JPH02189458A - 連続置換クロマトグラフィー方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は置換クロマトグラフィー及び置換クロマトグラ
フィー装置に関するものである。

クロマトグラフィーは化学物質の混合物から成分を分離
するのに用いる方法である。本方法は化合物の混合物の
化学又は物理特性が極めて同一に近いため、他の分離方
法では困難又は実行不可能な場合に特に有効である。種
々の成分が移動液により収着媒の床を移動する際、選択
的な減速度によりこれらが分離する。成分の分離は、収
着媒と移動液の相対的親和性、クロマトグラフィー装置
の長さ及び液体流速に依存する。

固定相によるサンプル分子の保持に関して４種の分離メ
カニズム又は方法が存在する。４種の基本クロマトグラ
フィー方法を順に述べると、すなわち液−液、液−面、
イオン交換及びサイズ排除クロマトグラフィーがある。

液−液又は分配クロマトグラフィーは液体固定相を含み
、その組成は液体移動相の組成と異なる。単一分子は、
分液漏斗を用いた液−液抽出の如（、移動及び固定液相
の間に分配する。該移動及び固定相の液体は、互いに混
合することができない。液−固又は吸着クロマトグラフ
ィーは、高い表面積粒子を有し、試料分子は、該粒子表
面にその親和性により保持される。イオン交換クロマト
グラフィーにおいて固定相は、例えばスルホネート（Ｓ
Ｏ３−）のような固定イオン基をＮａ”のような逆電荷
の対イオンに加えて含有する。対イオンは更に移動相内
に、例えばＮａＣｊ！のような触離塩の形態で存在する
のが一般的である。単一のイオン種、例えばＸ・はイオ
ン交換機構により保持される。

Ｘ　”　＋　−３０３−Ｎａ”　：　Ｎａ”　＋　−３
Ｏ３−Ｘ　”また、サイズ排除若しくはゲルパーミェー
ションクロマトグラフィーにおいて、カラム充填物はあ
る一定の大きさのボアを有する多孔性物質である。極め
て大きい分子は、全ボアから排除され、−カルさい分子
はほとんど全てのボアに入り込む。

従って、極めて大きい分子は、カラムを速く移動し、小
さい分子は充填物に保持される。一般に、サイズ排除ク
ロマトグラフィーにおける分離は、分子サイズにより完
全に確立される。

更に２つのクロマトグラフィー方法、すなわち結合相ク
ロマトグラフィー及びイオン対クロマトグラフィーが液
−液クロマトグラフィーの変形から得られる。結合相ク
ロマトグラフィーは、液−液クロマトグラフィーにおい
て使用したメカニカルな保持液相の代わりに、粒子に化
学的に結合する有機固定相を用いる。イオン対クロマト
グラフィーは液−液クロマトグラフィー又は結合相クロ
マトグラフィー及びイオン交換クロマトグラフィーの結
合として考えることができる。イオン対クロマトグラフ
ィーはメカニカル保持液体固定相又は結合相のいずれか
を用いて実施することができる。

４種の基本的なりロフトグラフィー法のうち、少なくと
も２種の全く異なる別個の分離原理が存在する。これら
は、置換クロマトグラフィー及び分析（ａｎａｌｙｔｉ
ｃａｌ）若しくは、溶離クロマトグラフィーと称される
ものである。置換クロマトグラフィーにおいては、少な
くとも２個の種Ｂ及びＣが；固定相に対してＢ又はＣの
いずれかより小さい親和性を有する第３の種Ａをもとか
ら担持している固定相又は樹脂上に収着されている。代
表的には該レジンの全キャパシティの５０パーセントま
で種Ｂ及びＣを担持する。次いで種りから成る置換試薬
をレジンに通す。種りはレジンに対する親和性がＢ又は
Ｃのいずれかより大きく、またＢおよびＣの混合物を（
Ｉ）レジンから置換させ、そしてレジンから溶出する同
濃度のバンド中にヘッドトウティル方法（ｈｅａｄ−ｔ
ｏ−ｔａｉｌ）で追い出させる。

分析又は溶離クロマトグラフィーにおいては、分離すべ
き混合物を最初、固定相上に吸着する。

次いで移動液相中に含まれる溶離若しくは溶離剤をレジ
ンに通す。該溶離剤もまた、混合物の成分に対する親和
性を有し、これはレジンに対する該成分の親和性とは異
なるものである。溶離剤は固定レジン相に対してはいか
なる親和性をも要しない。分離は、混合物中の成分の固
定相及び移動溶離相の競争（ｃｏｍｐｅｔｉ　Ｌｉｏｎ
）により達成される。該成分は、系の効率、選択性分解
により決せられる程度にまでレジ上で分離されるシンメ
トリカルなガウス形ピーク（Ｇａｕｓｓｉａｎ−ｓｈａ
ｐｅｄ）に分解される。

該レジンは、分解前の混合物を全レジンキリバシティの
１〜５％より多くは担持することはできず、ピークシン
メトリ−は反対方向を呈する。

分析若しくは、溶離クロマトグラフィーは、少ない量の
混合物を、極めて高い分離又は分解程度まで分離するの
に用いられる。従って、小さいスケールの分析適用にお
いて、最も適しておりかつ極めて広く用いられる。多量
の物質の分離に容易に用いる方法ではない。

一方、置換クロマトグラフィーは、溶離クロマトグラフ
ィーにより行うことのできる１０から５０倍の物質の量
を分離するのに適する方法である。成分の分解は多少、
劣るけれども、置換クロマトグラフィーは大きいスケー
ルの工業的クロマトグラフィー分離に適する方法である
。

通常的な実施においては、クロマトグー７フイーはバッ
チプロセスである。一定容量の分離すべき混合物をクロ
マトグラフィー〇カラム（すなわちレジンで充填された
単一の円筒状の管）のフィード端に導入し、成分をカラ
ム長に沿って個々特有のバンドに分解する。次いで分離
した成分は、異なる時間で？登山するので、カラム出口
で回収する。

溶離クロマトグラフィーは、多様なタイプの混合物に適
用でき、また高い分解性能を有し、更に非常に用途が広
いが、処理能力が不十分で連続操作ができないので、大
きいスケールの工業的操作に適する分離方法ではない。

クロマトグラフィー装置の能力を高める研究がなされた
。１つは溶離及び傾斜溶離クロマトグラフィーに基づく
連続環状クロマトグラフィー（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　
ａｎｎｕｌａｒ　ｃｈｒｏ−ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）　
（ＣＡＣ）システムである。

連続クロマトグラフィー分離は、ＣＡＣシステムにより
達成することができる。ＣＡＣ装置は、２個の同軸柱の
間のスペースに充填された吸着剤粒子を有する環状粒子
床から成る。カラムアセンブリがその軸のまわりをゆっ
くり回転する間、溶離溶液及びフィード混合物を環状床
に連続的に供給する。溶離剤は全周に渡って均一に供給
されるが、フィード混合物は、スペース内で固定されて
いる円周回出の固定ポイントのみに導入される。時間の
経過に従い、溶離剤粘度、回転速度及び成分の分配係数
に依存して変わるスロープを伴う、らせん状の成分バン
ドが発達し、フィードポイントから分離される。かかる
バンドはスペース中に固定され、環状床の反対端での別
の固定出口ポイントで排出する。条件が一定である限り
、フィードポイントからの各成分バンドの角ポジション
は一定である。粒子床の化学的調整を変えることなく、
溶離剤により粒子床から、フィード混合物を移動させる
ので、ＣＡＣシステムにおいては再生が必要とされない
。従ってＣＡＣシステムは連続定常状態方法である。

