤量し、そして２つの差を計算した。

細胞障害性Ｔ細胞の生体内発生は、ファーネス（ｆａａ
ｎｅｓ）ら、ＣＩ　ｉｎ、Ｅｓｐ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、
Ｖｏｌ、２７、ｐｐ、５０２−５０６（Ｉ９７７）に記
載されている方法に従って実施した。Ｃ５７ＢＬマウス
を１０の群に配置し、そして異なる投与量のスペルミン
ジアルデヒドまたは対照調製物を腹腔内注射した。最初
の注射後２日に、前述したように調製した１０’ＤＢＡ
細胞を腹腔内注射した。細胞の注射後１０日に、Ｃ５７
マウスを頚転位により殺し、そして肺臓中に発生した細
胞障害性Ｔ細胞を、５１Ｃｒ標識したＰＢ１５標的細胞
を溶菌するそれらの細胞の能力の測定により定量した（
肥満細胞腫、ＤＢＡ由来またはＣｏ　ｎＡ刺激ＤＢＡ牌
肺臓細胞の細胞）。Ｐ８１５細胞または芽細胞（ｂｌａ
ｓｔｓ）を１０７細胞／ｍ０．で懸濁し、そして２００
ＭＣ１の５１Ｃｒと１時間３７°Ｃにおいてインキュベ
ーションした。次いで、細胞を３回洗浄し、次いでＣ５
７ＢＬ牌細胞と２０＝１、ｌ０＝１および５：１（Ｃ５
７ＢＬ　：　ｐ８　］　５）の比でＶ形の底のマイクロ
タイタープレート中で最終の体ｆｆ２００ｍ（Ｉで混合
した。細胞を６分間回転し、そして３７°Ｃにおいて４
時間インキュベーションした。インキコベーション後、
］０００ｍの上澄み液を取り出し、そしてガンマカウン
ターで計数した。細胞障害性Ｔ細胞のパーセントを計算
した： 合計の細胞障害性％−（ＳＲＢＣにより解放された５　
］、　Ｃｒ−自発的解放）／合計の解放−自発的解放）
Ｘ１００ Ｊ、急性毒性 ２対のスイス・ウェブスター（Ｓｗｉｓｓ　　Ｗｅｂｓ
ｔｅｒ）マウスに、それぞれ、２０ｍｇお、Ｊ：び４０
０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射し、そして毒性作用を観測し
た。対照群は対照調製物を注射した。投与後２週に、動
物を検死し、そいて器官を異常について検査した。

Ｋ１アルデヒド試験 アルデヒド試験は、サラツキ（Ｓａｗｉｃｋｉ）ら、Ａ
ｎａｌｙｔｃａｌ　　Ｃｈｅｍ、、３３．９ｉ９６　（
Ｉ９６１）に記載されている方法に従って実施した。簡
潔的には、５０ｍ（２の０．４％の３−メチル−２−ベ
ンゾチアゾロンヒドラゾン（ＭＢＴＨ）の溶液を５０ｍ
Ｑの試験溶液に添加した。

この混合物を室温において３０分間放置し、次いで０．
２％の塩化第二鉄の溶液を添加し、次いでこの混合物を
室温において１０分間放置した。次いで、６５０ｍ（２
のアセトンを試料にゆっくり撹拌しながら添加し、そし
て試料の色濃度を６７０波長において分光光度計の読み
により定量した。

Ｌ１皮膚移植片の移植の実験において、Ｂａ１ｂ／Ｃ（
Ｎ２つ皮膚移植片をＣ３Ｈ上に１に記載する手順に従っ
て移植した。スペルミンジアルデヒドを移植直後に皮下
投与し、そして研究を通じて続けた。シクロスポリンＡ
（ＣｓＡ）を陽性の対照として一緒に実験した。

Ｍ１遅延した型の過敏性 遅延した型の過敏性を、Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスの足の裏に
おいて、抗原としてヒツジ赤血￥Ｃ（ＳＲＢＣ）を使用
して誘発した。簡潔的には、０．２ｍｆ２の０．０１％
の５ＲＢＣをＢ６Ｄ２Ｆ］マウスに静脈内注射した。４
日後、それらを足の裏において５０　／ｌρの２０％の
５ＲＢＣで対抗した。

足の裏の膨脹を２４．４８および７２時間後に測定した
。スペルミンジアルデヒドを免疫化前の日から開始して
腹腔内投与した。足の裏において対抗後、Ｂ６Ｄ２Ｆ　
１マウスに、対抗後１時間に対抗部位の側面に筋肉内注
射した。数匹のマウスには腹腔内投与せず、そして対抗
後１回だけ筋肉内注射した。結果を第７図に示す。

Ｎ１類似体のスクリーニングについてのバイオアッセイ 類似体のスクリーニングのために適当なバイオアッセイ
を確立するために、ＳＤＡがよく知られたポリアミン干
渉剤に等しいか、あるいはそれよりすぐれるかどうかを
確認することは適当であると考えた。下表に示すように
、ＳＤＡの効能はあるポリアミン類似体、ビス（エチル
）スペルミン（Ｐｏｒｔｅｒら、１９８７）およびＤＦ
ＭＯ、オルニチンデカルボキンラーゼの不可逆的阻害剤
（Ｍｃｔｃａｌｆら、１９８７）に類似した。

そのうえ、・ＤＦＭＯおよびビス−スペルミンと異なり
、ＳＤＡはポリアミンの生合成の重要な酵素の両者を阻
害することができ、これにより代償の応答を排除し、そ
してポリアミンの合成を完全に阻害することができた。

ＳＤＡは、他の２種類の試薬と同様に、無関係の通路を
阻害せず、ポリアミンとの特異的相互作用を示した。当
業者は、同様なバイオアッセイを使用して、ここに教示
する所望のＳＤＡ類似体を同定することができるであろ
う。

イ９ ＩＩ、結果 前述したように、ヒトリンパ球を調製し、そして１９７
３球および８９７３球に分割した。１９７３球および８
９７３球を、異なる濃度のスペルミンジアルデヒドと、
３７°Ｃにおいて１時間インキュベーションした。細胞
を３回ＰＲＭＩで洗浄し、次いでＰＨＡ推進Ｔ細胞増殖
アッセイまたはアメリカヤマゴボウのミトゲン（ＰＷＭ
）推進Ｂ細胞増殖アッセイにおいて構成した。結果を第
１図に示す。見ることができるように、スペルミンジア
ルデヒドはＴ細胞の増殖を０．６２Ｘ１０ミリモルにお
いて８５％だけ阻害し、これに対して８９７３球の増殖
を抑制するためには非常に大きい量を必要とした。

