JPH02195878A - プロテアーゼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）発明の目的 「産業上の利用分野」 本発明は新規なプロテアーゼに関し、より具体的にはバ
チルス・チューリンゲンシスの産生ずる耐熱性にすぐれ
たセリンプロテアーゼに関するものである。

プロテアーゼはその産業的利用価値が非常に大きい酵素
の一つであり、洗剤や洗顔料の成分として、あるいは皮
革加工や精肉分野での内軟化処理などの処理剤としてな
どその応用範囲は多岐にわたるものであり、本発明はそ
れらの業界で広く利用されるものである。

「従来の技術」 バチルス属の細菌が細胞外にプロテアーゼを生産するこ
とは知られ【おり、特にバチルス・リケニフォルミス（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）の産
生ずる細胞外セリンプロテアーゼであるサチライシンは
、その活性が界面活性剤中でも安定なことから、洗剤の
一成分として利用されている。

バイオリアクターとしてプロテアーゼを利用しようとい
う試みは固定化酵素などの技術が進むにつれて盛んにな
り、より安定な活性を持つプロテアーゼが求められる様
になってきている。

このような安定性にすぐれたプロテアーゼを得るため、
幾多のスクリーニングが行なわれ、耐熱性プロテアーゼ
を産生ずるいくつかの好熱菌が見出されている。例とし
てあげれば、サーミターゼを産生ずるサーモアクテノマ
イセス・ブルガリス（割りμ庶基−」μす１旦−ｒｊ　
ｓ　）や、サーモライシンを産生ずるバチルス・サーモ
プロテオリティカｘｑＩμすＪｕｓ　ｔｈｅｒｍｏＪ２
ｙｏ−±明月１環視りや、アクアライシン■や■を産生
ずるサーマス・アクアチカス（’Ｐｈｅｒｍ、ｐｓ」匹
！Ｕ弁ｕｓ）ＹＴ−１などである。

「発明が解決しようとする課題」 しかしながらこれら、サーモアクチノマイセス・ブルガ
リス、バチルス・サーモプロテオリティカスおよびサー
マス・アクアチカスのような中等度好熱菌や高度好熱菌
より耐熱性プロテアーゼを得るには、これらの生産菌の
生育至適温度である高温（５５〜７５℃）で培養する必
要がある。

本発明者等は中温菌により耐熱性プロテアーゼを得るべ
ぐ種々探索を行ったのである。

（ロ）発明の構成 「課題を解決するための手段」 本発明者等は３０〜３７℃という中温域に至適生育温度
を持つ中温菌であるバチルス・テ一すンゲンシスが産生
ずる新規な蛋白質を見出し、その特性について検討した
ところ、その蛋白質は酵素作用を有するもの、すなわち
プロテアーゼであり、しかもそのプロテアーゼは高温菌
が産生ずるプロテアーゼに匹敵するほどの高い耐熱性を
有するものであることを見出して本発明を完成した。

すなわち、本発明はバチルス・チューりンゲンシス（Ｂ
ａｃｉｌ　ｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）が産
生しＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動法による分子
量が３４０００±１０００でありＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｐｈ
ｅ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｑｌｎ−’ｐｙｒ−Ｑｌｙ−Ｉ、
ｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｉ　１　ｅ−Ｇｌ　ｎ−Ａｌ　
ａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎなる部分アミノ酸配列を有すること
を特徴とするプロテアーゼに関する発明とバチルス・チ
ューリンゲンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇ
ｉｅｎｓｉｓ）が産生しＳＤＳ−ポリアクリルアミド電
気泳動法による分子量が３４０００±１０００でありＰ
ｒｏ−Ｔｙｒ−ｐｂｅ−４ｓｎ−Ａｓｎ−Ｑｌｎ−’ｆ
ｙｒ−Ｑｌｙ−Ｌｅｕ−Ｑｌｙ−Ｌｙｓ−工１ｅ−Ｑｌ
ｎ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｑｌｎ　なる部分アミノ酸配列を
有する蛋白質を用いて他の蛋白質を分解することを特徴
とする蛋白質の分解方法に関する発明との２つの発明か
らなるものである。