ＣＡＣシステムにおいては、従来のクロマトグラフィー
分離の長さ及び時間の整合的作用（コーデイネート）特
性が、回転床の長さ及び角整合的作用（コーデイネート
）特性に代替した。この点に関し２、従来の溶離及び傾
斜溶離クロマトグラフィー及び溶離及び傾斜溶離ＣＡＣ
は各々ほとんど類似している。従って、溶離及び傾斜溶
離ＣＡＣは従来のバッチ溶離及びバッチ傾斜溶離クロマ
トグラフィーにより行うことのできる連続的なあらゆる
分離を実施することができなければならない。

レジンキャパシティのわずかな一部のみ、典型的には約
５％より少量が、溶離及び傾斜溶離ＣＡＣの双方におい
て分離されるべきクロマトグラフィー種を担持すること
ができるので、それにもかかわらず、ＣＡＣ原理は、レ
ジンの単位容量当りの比較的少量のクロマトグラフィー
種を分離することができる点においてのみ重大な欠陥を
有する。

本発明は、レジンの単位容量当り多量のクロマトグラフ
ィー種を分離する連続クロマトグラフィー方法を提供す
るものである。更に特に本発明の方法は、フィード混合
物流、置換試薬流、バリア試薬流を粒子床の一端近くに
同時に導入する。−般に、原流れは粒子床の頂端近くに
導入される。

該粒子床はレジンを含有する。フィード流は分離される
べき少なくとも２つの種Ｂ及びＣのクロマトグラフィー
混合物を含む。Ｃはレジンに対してＢより大きい親和性
を有する。置換剤流はクロマトグラフィー種りを含み、
Ｄはレジンに対してＣより大きい親和性を有する。バリ
ア流は、レジンに対してＢより小さい親和性を有するク
ロマトグラフィー種Ａを含む。゛流れ°゛は粒子床に関
して移動し、従ってほとんど全てのレジンが連続して（
ｉ）フィード混合物流、（ｉｉ）置換試薬流及び（ｉｉ
ｉ）バリア試薬流と接触する。ほぼ純粋なりとほぼ純粋
なＣが分離して収集される。全レジンキャパシティの５
０％まで分離されるべきクロマトグラフィー混合物を担
持できる。

更に、本発明は、上記方法に基づき、少なくとも２つの
クロマトグラフィー種を相互に分離する装置をも提供す
るものである。該装置はレジンを含有する粒子床を含む
ものである。装置はフィード混合物流、置換試薬流及び
バリア試薬流を粒子床の一端近くに同時に導入すること
を提供するものである。更に、該“流れ”は粒子床に関
して移動し、従ってほとんど全てのレジンが連続して（
ｉ）フィード混合物流、（ｉｉ）置換試薬流及び（ｊｉ
　）バリア試薬流と接触することを提供するものである
。

本発明は（ａ）連続置換クロマトグラフィー法及び（ｂ
）それに用いる装置に関するものである。

図面を参照にして、第１〜３図に示す如く、本発明はＣ
ＤＣ方法に使用する連続置換クロマトグラフィー（ＣＤ
Ｃ）装置ｌＯを提供するものである。該装置１０は固定
入口分配マニホルド１２、回転環状粒子床１４、複数の
固定コレクター容器１６を備えるや固定入口分配装置１
２は、複数の入口管１８〜２８、及びこれに対応する複
数の分配管３０〜４０を含む。特に固定入口分配装置１
２はフィード混合物入口管１８、置換試薬入口管２０、
再生試薬入口管２２、バリア試薬入口管２４、パージ入
口管２６、不活性ガス加圧入口管２８と対応分配管、す
なわちフィード混合物分配管３０、置換試薬分配管３２
、再生試薬分配管３４、バリア試薬分配管３６、パージ
分配管３８、及び不活性ガス加圧分配管４０を各々備え
る。フィード混合物分配管３０、置換試薬分配管３２、
再生試薬分配管３４、バリア試薬分配管３６の各々の出
口端４２．４４゜４６及び４８は、各分配管３０．３２
．３４及び３６の断面エリアよりも広いエリアを有する
セクターに渡り各々の混合物又は試薬を分配するのに適
合させる装置５０．５２．５４及び５６に各々終結する
のが好ましい。

第２図に示す如シ各分配装置５０．５２．５４及び５６
は細長いスロット５８中で終結する。代わりに１つ又は
それ以上の分配装置５０．５２．５４及び５６は一連の
ノズル（図示せず）に終結してもよい。

固定入口分配マニホルド１２は回転環状粒子床１４とＯ
リングで密閉接触５９されている。０リングシール５９
は、環状粒子床１４に対して入口分配マニホルド１２の
軸方向の回転を可能にする。回転環状粒子床１４は円筒
状内部コア６０及び共軸の円筒状外殻６２により画され
る。内部コア６０及び外殻６２の間にはさまれているも
のは、レジン６４である。内部コア６０と外殻６２の間
の環状厚みは外殻６２の半径とほぼ同様の大きさである
。例えば環状厚みは、レジン６４が外殻６２の断面エリ
アの約９５％まで占有するの如くである。

クロマトグラフィー不活性保持層６６も、回転環状粒子
床１４の頂部６８とレジン６４の上部端７０の間のスペ
ース■（第３図参照）内のコア６０及び殻６２の間には
さまれている。各分配装置５０．５２．５４及び５６の
少なくとも一部は、該不活性保持層６６内に入り込んで
いる。クロマトグラフィー不活性保持層６６の深さは、
分配装置５０．５２．５４及び５６を通過するフィード
混合物又は様々な試薬の導入によりレジン６４のあらゆ
る実質上の破壊を回避するのに十分なものである。代表
的なりロフトグラフィー不活性保持層６６はガラスピー
ズ７２より成る。好ましくは、ガラスピース７２は、分
配装置５０．５２．５４及び５６が、いかなる重大な障
害をも生じることなく、ガラスピーズ７２を水平に通過
することができるような十分小さい粒子サイズを有する
。

内部コア６０の頂部６１は、内部コア６０の外径とほぼ
同様の直径を有する上向き指示円錐形状被覆板６３でキ
ャップされる。粒子床１４の底部７４は、複数の出口管
７６内に終結している。環状粒子床１４は、モーター８
０に接着する一端７９と被覆板６３の底面８２に接着す
る他端８１を有する同軸シャフト７８により回転する。

本発明の特徴を具体化した方法において、フィード混合
物流、置換試薬流、再生試薬流、バリア試薬流及びパー
ジ試薬流を、固定入口分配マニホルド１２の各々フィー
ド混合物入口管１８、置換試薬入口管２０、再生試薬入
口管２２、バリア試薬入口管２４及びパージ試薬入口管
２６を通って装置１０に同時に供給する。フィード混合
物流はクロマトグラフィー種Ｂ及びＣを含み、そのうち
Ｃはレジン６４に対してＢより大きい親和性を有する。