こうして、スペルミンジアルデヒドは、８９７３球の抑
制作用を非常に少なくして、Ｔ細胞の増殖を優先的に抑
制する。さらに、これらのデータが示唆するように、ス
ペルミンジアルデヒドは、＝５１ １時間の短いインキュベーション期間後、１９７３球を
不可逆的に不活性化することができるであろう（５〜１
０分のインキュベーションは実際には不十分であったー
データは示されていない）。

この新規な性質は、スペルミンジアルデヒドを、他の免
疫抑制分子、例えば、シクロスポリンＡまたはプレドニ
ソン（これらはすべて性質が可逆的である）と区別する
。

マウスの骨髄細胞および牌細胞の各々を、異なる濃度の
半固体と、１時間インキュベーションした。次いで、細
胞をＰＲＭＩで３回洗浄し、モしてＣｏｎＡ推進増殖ア
ッセイにおいて構成した。

結果を第２図に示す。牌細胞は、見ることができるよう
に、スペルミンジアルデヒドにより仲介される抑制に、
骨髄細胞より非常に感受性であった。

Ｃ５７ＢＬマウスからの骨髄細胞および牌細胞の混合物
を、対照調製物または種々の濃度のスペルミンジアルデ
ヒドと、１時間インキュベーションした。次いで、細胞
をよく洗浄っし、そして致死的に照射した組織不適合性
ＡＫＲマウス中に静脈内注射した。移植組織対宿主の病
気の徴候、例えば、ねこ背、下痢、脱毛、および生理学
的状態を毎日記録した。再構成したマウスの生存時間を
第３図にを示す。対照マウスは、移植後約１０日で開始
する、急性ＧＶＨＤの重度の徴候を示した。

スペルミンジアルデヒドで処置した骨髄細胞を投与した
マウスは、わずかに温和なＧＶＨＤの徴候を発現しただ
けであった。０．２ミリモルの非常に高い投与量の群は
骨髄の毒性を示し、そして動物は、多分再構成の欠如の
ために、照射した対照とほぼ同じ時間に死亡した。より
低い投与量（０゜０３〜０−０６）のスペルミンジアル
デヒドで処置した骨髄を投与されたマウスは、有意に延
長した生存時間を示した。こうして、より低い投与量の
スペルミンジアルデヒドを使用する処置は、骨髄細胞に
対して毒性でなくて、１９７３球を不活性化し、そして
動物にＧ　Ｖ　ＨＤの徴候をほとんどなくして再構成さ
せることができた。これらのデータが示唆するように、
スペルミンジアルデヒドは、骨髄の移植前に、ヒト骨髄
の試料を生体外で処置して、患者にとって通常致死的で
ある引き統（ＧＶＨＤを軽減するために使用することが
できるであろう。

ように、移植組織対宿主の反応を有意に抑制した。

この移植組織対宿主の反応は、同種異系のＴ　ＩＪンパ
球を包含するＭＨＣクラスＩＩ反応の型な発現である。

スペルミンジアルデヒドは、静脈内に投与するとき、こ
の反応を抑制し、この分子が生体内において生体外と同
一の作用を仲介する、すなわち、それはＴ細胞増殖の効
力のある抑制剤として作用することを示唆する。

移植組織対宿主の反応は、親牌細胞の皮下注射によりＦ
ｌ受容体において、膝窩リンパ節の形態で発生させた。

スペルミンジアルデヒドの静脈内投与は、親牌細胞注射
の注射前２日に開始し、リンパ節の測定の日まで続けた
。膝窩リンパ節の増加のスコアは、試験（左）および対
照（右）のリンパ節の間の重量の差によった。結果を第
４図に示した。実質的な彫版は試験リンパ節において観
察された。スペルミンジアルデヒドの静脈内注射は、小
さい膝窩リンパ節の彫版により描写されるＤＢＡ牌細脳
細胞与後約ＩＯ日に、Ｃ５７ＢＬマウスはそれらの肺臓
中に細胞障害性Ｔ細胞を発生させ、これらの細胞はＤＢ
Ａ特異的抗原を有するＰ８１５肥満細胞腫の細胞を溶菌
する。細胞障害性Ｔ細胞は器官移植片拒絶反応の仲介に
おいて重要な役割を演するので、細胞障害性Ｔ細胞の生
体内抑制は延長した移植片の生存に導くことができる。

スペルミンジアルデヒドは、腹腔内投与したとき、投与
量に関係する方法で細胞障害性Ｔ細胞の発生を抑制した
（第５図）。１０ｍｇ／ｋｇ＝５６ の腹腔内投与量は最大の抑制を達成するように思われ、
これは移植組織対宿主の反応の生体内の最大抑制の達成
に要求される投与量（５ｍｇ／ｋｇ静脈内、第４図）と
よく対応する。

前述の２つのモデルは、合成スペルミンアルデヒドが生
体内の免疫抑制化合物として有効であることを、最初に
実証した。

Ｆ、急性毒物学の結果 スイス・ウェブスター（Ｓｗｉｓｓ　　Ｗｅｂｓｔｅｒ
）マウスに、毒性作用のために、２００ｍｇおよび４０
０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射した。スペルミンジアルデヒ
ドは、やぶにらみおよび身もだえにより示されるように
、これらの試験動物において急性に刺激するように思わ
れた。２００ｍｇ／ｋｇを投与されたマウスは他の毒性
作用を示さなかったが、４００ｍｇ／ｋｇを注射したマ
ウスは５日間腹または体全体の浮腫を示した。注射後１
４日の検死において、４００ｍｇ／ｋｇの群のみは陽性
の発見を示し、これは温和に彫版した腹および注射部位
におけるかさぶたの形成を示した。このデータが、この
分子のＬＤ＋ｏｏが４０ｍｇ／ｋｇであることを示した
上のイスラエル（Ｉｓｒａｅｌ）らが報告した結果と有
意に異なった。

Ｇ１皮膚移植片の生存の延長 第６図に描かれているように、Ｃ５Ａおよびすべての３
つの投与量のスペルミンジアルデヒド、ことに１０ｍｇ
／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇのスペルミンジアルデヒド
は皮膚移植片の生存を延長した。

両者の腹腔内投与および１回の足の裏の注射を与えたＢ
６Ｄ２Ｆｌマウスは、対抗後２４時間およびまた４８時
間後測定したとき、彫版の有意の減少を示した。足の裏
に１回の注射を受けたマウスは２４時間後膨彫版減少を
示さなかったが、４８時間後足した。

