【発明の詳細な説明】
【産業上の利用分野１
本発明は難消化性、難う触性を有し、かつ、ビフィズス
菌、乳酸菌の増殖作用等に効果を有する健康食品素材と
して利用されるイヌロオリゴ糖を、副生成物を少なく、
しかも効果的に製造する方法に関するものである。
Ｋ従来の技術Ｉ
従来、イヌロオリゴ糖を製造する方法としては、ダリャ
、キクイモ、オグルマ、アザミ等のキク科植物の根茎等
を熱水で抽出し、抽出液を濃縮して氷冷するか、又はア
ルコールを加えて沈澱物として得られるイヌリンを石灰
等で更にｉ製して酸又は酵素で分解して得る方法がある
。
この方法で用いられる酸としては塩酸等が用いられ、酵
素としては、例えば、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇ
ｉ ｌ １ｕｓ）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉ
ｌ ｌ ｉｕｎ＋）、フザリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ
）、キャンデイダ属（Ｃａｎｄ １ｄａ）、シュードト
ロピカリス属（Ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌ ｉｓ）
クレイベ０？イセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｎｌｙｃｅｓ
）、フラギルス属（Ｆｒａｇｉ ｌ ｉｓ）等のエンド
型及びエキソ型のイヌリナーゼが用いられている。又、
フラクトシルトランスフェラーゼをスクロースとフラク
トースの混合溶液に作用させることで、その転移反応に
よって７ラクトオリゴ糖とイヌロオリゴ糖が得られるこ
とが報告（Ｊｏｈｎ、Ｈ，Ｐａｚｕｒ氏、Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｂｉｏ−ｏｑｉｃａｌ Ｃｈｅｎｌｉｓｔ
ｒｙ、１９９，２１７〜２２５．（１９５２））されて
いる。しかし、β−フラクトフラノシダーゼを用いてイ
ヌロオリゴ糖を製造する方法については知られていない
。
Ｋ発明が解決しようとする課題】
上述した従来の方法でイヌリンを酸で分解すると着色物
質が生成し易く、フラクトースやジフラクトースアンハ
イドライド等の副生成物が生じ易く、イヌロオリゴ糖の
収率が極めて低い。又、イヌリンをイヌリナーゼで分解
する方法ではペニシリウム属由来のエンド型イヌリナー
ゼを利用することで収率は若干向上するものの、分子量
的５，０００のイヌリンを加水分解させるので反応に長
時間を要し経済性において問題がある。
フラクトシルトランスフェラーゼをスクロースとフラク
トースの混合溶液に作用させる方法では、イヌロオリゴ
糖を選択的に製造することが困難で、そのためにその生
成物の精製に手間を要すると共にイヌロオリゴ糖の収率
が極めて低（＼欠点があった。
これらの実情から、容易に入手出来る比較的低分子量の
糖を出発原料として、イヌロオリゴ糖を効果的に収率よ
く得られる方法の開発が望まれている。
Ｋ課題を解決するための手段］
本発明はスクロースとフラクトースの混合溶液にβ−フ
ラクトフラノシダーゼを作用さゼることにより、イヌロ
オリゴ糖を得る製造法に関するものである。β−フラク
トフラノシダーゼはスクロースのβ−１，２結合に作用
し、スクロース溶液が低濃度の場合にはスクロースの加
水分解反応が、スクロース溶液が高濃度の場合にはフラ
クトオリゴ糖が生成する反応が主として起こる。しかし
、高濃度スクロース溶液にβ−フラクトフラノシダーゼ
を長時間作用させると、反応前半ではフラクトオリゴ糖
の生成が認められるが、反応後半即ちスクロースが殆ど
残存しない状態では、イメロオリゴ糖が生成されている
ことが研究の結果明らかになった。
本発明者は、上述の結果よりβ−フラクトフラノシダー
ゼの反応機構を次の如く推定した。
ステップ■。
ＥＨ＋ ＧＯＦ ＝ＧＯＨ＋ＥＦ
（１）ステップ■。
ＥＦ＋Ｈ叶： ＦＯＨ十Ｅ１１（２）
ＥＦ＋ Ｇ（Ｆ）叶：Ｇ（Ｆ）。ＯＦ＋ ＥＨ（３）Ｅ
Ｆ＋ （Ｆ）叶＝（［）。ＯＦ＋ Ｅ）ｌ （４）上
式でＥＨはβ−フラクトフラノシダーゼ、ＧＯＦはスク
ロース、ＧＯＨはグルコース、ＥＦはβ−フラクトフラ
ノシダーゼとフラクトース複合体、ＨＯＨは水、 Ｆ叶
はフラクトース、Ｇ（Ｆ）。叶はｎ・１のときはスクロ
ースをｎ＝２以上はフラクトオリゴ糖、Ｇ（Ｆ） Ｏ
Ｆはフラクトオリゴ糖、 （Ｆ）。叶はｎ＝１のときは
フラクトースをｎ＝２以上はイヌロオリゴ糖、及び（「
）。０「はイヌロオリゴ糖を小す。
従って、ステップ■で生成したＥＦはステップ■で受容
軸となるＨ叶、Ｇ（Ｆ）ＯＨ及び（［）。叶と反応する
。水と反応した場合は（２）式の如くフラクトースが生
成する。一方（３）式の如くスクロースと反応した場合
はフラクトオリゴ糖が生成し、（４）式の如くフラクト
ースと反応した場合にはイメロオーリゴ糖が生成する。
このことから（４）式の反応を積極的に行えばイヌロオ
リゴ糖の生成量増大をもたらすこととなる。
従って、受容軸となるフラクトースをスクロース溶液に
添加した混合溶液を出発物質として、（４）式を積極的
に行うβ−フラクトフラノシダーゼを作用させることで
本発明の目的を達成するに至った。
本発明に用いられるβ−フラクトフラノシダーゼは、そ
の起源として、アスペルギルス・ニガー（＾５ｐｅｒ（
ｌｉｌｌｌｌｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・オリ
ゼ（＾５ｐｅｒ（ｌｉｌｌＵｓ ０ｒｙｚａｅ） 、ア
ウレオバシヂウム・プルランズ（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄ
ｉｕＩＩＰｕｌｌｕｌａｎｓ）、タラビケブス・パブレ
ア（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ Ｐｕｒｐｕｒｅａ） 、サッ
カ０？イセスφセレビシｘ （ＳａｃｃｈａｒｏｌＩｌ
ｙｃｅｓ Ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）等が上げられるが、
好ましくはアスペルギルス・オリゼ（＾５ｐｅｒｑｉｌ
ｌｕｓ ０ｒｙｚａｅ）由来のβ−フラクトフラノシダ
ーゼが用いられる。これらの酵素はこのまま用いてもよ
いし、副反応の問題が特になければ精製せず生菌及び死