置換試薬流はクロマトグラフィー種りを含み、Ｄはレジ
ン６４に対してＣより大きい親和性を有する。置換試薬
流は、レジン６４からＤを置換する能力を有し、その際
、他の点でレジン６４にほとんど影響を及ぼすことはな
い。本発明の一面において、再生試薬流は、例えばレジ
ン６４に対するＤの親和性より、Ｄに対し大きい親和性
を有するキレート剤成分を含むことができる。本発明の
他の面においては、再生試薬流はレジン６４からＤを移
動する能力のあるｐＨを有する。バリア試薬流は、レジ
ン６４に対してＢより小さい親和性を有するクロマトグ
ラフィー種Ａを含む。

フィード混合物流、置換試薬流、再生試薬流及びバリア
試薬流は、各々フィード分配装置５０、置換分配装置５
２、再生分配装置５４及びバリア分配装置５６を通って
同時に入口分配装置マニホルド１２を出る。これらの流
れは、クロマトグラフィー不活性保持層６６に別々に入
り、下へ向かってレジン６４中に移る。パージ流は、パ
ージ流分配管３８を通り入口分配装置マニホルド１２を
出て、同軸形状被覆板６３の上部面８６の中央上に突き
当たる。パージ流は、全ての方向にほぼ等しく被覆板６
３の上部面８６上に流れ落ち、次いでフィード流又は、
１つの試薬流のいずれかによっても占有されていない位
置でのクロマトグラフィー不活性保持層６６に入る。

パージ流は保持ＪＷ６６を通過し、レジン６４に入る際
、フィード流及び各試薬流から完全に区別されている。

本発明のＣＤＣ方法の定常状態中のあらゆる障害を回避
するために、全ての流れをほぼ同じ流速（体積／時間／
エリア）で固定入口分配装置マニホルト１２に導入する
のが好ましい。

不活性加圧ガスを、ＣＤＣ方法を促進するのに用いる場
合には、加圧ガスは加圧ガス入口管２８を介して固定入
口分配装置１２に入り、円錐形状被覆板６３の上面８６
上に位置する加圧ガス分配管４０を介して出る。

最初に、レジン６４に、クロマトグラフィー種Ａを担持
する。本発明の一面においては、クロマトグラフィー種
Ａを、レジン６４を粒子床１４に位置させる前に、該レ
ジン６４上に担持する。しかしながら、本発明の好まし
い−・面においては、クロマトグラフィー種Ａは、最初
にバリア試薬流のみがバリア分配装置５６を通り次いで
レジンの結合キャパシティのほぼ１００％がクロマトグ
ラフィー種Ａにより占有されるまでレジン６４を通るこ
とによりレジン６４上に担持される。

第１図に示す如く、粒子床１４は逆時計用りに回転する
。従って、クロマトグラフィー種Ａは、レジン６４から
フィード分配装置５０を通過するフィード混合物流中の
クロマトグラフィー種Ｒ及びＣに、置換される。フィー
ド混合物流を、−Ｓ的に少なくとも約５°　（又は粒子
床１４の水平断面エリアの少なくとも約１％）に広がる
セクターに渡り導入する。更に代表的には、フィード混
合物流を、約１０°から約２０°のセクター（又は粒子
床１４の水平断面エリアの約３〜約６％）にわたり導入
する。

−ｉ的に、全部のレジンキャパシティの約５０％までク
ロマトグラフィー種Ｂ及びＣにより占有されるように十
分なフィード混合物流をレジン６４内に導入する。代表
的にはレジン６４の全部のレジンキャパシティの少なく
とも約５％がクロマトグラフィー種Ｂ及びＣにより占有
される。分離することのできるクロマトグラフィー種の
量はレジン６４の全結合キャパシティに直接比例するの
で、分離されるべきクロマトグラフィー種は置換クロマ
トグラフィー法則に矛盾することなくレジンの結合キャ
パシティの大部分を占有するのが好ましい。

例えば、分離されるべきクロマトグラフィー種はレジン
の結合キャパシティの少なくとも約４０％、より好まし
くは少なくとも約４５％を占有する。

本発明の好ましい一面においては、粒子床１４は、フィ
ード分配装置５０を介してレジン６４内にフィード流の
みを導入して約３６０゛回転するのが好ましい。フィー
ド混合物により置換されたクロマトグラフィー種のほと
んど全てを、例えば置換されたＡを移動するために、第
３図に示す如く、パージ流分配管３８から出るパージ流
８５の一部８４を、フィード混合物流８７と置換試薬流
８９０間にレジン６４に導入する。置換分配装置５２を
介してレジン６４内に導入される置換試薬流８９には、
レジン６４に対してクロマトグラフィー種Ｂ及びＣより
大きい親和性を有するクロマトグラフィー種りを含有す
る。従って、クロマトグラフィー種りは、レジン６４か
らクロマトグラフィー種Ｂ及びＣを置換する。種Ｂを種
Ｃから、ほぼ完全に分離するために、置換種りを、種Ｃ
から種Ｂを分離するのに必要な少なくとも最小臨界バッ
チカラム長（すなわち、クロマトグラフィーでの語に置
き換えると、“バンド長”）と同様の長さの水平長を有
するセクターにわたり導入するのが好ましい。バンド長
は置換剤をバッチカラムに導入する前に、フィード混合
物により最初占有されるバッチカラムの長さである。代
表的には、置換種りを少なくとも約１２０°のセクター
（又は粒子床１４の水平断面エリアの少なくとも約３３
％）にわたり導入する。好ましくは、Ｄを少なくとも約
１８０°　（又は粒子床１４の水平断面エリアの少なく
とも約５０％）におよぶセクターにわたり導入する。

レジン６４に対するクロマトグラフィー親和性が異なる
ため、レジン６４を通り抜ける際、クロマトグラフィー
種Ｃはクロマトグラフィー種Ｂと置換し、ほぼ純粋なり
及びＣを各々含む個々特有の近接するバンド８８及び９
０を形成する。クロマトグラフィー種Ｂ及びＣは、各々
の出口管７６をほとんど分離して通過し、別の固定コレ
クター容器１６に、回転環状粒子床１４の低部７４でほ
とんど分離して収集される。置換剤クロマトグラフィー
種りを、再生分配装置５４から出る再生流９１によりレ
ジン６４から移動する。再生流を通常少なくとも約３５
°のセクター（又は、少なくとも粒子床１４の水平断面
工リアの約１０％）に渡って粒子床１４に導入する。更
に代表的には、再生流を約３５°〜約１００″′のセク
ター（又は粒子床１４の水平断面エリアの約１０〜約３
０％）に渡って導入する。

再生流９１は、パージ流８５の他の一部９３によりレジ
ン６４から、次々に除去される。次いでクロマトグラフ
ィーバリア種Ａを、バリア分配装置５６から出るバリア
試薬流９５によりレジン６４上に再担持する。バリア流
もまた少なくとも約３５°のセクター（粒子床の水平断
面エリアの少なくとも約１０％）に渡って粒子床に導入
するのが一般的である。しかしながら、バリア流は約３
５°〜約１００°のセクター（又は粒子床の水平断面エ
リアの約１０〜約３０％）に渡って導入するのが代表的
である。結合していないあらゆるクロマトグラフィー種
はパージ流８５の他の支流９７によりレジン６４から除
去される。