結果が示唆するように、全身的および局所的の両方でス
ペルミンジアルデヒドを投与されたマウスは、対抗後２
４時間または４８時間に測定したとき、彫版の減少を示
した。対抗後のみにスペルミンジアルデヒドを投与され
るマウスは、２４時間抜対照賦形剤を投与されたものに
類似する護膜を示した。しかしながら、４８時間後、対
照群のそれに匹敵する減少した護膜が観察された。

遅延した型の過敏性はＴ細胞仲介免疫応答である。抗原
で免疫化後、マウスを抗原に対して応答する特異的Ｔ細
胞で感作されるであろう。これらのＴ細胞は、足の裏を
包含する体の種々の部分に移動するであろう。同一抗原
を使用する対抗の間、これらのＴ細胞は再活性化され、
そしてリンフ才力インを放出させ、リン７オカインのあ
るものは単球、マクロファージおよび好中球のために化
学走性であろう。次いで、これらの細胞の蓄積は局所的
炎症に導き、実質的な護膜を引き起こす。スペルミンジ
アルデヒドを感作の前および直後に投与したとき、それ
は多分抗原に対するＴ細胞の応答を抑制し、そして対抗
後、足の裏の注射はＴ細胞および炎症に包含される他の
細胞を抑制した（足の裏の注射を省略した場合、護膜の
減少は有意でなかった）。しかしながら、注射を対抗後
のみに足の裏に与えた場合、炎症の応答の抑制は、また
、４８時間後に観察することができるであろう。これら
の発見が示唆するように、スペルミンジアルデヒドは感
作および炎症の両者の段階において抗原に対するＴ細胞
の応答を抑制した。しかしながら、スペルミンジアルデ
ヒドを感作の前および間に投与したきき、抑制は最も存
意であった。

組み合わせた注射は、感作したＴ細胞の発生および新し
い炎症の応答の両者を抑制した。

Ｈ，ＳＤＡ類似体のバイオアッセイの結果−比較Ｕ男 下に記載する表中に列挙されている、比較ＳＤＡ類似体
１〜６は、エステルまたはケトンによるアルデヒド末端
基の置換および最も近い窒素を除外した炭素鎖長さの減
少を表す。メチルエステルおよびエチルエステルの両者
は、Ｔ細胞／腫瘍細胞の増殖末端ポリアミン合成の阻害
において無効であった。

メチルケ１−ン（３）およびそのクロロ誘導体（４）の
両者は、ＳＤＡより高い化学的および代謝的安定性を示
し、そしてそれらは全身的使用に適するであろうことが
推定することができる。しかしながら、予備的アルキル
化の研究は、これらの化合物が非特異的アルキル化剤で
あり、多分ＤＮＡの破壊／架橋を引き起こし、細胞を死
亡させることを明らかにした。引き続いて、塩化物を除
去し、モしてＣ−鎖を還元したが、ケトン基を保持して
、化合物５および６を生成した。プロピルからメチルま
たはエチルへのＣ−鎖の還元は、活性を完全に損失させ
た（表参照）。

ＳＤＡ中のアルデヒド基はポリアミンの代謝における仲
介で抗増殖活性に対して極めて重要であると思われたの
で、中央の窒素の外により長いＣ−鎖をもつアルデヒド
類似体を最初に探した（７）。

ブチルの立体的配置はβ−Ｕト除反応に対してアルデヒ
ドを比較的抵抗性とし、生体内剤をＳＤＡより安定とす
る。ブチルアルデヒド（７）は、増殖アッセイにおいて
ＳＤＡより効力に劣ることが分かった（第８図）。しか
しながら、この化合物はアデノシルメチオニンデカルボ
キシラーゼを選択的に阻害しく第９図）、ポリアミンの
生合成との特異的相互作用を示した。ＳＤＡおよびブチ
ルジアルデヒドについての阻害曲線は、０．１２〜０゜
１３ＸＩＱ’モルのＩＣ５ｏ中央のと重なった。

ＤＦＭＯはＡｄｏＭｅｔＤＣの代償的増加を引き起こし
、そしてメチル−グリオキサル−（ビスグアニルヒドラ
ゾン）（ＭＧＢＧ）はＡ　ｄ　ｏ　Ｍ　ｅｔＤＣを阻害
した（第１０図）ので、本発明において、ＳＤＡ様化合
物はポリアミン生合成の阻害のために理想的であること
が発見された。重要な酵素の両者を阻害し、モしてＳＤ
Ａより代謝的に安定である類似体は、ブチルアルデヒド
およびその類似体はこれに関して非常に有用であろう。

そのうえ、ブチルアルデヒドの生体内特性は、また、Ｓ
ＤＡの機械的へのそれ以上の洞察を提供することができ
る。

要約すると、ＳＤＡのケトンおよびアルデヒドの類似体
の両者はＴ細胞および腫瘍細胞の増殖の阻害に適当であ
ることが示された。しかしながら、今日までの研究は、
アルデヒドのみがポリアミンの生合成を抑制し、したが
ってここにおいて特許請求するように好ましいことか示
された。クロロメチルケＩ・ンは高度にのアルキル化性
の非特異的毒性剤であった。ケトン基のほかにより短い
炭素鎖をもつ類似体は、生物学的活性の多少の減衰を示
した。これらの観察に基づいて、分子の側面または中央
部分におけるＣ−鎖が増加するか、あるいは非対称の立
体配置のもつアルデヒド類似体（例えば、モノアルデヒ
ド）は、また、ここに記載する方法において使用するこ
とができる。

６イ 材料および方法 礼μ：　ＳＤＡはわれわれの研究所の製剤開発部により
供給された対応するバイオアセタールの酸加水分解によ
り調製した。［３Ｈ］　−チミジンはニュー・イングラ
ンド・ニュークリアー（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ　　Ｎｕ
ｃｌｅａｒ、？サチュセッツ州ボストン）から購入した
。コンヵナバ！Ｊ７Ａ。

ウマ血清、ＰＲＭＩ　　１６４０およびＨＥＰＥＳは、
ギブフ（Ｇｉｂｃｏ、ニューヨーク州グランドアイラン
ド）から購入した。ＮＡＤおよびＮＡＤＰはベーリンガ
ー・マンヘイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　　Ｍａｎｎｈ
ｅｉｍ）がら購入した。アクロレインおよびジスルフィ
ラム（Ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ）は、アルドリッヒ・ケミ
カル・カンパニー（Ａｌｄｒｉｃｈ　　Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　　Ｃｏ、、ウィスコンシン州ミルウォーキー）がら
入手した。