滅菌の形でも用いることが出来る。また、本発明では上
述の如くβ−フラクトフラノシダーゼをそのまま作用さ
せてもよいが、固定化担体を用いてβ−フラクトフラノ
シダーゼを固定化させた固定化β−フラクトフラノシダ
ーゼを用いてもよい。その際の固定化方法は、従来公知
の方法例えば包括法、物理的吸着法、イオン結合法、共
有結合法、架橋法等が用いられる。
本発明の出発物質としてのスクロースとフラク）〜−ス
の混合割合は、β−フラクトフラノシダーゼの反応機構
からフラクトースが多い程（４）式の反応が促進される
が、反応速度の関係から過剰なフラクトースが未反応の
まま生成物に混入してしまう恐れかあるために適宜選定
する。又、出発物質の濃度が低いと（２）式の加水分解
反応が促進されてしまうために濃度は高い程よいが、混
合割合におけると同様に、過剰なフラクトースとスクロ
ースが未反応のまま生成物に混入してしまうために濃度
を適宜選定する。反応系のＤＨ，温度は用いる酵素や担
体等によって適宜選定される。
本発明の製造法では、イヌロオリゴ糖を副生成物を少な
くして得ることができるが、β−フラクトフラノシダー
ゼの反応機構から未反応の少量のスクロースやフラクト
ースが存在する。食品素材として用いる場合は、少量の
スクロースやフラクトースが混在しても問題になるもの
ではないが、必要に応じて活性炭とセライトを充填した
カラムやセルロース充填カラムで処理することによりイ
ヌロオリゴ糖のみを容易に得ることが出来る。
Ｋ実 施 例】
以下に実施例を挙げて本発明を詳述するが、本発明はこ
れらの範囲に限定されるものではない。
実施例の生成物各成分の定量はＨＰＬＣ（昭和電工製１
ｏｎＰａｋ ＫＳ−８０１カラム）を用いて各成分を分
離し、高感度示差屈折計を用いて測定した。
実施例１゜
アスペルギルス・オリゼ由来の米麹２０９をｐｌ（７，
８の０．１８リン酸緩衝溶液６０ｄで懸濁後吸引濾過し
、遠心分離（３，５００ｒｐＩｌｌ） Ｉ、て得た粗β
−フラクトフラノシダーゼ溶液から０．１−を採取し、
スクロース２ｒｎｇとフラクトース２ｔｎｙの混合溶液
に加え室温で１８時間反応させイヌロオリゴ糖を得た。
その結果を第１表に示した。
以下余白
第 １ 表
第 ２ 表
ここで、Ｍ２／Ｍ１値は減少したスクロース量に対する
イヌロオリゴ糖の生成量を示し、Ｈ２７Ｈ１値が高い程
イヌロオリゴ糖の選択的生成性が高いことになる。
比較例１゜
実施例１で用いた酵素に代えアスペルギルス・オリゼ由
来のフラクトシルトランスフェラーゼを用いて、実施例
１と同程度の減少スクロース量になる如り調製したフラ
クトシルトランスフェラーゼ溶液０．１ｍｌをスクロー
ス２〆とフラクトース２ｍｇの混合溶液に加え室温で１
８時間反応させた結果を第２表に示した。
実施例１のβ−フラクトフラノシダーゼに対し、フラク
トシルトランスフェラーゼを用いた場合にはイヌロオリ
ゴ糖の収率が非常に低いことが判る。
実施例２゜
（１）実施例１と同様の操作を行って得た粗β−フラク
トフラノシダーゼ溶液を５ｄづつ分取し、第３表に示し
た７種の担体者１蛇に加えて、４℃にて６６時間攪拌さ
せた後水洗を充分行い試料Ｎｏ、 １〜７の固定化β−
フラクトフラノシダーゼを得た。
以下余白
第 ３ 表
第３表中の各担体は、以下のようにして得たものである
。
（１）特開昭６３−２８４５３号の実施例１による。
（２）特開昭６３−２０５１４４号の実施例３による。
（３）特公昭６３−５４２８５号の実施例１において有
機ジイソシアネートとしてヘキサメチレンジイソシアネ
ートを用いた。
（４）特公昭６３−５４２８５号の実施例１において有
機ジイソシアネートとして４，４′ −ジフェニルメタ
ンジイソシアネートを用いた。
（５）脱アセチル化度８０％、平均分子量４６，０００
のキトサン７０ｇを３．５％酢酸水溶液９３０ｇに溶解
させて８威度７％の溶液を得、これを０．２５１／ＩＩ
φのノズル孔より１０％水酸化ナトリウム水溶液中に落
下させて粒径１ｍ／ｌＩφ、比表面積８９．７Ｃ勺の多
孔質粒状キトサン８６ｈｔｅ （湿状）を得た。
該多孔質粒状キトサン１００ｒｄ！、を３０％エチレン
グリコールジグリシジルエーテル溶液１００ｄに添加し
、６０℃で６０分間反応さ氾、水洗し更に１５％へキサ
メチレンジアミン溶液１００ｄに添加して７０℃にて９
０分間反応させた。その復水、 ０．２Ｎ酢酸、水、
０．５Ｎ水酸化ナトリウム、水の順に洗浄して得た。
０．２Ｈスクロースと１．５Ｈフラクトースを含む０．
０１Ｍリン酸緩衝溶液（ｐＨ６，８） ５威を７つ用
意し、夫々に上記で得た試料Ｎｏ、 １〜７の固定化β
−フラク［へフラノシダーゼを全量添加し室温にて反応
させ、夫々に対応した実験Ｎｏ１〜７についてのイヌロ
オリゴ糖を製造し、最大イヌロオリゴ糖生成量及び減少
スクロース量を測定した。
その結果を第４表に示した。
本実施例に示す如く固定化β−フラクトフラノシダーゼ
を用いても効果的にイヌロオリゴ糖が得られることが明
らかである。
（２）上記した実施例２（１）の試料Ｎ０１５の固定化
βフラクトフラノシダーゼを同様の操作で湿潤状態で１
２ｇ調製した。０．２５Ｍスクロースに対し、フラクト
ースを０．１０ 、 ０．２５ 、 ０．５０ 、 １
．０． ２．０゜４．０． ５．０． ６．０及び８．
０ｇをそれぞれ混合して得られた０、 ０１８リン酸緩
衡溶液ｆｐＨ６，８） ９種の混合渡者５ｄに試料Ｎｏ
、 ５の固定化β−フラクトフラノシダーゼを湿潤状態
で夫々 １Ｊづつ添加し、２５℃で反応させイヌロオリ
ゴ糖を製造し、最大イヌロオリゴ糖生成量を測定した。
基準としてフラクトースを全く添加しないものでも同様
の操作を行った。
その結果を第５表に示した。
以下余白
２：１５として濃度が異なる如く混合した６種の０．０
１Ｍリン酸緩衝溶液（ｐＨ６，８）各５蛇に試料Ｎｏ、
５の固定化β−フラクトフラノシダーゼを湿潤状態で
夫々 １ｇ添加し、２５℃で反応させてイヌロオリゴ糖
を製造し、最大イヌロオリゴ糖生成吊及び減少スクロー
ス量を測定し、その結果を第６表に示した。
以下余白
表中（）内はモル数を表す。
第５表より明らかな如くフラクトースの添加量を増加さ
せることによってイヌロオリゴ糖の生成量が増加するこ
とが明らかである。
（３）実施例２の （１）の試料Ｎｏ、 ５の固定化β
−フラクトフラノシダーゼを同様の操作で湿潤状態で８
ｇ調製した。スクロースとフラクトースのモル比を第６
表より明らかな如く出発原料のスクロースと７ラクトー
スの夫々の濃度が高い程Ｈ２／Ｍ１値が高く、スクロー