あらゆる過剰のクロマトグラフィー種Ａを除去した後は
、粒子床１４は、サイクルの始めの時とほぼ同様の状態
となる。必要なだけ何回でもサイクルを繰り返すことが
でき、従ってプロセスは連続する。代表的にはサイクル
を少なくとも２回は繰り返す。

上記説明及び第３図から明らかなように、フィード混合
物流及び各試薬流は、パージ流８５により隣の試薬流又
はフィード混合物流から分離されているのが好ましい。

しかしながら、種々の隣の流れがパージ流８５により分
離されていなくとも満足した結果が得られることは同様
である。

本発明の一面においては、バリア及び再生試薬流は、同
様の様式で作用し、第４図に示す如く単一の試薬流に合
流されることが可能であり、以下に実施例において説明
する。

フィード混合物流、置換試薬流、再生試薬流、バリア試
薬流及びパージ流の各部分のセクターはそれらの濃度、
流速及び成分によって変化させることが可能である。し
かし、全ての場合において、置換剤流セクターは、サイ
クル当り、多量のクロマトグラフィー種が分離できるよ
うにできるだけ大きいのが好ましい。

バッチ方法により実施することのできるあらゆる置換ク
ロマトグラフィー法は本発明のＣＤＣ方法により連続的
に実施することができる。例示的なクロマトグラフィー
方法としては、液−液、液−固、イオン交換、サイズ排
除、結合相及びイオン対クロマトグラフィー法がある。

バッチ置換クロマトグラフィー法により分離することの
できるあらゆる有機又は無機化合物は、本発明のＣＤＣ
方法により連続的に分離することができる。本明細書中
において用いる“有機化合物パの語は少なくとも１個の
炭素原子を含むあらゆる化合物を、また“無機化合物”
の語は炭素原子を全（含まないあらゆる化合物を意味す
る。本発明のＣＤＣ方法により連続的に分離することの
できる例示的な有機化合物には、薬品、タンパク質、抗
体、酸素及び有機金属化合物を含むが、これに限定され
るものではない。本発明のＣＤＣ方法により連続的に分
離することのできる例示的な無機化合物には遷移金属、
ランタニド、アクチニド及び鉱物を含むが、これに限定
されるものではない。

従って、本発明はレジン６４の単位容量あたり多量のク
ロマトグラフィー種を連続的に分離することのできるも
のである。

尖泡尉 互！　　希土類元素の分離を次の実施例で説明する。

Ｕ　　　ネオジム（Ｎｄ）とプラセオジム（Ｐｒ）の各
々を約１５０ｇ／／！含む原液を炭酸ネオジム（約９６
．０％Ｎｄｚ（ＣＯｓ）ｓ）と酸化プラセオジム（最低
約９６．０％Ｐｒ、Ｏ□）を用いて調整する。

炭酸ネオジム（約２４８．７　ｇ）を、約７０％の硝酸
を約６１ｒｓｌ含有する約３００１１１１の水に溶解す
る。

沸騰中に物質の損失を回避するため、炭酸物の増加添加
を行う。酸化プラセオジム（約１８７．１ｇ）を、約１
００ｍｆの７０％の熱硝酸中に溶解する。熱酸への酸化
物の増加添加は、酸化状態がＰｒ（４”　）からＰｒ　
（３＋　）に減するように約３０％の過酸化水素をしば
しば滴下することにより行う。完全に溶解した次に、Ｐ
ｒ混合物を粘稠な状態まで沸騰させて過剰の硝酸を排出
し、水の慎重な添加により再希釈する。次いで溶液を、
水酸化物形成を回避するように約０．５　ｍｌの約７０
％の硝酸を添加して全体積をおよそ４５０ｍ１にする。

室温で冷却した後２種の溶液を混合し、最終体積が約１
０１００Ｏ！となるように希釈する。置換クロマトグラ
フィー方法用のＮｄ／Ｐｒ原料溶液を、原液を希釈する
ことにより調製する。

使用する置換試薬は、アンモニウムイオンの形態のＮ−
（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミントリ酢酸（
ＨＥＤＴＡ）水溶液（約５　ｇ／ｌである。ＨＥＤＴＡ
を水に溶解し、ｐＨを水溶性の水酸化アンモニウムを用
いて約７．５に調整する。

環状クロマトグラフィー方法に用いるレジンはスルホン
化ポリスチレン−ジビニルベンゼンカチオン交換レジン
、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）　５０Ｗ　−Ｘ８ブラン
ド（約４４〜７４ミクロン）である。

使用する他の全ての試薬は分析品位を有する。

全ての溶液は脱イオン水を用いて調製し、更にバルンス
テ゛ンド（Ｂａｒｎｓ　Ｌｅａｄ）　ＮＡＮＯピュアフ
゛ランドの水清浄機器を用いて更に精製する。

■　　直径２７．９ｃｍ、全長６０ｃｍの連続環状クロ
マトグラフィーで１２．７ｍｍ環幅のものを、本例で用
いる。

原料及び溶剤の流速は、約１％以内に測定ポンプにより
調節する。

ペルキン−エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）モデ
ル３５４ブランドＵＶ／Ｖｉｓ分光光度計をＮｄ（３＋
）　（５７８ｎｍ）及びＰｒ　（３＋）　（４４４ｎｍ
）のアンモニウムＨＥＤＴＡ溶液の濃度を光学的に測定
するのに用いる。検出器のミリボルト信号は、グラフィ
カルデイスプレィ及びデジタルデータ記憶用のＩＢＭ−
＾Ｔブランドのパーソナルコンピューターに接続された
Ａ／Ｄ変換ボード（データトランスレーションモデル２
８０１）によりデジタル信号に変換される。

Ｎｄ及びＰｒ濃度もペルキン−エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ
−Ｅｌｍｅｒ）モデル２３８０ブランド原子吸収（ＡＡ
）分光光度計を用いて（Ｎｄ　（４９２，４ｎｍ）及び
Ｐｒ　（４９５，Ｉｎｍ）　）、またアプライド　リサ
ーチ　ラボラトリーズ（八ｐｐｌｉｄ。

Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）モデル
３５２０ブランドのシイクエンシャル　インダクティプ
リ　カプルドプラズマ原子発光スペクトル装置　（Ｓｅ
ｑｕｅｎｔｉａｌＩｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ　Ｃｏｕｐｌ
ｅｄ　Ｐｌａｓｍａ　ａｔｏｍｉｃ　Ｅｍｉｓｓｉｏｎ
Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ　（Ｉ　ＣＰ−＾ＥＳ））を
用いて（Ｎｄ（４０４，０７９ｎｍ）及びＰｒ　（４４
０，８７８ｎｍ）　）測定する。

Ｒｔｌ　　　Ｎｄ／Ｐｒは、視覚的に見やす＜　（Ｎｄ
（３＋）は紫、Ｐｒ　（３＋）は緑）近接したランタニ
ドの分離を表わすのでＮｄ／Ｐｒ二成分ランタニド混合
物を本概念を示すために選択する。

スルホン化したポリスチレン−ジビニルベンゼンカチオ
ン交換レジンを、固定レジン層として使用する。アンモ
ニウムイオン形態のＨＢＤＴＡの水溶液（約５ｇ／β）
でｐＨ約７．５のものを置換剤りとして用い、水素イオ
ン（Ｈ”″）をバリアイオン八として用いる。