プロピオンアルデヒドおよびベンズアルデヒドは、イー
ストマン・コダック・ケミカル・カンパニニューヨーク
州ロチェスクーから入手した。ジエチルアミノベンズア
ルデヒド（ＤＥＡＢ）は、ジョン・ヒルトン（Ｊｏｈｎ
　　Ｈｉｌｔｏｎ）博士（Ｊｏｈｎｓ　　Ｈｏｐｋｉｎ
ｓ　　５ｃｈｏｏｌ　　ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅｓ　　ミ
ゾリー州バルチモア）から提供された。

細胞の培養：ネズミ白血病細胞系、Ｌ１２１０／ＣＰＡ
およびＬ１２１０１０（また、Ｌ　ｅ　／　ＣＰＡおよ
びＬ　ｅ　／　Ｏとして知られている）は、Ｆ。

ストラック（Ｓｔｒｕｃｋ）博士（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　
　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ１アラバマ
州バーミンガム）により提供された。細胞は１０％のウ
マ血清、１００単位／ｍＱのペニシリンおよび１００μ
ｇ／ｍＱのストレプトマイシンを補充したＰＲＭＩ　　
１６４０中で増殖した。

培養物を３７°Ｃにおいて空気中の５％の加湿した雰囲
気中でインキュベーションした。骨髄細胞をマウスの大
腿からＰＲＭＴ　　１６４０で２５ゲージの針を備えた
ツベルクリン注射器を使用してフラッシュ（ｆｌｕｓｈ
）した。牌細胞について、肺臓を取り出し、そして微細
な針金のメツシュに通過させて単一の均質な細胞懸濁液
を得た。いずれの場合においても、細胞を遠心し、２回
洗浄し、そして薬物暴露培地中に再懸濁した（下を参照
）。

細胞の生存能力はトリパンブルーの排除により決定し、
そして細胞懸濁液を所望の濃度に希釈した。

ネズミ白血病細胞および骨髄細胞／牌細胞を、ＰＲＭＴ
　　１６４０またはＰＢＳに基づく溶液中においてＳＤ
Ａ　（ｌ　Ｘ　ｌ　Ｏ−’モル〜５Ｘ１０−’モル）で
処置した。述べるときはいつでも、細胞はＤＥＡＢ　（
ｔｏ〜３０μモル）で３０〜６０分間３７°Ｃにおいて
予備処置し、次いでＳＤＡに暴露しＩこ。

細胞の増殖のアッセイ：　　［３Ｈ］　−チミジンの組
み込みのために、薬物または賦形剤処置した骨髄細胞ま
たは牌細胞を、１０％の胎児子ウシ血清、ｌＯμモルの
β−メルカプトエタノール、２５ミリモルのＨＥ　Ｐ　
Ｅ　Ｓおよび２ミリモルのグルタミンを含有するＰＲＭ
Ｉ　　１６４０中で平板培養した。Ｃｏ　ｎＡ　（４μ
ｇ／ｍ１２および８／’ｇ／ｒｒｌ）＝６７ ＝６８ を、骨髄細胞および牌細胞のためのミトゲンとして使用
した。３日後、　［３Ｈ］　−チミジン（０，２μＣｉ
／ウエル）を添加し、そして細胞を１２〜１８時間後に
収穫した。Ｌ　１２１０／ＣＰＡおよびＬ１２１０１０
細胞（０，１〜ｌＸｌ０’細胞／ウエル）を１０％のウ
マ血清を含有するＰＲＭ１１６４０中で平板培養した。

２４時間後［３Ｈ１−チミジンを添加し、そして細胞を
ＧＦ／Ｂ１紙でシンチレーション計数のために濾過した
。

ＡＬＤＨのアッセイ：培養した白血病細胞および肝臓（
順転位置後にマウスから切除した）を、３体積の水冷１
．１５％のＫＣＩおよび１ミリモルのＥＤＴＡ中で均質
化した。ホモジネートを１００．０００ｇで４５分間遠
心し、そして得られる上澄み液を使用してサイドシルの
ＡＬＤＨ活性を測定した。特定のＡＬＤＨのアッセイの
ため、沈澱物（および全体のＡ　Ｌ　Ｄ　Ｈについての
ホモジネート）を均質化緩衝液中に再懸濁し、そして３
０分間４°Ｃにおいてｐ、２５％のトリトンＸ−１００
で処理した。可溶化した調製物を４８．０００ｇで３０
分間遠心し、そして上澄み液をＡＬＤＨの決定のために
抜き出した。

ＡＬＤＨの活性はＮＡＤまたはＮＡＤＰの減少を５〜６
分間３４０ナノモルにおいてＤＵ７０分光光度計［ベッ
クマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］で監視することによって測
定した。アッセイ混合物は５０ミリモルのリン酸カリウ
ム緩衝液、ｐＨ７゜４．２．０ミリモルのＮＡＤ　（ま
たはＮＡＤＰ）および１．０ミリモルのＥＤＴＡを含有
した。反応は基質（ＳＤＡまたは他のアルデヒド）を予
備加温した（３７°Ｃで５分）酵素調製物含有アッセイ
混合物に添加することによって開始した。ピラゾール（
０，１ミリモル）をとくに肝臓酵素のために添加して、
アルコールデヒドロゲナーゼを阻害した。見掛けのＫ、
値および最大速度（Ｖ、□）値は、回帰分析による勾配
の推定に基づくラインウェーパー−バーク（Ｌｉｎｅｗ
ｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋ）プロットを使用して計算した。

酵素の活性はｍＵ（ナノモル７分）／ｍｇのタンパク質
として表した。タンパク質の含量はブラッドフォード（
Ｂｒａｄｆｏｒｄ）法により、ウシ血清アルブミンを標
準として使用して決定した。

ヘモポイエチンコロニー形成のアッセイ：ヘモポイエチ
ンコロニー形成細胞を、小さい修正を加えたイスコープ
（ｉｓｃｏｖｅ）およびシーバー（Ｓｉｅｂｅｒ）によ
る技術に従い、培養した。

Ｓ　Ｄ　Ａ／Ｄ　Ｅ　Ａ　Ｂ処置した細胞または賦形剤
処置した細胞をエリトロポイエチンおよびコンディショ
ニングした培地とのネズミへモポイエチン培養混合物に
添加した（Ｔｅｒｒｙ　　Ｆｏｘ　　Ｌａｂ。