スの加水分解反応が制御されていることが明らかである
。
Ｋ発明の効果】
本発明はスクロースとフラクトースの混合溶液にβ−フ
ラクトフラノシダーゼを作用させることにより、従来の
方法に比して効果的にイヌロオリゴ糖を製造することが
出来る。Detailed Description of the Invention [Industrial Application Field 1] The present invention is directed to a canine oligonucleotide that is indigestible and tactile, and is used as a health food material that is effective in inhibiting the growth of bifidobacteria and lactic acid bacteria. Less sugar, less by-products,
Moreover, it relates to an effective manufacturing method. K. Prior Art I Conventionally, methods for producing canine oligosaccharides include extracting the rhizomes of Asteraceae plants such as dahlia, Jerusalem artichoke, oguruma, thistle, etc. with hot water, concentrating the extract and cooling it on ice, or There is a method in which inulin is obtained as a precipitate by adding alcohol, further precipitated with lime, etc., and decomposed with acid or enzymes. The acid used in this method is hydrochloric acid, and the enzyme is, for example, Aspergillus spp.
i l 1us), Penicillium spp.
l l iun+), Fusarium spp.
), Cand 1da, Pseudotropicalis
Crabe 0? Kluyveronlyces
), Fragilis, and other endo- and exo-type inulinases have been used. or,
It has been reported that when fructosyltransferase acts on a mixed solution of sucrose and fructose, 7-lactooligosaccharides and inulooligosaccharides can be obtained through the transfer reaction (John, H., Pazur, Journa
l of Bio-Oqical Chenlist
ry, 199, 217-225. (1952)). However, there is no known method for producing canine oligosaccharide using β-fructofuranosidase. K Problems to be Solved by the Invention When inulin is decomposed with acid using the conventional method described above, colored substances are likely to be produced, by-products such as fructose and difructose anhydride are likely to be produced, and the yield of inulooligosaccharide is extremely low. low. In addition, in the method of decomposing inulin with inulinase, the yield is slightly improved by using endo-type inulinase derived from the genus Penicillium, but since inulin with a molecular weight of 5,000 is hydrolyzed, the reaction takes a long time and is not economical. I have a problem with sexuality. In the method in which fructosyltransferase acts on a mixed solution of sucrose and fructose, it is difficult to selectively produce inulooligosaccharides, which requires time and effort to purify the product, and the yield of inulooligosaccharides is extremely low ( ＼There were drawbacks. Under these circumstances, there is a desire to develop a method that can effectively obtain inulooligosaccharides in good yields using easily available relatively low molecular weight sugars as starting materials. The present invention relates to a method for producing inulo-oligosaccharide by treating a mixed solution of sucrose