環状クロマトグラフを深さ約２２．８ｃｍにレジンとと
もに設置し、不活性ガラスピーズ（約０．１８ｍｍ直径
）の層（約１０ｃｍ）でトッピングする。固定人口分配
マニホルド１２、配設系（装置）は、クロマトグラフの
頂部の周囲の固定された位置に原料置換剤、バリア及び
充填水の導入が可能となるように形成される。

各分配管は、ガラスピーズ層の表面下を通るがレジンの
頂部を通る程度まで広がらない異なる一連のノズルに終
結する。粒子床は回転するので、ガラスピーズは、有効
レジンの表面を妨害しないように固定ノズルのまわりを
流動する。しかしガラスピーズはクロマトグラフの頂部
での異なる試薬流との混合、及び横方向上昇拡散を回避
するために提供される。このことは、試薬を望ましい決
まった領域に各々ばらばらにクロマトグラフの頂部のま
わりの異なるセクターに導入することを可能にする。

粒子床はノズルのすぐ下の域からの各々別の一連の分配
ノズルから出る試薬を除いて全てを排除するような方法
で操作される。異なる試薬の各セクターの幅は各々一連
の分配ノズルの幅の変化により変わる。連続的なフィー
ド、置換剤、バリア及びクロマトグラフの周囲のパージ
の添加も変化する。

第４図に示す如く、下記側中、Ｎｄ／Ｐｒ原料１００を
固定位置で（０度）１５度（ｄｅｇｒｅｅ）セクター１
０１に導入する。更にＩＩＥＤＴＡ置換剤１０３を含む
セクター１０２　（約１９５度）により処理される。（
注意）若干のスペース１０４は担持された原料により置
換された酸が、アンモニウムＨＥＤＴＢ置換剤セクター
１０２に介入するのを回避するために原料及び置換剤ノ
ズル間に存在する。）約０．ＩＮの硝酸１０９および脱
イオン水１１０を各々含むバリアセクター１０６とパー
ジセクター１０８は円周の残部を構成し、これらのセク
ター１０６及び１０８の各々は約７５度の幅を有する。

粒子床内のレジン６４の全てはまずＨｏの形に転化し、
次いで水でパージされて操作を開始する前に過剰の酸が
取り除かれる。このことは、クロマトグラフの上方の頭
隙中の中心に置かれたパージ分配管３８を通る原料試薬
により首尾よく達成でき、またクロマトグラフの全部分
に、放射状に供給される。これは同時に使用しない、あ
らゆる分配ノズルの下のセクターを含む。脱イオン水を
、次いで分離部分の残余に対してパージ分配管３８に注
ぐ。

クロマトグラフが２５．５°／時で回転するにつれて、
分離は最初フィード混合物１００を粒子床に約７．２　
　ｍｊ７／分の流速で注ぐことにより開始する。

次いで置換試薬１０３（流速約１３０ｍβ／分）、バリ
ア試薬１０９（流速的３７　ｍ１７分）及び充填水１１
０を各々別の分配ノズルを介して、同様のフラックス速
度で添加する。所定の実験における特定の条件に応じて
様々な流速に調節した。−旦好適な定常状８１作条件を
確立すると分離は連続的に無制限に持続する。

連続的な分離の推移をモニターすることができ、得られ
るクロマトグラムは、クロマトグラフの底部での各々の
出口管７６に滑り落ちてくる流れを割り当て、該出口管
は、クロマトグラフの周囲を３６０度回転する際の溶出
液を分析することにより記録される。本方法における連
続インライン検出及び観察（ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）は
首尾よく達成される。

連続ＣＤＣ分離は室温で実施される。

結果 上記した如く、１５度フィードセクター又は域１０１、
次の１９５度アンモニウムＨＥＤＴ八置へ剤セクター１
０２及び、各々酸再生１０９及び水バージ１１０を含む
２個の７５度セクター１０６及び１０８をＮｄ／Ｐｒ分
離に用いる。

最初は水素イオン形態のレジン全体と、パージ分配管３
８に流れる脱イオン水と共に、Ｎｄ／Ｐｒフィードを、
各金属的１０ｇ／ｊ！の濃度で、回転粒子床に適用する
。置換試薬１０３が存在しないので、３＋ランタニドは
レジンに強く付着し、回転するレジンの頂部で幅の狭い
バンド１１２に蓄積する。

次いで濃度が約５ｇ／ｆＳｐＨが約７．５のアンモニウ
ムＨＥＤＴＡ置換剤セクター１０２で処理し１、これは
結果としてフィード混合物が入り込む粒子床内の置換剤
の固定域となる。Ｎｄ１１４及びＰｒ１１６の各々の成
分バンドの分離及び展開がかかる域で生じる。

粒子床の長さは、物質がクロマトグラフを出る前に展開
するための完全な分離を可能にすることに適合させる。

かかる長さは、レジンに適用させるフィード１００の濃
度及び流速、アンモニウムＨ８ＤＴＡ置換剤１０３の濃
度及び流速、そして試薬セクター１０２及び１０６の広
さにより決定される。

−度、隣接したバンド１１４及び１１６に分離し、定常
状態条件が達せられると、レジン深を更に深くすること
は置換実験における分離においてそれ以上の改良をもた
らすものではない。このことは置換クロマトグラフィー
において“アイソタクテッグ点と称される。

酸再生セクター（約０．ＩＮ硝酸）は、アンモニウムＨ
ｆ！ＯＡ置換剤セクター１０２の後に、得られたアンモ
ニウムイオン形のレジンを最初の水素イオン形に戻すた
め添加するのに必要とされる。再生セクター１０６から
の過剰の酸を、最終的な脱イオン水パージ１１０により
フィードセクター１０１にもどす前にレジンから除去す
る。このことは、レジン６４を最初の条件に回復させ、
連続操作を可能とする。

本例において得られるクロマトグラムを第５図に示す。

曲線は、置換クロマトグラフ挙動を示す。

分離成分は、ほぼ同様の濃度及び域の近隣したバンドと
して現れた。従って置換クロマトグラフィーは本発明の
方法及び装置により連続的に達成される。

本発明を、若干の好ましい面に関してかなり詳細に説明
したが、他の面も有しているのは、もちろんである。例
えば、フィード混合物流は、分離されるべき２個以上の
クロマトグラフィー種を含むことができる。更に入口分
配マニホルドは、粒子床がほとんど静止している間に回
転することができ、該回転は時計回りでも反時計回りで
もよい。