本発明のプロテアーゼはバチルス・チューリンゲンシス
の発酵により産生されるが、その発酵は適当な培地をオ
ートクレーブにより滅菌後、それにバチルス・チューリ
ンゲンシスを接種し３０℃程度で１４〜２４時間振盪培
養することによりてなされる。なお培養中発泡すること
があれば、適当な消泡剤添加により解消される。

プロテアーゼ産生に際して、炭素源および窒素源につい
ては特に限定されるものではなくまた、Ｍｇ”＋Ｃａ”
ｔＭｎ”＋ｚｎ”＋Ｎａ”ｌＫ＋などの無機塩も適宜選
択して培地中に添加することができる。ただし、グルコ
ースの添加は本陣であるプロテアーゼの収得は、例えば
後記実施例に示すごとく一般の酵素の採取および精製の
手段に準じておこなうことができる。

すなわち、培養物を遠心分離等して菌体を分離し、その
培養ろ液から通常の分離手段、例えば塩析法、溶媒沈殿
法（メタノール、エタノール、アセトン等）によって蛋
白を沈殿させたり、また限外濾過により漉網させてプロ
テアーゼを得る。塩析法では、例えば硫酸アンモニウム
（５０〜７０％飽和分画）で沈殿させ、透析あるいは、
セフ７デ、クスＧ　−２５（５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｑ−２
５：　ファルマシア製）などによる通常の方法で脱塩す
ればよい。

さらに酵素を精製するのに、例えばＣＭセファテ、クス
（ファルマシア製）、０Ｍセルロース（ワットマン製）
、ＤＥＡＥセルロース（日本ウォーターズ製）のような
イオン交換クロマトグラフィーおよびセファデックスの
ような分子ふるいゲルクロマトグラフィー、またはヘモ
グ四ビンセファロースのようなアフィニティクロマトグ
ラフィー〔バイオケミカル　バイオフィン、クス　リサ
ーチ　コミュニュケーシ胃ン：］３ｉｏｃｈｅｍ、１３
ｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　５７゜（
３）、５４５．（１９６９））　　などを適宜組み合わ
せて、精製することができる。

このようにして得られた本発明のプロテアーゼをＰｒｏ
ｔｅａｓｅ’ｌ’Ｈと命名した。

「作　用」 テアーゼであるにもかかわらず、２ｍＭＣａ”存在下、
ｐＨ８，７，６０℃で７時間後になお８８チもの相対活
性を有するという熱安定性（耐熱性）を示す。また、界
面活性剤（１％ＳＤＳ）中でも７７％の残存活性を有す
るという当業者が予測し得なかった性能を有するもので
ある。

中温菌であるバチルス・チューリンゲンシスが何故耐熱
性プロテアーゼを産生ずるのかその機構は全く不明であ
る。

従来、中温菌から耐熱性プロテアーゼが得られたという
知見はなく、バチルス・チューリンゲンシスからプロテ
アーゼが得られたというステバッフ（３ｔｅｐａｎｏｖ
）の報告〔ピオキミャ（Ｂｔｏｋｙｍｔｙａ）ｓ４６．
（５）＋９２０＋（１９８１）’）もあるが、そのプロ
テアーゼもサチライシンと同程度の熱安定性しか有せず
、到底耐熱性グロテアーゼと呼べるものではなく、本発
明のプロテアーゼは全く特異的なものである。

「実施例」 以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。

実施例１ ■、北北海道大学農学部生学教室り分譲を受けたバチル
ス・チューリンゲンシス　パー　クルスタキ　ＨＤ−２
５５（米国農務省（ＵＳＤＡ）より入手可能）スラント
から一白金耳かきとり、下に示す分離用寒天培地（培地
１）にストリークし３０℃にて、−晩培養し集落を形成
させた。

このうち一つの集落を５Ｑｄ液体培地（培地２）に接種
し３０℃で９時間振盪培養した。これをさらに、同じ組
成の５Ｑｍ液体培地１０本に５００μｌずつ接種（１チ
接種）し、３０℃で１５時間振盪培養した。培養後、遠
心分離した上清液について６０℃におけるプロテアーゼ
活性を測定し、グロテアーゼ生産性を確認した。

この上清液は６５６００　ｕｎｉｔｓ／１の活性をもっ
ていた。

培地１ １．６　　チ ０．２　　　係 ０．０５チ １０’Ｍ 」 ０　　　Ｍ ０　　　Ｍ １．５　　　チ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ｂｒｏｔｈ＊ Ｃｌ ＭｇＳＯ４・７Ｈ１Ｏ ＦｅＳＯ。