ｒａｔ　Ｏｒ　ｌ　ｅ　Ｓ　％　カナダ国バンクーバー
）。この混合物を渦形成し、そしてｌ〜２ｒｒｌの部分
（ｌ×１０５骨髄細胞）を３５ｍｍのプラスチックペト
リ皿中で反復実験で平板培養した（ルクス懸濁皿、Ｆｌ
ｏｗ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）ｏ培養皿を加湿し
た雰囲気（９５％の空気：５％のＣ０２）中で３７°Ｃ
においてインキュベーションしｔこ。コロニーを第８日
まｊこは第１Ｏ日にＢＦＵＥ、ＣＦＵ−ＧＭおよびＣＦ
Ｕ−ミックスについて計数した。コロニーの型はライト
／ギエムサ・スティン（Ｗｒｉｇｈｔ／Ｇｉｅｍｓａ　
　５ｔａｉｎ）で確証した。

椛迷：初期の研究は基質としてＳＤＡを使用してＡＬＤ
Ｈの性質を研究するために設計した。マウス肝臓のサイ
ドシルの分画および白血病Ｌ１２ＩＱ／ＣＰＡ、両者の
プロピオンアルデヒドおよびＳＤＡは高い親和性の基質
として作用した（表参照）。Ｌ　１２１０／ＣＰＡおよ
び肝臓酵素についてのＳＤＡの平均Ｋｍ値は、それぞれ
、４１．６ミリモルおよび４８．５ミリモルであった。

ＡＬＤＨの比活性（Ｉｍｇのタンパク質基準に基づく）
は、Ｌ１２１０細胞に比較して、肝臓において１゜５倍
高かった（表参照）。腫瘍細胞および肝臓酵素のための
基質としてプロピオンアルデヒド（Ｉ゜０ミリモル）を
使用すると、比活性はＳＤＡ連結酵素より非常に高かか
った。したがって、ＳＤＡおよびプロピオンアルデヒド
との特異的イソチームの相互作用は必ずしも同一である
必要はないか、あるいはサイドシルのＡＬＤＨについて
のプロピオンアルデヒドのより高い親和性（表参照）は
酵素の発現の増大を説明することができる。

シクロホスファミド感受性Ｌ　１２１０１０細胞は、Ｓ
ＤＡまたは他のアルデヒドとの検出可能な酵素活性を示
さなかった。同様に、ＡＬＤＨの活性はＳＤＡ　（２，
５ミリモルまで）を使用してＬｌ　２１０／ＣＰＡまた
はマウス肝臓のミトコンドリアの分画において測定した
。

ＡＬＤＨの既知の阻害剤を使用して、ＳＤＡの酸化に含
まれる酵素の同一性を確証した（表参照）。

ジスルフイラムおよびＤＥＡＢは、ＡＬＤＨ活性を、そ
れぞれ、４．３μモルおよび０．０５５μモルの平均Ｉ
Ｃ５ｏ値で阻害した。ピラゾール、アルコールデヒドロ
ゲナーゼの阻害剤、は、基質としてＳＤＡでＬ　１２１
０／Ｃｐｐ、サイドシルの酵素に作用をもたなかった。

アクロレイン、高度に反応性のα、β−不飽和アルデヒ
ド、は、また、サイドシルのＡＬＤＨの効力のある阻害
剤であった（ＩＣ，。−２，５μモル）（表参照）。基
質としてＳＤＡを使用してＬ　１２１０／ＣＰＡ細胞に
おいて測定した、ＮＡＤＰ連結サイドシルのＡＬＤＨの
活性は、３．０−３．５ｍＵ／ｍｇタンパク質の範囲で
あった。ＮＡＤＰ連結ＡＬＤＨは、ＮＡＤ連結酵素（５
０〜１００μモルのアクロレインにおいて５０％の阻害
）よりアクロレインに対して感受性にかなり劣っている
ことが分かった。

ジスルフィラムおよびアクロレインの両者は、ＡＬＤＨ
の完全な阻害のために必要なものより非常に低い濃度に
おいて、生体外で腫瘍細胞およびヘモポイエチン先祖細
胞に対して非常に毒性であった。他方において、ＤＥＡ
Ｂは、生体内および生体外で最も効力のあるＡＬＤＨ阻
害剤であるほかに、５０μモルまでにおいてさえ無視し
得る細胞障害性を示した。したがって、引き続く実験に
おいて、ＤＥＡＢを選択して、ＳＤＡを使用する処置後
、白血病細胞および骨髄様先祖細胞の生存を研究した。

ＳＤＡで処置したＬ１２１０／ＣＰＡおよびＬｌ　２１
０１０は、［３Ｈ］　−チミジンの組み込みにおいて濃
度依存性の減少を示した。Ｌ１２１０１０細胞は、Ｌ　
ｌ　２１０／ＣＰＡに比較してＳＤＡに対してより感受
性であると思われ、ＳＤＡの平均ＩＣ５ｏ値は、それぞ
れ、４．６６μモルおよび８，３μモルであった。ＤＥ
ＡＢ　（２０μモル）を使用する細胞の予備処置は、Ｌ
１２１０／ＣＰＡ細胞におけるＳＤＡの細胞障害性を増
強したが、Ｌ　！　２１０１０細胞にほとんどまたはま
ったく作用を示さなかった。ＳＤＡ処置直後推定した細
胞の生存能力は、ＳＤＡのより高い濃度（〉２５μモル
）を除外して、未処置細胞（９０％）と同一であった。

しかしながら、５ＤＡＩＩＩＬｆ！ｔシた生存能力は１
２〜２４時間の期間にわたって鋭く定価し、そして細胞
のほとんどがＳＤＡの暴露の間「死亡するようにプログ
ラミング」されているように思われた。残りの細胞（２
日後〈２５％の生存能力）は増殖しつづけ、そしてＳＤ
Ａの６日の処置後、これらの細胞における［３Ｈ７−チ
ミジンの組み込みは、同一の期間の間培養した、未処置
の細胞に類似した。

ＰＢＳに基づく培地中でＳＤＡで処置し、そしてＰＲＭ
Ｉ　　１６４０−１０％のＰＢＳ中で３日間培養した、
不ズミ骨髄細胞は、［３Ｈ］　−チチミンの組み込みの
投与量依存性の減少を示した。

これらの細胞に対するＤＥＡＢ　（３０μモル）の予備
処置は、ＳＤＡのより低い濃度においてより高い感受性
を生じた。われわれの実験条件下に、ＡＬＤＨの活性は
骨髄細胞のホモジネートにおいて検出することができな
かった。より感受性の条件、例えば、特異的抗体プロー
ブはこれらの細胞におけるＡＬＤＨのレベルを推定する
ことを示唆する。ＳＤＡ処置（８−１２μモル）はＣｏ
ｎＡ誘発ネズミ牌細胞の増殖を壊滅させたが、ＤＥＡＢ
（２０μモル）の添加はＳＤＡの効能に有意の作用を示
さなかった。