更には、粒子床は環状である必要はない。例えば粒子床
は線状でもよく、種々の入口管は線状粒子床の頂部に渡
り連続的に移動することができる。

また、環状スロットを有する代わりに、分配装置は、く
さび形の隙間を有していてもよい。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の連続クロマトグラフィー装置の一部
切り欠いた斜視図、 第２図は、第１図の装置の頂部マニホルドの底面図、 第３図は、第１図の３−３線に沿った、種々の試薬セク
ターの分布を示す断面図、 第４図は、実施例において用いた本発明の連続クロマト
グラフィー装置の、第２図と同様の断面図、 第５図は、実施例の連続置換クロマトグラフィー分離実
験のクロマトグラムを示す。 １０・・・連続置換クロマトグラフィー装置１２・・・
固定人口分配装置 １４・・・環状粒子床 １６・・・固定コレクター容器 １８〜２８・・・入口管 ３０〜４０・・・分配管 ４２、４４．４６．４８・・・出口端 ５０、５２．５４．５６・・・分配装置５８・・・スロ
ット ５９・・・０リングシール ６０・・・コア ６２・・・外殻 ６３・・・被覆板 ６４・・・レジン ６６・・・保持層 ７２・・・ガラスピーズ ７４・・・低部 ７６・・・出口端 ７８・・・シャフト ８０・・・モーター ８５・・・パージ流 ８０、９０・・・バンド ９１・・・再生流 ９５・・・バリア試薬流 １００・・・フィード １０１、１０２．１０６・・・セクター１１０・・・脱
イオン水バージ １１２・・・バンド １１４・・・Ｎｄバンド １１６・・・Ｐｖバンド ＦＩＧ、　１ （７／６ノ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、少なくとも２つのクロマトグラフィー種を相互に分
   離するにあたり、 （ａ）フィード混合物流、置換試薬流及びバリア試薬流
   を粒子床の最初の端近くに同時に導入し、該粒子床はレ
   ジンを含有し、該フィード混合物流はクロマトグラフィ
   ー種Ｂ及びＣを含み、当該Ｃは、レジンに対してＢより
   大きい親和性を有し、該置換剤流は、クロマトグラフィ
   ー種Ｄを含み、当該Ｄは、レジンに対してＣより大きい
   親和性を有し、該バリア流はクロマトグラフィー種Ａを
   含み、当該Ａは、レジンに対して、Ｂより小さい親和性
   を有し、 （ｂ）粒子床に関して該流れは移動し、従って、ほとん
   ど全てのレジンが連続的に（ｉ）フィード混合物流、（
   ｉｉ）置換試薬流及び（ｉｉｉ）バリア試薬流と接触し
   、 （ｃ）ほぼ純粋なＢを集め、そして、 （ｄ）ほぼ純粋なＣを集める ことを特徴とする方法。 ２、フィード混合物流は、レジンに対する親和性がＢよ
   り大きいがＤより小さい少なくとも１個の他のクロマト
   グラフィー種を更に含むことを特徴とする請求項１記載
   の方法。 ３、ほとんど全てのレジンが少なくとも２度（ｉ）フィ
   ード混合物流、（ｉｉ）置換試薬流、及び（ｉｉｉ）バ
   リア試薬流と、連続して接触することを特徴とする請求
   項１記載の方法。 ４、工程Ａの前にＡをレジンに担持する工程を更に含む
   ことを特徴とする請求項１記載の方法。 ５、工程（ａ）は、パージ流を粒子床の最初の端近くに
   同時に導入する工程を含み、工程（ｂ）は、粒子床に関
   して該流れを移動し、従って、 （ I ）ほとんど全てのレジンが連続的に（ｉ）フィー
   ド混合物流、（ｉｉ）置換試薬流、（ｉｉｉ）バリア試
   薬流及び（ｉｖ）パージ流と接触し、（II）クロマトグ
   ラフィー種Ｂ及びＣは、レジン上に吸着し、次いでレジ
   ンから吸着したＢ及びＣをＤにより置換し、該レジンか
   らＤをＡにより置換し、次いでレジンに結合していない
   ほとんど全てのＡをパージ流により粒子床から除去する
   工程を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。 ６、工程（ｂ）は、粒子床に関して該流れを移動し、従
   って、（ I ）ほとんど全てのレジンが連続的に（ｉ）
   フィード混合物流、（ｉｉ）パージ流、（ｉｉｉ）置換
   試薬流、（ｉｖ）バリア試薬流及び（ｖ）パージ流と接
   触し、（II）クロマトグラフィー種Ｂ及びＣは、レジン
   上に吸着し、次いでレジンからフィード混合物流により
   置換されるほとんど全てのクロマトグラフィー種を、パ
   ージ流により粒子床から除去し、レジンから吸着したＢ
   及びＣをＤに置換し、該レジンからＤをＡにより置換し
   、次いでレジンに結合していないほとんど全てのＡをパ
   ージ流により粒子床から除去する工程を含むことを特徴
   とする請求項５記載の方法。 ７、流れは、ほとんど固定されて保持され、粒子床が回
   転することを特徴とする請求項１記載の方法。 ８、粒子床は、ほとんど固定されて保持され、流れが同
   時に回転することを特徴とする請求項１記載の方法。 ９、クロマトグラフィー種の各々は、イオン性クロマト
   グラフィー種であることを特徴とする請求項１記載の方
   法。 １０、クロマトグラフィー種の各々は、サイズクロマト
   グラフィー種であることを特徴とする請求項１記載の方
   法。 １１、クロマトグラフィー種の各々は、親和性クロマト
   グラフィー種であることを特徴とする請求項１記載の方
   法。 １２、クロマトグラフィー種の各々は、吸着クロマトグ
   ラフィー種であることを特徴とする請求項１記載の方法
   。 １３、工程（ａ）は、再生試薬流を粒子床の最初の端近
   くに同時に導入する工程を含み、工程（ｂ）は、粒子床
   に関して該流れを移動し、従って、 （ I ）ほとんど全てのレジンが連続的に（ｉ）フィー
   ド混合物流、（ｉｉ）置換試薬流、（ｉｉｉ）再生試薬
   流及び（ｉｖ）バリア試薬流と接触し、（II）クロマト
   グラフィー種Ｂ及びＣは、レジン上に吸着し、次いでレ
   ジンから吸着したＢ及びＣをＤに置換し、該レジンから
   Ｄを再生試薬流により置換し、次いでレジンがＡを担持
   する工程を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。 １４、工程（ａ）は、再生試薬流及びパージ流を粒子床
   の最初の端近くに同時に導入する工程を含み、工程（ｂ
   ）は、粒子床に関して該流れを移動し、従って、（ I
   ）ほとんど全てのレジンが連続的に（ｉ）フィード混合
   物流、（ｉｉ）置換試薬流、（ｉｉｉ）再生試薬流、（
   ｉｖ）バリア試薬流及び（ｖ）パージ流と接触し、（I
   I）クロマトグラフィー種Ｂ及びＣは、レジン上に吸着
   し、次いでレジンから吸着したＢ及びＣをＤにより置換
   し、該レジンからＤを再生試薬流により置換し、次いで
   該レジンがＡを担持し、次いでレジンに結合していない
   ほとんど全てのＡをパージ流により粒子床から除去する