Ｃａ（ＮＯｘ　）ｔ Ｍ！ＩＳＯ。

寒天 培地２　　Ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ｂｒｏｔｈ”　　１６　
　％ＫＣＩ　　　　　　　　　　（１，２％ＭｇＳＯ４
−７Ｈ，ＯＯ，ｏ　５　％ Ｆｅ５０．　　　　　　　　　　ｉｏ　　ＭＣａ（Ｎｏ
、　）、　　　　　　１０−”　ＭＭｎＳ０４１０　’
　Ｍ ＊ニュートリエンドフロス〔テフコ （］）ｉｆｅｏ）製〕 Ｉｆ、　　！で得られた上清液に硫酸アンモニウムを５
０係飽和となるよう、ＩＭｌ−リスヒドロ−’ｌ−ジア
ミノエタン溶液でｐＨを調整しながら水中で０℃に保ち
つつ添加した。

添加後さらに４５分間攪拌を続けて、完全に沈殿を生成
させた後、遠心により沈殿物を除去した。この上清に７
０％飽和となるように同様の操作により硫酸アンモニウ
ムを添加した。

遠心分離により上清を除去し得られた沈殿を２ｍＭｃａ
ｃｌｔを含む５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６）に溶解後同
じ緩衝液で透析し、ＰＥＧ−６０００による濃縮、さら
に同様の透析を繰り返した。

ｔ　　ｎで得られた活性画分を、２ｍＭＣａＣ１，を含
む５ｍＭリン酸緩衝液で平衡化したＣＭセルロースカラ
ムを用い、ＫＣＩ直線濃度勾配で分離した（第７図）。

活性画分は■と同様に濃縮し５ｍＭリン酸緩衝液−２ｍ
ＭＣａＣ１，（ｐＨ６）で透析した。

ｔｖ、ｉで得られた活性画分を、■と同じ緩衝液で平衡
化した５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｑ−７５５ｕｐｅｒｆｉｎｅ
　のカラムにより精製した（第８図）。これにより、精
製プロテアーゼ（ＰｒＯｔｅａ＄ｅＴＨ）を、約０．９
１ｎ？得た。

１品 実施例２ １、実施例１の■で得られた活性画分を、５ＥＰ−ＰＡ
Ｋ■ＣＡＲＴＲＩＤＧＥ（日本ウォーターズ製）のＡＣ
ＣＥＬＬＴＭＣＭ（０，２Ｍ　　ＫＣＩ　　で溶出）で
前処理後、１０ｍＭ）リス−２ｍ　Ｍ　ＣａＣ’を緩衝
液（ｐＨ８，７）で透析し、緩衝液置換を行なったもの
を同じ緩衝液で平衡化したヘモグロビンセファロース　
アフィニティクロマトカラムを用い、ＫＣＩ直線濃度勾
配で精製した。

Ｉｔ、　　Ｉで得られた活性画分をＰＥＧ−６０００で
濃縮し同じ緩衝液で透析後、高速液体カラムクロマトグ
ラフィーにて分離した。カラムは、日本ウォーターズ製
のＧ−ＤＥＡＥを用い、ＫＣＩ直線濃度勾配で溶出させ
た。活性は非吸着画分で検出された。これより、プロテ
アーゼ（ＰｒｏｔｅａｓｅＴＨ）が約１．１１１１１ｆ
得られた。

実施例３ 実施例１の…で得られた活性画分をＡＣＣＥＬＬＴＭＣ
Ｍで前処理後、１０ｍＭ）リス塩酸−２ｍＭ（：：ａＣ
ｌ、緩衝液（ｐＨ８，７）　　で透析し、緩衝液置換を
行なったものを、実施例２の川と同様の操作で高速液体
クロマトグラフィーにより溶出させた。これによりプロ
テアーゼ（ＰｒｏｔｅａｓｅＴＨ）　　が８７μｇ得ら
れた。