ＡＬＤＨの役割についての定量的に同様な観察は、骨髄
細胞の増殖および骨髄様コロニーの形成を使用して得ら
れた。ＳＤＡの処置は、５０μモルの濃度において、Ｂ
ＦＵ−ＥおよびＣＦＵ−ＧＭのコロニーのほとんど完全
な抑制を引き起こした。しかしながら、ＳＤＡのより低
い濃度（Ｉ０〜２５μモル）において、ＤＥＡＢの予備
処置は、ＳＤＡの暴露後、骨髄様コロニー形成細胞の感
受性をさらに増強した。対照コロニーの形成は、それぞ
れ、ＢＦＵ−ＥおよびＣＦＵ−ＧＭについて、１６〜２
２コロニーおよび１７０〜２１０コロニー／ｌＸｌ０’
核化細胞の範囲であった。

Ｓ　　Ｄ　Ａ　　　　　　　４１．６±５．１　　　　
　　　　　６．８±１．６４８．５±３．３＊　　　　
　　１０．５±３４２＊プロピオン　　２６．５±４．
９　　　　１０．５チ３．２アルデヒド　　１４．０±
２．８＊　　　　　２２．５±３．９＊阻害（ＩＣｓｏ
、ｆｉ　Ｍ）；５ＤＡ（Ｉ，０ｍＭ）基質としてジスル
フイラム　４．３±１．１ Ｄ　Ｅ　Ａ　Ｂ　　　　　０．０５５５±０．０１５ア
クロレイン　　２．５土０．６３ ＡＬＤＨの活性は、前述したように、３４０ｎｍにおい
てＮＡＤの減少を監視することによって測定した。阻害
の研究のため、酵素調製物を阻害剤で５分間３７°Ｃに
おいて予備処置した。値は３〜４回の実験からの土ＳＥ
Ｍである。

＊マウス肝臓においてサイドシルのＡＬＤＨ０本発明の
主な特徴および態様は、次の通りである。

ｌ、生きている細胞に、実質的に純粋な形態で、免疫抑
制応答を誘発するために効果量の、一般式％式％ 式中、 ＡＬＫ’は独立にアルキレンであり、 Ｒ２は独立に水素または−ＣＨ２Ｒ３であり、Ｒ３は独
立にアルキルであり、 ＡＬＫ２はアルキレンであり、そして ＺはＨまたはＡＬＫ’−ＣＨＯである、の化合物または
その酸付加塩を投与することを特徴とする、生きている
細胞において免疫抑制応答を誘発する方法。

２、前記免疫抑制応答はリンパ球様細胞のＴ細胞の集団
に対して特異的であり、そして抗原非特異的である、上
記第１項記載の方法。

３、前記免疫抑制応答は前記Ｔ細胞の集団の増殖の減少
である、上記第２項記載の方法。

４、前記免疫抑制応答は、ヘルパーＴ細胞および細胞障
害性Ｔ細胞から本質的に成る群より選択される細胞の増
殖の選択的抑制である、上記第３項記載の方法。

５、前記免疫抑制応答は実質的に不可逆的である、上記
第３項記載の方法。

６、前記生きている細胞は、骨髄細胞、牌細胞、および
末梢リンパ球、またはそれらの組み合わせから本質的に
成る群より選択される、上記第１項記載の方法。

７、前記免疫抑制応答された細胞を生きている有機体に
投与することをさらに含む、上記第６項記載の方法。

８、前記投与は骨髄の移植組織である、上記第７項記載
の方法。

９、生きている有機体に、実質的に純粋な形態で、免疫
抑制応答を誘発するために効果量の、一般式■： ０ＣＩ（−ＡＬＫ”−ＮＲ”−ＣＨ２−ＡＬＫ’ＣＨ２
−Ｎ　Ｒ２７Ｚ 式中、　　　　　　　　　　　　（Ｉ）ＡＬＫ’は独立
にアルキレンであり、 Ｒ２は独立に水素または−ＣＨ２Ｒ３であり、Ｒ３は独
立にアルキルであり、 ＡＬＫ”はアルキレンであり、そして ＺはＨまたはＡＬＫ’−ＣＨＯである、の化合物または
その酸付加塩を投与することを特徴とする、生きている
有機体において免疫抑制応答を誘発する方法。

１Ｏ１Ｒ２は独立に水素である、上記第９項記載の方法
。

１１、治療を開始する個体に、実質的に純粋な形態で、
免疫学的移植組織対宿主の反応を誘発するために効果量
の、一般式Ｉ： ０ＣＨ−ＡＬＫ’−ＮＲ”ＣＨ２−ＡＬＫ２ＣＨ２−Ｎ
　Ｒ２−Ｚ 式中、　　　　　　　　　　　　（Ｉ）ＡＬＫ’は独立
にアルキレンでアリ、 Ｒ２は独立に水素または−ＣＨ２Ｒ’であり、Ｒ３は独
立にアルキルであり、 ＡＬＫ２はアルキレンであり、そして ＺはＨまたはＡＬＫ、’−ＣＨ０である、の化合物また
はその酸付加塩を投与することを特徴とする、前記個体
における免疫学的移植組織対宿主の反応を抑制する治療
学的方法。

１２、生きている有機体からの骨髄の抽出物に、実質的
に純粋な形態で、Ｔ細胞の増殖を抑制するために効果量
の、一般式■： ＯＣＨＡ　Ｌ　Ｋ　’　　Ｎ　Ｒ”　　ＣＨ２Ａ　Ｌ　
Ｋ　２ＣＨ２−ＮＲ’−Ｚ 式中、　　　　　　　　　　　　（Ｉ）ＡＬＫ’は独立
にアルキレンであり、 Ｒ２は独立に水素または−ＣＨ２Ｒ３であり、Ｒ３は独
立にアルキルであり、 ＡＬＫ２はアルキレンであり、そして ＺはＨまたはＡＬＫ’−ＣＨＯである、の化合物または
その酸付加塩を投与することを特徴とする、生きている
有機体からの骨髄の抽出物を処理して前記抽出物におけ
るＴ細胞の集団の増殖を抑制する生体外法。