   工程を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。 １５、工程（ｂ）は、粒子床に関して該流れを移動し、
   従って、ほとんど全てのレジンが連続的に （ｉ）フィード混合物流、（ｉｉ）パージ流、（ｉｉｉ
   ）置換試薬流、（ｉｖ）再生試薬流、（ｖ）バリア試薬
   流及び（ｖｉ）パージ流と接触し、従ってクロマトグラ
   フィー種Ｂ及びＣは、レジン上に吸着し、次いでレジン
   からフィード混合物流により置換されるほとんど全ての
   クロマトグラフィー種をパージ流によりレジン床から除
   去し、レジンから吸着したＢ及びＣをＤに置換し、該レ
   ジンからＤを再生試薬流により置換し、次いでレジンが
   Ａを担持し、次いでレジンに結合していないほとんど全
   てのＡをパージ流により粒子床から除去する工程を含む
   ことを特徴とする請求項１４記載の方法。 １６、方法には、液−液クロマトグラフィー法を含むこ
   とを特徴とする請求項１記載の方法。 １７、方法には、液−固クロマトグラフィー法を含むこ
   とを特徴とする請求項１記載の方法。 １８、方法には、イオン交換クロマトグラフィー法を含
   むことを特徴とする請求項１記載の方法。 １９、方法には、サイズ排除クロマトグラフィー法を含
   むことを特徴とする請求項１記載の方法。 ２０、方法には、結合相クロマトグラフィー法を含むこ
   とを特徴とする請求項１記載の方法。 ２１、方法には、イオン対クロマトグラフィー法を含む
   ことを特徴とする請求項１記載の方法。 ２２、Ｂ及びＣは、有機及び無機化合物から成る群より
   選ばれることを特徴とする請求項２２記載の方法。 ２３、有機化合物は、薬品、タンパク質、抗体、酸素及
   び有機金属化合物から成る群より選ばれることを特徴と
   する請求項２２記載の方法。 ２４、無機化合物は、遷移金属化合物であることを特徴
   とする請求項２２記載の方法。 ２５、無機化合物はランタニド及びアクチニド化合物で
   あることを特徴とする請求項２２記載の方法。 ２６、工程（ａ）は、少なくとも１つの流れを、粒子床
   の最初の端近くに、該粒子床の少なくとも約１％の水平
   断面エリアに広がゾーン（一帯）に渡って導入する工程
   を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。 ２７、フィード混合物流を、粒子床の約３〜約６％の水
   平断面エリアに広がるゾーン（一帯）に渡って導入する
   ことを特徴とする請求項２６記載の方法。 ２８、置換試薬流を、粒子床の少なくとも約３３％の水
   平断面エリアに広がるゾーン（一帯）に渡って導入する
   ことを特徴とする請求項２６記載の方法。 ２９、バリア試薬流を、粒子床の少なくとも約１０％の
   水平断面エリアに広がるゾーン（一帯）に渡って導入す
   ることを特徴とする請求項２６記載の方法。 ３０、フィード混合物流を、粒子床の最初の端近くに、
   該粒子床の約３〜約６％の水平断面エリアに広がるゾー
   ン（一帯）に渡って導入し、置換試薬流を、粒子床の最
   初の端近くに、該粒子床の少なくとも約５０％の水平断
   面エリアに広がるゾーン（一帯）に渡って導入し、バリ
   ア試薬流を、粒子床の最初の端近くに、該粒子床の約１
   ０〜約３０％の水平断面エリアに広がるゾーン（一帯）
   に渡って導入することを特徴とする請求項２６記載の方
   法。 ３１、ゾーン（帯）は、粒子床のアーチ形水平断面エリ
   アに広がることを特徴とする請求項２６記載の方法。 ３２、最初の端は、粒子床の頂部であることを特徴とす
   る請求項１記載の方法。 ３３、工程（ａ）は、Ｂ及びＣが、全レジンキャパシテ
   ィの少なくとも約５％を占有するようにレジンがフィー
   ド混合物流を担持する工程を含むことを特徴とする請求
   項１記載の方法。 ３４、工程（ａ）は、Ｂ及びＣが、全レジンキャパシテ
   ィの約５０％までを占有するようにレジンがフィード混
   合物流を担持する工程を含むことを特徴とする請求項１
   記載の方法。 ３５、工程（ａ）は、Ｂ及びＣが、全レジンキャパシテ
   ィの約５〜約５０％を占有するようにレジンがフィード
   混合物流を担持する工程を含むことを特徴とする請求項
   １記載の方法。 ３６、工程（ａ）は、全ての流れをほぼ同じ流速で導入
   することを特徴とする請求項１記載の方法。 ３７、工程（ａ）は、フィード混合物流をクロマトグラ
   フィー不活性保持層に導入し、次いでレジンを通る工程
   を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。 ３８、工程（ａ）は、置換試薬流をクロマトグラフィー
   不活性保持層に導入し、次いでレジンを通る工程を含む
   ことを特徴とする請求項１記載の方法。 ３９、工程（ａ）は、バリア試薬流をクロマトグラフィ
   ー不活性保持層に導入し、次いでレジンを通る工程を含
   むことを特徴とする請求項１記載の方法。 ４０、工程（ａ）は、フィード混合物流、置換試薬流及
   びバリア試薬流をクロマトグラフィー不活性保持層に導
   入し、次いでレジンを通る工程を含むことを特徴とする
   請求項１記載の方法。 ４１、パージ流は水であることを特徴とする請求項５記
   載の方法。 ４２、少なくとも２つのクロマトグラフィー種を相互に
   分離するにあたり、 （ａ）粒子床がクロマトグラフィー種Ａを担持し、該粒
   子床はレジンを含有し、 （ｂ）フィード混合物流、置換試薬流、バリア試薬流及
   びパージ流をクロマトグラフィー不活性保持層に同時に
   導入し、次いでレジンを通り、該フィード混合物流はク
   ロマトグラフィー種Ｂ及びＣを含み、当該Ｃはレジンに
   対してＢより大きい親和性を有し、該置換剤流はクロマ
   トグラフィー種Ｄを含み、当該Ｄはレジンに対してＣよ
   り大きい親和性を有し、該バリア試薬流はクロマトグラ
   フィー種Ａを含み、当該Ａはレジンに対してＢより小さ
   い親和性を有し、 （Ｃ）粒子床に関して該流れは移動し、従って、ほとん
   ど全てのレジンが連続的に少なくとも２度（ｉ）フィー
   ド混合物流、（ｉｉ）置換試薬流（ｉｉｉ）バリア試薬
   流及び（ｉｖ）パージ流と接触し、 （ｄ）ほぼ純粋なＢを集め、そして、 （ｅ）ほぼ純粋なＣを集める ことを特徴とする方法。 ４３、工程（ｂ）は、再生流をクロマトグラフィー不活
   性保持層に導入し、次いでレジンを通る工程を含み、工
   程（Ｃ）は、粒子床に関して該流れを移動し、従って、
   （ I ）ほとんど全てのレジンが連続的に（ｉ）フィー
   ド混合物流、 （ｉｉ）置換試薬流、（ｉｉｉ）再生試薬流、（ｉｖ）
   バリア試薬流及び（ｖ）パージ流と接触し、従ってクロ
   マトグラフィー種Ｂ及びＣは、レジン上に吸着し、次い
   でレジンから収着したＢ及びＣをＤにより置換し、該レ
   ジンからＤを再生試薬流により置換し、次いで該レジン
   がＡを担持し、次いでレジンに結合していないほとんど