以上のようにして得られたＰｒｏｔｅａｓｅ　’ｆＨは
、以下に示すような物理化学的性質を有する。

■分子量 ３４０００±１０００（ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電
気泳動による）　（第２図） ■等電点 ９０　（等電点電気泳動より） ■作用温度範囲および作用至適温度 本酵素を１０ｍＭトリス塩酸−２ｍＭＣａＣ１゜緩衝液
（ｐＨ８，７）　　中で１５分間作用させたときの作用
至適温度は７０℃である　（第３図）。

■熱安定性 本酵素を１０ｍＭトリス塩酸−２ｍＭｃａｃｌ。

緩衝液（ｐＨ８，７）中、各温度で１５分間保温したあ
とその残存活性をはかると６０℃では全く失活しないが
、７０℃以上では不安定である（第４図）。

さらに６０℃においては高度の熱安性を示し、２ｍＭＣ
ａ”＋存在下では、７時間保温後なお８８％の活性を有
する（第１図）。

■作用至適ｐＨ 広域緩衝液プリットンーロビンソン（Ｂｒｉｔｔｏｎ−
Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　）緩衝液（５ｍＭクエン酸、５ｍＭ
リン酸カリウム、５ｍＭホウ酸、５ｍＭジエチルバルビ
ッール酸を、Ｎａ０Ｉ（で目的のｐＨにしたもの）を用
いてその作用至適ｐＨを２５℃において測定したところ
、ｐＨ８〜９において活性ピークを形成しｐＨ９付近が
最大であった（第５図）。

■安定ｐＨ 広域緩衝液Ｂｒ１ｔｔｏｎ−Ｒｏｂｉｎｓｏｎ緩衝液を
用いて安定１）Ｉ（を２５℃で調べたところｐＨ５〜１
０において高い安定性を示した（第６図）。

■基質特異性 各合成基質に対する分解活性はつぎに示す通りである。

比活性（単位／ｍｙ　　Ｐｒｏｔｅｉｎ）ｚＡＡＬｐＮ
Ａ” ｚＹｐＮＰ” ｚＮｐＮＰ” ＺＡＩ）ＮＰ” ＢｏｃＡＡｐＮＡ＊５ ＳｕｃＡＡＡｐＮＡ” ＢＡＰＮＡ＊？ ｎ１ｔｒｏａｎｉｌｌｉｄｅ Ｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ｔｙｒ−ｐ−ｎ
ｉｔｒｏＰｈｅｎｏ１１３ｅｎｚｙｌ　ｏｘｙｃａｒｂ
ｏｎｙ　１−Ａ５ｎ−ｐ−ｎｉ　ｔｒｏＰｈｅｎｏｌＢ
ｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ−Ａｌａ−ｐ−ｎｉ
ｔｒｏＰｈｅｎｏｌｔ−Ｂｕ　ｔｙ　Ｉ　ｏｘｙｃａｒ
ｂｏｎ）？Ａｌａ−Ａｌ　ａ−ｐ−ｎ　ｉ　ｔ　ｒｏａ
ｎ　ｉ　ｌ　１１ｄｅＳｕｃｃ　１ｎｙｌ−，４１ａ−
Ａｌａ−Ａｌ　ａ−ｐ−ｎｉ　ｔｒｏａｎｉ　１１１ｄ
ｅＮａ−Ｂｅｎｚｏｙ　ｌ−Ａｒｇ−ｐ−ｎ　ｉ　ｔ　
ｒｏａｎ　ｉ　１１　ｉｄｅ■阻害剤の影響 第９表に示す各種プ・テアーゼ阻害剤についてそれぞれ
表に示した濃度となるように酵素溶液に添加し、６７℃
で１０分間保温し残存活性をアゾカゼイン法で測定した
。

阻害剤 ｎｏｎｅ（ｃｏｎｔ、） ＰＭＳＦ” ＥＤＴＡ’ ＥＧＴＡ＊” 工Ｏｄｏ　ａｃｅｔａｔｅ Ｓｏｙｂｅａｎ　’ｌ’ｒｙｐｓｉｎ　１ｎｈｉｂｉ　
ｔｅｒＴＬＣＫ” ｐｅｐｓｔａｔｉｎ 濃度 残存活性チ ０ｍＭ １ｍＭ ０ｍＭ ０ｍＭ ０ｍＭ １９／ｌｌ１１ ０ｍＭ ０．１　ｍＭ ２．７ ４．２ ８７、７ １０２．１ １．５．９ ９１．９ ０Ｚ８ １０１．５ ＊’　Ｎａ−ｐ　’ｌ’ｏｓｙｌ　　（ｙＳｌｎｅ　Ｃ
ｈｌｏｒａｎｅｔｈｙｌ　［ｅｔｏｎｅＰｒｏｔｅａｓ
ｅＴＨはセリンプロテアーゼ阻害剤であるＰＭＳＦによ
り完全に阻害され、ＳＨキレータ−であるヨード酢酸に
よっても８５チ程度阻害される。