and fructose with β-fructofuranosidase. , 2 bonds, and when the concentration of sucrose solution is low, the hydrolysis reaction of sucrose occurs, and when the concentration of sucrose solution is high, the reaction that produces fructooligosaccharides mainly occurs.However, in high concentration sucrose solution, β -Research has revealed that when fructofuranosidase is allowed to act for a long time, fructooligosaccharides are produced in the first half of the reaction, but imello-oligosaccharides are produced in the second half of the reaction, when almost no sucrose remains. The present inventor estimated the reaction mechanism of β-fructofuranosidase as follows from the above results. Step ①. EH + GOF = GOH + EF
(1) Step ■. EF + H Kano: FOH 11 E11 (2) EF + G (F) Kano: G (F). OF+ EH(3)E
F+ (F) Kano = ([). OF+ E)l (4) In the above formula, EH is β-fructofuranosidase, GOF is sucrose, GOH is glucose, EF is β-fructofuranosidase and fructose complex, HOH is water, F is fructose, G(F ). Leaves are sucrose when n 1, fructooligosaccharide when n = 2 or more, G(F) O
F is fructooligosaccharide (F). Leaves contain fructose when n = 1, inulooligosaccharide when n = 2 or more, and (
). 0" reduces inulo-oligosaccharide. Therefore, the EF produced in step ■ reacts with H leaf, G(F)OH and ([). leaf which become receptor axes in step ■. When reacted with water, ( 2) Fructose is produced as shown in equation (3).On the other hand, when it reacts with sucrose as shown in equation (3), fructooligosaccharide is produced, and when it reacts with fructose as shown in equation (4), imellooligosaccharide is produced. If the reaction of formula (4) is actively carried out, the amount of inulooligosaccharide produced will increase. Therefore, using a mixed solution of fructose, which serves as an acceptor axis, as a starting material and adding it to a sucrose solution, formula (4) can be expressed as follows: The purpose of the present invention has been achieved by making β-fructofuranosidase act actively. The β-fructofuranosidase used in the present invention is derived from Aspergillus niger (^5per).
llllls niger), Aspergillus oryzae (^5per(lillUs 0ryzae), Aureobasidium pullulans)
iuIIPullulans), Claviceps Purpurea, Sacca 0? Ises φ Cerevishi x (SaccharolIl
yces Cerevisiae), etc.
Preferably Aspergillus oryzae (^5perqil)
β-fructofuranosidase derived from P. lus 0ryzae is used. These enzymes may be used as they are, or may be used in live or sterilized form without purification unless there is a problem with side reactions. Furthermore, in the present invention, as described above, β-fructofuranosidase may be allowed to act as it is, but it is also possible to use immobilized β-fructofuranosidase in which β-fructofuranosidase is immobilized using an immobilization carrier. . As the immobilization