JPH02215389A - メバロン酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、メバロン酸の製造方法、特に、メバロン酸を
高収率で且つ安価に得る方法に関するものである。

尚、メバロン酸は酸型とラクトン型の２通りの構造を示
すが、相互に変換することが公知であり、以下本明細所
では特に断らない限り、両型を総称してメバロン酸と言
う。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕メバロ
ン酸は、ライト等によって初めて単離された物質であり
〔ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサ
イエフテイ　＜Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆｔｈｅ　Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ　）　７
８＠、５２７３〜５２７５．１９５６年参照〕、コレス
テロールを始めとする各種イソプレノイド化合物の重要
な中間体として知られている。

又、メバロン酸は、種々の微生物及び／又は動植物に対
して成育促進作用を有する等、生物の代謝に重要な役割
を果たしているため、微生物、動植物の成長促進剤とし
て用いられ、またピレスロイド系農薬、ユビキノン、ド
リコール、脂Ｒ性ビタミン等の前駆体等に用いられる。

これらの研究には、本来天然型（Ｒ型）メバロン酸を使
用することが好ましいが、天然型メバロン酸は人手し難
いため、従来、化学合成されたラセミ体が使用されてい
る。

天然型のメバロン酸の製造法としては、特開昭６３−２
１６４８４号公報、同６３−２１６４８５号公報、同６
３−２１６４８６号公報及び同６３−２Ｉ６４Ｂ７号公
報に、サツカロマイコブシス・フィブリゲラ等の微生物
を用いることにより最高１２■／−のメバロン酸を培地
中に蓄積する方法が記載されているが、さらに効率的に
高濃度でメバロン酸を蓄積させる方法が望まれている。

又、これらの公知の方法では、高価なマルトエキス、肉
エキス等の培養原料を用いるため、安価な培養原料を用
いる方法が望まれている。

従って、本発明の目的は、安価な培養原料を用いて高収
率でメバロン酸を製造する方法を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明は、上記目的を、メバロン酸生産菌を培地中で培
養することによりメバロン酸を生産するに際し、培地中
に、有機態窒素源として、少なくとも〔Ａ〕カゼイン由
来のペプトンを０．０１〜１０重量％（乾燥重量基準）
及びＣＢ）コーン・ステイープ・リカーを０．０１〜１
０重量％（乾燥重量基準）含有させることを特徴とする
メバロン酸の製造方法を提供することにより達成したも
のである。

以下、本発明のメバロン酸の製造方法について詳述する
。

本発明において使用する〔Ａ〕カゼイン由来のペプトン
としては、各種カゼインから製造されたものであればど
のようなものでも良く、例えば、牛乳、山羊孔等から製
造されるカルシウムカゼイン、ナトリウムカゼイン等の
カゼインを、ペプシン、トリプシン、パンクレアチン、
プロメライン等各種の動植物及び微生物由来の蛋白質分
解酵素や、酸、アルカリ等により加水分解して得られる
ものを使用することができる。

上記ペプトンとしては、全窒素含量中の”アミノ態窒素
含量が２０〜４０重量％、特に２５〜３５重景％となる
ように加水分解したペプトンが好ましい。

アミノ態窒素含量が上記量より多いと、加水分解時に副
生ずる不純物が多くなり易く、メバロン酸生産量が低下
する傾向にあり、又アミノ態窒素含量が上記量より少な
いと、微生物が利用しづらい為かやはりメバロン酸生産
量が低下する傾向にある。

上記〔Ａ〕カゼイン由来のペプトンは、培地中に乾燥重
量として０．０１〜ｌＯ重量％含有させる。

〔Ａ〕カゼイン由来ペプトンが上記量より少ないと、メ
バロン酸生産量が向上セす、又上記量より多いと、菌体
量が多くなる為酸素不足となってやはりメバロン酸生産
量が向上しない。

又、本発明において使用するＣＢ）コーン・ステイープ
・リカーとしては、例えば下記のものが挙げられる。

■イネ目イネ科のＺｅａ属に属する植物、所謂トウモロ
コシの少なくとも生及び／又は乾燥した種子を、３０〜
７０℃、好ましくは４０〜５０℃の温水中に２４時間以
上、好ましくは４８時間以上浸漬した浸漬液。

■上記トウモロコシの少なくとも生及び／又は乾燥した
種子を、３０℃以上、好ましくは５０℃以上の温水又は
熱水に５分〜２４時間、好ましくは１時間〜１２時間浸
漬した浸漬液を培養液として、常法により乳酸菌、例え
ば、ストレプトコアカス（Ｓ　ｔｒｅｐ　ｔｏｃｏｃｅ
ｕｓ）属、ラクトバチルス（Ｌａｃｔ。

ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ペデイオコッカス（Ｐｅｄｉｏ
ｃｏｃｃｕｓ）属、パイフィトバクテリウム（Ｂｉｆｉ
ｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ロイコノストック（Ｌｅ
ｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属等に属する乳酸菌の一種以上を
２０℃〜４５℃、好ましくは３０℃〜３７℃で、３時間
〜９６時間、好ましくは６時間〜４８時間培養した培養
液。

上記〔Ｂ〕コーン・スティープ・リカーは、培地中に乾
燥重量として０．０１〜１０重量％含有させる。

〔Ｂ〕コーン・スティープ・リカーが上記量より少ない
と、メバロン酸生産量が向上せず、父上配量より多いと
、菌体量が多くなる為酸素不足となってやはりメバロン
酸生産量が向上しない。

本発明において前記〔Ａ〕カゼイン由来のペプトン及び
前記〔Ｂ〕コーン・スティープ・リカーを、〔Ａ〕及び
ＣＢ）の合計量が好ましくは０．２〜１１重量％、より
好ましくは０．４〜５重量％となるように使用すると、
メバロン酸をより効率的に生産することができる。

本発明において、メバロン酸生産菌を培養する培地とし
ては、有機態窒素源として少なくとも前記〔Ａ〕カゼイ
ン由来のペプトン及び前記ＣＢ）コーン・ステイープ・
リカーを用いる以外は公知の培地組成と同様の組成のも
のを使用することができ、例えば、グルコース、シェー
クロース等の炭素源５〜１５重量％、カゼイン由来のペ
プトンを乾燥重量として０．０１〜１０重量％、コーン
・ステイープ・リカーを乾燥重量として０．０１〜１０
１〜１０重量水（残部）からなる培地を挙げることがで
きる。

又、上記培地には、本発明の目的を逸脱しない範囲内で
必要に応じてその他の有機態窒素源、界面活性剤（例え
ば、微生物の細胞膜の可溶化作用を持つ非イオン性界面
活性剤）、リン酸塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カ
ルシウム塩等の無機塩類等を添加することができ、これ
らの添加物の添加量は、好ましくは各々０．０１〜５重
量％とするのが良い。

又、合成高分子、シリコーン系の消泡剤も本発明の目的
を逸脱しない範囲内で必要に応じて培地に添加すること
ができる。

本発明において使用するメバロン酸生産菌としては、実
質的にメバロン酸を生産する微生物であればどのような
ものでも良く、例えば、サツカロマイコブシス・フィブ
リゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓｆｉｂｕｌ
ｉｇａｒａ　）に属する微生物等、特開昭６３２１６４
８７号公報に記載されている微生物を使用すると効率的
であり好ましい。

本発明において、前記培地で前記メバロン酸生産菌を培
養する具体的な方法は、特に制限されず、公知の培養方
法を利用することができ、例えば、特開昭６３−２１６
４８４号公報に記載されている方法、即ち、温度２０〜
４０℃、好ましくは２５〜３５℃で振盪培養するか、１
００〜５００ｒｐｍ、好ましくは２００〜４００ｒｐｍ
で０．２〜１．５ＶＶＭ、好ましくは０．５〜１．　Ｏ
Ｖ　Ｖ　Ｍの通気撹拌培養すると効率的であり好ましい
。

更に、一定時間振盪培養及び／又は通気撹拌培養後、培
養液中に少なくとも炭素源を含有する基質の添加を１回
又は複数回繰り返して行い培養を継続すると、効率的に
メバロン酸を得ることができ好ましい。

本発明の方法により製造されたメバロン酸は公知の精製
法により精製することができる０例えば、培養終了後、
遠心分離濾過法、有機合成膜〔例えば、ＭＦＩＩＩ（メ
ンブランフィルタ−）〕による国体分離法等の公知の菌
体分離方法で培養物から菌体を除いた後、該培養物に公
知の精製法を適用すれば良く、かかる公知の精製法とし
ては、例えば、逆浸透膜、シリカゲル、イオン交換樹脂
、ポーラスポリマー樹脂による精製法、酢酸エチル、メ
チルエチルケトン等による溶剤抽出、及び減圧蒸留、分
子蒸留、結晶化等による精製法などを挙げることができ
る。