しかし、金属キレート剤に対して耐性を示す。

■金属の影響 各種金属イオンのうちＣａ”＋Ｍｇ”＋等は本酵素の熱
安定性に有効である。

◎界面活性剤の影響 １０ｍＭ）リス塩酸−２ｍＭ　ｃａｃｌ、　　緩衝液（
ｐＨ８，７）中のＰｒｏｔｅａｓｅ’ｌ’Ｈにドデシ）
ｖ硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を添加して３７℃で３０分
間保温すると、０．１％ＳＤＳで８８．７１，１％ＳＤ
Ｓで７７チの残存活性があった。

なお、これらの物理化学的性質を求める際の酵素活性測
定法および蛋白質定量法は、次に示す方法で行なった。

■酵素活性測定法 （１）アゾカゼイン法 酵素溶液５０μｍに、１０ｍＭ　　）リス塩酸−２ｍＭ
　ＣａＣ１，緩衝液（ｐＨ８，０）　　中に溶かした０
、５チアゾカゼイン溶液を１００μｌ添加して混ぜ、６
０℃にて１５分間反応後１０　％　）　ＩＪジクロロ酸
を加えて反応を止めた。

この溶液の上清（ＴＣＡ可溶性蛋白画分）２００μｌ　
にＩＮ　　ＮａＯＨ２００μｌ　　を添加後波長４４０
　ｎｒｎで比色定量した。酵素力価は上記の条件下で５
０分間に１１Ｒ９のアゾカゼインを分解する酵素量を１
単位とした。

（２）ｐ−ニトロフェノールあるいはｐ−ニドロア＋？
＋　ＩＪン合成基質分解活性 ジメチルホルムアミド中に溶かした０、５■／ｄの濃度
を持つ合成基質（ｚＡＡＬｐＮＡ。

ＢｏｃＡＡｐＮＡ　、　ｚＹｐＮＰ　、　ｚＡｐＮＰ　
、　ｚＮｐＮＰ　。

５ｕＣＡＡＡＰＮＡ、ＢＡＰＮＡ）　８０μｌに５０ｍ
Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，５）４００μｌ　を添加
し、３７℃で４０５　ｎｍにおける吸光度変化を測定し
た。酵素力価は上記の条件下で１分間に１μｍｏｌのｐ
−＝）ロアェノールあるいはｐ−ニトロアニリンを遊離
する酵素量を１単位とした。

■蛋白定量法 蛋白定量は、プロティンアッセイキット（二ホンバイオ
ラッドラボラトリーズ製：　ＪａｐａｎＢｉｏ　−Ｒａ
ｄ　Ｌａｂ、　Ｌｔｄ、）を用い、ボビン　プラズマ　
ガフ”ｑ−グロプリｙ　（Ｂｏｖｉｎｅ　ｐｌａｓｍａ
Ｑａｒｒｍａ　Ｑｌｏｂｕｌｉｎ）を標準蛋白として、
算出した。

（ハ）発明の効果 本発明のプロテアーゼは中温菌であるバチルス・リンゲ
ンシスが産生じたものであり、バチルス・チューリンゲ
ンシスが耐熱性のプロテアーゼを産生ずることについて
は、未だ何ら知られておらず、本酵素は全く新規なプロ
テアーゼである。

本発明のプロテアーゼを産生ずる菌株バチルス・チュー
リンゲンシスは、常温（３０℃付近）で効率よくプロテ
アーゼを産生ずるので、本発明のプロテアーゼは好熱園
の場合に比べ、低温で大量に紅済的に取得することがで
きる。