method in this case, conventionally known methods such as an entrapment method, a physical adsorption method, an ionic bond method, a covalent bond method, a crosslinking method, etc. are used. The mixing ratio of sucrose and fruc) to -s as the starting materials of the present invention is determined based on the reaction mechanism of β-fructofuranosidase. Since there is a risk that unreacted fructose may be mixed into the product, it should be selected appropriately. In addition, if the concentration of the starting material is low, the hydrolysis reaction of equation (2) will be accelerated, so a higher concentration is better, but as with the mixing ratio, excess fructose and sucrose remain unreacted and become the product. To prevent contamination, select the concentration appropriately. The DH and temperature of the reaction system are appropriately selected depending on the enzyme, carrier, etc. used. In the production method of the present invention, inulooligosaccharide can be obtained with fewer by-products, but due to the reaction mechanism of β-fructofuranosidase, a small amount of unreacted sucrose and fructose are present. When used as a food material, it is not a problem even if a small amount of sucrose or fructose is mixed in, but if necessary, it is easy to treat only inulooligosaccharide by treating it with a column packed with activated carbon and celite or a column packed with cellulose. can be obtained. K Examples The present invention will be described in detail with reference to Examples below, but the present invention is not limited to these scopes. The quantitative determination of each component of the product in the examples was performed using HPLC (Showa Denko 1
onPak KS-801 column) to separate each component, and measured using a high-sensitivity differential refractometer. Example 1゜Pl (7,
The crude β obtained by suspension in 60 d of 0.18 phosphate buffer solution of 8, suction filtration, and centrifugation (3,500 rpm)
- 0.1- is collected from the fructofuranosidase solution,
It was added to a mixed solution of 2 rng of sucrose and 2 tny of fructose and reacted at room temperature for 18 hours to obtain canine oligosaccharide. The results are shown in Table 1. Table 1 Table 2 Here, the M2/M1 value indicates the amount of inulooligosaccharide produced relative to the reduced amount of sucrose, and the higher the H27H1 value, the higher the selective production of inulooligosaccharides. Comparative Example 1゜ Using fructosyltransferase derived from Aspergillus oryzae instead of the enzyme used in Example 1, 0.1 ml of a fructosyltransferase solution prepared to reduce the amount of sucrose to the same extent as in Example 1 was added to sucrose. 2. Add 1 to a mixed solution of 2 mg of fructose and 2 mg of fructose at room temperature.