〔実施例〕

以下に本発明の実施例及び比較例を挙げ、本発明をさら
に詳細に説明する。

尚、以下の実施例及び比較例におけるメバロン酸の定量
は以下の通り行った。

（メバロン酸の定量方法） 試料溶液１．０−を試験管にとり、５０％（Ｗ／Ｗ）リ
ン酸を５〜６滴加えて酸性とする。

これにＮ　ａ　ｘ　Ｓ　Ｏａ　１　ｇを添加し、更に酢
酸エチル２．０−を加えて３０秒間撹拌する。

これをローターの半径１４唾、２５００ｒｐｍにて２分
間遠心分離し、上層の酢酸エチル層を別の試験管Ａにと
り蒸発乾固させる。

下層の水相に更に酢酸エチル２．０−を加えて３０秒間
撹拌する。

これを同様に遠心分離し、上層の酢酸エチル層を前記試
験管Ａにとり蒸発乾固させる。

さらに同様の操作を繰り返し、合計酢酸エチル層６−（
合計量）の乾固物を得る。

この乾固物を１０５ｇ／−のδ−バレロラクトン（アル
ドリッチ社製）を内部標準として含むイソプロパツール
１−に溶解し、高速液体クロマトグラフイーにより定量
する。

尚、高速液体クロマトグラフィーの条件は以下の通りで
ある。

カラム：ヌクレオジル　５　Ｎ　（ＣＨｚ）’ｔ（西独
、Ｍ・ナーゲル社製） φ４．６Ｘ２５０ｍ、４０℃ 移動相：ｎ−ヘキサン／イソプロパツール＝９／１、２
．０ｄ／分 検出器：示差屈折計 注入量：５μに 実施例１ グルコース１０重量％、カゼイン由来のペプトン（アミ
ノ態窒素含量３１重量％）０．５重量％（乾燥重量）、
コーン・ステイープ・リカー（４５℃、５０時間浸漬液
：水分５０重量％）１．０重量％（乾燥重量基準で０，
５重量％）　、ＫＨＩＰＯ４０，１重量％、Ｍ　ｇ　Ｓ
　Ｏａ・７Ｈ２００，０５重量％、ＣａＣ０＋１．０重
量％、残部水からなる培地５−を試験管（φ２４Ｘ２０
０ｍｍ）に入れ１２１℃で１５分間殺菌した。

これにサツカロマイコブシス・フィブリゲラ（Ｓａｃｃ
ｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ　ｆｔｂｕｌｉｇｅｒａ　）
　　Ｉ　ＦＯ０１０７（ＩＦＯは（財）醗酵研究所保存
菌株を表す）を１白金耳接種し２８℃、３ＱＯｒｐｍで
振盪培養した。

培養３日目及び７日目にそれぞれ５０重量％グルコース
水溶液０．５ｇを添加して培養を継続し１２２日目培養
を終了した。

得られた培養物中のメバロン酸を前記定量法により測定
したところ、メバロン酸量は１４．１■／−であった。

比較例１〜５ 実施例１で使用したカゼイン由来のペプトンを下記表１
に示すペプトンに代えた以外は実施例１と同様にして培
養を行い、培養物中のメバロン酸量を同様に測定した。

その結果を下記表１に示す。

表　　　１ 注）各種ペプトンは何れもオリエンタル酵母工業■製 比較例６ 実施例１で使用したコーン・ステイープ・リカー　１．
０重量％を酵母エキス（デイフコ・ラボラトリーズ＆り
０．２５重量％に代えた以外は実施例１と同様にして培
養を行い、培養物中のメバロン酸量を同様に測定した。

その結果、メバロン酸量は１２．１■／−であった。

比較例７〜８ 実施例１で使用した培地からコーン・ステイープ・リカ
ーを除き且つカゼイン由来のペプトンの使用量を０．５
重量％から１．０重量％に代えた培地（比較例７）、実
施例１で使用した培地からカゼイン由来のペプトンを除
き且つコーン・ステイープ・リカーの使用量を１．０重
量％から２．０重量％に代えた培地（比較例８）をそれ
ぞれ使用した以外は実施例１と同様にして培養を行い、
培養物中のメバロン酸量を同様に測定した。その結果、
メバロン酸量はそれぞれ０．７　ｗ／ｄ　（比較例７）
、１１．４■／−（比較例８）であった。

〔発明の効果〕

本発明のメバロン酸の製造方法によれば、高収率で且つ
安価にメバロン酸を得ることができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 メバロン酸生産菌を培地中で培養することによりメバロ
   ン酸を生産するに際し、培地中に、有機態窒素源として
   、少なくとも〔Ａ〕カゼイン由来のペプトンを０．０１
   〜１０重量％（乾燥重量基準）及び〔Ｂ〕コーン・ステ
   ィープ・リカーを０．０１〜１０重量％（乾燥重量基準
   ）含有させることを特徴とするメバロン酸の製造方法。