１３、次の式（Ｘ）： 式中、 Ｒ１は独立にアルキルまたはベンジルであり、ＡＬＫ’
は独立にアルキレンであり、 Ｒ２は□独立に水素または一〇Ｈ２Ｒ３であり、Ｒ３は
独立にアルキルであり、そして ＡＬＫ２はアルキレンである、 のジアセタールまたはその製剤学的に許容されうる酸付
加塩、ただしＡ　Ｌ　Ｋ　’およびＡＬＫ”の各々が独
立にエチレンである場合、Ｒ２は一〇’Ｈ２Ｒ”である
。

１４、式中、 Ｒ１は独立に直鎖状もしくは分枝鎖状の約１〜６個の炭
素原子を有するアルキルであり、ＡＬＫ’は独立に直鎖
状もしくは分枝鎖状の約１〜６個の炭素原子を有するア
ルキレンであり、Ｒ３は独立に直鎖状もしくは分校鎖状
の約１〜６個の炭素原子を有するアルキルであり、そし
てＡＬＫ２は独立に直鎖状もしくは分枝鎖状の約１〜８
個の炭素原子を有するアルキレンである、上記第１３項
記載のジアセタール。

１５、次の式： ％式％ 式中、 ＡＬＫ’は独立にアルキレンであり、 Ｒ２は独立に水素または−ＣＨ２Ｒ’であり、Ｒ３は独
立にアルキルであり、そして ＡＬＫ”はアルキレンである、 のジアルデヒドまた１まその酸付加塩、ただしＡＬＫｌ
およびＡＬＫ’の各々が独立にエチレンである場合、Ｒ
２は−ＣＨ２１３である。

１６、式中、 ＡＬＫ’は独立に直鎖状もしくは分枝鎖状の約１〜６個
の炭素原子を有するアルキレンであり、Ｒ３は独立に直
鎖状もしくは分枝鎖状の約１〜６個の炭素原子を有する
アルキルであり、そしてＡＬＫ”は独立に直鎖状もしく
は分枝鎖状の約１〜８個の炭素原子を有するアルキレン
である、上記第１５項記載のジアルデヒド。

１７、一般式ＩのＡＬＫ’は直鎖状もしくは分校鎖状の
約１〜約６個の炭素原子を有するアルキレンであり、Ｒ
３は約１〜約６個の炭素原子を有するアルキルであり、
そしてＡＬＫ２は約１〜約８個の炭素原子を有するアル
キレンであり、そしてＺはＡＬＫ’−ＣＨＯである、上
記第４項記載の方法。

１８、ＡＬＫ’は直鎖状もしくは分枝鎖状の約１〜約４
個の炭素原子を有するアルキレンであり、Ｒ２は水素で
あり、そしてＡＬＫ２は直鎖状もしくは分枝鎖状の約１
〜約４個の炭素原子を有するアルキレンである、上記第
１７項記載の方法。