The results of the reaction for 8 hours are shown in Table 2. It can be seen that when fructosyltransferase is used as opposed to the β-fructofuranosidase of Example 1, the yield of canine oligosaccharide is extremely low. Example 2゜(1) The crude β-fructofuranosidase solution obtained by carrying out the same operation as in Example 1 was separated into 5 d portions, and in addition to the 7 types of carriers shown in Table 3, After stirring at 4°C for 66 hours, the samples No. 1 to 7 were immobilized β-
Fructofuranosidase was obtained. Each carrier in Table 3 was obtained as follows. (1) According to Example 1 of JP-A-63-28453. (2) According to Example 3 of JP-A-63-205144. (3) Hexamethylene diisocyanate was used as the organic diisocyanate in Example 1 of Japanese Patent Publication No. 63-54285. (4) In Example 1 of Japanese Patent Publication No. 63-54285, 4,4'-diphenylmethane diisocyanate was used as the organic diisocyanate. (5) Degree of deacetylation 80%, average molecular weight 46,000
70g of chitosan was dissolved in 930g of 3.5% acetic acid aqueous solution to obtain a solution with 8 strength of 7%, which was 0.251/II
It was dropped into a 10% aqueous sodium hydroxide solution through a φ nozzle hole to obtain porous granular chitosan (wet) having a particle size of 1 m/lIφ and a specific surface area of 89.7 C. The porous granular chitosan 100rd! was added to 100 d of 30% ethylene glycol diglycidyl ether solution, reacted at 60°C for 60 minutes, washed with water, and then added to 100 d of 15% hexamethylene diamine solution at 70°C.
The reaction was allowed to proceed for 0 minutes. Its condensate, 0.2N acetic acid, water,
It was obtained by washing with 0.5N sodium hydroxide and water in that order. 0.2H sucrose and 1.5H fructose.
Prepare 7 samples of 01M phosphate buffer solution (pH 6, 8) and immobilize β of sample No. 1 to 7 obtained above, respectively.
- Frac [The whole amount of hefuranosidase was added and reacted at room temperature to produce inulooligosaccharides for corresponding experiments Nos. 1 to 7, and the maximum amount of inulooligosaccharide produced and the amount of reduced sucrose were measured. The results are shown in Table 4. It is clear that canine oligosaccharide can be effectively obtained using immobilized β-fructofuranosidase as shown in this example. (2) The immobilized β-fructofuranosidase of sample N015 in Example 2 (1) above was prepared in the same manner as above in a wet state.
2g was prepared. For 0.25M sucrose, add fructose to 0.10, 0.25, 0.50, 1
．． 0. 2.0°4.0. 5.0. 6.0 and 8.
Sample No.
, 5 immobilized β-fructofuranosidases were added in a wet state in an amount of 1 J each, reacted at 25° C. to produce inulooligosaccharide, and the maximum amount of inulooligosaccharide produced was measured. Similar operations were performed using a sample to which no fructose was added as a standard. The results are shown in Table 5. 6 kinds of 0.0 mixed with different concentrations as below margin 2:15
1M phosphate buffer solution (pH 6, 8) Sample No.
1 g of each immobilized β-fructofuranosidase No. 5 was added in a wet state and reacted at 25°C to produce inulooligosaccharide. The maximum amount of inulooligosaccharide produced and the decrease in the amount of sucrose were measured. The results are shown in Table 6. Indicated. In the margin table below, the numbers in parentheses represent the number of moles. As is clear from Table 5, it is clear that increasing the amount of fructose added increases the amount of inulooligosaccharide produced. (3) Immobilization β of sample No. 5 in (1) of Example 2
- Fructofuranosidase was added in a wet state using the same procedure.
g was prepared. The molar ratio of sucrose and fructose is
As is clear from the table, the higher the concentrations of each of the starting materials sucrose and 7-lactose are, the higher the H2/M1 value is, and it is clear that the hydrolysis reaction of sucrose is controlled. K Effects of the Invention The present invention allows canine oligosaccharides to be produced more effectively than conventional methods by allowing β-fructofuranosidase to act on a mixed solution of sucrose and fructose.