   全てのＡをパージ流により粒子床から除去する工程を含
   むことを特徴とする請求項４２記載の方法。 ４４、工程（ｃ）は、粒子床に関して該流れを移動し、
   従って、（ I ）ほとんど全てのレジンが連続的に（ｉ
   ）フィード混合物流、（ｉｉ）パージ流、（ｉｉｉ）置
   換試薬流、（ｉｖ）バリア試薬流、（ｖ）再生流及び（
   ｖｉ）パージ流と接触し、従ってクロマトグラフィー種
   Ｂ及びＣは、レジン上に吸着し、レジンからフィード混
   合物流により置換されるほとんど全てのクロマトグラフ
   ィー種をパージ流により粒子床から除去し、次いでレジ
   ンから吸着したＢ及びＣをＤにより置換し、該レジンか
   らＤを再生試薬流により置換し、次いで該レジンがＡを
   担持し、次いでレジンに結合していないほとんど全ての
   Ａをパージ流により粒子床から除去する工程を含むこと
   を特徴とする請求項４３記載の方法。 ４５、少なくとも２つのクロマトグラフィー種を相互に
   分離するにあたり、 （ａ）レジンを含有する粒子床に、ほとんど全てのレジ
   ンがＡを担持するようにクロマトグラフィー種Ａを担持
   し、 （ｂ）レジンから少なくともＡの一部を、相互にほとん
   ど分離すべき少なくとも２種のクロマトグラフィー種混
   合物により置換し、該分離すべき各クロマトグラフィー
   種はレジンに対してＡより大きい親和性を有し、 （ｃ）クロマトグラフィー種Ａの流れ、分離すべきクロ
   マトグラフィー種の混合物の流れ、そしてクロマトグラ
   フィー種Ｄの流れをレジン床の頂部近くに同時に導入し
   、Ｄはレジンに対して分離すべき全クロマトグラフィー
   種より大きい親和性を有し、 （ｄ）Ａの流れ、分離すべきクロマトグラフィー種の混
   合物の流れ、Ｄの流れを粒子床に関して移動し、従って
   、ほとんど全てのレジンが連続的に（ｉ）分離すべき種
   、（ｉｉ）Ｄ及び（ｉｉｉ）Ａと接触し、 （ｅ）混合物中の各クロマトグラフィー種をほとんど分
   離して集める ことを特徴とする方法。 ４６、少なくとも２つのクロマトグラフィー種を相互に
   分離する装置において、 （ａ）レジンを含有する粒子床 （ｂ）粒子床を通る３つの別の液体流を同時に導入する
   手段、 （ｃ）粒子床に関して流れを移動させ、従って、ほとん
   ど全てのレジンが連続的に３つの流れの各々に接触する
   手段、 を含むことを特徴とする装置。 ４７、流れ導入手段は、更に、粒子床を通る４つの別の
   液体流を同時に導入することができ、また、移動手段は
   、更に、ほとんど全てのレジンが４つの流れの各々に連
   続的に接触するように、粒子床に関して該流れを移動さ
   せることができることを特徴とする請求項４６記載の装
   置。 ４８、流れ導入手段は、フィード混合物流、置換試薬流
   、バリア試薬流及びパージ試薬流を粒子床の頂部近くに
   同時に導入することができ、また、移動手段は、更に、
   ほとんど全てのレジンがｉ）フィード混合物流、ｉｉ）
   パージ流、ｉｉｉ）置換試薬流、ｉｖ）バリア試薬流、
   ｖ）パージ流に、連続的に接触するように、粒子床に関
   して、該流れを移動させることができることを特徴とす
   る請求項４７記載の装置。 ４９、移動手段は、粒子床を移動するのに適用され、流
   れ導入手段はほぼ固定されていることを特徴とする請求
   項４６記載の装置。 ５０、移動手段は、流れ導入手段を移動するのに適用さ
   れ、粒子床はほぼ固定されていることを特徴とする請求
   項４６記載の装置。 ５１、粒子床は環状であることを特徴とする請求項４６
   記載の装置。 ５２、流れ導入手段は、フィード混合物流、置換試薬流
   、バリア試薬流、再生試薬流及びパージ試薬流を粒子床
   の頂部近くに同時に導入することができ、また、移動手
   段は、更に、ほとんど全てのレジンがｉ）フィード混合
   物流、ｉｉ）置換試薬流、ｉｉｉ）再生試薬流、ｉｖ）
   バリア試薬流、ｖ）パージ流に、連続的に接触するよう
   に、粒子床に関して、該流れを移動させることができる
   ことを特徴とする請求項４８記載の装置。 ５３、移動手段は、更に、ほとんど全てのレジンがｉ）
   フィード混合物流、ｉｉ）パージ流、ｉｉｉ）置換試薬
   流、ｉｖ）再生流、ｖ）バリア試薬流、ｖｉ）パージ流
   に連続的に接触するように、粒子床に関して、該流れを
   移動させることができることを特徴とする請求項５２記
   載の装置。 ５４、流れ導体装置は、少なくとも１つの流れを、粒子
   床の頂部近くに、該粒子床の少なくとも約１％の水平断
   面エリアに広がるゾーン（一帯）に渡って導入するのに
   適用されることを特徴とする請求項４６記載の装置。 ５５、ゾーン（帯）は、粒子床のアーチ形水平断面エリ
   アに広がることを特徴とする請求項５４記載の装置。 ５６、流れ導入手段は、フィード混合物流を、粒子床の
   頂部近くに、該粒子床の約３〜約６％の水平断面エリア
   に広がるゾーン（一帯）に渡って導入するのに適用され
   ることを特徴とする請求項５４記載の装置。 ５７、流れ導入手段は、置換試薬流を、粒子床の頂部近
   くに、該粒子床の約３３％の水平断面エリアに広がるゾ
   ーン（一帯）に渡って導入するのに適用されることを特
   徴とする請求項５４記載の装置。 ５８、流れ導入手段は、バリア試薬流を、粒子床の頂部
   近くに、該粒子床の少なくとも約１０％の水平断面エリ
   アに広がるゾーン（一帯）に渡って導入するのに通用さ
   れることを特徴とする請求項５４記載の装置。 ５９、流れ導入手段は、フィード混合物流を、粒子床の
   頂部近くに、該粒子床の約３〜約６％の水平断面エリア
   に広がるゾーン（一帯）に渡って導入し、置換試薬流を
   、粒子床の頂部近くに、該粒子床の少なくとも約５０％
   の水平断面エリアに広がるゾーン（一帯）に渡って導入
   し、バリア試薬流を、粒子床の頂部近くに、該粒子床の
   少なくとも約１０〜約３０％の水平断面エリアに広がる
   ゾーン（一帯）に渡って導入するのに適用することを特
   徴とする請求項５４記載の装置。 ６０、粒子床は、更にレジン上にクロマトグラフィー不
   活性保持層を含有することを特徴とする請求項４６記載
   の装置。 ６１、流れ導入手段は、少なくとも１つの流れをクロマ
   トグラフィー不活性保持層に導入し、次いでレジンを通
   すのに適用されることを特徴とする請求項４６記載の装
   置。 ６２、流れ導入手段は、複数の流れをクロマトグラフィ
   ー不活性保持層に導入し、次いでレジンを通すのに適用
   されることを特徴とする請求項４６記載の装置。 ６３、粒子床は、更に内部コア及び外殻を含み、レジン
   は、内部コア及び外殻との間にはさまれ、そしてレジン
   は、外殻の水平断面エリアの約９５％まで占有すること
   を特徴とする請求項４６記載の装置。 ６４、粒子床は、ほぼ線状であることを特徴とする請求
   項４６記載の装置。