１９、ＡＬＫ’は約１〜約２個の炭素原子を有するアル
キレンであり、そしてＡＬＫ”は約１〜約３個の炭素原
子を有するアルキレンである、上記第１８項記載の方法
。

２０、前記一般式Ｉの化合物はスペルミンジアルデヒド
である、上記第１９項記載の方法。

【図面の簡単な説明】

策土層 ヒトＴおよび８９７３球を、異なる濃度のスペルミンジ
アルデヒドと別々に生体外で１時間インキュベーション
した。細胞をよく洗浄し、モしてＰＨＡ（Ｔ細胞につい
て）またはＰＷＭ　（Ｂ細胞について）の増殖アッセイ
において用意した。グラフを描き、ここで応答のパーセ
ントをスペルミンジアルデヒドの濃度の関数としてプロ
ットする。 寒又層 マウス胛細胞および骨動細胞を、異なる濃度のスペルミ
ンジアルデヒドと別々に生体外で１時間インキュベーシ
ョンした。細胞をよく洗浄し、そしてＣｏｎＡ刺激増学
アッセイにおいて用意した。 グラフを描き、ここで応答のパーセントをスペルミンジ
アルデヒドの濃度の関数としてプロットする。 匙１図 Ｃ５７ＢＬ牌臓および骨髄細胞の混合物を異なる濃度の
スペルミンジアルデヒドまたは対照の調製物で処理し、
そして致死的に照射したＡＫＲマウス中に静脈内注射し
た。グラフを描き、ここで生存パーセントを時間の関数
としてスコアを付ける。 乳土理 （ＬｅｗＸＢＮ）ラットを、異なる投与量のスペルミン
ジアルデヒドで８日間毎日静脈内注射した。第２日に、
ＢＮラット牌牌細Ｆｌラットの左足の裏に皮下注射した
。これらのラットを７日で殺し、そして左および右の膝
窩のリンパ節を切除し、そして秤量した。重量の差を使
用したスペルミンジアルデヒドの濃度の関数としてプロ
・７トする。 寒旦理 Ｃ５７ＢＬマウスを異なる投与量のスペルミンジアルデ
ヒドで毎日腹腔的注射した。第２日に、それらに、また
、１０７ＤＢＡ牌細胞を与えた。 ７日後、動物を殺し、そして細胞障害性Ｔ細胞のパーセ
ントを測定し、肺臓中に発生した特異的溶菌％を計算し
、そしてスペルミンジアルデヒドの濃度の関数としてプ
ロットした。 寒五週 皮膚の移植実験において、ＢＨＡ／Ｃ（Ｈ２°）皮膚移
植片をＣ３Ｈマウスに移植した。スペルミンジアルデヒ
ドを移植直後に皮下投与し、そして研究を通して続けた
。コンカナバリンＡを陽性の対照として使用した。皮膚
移植片の生存％を移植後の日数に対してプロットした。 寒り週 遅延した型の過敏性を８６Ｄ２Ｆ　ｌマウスの足の裏に
おいて誘発し、そして彫版（ｍｍ）を種々の時間におい
て測定した。 寒麗翠 ＳＤＡおよびその類似体のコンカナバリンＡ牌臓Ｔ細胞
の増殖への作用。 牌細胞を種々の濃度のＳＤＡまたは類似体で３０分間３
７°Ｃにおいて処置した。細胞を洗浄し、そしてコンカ
ナバリンＡの存在下に３日間培養した。［３Ｈ］チミジ
ン０．１μＣｉ／ウエルを添加し、そして細胞を１８〜
２４時間後収穫し、ＩＣ５ｏは０．７０μモルであった
。ブチルジアルデヒドはＳＤＡより３倍効能があったが
、それは代謝的により安定性であり、それゆえ臨床的に
より関連性があるべきであろう。 笈■理 ＳＤＡおよびその類似体によるＳ−アデノシルメチオニ
ンデカルボキシラーゼ（ＡｄｏＭｅｔＤＣ）の阻害。 ネズミ白血病Ｌ１２１０細胞懸濁液を、異なる濃度のＳ
ＤＡまたはブチルジアルデヒドとともにイ、ンキュベー
ションし、そしてＡｄｏＭｅｔ　　ＤＣの活性を［１４
Ｃ］Ｃｏ２の放出の監視により推定した。両者の薬物に
ついての阻害曲線は、０．１２〜０．１３　Ｘ　１０−
３モルのＩＣ５ｏ値と重なった。 第１θ図 ＝８７ ３ＤＡおよび他の既知の阻害剤によるポリアミン生合成
酵素の調節。 図面は、ＳＤＡ、その類似体、ブチルジアルデヒド（Ｂ
ＤＡ）　、ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）お
よびメチルグリオキサルビス（グアニルヒドラゾン’）
（ＭＧＢＧ）による、ポリアミン合成の重要な調節酵素
の阻害の比較プロフィルを示す。ＤＦＭＯは高い効能で
ＯＤＣを阻害したが、ＭＧＢＧはＡｄｏＭｅｔ　　ＩＣ
の活性を選択的に減少させた。類似体のＢＤＡはＡ　ｄ
　ｏ　Ｍ　ｅｔ　　ＤＣに対するその活性においてＭＧ
ＢＧに類似した。しかしながら、ＳＤＡは重要な酵素の
両者を阻害し、これにより代償の応答（ＡｄｏＭｅｔ　
　ＤＣへのＤＦＭＯの）を排除し、そしてポリアミンの
生合成を完全に阻害する、唯一の薬物であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、生きている細胞に、実質的に純粋な形態で、免疫抑
   制応答を誘発するために効果量の、一般式 I ： ＯＣＨ−ＡＬＫ＾１−ＮＲ＾２−ＣＨ＿２−ＡＬＫ＾２
   −ＣＨ＿２−ＮＲ＾２−Ｚ（ I ） 式中、 ＡＬＫ＾１は独立にアルキレンであり、 Ｒ＾２は独立に水素または−ＣＨ＿２Ｒ＾３であり、Ｒ
   ＾３は独立にアルキルであり、 ＡＬＫ＾２はアルキレンであり、そして ＺはＨまたはＡＬＫ＾１−ＣＨＯである、 の化合物またはその酸付加塩を投与することを特徴とす
   る、生きている細胞において免疫抑制応答を誘発する方
   法。 ２、生きている有機体に、実質的に純粋な形態で、免疫
   抑制応答を誘発するために効果量の、一般式 I ： ＯＣＨ−ＡＬＫ＾１−ＮＲ＾２−ＣＨ＿２−ＡＬＫ＾２
   −ＣＨ＿２−ＮＲ＿２−Ｚ 式中、　（ I ） ＡＬＫ＾１は独立にアルキレンであり、 Ｒ＾２は独立に水素または−ＣＨ＿２Ｒ＾３であり、Ｒ
   ＾３は独立にアルキルであり、 ＡＬＫ＾２はアルキレンであり、そして ＺはＨまたはＡＬＫ＾１−ＣＨＯである、 の化合物またはその酸付加塩を投与することを特徴とす
   る、生きている有機体において免疫抑制応答を誘発する
   方法。 ３、治療を開始する個体に、実質的に純粋な形態で、免
   疫学的移植組織対宿主の反応を誘発するために効果量の
   、一般式 I ： ＯＣＨ−ＡＬＫ＾１−ＮＲ＾２−ＣＨ＿２−ＡＬＫ＾２
   −ＣＨ＿２−ＮＲ＾２−Ｚ 式中、　（ I ） ＡＬＫ＾１は独立にアルキレンであり、 Ｒ＾２は独立に水素または−ＣＨ＿２Ｒ＾３であり、Ｒ
   ＾３は独立にアルキルであり、 ＡＬＫ＾２はアルキレンであり、そして ＺはＨまたはＡＬＫ＾１−ＣＨＯである、 の化合物またはその酸付加塩を投与することを特徴とす
   る、前記個体における免疫学的移植組織対宿主の反応を
   抑制する治療学的方法。 ４、生きている有機体からの骨髄の抽出物に、実質的に
   純粋な形態で、Ｔ細胞の増殖を抑制するために効果量の
   、一般式 I ： ＯＣＨ−ＡＬＫ＾１−ＮＲ＾２−ＣＨ＿２−ＡＬＫ＾２
   −ＣＨ＿２−ＮＲ＾２−Ｚ 式中、　（ I ） ＡＬＫ＾１は独立にアルキレンであり、 Ｒ＾２は独立に水素または−ＣＨ＿２Ｒ＾３であり、Ｒ
   ＾３は独立にアルキルであり、 ＡＬＫ＾２はアルキレンであり、そして ＺはＨまたはＡＬＫ＾１−ＣＨＯである、 の化合物またはその酸付加塩を投与することを特徴とす
   る、生きている有機体からの骨髄の抽出物を処理して前
   記抽出物におけるＴ細胞の集団の増殖を抑制する生体外
   法。 ５、次の式（Ｘ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、 Ｒ＾１は独立にアルキルまたはベンジルであり、ＡＬＫ
   ＾１は独立にアルキレンであり、 Ｒ＾２は独立に水素または−ＣＨ＿２Ｒ＾３であり、Ｒ
   ＾３は独立にアルキルであり、そして ＡＬＫ＾２はアルキレンである、 のジアセタールまたはその製剤学的に許容されうる酸付
   加塩、ただしＡＬＫ＾１およびＡＬＫ＾２の各々が独立
   にエチレンである場合、Ｒ＾２は−ＣＨ＿２Ｒ＾３であ
   る。 ６、次の式： ＯＨＣ−ＡＬＫ＾１−ＮＲ＾２−ＣＨ＿２−ＡＬＫ＾２
   −ＣＨ＿２−ＮＲ＾２−ＡＬＫ＾１−ＣＨＯ 式中、 ＡＬＫ＾１は独立にアルキレンであり、 Ｒ＾２は独立に水素または−ＣＨ＿２Ｒ＾３であり、Ｒ
   ＾３は独立にアルキルであり、そして ＡＬＫ＾２はアルキレンである、 のジアルデヒドまたはその酸付加塩、ただしＡＬＫ＾１
   およびＡＬＫ＾２の各々が独立にエチレンである場合、
   Ｒ＾２は−ＣＨ＿２Ｒ＾３である。