さらに本発明のプロテアーゼは界面活性剤中でも安定で
あるため、洗剤用酵素としても特に有用である。

従って、本発明のプロテアーゼが各産業に及ぼす効果は
絶大なものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｐｒｏｔｅａｓｅ’ｐＨを１０ｍＭ）リス塩
酸−２ｍＭＣａＣｌ、緩衝液（１）Ｈ８，７）中で６０
℃で保温したときの残存活性を表したものである。 第２図は、レムリ法〔ネイチュアー：Ｎａｔｕｒｅ（Ｉ
、ａｎｄｏｎ）、２７７　、６８０．　（１９７０）’
）によるＳＤＳポリアクリルアミドゲル（１５％）電気
泳動の図である。■のレーンが分子量マーカー（Ｊａｐ
ａｎＢｊｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂ、　Ｌｔｄ、）、■のレー
ンが精製ＰｒｏｔｅａｓｅＴＨを表す。 第３図は、作用至適温度を示したものである。 １０ｍＭ）リス塩＃ｌ−２ｍＭＣａＣ１緩衝液（ｐ）（
８，７）中各温度でプロテアーゼ活性を測定したときの
相対活性である。 第４図は、ＰｒｏｔｅａｓｅＴＨの熱安定性を表したも
のである。１０ｍＭ　　トリス塩酸−２ｍＭ（：ａＣ１
２緩衝液（ｐＨ８，７）中で各温度で１５分間保温した
あとの残存活性を表す。 第５図は、作用至適ｐＨを示したものである。 各ＰＨの緩衝液中２５℃でプロテアーゼ活性を測定した
ときの図である。 第６図は、ｐＨ安定性を表したものである。 広域緩衝液Ｂｒ１ｔｔｏｎ−１ｏｂｉｎｓｏｎ緩衝液中
で２５℃で１６時間保温後の残存活性を表す。 第７図は、ＣＭ−セルロースクロマトグラフィーの図で
ある。５ｍＭリン酸−２ｍＭＣａＣｌ２緩衝液（ｐＨ６
）で平衡化したカラムで０〜０．２５ＭＫＣｌの直線濃
度勾配をかけて、精製した。 第８図は、３ｅｐｈａｄｅｘ　Ｑ−７５５ｕｐｅｒｆｉ
ｎｅによるゲル濾過クロマトグラフィーの図である。５
ｍＭリン酸−２ｍＭＣａＣ１，緩衝液（ｐＨ６）で平衡
化したカラムにサンプルをのせ、３．４ｄ／ｆｒａｃｔ
ｉｏｎ、往速１Ｑｆｆｌ／／ｌｌｒ、で溶出させた。 第９図は、ヘモグロビンセファロース　アフィニティク
ロマトグラフィーの図である。５ｍＭＢｒ１ｔｔｏｎ−
１ｏｂｉｎｓｏｎ緩衝液で平衡化したカラムにサンプル
をのせ、０〜ＩＭ　　ＫＣＩの直線濃度勾配をかけて、
ｔ　５　ｍｌ　／　ｆｒａｃｔｉｏｎ、　１５ｍ１／ｈ
ｒ。 で溶出させた。 第１０図は、Ｇ−ＤＥＡＥカラムを用いた高速液体クロ
マトグラフィーの図である。０〜１ＭＫＣｌの直線濃度
勾配流速０．７　ｒｔｔｌ　／―で溶出させるが、活性
成分は、非吸着画分で回収できる。 第１１図は、Ｐｒｏｔｅａｓｅ’ｐ）（とサチライシン
カールスバーグとの６０℃における熱安定性の比較の図
である。両者を１０ｍＭ）リス塩酸−２ｍＭＣａ（１，
緩衝液（ｐＨ８，７）中で保温後の残存活性を比較した
ものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、バチルス・チューリンゲンシス（￥Ｂａｃｉｌｌｕ
   ｓ￥￥ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ￥）が産生しＳＤＳ
   −ポリアクリルアミド電気泳動法による分子量が３４０
   ００±１０００でありＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ
   −Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−
   Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎなる
   部分アミノ酸配列を有することを特徴とするプロテアー
   ゼ。 ２、バチルス・チューリンゲンシス（￥Ｂａｃｉｌｌｕ
   ｓ￥￥ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ￥）が産生しＳＤＳ
   −ポリアクリルアミド電気泳動法による分子量が３４０
   ００±１０００でありＰｒｏ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ
   −Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−
   Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎなる
   部分アミノ酸配列を有する蛋白質を用いて他の蛋白質を
   分解することを特徴とする蛋白質の分解方法。